CN107847562A

CN107847562A - 使用 ACTRII 配体陷阱治疗 β‑地中海贫血

Info

Publication number: CN107847562A
Application number: CN201680041002.2A
Authority: CN
Inventors: 肯尼思·M·阿蒂; 阿伯达拉曼恩·拉亚德姆; 拉杰什·乔普拉; 杰伊·巴克斯托姆
Original assignee: Sailelong Aike Pharmaceutical Co; Celgene Corp
Current assignee: Sailelong Aike Pharmaceutical Co; Celgene Corp; Acceleron Pharma Inc
Priority date: 2015-05-13
Filing date: 2016-05-12
Publication date: 2018-03-27
Also published as: WO2016183280A1; JP2021191755A; TN2017000468A1; AU2021258087A1; PH12017502079A1; MY189601A; HK1251157A1; IL284686A; TWI814187B; AU2016261913A1; IL284686B; IL255527B; JP6976859B2; TWI762444B; EP3294320A1; TW201709927A; JOP20160092B1; IL284686B2; AU2016261913B2; EP3294320A4

Abstract

本文提供通过皮下给予约0.8mg/kg ActRII信号转导抑制剂来治疗β‑地中海贫血的方法。本文还提供调节给予对象的ActRII信号转导抑制剂的剂量的方法。

Description

使用ACTRII配体陷阱治疗β-地中海贫血

1.相关申请的交叉引用

本申请要求2015年5月13日提交的美国临时专利申请号62/161,136、2015年6月10日提交的美国临时专利申请号62/173,836和2015年10月19日提交的美国临时专利申请号62/243,457的优先权的权益，其每一个的完整内容通过引用并入本文并用于所有目的。

2.序列表

本申请正在与以文件名“12827_952_228_SeqListing.txt”提交的序列表一起提交，该文件的大小为97千字节，于2016年5月4日创建。序列表通过引用以其整体并入本文并用于所有目的。

3.发明领域

本文提供治疗和/或预防β-地中海贫血例如输血依赖性和非输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象激活素II型受体信号转导抑制剂(ActRII信号转导抑制剂，例如激活素配体陷阱)。

4.发明背景

β-地中海贫血，全世界最常见的遗传性血红蛋白病之一，是因编码β-珠蛋白的基因的常染色体突变所致，该突变诱导红细胞生成细胞中这种蛋白质不合成或低水平合成(Weatherall DJ,2001,Nature Reviews Genetics；2(4):245-255)。约8000-9000万人(约全球人口的1.5％)是β-地中海贫血的携带者，其中每年出生约60,000有症状的个体(Modell et al.,2007,Scand J Clin Lab Invest；67:39-69)。有症状的个体的年发病率估计全世界为1/100,000，欧盟(EU)为1/10,000(Galanello R and Origa R，2010，Orphanet J Rare Dis；5:11)。发病率在地中海地区、中东和东南亚(特别是印度、秦国和印尼；该地区占约受累出生的50％)最高，并且发病率因移民而在全世界逐步提高(例如欧洲、美国和澳大利亚)(Colah R,Gorakshakar et al.,2010；Expert Rev Hematol；3(1):103-17；Modell et al.,2008,Bull World Health Organ；86(6):480-7)。

β-地中海贫血的特征在于β-珠蛋白链减少，随后血红蛋白(Hb)分子的珠蛋白链(α:非α比率)不平衡，这导致红细胞生成受损和其它并发症。已描述了患有影响β-珠蛋白基因的β-地中海贫血的患者中近200种不同的突变，对于该基因患者可为纯合或复杂杂合的。因此，表型效应，在来自轻微损害到β-珠蛋白链合成完全抑制的患者中有很大程度的不同(Thein SL,2013,Cold Spring Harb Perspect Med；3(5):a011700)。除缺陷型β-珠蛋白链以外，患者还可以β-地中海贫血合并结构变体(例如HbE)存在，导致HbE/β-地中海贫血。

鉴于目前没有治疗β-地中海贫血(例如输血依赖性和非输血依赖性β-地中海贫血)的安全有效的药物疗法，因此对于专门克服β-地中海贫血综合征(包括贫血和无效性红细胞生成并发症)的基础病理生理学的新疗法，存在重大的未被满足的医学需要。

两种相关II型受体，ActRIIA和ActRIIB，已被鉴定为激活素的II型受体(Mathewsand Vale,1991,Cell 65:973-982；Attisano et al.,1992,Cell 68:97-108)。除激活素以外，ActRIIA和ActRIIB可与几种其它的TGF-β家族蛋白质在生化上相互作用，包括BMP7、Nodal、GDF8和GDF11(Yamashita et al.,1995,J.Cell Biol.130:217-226；Lee andMcPherron,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.98:9306-9311；Yeo and Whitman,2001,Mol.Cell7:949-957；Oh et al.,2002,Genes Dev.16:2749-54)。ALK4是激活素、特别是激活素A的I型受体，而ALK-7还可用作激活素、特别是激活素B的受体。

由包括激活素-受体IIB型(ActRIIB)的胞外域和人IgG1Fc(ActRIIB-hFc)的人源化融合蛋白组成的激活素配体陷阱，目前正在用于治疗患有β-地中海贫血的对象的II期临床试验中进行评价。

5.发明概述

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂。

本文提供用于治疗有需要的对象的输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂。

本文提供用于治疗有需要的对象的非输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂，其中对象的表型选自β⁰/β⁰、β⁺/β⁺、β⁰/β⁺、β⁰/HbE和β⁺/HbE。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂，其中对象的表型包括2个严重的血红蛋白β链突变的共遗传，且其中对象患有α-地中海贫血。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂，其中对象的表型包括2个严重的血红蛋白β链突变的共遗传，且其中对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予对象ActRII信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予对象ActRII信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中对象的表型选自β⁰/β⁰、β⁺/β⁺、β⁰/β⁺、β⁰/HbE和β⁺/HbE。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予ActRII信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予对象ActRII信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述给予足以在给予之间可检测地降低所述对象血清中的GDF-11水平。

