CN115427056A

CN115427056A - 使用actriib配体陷阱和菲卓替尼治疗贫血的方法

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Publication number: CN115427056A
Application number: CN202180028593.0A
Authority: CN
Inventors: A·拉德姆; S·瑞特兰; J·T·巴克斯托姆
Original assignee: Celgene Corp
Current assignee: Celgene Corp
Priority date: 2020-04-13
Filing date: 2021-04-12
Publication date: 2022-12-02
Also published as: WO2021211418A1; MX2022012610A; AU2021256419A1; EP4135736A1; KR20230003502A; JP2023523568A; US20230181690A1; BR112022020628A2; IL297258A

Abstract

本文提供了治疗有需要的受试者的贫血的方法，这些方法包括向该受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱并且向该受试者施用菲卓替尼。特别地，该方法包括在施用之前和之后对该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平进行测量。

Description

使用ACTRIIB配体陷阱和菲卓替尼治疗贫血的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年4月13日提交的美国临时申请号63/009,400的权益，该申请的内容通过引用以其全文并入本文。

对以电子方式提交的序列表的引用

本申请通过引用将随申请一起提交的ASCII文本格式的序列表的计算机可读形式(CRF)以其全文并入。随申请一起提交的序列表文本文件题为14247-487-228_SEQ_LISTING.TXT，创建于2021年4月4日，并且大小为73,372字节。

1.技术领域

本文提供了使用激活素IIB型(ActRIIB)配体陷阱与菲卓替尼联合治疗有需要的受试者的贫血的方法。本文提供了使用激活素IIB型(ActRIIB)与菲卓替尼联合治疗患有骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化的受试者的贫血的方法。

2.背景技术

骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化(MF)是一种严重且危及生命的疾病，可表现为新发或原发性骨髓纤维化(PMF)，或从先前的真性红细胞增多症演变而来(PV后MF)或原发性血小板增多症演变而来(ET后MF)(WHO classification of tumours ofhaematopoietic and lymphoid tissues[WHO造血和淋巴组织肿瘤分类],Swerdlow编辑,(IARC出版社(IARC Press),2008))。该疾病的特征在于克隆性骨髓增殖、无效造血、骨髓基质改变、肝脾髓外造血和异常的细胞因子表达(Tefferi,2016,Am.J.Hematol.[美国血液学杂志]91(12):1262-1271)。患者典型地表现为脾肿大、全身症状、中度至重度贫血、血小板减少症和白细胞增多。

原发性骨髓纤维化是费城染色体(Ph1)阴性骨髓增殖性肿瘤(MPN)组的成员，该组还包括PV和ET(Tefferi,2007,Clin.Adv.Hematol.Onlco.[血液学与肿瘤学临床进展]5:113-115)。几乎所有的PV患者和约一半的ET和PMF患者都具有Janus激酶2(JAK2)突变，典型地是JAK2V617F。JAK2、CALR和MPL的突变导致JAK/信号转导子和转录激活因子(STAT)信号传导途径的激活，从而导致细胞增殖和抑制细胞死亡。结果是克隆扩增(Ihle,2007,Curr.Opin.Genet.Dev.[遗传学与发育新见]17(1):8-14)。

真性红细胞增多症(PV)和原发性血小板增多症(ET)的特征在于红细胞(RBC)和血小板水平升高。然而，约10％的受到影响的患者发展为在形态上与PMF无法区分的骨髓纤维化。这些病症称为PV后MF和ET后MF(Campbell和Green,2005,HematologyAm.Soc.Hematol.Educ.Program[血液学-美国血液学学会教育项目]201-208)，并且在临床上被命名为MPN相关性骨髓纤维化。MPN相关性骨髓纤维化患者的生存预后与PMF的生存预后相似，并且转化为急性髓性白血病(AML)的累积风险为约10％。

大约70％的MF个体处于中风险2或高风险类别(Gangat等人,2011,J.Clin.Oncol.[临床肿瘤学杂志]29(4):392-397)，代表了最大的未满足的医疗需求。脾脏和肝脏的症状性肿大、RBC输注的必要性、恶病质及其他MF相关症状导致这些患者的生活质量大大降低(Mesa等人,Leukemia[白血病]21(9):1964-1970)。

贫血是红细胞数量减少或血液中血红蛋白低于正常量。血红蛋白的氧结合能力降低也可能导致贫血。贫血是最常见的血液障碍。约三分之二的MPN相关性骨髓纤维化患者在诊断时存在贫血，并且几乎所有患者在其病程期间都会发生贫血。总体而言，贫血和RBC输注依赖性是生存和转变为急变期风险的强健的独立预后变量(Passamonti等人,2010,Blood[血液]115(9):1703-1708；Elena等人,2011,Haematologica[血液学]96(1):167-170)。MPN相关性骨髓纤维化中贫血的病因是复杂的(Barosi等人,2010,Leuk Res.[白血病研究]34(9):1119-1120；Cervantes等人,2009,Blood[血液]113(13):2895-2901)。除潜在的疾病外，一些用于治疗MPN相关性骨髓纤维化的药物，如羟基脲(羟基尿素)和JAK2抑制剂(例如鲁索替尼)，可加重贫血。例如，虽然鲁索替尼在脾脏大小和症状缓解方面表现出显著改善，但它通常与中度至重度血小板减少症和贫血相关(Verstovsek等人,2017,J.Hematol.Oncol.[血液学和肿瘤学杂志]10(1):55)。

鉴于目前缺乏安全且有效的药物疗法来治疗MPN相关性骨髓纤维化患者的贫血，因此对于开发治疗MPN相关MF患者贫血的新疗法存在显著未满足的医疗需求。

两种相关的II型受体ActRIIA和ActRIIB已被鉴定为激活素的II型受体(Mathews和Vale,1991,Cell[细胞]65:973-982；Attisano等人,1992,Cell[细胞]68:97-108)。除了激活素外，ActRIIA和ActRIIB可以与其他几种TGF-β家族蛋白(包括BMP7、Nodal、GDF8和GDF11)发生生化相互作用(Yamashita等人,1995,J.Cell Biol.[细胞生物学杂志]130:217-226；Lee和McPherron,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.[美国国家科学院院刊]98:9306-9311；Yeo和Whitman,2001,Mol.Cell[分子细胞]7:949-957；Oh等人,2002,Genes Dev.[基因和发育]16:2749-54)。ALK4是激活素(特别是激活素A)的主要I型受体，并且ALK-7也可以作为激活素(特别是激活素B)的受体。

鲁特西普是一种ActRIIB配体抑制剂，已被描述用于治疗各种适应症。参见例如美国专利申请公开号US 2018/0050085 A1、美国专利号8,058,229、美国专利号8,361,957和美国专利号8,343,933。

3.发明内容

在一个方面，本文提供了用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，这些方法包括向受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱；并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物。

在另一方面，本文还提供了用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，这些方法包括(a)对受试者的血红蛋白(Hgb)水平进行首次测量；(b)向该受试者施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱；(c)向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物；(d)在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱后的第一时间段结束时，对该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平进行第二次测量；以及(e)基于与首次测量的血红蛋白(Hgb)水平相比的第二次测量的血红蛋白(Hgb)水平，或基于该受试者在第一时间段期间接受的红细胞输注次数，向该受试者施用后续剂量的该ActRIIB配体陷阱。

在一些实施例中，伴随施用该ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

在一些实施例中，该受试者是被诊断患有骨髓纤维化的受试者。

在一些实施例中，该骨髓纤维化是骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化。

在一些实施例中，该骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。

在一些实施例中，该骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)。

在一些实施例中，该骨髓纤维化是中风险或高风险真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)。

在一些实施例中，该骨髓纤维化是中风险或高风险原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。

在一些实施例中，该受试者是人。

在一些实施例中，该贫血与骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化相关。

在一些实施例中，该受试者是红细胞(RBC)输注依赖性的或非输注依赖性的。

在一些实施例中，该受试者是RBC输注依赖性的。

在一些实施例中，在施用该ActRIIB配体陷阱之前的84天内，该受试者在RBC输注中已接受4至12个RBC单位。

在一些实施例中，在未输注红细胞(RBC)的情况下，该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。

在一些实施例中，该受试者是非输注依赖性的。

在一些实施例中，在施用该ActRIIB配体陷阱之前的84天内，该受试者在RBC输注中已接受少于4个红细胞(RBC)单位。

在一些实施例中，该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于9.5g/dL。

在一些实施例中，在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱并伴随施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物之前，该受试者已接受过菲卓替尼治疗至少8周、至少16周、至少24周、至少32周或至少40周。

在一些实施例中，该受试者以前接受过鲁索替尼治疗。

在一些实施例中，每日施用该菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

在一些实施例中，口服施用该菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

在一些实施例中，以400mg/天的剂量施用该菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱在每个治疗周期开始时施用一次，其中每个周期为21天。

在一些实施例中，将该ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个周期。

在一些实施例中，将该ActRIIB配体陷阱皮下施用于该受试者。

在一些实施例中，该施用的ActRIIB配体陷阱的药学有效量是0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg或1.75mg/kg。

在一些实施例中，该施用的ActRIIB配体陷阱的药学有效量是1.33mg/kg。

在一些实施例中，该血红蛋白(Hgb)水平的首次测量是在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱之前进行。

在一些实施例中，该血红蛋白(Hgb)水平的首次测量与该初始剂量的ActRIIB配体陷阱的施用同时进行，或在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱后约3周、6周、9周、12周、15周、18周、21周或24周进行。

在一些实施例中，该血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量在该初始剂量的ActRIIB配体陷阱施用于该受试者后约在3周、6周、9周、12周、15周、18周、21周、24周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月进行。

在一些实施例中，该第一时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周。

在一些实施例中，该第一时间段是6周。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是1.33mg/kg。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg或1.75mg/kg。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.33mg/kg。

在一些实施例中，当该第二次测量的Hgb水平比该首次测量的Hgb水平高2g/dL或更多时，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量低于该ActRIIB配体陷阱的初始剂量。

在一些实施例中，当该受试者在该第一时间段期间输注过一次或多次RBC，或该第二次测量的Hgb水平比该首次测量的Hgb水平高0至约1g/dL之间，或该首次测量的Hgb水平在约6周的无输注期间降低1g/dL或更多时，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量高于该ActRIIB配体陷阱的初始剂量。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量与该ActRIIB配体陷阱的初始剂量相同。

在一些实施例中，这些方法进一步包括根据美国国家癌症研究所(NCI)不良事件通用术语标准(CTCAE)将该受试者中的血液学、肝脏、非血液学或胃肠道事件分级为1、2、3、4或5级；并且施用后续剂量的菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

在一些实施例中，菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的该后续剂量是300mg/天、200mg/天或100mg/天。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱是人源化融合蛋白，该人源化融合蛋白由ActRIIB的细胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱是融合蛋白，该融合蛋白包含ActRIIB的细胞外结构域和人IgG1 Fc结构域。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱是包含氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:3具有90％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:3具有95％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:3具有98％同一性的氨基酸序列；SEQ ID NO:3；与SEQ ID NO:6具有90％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:6具有95％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:6具有98％同一性的氨基酸序列；SEQ ID NO:6；与SEQ ID NO:7具有90％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:7具有95％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:7具有98％同一性的氨基酸序列；SEQ ID NO:7；与SEQ ID NO:11具有90％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:11具有95％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:11具有98％同一性的氨基酸序列；和SEQ ID NO:11。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱是包含氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列选自由以下组成的组：与SEQ ID NO:11具有90％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:11具有95％同一性的氨基酸序列；与SEQ ID NO:11具有98％同一性的氨基酸序列；和SEQ ID NO:11。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱是包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的多肽。

在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱是由SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQ IDNO:34的简并形式编码的多肽。

在一些实施例中，该方法使该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少0.5g/dL、至少1.0g/dL、至少1.5g/dL、至少2.0g/dL或至少2.5g/dL。

在一些实施例中，该方法使该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少1.5g/dL。

在一些实施例中，该方法在56天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9或至少10个单位。

在一些实施例中，该方法在56天的时间段内使该受试者接受的RBC输注减少了至少4个单位。

在一些实施例中，该方法在84天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9或至少10个单位。

在一些实施例中，该方法在连续84天的时间段内使该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少1.5g/dL。

在一些实施例中，该受试者在连续84天的时间段内无红细胞(RBC)输注。

在一些实施例中，该方法使该受试者中的血红蛋白(HGB)水平增加到与所述治疗前该受试者中的HGB水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

在一些实施例中，该方法使该受试者中的血细胞比容(HCT)水平增加到与所述治疗前该受试者中的HCT水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

在一些实施例中，该方法使该受试者中的平均红细胞体积(MCV)水平降低到与所述治疗前该受试者中的MCV水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。

在一些实施例中，该方法使该受试者中的细胞血红蛋白浓度(CHC)水平增加到与所述治疗前该受试者中的CHC水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

在一些实施例中，该方法使该受试者中的红细胞分布宽度(RDW)水平降低到与所述治疗前该受试者中的RDW水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。

在一些实施例中，该受试者中的网织红细胞水平保持在与所述治疗前该受试者中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。

在一些实施例中，该受试者中的网织红细胞水平保持在与参考群体中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。

在一些实施例中，该受试者中的白细胞水平保持在与所述治疗前该受试者中的白细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。

4.附图说明

图1展示了用鲁特西普和菲卓替尼的组合治疗患者的总体研究设计。

5.具体实施方式

5.1缩写和术语

如本文所用，术语“约”当与数字结合使用时是指参考数字1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％以内的任何数字。在某些实施例中，术语“约”涵盖所列举的确切数字。

如本文所用，“ActRII”是指激活素受体II型。如本文所用，“ActRIIB”是指激活素受体IIB型。参见例如，Attisano等人,1992,Cell[细胞]68:97-108。GenBank^TM登录号NM_001106.3提供了示例性人ActRIIB核酸序列。GenBank^TM登录号NP_001097.2提供了示例性人ActRIIB氨基酸序列。

“β⁰”是指与缺乏β球蛋白亚基合成相关的等位基因。

“β⁺”是指与减少的β球蛋白亚基合成相关的等位基因。

如本文所使用，“BL”是指基线。

如本文所用，“CHC”是指细胞血红蛋白浓度。

如本文所用，“ECD”是指细胞外结构域。

如本文所使用，“EPO”是指红细胞生成素。

如本文所用，“菲卓替尼”是指N-叔丁基-3-[(5-甲基-2-{4-[2-(吡咯烷-1-基)乙氧基]苯胺基}嘧啶-4-基)氨基]苯磺酰胺(CAS号936091-26-8)的化合物及其药学上可接受的盐和/或水合物(如二氯化物一水合物)。它也被称为SAR302503或TG101348，并且具有以下结构：

如本文所用，“Hb”和“Hgb”均指血红蛋白。

如本文所用，“HI-E”是指红系血液学改善。在某些实施例中，HI-E如IWG所定义。在某些实施例中，HI-E如经修改的2006IWG所定义。在某些实施例中，低输注负担患者的HI-E是患者中血红蛋白浓度增加至少1.5g/dL，持续至少8周。在某些实施例中，高输注负担患者的HI-E是8周内RBC输注减少至少4个单位。

如本文所用，“HTB”是指高输注负担。在某些实施例中，HTB受试者在8周的过程中接受大于或等于4个RBC单位。

如本文所用，“IgG”是指免疫球蛋白G。

如本文所用，“IPSS-R”是指国际预后评分系统-修订版。

如本文所用，“IWG”是指国际工作组。参见例如，Cheson等人Blood.[血液]200096:3671-3674。在某些实施例中，IWG是指经修改的2006年标准。参见例如，Cheson等人,2006,Blood[血液],108(2)。

如本文所用，“LTB”是指低输注负担。在某些实施例中，LTB受试者在8周的过程中接受少于4个RBC单位。

如本文所用，“鲁特西普”是指由开放阅读框的表达以及随后的蛋白质纯化程序产生的产物，该开放阅读框具有编码SEQ ID NO:11的SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQ IDNO:34的简并形式。

如本文所用，“MedDRA”是指监管活动医学词典。

如本文所用，“MCV”是指平均红细胞体积。

如本文所用，“MDS”是指骨髓增生异常综合征。

如本文所用，“mg/kg”在ActRIIB配体陷阱的剂量的上下文中是指该ActRIIB配体陷阱的毫克数/千克待施用该ActRIIB配体陷阱的受试者的体重。

如本文所用，“MPN相关性骨髓纤维化”是指骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化。

如本文所用，“PD”是指药效动力学。

如本文所用，“PK”是指药代动力学。

如本文所用，“PMF”是指原发性骨髓纤维化。

如本文所用，“ET后MF”是指原发性血小板增多症后骨髓纤维化。

如本文所用，“PV后MF”是指真性红细胞增多症后骨髓纤维化。

如本文所用，“RA”是指难治性贫血。

如本文所用，“RAEB”是指具有过多母细胞的难治性贫血。

如本文所用，“RBC”是指红细胞。

如本文所用，“RBC-TI”是指不依赖红细胞输注。

如本文所用，“RDW”是指红细胞分布宽度。

如本文所用，“SC”是指皮下。

如本文所用，“WPSS”是指世界卫生组织(WHO)预后评分系统。

在某些实施例中，在贫血的上下文中，“治疗(treat、treatment或treating)”包括改善至少一种贫血症状。贫血的非限制性实例包括疲劳、能量损失、心跳加速、呼吸急促、头痛、注意集中困难、头晕、皮肤苍白、腿部痉挛和失眠。

5.2概述

本文提供了治疗有需要的受试者的贫血的方法，这些方法包括向该受试者施用ActRIIB配体抑制剂(例如，鲁特西普，其是由开放阅读框的表达以及随后的蛋白质纯化程序产生的产物，该开放阅读框具有编码SEQ ID NO:11的SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQID NO:34的简并形式；参见第5.4节)，并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物(参见第5.3节)。给药方案在5.5和5.8节中进行了描述。可以使用本文提供的方法治疗的患者群体在5.6节中进行了描述。

5.3菲卓替尼

菲卓替尼

是一种口服激酶抑制剂，其对野生型和突变激活的Janus激酶2(JAK2)和纤维肌痛综合征(FMS)样酪氨酸激酶3(FLT3)具有活性。菲卓替尼是JAK2选择性抑制剂，其对JAK2的效力高于家族成员JAK1、JAK3和酪氨酸激酶2(TYK2)。在表达具有突变活性的JAK2或FLT3的细胞模型中，菲卓替尼降低信号转导子和转录激活因子(STAT3/5)蛋白的磷酸化，抑制细胞增殖，并诱导凋亡细胞死亡。在JAK2V617F驱动的骨髓增殖性疾病的小鼠模型中，菲卓替尼阻断了STAT3/5的磷酸化，提高了存活并改善了疾病相关症状，包括降低白细胞、血细胞比容、脾肿大和纤维化。

菲卓替尼在一项在先前未经治疗的中风险2或高风险MF患者中进行的随机、安慰剂对照的3期研究(JAKARTA[EFC12153])中表现出临床功效。

2019年8月16日，菲卓替尼

得到了美国FDA批准，用于治疗患有中风险2或高风险原发性或继发性(真性红细胞增多症后或原发性血小板增多症后)骨髓纤维化的成人患者。

在某些实施例中，菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物可用于本文提供的方法中(参见第5.5节)。

在一些实施例中，如本文所用，“菲卓替尼”是指菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物。在一些实施例中，“菲卓替尼”是指菲卓替尼二盐酸盐。在一些实施例中，“菲卓替尼”是指菲卓替尼二盐酸盐一水合物。

