CN115429824B - 一种具有防治阿尔茨海默症的新型红参的炮制工艺及其相关产品 - Google Patents
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Abstract
一种具有防治阿尔茨海默症的新型红参的炮制工艺及其相关产品。本发明涉及一种新型红参的加工制备工艺，该工艺制备的新型红参及其加工产品具有防治阿尔茨海默症的药理活性。具体的说，该工艺是在高温高压条件下进行蒸制，蒸制温度110～150℃，蒸制1～4h，蒸制过程中分阶段控制升温速率，100℃以下的升温速率为1.2～3.0℃/min，100℃以上的升温速率为1.5～1.8℃/min，蒸制结束后自然冷却，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，70～100℃干燥8～14h，然后35～55℃干燥。本发明所制备红参的原料可以是新鲜人参或生晒参。本发明制备的新型红参及其加工品可应用于制备防治阿尔茨海默症药物，其具有显著的抗炎药理活性，可显著改善阿尔茨海默症的学习记忆能力，同时减少β样淀粉斑块的数量和面积。
Description
技术领域
本发明属于中药领域，涉及一种红参加工的新方法，该方法所加工的红参具有防治阿尔茨海默症的药理活性，进一步涉及以该方法得到的红参为原料加工的其他产品。
背景技术
阿尔茨海默症(Alzheimer disease，AD)，又叫老年性痴呆，是一种中枢神经系统变性病。2019年全球老年痴呆报告显示，目前全球老年痴呆症的患者已超过5000万，预计到2050年会增长到1.52亿。迄今为止，AD的病因及发病机制尚未阐明，据统计，仅在1998年到2017年之间，各大药企共推出了200余种治疗老年痴呆的药物，仅有3种药物和一种固定剂量复方获得FDA的上市批准。然而，这些药物没有一种能够治愈AD，仅起到缓解部分症状的作用。因此，亟需开发有效治疗老年痴呆症的药物。
中医学认为痴呆病位在脑，与心肝脾肾功能失调关系密切。《素问·上古天真论》记载：“肾藏精，主骨生髓，通于脑”，“脑为髓之海”。痴呆病名首见于汉代《华佗神医秘传》。其基本病机是髓减脑消，神机失用，脑髓空虚，气血不足致心神失养。多表现为本虚标实，以心肝脾肾虚为本，痰瘀内生，气血逆乱为标。老年痴呆的治疗以补肾填精为主，兼以健脾益气、活血化瘀。人参作为补气要药，最早载于《神农本草经》，被列为上品，具有补五脏、安精神、定魂魄、止惊悸、除邪气、名目、开心益智、久服轻身延年等功效。人参有良好的抗衰老、抗疲劳、提高人体免疫力、调节神经系统和兴奋造血系统功能等作用。改善中老年人的微循环，提高记忆、学习能力。
红参是在明末清初的时候出现。清代《宁古塔纪略》中记载：“人参以八九月间者为最佳，生者色白，蒸熟辄带红色。红而明亮者，其精神足，为第一等”。红参经过蒸制，味甘而厚，性偏温，具有更强的补气作用，可大补元气，复脉固脱，益气摄血；用于体虚欲脱，肢冷脉微，气不摄血，崩漏下血等，主要利用其益气养血、补肾填精的作用。红参中稀有人参皂苷的种类丰富、含量更高，而且极性较小的稀有人参皂苷能够更好地吸收，具有更强的药理活性。传统的红参蒸制以新鲜人参为原料，一般采用蒸锅，常压状态下90～100℃蒸制2～3个小时，然后自然晒干。
随着现代加工技术的发展，出现高压蒸制设备，高压蒸制可以使蒸制温度超过100℃，也开始将高压蒸制用于人参的蒸制工艺。但人们对高压蒸制的认识还有待提高，通常在高压蒸制人参的时候，只关注到了在高于100℃蒸制人参，有利于提高人参中稀有皂苷含量，将温度范围设计到120℃以上很宽的范围(如120-180℃)，但过高温度会产生苯并芘等毒性致癌物质，还会影响红参的外观性状，尤其是出现破裂会造成有效成分的流失，因此需要注意控制合理温度。同时，现阶段高压蒸制红参，都是采取一次升温到达蒸制的温度，然后在该温度下蒸制一定时间，并没有注意到蒸制过程中阶段升温、合理控制升温速率对红参疗效的影响。达到100℃后，升温速率明显变缓。本发明的红参蒸制工艺可同时适用于新鲜人参和生晒参，这样可以扩大红参蒸制的原料来源，不受新鲜人参无法长期保存的影响。
发明内容
本发明公开了一种新的红参制备工艺，该工艺是在高温条件下进行红参蒸制，分两个阶段升温，中间保持恒定一定时间，对升温速率分别进行控制；烘干阶段高温烘制一定时间再进行低温烘制；所用的原料可以是新鲜人参或生晒参，所得的新型红参及其制剂可应用于阿尔茨海默病的预防和治疗。
本发明涉及一种红参的加工制备工艺，该工艺制备的红参及其加工产品具有防治阿尔茨海默症的药理活性。
本发明研究发现，蒸制第一阶段缓慢升温(100℃以下)，之后100℃保持一定时间，再进行第二阶段快速升温(100℃以上)可以明显提高红参的质量；同时阶段烘干过程也是制备红参的关键。
本发明公开的红参的加工制备工艺，该工艺是在高温高压的条件下进行，蒸制温度110～150℃。
本发明公开的红参的加工制备工艺，该工艺中升温速度分两个阶段进行控制，100℃以下，1.2～3.0℃/min，中间间隔一定时间3～10min，100摄氏度以上，1.0～2.0℃/min。
本发明公开的红参的加工制备工艺，蒸制结束后，冷却到60℃保温半小时后取出放凉，干燥过程分为两个阶段，第一次干燥为70～100℃，干燥8～14h；第二次干燥过程为35～55℃，干燥7～10天，待样品完全干燥。