在任一前述方法的某些实施方案中，β-地中海贫血是输血依赖性β-地中海贫血。在任一前述方法的某些实施方案中，β-地中海贫血是非输血依赖性β-地中海贫血。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象血红蛋白浓度的第一次测量；在第一段时间之后进行对象血红蛋白浓度的第二次测量；根据血红蛋白浓度的第二次测量和血红蛋白浓度的第一次测量之间的差异给予ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象血细胞比容的第一次测量；在第一段时间之后进行对象血细胞比容的第二次测量；根据血细胞比容的第二次测量和血细胞比容的第一次测量之间的差异给予ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象胎儿血红蛋白的第一次测量；在第一段时间之后进行对象胎儿血红蛋白浓度的第二次测量；根据胎儿血红蛋白浓度的第二次测量和胎儿血红蛋白浓度的第一次测量之间的差异给予ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括(a)进行对象的血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量；(b)在第一段时间之后进行对象的血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第二次测量；和(c)在第二段时间之后，终止给予初始剂量并给予对象ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中后续剂量在对象的上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量在给予对象ActRII信号转导抑制剂的初始剂量之前进行。在某些实施方案中，血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量紧接在将ActRII信号转导抑制剂的初始剂量给予对象之后或在之后至多1天、2天、3天、4天、5天、6天或1周内进行。在某些实施方案中，血红蛋白、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第二次测量在将ActRII信号转导抑制剂的初始剂量给予对象后约3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月进行。在某些实施方案中，第二段时间在当进行第二次测量时的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周内。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂的后续剂量为约0.3mg/kg、约0.45mg/kg、约0.6mg/kg、约1.0mg/kg或约1.25mg/kg。在某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象的血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第三次测量。

在任一前述方法的某些实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；(b)血红蛋白浓度的第二次测量大于血红蛋白浓度的第一次测量小于或等于1.5g/dL；和(c)后续剂量等于初始剂量。

在任一前述方法的某些实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；(b)血红蛋白浓度的第二次测量大于血红蛋白浓度的第一次测量大于1.5g/dL；和(c)后续剂量为小于初始剂量的约25％。

在任一前述方法的某些实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量(i)大于12.5g/dL且小于或等于14g/dL；和(ii)大于血红蛋白浓度的第一次测量小于或等于1.5g/dL；(b)后续剂量等于初始剂量；和(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量小于或等于12.5g/dL。

在任一前述方法的某些实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量(i)大于12.5g/dL且小于或等于14g/dL，和(ii)大于血红蛋白浓度的第一次测量大于1.5g/dL；(b)后续剂量为小于初始剂量的约25％；和(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量测定为(i)小于或等于12.5g/dL，和(ii)血红蛋白浓度的第一次测量和血红蛋白浓度的第三次测量之间的变化小于或等于1.5g/dL。

在任一前述方法的某些实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量大于14g/dL；(b)后续剂量为小于初始剂量的约25％；和(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量小于12.5g/dL。

在任一前述方法的某些实施方案中，初始剂量每21天一次给予。在某些实施方案中，后续剂量每21天一次给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括降低对象的GDF11水平。在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括提高对象的胎儿血红蛋白水平。

在任一前述方法的某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导的抑制剂。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIA的胞外域和人IgG1Fc结构域组成的人源化融合蛋白。在某些实施方案中，ActRIIA信号转导抑制剂是包含选自以下氨基酸序列的多肽：(a)与SEQ ID NO:2有90％同一性；(b)与SEQ ID NO:2有95％同一性；(c)与SEQ ID NO:2有98％同一性；(d)SEQ ID NO:2；(e)与SEQ ID NO:3有90％同一性；(f)与SEQ ID NO:3有95％同一性；(g)与SEQ ID NO:3有98％同一性；(h)SEQ ID NO:3；(i)与SEQ ID NO:6有90％同一性；(j)与SEQ ID NO:6有95％同一性；(k)与SEQ ID NO:6有98％同一性；(l)SEQ ID NO:6；(m)与SEQ ID NO:7有90％同一性；(n)与SEQ ID NO:7有95％同一性；(o)与SEQ ID NO:7有98％同一性；和(p)SEQ ID NO:7。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的多肽。

在任一前述方法的某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导的抑制剂。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIB的胞外域和人IgG1Fc结构域组成的人源化融合蛋白。在某些实施方案中，ActRIIB抑制剂是包含选自以下氨基酸序列的多肽：(a)与SEQ ID NO:17有90％同一性；(b)与SEQ ID NO:17有95％同一性；(c)与SEQID NO:17有98％同一性；(d)SEQ ID NO:17；(e)与SEQ ID NO:20有90％同一性；(f)与SEQID NO:20有95％同一性；(g)与SEQ ID NO:20有98％同一性；(h)SEQ ID NO:20；(i)与SEQID NO:21有90％同一性；(j)与SEQ ID NO:21有95％同一性；(k)与SEQ ID NO:21有98％同一性；(l)SEQ ID NO:21；(m)与SEQ ID NO:25有90％同一性；(n)与SEQ ID NO:25有95％同一性；(o)与SEQ ID NO:25有98％同一性；和(p)SEQ ID NO:25。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的多肽。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

本文提供用于治疗有需要的对象的输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中激活素受体II型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

本文提供用于治疗有需要的对象的非输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中对象的表型选自β⁰/β⁰、β⁺/β⁺、β⁰/β⁺、β⁰/HbE和β⁺/HbE，且其中ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ IDNO:25的氨基酸序列。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中对象的表型包括2个严重的血红蛋白β链突变的共遗传，其中对象患有α-地中海贫血，且其中ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中对象的表型包括2个严重的血红蛋白β链突变的共遗传，其中对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症，且其中ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次将ActRIIB信号转导抑制剂给予对象，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次将ActRIIB信号转导抑制剂给予对象，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中对象的表型选自β⁰/β⁰、β⁺/β⁺、β⁰/β⁺、β⁰/HbE和β⁺/HbE。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予ActRIIB信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症。