5.4ACTRIIB配体陷阱

在某些实施例中，本节中描述的ActRIIB配体陷阱可用于本文提供的方法中(参见第5.5节)。在某些实施例中，用于与本方法一起使用的ActRIIB配体陷阱包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列。在某些实施例中，用于与本方法一起使用的ActRIIB配体陷阱是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码SEQ ID NO:11的SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQ ID NO:34的简并形式。

如本文所用，术语“ActRIIB”是指来自任何物种的激活素受体IIB型(ActRIIB)蛋白的家族以及通过诱变或其他修饰衍生自此类ActRIIB蛋白的变体。本文提及ActRIIB应理解为是提及目前鉴定的受体形式中的任一种。ActRIIB家族的成员通常是跨膜蛋白，由具有富半胱氨酸区的细胞外配体结合结构域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的细胞质结构域构成。

用于本文所述组合物和方法的ActRIIB配体陷阱包括但不限于结合激活素的可溶性ActRIIB多肽；与激活素(特别是激活素A或B亚基，也称为βA或βB)结合并破坏ActRIIB结合的抗体；与ActRIIB结合并破坏激活素结合的抗体；针对激活素或ActRIIB结合选择的非抗体蛋白；以及针对激活素或ActRIIB结合选择的随机肽，它们可以与Fc结构域缀合。

在某些实施例中，具有激活素或ActRIIB结合活性的两种或更多种不同的蛋白质(或其他部分)，尤其是分别阻断I型(例如，可溶性I型激活素受体)和II型(例如，可溶性II型激活素受体)结合位点的激活素结合蛋白可以连接在一起，以产生抑制ActRIIB的双功能或多功能结合分子，因此可用于本文所述组合物和方法。在某些实施例中，抑制ActRIIB的激活素-ActRIIB信号传导轴拮抗剂包括用于本文所述组合物和方法中的核酸适体、小分子和其他试剂。

此类ActRIIB配体陷阱可以如先前在国际公开号WO2014/066486的5.5.2节中所述产生和修饰，将该国际公开以其全文并入本文。

(a)包含ActRIIB抗体的ActRIIB配体陷阱

在某些实施例中，在本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱包括与激活素(特别是激活素A或B亚基)结合并破坏ActRIIB结合的抗体。

(b)包含ActRIIB多肽的ActRIIB配体陷阱

如本文所用，术语“ActRIIB多肽”是指包含ActRIIB家族成员的任何天然存在的多肽及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽。例如，ActRIIB多肽包括衍生自任何已知ActRIIB受体的序列的多肽，该受体具有以下序列，该序列与ActRIIB多肽的序列具有至少约80％的同一性，任选地至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同一性。例如，ActRIIB多肽可以结合并抑制ActRIIB蛋白和/或激活素的功能。ActRIIB多肽的实例包括人ActRIIB前体多肽(SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14)。对于其氨基酸序列以SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14描述的ActRIIB前体多肽(即人ActRIIB前体多肽)，ActRIIB前体多肽的信号肽位于氨基酸1-18；细胞外结构域位于氨基酸19至134，并且可能的N-连接糖基化位点位于氨基酸42和65位。编码SEQ ID NO:2的人ActRIIB前体多肽的核酸序列被公开为SEQ ID NO:5(SEQ ID NO:5提供了在对应于氨基酸位置64的密码子处的丙氨酸，但本领域技术人员可使用本领域已知的方法容易地对其进行修饰，以提供对应于氨基酸位置64的密码子处的精氨酸取而代之)。有关序列的描述参见表1。

本文描述的所有ActRIIB相关多肽的氨基酸编号是基于SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:14(不同之处仅在位置64处表达的氨基酸)的氨基酸编号，除非另外具体指定。例如，如果ActRIIB多肽被描述为在氨基酸位置79处具有取代/突变，则要理解为该位置79是指衍生出ActRIIB多肽的SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14中的第79个氨基酸。同样，如果ActRIIB多肽被描述为在氨基酸位置64处具有丙氨酸或精氨酸，则要理解为位置64是指衍生出ActRIIB多肽的SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14中的第64个氨基酸。

在某些实施例中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱包含含有ActRIIB的激活素结合结构域的多肽。在某些实施例中，ActRIIB的激活素结合结构域包含ActRIIB的细胞外结构域或其一部分。在特定实施例中，ActRIIB的细胞外结构域或其部分是可溶的。ActRIIB多肽的说明性修饰形式在美国专利申请公开号20090005308和20100068215中披露，其披露内容通过引用以其全文并入本文。

在特定实施例中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱是可溶性ActRIIB多肽。术语“可溶性ActRIIB多肽”通常指包含ActRIIB蛋白的细胞外结构域(包括ActRIIB蛋白的任何天然存在的细胞外结构域及其任何变体(包括突变体、片段和肽模拟物形式))的多肽。可溶性ActRIIB多肽可以与激活素结合；然而，野生型ActRIIB蛋白在与激活素相对于GDF8/11的结合方面没有表现出显著的选择性。在某些实施例中，具有不同结合特性的ActRIIB的改变形式可以用于本文提供的方法中。例如，在国际专利申请公开号WO2006/012627和WO 2010/019261中披露了此类改变形式，其披露内容通过引用以其全文并入本文。通过将天然或改变的ActRIIB蛋白与第二激活素选择性结合剂偶联，可以增加这些天然或改变的ActRIIB蛋白对激活素的特异性。示例性的可溶性ActRIIB多肽包括人ActRIIB多肽的细胞外结构域(例如，SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、24和29)。

Hilden等人(Blood[血液],1994,83(8):2163-70)披露的具有ActRIIB细胞外序列的Fc融合蛋白，其在对应于ActRIIB前体氨基酸序列(即SEQ ID NO:2)的氨基酸64的位置处具有丙氨酸(在本文中称为“A64”)，已被证明对激活素和GDF-11具有相对较低的亲和力。相比之下，在ActRIIB前体氨基酸序列的位置64处具有精氨酸(在本文中称为“R64”)的Fc融合蛋白对激活素和GDF-11具有低纳摩尔至高皮摩尔范围内的亲和力(参见例如，美国专利申请公开号20100068215，将其披露内容以其全文并入本文)。在位置64处具有精氨酸的ActRIIB前体氨基酸序列以SEQ ID NO:14表示。这样，在某些实施例中，根据本文所述组合物和方法使用的ActRIIB多肽可包含(i)在对应于ActRIIB前体氨基酸序列(即SEQ ID NO:2)的氨基酸64的位置处的丙氨酸；或(ii)ActRIIB前体氨基酸序列(即SEQ ID NO:14)的位置64处的精氨酸。在其他实施例中，根据本文所述组合物和方法使用的ActRIIB多肽可以在对应于ActRIIB前体氨基酸序列(即SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14)的氨基酸64的位置处包含不是丙氨酸或精氨酸的氨基酸。

已经表明，ActRIIB细胞外结构域的C末端处脯氨酸结的缺失降低了受体对激活素的亲和力(参见例如，Attisano等人,Cell[细胞],1992,68(1):97-108)。相对于含有SEQ IDNO:14的氨基酸20-134(即SEQ ID NO:17)的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-134)-Fc”(其包括脯氨酸结区域和完整的近膜结构域)，含有SEQ ID NO:14的氨基酸20-119(即SEQID NO:18)的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-119)-Fc”对GDF-11和激活素的结合减少。然而，相对于ActRIIB的非截短的细胞外结构域，含有SEQ ID NO:14的氨基酸20-129的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-129)-Fc”保留了相似但略微降低的活性，即使脯氨酸结区域被破坏。因此，预期包含终止于SEQ ID NO:14(或SEQ ID NO:2)的氨基酸134、133、132、131、130和129处的细胞外结构域的ActRIIB多肽都是有活性的，但终止于氨基酸134或133的构建体可能是活性最强的。类似地，预期在任何残基129-134处的突变不会大幅度改变配体结合亲和力，如SEQ ID NO:14的P129和P130的突变不会显著降低配体结合的事实所表明的。因此，根据本文所述的方法和组合物使用的ActRIIB多肽可止于早至SEQ ID NO:14(或SEQ ID NO:2)的氨基酸109(即，最后的半胱氨酸)，然而，预期止于SEQ ID NO:14(或SEQ IDNO:2)的氨基酸位置109和119处或其之间的形式的配体结合能力降低。

SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:14的氨基酸29代表ActRIIB前体序列中的起始半胱氨酸。预期始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的N末端的氨基酸29或这些氨基酸位置之前开始的ActRIIB多肽，将保持配体结合活性。SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的位置24处的丙氨酸到天冬酰胺的突变引入了N-连接糖基化序列，而基本上不影响配体结合。这证实了信号切割肽和半胱氨酸交联区之间的区域(对应于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸20-29)中的突变是极大被接受的。特别地，始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸位置20、21、22、23和24的ActRIIB多肽将保持活性，还预期始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸位置25、26、27、28和29的ActRIIB多肽保持活性。始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸位置22、23、24或25的ActRIIB多肽将具有最大活性。

总之，根据本文所述的方法和组合物使用的ActRIIB前体蛋白(即SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14)的活性部分(即ActRIIB多肽)通常包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸29-109，并且此类ActRIIB多肽可以例如从对应于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸19-29中任一个的残基处开始并且在对应于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸109-134中任一个的位置处结束。本文涵盖的ActRIIB多肽的特定实例包括从SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:14的19-29、20-29或21-29的氨基酸位置处开始并且从SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的119-134、119-133或129-134、129-133的氨基酸位置处结束的那些。本文涵盖的ActRIIB多肽的其他特定实例包括从SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的20-24(或21-24、或22-25)的氨基酸位置处开始并且从SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的109-134(或109-133)、119-134(或119-133)或129-134(或129-133)的氨基酸位置处结束的那些。还考虑落入这些范围内的变体ActRIIB多肽，特别是与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的对应部分具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性或序列同源性的那些。

在某些实施例中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱包含ActRIIB的细胞外结构域的截短形式。截短可以是在ActRIIB多肽的羧基末端和/或氨基末端。在某些实施例中，相对于成熟的ActRIIB多肽细胞外结构域，截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸长度。在某些实施例中，截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个成熟ActRIIB多肽细胞外结构域的N末端氨基酸。在某些实施例中，截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个成熟ActRIIB多肽细胞外结构域的C末端氨基酸。例如，ActRIIB的截短形式包括具有氨基酸20-119；20-128；20-129；20-130；20-131；20-132；20-133；20-134；20-131；21-131；22-131；23-131；24-131；和25-131的多肽，其中氨基酸位置参考SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14中的氨基酸位置。

ActRIIB的另外示例性截短形式包括(i)始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸21-29的任一个的氨基酸(任选地始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的22-25)和止于SEQID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸109-134的任一个的多肽；(ii)始于SEQ ID NO:2或SEQID NO:14的氨基酸20-29的任一个(任选地始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的22-25)和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸109-133的任一个的多肽；(iii)始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸20-24的任一个(任选地始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的22-25)和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸109-133的任一个的多肽；(iv)始于SEQID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸21-24的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸109-134的任一个的多肽；(v)始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸20-24的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸118-133的任一个的多肽；(vi)始于SEQ IDNO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸21-24的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸118-134的任一个的多肽；(vii)始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸20-24的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸128-133的任一个的多肽；(viii)始于SEQID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸20-24的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸128-133的任一个的多肽；(ix)始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸21-29的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸118-134的任一个的多肽；(x)始于SEQID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸20-29的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸118-133的任一个的多肽；(xi)始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸21-29的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸128-134的任一个的多肽；以及(xii)始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸20-29的任一个和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸128-133的任一个的多肽。在特定的实施例中，ActRIIB多肽包含始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸位置25和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸位置131的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成。在另一个特定的实施例中，ActRIIB多肽由或基本上由SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28或29的氨基酸序列组成。

本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB多肽的任一个可以作为同源二聚体产生。本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB多肽的任一个可配制成具有异源部分的融合蛋白，该异源部分包含来自IgG重链的恒定区，例如Fc结构域。本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB多肽的任一个可包含在对应于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的位置79的位置处的酸性氨基酸，任选地与相对于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的一个或多个另外的氨基酸取代、缺失或插入组合。

在特定实施例中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱包含具有一个或多个氨基酸取代/突变的ActRIIB的细胞外结构域。这样的氨基酸取代/突变可以是例如SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸位置79处的亮氨酸交换为酸性氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸。例如，在ActRIIB细胞外结构域多肽中SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的位置L79可改变，以赋予改变的激活素-肌生成抑制蛋白(GDF-11)结合性质。与激活素结合相比，L79A和L79P突变更大程度地降低GDF-11结合。L79E和L79D突变保持GDF-11结合，同时表明极大地降低了激活素结合。

在某些实施例中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱包含截短形式的ActRIIB细胞外结构域，该细胞外结构域还携带氨基酸取代，例如SEQ ID NO:2或SEQID NO:14的氨基酸位置79处的亮氨酸交换为酸性氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸。在特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的还携带氨基酸取代的ActRIIB多肽的细胞外结构域的截短形式是SEQ ID NO:9。截短的和/或携带一个或多个氨基酸取代的ActRIIB的形式可与上文论述的抗体的Fc结构域连接。

例如，可通过筛选重组产生自编码ActRIIB多肽的核酸的相应片段的多肽，获得ActRIIB多肽的功能活性片段。此外，片段可使用本领域已知的技术，例如常规的Merrifield固相f-Moc或t-Boc化学过程来化学合成。可产生片段(重组地或通过化学合成)，并对其进行测试，以鉴定可用作ActRIIB蛋白或激活素介导的信号传导的拮抗剂(陷阱)的那些肽基片段。

此外，可通过例如筛选重组产生自编码ActRIIB多肽的相应诱变核酸的修饰多肽的文库，获得ActRIIB多肽的功能活性变体。可产生变体，并对其进行测试，以鉴定可以用作ActRIIB蛋白或激活素介导的信号传导的拮抗剂(抑制剂)的那些。在某些实施例中，ActRIIB多肽的功能变体包含与选自SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。在某些实施例中，功能变体具有与选自SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列。

已经表明，由SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的残基Y31、N33、N35、L38到T41、E47、E50、Q53到K55、L57、H58、Y60、S62、K74、W78到N83、Y85、R87、A92和E94到F101限定了ActRIIB的配体结合口袋。在这些位置，预期保守突变将是被接受的，尽管K74A突变是极大被接受的，R40A、K55A、F82A和位置L79处的突变也是一样。在非洲蟾蜍属(Xenopus)中R40是K，表明该位置处的碱性氨基酸将是被接受的。Q53在牛ActRIIB中是R且在非洲蟾蜍属ActRIIB中是K，因此包括R、K、Q、N和H的氨基酸在该位置处将是被接受的。因此，用于在本文所述方法和组合物中使用的ActRIIB多肽的通式是包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸29-109，但任选地始于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的范围为20-24或22-25的氨基酸位置和止于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的范围为129-134的氨基酸位置，且在配体结合口袋中包含不超过1、2、5或15个保守氨基酸改变，以及在配体结合口袋中在SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸位置40、53、55、74、79和/或82处包含零、一个或多个非保守改变的通式。这样的ActRIIB多肽可以保持与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸29-109的序列大于80％、90％、95％或99％序列同一性或序列同源性。结合口袋(此处可以极大接受变异性)外的位点包括ActRIIB细胞外结构域的氨基和羧基末端以及位置42-46和65-73。SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的位置65处天冬酰胺向丙氨酸的改变(N65A)实际上改善了A64背景中的配体结合，并因此预期在R64背景中对配体结合无不利影响。该变化可能会消除A64背景中N65处的糖基化，因此表明在该区域内显著的变化可能是被接受的。尽管R64A变化是不太被接受的，但是R64K是极大被接受的，并因此另一个碱性残基，如H在位置64处可以是被接受的。

在特定实施例中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱包含缀合物/融合蛋白，该缀合物/融合蛋白包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIB受体的细胞外结构域(例如激活素结合结构域)。此类缀合物/融合蛋白可包含本文披露的任何ActRIIB多肽(例如SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的任一个)、本领域已知的任何ActRIIB多肽或使用本领域已知的和/或本文提供的方法产生的任何ActRIIB多肽。

在某些实施例中，细胞外结构域经由接头(例如肽接头)与抗体的Fc部分连接。示例性接头包括短多肽序列，如2-10、2-5、2-4、2-3个氨基酸残基(例如甘氨酸残基)，例如像，Gly-Gly-Gly接头。在特定的实施例中，接头包含氨基酸序列Gly-Gly-Gly(GGG)。在另一个特定的实施例中，接头包含氨基酸序列Thr-Gly-Gly-Gly(TGGG)。任选地Fc结构域在残基如Asp-265、赖氨酸322和Asn-434处具有一个或多个突变。在某些情况下，相对于野生型Fc结构域，具有一个或多个这些突变(例如Asp-265突变)的突变体Fc结构域结合Fcγ受体的能力降低。在其他情况下，相对于野生型Fc结构域，具有一个或多个这些突变(例如Asn-434突变)的突变体Fc结构域结合MHC I类相关Fc受体(FcRN)的能力提高。SEQ ID NO:6、7、10、11、20、21、24、25、26、27、30、32和33中所示包含与Fc结构域融合的ActRIIB的可溶性细胞外结构域的示例性融合蛋白。

在特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIB的细胞外结构域或其部分，其中所述ActRIIB配体陷阱包含与选自SEQ ID NO:6、7、10、11、20、21、24、25、26、27、30、32和33的氨基酸序列具有至少75％同一性的氨基酸序列。在另一个特定的实施例中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB配体陷阱包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIB的细胞外结构域或其部分，其中所述ActRIIB配体陷阱包含与选自SEQ ID NO:6、7、10、11、20、21、24、25、26、27、30、32和33的氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

在特定的实施例中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB配体陷阱是人ActRIIB受体的细胞外结构域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个特定的实施例中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB配体陷阱是人ActRIIB受体的截短的细胞外结构域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个特定的实施例中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB配体陷阱是人ActRIIB受体的截短的细胞外结构域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中该人ActRIIB受体的截短细胞外结构域在对应于SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸79的氨基酸位置处具有氨基酸取代。在一个实施例中，在对应于SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:14的氨基酸79的氨基酸位置处的氨基酸取代是用天冬氨酸取代亮氨酸(即L79D突变)。

在特定的实施例中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB配体陷阱是SEQ IDNO:10或11，其代表人ActRIIB受体的细胞外结构域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中所述ActRIIB细胞外结构域包含具有L79D突变的SEQ ID NO:14的氨基酸25-131。编码SEQID NO:10的ActRIIB-Fc融合蛋白的核酸序列以SEQ ID NO:31表示。

在另一个特定的实施例中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB配体陷阱是SEQID NO:20或21，其代表人ActRIIB受体的细胞外结构域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中所述ActRIIB细胞外结构域包含具有L79D突变的SEQ ID NO:2的氨基酸25-131。

在特定实施例中，相对于ActRIIB(R64)-Fc形式，包含增加ActRIIB-Fc融合蛋白的血清半衰期的另外的N-连接糖基化位点(N-X-S/T)的突变的ActRIIB多肽可用于本文所述方法和组合物中。在特定的实施例中，在SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的位置24处引入天冬酰胺(A24N)产生赋予更长半衰期的NXT序列。其他NX(T/S)序列可在42-44(NQS)和65-67(NSS)处发现，尽管后者可能无法用位置64处的R(即在R64多肽中)有效糖基化。通常，可以在ActRIIB的配体结合口袋外的位置处引入N-X-S/T序列，这在上文中有详细说明。特别适合于非内源N-X-S/T序列引入的位点包括SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:14的氨基酸20-29、20-24、22-25、109-134、120-134或129-134。还可将N-X-S/T序列引入ActRIIB序列与Fc或其他融合组分之间的接头中。可通过将N引入相对于预先存在的S或T的正确位置或通过将S或T引入对应于预先存在的N的位置，以最小努力引入这样的位点。因此，产生N-连接糖基化位点的所希望的改变是：A24N、R64N、S67N(可能与N65A改变组合)、E106N、R112N、G120N、E123N、P129N、A132N、R112S和R112T(所有氨基酸位置对应于它们可在SEQ ID NO:2或SEQID NO:14中发现的位置)。可将预期糖基化的任何S变为T，因为由糖基化提供了保护而不产生免疫原性位点。同样，可将预期糖基化的任何T变为S。因此，本文涵盖S67T和S44T改变。同样，在A24N变体中，可以使用S26T改变。因此，ActRIIB多肽可包括一个或多个另外的非内源N-连接糖基化共有序列。