本发明公开的药效实验中，研究红参对AD细胞模型的保护作用；进一步对转基因AD小鼠采用水迷宫实验评价小鼠的学习能力，硫磺素染色观察大脑β淀粉样斑块沉积的变化。
本发明制备的红参加工产品包括提取物和制剂，例如红参水提取物、醇提取物和以其为主要原料的制剂，同时还包括从本发明的红参中提取或合成的稀有人参皂苷S-Rg3、R-Rg3、S-Rh1、R-Rh1、Rk1、Rg5、Rk3、Rh4等。
本发明中红参蒸制优化工艺：
取人参，置于高压蒸汽锅中，以1.2～3.0℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3～20min，然后以1.0～2.0℃/min的速率，升温至110～150℃，蒸制1～4小时，蒸制结束后，取出放凉，干燥即得红参样品。
本发明中红参蒸制进一步优化工艺：
取人参，置于高压蒸汽锅中，以1.8～2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3～5min，然后以1.5～1.8℃/min的速率，升温至120～140℃，蒸制2～3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，70～100℃干燥10～14h，然后35～55℃烘干，即得红参样品。
本发明中使用的人参可以是鲜参或生晒参，鲜参要洗净表面附着的泥沙，适当控水；生晒参净制后要经过润制处理，其加水比例为生晒参的0.4-1.0倍。
本发明中红参防治AD的研究：
首先提取制备红参提取物，观察红参提取物对Aβ诱导SH-SY5Y细胞的保护作用和对LPS诱导BV-2细胞的保护作用。并以APP/PS1双转基因AD小鼠为研究对象，研究本发明的红参提取物防治AD的作用；采用水迷宫实验评价小鼠记忆功能的改善，硫磺素染色实验观察β样淀粉蛋白斑块的大小和面积。
具体实施方式
实施例1：
红参提取物制备：本发明制备的红参样品粉碎过四号筛，精密称定，加水提取，料液比1∶10～1∶20，提取1～3次，每次时间1～3h，离心，合并上清液水浴蒸干得固体浸膏。
对比实施例1：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例2：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至110℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
实施例2：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
实施例3：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至130℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
实施例4：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至140℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例3：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至150℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例4：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至160℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例5：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至180℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例6：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以1.8℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
实施例5：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持5min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例7：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持10min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例8：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持20min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例9：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以1.2℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