本文提供用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次将ActRIIB信号转导抑制剂给予对象，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述给予足以在给予之间可检测地降低所述对象血清中的GDF-11水平。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象血红蛋白浓度的第一次测量；在第一段时间之后进行对象血红蛋白浓度的第二次测量；根据血红蛋白浓度的第二次测量和血红蛋白浓度的第一次测量之间的差异给予ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象血细胞比容的第一次测量；在第一段时间之后进行对象血细胞比容的第二次测量；根据血细胞比容的第二次测量和血细胞比容的第一次测量之间的差异给予ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象胎儿血红蛋白浓度的第一次测量；在第一段时间之后进行对象胎儿血红蛋白浓度的第二次测量；根据胎儿血红蛋白浓度的第二次测量和胎儿血红蛋白浓度的第一次测量之间的差异给予ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括(a)进行对象血红蛋白浓度的第一次测量；(b)在第一段时间之后进行对象血红蛋白浓度的第二次测量；和(c)在第二段时间之后，终止给予初始剂量并给予对象ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量，其中后续剂量在对象的上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量在给予对象ActRIIB信号转导抑制剂的初始剂量之前进行。在某些实施方案中，血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量在紧接将ActRIIB信号转导抑制剂的初始剂量给予对象之后或在之后至多1天、2天、3天、4天、5天、6天或1周内。在某些实施方案中，血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第二次测量在将ActRIIB信号转导抑制剂的初始剂量给予对象后约3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月进行。在某些实施方案中，第二段时间在当进行第二次测量时的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周内。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量为约0.3mg/kg、约0.45mg/kg、约0.6mg/kg、约1.0mg/kg或约1.25mg/kg。在某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象的血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第三次测量。

在任一前述方法的某些实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；(b)血红蛋白浓度的第二次大于血红蛋白浓度的第一次测量测量大于1.5g/dL；和(c)后续剂量为小于初始剂量的约25％。

在任一前述方法的某些实施方案中，初始剂量每21天一次给予。在任一前述方法的某些实施方案中，后续剂量每21天一次给予。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括降低对象的GDF11水平。

在任一前述方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括提高对象的胎儿血红蛋白水平。

本文提供提高对象的胎儿血红蛋白水平的方法，所述方法包括将ActRIIB信号转导抑制剂给予对象。

在任一前述方法的某些实施方案中，对象表达血红蛋白E。

在任一前述方法的某些实施方案中，对象不表达血红蛋白S。

在任一前述方法的某些实施方案中，红细胞反应(erythroid response)由以下组成：(i)输血负担(transfusion burden)减轻大于或等于33％持续12周，和(ii)在12周时间内减少至少2个单位的红细胞。

在任一前述方法的某些实施方案中，红细胞反应包括与基线血红蛋白浓度相比血红蛋白浓度增加大于1g/dL，其中血红蛋白浓度的增加通过在连续12周时间内没有输血时的血红蛋白浓度值来衡量。

在任一前述方法的某些实施方案中，对象是人。

在任一前述方法的某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂以无菌无防腐剂的冻干块装入容器中，在给予对象之前保存在2℃和8℃之间。在某些实施方案中，容器装有37.5mg的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，容器装有75mg的ActRII信号转导抑制剂。

6.附图简述

图1表示在治疗之前或在接受剂量为1.25mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)持续2周或5周后示例性输血依赖性患者腿溃疡的愈合。

7.发明详述

7.1概述

本文提供治疗对象的β-地中海贫血(例如输血依赖性或非输血依赖性β-地中海贫血)的方法，所述方法包括给予对象ActRII信号转导抑制剂。

7.2缩略语和术语

如本文所用，术语“约”当与数值连用时是指所引用数值的1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％内的任何数值。在某些实施方案中，术语“约”包括所列出的精确数值。

如本文所用，“ActRII”是指激活素受体II型。如本文所用，“ActRIIA”是指激活素受体IIA型。参见例如Mathews and Vale，1991，Cell 65:973-982。GenBank^TM登录号NM_001278579.1提供示例性人ActRIIA核酸序列。GenBank^TM登录号NP_001265508.1提供示例性人ActRIIA氨基酸序列。如本文所用，“ActRIIB”是指激活素受体IIB型。参见例如Attisano等，1992，Cell 68：97-108。GenBank^TM登录号NM_001106.3提供示例性人ActRIIB核酸序列。GenBank^TM登录号NP_001097.2提供示例性人ActRIIB氨基酸序列。

如本文所用，“ActRIIA-mFc”或“mActRIIA-Fc”是指小鼠激活素IIA型受体-IgG1融合蛋白。参见例如美国专利号8,173,601。如本文所用，“mActRIIB-Fc”或“ActRIIB-mFc”是指小鼠激活素IIB型受体-IgG1融合蛋白。参见例如美国专利号8,173,601。如本文所用，“hActRIIA-Fc”或“ActRIIA-hFc”是指人激活素IIA型受体-IgG1融合蛋白。参见例如美国专利号8,173,601。在某些实施方案中，ActRIIA-hFc是指包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的多肽。如本文所用，“hActRIIB-Fc”或“ActRIIB-hFc”是指人激活素IIB型受体-IgG1融合蛋白。参见例如美国专利号8,173,601。在某些实施方案中，ActRIIB-hFc是指包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的多肽。