在某些实施例中，本文所述方法和组合物利用分离的或纯化的ActRIIB多肽，即分离自其他蛋白质或在其他方面基本不含其他蛋白质的ActRIIB多肽可用于本文所述方法和组合物。一般将通过从重组核酸表达来产生ActRIIB多肽。

在某些方面，本文所述方法和组合物中使用的ActRIIB多肽由分离的和/或重组的核酸编码，包括本文披露的片段、功能变体和融合蛋白。例如，SEQ ID NO:5编码天然存在的人ActRIIB前体多肽。主题核酸可以是单链的或双链的。此类核酸可以是DNA或RNA分子。这些核酸可用于例如制备ActRIIB多肽的方法，或作为直接的治疗剂(例如在基因疗法中)。

在某些方面，要进一步了解，可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽的核酸包括作为SEQ ID NO:5的变体的核酸以及编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列的变体的核酸(例如编码SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的核酸)。变体核苷酸序列包括差异在于一个或多个核苷酸取代、添加或缺失的序列，例如等位基因变体。

在某些实施例中，可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽的分离的或重组的核酸序列与SEQ ID NO:5或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的核酸)具有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性。本领域普通技术人员应认识到，与SEQ ID NO:5或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的核酸)互补的核酸序列以及SEQ ID NO:19或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:3、4、9、12、13、15、16、17、18、19、22、23、28和29的核酸)的变体可用于本文所述方法和组合物。在另外的实施例中，这些核酸序列可以是分离的、重组的和/或与异源核苷酸序列融合，或可在DNA文库中。

测定

可测试各种ActRIIB多肽变体或可溶性ActRIIB多肽变体抑制ActRIIB信号传导的能力。此外，可测试化合物抑制ActRIIB信号传导的能力。一旦证实ActRIIB配体陷阱的活性，这些化合物可用于本文提供的方法。以下测定针对ActRIIA进行描述，但对于ActRIIB也可类似地进行。

例如，可对ActRIIA多肽变体对涉及骨产生或骨破坏的基因表达的影响进行评估。根据需要，这可在一种或多种重组ActRIIA配体蛋白(例如激活素)的存在下进行，并且细胞可被转染，以产生ActRIIA多肽和/或其变体，并且任选地产生ActRIIA配体。同样，可将ActRIIA多肽施用于小鼠或其他动物，并可评估一种或多种骨性质，如密度或体积。还可以评价骨折的愈合速率。双能x射线吸收测定法(DEXA)是一种用于评估动物骨密度的成熟的非侵入性定量技术。在人类中，中枢DEXA系统可用于评价脊柱和骨盆的骨密度。这些是总体骨密度的最佳预测值。外周DEXA系统可用于评价外周骨的骨密度，包括例如手、腕部、踝和脚的骨骼。传统的x射线成像系统，包括CAT扫描，可用于评价骨生长和骨折愈合。此外，骨密度可以使用定量计算机断层扫描(qCT)来测量。还可以评价骨的机械强度。

在某些方面，本文提供ActRIIA多肽(例如可溶性ActRIIA多肽)和激活素多肽鉴定作为激活素-ActRIIA信号传导途径的激动剂或拮抗剂的化合物(药剂)的用途。可以对通过该筛选鉴定的化合物进行测试，以评估其在体外调节骨生长或矿化的能力。任选地，可在动物模型中进一步测试这些化合物，以评估其在体内调节组织生长的能力。

有多种筛选通过靶向激活素和ActRIIA多肽调节组织生长的治疗剂的方法。在某些实施例中，可以进行化合物的高通量筛选，以鉴定干扰激活素或ActRIIA介导的对骨的作用的药剂。在某些实施例中，进行测定以筛选并鉴定特异性抑制或降低ActRIIA多肽与激活素结合的化合物。可替代地，可使用测定来鉴定提高ActRIIA多肽与激活素结合的化合物。在另外的实施例中，可通过化合物与激活素或ActRIIA多肽相互作用的能力来鉴定这些化合物。

多种测定形式将是足够的，且根据本披露，本领域普通技术人员仍可了解本文没有明确描述的那些。如本文描述的，本文使用的测试化合物(药剂)可以通过任何组合化学方法产生。可替代地，主题化合物可以是体内或体外合成的天然存在的生物分子。例如，待测试其作为组织生长调节剂的能力的化合物(药剂)可通过例如细菌、酵母、植物或其他生物体(例如天然产物)产生、以化学方式产生(例如小分子，包括肽模拟物)或重组产生。本文预期的测试化合物包括非肽基有机分子、肽、多肽、肽模拟物、糖、激素和核酸分子。在特定的实施例中，测试剂是具有小于约2,000道尔顿分子量的有机小分子。

测试化合物可以作为单个离散实体提供，或以例如通过组合化学作用制备的较大复杂性的文库提供。这些文库可包含例如醇、烷基卤化物、胺、酰胺、酯、醛、醚和其他有机化合物类别。向测试系统提供的测试化合物可呈分离的形式，或作为化合物的混合物，特别在初步筛选步骤中。任选地，化合物可以用其他化合物衍生化，并具有便于化合物分离的衍生基团。衍生基团的非限制性实例包括生物素、荧光素、洋地黄毒苷、绿色荧光蛋白、同位素、多组氨酸、磁珠、谷胱甘肽S转移酶(GST)、光活化性交联剂或其任何组合。

在测试化合物和天然提取物的文库的许多药物筛选程序中，高通量测定是所需的，以使在给定时间段内检测的化合物数目最大化。在例如可用纯化的或半纯化的蛋白质衍生的无细胞系统中进行的测定作为“初步”筛选通常是优选的，因为它们可产生以允许快速开发和相对容易地检测由测试化合物介导的分子靶标中的改变。此外，测试化合物的细胞毒性或生物利用率的作用一般在体外系统中可忽略，该测定反而主要集中于药物对分子靶标的作用，正如在ActRIIA多肽和激活素之间结合亲和力的改变方面这可能是明显的。

仅为了说明，在示例性筛选测定中，使目标化合物与分离且纯化的ActRIIA多肽接触，该ActRIIA多肽通常能够结合激活素。然后向化合物和ActRIIA多肽的混合物中添加含有ActRIIA配体的组合物。ActRIIA/激活素复合物的检测和定量提供用于测定化合物抑制(或强化)ActRIIA多肽与激活素之间形成复合物的功效的手段。可通过从使用各种浓度的测试化合物获得的数据生成剂量响应曲线来评估化合物的功效。此外，还可进行对照测定以提供用于对比的基线。例如，在对照测定中，将分离且纯化的激活素添加到含有ActRIIA多肽的组合物中，并且在不存在测试化合物情况下对ActRIIA/激活素复合物的形成进行定量。应当理解，反应物混合的顺序通常可变化，并且可以同时混合。此外，可使用细胞提取物和裂解物代替纯化的蛋白质以提供合适的无细胞测定系统。

ActRIIA多肽与激活素之间的复合物形成可以通过多种技术来检测。例如，可使用例如可检测地标记的蛋白质，例如放射性标记的(例如32P、35S、14C或3H)、荧光标记的(例如FITC)或酶标记的ActRIIA多肽或激活素，通过免疫测定法，或通过色谱检测，对复合物形成的调节进行定量。

在某些实施例中，在直接或间接测量ActRIIA多肽与其结合蛋白之间相互作用的程度时，本文预期使用荧光偏振测定和荧光共振能量转移(FRET)测定。此外，其他检测方式，例如基于光波导(PCT公开WO 96/26432和美国专利号5,677,196)、表面等离子体共振(SPR)、表面电荷传感器和表面力传感器的那些，与本文描述的许多实施例是兼容的。

此外，相互作用陷阱测定，也称为“双杂交测定”可用于鉴定破坏或强化ActRIIA多肽与它的结合蛋白之间相互作用的试剂。参见例如美国专利号5,283,317；Zervos等人(1993)Cell[细胞]72:223-232；Madura等人(1993)J Biol Chem[生物化学杂志]268:12046-12054；Bartel等人(1993)Biotechniques[生物技术]14:920-924；以及Iwabuchi等人(1993)Oncogene[致癌基因]8:1693-1696。在特定的实施例中，本文预期使用反向双杂交系统来鉴定解除ActRIIA多肽与其结合蛋白之间的相互作用的化合物(例如小分子或肽)。参见例如，Vidal和Legrain,(1999)Nucleic Acids Res[核酸研究]27:919-29；Vidal和Legrain,(1999)Trends Biotechnol[生物技术趋势]17:374-81；以及美国专利号5,525,490；5,955,280；和5,965,368。

在某些实施例中，通过其与ActRIIA或激活素多肽相互作用的能力来鉴定主题化合物。化合物与ActRIIA或激活素多肽之间的相互作用可以是共价的或是非共价的。例如，可使用体外生物化学方法，包括光交联、放射性标记的配体结合和亲和色谱法，在蛋白质水平上鉴定这样的相互作用(Jakoby W B等人,1974,Methods in Enzymology[酶学方法]46:1)。在某些情况下，可在基于机制的测定中，如检测与激活素或ActRIIA多肽结合的化合物的测定中，筛选化合物。这可包括固相或液相结合事件。可替代地，编码激活素或ActRIIA多肽的基因可与报告基因系统(例如β-半乳糖苷酶、萤光素酶或绿色荧光蛋白)一起转染到细胞中，并优选通过高通量筛选针对文库进行筛选，或用文库的独立成员进行筛选。可使用其他基于机制的结合测定，例如检测自由能变化的结合测定。结合测定可用与孔、珠或芯片固定的或通过固定化抗体捕获的或通过毛细管电泳分离的靶标来进行。通常可使用比色或荧光或表面等离子体共振检测结合的化合物。

5.5治疗方法

本文提供了治疗有需要的受试者的贫血的方法，这些方法包括向受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱(如5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱)；并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物(如5.3节中所述)。在某些实施例中，伴随施用ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

在一些实施例中，受试者是5.6节中所述的受试者。在一些实施例中，该受试者是人。在一些实施例中，受试者是被诊断患有骨髓纤维化的受试者。在一些实施例中，受试者是被诊断患有骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化的受试者。在某些实施例中，骨髓纤维化是骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化。在某些实施例中，骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。

在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化。在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是真性红细胞增多症骨髓纤维化。在更多的一些实施例中，真性红细胞增多症骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变或JAK2外显子12突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是真性红细胞增多症后骨髓纤维化。在更多的一些实施例中，真性红细胞增多症后骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化。在一些实施例中，原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在一些实施例中，原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化包括网硬蛋白纤维化或三色染色的纤维化。

在某些实施例中，受试者患有贫血。在某些实施例中，贫血与骨髓纤维化相关。在某些实施例中，贫血与MPN相关性骨髓纤维化相关。在某些实施例中，贫血与原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)相关。

在某些实施例中，贫血是与无效造血、地中海贫血、α-地中海贫血、β-地中海贫血、骨髓增生异常综合征(MDS)、或非增殖性慢性粒单核细胞性白血病(CMML)相关的贫血。

在一些实施例中，受试者是5.6节中所述的受试者。在一些实施例中，该受试者是人。

在一些实施例中，受试者是红细胞输注依赖性的或非输注依赖性的。在某些实施例中，受试者是红细胞输注依赖性的。在某些实施例中，受试者是非输注依赖性的。在某些实施例中，受试者是红细胞输注非依赖性的。

在一些实施例中，如本文所用，“输注”是指红细胞(RBC)输注。

在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者在RBC输注中已接受少于4个RBC单位，则该受试者是非输注依赖性的或红细胞输注非依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者在RBC输注中已接受1个、2个或3个RBC单位，则该受试者是非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者没有接受(接受0个)RBC单位，则该受试者是非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者没有接受(接受0次)RBC输注，则该受试者是非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的。

在一个实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者在RBC输注中已接受少于4个RBC单位，则该受试者是非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的。在一个实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者在RBC输注中已接受1个、2个或3个RBC单位，则该受试者是非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的。在一个实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者在RBC输注中没有接受(接受0个)RBC单位，则该受试者是非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的。在一个实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者没有接受(接受0次)RBC输注，则该受试者是非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的。

在一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的受试者在RBC输注中已接受少于4个RBC单位，并且该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于9.5g/dL。在另一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的受试者在RBC输注中没有接受(接受0个)RBC单位，并且该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于9.5g/dL。在又另一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该非输注依赖性的或RBC输注非依赖性的受试者没有接受(接受0次)RBC输注，并且该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于9.5g/dL。

在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者已接受4个或更多个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者已接受4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者已接受4至16个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者已接受4至12个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者已接受4至10个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者已接受4至8个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该受试者已接受4至6个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。

在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受4个或更多个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受4至16个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受4至12个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受4至10个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受4至8个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受4至6个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受6至12个、6至10个、或6至8个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。在一些实施例中，如果在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该受试者已接受8至12个或8至10个RBC单位，则该受试者是红细胞输注依赖性的。

在一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该红细胞输注依赖性的受试者已接受4个或更多个RBC单位，并且该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。在另一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前至少60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该红细胞输注依赖性的受试者已接受4至12个RBC单位，并且该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。

在一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，RBC输注依赖性的受试者已接受4个或更多个红细胞单位，并且该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。在另一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，RBC依赖性的受试者已接受4至12个红细胞单位，并且该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。

在一些实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该RBC输注依赖性的受试者在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过2、3、4、5、6、7或8周。在一些实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该RBC输注依赖性的受试者在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过4、5、6或7周。在一些实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段期间，该RBC输注依赖性的受试者在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过6周。在一些实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该RBC输注依赖性的受试者在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过2、3、4、5、6、7或8周。在一些实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该RBC输注依赖性的受试者在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过4、5、6或7周。在一些实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，该RBC输注依赖性的受试者在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过6周。

在一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，RBC依赖性的受试者在RBC输注中已接受4个或更多个RBC单位，并且在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过2、3、4、5、6、7或8周，并且该RBC依赖性的受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。在另一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，RBC依赖性的受试者在RBC输注中已接受4至12个RBC单位，并且在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过2、3、4、5、6、7或8周，并且该RBC依赖性的受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。在又另一个实施例中，在向受试者施用其菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，RBC依赖性的受试者在RBC输注中已接受4个或更多个RBC单位，并且在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过6周，并且该RBC依赖性的受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。在又另一个实施例中，在向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前84天的时间段期间，RBC依赖性的受试者在RBC输注中已接受4至12个RBC单位，并且在无RBC输注的情况下，间隔时间不超过6周，并且该RBC依赖性的受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。

在一些实施例中，将菲卓替尼作为组合物的一部分施用于受试者。在一些实施例中，组合物是5.7节中所述的组合物。

在一些实施例中，将菲卓替尼以5.8节中所述的剂量施用。在一个实施例中，将菲卓替尼以400mg/天、300mg/天、200mg/天或100mg/天的剂量施用。在另一个实施例中，将菲卓替尼以5.8节中所述的频率施用于受试者。在优选的实施例中，每日施用菲卓替尼。

在一些实施例中，将菲卓替尼经由5.10节中所述的施用途径施用于受试者。在一些实施例中，将菲卓替尼口服施用于受试者。

在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱作为组合物的一部分施用于受试者。在一些实施例中，组合物是5.7节中所述的组合物。

在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱经由5.10节中所述的施用途径施用于受试者。在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱静脉内或皮下施用于受试者。在优选的实施例中，将ActRIIB配体陷阱皮下施用于受试者。

在一些实施例中，将菲卓替尼以5.8节中所述的剂量施用。在一些实施例中，以0.3mg/kg至2.0mg/kg，例如0.3mg/kg、0.33mg/kg、0.45mg/kg、0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.75mg/kg或2.0mg/kg的剂量施用ActRIIB配体陷阱。在一些实施例中，以药学有效量施用ActRIIB配体陷阱。在一个实施例中，施用的ActRIIB配体陷阱的药学有效量是1.33mg/kg。在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱以5.8节中所述的频率施用于受试者。在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每14天一次、每21天一次、每28天一次、每35天一次、或每42天一次施用于受试者。在优选的实施例中，将ActRIIB配体陷阱每21天一次施用于受试者。在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每个治疗周期1次、2次或3次施用于受试者。在优选的实施例中，将ActRIIB配体陷阱每个治疗周期一次施用于受试者。在一些实施例中，将该ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个周期。在一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少6、7、8、9或10个周期。在另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者6个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者7个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者8个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者9个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者10个周期。在一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱在每个治疗周期开始时施用一次。

在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱是5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱是包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的多肽。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱是包含由SEQ ID NO:11的氨基酸序列组成的氨基酸序列的多肽。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱是由SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列组成的多肽。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱是由SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQ ID NO:34的简并形式编码的多肽。在一个优选的实施例中，ActRIIB配体陷阱是鲁特西普。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱是包含氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列选自由以下组成的组：(a)与SEQ ID NO:3具有90％同一性的氨基酸序列；(b)与SEQ ID NO:3具有95％同一性的氨基酸序列；(c)与SEQ ID NO:3具有98％同一性的氨基酸序列；(d)SEQ IDNO:3；(e)与SEQ ID NO:6具有90％同一性的氨基酸序列；(f)与SEQ ID NO:6具有95％同一性的氨基酸序列；(g)与SEQ ID NO:6具有98％同一性的氨基酸序列；(h)SEQ ID NO:6；(i)与SEQ ID NO:7具有90％同一性的氨基酸序列；(j)与SEQ ID NO:7具有95％同一性的氨基酸序列；(k)与SEQ ID NO:7具有98％同一性的氨基酸序列；(l)SEQ ID NO:7；(m)与SEQ IDNO:11具有90％同一性的氨基酸序列；(n)与SEQ ID NO:11具有95％同一性的氨基酸序列；(o)与SEQ ID NO:11具有98％同一性的氨基酸序列；和(p)SEQ ID NO:11。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码SEQ ID NO:11的SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQ ID NO:34的简并形式。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱是人源化融合蛋白，该人源化融合蛋白由ActRIIB的细胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成。

本文还提供了治疗有需要的受试者的方法，这些方法包括(a)对受试者的血红蛋白(Hgb)水平进行首次测量；(b)向受试者施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱(如5.4节中所述的ActRIIB配体抑制剂)；(c)向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物(如5.3节中所述)；(d)在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱后的第一时间段结束时，对该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平进行第二次测量；以及(e)基于与首次测量的血红蛋白(Hgb)水平相比的第二次测量的血红蛋白(Hgb)水平，或基于该受试者在第一时间段期间接受的红细胞输注次数，向该受试者施用后续剂量的该ActRIIB配体陷阱。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化。在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是真性红细胞增多症骨髓纤维化。在更多的一些实施例中，真性红细胞增多症骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变或JAK2外显子12突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是真性红细胞增多症后骨髓纤维化。在更多的一些实施例中，真性红细胞增多症后骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化。在更多的一些实施例中，原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在更多的一些实施例中，原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化包括网硬蛋白纤维化或三色染色的纤维化。

在一些实施例中，将菲卓替尼以5.8节中所述的剂量施用。在一个实施例中，将菲卓替尼以600mg/天、500mg/天、400mg/天、300mg/天、200mg/天或100mg/天的剂量施用。在另一个实施例中，将菲卓替尼以5.8节中所述的频率施用于受试者。在优选的实施例中，每日施用菲卓替尼。