实施例6：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以1.8℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例10：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以3.0℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例11：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.0℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
实施例7：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.8℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例12：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以2.0℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例13：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制1小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到80℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
实施例8：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制2小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例14：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制4小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后50℃烘干。
对比实施例15：
取鲜参1kg，洗去表面附着的泥沙，适当控干水，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，然后50℃烘干。
实施例9：
取生晒参1kg，加0.4倍水进行润制处理，药透水尽，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制2小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥14h，然后55℃烘干。
实施例10：
取生晒参1kg，加0.6倍水进行润制处理，药透水尽，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制2小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，70℃干燥10h，然后50℃烘干。
实施例11：
取生晒参1kg，加0.8倍水进行润制处理，药透水尽，然后置于高压蒸汽灭菌锅中，以2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3min，然后以1.5℃/min的速率，升温至120℃，蒸制2小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，80℃干燥10h，然后35℃烘干。
实施例12：
取上述实施例中制备的红参样品进行药效学研究。
1红参提取物对Aβ诱导SH-SY5Y细胞的保护作用
1.1细胞培养
SH-SY5Y细胞用含15％胎牛血清的MEM/F12培养基于37℃、5％CO2的培养箱中传代培养。
1.2分组和给药
选择对数期的细胞，进行细胞计数以后接种于96孔板中，分为空白组、给药组、模型组，空白组加正常培养基，模型组加20μM Aβ42，给药组在模型组的基础上加入本发明实施例的红参提取物(包括实施例2-11和对比实施例1-15)进行预处理。
1.3 MTT测定细胞活力
待培养结束后，每孔加入20μL MTT溶液(5mg/mL，即0.5％MTT)，继续培养4h。终止培养后，小心吸去孔内培养液。每孔加入150μL DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶标仪上OD 490nm处测量各孔的吸光值。每个试验组设置6个复孔，每次试验重复3次。完成测定其吸光度(A)值后，计算细胞活力。
表1红参对Aβ42诱导SH-SY5Y细胞活力的影响(n＝6，％，)
注：Control：空白对照组，M：模型组；#与空白组比较，###P＜0.001；*与模型组比较，*P＜0.05，***P＜0.001；
-代表没有破裂，+代表破裂程度，数量越多代表破裂严重
2红参提取物对LPS诱导BV-2细胞的保护作用
2.1细胞培养
BV-2置于含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的DMEM培养基中，放置在37℃、5％CO2的细胞培养箱中培养。每2～3d传代1次。