“AE”是指不良事件。

“β⁰”是指与没有β珠蛋白亚基合成有关的等位基因。

“β⁺”是指与β珠蛋白亚基合成减少有关的等位基因。

“Hb”是指血红蛋白蛋白质。GenBank^TM登录号NP_000549.1(SEQ ID NO:48)提供人血红蛋白α亚基的示例性氨基酸序列。GenBank^TM登录号NP_000509.1(SEQ ID NO:49)提供人血红蛋白β亚基的示例性氨基酸序列。GenBank^TM登录号NP_000550.2(SEQ ID NO:50)提供人血红蛋白γ亚基的示例性氨基酸序列。通常，成人中最常见的血红蛋白形式包含2个α亚基和2个β亚基。胎儿血红蛋白，亦称为“血红蛋白F”或“HbF”包含2个α亚基和2个γ亚基。

“HbE”或“血红蛋白E”是技术领域公认的术语，是指血红蛋白(例如人血红蛋白)的突变形式。血红蛋白E包含2个α亚基和2个β亚基，其中β亚基的26位由谷氨酸突变为赖氨酸(E26K)。

“HbE/β-地中海贫血”是指血红蛋白E和β⁰等位基因的共遗传。

“HbS”或“血红蛋白S”是技术领域公认的术语，是指血红蛋白(例如人血红蛋白)的突变形式。血红蛋白S包含2个α亚基和2个β亚基，其中β亚基的6位从谷氨酰胺突变成缬氨酸(G6V)。

在某些实施方案中，红细胞的1个单位是指从约400-500mL捐赠血得到的浓集红细胞的量。

7.3治疗和/或预防方法

7.3.1β-地中海贫血

在某些实施方案中，本文提供用于治疗和/或预防对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg或约1.1mg/kg ActRII信号转导抑制剂(例如激活素配体陷阱)的初始剂量，其中将ActRII信号转导抑制剂在对象的上臂、腹部或大腿皮下给予对象。

在某些实施方案中，本文提供用于治疗和/或预防对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg ActRII信号转导抑制剂(例如激活素配体陷阱)的初始剂量，其中将ActRII信号转导抑制剂在对象的上臂、腹部或大腿皮下给予对象。

在某些实施方案中，“治疗”、“医治”或“处理”在β-地中海贫血的情况下，包括改善β-地中海贫血的至少一个症状。β地中海贫血的症状的非限制性实例包括骨髓中的缺陷红细胞产生、无效性红细胞生成、血红蛋白水平不足、多器官功能障碍、铁过载、苍白、疲倦、黄疸和脾大。

在某些实施方案中，对象是第7.5节描述的对象。在某些实施方案中，β-地中海贫血是输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，β-地中海贫血是非输血依赖性β-地中海贫血。

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第5.6节的描述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节描述的ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是如第7.6.1节描述的ActRIIA信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIA信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc例如ActRIIA-hFc(例如SEQ ID NO:7)。