在一些实施例中，将菲卓替尼以5.8节中所述的剂量施用。在一些实施例中，以0.3mg/kg至2.0mg/kg，例如0.33mg/kg、0.45mg/kg、0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.75mg/kg或2.0mg/kg的剂量施用ActRIIB配体陷阱。在一些实施例中，以药学有效量施用ActRIIB配体陷阱。在一个实施例中，施用的ActRIIB配体陷阱的药学有效量是1.33mg/kg。在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱以5.8节中所述的频率施用于受试者。在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每14天一次、每21天一次、每28天一次、每35天一次、或每42天一次施用于受试者。在优选的实施例中，将ActRIIB配体陷阱每21天一次施用于受试者。在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每个治疗周期1次、2次或3次施用于受试者。在优选的实施例中，将ActRIIB配体陷阱每个治疗周期一次施用于受试者。在一些实施例中，将该ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个周期。在一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少6、7、8、9或10个周期。在另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者6个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者7个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者8个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者9个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者10个周期。在一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱在每个治疗周期开始时施用一次。

5.5.1ActRIIB配体陷阱的剂量调整或延迟

在一些实施例中，在本文所述的方法中，在受试者的治疗期间调整ActRIIB配体陷阱的剂量。在一些实施例中，在每个治疗周期之前调整ActRIIB配体陷阱的剂量。在一些实施例中，基于受试者中首次测量和第二次测量的血红蛋白(Hgb)水平调整ActRIIB配体陷阱的剂量。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量基于进行调整。在一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量基于前两个治疗周期中进行的血红蛋白(Hgb)水平的首次测量和血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量的比较进行调整。

在一些实施例中，该血红蛋白(Hgb)水平的首次测量是在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱之前进行。在一些实施例中，在每个治疗周期之前进行血红蛋白(Hgb)水平的首次测量。在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的首次测量在第1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个治疗周期之前进行。在一些实施例中，该血红蛋白(Hgb)水平的首次测量与该初始剂量的ActRIIB配体陷阱的施用同时进行，或在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱后约3周、6周、9周、12周、15周、18周、21周或24周进行。在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的首次测量与初始剂量的ActRIIB配体陷阱的施用同时进行。在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的首次测量在施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱后约3周、6周、9周、12周、15周、18周、21周或24周进行。

在一些实施例中，第一时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、15周、18周、21周、24周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月。在一些实施例中，第一时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、15周、18周、21周或24周。在一些实施例中，第一时间段是3或6周。在某些实施例中，第一时间段是3周。在某些实施例中，第一时间段是6周。

在一些实施例中，Hgb水平的第二次测量在受试者中Hgb水平的首次测量之后约1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、15周、18周、21周、24周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月进行。在一些实施例中，Hgb水平的第二次测量在受试者中Hgb水平的首次测量之后约1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、15周、18周或21周进行。在一些实施例中，Hgb水平的第二次测量在受试者中Hgb水平的首次测量后约3或6周进行。在一些实施例中，Hgb水平的第二次测量在受试者中Hgb水平的首次测量后约3周进行。在一些实施例中，Hgb水平的第二次测量在受试者中Hgb水平的首次测量后约6周进行。

在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量是在施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱之前进行。在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量在从第二个治疗周期开始的每个治疗周期之前进行。在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量在第2、3、4、5、6、7、8、9或10个治疗周期之前进行。在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量与后续剂量的ActRIIB配体陷阱的施用同时进行，或在施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱后约3周、6周、9周、12周、15周、18周、21周或24周进行。在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量与后续剂量的ActRIIB配体陷阱的施用同时进行。在一些实施例中，血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量在施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱后约3周、6周、9周、12周、15周、18周、21周或24周进行。在一些实施例中，第二次测量在施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱后约6周进行。

在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是0.3mg/kg、0.33mg/kg、0.45mg/kg、0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.75mg/kg或2.0mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是0.30mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是0.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是0.45mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是0.6mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是0.8mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是1.0mg/kg。在优选的实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是1.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是1.75mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是2.0mg/kg。

在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.30mg/kg、0.33mg/kg、0.45mg/kg、0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.75mg/kg或2.0mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg或1.75mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.30mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.45mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.6mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.8mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.0mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.75mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是2.0mg/kg。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的后续剂量比ActRIIB配体陷阱的初始剂量高约0.5mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg或约35mg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的后续剂量比ActRIIB配体陷阱的初始剂量高约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg或约0.5mg/kg。

在某些实施例中，后续剂量比初始剂量高约0.5mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约1.1mg、约1.2mg、约1.3mg、约1.4mg、约1.5mg、约1.6mg、约1.7mg、约1.8mg、约1.9mg、约2.0mg、约2.1mg、约2.2mg、约2.3mg、约2.4mg、约2.5mg、约2.5mg、约2.6mg、约2.7mg、约2.8mg、约2.9mg、约3.0mg、约3.5mg、约4.0mg、约4.5mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约11mg、约12mg、约13mg、约14mg、约15mg、约16mg、约17mg、约18mg、约19mg、约20mg或约35mg，或比初始剂量低约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.11mg/kg、约0.12mg/kg、约0.13mg/kg、约0.14mg/kg、约0.15mg/kg、约0.16mg/kg、约0.17mg/kg、约0.18mg/kg、约0.19mg/kg、约0.20mg/kg、约0.21mg/kg、约0.22mg/kg、约0.23mg/kg、约0.24mg/kg、约0.25mg/kg、约0.26mg/kg、约0.27mg/kg、约0.28mg/kg、约0.29mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg、约0.45mg/kg或约0.5mg/kg。

在一些实施例中，当第二次测量的Hgb水平比首次测量的Hgb水平高0.5g/L或更多、1.0g/L或更多、1.5g/L或更多、2.0g/L或更多或2.5g/L或更多时，ActRIIB配体陷阱的后续剂量低于ActRIIB配体陷阱的初始剂量。在一些实施例中，当第二次测量的Hgb水平比首次测量的Hgb水平高2.0g/L或更多时，ActRIIB配体陷阱的后续剂量低于ActRIIB配体陷阱的初始剂量。

在一些实施例中，当第二次测量的Hgb水平比首次测量的Hgb水平高0.5g/L或更多、1.0g/L或更多、1.5g/L或更多、2.0g/L或更多或2.5g/L或更多时，待施用的ActRIIB配体陷阱的剂量减少。在一些实施例中，当第二次测量的Hgb水平比首次测量的Hgb水平高2.0g/L或更多时，待施用的ActRIIB配体陷阱的剂量减少。

在一些实施例中，当受试者在第一时间段期间输注过一次或多次RBC，或第二次测量的Hgb水平比首次测量的Hgb水平高0至约1g/dL之间，或首次测量的Hgb水平在约6周的无输注期间降低1g/dL或更多时，ActRIIB配体陷阱的后续剂量高于ActRIIB配体陷阱的初始剂量。在一些实施例中，当受试者在第一时间段期间输注过一次或多次RBC，ActRIIB配体陷阱的后续剂量高于ActRIIB配体陷阱的初始剂量。在一些实施例中，当第二次测量的Hgb水平比首次测量的Hgb水平高0至约1g/dL时，ActRIIB配体陷阱的后续剂量高于ActRIIB配体陷阱的初始剂量。在一些实施例中，当首次测量的Hgb水平在大约6周的无输注期间降低1g/dL或更多时，ActRIIB配体陷阱的后续剂量高于ActRIIB配体陷阱的初始剂量。

在一些实施例中，当受试者患有4级血小板减少症或3级血小板减少症伴活动性出血时，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周。在一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟1个周期。在另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟2个周期。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟3个周期。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟4个周期。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟长达3周。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟长达6周。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟长达9周。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟长达12周。在一些实施例中，在延迟施用ActRIIB配体陷阱期间每周测量白细胞、中性粒细胞和血小板计数。

在一些实施例中，当受试者患有4级中性粒细胞减少症或4级白细胞减少症(恶化2级)时，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周。在一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟1个周期。在另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟2个周期。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟3个周期。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟4个周期。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟长达3周。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟长达6周。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟长达9周。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟长达12周。在一些实施例中，在延迟施用ActRIIB配体陷阱期间每周测量白细胞计数(WBC)、中性粒细胞和血小板计数。

在一些实施例中，当受试者的白细胞计数(WBC)是120x10⁹/L或更多、或30x10⁹/L或更多并且超过基线WBC的三倍时，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周。在一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟1周。在另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟2周。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟3周。在又另一个实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟4周。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟并且每周测量受试者的WBC。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的施用被延迟直到受试者的WBC少于120x10⁹/L、少于30x10⁹/L、或少于基线WBC的三倍。

5.5.2菲卓替尼的剂量调整或延迟

在一些实施例中，当受试者出现不良事件时，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少。在一些实施例中，当受试者患有根据美国国家癌症研究所(NCI)不良事件通用术语标准(CTCAE)分级为1、2、3、4或5级事件的血液学、肝脏、非血液学或胃肠道不良事件时，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少。在一些实施例中，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少至300mg/天、200mg/天或100mg/天。在一个实施例中，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少至300mg/天。在另一个实施例中，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少至200mg/天。在又另一个实施例中，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少至100mg/天。在又另一个实施例中，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少至0mg/天。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被中止。

在一些实施例中，当受试者患有4级血小板减少症或3级血小板减少症伴活动性出血时，菲卓替尼的施用被延迟。在一些实施例中，菲卓替尼的施用被延迟1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周。在一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟1周。在另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟2周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟3周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟4周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达3周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达4周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达3周直到受试者的血小板减少症变为3级或更低。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达4周直到受试者的血小板减少症变为3级或更低。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达3周直到受试者的血小板减少症变为3级或更低，无出血现象。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达4周直到受试者的血小板减少症变为3级或更低，无出血现象。在一些实施例中，当延迟后施用菲卓替尼时，将菲卓替尼以菲卓替尼的后续剂量施用。在一些实施例中，菲卓替尼的后续剂量与延迟之前菲卓替尼的剂量相同。在一些实施例中，菲卓替尼的后续剂量是400mg/天。在一些实施例中，菲卓替尼的后续剂量比延迟之前菲卓替尼的剂量低100mg/天。在一些实施例中，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少至300mg/天、200mg/天或100mg/天。在一些实施例中，菲卓替尼的后续剂量是300mg/天、200mg/天或100mg/天。

在一些实施例中，当受试者患有4级中性粒细胞减少症时，菲卓替尼的施用被延迟。在一些实施例中，菲卓替尼的施用被延迟1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12周。在一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟1周。在另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟2周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟3周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟4周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达3周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达4周。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达3周直到受试者的中性粒细胞减少症变为2级或更低。在又另一个实施例中，菲卓替尼的施用被延迟长达4周直到受试者的中性粒细胞减少症变为2级或更低。在一些实施例中，当延迟后施用菲卓替尼时，将菲卓替尼以菲卓替尼的后续剂量施用。在一些实施例中，菲卓替尼的后续剂量与延迟之前菲卓替尼的剂量相同。在一些实施例中，菲卓替尼的后续剂量是400mg/天。在一些实施例中，菲卓替尼的后续剂量比延迟之前菲卓替尼的剂量低100mg/天。在一些实施例中，向受试者施用的菲卓替尼的剂量减少至300mg/天、200mg/天或100mg/天。在一些实施例中，菲卓替尼的后续剂量是300mg/天、200mg/天或100mg/天。

在一些实施例中，本文所述的方法的治疗功效使用改良的血液学改善-红细胞响应(HI-E)来测量。在一些实施例中，HI-E是在任何连续的≥84天的时间段(12周)内使用用于MDS的国际工作组(IWG)响应标准(MDS-IWG标准)定义的。MDS-IWG标准例如在Cheson等人,2006,Blood.[血液]108:419-425中披露，将其披露内容通过引用以其全文并入本文。

在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少0.5g/dL、至少1.0g/dL、至少1.5g/dL、至少2.0g/dL或至少2.5g/dL。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少0.5g/dL。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少1.0/dL。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少1.5g/dL。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少2.0g/dL。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少2.5g/dL。在一些实施例中，将Hgb水平增加与基线进行比较。在优选的实施例中，基线是向受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前受试者中的Hgb水平。在一些实施例中，基线是参考群体中的Hgb水平。

在一些实施例中，本文所述的方法使受试者的RBC输注负担降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者的RBC输注负担降低至少40％。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者的RBC输注负担降低至少50％。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者的RBC输注负担降低至少60％。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者的RBC输注负担降低至少70％。

在一些实施例中，本文所述的方法在56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段内使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9或至少10个单位。在一些实施例中，本文所述的方法在56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段内使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，本文所述的方法在56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段内使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少8个单位。在一些实施例中，本文所述的方法在56天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，本文所述的方法在63天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，本文所述的方法在70天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，本文所述的方法在77天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，本文所述的方法在84天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。

在一些实施例中，受试者在连续56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、98或105天的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续84天的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续91天的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续105天的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、98或105天的时间段内变为非输注依赖性。在一些实施例中，受试者在连续84天的时间段内变为非输注依赖性。在一些实施例中，受试者在连续91天的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续105天的时间段内变为非输注依赖性。

在一些实施例中，受试者在连续至少6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周或15周的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续至少8周的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续至少10周的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续至少15周的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，受试者在连续至少6周、7周、8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周或15周的时间段内变为非输注依赖性。在一些实施例中，受试者在连续至少8周的时间段内变为非输注依赖性。在一些实施例中，受试者在连续至少10周的时间段内变为非输注依赖性。在一些实施例中，受试者在连续至少15周的时间段内变为非输注依赖性。

在一些实施例中，与基线相比，本文所述的方法在56天的时间段内使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少1.5g/dL或使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位，其中该受试者是红细胞输注依赖性的或非输注依赖性的。

在一些实施例中，与基线相比，本文所述的方法在84天的时间段内使受试者的RBC输注负担降低至少50％并且使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少至少4个单位，其中该受试者是红细胞输注依赖性的。

在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平与基线相比增加至少1.5g/dL并且受试者在连续84天的时间段内无RBC输注，其中该受试者是非输注依赖性的。在特定实施例中，在无RBC输注(无输注)的情况下，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平在连续84天的时间段内与基线相比增加至少1.5g/dL，其中该受试者是非输注依赖性的。

在一些实施例中，受试者在连续84天的时间段内无RBC输注，其中该受试者是红细胞输注依赖性的或非输注依赖性的。

在一些实施例中，本文所述的方法使该受试者中的血红蛋白(HGB)水平增加到与所述治疗前该受试者中的HGB水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血红蛋白(HGB)水平增加到与向该受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前该受试者中的HGB水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血细胞比容(HCT)水平增加到与所述治疗前该受试者中的HCT水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的血细胞比容(HCT)水平增加到与向该受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前该受试者中的HCT水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的平均红细胞体积(MCV)水平降低到与所述治疗前该受试者中的MCV水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的平均红细胞体积(MCV)水平降低到与向该受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前该受试者中的MCV水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。

在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的细胞血红蛋白浓度(CHC)水平增加到与所述治疗前该受试者中的CHC水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的细胞血红蛋白浓度(CHC)水平增加到与向该受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前该受试者中的CHC水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

在一些实施例中，本文所述的方法使该受试者中的红细胞分布宽度(RDW)水平降低到与所述治疗前该受试者中的RDW水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。在一些实施例中，本文所述的方法使受试者中的红细胞分布宽度(RDW)水平降低到与向该受试者施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前该受试者中的RDW水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。

在某些实施例中，对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与血红蛋白(Hgb)增加有关，例如，在没有RBC输注的情况下，在任何连续84天的时间段内，相比基线增加≥1.5g/dL的血红蛋白的受试者比例，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与增加的红细胞(RBC)输注非依赖性有关，例如，在任何连续84天时间段内无RBC输注的受试者比例，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与贫血响应的时间有关，例如，从首次的鲁特西普剂量到首次出现贫血响应的时间，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与贫血响应的持续时间有关，例如，受试者中贫血响应的最长持续时间，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与RBC输注的频率有关，例如，每名受试者每4周输注的RBC单位的平均数，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与RBC输注依赖性的频率有关，例如，在任何连续84天时间段内，将其输注负担从基线降低≥50％的RBC输注依赖性的受试者的比例，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与如经由改良的骨髓增殖性肿瘤症状评估表(MPN-SAF)(参见Emanual等人,“Myeloproliferative Neoplasm(MPN)SymptomAssessment Form Total Symptom Score:Prospective International Assessment ofan Abbreviated Symptom Burden Scoring System Among Patients With MPNs[骨髓增殖性肿瘤(MPN)症状评估表的总症状得分：在MPN患者中对简明症状负担得分系统进行的前瞻性国际性评估],”J.Clin.Oncol.[临床肿瘤学杂志]30(33):4098-4103(2012))记录和评估的实现疲劳症状减轻的受试者比例有关，因此对贫血响应进行测量，例如，测量疲劳、盗汗、瘙痒、腹部不适、左侧肋骨下疼痛、早饱、和骨痛(例如，在如通过MPN-SAF测量的实现疲劳症状减少≥50％的受试者中)。在一些实施例中，因为贫血响应与如经由改良的骨髓增殖性肿瘤症状评估表(MPN-SAF)(参见Emanual等人,“Myeloproliferative Neoplasm(MPN)Symptom Assessment Form Total Symptom Score:Prospective InternationalAssessment of an Abbreviated Symptom Burden Scoring System Among PatientsWith MPNs[骨髓增殖性肿瘤(MPN)症状评估表的总症状得分：在MPN患者中对简明症状负担得分系统进行的前瞻性国际性评估],”J.Clin.Oncol.[临床肿瘤学杂志]30(33):4098-4103(2012))记录和评估的实现总症状得分(TSS)减少≥50％的受试者比例有关，因此对贫血响应进行测量，例如，测量疲劳、盗汗、瘙痒、腹部不适、左侧肋骨下疼痛、早饱、和骨痛。在一些实施例中，因为贫血响应与健康相关的生活质量(HRQoL)量度相关，例如测量HRQoL问卷领域得分与基线得分相比的平均变化，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与EQ-5D-5L问卷得分(EuroQol，鹿特丹，荷兰)有关，例如，测量EQ-5D-5L问卷领域得分与基线得分相比的平均变化，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，因为贫血响应与不良事件(AE)有关，例如不良事件的类型、频率和严重程度，因此对贫血响应进行测量。在一些实施例中，使用抗药物抗体(ADA)对贫血响应进行测量(例如，抗药物抗体的频率和对受试者的功效、安全性或药代动力学的影响)。在一些实施例中，使用药代动力学参数对贫血响应进行测量，例如血浆浓度-时间曲线、曲线下面积(AUC)、Cmax。

本文还提供了用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，其中该方法包括向该受试者施用剂量为0.33mg/kg、0.45mg/kg、0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg、1.75mg/kg或2.0mg/kg的ActRIIB配体陷阱(如5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱)，该ActRIIB配体陷阱包含由SEQ IDNO:11的氨基酸序列组成的氨基酸序列，其中该ActRIIB配体陷阱每21天一次皮下施用于受试者；并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物(如5.3节中所述)。在某些实施例中，伴随施用ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

本文还提供了用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，其中该方法包括向该向受试者施用剂量是0.33mg/kg、0.45mg/kg、0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg、1.75mg/kg或2.0mg/kg的ActRIIB配体陷阱(如5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱)，该ActRIIB配体陷阱包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列，其中该ActRIIB配体陷阱每21天一次皮下施用于受试者；并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物(如5.3节中所述)。在某些实施例中，伴随施用ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