2.2分组和给药
选择对数期的细胞，进行细胞计数以后接种于24孔板中，分为空白组、给药组、模型组，空白组加正常培养基，模型组加1μg/ml LPS，给药组在模型组的基础上加入本发明实施例的红参提取物(实施例1-22)预处理。
2.3细胞上清液NO测定
取各组细胞上清液200μL，分别加入Griess试剂A液、B液各50μL，室温放置10min后，酶标仪540nm进行测定。每个试验组设置3个复孔，每次试验重复3次。
表2红参对BV-2细胞NO产生的影响(n＝3，μM，)
注：Control：空白对照组，M：模型组；#与空白组比较，###P＜0.001；*与模型组比较，*P＜0.05，***P＜0.001
对比实施例1为普通红参样品制备，是在常压条件下进行蒸制，为传统红参蒸制方式。对比实施例2、实施例2-4、对比实施例3-5是加压条件下进行蒸制，为不同蒸制温度的红参样品制备，考察高压状态下，蒸制温度(110-180℃)对红参质量的影响。对比实施例6是一次连续升温；实施例2、实施例5、对比实施例7、对比实施例8是两次阶段升温，为不同停留时间红参样品制备，考察中间停留时间(3-20min)对红参质量的影响。对比实施例9、实施例6、实施例2、对比实施例10为第一次升温不同速率的红参样品制备，考察第一次升温速率(1.2-3.0℃/min)对红参质量的影响。对比实施例11、实施例2、实施例7、对比实施例12为第二次升温不同速率红参样品制备，考察第二次升温速率(1.0-2.0℃/min)对红参质量的影响。对比实施例13、实施例8、实施例2、对比实施例14为不同蒸制时间红参样品制备，考察蒸制时间(1-4h)对红参质量的影响。对比实施例15是一次干燥、实施例2是阶段干燥，为蒸制后不同干燥温度红参样品制备，考察蒸制后样品一次干燥(低温)和分阶段干燥(高温+低温)对红参质量的影响。实施例9-11为以生晒参润制后蒸制的红参样品，考察人参干燥品是否适合用于制备红参样品。采用细胞实验评价本发明制备的红参样品对AD细胞模型具有明显的保护作用。
Aβ对神经细胞具有毒性作用，以Aβ诱导SH-SY5Y细胞建立AD细胞模型，以细胞活力为指标考察本发明制备的红参样品对AD细胞的保护作用。表1可以看出，模型组与正常组在细胞活力存在明显差异。加压蒸制条件下(对比实施例2、实施例2-4、对比实施例3)制备的红参比常压蒸制条件下制备的红参(对比实施例1)具有更强的活性，加压蒸制条件下不同蒸制温度(对比实施例2、实施例2-4、对比实施例3-5)对红参质量的影响可以看出，在蒸制温度110-150℃的条件下制备的红参样品对AD细胞模型具有显著的保护作用，其中120-140℃条件下具有极显著作用。传统常压蒸制红参不具有显著的保护作用。当高压蒸制温度超过150℃后，加压条件下所制备的红参样品不能增强细胞活力，不具有保护AD细胞的作用，而且红参样品的外观性状明显变化，破裂现先明显，收率显著降低。红参蒸制过程中中间停留时间(实施例2、实施例5、对比实施例7、对比实施例8)对红参质量的影响可以看出，停留时间3-20min的条件下制备的红参样品对AD细胞模型具有显著的保护作用，其中3-5min条件下具有极显著作用。同时，相比一次升温(对比实施例6)加压条件下分段升温(实施例2、实施例5)具有更强的活性。第一次升温速率(对比实施例9、实施例6、实施例2、对比实施例10)对红参质量的影响可以看出，升温速率1.2-3.0℃/min的条件下制备的红参样品对AD细胞模型具有显著的保护作用，其中1.8-2.4℃/min条件下具有极显著作用。第二次升温速率(对比实施例11、实施例2、实施例7、对比实施例12)对红参质量的影响可以看出，升温速率1.0-2.0℃/min的条件下制备的红参样品对AD细胞模型具有显著的保护作用，其中1.5-1.8℃/min条件下具有极显著作用。红参蒸制时间(对比实施例13、实施例8、实施例2、对比实施例14)对红参质量的影响可以看出，蒸制1-4h的条件下制备的红参样品对AD细胞模型具有显著的保护作用，其中2-3h条件下具有极显著作用。红参蒸制后干燥温度(对比实施例15、实施例2)对红参质量的影响可以看出，红参蒸制后梯度烘干比一次烘干的保护作用更强。以润制的生晒参为原料(实施例9-11)对红参质量的影响可以看出，不同润制条件下制备的红参样品对AD细胞模型都具有极显著的保护作用，同时可以看出蒸制后的干燥条件以70-80℃干燥10-14h，然后35-55℃烘干为宜。
小胶质细胞是大脑中的免疫细胞，通过LPS诱导BV-2细胞建AD炎症细胞模型，以细胞上清液中NO的释放量为指标考察本发明制备的红参样品对AD细胞的保护作用。表2可以看出，模型组与正常组在细胞上清液NO的释放上存在明显差异。本发明工艺制备的红参样品可以抑制LPS诱导的AD炎症模型对细胞起到明显的保护作用。加压蒸制条件下(对比实施例2、实施例2-4、对比实施例3)制备的红参比常压蒸制条件下制备的红参(对比实施例1)对NO的产生具有更强的抑制作用，蒸制温度(对比实施例2、实施例2-4、对比实施例3-5)对红参质量的影响可以看出，110-180℃的条件下制备的红参样品均可以显著抑制细胞上清液中NO的释放，最佳为蒸制温度为120-140℃。