在某些实施方案中，按第7.9节所述将第ActRII信号转导抑制剂给予对象。

在某些实施方案中，按第7.8节所述将ActRII信号转导抑制剂连同第二药物活性剂或疗法一起给予对象。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括按第7.3.2节或第7.4节所述给予对象ActRII信号转导抑制剂的后续剂量。例如，所述方法可进一步包括对象血红蛋白浓度的分析作为确定待给予对象的后续给药方案的手段。在某些实施方案中，对象的血红蛋白浓度可用来(i)评价用于对象的合适给药，其中对象是待用或正用ActRII信号转导抑制剂(例如激活素配体陷阱)治疗的候选者；(ii)评价在治疗期间是否调节ActRII信号转导抑制剂的剂量；和/或(iii)评价ActRII信号转导抑制剂的合适的维持剂量。根据对象的血红蛋白浓度，可开始、增加、降低、延迟或终止用ActRII信号转导抑制剂的给药。参见例如表1和表2。在某些实施方案中，所述方法进一步包括(a)进行对象血红蛋白浓度的第一次测量；(b)在第一段时间之后进行对象血红蛋白浓度的第二次测量；和(c)在第二段时间之后，终止给予初始剂量并给予对象ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中后续剂量在对象的上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予。在某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象的血红蛋白浓度的第三次测量。在某些实施方案中，滴定ActRII信号转导抑制剂的后续剂量直到约1.25mg/kg的最大后续剂量。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如本文第7.5节描述的对象)在对象中引起红细胞反应。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象的输血负担减轻达至少33％，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象的输血负担减轻达至少50％，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象的输血负担减轻达至少25％、30％、33％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或100％，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象的输血负担减轻达至少25％、30％、33％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或100％持续至少8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象的输血负担减轻达至少33％达至少12周，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象的输血负担减轻达至少50％达至少12周，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象的红细胞输入减少达至少1、2、3、4或更多个红细胞单位，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象的红细胞输入减少达至少1、2、3、4或更多个红细胞单位持续至少8周、9周、10周、11周、12周、13周、14周、15周、16周、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月。在某些实施方案中，红细胞反应包括对象中至少2个单位的红细胞减少达至少12周，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括(i)对象的输血负担减轻达至少33％达至少12周，和(ii)对象减少至少2个单位的红细胞达至少12周，其中对象患有输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，输血负担的减轻是与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内在基线对象的输血负担相比。在某些实施方案中，红细胞单位的减少是与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内给予对象的红细胞的单位相比。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节描述的ActRIIB信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)在对象中引起红细胞反应。在某些实施方案中，红细胞反应包括与在按照本文提供的方法治疗前对象的血红蛋白浓度相比对象的血红蛋白浓度增加大于0.75g/dL、1g/dL、1.25g/dL或1.5g/dL，其中血红蛋白浓度通过在对象中在不输血至少连续12周时间内对象的血红蛋白浓度衡量，且其中对象患有非输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，红细胞反应包括与在按照本文提供的方法治疗前对象的血红蛋白浓度相比对象的血红蛋白浓度增加大于1g/dL，其中血红蛋白浓度通过在对象中在不输血至少连续12周时间内对象的血红蛋白浓度衡量，且其中对象患有非输血依赖性β地中海贫血。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗的输血依赖性β-地中海贫血对象在治疗后不需要红细胞输入达至少8周、9周、10周、12周、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或1年。在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗的输血依赖性β-地中海贫血对象在治疗后不需要红细胞输入达至少8周。在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗的输血依赖性β-地中海贫血对象在治疗后不需要红细胞输入达至少12周。在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗的输血依赖性β-地中海贫血对象在治疗后不需要红细胞输入达至少8周。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内对象的肝铁浓度的水平相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致对象的肝铁浓度降低达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内对象的肝铁浓度相比，对象的肝铁浓度降低达约10％。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内对象的肝铁浓度相比，对象的肝铁浓度降低达约15％。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内对象的肝铁浓度相比，对象的肝铁浓度降低达约20％。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内对象的肝铁浓度相比，对象的肝铁浓度降低介于5％和30％之间。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内对象的肝铁浓度相比，对象的肝铁浓度降低介于10％和30％之间。在某些实施方案中，肝铁浓度按照第7.7节中描述的测定法测定。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内对象的心肌铁浓度相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致降低对象的心肌铁浓度达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，心肌铁浓度按照第7.7节中描述的测定法测定。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)导致对象的每日铁螯合疗法减少，例如给予对象的一次或多次铁螯合治疗剂的剂量或频率降低。铁螯合治疗剂的非限制性实例包括地拉罗司、去铁酮和去铁胺。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始对象治疗之前1周、2周、3周或4周内对象的血清铁蛋白水平相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致对象的血清铁蛋白水平降低达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，血清铁蛋白水平按照第7.7节描述的测定法测定。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)导致与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的胎儿血红蛋白浓度相比，对象的胎儿血红蛋白浓度增加达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、200％、300％、400％或至少500％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、200％、300％、400％或至多500％。在某些实施方案中，胎儿血红蛋白浓度血清铁蛋白水平按照第7.7节描述的测定法测定。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的GDF11浓度相比，对象的GDF11浓度降低达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、200％、300％、400％或至少500％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、200％、300％、400％或至多500％。在某些实施方案中，GDF11浓度血清铁蛋白水平按照第7.7节描述的测定法测定。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法治疗对象之前1、2、3或4周内的症状相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)减轻与一种或多种β-地中海贫血临床并发症有关的症状。在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)减轻与一种或多种输血依赖性β-地中海贫血临床并发症相关的症状。输血依赖性β-地中海贫血的非限制性实例包括生长阻滞、苍白、黄疸、肌肉系统差、膝外翻、肝脾大、腿溃疡、因骨髓外造血发生包块、产生于骨髓扩增的骨骼变化和长期红细胞输入的临床并发症(例如乙型肝炎病毒感染、丙型肝炎病毒感染)和人免疫缺陷病毒感染、同种异体免疫和因铁过载所致器官损害，例如肝损害、心脏损害和内分泌腺损害。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的症状相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)减轻与一种或多种非输血依赖性β-地中海贫血临床并发症有关的症状。非输血依赖性β-地中海贫血的非限制性实例包括内分泌异常例如糖尿病、甲状腺机能减退、性腺功能减退症、血栓性事件、肺动脉高压、高凝性、生命后期发生输血依赖性、无效性红细胞生成、骨髓髓质外造血组织扩增、骨髓外造血包块形成、骨骼畸形、骨质减少、骨质疏松症、骨痛、胆石、腿溃疡和同种异体免疫。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的红细胞形态相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)改善对象的红细胞形态。红细胞形态改善的非限制性决定因素包括对象的异常红细胞数与对象的红细胞总数比例的降低、对象的嗜碱性点彩红细胞数与对象的红细胞总数的比率降低、对象的异形红细胞数与对象的红细胞总数的比率、对象的裂细胞数与对象的红细胞总数的比率降低降低和对象的不规则收缩的红细胞数与对象的红细胞总数的比率降低。在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)导致与对象的异常红细胞数与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的红细胞总数的比率相比，对象的异常红细胞数与对象的红细胞总数的比率降低达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)导致与对象的嗜碱性点彩红细胞数与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的红细胞总数的比率相比，对象的嗜碱性点彩红细胞数与对象的红细胞总数的比率降低达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的异形红细胞数与对象的红细胞总数的比率相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)导致对象的异形红细胞数与对象的红细胞总数的比率降低达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的裂细胞数与对象的红细胞总数的比率相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)导致对象的裂细胞数与对象的红细胞总数的比率降低达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的不规则收缩的红细胞数与对象的红细胞总数的比率相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致对象的不规则收缩的红细胞数与对象的红细胞总数的比率降低达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至多100％。在某些实施方案中，红细胞形态血清铁蛋白水平按照第7.7节描述的测定法测定。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内骨质疏松症的1、2、3、4或更多个症状减轻。在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内骨质减少的1、2、3、4或更多个症状减轻。在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的骨盐密度相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象7.5)导致对象的骨盐密度增加达至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、200％、300％、400％或至少500％或至多5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、200％、300％、400％或至多500％。在某些实施方案中，骨盐密度是全身骨盐密度、总髋部骨盐密度或腰脊柱骨盐密度。在某些实施方案中，骨盐密度按照第7.7节描述的测定法测定Error！Reference source not found.。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，与在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的骨骼畸形相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致对象的骨骼畸形减轻。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ IDNO:25)。

在某些实施方案中，在按照本文提供的方法开始治疗对象之前1、2、3或4周内对象的生命质量相比，按照本文提供的方法治疗对象(例如第7.5节描述的对象)导致对象的生命质量改善。在某些实施方案中，生命质量按照第7.7节描述的测定法测定Error！Reference source not found.。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