本文还提供了用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，其中该方法包括向该受试者施用ActRIIB配体陷阱(如5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱)，并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物(如5.3节中所述)，其中该方法使该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少0.5g/dL、至少1.0g/dL、至少1.5g/dL、至少2.0g/dL或至少2.5g/dL。在某些实施例中，伴随施用ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

本文还提供了用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，其中该方法包括向该受试者施用ActRIIB配体陷阱(如5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱)，并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物(如5.3节中所述)，其中该方法使该受试者的RBC输注负担降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在某些实施例中，伴随施用ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

本文还提供了用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，其中该方法包括向该受试者施用ActRIIB配体陷阱(如5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱)，并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物(如5.3节中所述)，其中该方法在56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9或至少10个单位。在某些实施例中，伴随施用ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

本文还提供了用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，其中该方法包括向该受试者施用ActRIIB配体陷阱(如5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱)，并且向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物(如5.3节中所述)，其中该受试者在连续56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、98或105天的时间段内无RBC输注或变为非输注依赖性。

5.6患者群体

根据本文所述的方法治疗的受试者可以是任何哺乳动物，例如啮齿类动物和灵长类动物，并且在一个优选的实施例中，是人。在某些实施例中，受试者是人。在某些实施例中，本文所述的方法可用于治疗任何哺乳动物如啮齿动物和灵长类动物的贫血，并且在一个优选的实施例中，人类的贫血。

在某些实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者可以是任何年龄。在某些实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者小于18岁。在特定的实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者小于13岁。在另一个特定的实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者小于12岁、小于11岁、小于10岁、小于9岁、小于8岁、小于7岁、小于6岁或小于5岁。在另一个特定的实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者是1-3岁、3-5岁、5-7岁、7-9岁、9-11岁、11-13岁、13-15岁、15-20岁、20-25岁、25-30岁、或大于30岁。在另一个特定的实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者是30-35岁、35-40岁、40-45岁、45-50岁、50-55岁、55-60岁、或大于60岁。在另一个特定的实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者是60-65岁、65-70岁、70-75岁、75-80岁、或大于80岁。

在某些实施例中，受试者需要定期的、终生的红细胞输注。在某些实施例中，受试者患有高输注负担。在某些实施例中，高输血负担是根据本文提供的方法进行治疗之前24周内12个或更多个红细胞单位。在某些实施例中，受试者具有低输注负担。在某些实施例中，低输注负担是根据本文提供的方法进行治疗之前24周内7-12个红细胞单位。

在一些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者是被诊断患有骨髓纤维化的受试者。在一些实施例中，受试者是被诊断患有骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化的受试者。在某些实施例中，骨髓纤维化是骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化。在某些实施例中，骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。

在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者患有骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化。在某些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是原发性骨髓纤维化。在一些实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是真性红细胞增多症骨髓纤维化。在更特定的实施例中，真性红细胞增多症骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变或JAK2外显子12突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在特定实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是真性红细胞增多症后骨髓纤维化。在更特定的实施例中，真性红细胞增多症后骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在特定实施例中，骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化是原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化。在更特定的实施例中，原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化与JAK2突变，例如JAK2 V617F突变，或血小板生成素受体(MPL)突变相关或由其引起。在更特定的实施例中，原发性血小板减少症或原发性血小板增多症后骨髓纤维化包括网硬蛋白纤维化或三色染色的纤维化。

在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者患有贫血。在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者患有骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化和贫血。在某些实施例中，贫血与骨髓纤维化相关。在某些实施例中，贫血与MPN相关性骨髓纤维化相关。在某些实施例中，贫血与原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)相关。

在某些实施例中，本文所述的方法可用于治疗受试者的贫血，例如与无效造血相关的贫血、或地中海贫血。

在某些实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者(参见5.5节和5.9节)如β-地中海贫血。在某些实施例中，β-地中海贫血是输注依赖性β-地中海贫血。输注依赖性β-地中海贫血也被称为“库利氏贫血”。在某些实施例中，β-地中海贫血是重型β-地中海贫血。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是重型β-地中海贫血。在某些实施例中，β-地中海贫血是非输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，β-地中海贫血是中间型β-地中海贫血。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是非中间型β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者患有HbE/β地中海贫血。在某些实施例中，受试者(i)患有重型β-地中海贫血；(ii)患有严重HbE/β-地中海贫血；以及(iii)是输注依赖性。在某些实施例中，受试者(i)患有中间型β-地中海贫血；(ii)患有轻度/中度HbE/β-地中海贫血；以及(iii)是非输注依赖性。

在某些实施例中，根据本文所述的方法治疗的受试者(参见5.5节和5.9节)患有输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者已被诊断患有输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者已被诊断患有β-地中海贫血和血红蛋白E。在某些实施例中，诊断已通过遗传分析确认。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是重型β-地中海贫血。在某些实施例中，输注依赖性β-地中海贫血是重型β-地中海贫血。在某些实施例中，受试者包含基因型，该基因型包含针对突变β球蛋白等位基因的纯合性或复合杂合性。在某些实施例中，纯合性包含β⁰/β⁰，其中β⁰是指与β球蛋白链合成缺乏相关的等位基因。在某些实施例中，纯合性包含β⁺/β⁺，其中β⁺是指与β球蛋白链合成减少相关的等位基因。在某些实施例中，复合杂合性包含β⁰/β⁺，其中β⁰是指与β球蛋白链合成缺乏相关的等位基因，并且其中β⁺是指与β球蛋白链合成减少相关的等位基因。在某些实施例中，复合杂合性包含β⁰/HbE，其中β⁰是指与β球蛋白链合成缺乏相关的等位基因，并且其中HbE是指血红蛋白E。在某些实施例中，复合杂合性包含β⁺/HbE，其中β⁺是指与β球蛋白链合成减少相关的等位基因，并且其中HbE是指血红蛋白E。在某些实施例中，受试者患有症状性地中海贫血。在某些实施例中，受试者患有共遗传的α-球蛋白基因重复。在某些实施例中，受试者已被诊断患有输注依赖性β-地中海贫血。在某些实施例中，诊断已通过遗传分析确认。在某些实施例中，受试者是人婴儿受试者。在某些实施例中，受试者患有遗传性胎儿血红蛋白持续症。

在一些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者先前已经用鲁索替尼进行治疗。在特定的实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者已经紧接在治疗前接受稳定剂量的鲁索替尼至少112天。

在一些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者先前未用鲁索替尼进行治疗。

在一些实施例中，该受试者是人。

在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者患有血小板减少症。在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者具有小于1x10¹¹个血小板/升。在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者患有中性粒细胞减少症。在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者具有小于1x10⁹/升的中性粒细胞绝对计数。

在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者具有小于13,000个白细胞/μL、小于12,000个白细胞/μL、小于11,000个白细胞/μL、小于10,000个白细胞/μL、小于7,500个白细胞/μL、或小于500个白细胞/μL。

在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者中的血红蛋白水平小于10g/dL、9g/dL、8g/dL或7g/dL。在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者中的血红蛋白水平在7g/dL和7.5g/dL之间、7.5g/dL和8g/dL之间、8g/dL和8.5g/dL之间、8.5g/dL和9.0g/dL之间、9.0g/dL和9.5g/dL或9.5g/dL和10.0/dL之间。

在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者具有低输注负担。在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的具有低输注负担的受试者需要最多0、1、2或3个单位的红细胞/8周。在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的受试者具有高输注负担。在某些实施例中，根据本文提供的方法治疗的具有高输注负担的受试者需要至少4、5、6、7、8、9、10、11、12或13个单位的红细胞/8周。

5.7药物组合物

本文还提供了“药物组合物”，其包含本文提供的ActRIIB配体陷阱或本文提供的菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物，以及一种或多种药学上可接受的载体。在一个特定实施例中，药物组合物包含本文提供的ActRIIB配体陷阱。在一个特定实施例中，药物组合物包含本文提供的菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物，以及一种或多种药学上可接受的载体。在一个特定实施例中，ActRIIB配体陷阱以治疗有效量存在。在一个特定实施例中，ActRIIB配体陷阱以预防有效量存在。可以根据本文提供的方法和用途使用药物组合物。因此，例如，可将药物组合物施用于受试者，以实践本文提供的治疗或预防方法和用途。可以将本文提供的药物组合物配制成与预期的施用方法或途径相容；本文阐述了示例性施用途径。

药物组合物典型地包含本文提供的ActRIIB配体陷阱或本文提供的菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物，以及药学上可接受的载体。适合的药学上可接受的载体包括但不限于抗氧化剂(例如，抗坏血酸)、防腐剂(例如苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸酯)、乳化剂、助悬剂、分散剂、溶剂、缓冲剂、润滑剂、填充剂和/或稀释剂。例如，合适媒剂可以为生理盐水溶液。可以使用的典型的缓冲剂包括但不限于药学上可接受的弱酸、弱碱或其混合物。缓冲剂组分还可以包括水溶性试剂，例如磷酸、酒石酸、琥珀酸、柠檬酸、乙酸及其盐。

媒剂可以含有其他药学上可接受的赋形剂，用于改变或维持药物组合物的pH、渗透压、粘度或稳定性。在特定的实施例中，媒剂是水性缓冲液。在特定的实施例中，媒剂包含例如氯化钠。

本文提供的药物组合物还可以含有其他药学上可接受的配制剂。关于药学上可接受的配制剂，参见，例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学],第18版(1990,Mack Publishing Co.[麦克出版公司],伊斯顿，宾夕法尼亚州18042)第1435-1712页,以及The Merck Index[默克索引],第12版(1996,Merck Publishing Group[默克出版集团],怀特豪斯,新泽西州)。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼被配制为适用于本文所述的组合治疗。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱与药学上可接受的载体一起配制用于与本文所述的方法一起使用。例如，ActRIIB配体陷阱可以单独施用或作为药物配制品(治疗组合物)的组分施用。ActRIIB配体陷阱可以经配制用于以任何便利的方式施用而用于人或兽医学中。

在一个优选的实施例中，ActRIIB配体陷阱被配制用于皮下施用。

在另一个优选的实施例中，将ActRIIB配体陷阱作为无菌、无防腐剂的冻干粉末或饼包装在容器中。在某些实施例中，容器包含25mg的ActRIIB配体陷阱。在某些实施例中，包含25mg的ActRIIB配体陷阱的容器包含总共37.5mg的蛋白质。在某些实施例中，包含25mg的ActRIIB配体陷阱的容器中的ActRIIB配体陷阱用0.68mL的注射用水重构。在某些实施例中，容器包含75mg的ActRIIB配体陷阱。在某些实施例中，包含75mg的ActRIIB配体陷阱的容器包含总共87.5mg的蛋白质。在某些实施例中，包含75mg的ActRIIB配体陷阱的容器中的ActRIIB配体陷阱用1.6mL的注射用水重构。在某些实施例中，将容器中的ActRIIB配体陷阱用一定体积的注射用水重构，使得注射用水中重构的ActRIIB配体陷阱的最终浓度是50mg/mL，pH是约6.5。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱在重构10小时内施用于受试者。在某些实施例中，容器包含在基于10mM柠檬酸盐缓冲液的溶液中的浓度是50mg/mL的ActRIIB配体陷阱，其中该基于10mM柠檬酸盐缓冲液的溶液包含10mM柠檬酸盐(pH 6.5)、9％蔗糖和0.02％聚山梨醇酯80。在某些实施例中，容器在2℃和8℃之间储存。在某些实施例中，容器在2℃和8℃之间储存18个月。在某些实施例中，容器是具有灰色丁基涂层塞的3mL玻璃小瓶。在某些实施例中，容器是具有灰色橡胶塞的3mL玻璃小瓶。在某些实施例中，橡胶塞通过带有彩色塑料按钮的卷曲铝翻盖固定就位。在某些实施例中，3mL玻璃小瓶包含25mg的ActRIIB配体陷阱并且彩色塑料按钮是红色的。在某些实施例中，3mL玻璃小瓶包含75mg的ActRIIB配体陷阱并且彩色塑料按钮是白色的。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的多肽。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是包含由SEQ IDNO:11的氨基酸序列组成的氨基酸序列的多肽。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是由SEQID NO:11中所示的氨基酸序列组成的多肽。

在特定的实施例中，将ActRIIB配体陷阱作为无菌、无防腐剂的冻干粉末或饼包装在容器中。在特定的实施例中，容器包含在10mM柠檬酸盐缓冲液(pH 6.5)中的50mg/mL的ActRIIB配体陷阱。在特定的实施例中，容器包含56mg的ActRIIB配体陷阱、0.19mg的柠檬酸一水合物、3.03mg的柠檬酸三钠脱水物、0.24mg的聚山梨醇酯80和100.80mg的蔗糖。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的多肽。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是包含由SEQ ID NO:11的氨基酸序列组成的氨基酸序列的多肽。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是由SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列组成的多肽。

在某些实施例中，本文提供的治疗方法包括将组合物(包含ActRIIB配体陷阱)作为植入物或装置全身或局部施用。当施用时，本文提供的用于使用的治疗组合物是无热原的生理学上可接受的形式。除了ActRIIB配体陷阱之外的其他治疗上有用的试剂(也可以任选地包括在如上所述的组合物中)可以与主题化合物(例如，5.4节中所述的ActRIIB配体陷阱)同时或顺序施用。

典型地，将肠胃外施用ActRIIB配体陷阱。在一个优选的实施例中，将皮下施用ActRIIB配体陷阱。适合用于肠胃外施用的药物组合物可以包含与以下项组合的一种或多种ActRIIB多肽：一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、悬浮液或乳剂、或可以在使用之前即刻重构于无菌可注射溶液或分散液的无菌粉剂，这些溶液、分散液、悬浮液或乳剂、或无菌粉剂可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使配制品与预期接受者的血液等渗的溶质、或悬浮剂或增稠剂。可以在用于本文所述方法的药物组合物中使用的合适的水性和非水性载剂的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射有机酯(如油酸乙酯)。例如，可以通过使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散液的情况下通过维持所需粒径、以及通过使用表面活性剂来维持适宜的流动性。

本文所述的组合物还可以含有辅助剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂以及分散剂。可以通过包括多种抗细菌剂和抗真菌剂(例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)来确保防止微生物的作用。还希望在组合物中包括等渗剂，如糖、氯化钠等。此外，可以通过包括延迟吸收的试剂(例如单硬脂酸铝和明胶)引起可注射药物形式的延长吸收。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱在药物组合物中是基本上纯的。特别地，药物组合物中最多20％、10％、5％、2.5％、1％、0.1％或最多0.05％的化合物是ActRIIB配体陷阱和药学上可接受的载体之外的化合物。

在某些实施例中，根据本文提供的方法在室温下将ActRIIB配体陷阱施用于患者。

在某些实施例中，将菲卓替尼与药学上可接受的载体一起配制用于与本文所述的方法一起使用。

在某些实施例中，菲卓替尼可以以制剂的常规形式，例如胶囊、微胶囊、片剂、颗粒剂、粉末、糖锭剂、丸剂、栓剂、注射剂、悬浮液、糖浆、贴片、乳膏、洗剂、软膏、凝胶、喷雾、溶液和乳剂，口服、局部或肠胃外施用于受试者。合适的配制品可以使用常规的有机或无机添加剂通过常用的方法制备，这些添加剂是例如稀释剂(例如蔗糖、淀粉、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、纤维素、滑石、磷酸钙或碳酸钙)、粘合剂(例如纤维素、甲基纤维素、羟甲基纤维素、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、阿拉伯树胶、聚乙二醇、蔗糖或淀粉)、崩解剂(例如淀粉、羧甲基纤维素、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、碳酸氢钠、磷酸钙或柠檬酸钙)、润滑剂(例如硬脂酸镁、轻质无水硅酸、滑石或十二烷基硫酸钠)、调味剂(例如柠檬酸、薄荷醇、甘氨酸或橙粉)、防腐剂(例如苯甲酸钠、亚硫酸氢钠、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯)、稳定剂(例如柠檬酸、柠檬酸钠或乙酸)、助悬剂(例如甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或硬脂酸铝)、分散剂(例如羟丙基甲基纤维素)、水和底蜡(例如可可脂、白凡士林或聚乙二醇)。药物组合物中化合物的有效量可以处于对口服和肠胃外施用都将发挥所需作用的水平。

在一个优选的实施例中，菲卓替尼被配制用于口服施用。

在某些实施例中，菲卓替尼被配制用于肠胃外施用。在一个实施例中，将菲卓替尼作为无菌、无防腐剂的冻干粉末或饼包装在容器中。

在某些实施例中，菲卓替尼以胶囊或片剂的形式配制。在某些实施例中，菲卓替尼以微片剂或微丸的形式配制，并且其中该微片剂或微丸被肠溶包衣。在某些实施例中，微片剂或微丸包含在胶囊中。在一个优选的实施例中，菲卓替尼以胶囊的形式配制。

5.8剂量和方案

5.8.1ActRIIB配体陷阱的剂量

在某些实施例中，根据本文提供的方法施用于受试者的ActRIIB配体陷阱(参见5.5节和5.9节)是由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码SEQ ID NO:11的SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQ ID NO:34的简并形式。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱(例如，由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码SEQ ID NO:11的SEQID NO:34的核苷酸序列或SEQ ID NO:34的简并形式)的剂量是约0.3mg/kg至2.0mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱(例如，由开放阅读框的表达产生的产物，该开放阅读框具有编码SEQ ID NO:11的SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQ ID NO:34的简并形式)的剂量是约0.30mg/kg、0.35mg/kg、是约0.4mg/kg、约0.45mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg或约1.25mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约0.3mg/kg、0.33mg/kg、0.45mg/kg、0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.75mg/kg或2.0mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约0.3mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约0.33mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约0.45mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约0.6mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约0.8mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约1.0mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约1.33mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约1.75mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约2.0mg/kg。在一些实施例中，以药学有效量施用ActRIIB配体陷阱。在一个实施例中，施用的ActRIIB配体陷阱的药学有效量是1.33mg/kg。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是初始剂量。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是约0.3mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是约0.33mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是约0.45mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是约0.6mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是约0.8mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是约1.0mg/kg。在优选的实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是约1.33mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是约1.75mg/kg。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的初始剂量是约2.0mg/kg。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱的剂量是后续剂量。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.30mg/kg、0.33mg/kg、0.45mg/kg、0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg、1.75mg/kg或2.0mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg或1.75mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.30mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.45mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.6mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.8mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.0mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.75mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是2.0mg/kg。

在某些实施例中，与初始剂量相比，以更高的频率施用后续剂量。在某些实施例中，与初始剂量相比，以更低的频率施用后续剂量。在某些实施例中，与初始剂量相比，以相同的频率施用后续剂量。在某些实施例中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天施用后续剂量。在某些实施例中，每21天施用后续剂量。在某些实施例中，连续地和/或无限期施用后续剂量。

在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每14天一次、每21天一次、每28天一次、每35天一次、或每42天一次施用于受试者。在优选的实施例中，将ActRIIB配体陷阱每21天一次施用于受试者。在一些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每个治疗周期1次、2次或3次施用于受试者。在优选的实施例中，将ActRIIB配体陷阱每个治疗周期一次施用于受试者。在一些实施例中，将该ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个周期。在一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少6、7、8、9或10个周期。在另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者6个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者7个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者8个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者9个周期。在又另一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱施用于受试者10个周期。在一个实施例中，将ActRIIB配体陷阱在每个治疗周期开始时施用一次。

在某些实施例中，将ActRIIB配体陷阱皮下施用于受试者。在某些实施例中，在受试者的上臂、腹部或大腿将ActRIIB配体陷阱皮下施用于受试者。在某些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每21天施用于受试者。在某些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天施用于受试者。在某些实施例中，在受试者的上臂、腹部或大腿将ActRIIB配体陷阱每21天皮下施用于受试者。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱是如5.7节中所述的组合物的一部分。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱是在注射用水中重构的无菌、无防腐剂的冻干粉末。在某些实施例中，将单次剂量的ActRIIB配体陷阱在体积大于1mL的注射用水中重构。在此类实施例中，经由两次注射等体积的重构的ActRIIB配体抑制剂将单次剂量的ActRIIB配体陷阱施用于受试者。在某些实施例中，将两次注射在分开的部位施用于受试者，例如，一次在右大腿注射，并且一次在左大腿注射。