红参蒸制过程中中间停留时间(实施例2、实施例5、对比实施例7、对比实施例8)对红参质量的影响可以看出，3-20min的条件下制备的红参样品均可以显著抑制细胞上清液中NO的产生，最佳停留时间为3-5min。相比一次升温(对比实施例6)加压条件下分段升温(实施例2、实施例5)具有更强的活性。第一次升温速率(对比实施例9、实施例6、实施例2、对比实施例10)对红参蒸制质量的影响可以看出，1.2-3.0℃/min的条件下制备的红参样品均可以显著抑制细胞上清液中NO的产生，最佳速率为1.8-2.4℃/min。第二次升温速率(对比实施例11、实施例2、实施例7、对比实施例12)对红参质量的影响可以看出，1.0-2.0℃/min的条件下制备的红参样品均可以显著抑制细胞上清液中NO的产生，最佳速率为1.5-1.8℃/min。红参蒸制时间(对比实施例13、实施例8、实施例2、对比实施例14)对红参质量的影响可以看出，1-4h的条件下制备的红参样品均可以显著抑制细胞上清液中NO的产生，最佳蒸制时间为2-3h。红参蒸制后干燥温度(对比实施例15、实施例2)对红参质量的影响可以看出，红参蒸制后梯度烘干比一次烘干的保护作用更强。以润制的生晒参为原料(实施例9-11)对红参质量的影响可以看出，不同润制条件下制备的红参均可以显著抑制细胞上清液中NO的产生。
3红参提取物对APP/PS1双转基因AD小鼠的药效学研究
3.1实验动物
APP/PS1双转基因小鼠，5月龄，体重20克左右，雌性。
3.2实验分组与剂量
将30只APP/PS1双转基因小鼠随机分为3组，每组10只，即模型组、实施例2组、实施例10组(剂量合生药量为2.4g/kg)。另设正常组，C57BL/6品系的正常小鼠10只，各组灌胃给药，模型组和正常组用等体积的蒸馏水代替，给药4个月。
3.3指标检测
3.3.1 Morris水迷宫实验
给药4个月后，首先完成水迷宫实验，包括定位航行实验和空间探索实验评估小鼠的学习记忆力，验证痴呆小鼠成模与否及严重程度。圆形水池直径120cm，高50cm，池中水深30cm，池底白色，水温保持在(23±2)℃；分水池为4个象限，任选一象限在中央放置与池壁圆心距离相等平台，直径12cm，高29cm，没于水下1cm。应用自动摄像及X maze分析系统实时跟踪记录动物运动轨迹。
实验训练阶段将小鼠置于迷宫内训练1次/d，并适应环境，连续6d后进行学习和记忆功能检测。定位航行实验记录小鼠的逃避潜伏期，方法是将平台固定于任一象限中央，每次训练在固定入水点，将小鼠面向池壁放入水池，同次训练各组小鼠入水点相同。图像处理系统将记录小鼠在水中游泳并爬上平台的路线图及所需时间(即逃避潜伏期)。设定最长游动时限为60s，如小鼠在60s内未爬上平台，需将其引至平台并停留10s，记潜伏期为60s。记录的逃避潜伏期的算术平均数作为当天的成绩进行统计。逃避潜伏期越短说明学习记忆获得和巩固的能力越强。
撤去平台，小鼠投入水中的方法及次数同上，记录小鼠60s内穿越原平台位置的次数，记录的穿台次数的算术平均数作为当天的成绩进行统计。穿台指数反映小鼠对空间位置的记忆和判断能力，穿台次数越多，空间探索能力越强。空间探索实验记录小鼠在所放平台象限停留时间。
从表3转基因AD小鼠行为学结果中可以看出，模型组与正常组小鼠逃避潜伏期和目标象限停留时间存在明显差异。本发明工艺制备的红参对小鼠的行为学具有明显的改善。实施例2、10的逃避潜伏期和目标象限停留时间与模型组存在明显差异，可以看出，本发明制备的红参样品可以明显改善AD小鼠的记忆功能，具有显著防治AD的药理作用。同时新鲜人参和生晒参都可以作为制备红参的原料。
表3不同实施例制备红参的水迷宫实验结果
注：Control：空白对照组，M：模型组；#与空白组比较，#P＜0.05，###P＜0.001；*与模型组比较，**P＜0.01，***P＜0.0013.3.2硫磺素-S染色
取石蜡包埋切片，二甲苯脱蜡梯度至水后硫磺素染色，荧光显微镜下观察β淀粉样斑块的数量及面积。
可以看出模型组β淀粉样斑块的数量多、面积大，本发明工艺制备的红参可以明显降低β淀粉样斑块的数量和面积。实施例2、10制备的红参可以看到β淀粉样斑块的数量和面积明显改善。
Claims (3)
1.一种具有防治阿尔茨海默症作用的红参，其特征在于，由如下方法制得：取人参，置于高压蒸汽锅中，以1.8～2.4℃/min的速率，匀速升温至100℃，保持3-5min，然后以1.5～1.8℃/min的速率，升温至120～140℃，蒸制2～3小时，蒸制结束后，以0.5℃/min降温，待温度降到60℃保温半小时后取出放凉，70～100℃干燥10～14h，然后35～55℃烘干，即得。
2.如权利要求1所述的红参，其特征在于，人参可以是鲜参或生晒参，鲜参要洗净表面附着的泥沙，适当控水；生晒参净制后要经过润制处理，其加水比例为生晒参的0.4-1.0倍。
3.权利要求1或2所述的红参在制备防治阿尔茨海默症药物中的应用。
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 红参水提物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用;王晶等;《华西药学杂志》;第23卷(第6期);627-630 * |
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