7.3.2调节剂量给药

本文还提供治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法(参见第7.3.1节7.3.1)，所述方法包括将对象的血红蛋白浓度分析作为确定待给予对象的后续给药方案的手段。在某些实施方案中，对象的血红蛋白浓度可用来(i)评价用于对象的合适给药，其中对象是待用或正用ActRII信号转导抑制剂(例如激活素配体陷阱)治疗的候选者；(ii)评价在治疗期间是否调节ActRII信号转导抑制剂的剂量；和/或(iii)评价ActRII信号转导抑制剂的合适的维持剂量。根据对象的血红蛋白浓度，可开始、增加、降低、延迟或终止用ActRII信号转导抑制剂的给药。参见例如表1和表2。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

表1.后续给药方案：剂量延期、剂量减少和剂量停止

表2.起始剂量水平与剂量减少和递增

在某些实施方案中，治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法(参见第7.3.1节7.3.1)进一步包括(a)进行对象血红蛋白浓度的第一次测量；(b)在第一段时间之后进行对象血红蛋白浓度的第二次测量；和(c)在第二段时间之后，终止给予初始剂量并给予对象ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中后续剂量在对象的上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予。在某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象的血红蛋白浓度的第三次测量。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，第一次测量和/或第二次测量按第7.7节中所述进行。在某些实施方案中，血红蛋白浓度的第一次测量在给予对象ActRII信号转导抑制剂的初始剂量之前进行。在某些实施方案中，血红蛋白浓度的第一次测量紧接在将ActRII信号转导抑制剂的初始剂量给予对象之后或在之后至多1天、2天、3天、4天、5天、6天或1周内。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，血红蛋白浓度的第二次测量在将ActRII信号转导抑制剂的初始剂量给予对象后约3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月进行。

在某些实施方案中，第二段时间在当进行第二次测量时的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周内。

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂的后续剂量为约0.3mg/kg、约0.45mg/kg、约0.6mg/kg、约1.0mg/kg或约1.25mg/kg。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂的后续剂量滴定直到约1.25mg/kg的最大后续剂量。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，所述方法进一步包括进行对象的血红蛋白浓度的第三次测量。

在一个具体的实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；(b)血红蛋白浓度的第二次测量大于血红蛋白浓度的第一次测量小于或等于1.5g/dL；和(c)后续剂量等于初始剂量。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在另一个具体的实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；(b)血红蛋白浓度的第二次测量大于血红蛋白浓度的第一次测量大于1.5g/dL；和(c)后续剂量为小于初始剂量的约25％。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在又一个具体的实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量(i)大于12.5g/dL且小于或等于14g/dL；和(ii)大于血红蛋白浓度的第一次测量小于或等于1.5g/dL；(b)后续剂量等于初始剂量；和(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量小于或等于12.5g/dL。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在又一个具体的实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量(i)大于12.5g/dL且小于或等于14g/dL，和(ii)大于血红蛋白浓度的第一次测量大于1.5g/dL；(b)后续剂量为小于初始剂量的约25％；和(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量测定为(i)小于或等于12.5g/dL，和(ii)血红蛋白浓度的第一次测量和血红蛋白浓度的第三次测量之间的变化小于或等于1.5g/dL。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在又一个具体的实施方案中，(a)血红蛋白浓度的第二次测量大于14g/dL；(b)后续剂量为小于初始剂量的约25％；和(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量小于12.5g/dL。在某些实施方案中，所述方法进一步包括测定血红蛋白浓度的第三次测量。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，初始剂量按第7.4节所述给予。在某些实施方案中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天一次将初始剂量给予对象。在某些实施方案中，将初始剂量通过皮下注射给予对象。在某些实施方案中，将初始剂量在对象上臂、腹部或大腿中给予对象。在某些实施方案中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天一次将初始剂量在对象上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予对象。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，初始剂量按第7.4节所述给予。在某些实施方案中，每21天一次将初始剂量给予对象。在某些实施方案中，将初始剂量通过皮下注射给予对象。在某些实施方案中，将初始剂量在对象上臂、腹部或大腿中给予对象。在某些实施方案中，每21天一次将初始剂量在对象上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予对象。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，初始剂量按第7.4节所述给予7.4。在某些实施方案中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天一次将初始剂量给予对象。在某些实施方案中，将初始剂量通过皮下注射给予对象。在某些实施方案中，将初始剂量在对象上臂、腹部或大腿中给予对象。在某些实施方案中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天一次将初始剂量在对象上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予对象。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，后续剂量按第7.4节所述给予。在某些实施方案中，每21天一次将后续剂量给予对象。在某些实施方案中，将后续剂量通过皮下注射给予对象。在某些实施方案中，将后续剂量在对象的上臂、腹部或大腿中给予对象。在某些实施方案中，每21天一次在对象的上臂、腹部或大腿中通过皮下注射将后续剂量给予对象。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂7.6.2。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些实施方案中，后续剂量按第7.4节所述给予7.4。在某些实施方案中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天一次将后续剂量给予对象。在某些实施方案中，将后续剂量通过皮下注射给予对象。在某些实施方案中，将后续剂量在对象的上臂、腹部或大腿中给予对象。在某些实施方案中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天一次在对象上臂、腹部或大腿中通过皮下注射将后续剂量给予对象。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRIIB信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。

在某些其它实施方案中，对象是第7.5节描述的对象。在某些实施方案中，对象患有β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象患有输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象患有重度β-地中海贫血。在某些实施方案中，输血依赖性β-地中海贫血是重度β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象患有非输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象患有中度β-地中海贫血。在某些实施方案中，非输血依赖性β-地中海贫血是中度β-地中海贫血。

在某些实施方案中，血红蛋白浓度(即第一血红蛋白浓度、第二血红蛋白浓度和第三血红蛋白浓度)按第7.7节所述测定。

在某些实施方案中，本文提供的方法按第7.8节所述与第二药物活性剂或疗法组合使用。

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂如第7.6节中所述7.6。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.2节中描述的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.1节中描述的ActRIIA信号转导抑制剂7.6.1。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc例如ActRIIA-hFc(例如SEQ IDNO:7)。