5.8.2菲卓替尼的剂量

在某些实施例中，将菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物口服施用于受试者。在一些实施例中，将菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物每日施用于受试者。在某些实施例中，每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天将菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物施用于受试者。

在一些实施例中，以600mg/天、500mg/天、400mg/天、300mg/天、200mg/天或100mg/天的剂量将菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物施用于受试者。

在一些实施例中，以400mg/天、300mg/天、200mg/天或100mg/天的初始剂量将菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物施用于受试者。在一个优选实施例中，初始剂量是400mg/天。在另一个实施例中，初始剂量是300mg/天。在又另一个实施例中，初始剂量是200mg/天。在又另一个实施例中，初始剂量是100mg/天。

在一些实施例中，以400mg/天、300mg/天、200mg/天或100mg/天的后续剂量将菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物施用于受试者。在某些实施例中，根据5.5节中提供的方法确定菲卓替尼的后续剂量。在一个优选实施例中，后续剂量是400mg/天。在另一个实施例中，后续剂量是300mg/天。在又另一个实施例中，后续剂量是200mg/天。在又另一个实施例中，后续剂量是100mg/天。

5.9组合疗法

在某些实施例中，在施用ActRIIB配体陷阱之前或与其同时施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物。

在某些实施例中，在施用ActRIIB配体陷阱之后施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

在某些实施例中，在施用ActRIIB配体陷阱之前，受试者以前接受过菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物治疗。

在某些实施例中，在施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物之前，受试者以前接受过ActRIIB配体陷阱治疗。

在某些实施例中，在共同施用ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物之前，受试者以前接受过菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物治疗。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用是伴随施用。

在某些实施例中，伴随施用ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的，其中ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的各自剂量是足以减少或减轻贫血的一种或多种症状的剂量。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的，其中ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的各自剂量是足以减少或减轻由骨髓增殖性肿瘤相关性骨髓纤维化引起或与其相关的贫血的一种或多种症状的剂量。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用对预防至少一种贫血症状恶化是药学上有效的。

在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的组合治疗在治疗贫血方面显示出协同效应。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱与菲卓替尼组合治疗的剂量低于ActRIIB配体陷阱在单一疗法中的药学有效剂量。在某些实施例中，组合治疗中的菲卓替尼的剂量低于单一疗法中的菲卓替尼的药学有效剂量。

在某些实施例中，与受试者在基线时的血红蛋白水平相比，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对增加受试者中的血红蛋白水平是药学上有效的。在评价受试者中的血红蛋白水平增加的上下文中，“基线”是指紧接向该受试者首次施用菲卓替尼和/或ActRIIB配体陷阱之前的时间。在某些实施例中，在已向受试者施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱之后的任何连续84天时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用在药学上有效使受试者中血红蛋白(Hgb)的水平增加至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用在药学上是有效的，其中该受试者在连续84天的时间段期间已输注少于4个单位的红细胞单位。在某些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用在药学上是有效的，其中该受试者在连续84天的时间段期间已输注0个单位的红细胞单位。在某些实施例中，在已向受试者施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱之后的任何连续84天时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用在药学上有效使血红蛋白的水平增加至少0.5g/dL、至少0.8g/dL、至少1.0g/dL、至少1.2g/dL、至少1.5g/dL、至少1.8g/dL、至少2.0g/dL、至少2.2g/dL、至少2.4g/dL、至少2.6g/dL、至少2.8g/dL、至少3.0g/dL、至少3.2g/dL、至少3.4g/dL、至少3.6g/dL、至少3.8g/dL、至少4.0g/dL、至少5.0g/dL或至少6.0g/dL。在某些实施例中，在施用ActRIIB配体陷阱之后，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用在药学上有效使受试者中的血红蛋白水平增加，持续至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少12个月、至少18个月、至少24个月或至少48个月。在某些实施例中，与受试者在基线时的红细胞输注频率相比，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用在药学上有效使受试者中的红细胞输注频率降低。

在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者的RBC输注负担降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或至少100％。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者的RBC输注负担降低至少40％。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者的RBC输注负担降低至少50％。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者的RBC输注负担降低至少60％。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者的RBC输注负担降低至少70％。

在一些实施例中，在56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9或至少10个单位。在一些实施例中，在56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，在56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89或90天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少8个单位。在一些实施例中，在56天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，在63天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，在70天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，在77天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。在一些实施例中，在84天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位。

在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用是药学上有效的，其中受试者在连续56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、98或105天的时间段内无RBC输注或变为非输注依赖性。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用是药学上有效的，其中受试者在连续84天的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用是药学上有效的，其中受试者在连续91天的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用是药学上有效的，其中受试者在连续105天的时间段内无RBC输注。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用是药学上有效的，其中受试者在连续84天的时间段内变为非输注依赖性。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用是药学上有效的，其中受试者在连续91天的时间段内变为非输注依赖性。在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用是药学上有效的，其中受试者在连续105天的时间段内变为非输注依赖性。

在一些实施例中，与基线相比，在56天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少1.5g/dL或使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少4个单位，其中该受试者是红细胞输注依赖性的或非输注依赖性的。

在一些实施例中，与基线相比，在84天的时间段内，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者的RBC输注负担降低至少50％并且使受试者接受的红细胞(RBC)输注减少至少4个单位，其中该受试者是红细胞输注依赖性的。

在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平与基线相比增加至少1.5g/dL并且受试者在连续84天的时间段内无RBC输注，其中该受试者是非输注依赖性的。在特定实施例中，在无RBC输注(无输注)的情况下，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用在药学上有效使受试者中的血红蛋白(Hgb)水平在连续84天的时间段内与基线相比增加至少1.5g/dL，其中该受试者是非输注依赖性的。

在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼的共同施用是药学上有效的，其中受试者在连续84天的时间段内无RBC输注，其中该受试者是红细胞输注依赖性的或非输注依赖性的。

在某些实施例中，一个RBC单位是指约150mL、200mL、250mL、300mL、350mL、100-200mL、150-250mL、200-300mL、250-300mL或250-350mL的RBC。

5.9.1组合的临床益处

JAK2抑制剂(例如鲁索替尼或菲卓替尼)疗法可能与中度至重度血小板减少症和贫血有关。剂量减少和治疗中止用于解决这些副作用(Verstovsek,2017,J.Hematol.Oncol.[血液学和肿瘤学杂志]10:55)。

本文还提供了在无剂量减少的情况下安全地施用JAK2抑制剂以治疗受试者的骨髓纤维化的方法，所述方法包括：向该受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱(例如，鲁特西普)并向该受试者施用JAK2抑制剂。不受理论束缚，ActRIIB配体陷阱消除或减少与JAK2疗法相关的一种或多种副作用(如血小板减少症或贫血)。

在某些实施例中，JAK2抑制剂是鲁索替尼。在某些实施例中，JAK2抑制剂是菲卓替尼。在一些实施例中，JAK2抑制剂以正常剂量施用。在一些实施例中，JAK2抑制剂的正常剂量是推荐的起始剂量。在一个实施例中，当JAK2抑制剂是鲁索替尼时，正常剂量是20mg，每天两次。在另一个实施例中，当JAK2抑制剂是鲁索替尼时，正常剂量是15mg，每天两次。在一个实施例中，当JAK2抑制剂是菲卓替尼时，正常剂量是400mg，每天一次。在另一个实施例中，当JAK2抑制剂是菲卓替尼时，正常剂量是300mg，每天一次。在又另一个实施例中，当JAK2抑制剂是菲卓替尼时，正常剂量是200mg，每天一次。在某些实施例中，以推荐起始剂量的至少75％、80％、85％、90％或95％施用JAK2抑制剂。在某些实施例中，正常剂量是当伴随施用强CYP3A4抑制剂时调整的正常剂量。在某些实施例中，推荐的起始剂量是当伴随施用强CYP3A4抑制剂时调整的推荐起始剂量。

在某些实施例中，以正常剂量施用JAK2抑制剂持续延长的时间段。在某些实施例中，以正常剂量施用JAK2抑制剂持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。在某些实施例中，以正常剂量施用JAK2抑制剂持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。

在某些实施例中，当伴随施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱时，JAK2抑制剂的剂量由于不良效应而未减少。在某些实施例中，不良效应为贫血。在某些实施例中，不良效应是血小板减少症。在某些实施例中，不良效应为中性粒细胞减少症。

在某些实施例中，该方法进一步包括监测由JAK2抑制剂引起的任何不良效应。在某些实施例中，不良效应为贫血。在某些实施例中，不良效应是血小板减少症。在某些实施例中，不良效应为中性粒细胞减少症。在某些实施例中，监测受试者的全血细胞计数(CBC)、红细胞计数或血小板计数。在一个实施例中，每月测量受试者的全血细胞计数(CBC)、红细胞计数或血小板计数。在另一个实施例中，每1、2、3、4、5、6、7、8、9或10周测量受试者的全血细胞计数(CBC)、红细胞计数或血小板计数。在另一个实施例中，每周1、2、3或4次测量受试者的全血细胞计数(CBC)、红细胞计数或血小板计数。

在某些实施例中，骨髓纤维化是骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化。在某些实施例中，骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。

本文还提供了减少由施用JAK2抑制剂引起的不良效应以治疗受试者的骨髓纤维化的方法，所述方法包括向该受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱。在某些实施例中，不良效应为贫血。在某些实施例中，不良效应是血小板减少症。在某些实施例中，不良效应为中性粒细胞减少症。在某些实施例中，当伴随施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱时，JAK2抑制剂的剂量由于不良效应而未减少。在某些实施例中，通过测量受试者的全血细胞计数(CBC)、红细胞计数或血小板计数来监测不良效应。在一个实施例中，每月测量受试者的全血细胞计数(CBC)、红细胞计数或血小板计数。在另一个实施例中，每1、2、3、4、5、6、7、8、9或10周测量受试者的全血细胞计数(CBC)、红细胞计数或血小板计数。在另一个实施例中，每周1、2、3或4次测量受试者的全血细胞计数(CBC)、红细胞计数或血小板计数。

在一些实施例中，ActRIIB配体陷阱(例如鲁特西普)根据5.5和5.8节中所述的施用剂量和方案施用。在一些实施例中，该施用的ActRIIB配体陷阱的药学有效量是0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg或1.75mg/kg。在一些实施例中，该施用的ActRIIB配体陷阱的药学有效量是1.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是1.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg或1.75mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.33mg/kg。在一些实施例中，该ActRIIB配体陷阱在每个治疗周期开始时施用一次，其中每个周期为21天。在一些实施例中，将该ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个周期。

本文还提供了治疗受试者的骨髓纤维化的方法，所述方法包括向该受试者施用JAK2抑制剂；

向该受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱；

其中以JAK2抑制剂的剂量由于不良效应而未调整的有效剂量伴随施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱。在某些实施例中，JAK2抑制剂剂量未减少。在某些实施例中，不良效应为贫血。在一个实施例中，不良效应是红细胞计数减少。在一个实施例中，不良效应是红细胞(RBC)输注单位的增加。

本文还提供了治疗受试者的骨髓纤维化的方法，所述方法包括以初始剂量向该受试者施用JAK2抑制剂；

向该受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱；以及

维持该JAK2抑制剂的初始剂量持续延长的时间段。

在某些实施例中，以有效减少或缓解不良效应的剂量伴随施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱。在某些实施例中，JAK2抑制剂剂量未减少。在某些实施例中，不良效应为贫血。在一些实施例中，JAK2抑制剂的初始剂量是推荐的起始剂量。在一个实施例中，当JAK2抑制剂是鲁索替尼时，初始剂量是20mg，每天两次。在另一个实施例中，当JAK2抑制剂是鲁索替尼时，初始剂量是15mg，每天两次。在一个实施例中，当JAK2抑制剂是菲卓替尼时，初始剂量是400mg，每天一次。在另一个实施例中，当JAK2抑制剂是菲卓替尼时，初始剂量是300mg，每天一次。在又另一个实施例中，当JAK2抑制剂是菲卓替尼时，初始剂量是200mg，每天一次。在某些实施例中，以推荐起始剂量的至少75％、80％、85％、90％或95％施用JAK2抑制剂。在某些实施例中，初始剂量是当伴随施用强CYP3A4抑制剂时调整的剂量。在某些实施例中，推荐的起始剂量是当伴随施用强CYP3A4抑制剂时调整的推荐起始剂量。在某些实施例中，以初始剂量施用JAK2抑制剂持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。在某些实施例中，以初始剂量施用JAK2抑制剂持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。

本文还提供了用于使用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱治疗受试者的贫血的方法，所述方法包括向需要治疗的受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱，其中正向该受试者伴随施用JAK2抑制剂以治疗骨髓纤维化。在某些实施例中，以正常剂量施用JAK2抑制剂的伴随治疗持续延长的时间段。在某些实施例中，以正常剂量施用JAK2抑制剂持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。在某些实施例中，以正常剂量施用JAK2抑制剂持续至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。

在该5.9.1小节中的上述方法的一个实施例中，激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱是本文披露的激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱。

5.10施用途径

在某些实施例中，经由注射施用ActRIIB配体陷阱。在某些实施例中，皮下施用ActRIIB配体陷阱。在某些实施例中，将ActRIIB配体陷阱每3周施用一次。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的多肽。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是包含由SEQ ID NO:11的氨基酸序列组成的氨基酸序列的多肽。在特定实施例中，ActRIIB配体陷阱是由SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列组成的多肽。在一个优选的实施例中，ActRIIB配体陷阱是鲁特西普。

菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的施用途径独立于本文提供的ActRIIB配体陷阱的施用途径。在一个优选实施例中，口服施用菲卓替尼。在另一个实施例中，静脉内施用菲卓替尼。在又另一个实施例中，皮下施用菲卓替尼。

6.实例

6.1实例1：菲卓替尼与鲁特西普伴随施用用于治疗患有骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化的受试者的贫血的3B期、多中心、单臂、开放标记功效和安全性研究

该实例涉及3B期、多中心、单臂、开放标记研究的子研究。主要研究是评价菲卓替尼在患有动态国际预后评分系统(DIPSS)中风险或高风险MPN相关性MF(包括PMF、PV后MF和ET后MF)的受试者中的功效和安全性。该子研究评价鲁特西普(一种ActRIIB配体陷阱)在患有MPN相关性MF和贫血的受试者中与菲卓替尼伴随施用时的安全性、耐受性和有效性。该子研究不早于初始菲卓替尼剂量后32周开始。该子研究分为子研究筛选期(主要研究期间)、子研究治疗期(由子研究治疗阶段和子研究第24周(子研究第169天)贫血响应评估期组成)，然后是子研究治疗后随访期(由42天的安全性随访期和子研究长期随访期组成)。整体研究设计描述于图1中。

该子研究主要评价鲁特西普与菲卓替尼伴随施用时的安全性和耐受性，以及评价其在两组患有MPN相关性MF和贫血的患者中的功效：1)A组(输注依赖性)：具有RBC基线输注负担为4-12个RBC单位/84天的受试者，在无RBC输注情况下，无>6周(42天)的间隔时间；2)B组(非输注依赖性)：具有RBC基线输注负担<4个RBC单位/84天或贫血(在紧接子研究周期1，第1天(C1D1)日期之前的84天时间段中，在≥3个不同的日期(包括给药当天)记录的Hgb水平≤9.5g/dL)的受试者。

符合输注或贫血标准且在主要研究期间已接受菲卓替尼持续至少32周同时在紧接子研究周期1第1天(C1D1)之前接受稳定剂量的菲卓替尼持续16周的受试者有资格参与子研究。

通过安全性监测，在大约6名受试者在子研究中完成至少2个周期的鲁特西普治疗后，进行中期安全性监测审查。使用该伴随治疗的所有可用安全性数据持续评价安全性(包括至少接受2个周期的6名受试者)，并且将与每种治疗的单一疗法安全性数据进行比较。如果未观察到重大毒性(定义为不可接受或不可控制的毒性)，则将继续并完成其余受试者的招募。

受试者接受鲁特西普的伴随治疗，直到子研究第24周(子研究第169天)的贫血响应评估，并且可以继续伴随治疗，只要他们继续获得如通过研究者评估的临床益处(贫血、脾脏或症状响应)，除非他们发展为进展性疾病(根据国际工作组-骨髓增殖性肿瘤研究和治疗(IWG-MRT)2013标准)或不可接受的毒性，撤回同意，或满足任何其他中止治疗的标准。经评估，受试者可以：1)继续伴随治疗，2)中止鲁特西普并继续菲卓替尼单一疗法，或3)中止两种研究治疗。

由于不同的给药时间表和事件表，子研究中的访视与主要研究不同。基于已建立的鲁特西普给药时间表，在3周的周期内进行子研究中的计划访视。一旦受试者进入子研究，该受试者将继续遵循子研究的事件时间表。

大约25名来自先前接受过鲁索替尼治疗并患有PMF、PV后MF或ET后MF以及贫血的受试者(来自主要研究)被招募进任选的子研究。在大约6名受试者完成至少2个周期的伴随治疗后，进行中期安全性监测审查。

6.1.1研究设计和研究时间段

(a)筛选期

当受试者接受主要研究的治疗时，对这些受试者进入子研究进行筛选。任何接受过至少32周菲卓替尼治疗的贫血受试者都有资格，并可在任何时间点针对子研究进行筛选。所有签署子研究同意书的受试者都将进行最长28天的筛选期。

(b)招募

合格的受试者基于符合的纳入标准被分配至A组或B组。

·A组：输注依赖性(4-12个RBC单位/84天)贫血

·B组：非输注依赖性(接受<4个RBC单位/84天或仅具有Hgb≤9.5g/dL的贫血)贫血

不合格的受试者继续在主要研究中，仅接受菲卓替尼并根据主要研究完成周期访视。

(c)治疗期

鲁特西普的起始剂量为1.33mg/kg，作为皮下注射剂施用

(d)贫血响应评估(第24周(子研究第169天))

所有招募的受试者持续治疗至少到子研究第24周(子研究第168天)结束。进行贫血响应评估以评估临床益处(贫血、脾脏或症状响应)以确定受试者是否可以继续伴随治疗。

如果受试者继续获得临床益处，且该受试者不符合任何治疗中止标准(即不可接受的毒性、进展性疾病、受试者退出)，则在子研究第24周(第169天)进行贫血反应评估后，这些受试者可保持伴随治疗。贫血响应评估后的每个周期都会进行临床益处评估。

6.1.2纳入标准

大约25名来自先前接受过鲁索替尼治疗并患有PMF、PV后MF或ET后MF以及贫血(如下定义)的受试者(来自主要研究)被招募进该子研究。

受试者满足以下被招募到该研究中的主要研究标准：

1.签署知情同意书(ICF)时受试者至少18岁；

2.受试者具有0、1或2的东部肿瘤协作组(ECOG)活动状态得分(PS)；

3.受试者根据2016年世界卫生组织(WHO)标准诊断为原发性骨髓纤维化(PMF)，或根据IWG-MRT 2007标准诊断为ET后或PV后骨髓纤维化，由最近的当地病理报告确认；

4.受试者的DIPSS风险得分为中等或高等；

5.受试者在筛选期期间有可测量的脾肿大，如通过MRI或CT扫描评估的脾体积≥450cm³或通过左肋缘下方可触知的脾脏测量≥5cm所证明；

6.受试者在被诊断患有MF(PMF、ET后MF或PV后MF)时以前暴露于鲁索替尼，并且必须至少满足以下标准之一(a或b)：

a.使用鲁索替尼治疗≥3个月；

b.使用鲁索替尼治疗≥28天并发以下任何一种情况：

i.发展为需要红细胞输注(至少2个单位/月，持续2个月)或

ii.使用鲁索替尼治疗时，≥3级AE：血小板减少症、贫血、血肿和/或出血；

7.在菲卓替尼治疗之前的最后一次疗法开始之前，受试者必须使先前疗法的治疗相关毒性消退至1级或治疗前基线；

8.在进行任何与研究相关的评估/程序之前，受试者必须了解并自愿签署ICF；

9.受试者愿意并且能够遵守研究访视时间表和其他协议要求；

10.有生育能力的女性(FCBP)必须：

a.在开始研究疗法之前有两次经研究者证实的妊娠测试阴性。她必须同意在研究过程期间和在研究疗法结束之后进行妊娠测试。即使受试者实施免于异性接触的真正禁欲*，这也适用；

b.承诺免于异性接触的真正禁欲(这必需每月审查并记录来源)或在开始研究产品前-14天，在研究疗法(包括剂量中断)期间和在中止研究疗法后持续30天同意使用且能够遵从有效的无间断避孕；

11.男性受试者必须做到以下：

a.即使男性受试者进行了成功的输精管切除术，但在参与研究时、在剂量中断期间和在研究产品中止后持续至少30天，或更长(如果针对每种化合物和/或当地法规要求)，他也必须实行真正禁欲(这必需每月审查)或在与妊娠女性或有生育能力的女性有性接触期间同意使用避孕套。

除了主要研究的标准外，在招募进子研究时，所有受试者必须符合以下纳入标准：

1.在进行任何与子研究相关的评估/程序之前，受试者必须了解并自愿签署任选的子研究ICF；

2.受试者必须已服用菲卓替尼至少32周(约8个周期)

3.受试者必须在紧接预计招募日期(SC1D1)前的时间内接受稳定剂量的菲卓替尼至少16周(约4个周期)[无剂量水平变化]

4.受试者患有贫血，定义为：

a.A组-输注依赖性(TD)贫血

-RBC-输注频率*：紧接SC1D1日期(子研究周期1第1天)前4至12个RBC单位/84天，在无RBC输注的情况下，无>6周(42天)的时间间隔。

-在鲁特西普施用之前SC1D1时，受试者的Hgb值必须<11.5g/dL。

b.B组-非输注依赖性(NTD)贫血

-RBC-输注频率：紧接SC1D1日期前，<4个RBC单位/84天；或

-在紧接子研究C1D1日期前的84天时间段中，在≥3个不同的日期(包括给药当天)记录有至少3个Hgb水平≤9.5g/dL。每次Hgb测量必须间隔≥14天。血红蛋白测量时间间隔≥42天的受试者将不被招募。

*“基线”定义为子研究周期1第1天之前的84天滚动时间段(3个周期，每个周期28天)。Hgb≤7或者Hgb≤9.5g/dL伴随症状时给予的任何输注都将计入基线输注需求。仅用于出血或感染给予的输注将不计入合格性基线输注需求。

5.受试者具有≤2的东部肿瘤协作组(ECOG)活动状态得分

受试者愿意并且能够遵守研究访视时间表和其他协议要求。

6.1.3排除标准

1.以下任何实验室异常：

a.血小板<50,000/μL

b.中性粒细胞绝对计数(ANC)<1.0x109/L

c.白细胞计数(WBC)>100x109/L

d.外周血中成髓细胞≥5％

e.估计的肾小球滤过率<30mL/min/1.73m2(根据肾病饮食改良[MDRD]公式)

f.血清淀粉酶或脂肪酶>1.5xULN(正常上限)

g.天冬氨酸氨基转移酶(AST)或丙氨酸氨基转移酶(ALT)>3xULN

h.总胆红素>1.5xULN，如果直接胆红素分数<总胆红素的25％，则受试者的总胆红素在1.5-3.0xULN之间是合格的2.受试者是妊娠或哺乳期女性

3.以前有脾切除术的受试者

4.以前或计划进行造血细胞移植的受试者

5.有脑病(包括韦尼克脑病)既往史的受试者

6.有脑病(包括韦尼克脑病)的体征或症状(例如，严重的共济失调、眼麻痹或小脑体征)的受试者

7.患有硫胺素缺乏症的受试者，根据机构标准定义为全血中的硫胺素水平低于正常范围，并且在研究招募之前未纠正

8.伴随用或使用已知为细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的强或中度诱导剂或CYP2C19和CYP3A4的双重抑制剂的药物、草药或食物的受试者

9.接受任何化学疗法、免疫调节药物疗法(例如，沙利度胺、干扰素-α)、阿那格雷、免疫抑制疗法、全身性皮质类固醇>10mg/天泼尼松或等效物的受试者。过去曾暴露于羟基脲(例如Hydrea)的受试者可以招募进研究，只要在开始菲卓替尼治疗前14天内未进行施用

10.受试者在菲卓替尼开始前14天内接受过鲁索替尼

11.在菲卓替尼治疗开始前14天内接受骨髓生长因子(例如粒细胞集落刺激因子[G-CSF])治疗的受试者

12.以前暴露于除鲁索替尼治疗外的一种或多种Janus激酶(JAK)抑制剂超过1个周期的受试者

13.接受阿司匹林治疗，其中每日剂量>150mg的受试者

14.在开始菲卓替尼治疗前28天内进行过大手术的受试者

15.诊断为患有慢性肝病(例如慢性酒精性肝病、自身免疫性肝炎、硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、血色素沉着症、非酒精性脂肪性肝炎)的受试者

16.受试者先前患有除正在研究的疾病以外的恶性肿瘤，除非该受试者在招募前至少3年不需要治疗恶性肿瘤。但是，可以招募具有以下病史/并发症的受试者，条件是治疗成功：非浸入性皮肤癌、原位宫颈癌、乳腺原位癌、前列腺癌的偶然组织学发现(使用肿瘤、结节、转移[TNM]临床分期系统的T1a或T1b)，或无疾病且仅进行激素治疗。

17.患有不受控制的充血性心力衰竭(纽约心脏协会分类3或4)的受试者

18.患有已知人类免疫缺陷病毒(HIV)、已知活动性传染性乙型肝炎(HepB)和/或已知活动性传染性丙型肝炎(HepC)的受试者

19.患有严重活动性感染的受试者

20.存在会抑制口服药物吸收的任何重大胃障碍或其他障碍的受试者

21.受试者不能吞咽胶囊

22.受试者具有任何会阻止该受试者参与研究的重大医学病症、实验室异常或精神疾病

23.受试者具有任何会使该受试者处于不可接受的风险中的病症，包括存在实验室异常，如果他/她参加研究

24.受试者具有任何会混淆解释研究数据的能力的病症

25.在开始菲卓替尼治疗前30天内参与任何研究药剂(药物、生物制剂、装置)研究的受试者

26.预期寿命少于6个月的受试者。

6.1.4子研究排除标准

1.患有除MPN相关性MF或JAK2抑制剂疗法以外的原因(例如，缺铁、维生素B12和/或叶酸缺乏、自身免疫性或溶血性贫血、感染或任何类型的已知临床上显著的出血或隔离)引起的贫血的受试者。

2.在SC1D1时具有任何以下实验室异常的受试者：

a.中性粒细胞<1x109/L

b.白细胞计数(WBC)>100x109/L

c.血小板<50x109/L或>1000x109/L

d.外周血成髓细胞>5％。

e.估计的肾小球滤过率<40mL/min/1.73m2(经由4变量肾病饮食改良[MDRD]公式)

f.天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转移酶(ALT)>3.0x正常上限(ULN)

g.直接胆红素≥2xULN(如果这些可归因于骨髓内活性红细胞前体破坏(即无效造血)，则更高的水平是可以接受的)

3.尽管进行了适当的治疗，但在SC1D1之前舒张压≥90mmHg或收缩压≥140mmHg的受试者。

4.受试者先前患有除正在研究的疾病以外的恶性肿瘤，除非该受试者在招募前至少3年不需要治疗恶性肿瘤。但是，允许具有以下病史/并发症的受试者：

a.皮肤基底细胞癌或鳞状细胞癌

b.宫颈原位癌

c.乳腺原位癌

d.前列腺癌的偶然组织学发现(使用肿瘤、结节、转移[TNM]临床分期系统的T1a或T1b)

5.受试者在紧接SC1D1前的6个月内患有中风、深静脉血栓形成、肺或动脉栓塞。

6.在招募日期前2个月内进行过大手术的受试者。受试者必须在紧接招募日期前从任何先前的手术中完全恢复。

7.患有控制不充分的心脏病和/或已知左心室射血分数<35％的受试者。

8.受试者患有不受控制的全身性真菌、细菌或病毒感染(定义为与感染相关的持续体征/症状，尽管使用了适当的抗生素、抗病毒治疗和/或其他治疗但没有改善)。

9.受试者以前接受过鲁特西普或索特西普(sotatercept)治疗。

10.受试者对研究产品中的重组蛋白或赋形剂有严重过敏或过敏反应或超敏反应史(参见鲁特西普IB)。

11.在招募前最后6个月内具有大出血事件(定义为关键区域或器官的症状性出血和/或导致Hgb降低≥2g/dL或导致输注≥2个单位的浓集红细胞的出血)的受试者。

12.受试者在SC1D1前≤56天使用红细胞生成素刺激剂(ESA)。

6.1.5治疗施用和时间表

受试者继续接受在主要研究期间施用的相同剂量水平的菲卓替尼。此外，受试者还在每个21天治疗周期的第1天接受鲁特西普，直到子研究周期1第1天(SC1D1)日期后的至少第168天，除非受试者经历进展为AML、不可接受的毒性、撤回同意、或在第169天响应评估之前满足任何其他治疗中止标准。治疗周期是21天持续时间。

(a)菲卓替尼的施用

菲卓替尼剂量为400mg/天PO(4x100mg胶囊)，作为门诊患者连续每天自行口服施用一次，优选地与晚餐一起，每天同一时间。然而，菲卓替尼可以在考虑或不考虑食物的情况下服用。在错过了剂量的情况下，则在第二天与在错过剂量前以前服用的相同时间服用下一剂量。

可以采用灵活的剂量改良方案来使个体受试者的药物毒性最小化，其中可能的日剂量为100mg、200mg、300mg或400mg。出于施用目的，周期定义为4周(28天)时间段。受试者可以继续使用菲卓替尼治疗，直到出现不可接受的毒性、缺乏治疗效果、疾病进展或直到撤回同意。

(b)鲁特西普的施用

鲁特西普在每21天周期的第1天施用，初始剂量水平为1.33mg/kg。如本文所述，可以从第3周期开始逐步增高剂量。将鲁特西普作为皮下注射剂施用于受试者。在每次施用前评估受试者的Hgb、WBC、血液成髓细胞百分比和血压。

鲁特西普起始剂量与剂量增加和减少列于表1中。

表1.鲁特西普起始剂量水平与剂量减少和剂量滴定

3<sup>rd</sup>剂量减少	2<sup>nd</sup>剂量减少	1<sup>st</sup>剂量减少	起始剂量水平	1<sup>st</sup>剂量滴定增加
					0.6mg/kg	0.8mg/kg	1.0mg/kg	1.33mg/kg	1.75mg/kg

(c)鲁特西普剂量滴定

一到子研究周期3第1天并由研究者在每个随后的治疗周期之前进行评估，在子研究治疗阶段期间受试者的剂量水平可能会从起始剂量水平为1.33mg/kg增加到最大为1.75mg/kg。

如果受试者经历了在相同剂量水平下评估的最近的先前治疗周期中的两个，并且如果受试者在2个最先前的治疗周期中没有满足任何方案剂量延迟和/或减少标准，则他们可能有资格进行剂量滴定。如果满足以下标准中的一项或多项，则剂量水平可增加1个剂量水平：

·受试者在2个最近的先前治疗周期(约6周)期间具有≥1个RBC输注事件(输注前Hgb≤9.5g/dL)

·在大约6周的无输注期间观察到Hgb下降≥1g/dL，并且在该下降之前无RBC输注(Hgb下降发生在最后一次RBC输注后≥14天)

·Hgb值比基线平均输注前Hgb值增加不超过1g/dL

应针对每个受试者单独滴定剂量水平。

6.1.6终点

主要目的是评价菲卓替尼与鲁特西普伴随施用时的安全性和耐受性。在样本量为25的情况下，估计响应率和不良事件率的标准误差将不超过0.1。对于与改良的8周血液学改善-红细胞响应(HI-E)相关的贫血响应的次要终点，基于12周平均血红蛋白增加≥1.5g/dL的预期速率或在任何12周时间段内≥50％ RBC输注减少(至少4个单位)，估计的响应率为至少50％。

该子研究的主要和次要终点列于下表2中。在子研究期间收集的任何数据都可用于主要研究分析，包括但不限于脾脏体积、触诊脾脏大小、MFSAF v4.0(骨髓纤维化症状评估表)和硫胺素(和简易精神状态检查[MMSE])监测。

表2.研究终点

6.1.7RBC输注

基于Hgb水平和症状的红细胞输注实践不应在筛选期和治疗阶段期间针对个体受试者改变。

对于研究期间(在研究站点或外部机构)接受的任何RBC输注，应收集输注前即刻的Hgb值以及其他几个参数(即输注单位数、输注量、输注日期)。

每个受试者均具有在研究期间需要输注的“输注前血红蛋白阈值”，该阈值是基于输注史确定的。基线输注前血红蛋白阈值将是子研究周期1第1天前12周期间所有记录的输注前血红蛋白值的平均值。在治疗期间，如果与该受试者的输注前血红蛋白阈值相比，输注前血红蛋白水平增加≥1g/dL(在下一次预期的输注事件时)，则输注应至少延迟7天和/或输注单位数应减少1个或多个RBC单位。

出于本研究的目的，RBC或全血输注被视为等效。

7.序列的说明

表3.序列信息

8.等效形式

尽管参考其特定实施例详细描述了本发明，但应理解，功能等效形式的变化均在本发明的范围内。实际上，除了本文中显示和描述的那些之外，根据前述描述和附图，本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。这类修改旨在落入所附权利要求书的范围内。本领域的技术人员仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文所述的本发明这些具体实施例的许多等效形式。此类等效形式旨在为下列权利要求所涵盖。

本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请都通过引用并入本说明书中，如同每一单独的出版物、专利或专利申请具体且单独地指明通过引用以其全文并入本文。

序列表

<110> 细胞基因公司（Celgene Corporation）

<120> 使用ACTRIIB配体陷阱和菲卓替尼治疗贫血的方法

<130> 14247-487-228

<140>

<141>

<150> US 63/009,400

<151> 2020-04-13

<160> 34

<170> 用于Windows版本4.0的FastSEQ

<210> 1

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽，其具有EC结构域的N末端

6个氨基酸缺失和EC结构域的C末端4个氨基酸缺失（SEQ ID NO:14的氨基酸

25-130）并具有L79D突变

<400> 1

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105

<210> 2

<211> 512

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<220>

<223> 人ActRIIB前体蛋白序列（A64）

<400> 2

Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp

1 5 10 15

Pro Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr

20 25 30

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg

35 40 45

Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn

85 90 95

Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg

100 105 110

Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro

115 120 125

Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu

130 135 140

Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr

145 150 155 160

Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu

180 185 190

Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln

195 200 205

Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys

210 215 220

Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys

225 230 235 240

His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn

245 250 255

Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser

260 265 270

Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys

275 280 285

His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp

290 295 300

Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg

305 310 315 320

Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val

325 330 335

Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro

340 345 350

Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu

355 360 365

Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile

370 375 380

Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys

385 390 395 400

Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu

405 410 415

Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val

420 425 430

His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro

435 440 445

Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp

450 455 460

Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu

465 470 475 480

Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu

485 490 495

Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile

500 505 510

<210> 3

<211> 116

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:2的氨基酸19-134）

<400> 3

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr

115

<210> 4

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽，其具有C末端15个

氨基酸缺失（SEQ ID NO:2的氨基酸19-119）

<400> 4

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala

100

<210> 5

<211> 1539

<212> DNA

<213> 智人（Homo sapiens）

<220>

<223> 编码人ActRIIB（A64）前体蛋白的核酸序列

<400> 5

atgacggcgc cctgggtggc cctcgccctc ctctggggat cgctgtggcc cggctctggg 60

cgtggggagg ctgagacacg ggagtgcatc tactacaacg ccaactggga gctggagcgc 120

accaaccaga gcggcctgga gcgctgcgaa ggcgagcagg acaagcggct gcactgctac 180

gcctcctggg ccaacagctc tggcaccatc gagctcgtga agaagggctg ctggctagat 240

gacttcaact gctacgatag gcaggagtgt gtggccactg aggagaaccc ccaggtgtac 300

ttctgctgct gtgaaggcaa cttctgcaac gagcgcttca ctcatttgcc agaggctggg 360

ggcccggaag tcacgtacga gccacccccg acagccccca ccctgctcac ggtgctggcc 420

tactcactgc tgcccatcgg gggcctttcc ctcatcgtcc tgctggcctt ttggatgtac 480

cggcatcgca agccccccta cggtcatgtg gacatccatg aggaccctgg gcctccacca 540

ccatcccctc tggtgggcct gaagccactg cagctgctgg agatcaaggc tcgggggcgc 600

tttggctgtg tctggaaggc ccagctcatg aatgactttg tagctgtcaa gatcttccca 660

ctccaggaca agcagtcgtg gcagagtgaa cgggagatct tcagcacacc tggcatgaag 720

cacgagaacc tgctacagtt cattgctgcc gagaagcgag gctccaacct cgaagtagag 780

ctgtggctca tcacggcctt ccatgacaag ggctccctca cggattacct caaggggaac 840

atcatcacat ggaacgaact gtgtcatgta gcagagacga tgtcacgagg cctctcatac 900

ctgcatgagg atgtgccctg gtgccgtggc gagggccaca agccgtctat tgcccacagg 960

gactttaaaa gtaagaatgt attgctgaag agcgacctca cagccgtgct ggctgacttt 1020

ggcttggctg ttcgatttga gccagggaaa cctccagggg acacccacgg acaggtaggc 1080

acgagacggt acatggctcc tgaggtgctc gagggagcca tcaacttcca gagagatgcc 1140

ttcctgcgca ttgacatgta tgccatgggg ttggtgctgt gggagcttgt gtctcgctgc 1200

aaggctgcag acggacccgt ggatgagtac atgctgccct ttgaggaaga gattggccag 1260

cacccttcgt tggaggagct gcaggaggtg gtggtgcaca agaagatgag gcccaccatt 1320

aaagatcact ggttgaaaca cccgggcctg gcccagcttt gtgtgaccat cgaggagtgc 1380

tgggaccatg atgcagaggc tcgcttgtcc gcgggctgtg tggaggagcg ggtgtccctg 1440

attcggaggt cggtcaacgg cactacctcg gactgtctcg tttccctggt gacctctgtc 1500

accaatgtgg acctgccccc taaagagtca agcatctaa 1539

<210> 6

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的ActRIIB（A64；SEQ ID NO: 3）的可溶性细胞外结构域的融合蛋白