7.4给药方案

在某些实施方案中，按照本文提供的方法(参见第7.3.1和7.3.2节)给予的ActRII信号转导抑制剂的剂量为约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1.0mg/kg、约1.1mg/kg或约1.2mg/kg。在某些实施方案中，按照本文提供的方法(参见第7.3.1和7.3.2节)给予的ActRII信号转导抑制剂的剂量为约0.8mg/kg。在某些实施方案中，ActRII抑制剂是第7.6.2节列出的ActRIIB信号转导的抑制剂。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB-Fc例如ActRIIB-hFc(例如SEQ ID NO:25)。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.6.1节列出的ActRIIA信号转导的抑制剂。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA-Fc例如ActRIIA-hFc(例如SEQ ID NO:7)。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导抑制剂和ActRIIB信号转导抑制剂的组合。

在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂皮下给予对象。在某些实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂在对象的上臂、腹部或大腿皮下给予对象。在某些实施方案中，每21天将ActRII信号转导抑制剂给予对象。在某些实施方案中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天将ActRII信号转导抑制剂给予对象。在某些实施方案中，每21天将ActRII信号转导抑制剂在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予对象。在某些实施方案中，每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天将ActRII信号转导抑制剂在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予对象。

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是第7.9节中描述的组合物7.9。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是在注射用水复溶的无菌无防腐剂的冻干粉。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂的单剂量在体积大于1mL的注射用水中复溶。在这类实施方案中，通过等体积复溶ActRII信号转导抑制剂的两次注射将ActRII信号转导抑制剂的单剂量给予对象。在某些实施方案中，将两次注射在不同部位给予对象，例如一次注射在右腿，一次注射在左腿。

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂的剂量是初始剂量。在某些实施方案中，初始剂量为约0.8mg/kg。

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂的剂量是后续剂量。在某些实施方案中，后续剂量大于初始剂量。在某些实施方案中，后续剂量小于初始剂量。在某些实施方案中，后续剂量为约0.3mg/kg、约0.45mg/kg、约0.6mg/kg、约1.0mg/kg或约1.25mg/kg。在某些实施方案中，后续剂量为约0.3mg/kg、约0.45mg/kg、约0.6mg/kg、约1.0mg/kg或约1.25mg/kg。在某些实施方案中，后续剂量为约0.3mg/kg。在某些实施方案中，后续剂量为约0.45mg/kg。在某些实施方案中，后续剂量为约0.6mg/kg。在某些实施方案中，后续剂量为约1.0mg/kg。在某些实施方案中，后续剂量为约1.25mg/kg。在某些实施方案中，后续剂量大于初始剂量约2.5mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg，或大于初始剂量约35mg,或约0.05mg/kg、约0.1mg/kg、约0.15mg/kg、约0.25mg/kg、约0.3mg/kg、约0.35mg/kg、约0.4mg/kg或约0.5mg/kg。

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂的后续剂量以足以达到约0.2微克/kg或更大的血清浓度的间隔和量给予，并且需要约1微克/kg或2微克/kg或更大的血清水平以实现对骨密度和强度的显著作用。可设计后续给药方案以达到介于0.2和15微克/kg之间和任选介于1和5微克/kg之间的血清浓度。在人中，0.2微克/kg的血清水平可用约0.1mg/kg或更大的单一后续剂量达到，1微克/kg的血清水平可用约0.3mg/kg或更大的单一后续剂量达到。所观察到的分子的血清半寿期介于约20和30天之间，明显大于大多数的Fc融合蛋白，因此可在例如每周一次或两周一次基础上通过用约0.2-0.4mg/kg给药，实现持续有效的血清水平，或可采用较高的剂量与给药之间较长的间隔。例如，可在一月一次或两月一次的基础上使用约1-3mg/kg的后续剂量，且仅需要每3、4、5、6、9、12或更多个月一次给药，对骨的作用将充分持久。ActRII信号转导抑制剂的血清水平可通过技术人员已知的任何方法测量。例如，采用例如ELISA，可使用针对ActRII信号转导抑制剂的抗体测定ActRII信号转导抑制剂的血清水平。

在某些实施方案中，后续剂量比初始剂量更频繁地给予。在某些实施方案中，后续剂量比初始剂量较不频繁地给予。在某些实施方案中，后续剂量以与初始剂量相同的频率给予。在某些实施方案中，后续剂量每14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天给予。在某些实施方案中，后续剂量每21天给予。在某些实施方案中，后续剂量连续和/或无限期地给予。

当与本文提供的剂量(例如ActRII信号转导抑制剂的剂量或第二活性剂的剂量)联用时，措词“约”是指所引用数值的1、5或10％以内的任何数值。

7.5患者群

按照本文所述方法治疗的对象可以是任何哺乳动物例如啮齿动物和灵长类动物，在一个优选的实施方案中为人。在某些实施方案中，本文所述方法可用于治疗对象的β-地中海贫血例如输血依赖性β-地中海贫血、非输血依赖性β-地中海贫血、重度β-地中海贫血和中度β-地中海贫血，以减轻患有β-地中海贫血的对象的输血负担，或监测所述治疗，和/或在任何哺乳动物例如啮齿动物或灵长类动物中，在一个优选的实施方案中在人类对象中，选择待按照本文提供的方法治疗的对象。

在某些实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象可为任何年龄。在某些实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象小于18岁。在一个具体的实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象小于13岁。在另一个具体的实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象小于12岁、小于11岁、小于10岁、小于9岁、小于8岁、小于7岁、小于6岁或小于5岁。在另一个具体的实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象为1-3岁、3-5岁、5-7岁、7-9岁、9-11岁、11-13岁、13-15岁、15-20岁、20-25岁、25-30岁或大于30岁。在另一个具体的实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象为30-35岁、35-40岁、40-45岁、45-50岁、50-55岁、55-60岁或大于60岁。在另一个具体的实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象为60-65岁、65-70岁、70-75岁、75-80岁或大于80岁。