<400> 6

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

115 120 125

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

130 135 140

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

145 150 155 160

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

165 170 175

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

180 185 190

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

195 200 205

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

210 215 220

Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

225 230 235 240

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

245 250 255

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

260 265 270

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

275 280 285

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

290 295 300

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

305 310 315 320

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

325 330 335

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 7

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的具有C末端15个氨基酸缺失的ActRIIB（A64）

（SEQ ID NO:4）的可溶性细胞外结构域的融合蛋白

<400> 7

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 8

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽，其具有EC结构域的N末端6个氨基酸缺失和

EC结构域的C末端5个氨基酸缺失（SEQ ID NO:14的氨基酸25-129）并具有L79D突变

<400> 8

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro

100 105

<210> 9

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

EC结构域的C末端3个氨基酸缺失（SEQ ID NO:14的氨基酸25-131）并具有L79D突变

<400> 9

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105

<210> 10

<211> 360

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 未加工的ActRIIB-Fc融合蛋白，其具有EC结构域的N末端6个氨基酸缺失和EC结构域

的C末端3个氨基酸缺失（SEQ ID NO:14的氨基酸25-131）并具有L79D突变和TPA前导序列

<400> 10

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr

20 25 30

Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu

35 40 45

Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp

65 70 75 80

Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu

85 90 95

Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu

100 105 110

Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu

115 120 125

Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

130 135 140

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

145 150 155 160

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

165 170 175

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

180 185 190

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

195 200 205

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

210 215 220

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

225 230 235 240

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

245 250 255

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

260 265 270

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

275 280 285

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

290 295 300

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

305 310 315 320

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

325 330 335

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

340 345 350

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360

<210> 11

<211> 335

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 加工的ActRIIB-Fc融合蛋白，其具有EC结构域的N末端6个氨基酸缺失

和EC结构域的C末端3个氨基酸缺失（SEQ ID NO:14的氨基酸25-131）并具

有L79D突变（鲁特西普）

<400> 11

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His

100 105 110

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

130 135 140

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

145 150 155 160

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

165 170 175

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

180 185 190

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

195 200 205

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

210 215 220

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

225 230 235 240

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

245 250 255

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

260 265 270

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

275 280 285

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

290 295 300

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

305 310 315 320

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330 335

<210> 12

<211> 115

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:2的氨基酸20-134）

<400> 12

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 13

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列，其具有C末端15个

氨基酸缺失（SEQ ID NO:2的氨基酸20-119）

<400> 13

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala

100

<210> 14

<211> 512

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<220>

<223> 人ActRIIB前体蛋白序列（R64）

<400> 14

Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp

1 5 10 15

Pro Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr

20 25 30

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg

35 40 45

Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg

50 55 60

Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn

85 90 95

Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg

100 105 110

Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro

115 120 125

Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu

130 135 140

Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr

145 150 155 160

Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu

180 185 190

Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln

195 200 205

Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys

210 215 220

Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys

225 230 235 240

His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn

245 250 255

Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser

260 265 270

Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys

275 280 285

His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp

290 295 300

Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg

305 310 315 320

Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val

325 330 335

Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro

340 345 350

Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu

355 360 365

Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile

370 375 380

Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys

385 390 395 400

Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu

405 410 415

Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val

420 425 430

His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro

435 440 445

Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp

450 455 460

Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu

465 470 475 480

Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu

485 490 495

Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile

500 505 510

<210> 15

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:14的氨基酸19-134）

<400> 15

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr

115

<210> 16

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

氨基酸缺失（SEQ ID NO:14的氨基酸19-119）

<400> 16

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala

100

<210> 17

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:14的氨基酸20-134）

<400> 17

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 18

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列，其具有C末端15个氨基酸缺失

（SEQ ID NO:14的氨基酸20-119）

<400> 18

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala

100

<210> 19

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

EC结构域的C末端3个氨基酸缺失（SEQ ID NO:2的氨基酸25-131）并具有L79D突变

<400> 19

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105

<210> 20

<211> 360

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

的C末端3个氨基酸缺失（SEQ ID NO:2的氨基酸25-131）并具有L79D突变和TPA前导序列

<400> 20

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr

20 25 30

Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu

35 40 45

Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp

65 70 75 80

Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu

85 90 95

Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu

100 105 110

Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu

115 120 125

Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

130 135 140

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

145 150 155 160

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

165 170 175

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

180 185 190

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

195 200 205

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

210 215 220

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

225 230 235 240

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

245 250 255

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

260 265 270

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

275 280 285

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

290 295 300

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

305 310 315 320

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

325 330 335

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

340 345 350

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360

<210> 21

<211> 335

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 加工的ActRIIB-Fc融合蛋白，其具有EC结构域的N末端6个氨基酸缺失和EC

结构域的C末端3个氨基酸缺失（SEQ ID NO:2的氨基酸25-131）并具有L79D突变

<400> 21

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His

100 105 110

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

130 135 140

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

145 150 155 160

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

165 170 175

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

180 185 190

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

195 200 205

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

210 215 220

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

225 230 235 240

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

245 250 255

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

260 265 270

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

275 280 285

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

290 295 300

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

305 310 315 320

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330 335

<210> 22

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:14的氨基酸20-134），其具有L79D突变

<400> 22

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 23

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:2的氨基酸20-134），其具有L79D突变

<400> 23

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 24

<211> 343

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:14的氨基酸20-134），其具有

与具有GGG接头的Fc结构域融合的L79D突变

<400> 24

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

115 120 125

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

130 135 140

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

145 150 155 160

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

165 170 175

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

180 185 190

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

195 200 205

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

210 215 220

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

225 230 235 240

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

245 250 255

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

260 265 270

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

275 280 285

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

290 295 300

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

305 310 315 320

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

325 330 335

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 25

<211> 343

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:2的氨基酸20-134），其具有

与Fc结构域融合的L79D突变

<400> 25

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

115 120 125

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

130 135 140

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

145 150 155 160

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

165 170 175

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

180 185 190

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

195 200 205

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

210 215 220

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

225 230 235 240

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

245 250 255

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

260 265 270

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

275 280 285

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

290 295 300

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

305 310 315 320

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

325 330 335

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 26

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

与Fc结构域融合的L79D突变和TPA前导序列

<400> 26

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr

20 25 30

Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn

35 40 45

Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His

50 55 60

Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys

65 70 75 80

Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys

85 90 95

Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly

100 105 110

Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro

115 120 125

Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr

130 135 140

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

145 150 155 160

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

165 170 175

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

180 185 190

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

195 200 205

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

210 215 220

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

225 230 235 240

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

245 250 255

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

260 265 270

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

290 295 300

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

305 310 315 320

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

325 330 335

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

340 345 350

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360 365

<210> 27

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列（SEQ ID NO:2的氨基酸20-134），

其具有与Fc结构域融合的L79D突变和TPA前导序列

<400> 27

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr

20 25 30

Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn

35 40 45

Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His

50 55 60

Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys

65 70 75 80

Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys

85 90 95

Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly

100 105 110

Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro

115 120 125

Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr

130 135 140

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

145 150 155 160

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

165 170 175

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

180 185 190

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

195 200 205

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

210 215 220

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

225 230 235 240

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

245 250 255

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

260 265 270

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

290 295 300

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

305 310 315 320

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

325 330 335

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

340 345 350

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360 365

<210> 28

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列，其具有变体C末端序列（在

WO2007/053775中披露）

<400> 28

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu

130 135 140

<210> 29

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

WO2007/053775中披露），该变体C末端序列具有L79D突变

<400> 29

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu

130 135 140

<210> 30

<211> 370

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性（细胞外）、加工的多肽序列，其具有变体C末端序列（在WO2007/053775中披露），

该变体C末端序列具有与具有TGGG接头的Fc结构域融合的L79D突变

<400> 30

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Thr Gly Gly

130 135 140

Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

145 150 155 160

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

165 170 175

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

180 185 190

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

195 200 205

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

210 215 220

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

225 230 235 240

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

245 250 255

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

260 265 270

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

275 280 285

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

290 295 300

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

305 310 315 320

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

325 330 335

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

340 345 350

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

355 360 365

Gly Lys

370

<210> 31

<211> 1083

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码SEQ ID NO:10的核酸序列

<400> 31

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60

tcgcccggcg ccgccgaaac ccgcgaatgt atttattaca atgctaattg ggaactcgaa 120

cggacgaacc aatccgggct cgaacggtgt gagggggaac aggataaacg cctccattgc 180

tatgcgtcgt ggaggaactc ctccgggacg attgaactgg tcaagaaagg gtgctgggac 240

gacgatttca attgttatga ccgccaggaa tgtgtcgcga ccgaagagaa tccgcaggtc 300

tatttctgtt gttgcgaggg gaatttctgt aatgaacggt ttacccacct ccccgaagcc 360

ggcgggcccg aggtgaccta tgaacccccg cccaccggtg gtggaactca cacatgccca 420

ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 480

aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 540

cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 600

aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 660

gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 720

ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 780

gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 840

ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 900

gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctat 960

agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1020

atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 1080

tga 1083

<210> 32

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的ActRIIB（R64；SEQ ID NO:15）的可溶性细胞外结构域的融合蛋白

<400> 32

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

115 120 125

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

130 135 140

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

145 150 155 160

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

165 170 175

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

180 185 190

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

195 200 205

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

210 215 220

Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

225 230 235 240

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

245 250 255

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

260 265 270

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

275 280 285

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

290 295 300

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

305 310 315 320

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

325 330 335

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 33

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的具有C末端15个氨基酸缺失的ActRIIB（R64）

（SEQ ID NO:16）的可溶性细胞外结构域的融合蛋白

<400> 33

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 34

<211> 1083

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<221> 尚未归类的信号

<222> (1)..(72)

<223> 编码TPA信号肽的核苷酸序列

<220>

<223> 编码SEQ ID NO:1和组织纤溶酶原激活剂（TPA信号肽序列）的核酸序列

<400> 34

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60

tcgcccggcg ccgccgaaac ccgcgaatgt atttattaca atgctaattg ggaactcgaa 120

cggacgaacc aatccgggct cgaacggtgt gagggggaac aggataaacg cctccattgc 180

tatgcgtcgt ggaggaactc ctccgggacg attgaactgg tcaagaaagg gtgctgggac 240

gacgatttca attgttatga ccgccaggaa tgtgtcgcga ccgaagagaa tccgcaggtc 300

tatttctgtt gttgcgaggg gaatttctgt aatgaacggt ttacccacct ccccgaagcc 360

ggcgggcccg aggtgaccta tgaacccccg cccaccggtg gtggaactca cacatgccca 420

ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 480

aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 540

cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 600

aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 660

gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 720

ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 780

gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 840

ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 900

gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctat 960

agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1020

atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1080

tga 1083

Claims

1.一种用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，该方法包括

向受试者施用激活素受体IIB型(ActRIIB)配体陷阱；并且

向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物。

2.一种用于治疗有需要的受试者的贫血的方法，该方法包括

(a)对受试者的血红蛋白(Hgb)水平进行首次测量；

(b)向该受试者施用初始剂量的ActRIIB配体陷阱；

(c)向该受试者施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐和/或水合物；

(d)在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱后的第一时间段结束时，对该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平进行第二次测量；并且

(e)基于与首次测量的血红蛋白(Hgb)水平相比的第二次测量的血红蛋白(Hgb)水平，或基于该受试者在第一时间段期间接受的红细胞输注次数，向该受试者施用后续剂量的该ActRIIB配体陷阱。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中伴随施用该ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱和菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的共同施用对治疗贫血是药学上有效的。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中该受试者是被诊断患有骨髓纤维化的受试者。

6.如权利要求5所述的方法，其中该骨髓纤维化是骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化。

7.如权利要求5所述的方法，其中该骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)、真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)或原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。

8.如权利要求7所述的方法，其中该骨髓纤维化是中风险或高风险原发性骨髓纤维化(PMF)。

9.如权利要求7所述的方法，其中该骨髓纤维化是中风险或高风险真性红细胞增多症后骨髓纤维化(PV后MF)。

10.如权利要求7所述的方法，其中该骨髓纤维化是中风险或高风险原发性血小板增多症后骨髓纤维化(ET后MF)。

11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中该受试者是人。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中该贫血与骨髓增殖性肿瘤(MPN)相关性骨髓纤维化相关。

13.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中该受试者是红细胞(RBC)输注依赖性的或非输注依赖性的。

14.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中该受试者是RBC输注依赖性的。

15.如权利要求14所述的方法，其中在施用该ActRIIB配体陷阱之前的84天内，该受试者在RBC输注中已接受4至12个RBC单位。

16.如权利要求14所述的方法，其中在未输注红细胞(RBC)的情况下，该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于11.5g/dL。

17.如权利要求1至13中任一项所述的方法，其中该受试者是非输注依赖性的。

18.如权利要求17所述的方法，其中在施用该ActRIIB配体陷阱之前的84天内，该受试者在RBC输注中已接受少于4个红细胞(RBC)单位。

19.如权利要求17所述的方法，其中该受试者的血红蛋白(Hgb)水平低于9.5g/dL。

20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱并伴随施用菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物之前，该受试者已接受过菲卓替尼治疗至少8周、至少16周、至少24周、至少32周或至少40周。

21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中该受试者以前接受过鲁索替尼治疗。

22.如权利要求1至21中任一项所述的方法，其中每日施用该菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

23.如权利要求1至22中任一项所述的方法，其中口服施用该菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中以400mg/天的剂量施用该菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱在每个治疗周期开始时施用一次，其中每个周期是21天。

26.如权利要求1至25中任一项所述的方法，其中将该ActRIIB配体陷阱施用于该受试者至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个周期。

27.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中将该ActRIIB配体陷阱皮下施用于该受试者。

28.如权利要求1至27中任一项所述的方法，其中该施用的ActRIIB配体陷阱药学有效量是0.6mg/kg、0.8mg/kg、1mg/kg、1.33mg/kg或1.75mg/kg。

29.如权利要求28所述的方法，其中该施用的ActRIIB配体陷阱药学有效量是1.33mg/kg。

30.如权利要求2至27中任一项所述的方法，其中该血红蛋白(Hgb)水平的首次测量是在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱之前进行。

31.如权利要求2至27中任一项所述的方法，其中该血红蛋白(Hgb)水平的首次测量与该初始剂量的ActRIIB配体陷阱的施用同时进行，或在施用该初始剂量的ActRIIB配体陷阱后约3周、6周、9周、12周、15周、18周、21周或24周进行。

32.如权利要求2至31中任一项所述的方法，其中该血红蛋白(Hgb)水平的第二次测量在该初始剂量的ActRIIB配体陷阱施用于该受试者后约在3周、6周、9周、12周、15周、18周、21周、24周、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月进行。

33.如权利要求2至32中任一项所述的方法，其中该第一时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周或8周。

34.如权利要求33中任一项所述的方法，其中该第一时间段是6周。

35.如权利要求2至34中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱的初始剂量是1.33mg/kg。

36.如权利要求2至35中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是0.6mg/kg、0.8mg/kg、1.0mg/kg、1.33mg/kg或1.75mg/kg。

37.如权利要求2至35中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱的后续剂量是1.33mg/kg。

38.如权利要求2至35中任一项所述的方法，其中当该第二次测量的Hgb水平比该首次测量的Hgb水平高2g/dL或更多时，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量低于该ActRIIB配体陷阱的初始剂量。

39.如权利要求2至35中任一项所述的方法，其中当该受试者在该第一时间段期间输注过一次或多次RBC，或该第二次测量的Hgb水平比该首次测量的Hgb水平高0至约1g/dL之间，或该首次测量的Hgb水平在约6周的无输注期间降低1g/dL或更多时，该ActRIIB配体陷阱的后续剂量高于该ActRIIB配体陷阱的初始剂量。

40.如权利要求2至35中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱的后续剂量与该ActRIIB配体陷阱的初始剂量相同。

41.如权利要求1至40中任一项所述的方法，该方法进一步包括

根据美国国家癌症研究所(NCI)不良事件通用术语标准(CTCAE)将该受试者中的血液学、肝脏、非血液学或胃肠道事件分级为1、2、3、4或5级；并且

施用后续剂量的菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物。

42.如权利要求41所述的方法，其中菲卓替尼或其药学上可接受的盐或水合物的后续剂量是300mg/天、200mg/天或100mg/天。

43.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱是人源化融合蛋白，该人源化融合蛋白由ActRIIB的细胞外结构域和人IgG1 Fc结构域组成。

44.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱是融合蛋白，该融合蛋白包含ActRIIB的细胞外结构域和人IgG1 Fc结构域。

45.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱是包含氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列选自由以下组成的组：

(a)与SEQ ID NO:3具有90％同一性的氨基酸序列；

(b)与SEQ ID NO:3具有95％同一性的氨基酸序列；

(c)与SEQ ID NO:3具有98％同一性的氨基酸序列；

(d)SEQ ID NO:4；

(e)与SEQ ID NO:6具有90％同一性的氨基酸序列；

(f)与SEQ ID NO:6具有95％同一性的氨基酸序列；

(g)与SEQ ID NO:6具有98％同一性的氨基酸序列；

(h)SEQ ID NO:7；

(i)与SEQ ID NO:7具有90％同一性的氨基酸序列；

(j)与SEQ ID NO:7具有95％同一性的氨基酸序列；

(k)与SEQ ID NO:7具有98％同一性的氨基酸序列；

(l)SEQ ID NO:8；

(m)与SEQ ID NO:11具有90％同一性的氨基酸序列；

(n)与SEQ ID NO:11具有95％同一性的氨基酸序列；

(o)与SEQ ID NO:11具有98％同一性的氨基酸序列；以及

(p)SEQ ID NO:11。

46.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱是包含氨基酸序列的多肽，该氨基酸序列选自由以下组成的组：

(a)与SEQ ID NO:11具有90％同一性的氨基酸序列；

(b)与SEQ ID NO:11具有95％同一性的氨基酸序列；

(c)与SEQ ID NO:11具有98％同一性的氨基酸序列；以及

(d)SEQ ID NO:11。

47.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱是包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列的多肽。

48.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中该ActRIIB配体陷阱是由SEQ ID NO:34的核苷酸序列或SEQ ID NO:34的简并形式编码的多肽。

49.如权利要求1至47中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少0.5g/dL、至少1.0g/dL、至少1.5g/dL、至少2.0g/dL或至少2.5g/dL。

50.如权利要求49所述的方法，其中该方法使该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少1.5g/dL。

51.如权利要求1至47中任一项所述的方法，其中该方法在56天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9或至少10个单位。

52.如权利要求51所述的方法，其中该方法在56天的时间段内使该受试者接受的RBC输注减少了至少4个单位。

53.如权利要求1至47中任一项所述的方法，其中该方法在84天的时间段内使该受试者接受的红细胞(RBC)输注减少了至少2、至少3、至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9或至少10个单位。

54.如权利要求1至47中任一项所述的方法，其中该方法在连续84天的时间段内使该受试者中的血红蛋白(Hgb)水平增加至少1.5g/dL。

55.如权利要求1至47中任一项所述的方法，其中该受试者在连续84天的时间段内无红细胞(RBC)输注。

56.如权利要求1至55中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的血红蛋白(HGB)水平增加到与所述治疗前该受试者中的HGB水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

57.如权利要求1至56中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的血细胞比容(HCT)水平增加到与所述治疗前该受试者中的HCT水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

58.如权利要求1至57中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的平均红细胞体积(MCV)水平降低到与所述治疗前该受试者中的MCV水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。

59.如权利要求1至58中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的细胞血红蛋白浓度(CHC)水平增加到与所述治疗前该受试者中的CHC水平相比相同或高约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％、100％、200％或500％的水平。

60.如权利要求1至59中任一项所述的方法，其中该方法使该受试者中的红细胞分布宽度(RDW)水平降低到与所述治疗前该受试者中的RDW水平相比相同或低约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、90％或100％的水平。

61.如权利要求1至60中任一项所述的方法，其中该受试者中的网织红细胞水平保持在与所述治疗前该受试者中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。

62.如权利要求1至61中任一项所述的方法，其中该受试者中的网织红细胞水平保持在与参考群体中的网织红细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。

63.如权利要求1至62中任一项所述的方法，其中该受试者中的白细胞水平保持在与所述治疗前该受试者中的白细胞水平相比相同或者高或低约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％的范围内。