在某些实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象(参见第7.3节)患有β-地中海贫血。在某些实施方案中，β-地中海贫血是输血依赖性β-地中海贫血。输血依赖性β-地中海贫血亦称为“库利氏贫血(Cooley’s anemia)”。在某些实施方案中，β-地中海贫血是重度β-地中海贫血。在某些实施方案中，输血依赖性β-地中海贫血是重度β-地中海贫血。在某些实施方案中，β-地中海贫血是非输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，β-地中海贫血是中度β-地中海贫血。在某些实施方案中，输血依赖性β-地中海贫血是中度非β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象患有HbE/β地中海贫血。在某些实施方案中，对象(i)患有重度β-地中海贫血；(ii)患有重度HbE/β-地中海贫血；和(iii)是输血依赖性的。在某些实施方案中，对象(i)患有中度β-地中海贫血；(ii)患有轻度/中度HbE/β-地中海贫血；和(iii)是非输血依赖性的。

在某些实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象(参见第7.3节)患有输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象被诊断患有输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象被诊断患有β-地中海贫血和血红蛋白E。在某些实施方案中，诊断得到遗传分析证实。在某些实施方案中，输血依赖性β-地中海贫血是重度β-地中海贫血。在某些实施方案中，输血依赖性β-地中海贫血是重度β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象包含含有突变型β珠蛋白等位基因的纯合性或复合杂合性的表型。在某些实施方案中，纯合性包含β⁰/β⁰，其中β⁰是指与β珠蛋白链合成缺乏有关的等位基因。在某些实施方案中，纯合性包含β⁺/β⁺，其中β⁺是指与β珠蛋白链合成减少有关的等位基因。在某些实施方案中，复合杂合性包含β⁰/β⁺，其中β⁰是指与β珠蛋白链合成缺乏有关的等位基因，且其中β⁺是指与β珠蛋白链合成减少有关的等位基因。在某些实施方案中，复合杂合性包含β⁰/HbE，其中β⁰是指与β珠蛋白链合成缺乏有关的等位基因，且其中HbE是指血红蛋白E。在某些实施方案中，复合杂合性包含β⁺/HbE，其中β⁺是指与β珠蛋白链合成减少有关的等位基因，且其中HbE是指血红蛋白E。在某些实施方案中，对象患有有症状的地中海贫血。在某些实施方案中，对象患有α-珠蛋白基因的共遗传的重复。在某些实施方案中，对象被诊断患有输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，诊断得到遗传分析证实。在某些实施方案中，对象是人类婴儿对象。在某些实施方案中，对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症。

在某些实施方案中，对象需要定期的终身红细胞输入。在某些实施方案中，患有输血依赖性β-地中海贫血的对象在24周时间内需要超过5个红细胞单位的输血。在某些实施方案中，患有输血依赖性β-地中海贫血的对象在24周时间内需要超过6个红细胞单位的输血。在某些实施方案中，对象有高输血负担。在某些实施方案中，在按照本文提供的方法治疗前24周内，高输血负担为12或更多个红细胞单位。在某些实施方案中，对象有低输血负担。在某些实施方案中，在按照本文提供的方法治疗前24周内，低输血负担为7-12个红细胞单位。

在某些实施方案中，对象患有一种或多种输血依赖性β-地中海贫血临床并发症。输血依赖性β-地中海贫血临床并发症的非限制性实例包括生长阻滞、苍白、黄疸、肌肉系统差、膝外翻、肝脾大、腿溃疡、因骨髓外造血发生包块和产生于骨髓扩增的骨骼变化。在某些实施方案中，对象患有长期红细胞输入的一种或多种并发症。长期红细胞输入的并发症的非限制性实例包括输血相关感染例如乙型肝炎病毒感染、丙型肝炎病毒感染和人免疫缺陷病毒感染、同种异体免疫和因铁过载所致器官损害，例如肝损害、心脏损害和内分泌腺损害。

在某些实施方案中，按照本文所述方法治疗的对象(参见第7.3节)患有非输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，患有非输血依赖性β-地中海贫血的对象在24周时间内需要0-5个红细胞单位的输血。在某些实施方案中，患有非输血依赖性β-地中海贫血的对象在24周时间内需要0-6个红细胞单位的输血。在某些实施方案中，对象被诊断患有β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象被诊断患有β-地中海贫血和血红蛋白E。在某些实施方案中，β-地中海贫血得到遗传分析证实。在某些实施方案中，非输血依赖性β-地中海贫血是中度β-地中海贫血。在某些实施方案中，非输血依赖性β地中海贫血是轻度-中度血红蛋白E/β-地中海贫血。在某些实施方案中，非输血依赖性β-地中海贫血不需要定期红细胞输入。在某些实施方案中，对象很少需要红细胞输入。在某些实施方案中，非输血依赖性β-地中海贫血在生命后期需要定期红细胞输入。在某些实施方案中，对象在按照本文提供的方法治疗前的24周时间内曾接受0-5个红细胞单位。在某些实施方案中，对象在按照本文提供的方法治疗前的24周时间内曾接受0-6个红细胞单位。在某些实施方案中，对象具有小于10.0g/dL的平均基线血红蛋白水平。

在某些实施方案中，β-地中海贫血是非输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，β-地中海贫血是中度β-地中海贫血。在某些实施方案中，输血依赖性β-地中海贫血是中度非β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象包含含有复合杂合性的表型。在某些实施方案中，复合杂合性包含β⁰等位基因，其中β⁰是指与β珠蛋白链合成缺乏有关的等位基因。在某些实施方案中，复合杂合性包含β⁺等位基因，其中β⁺是指与β珠蛋白链合成减少有关的等位基因。在某些实施方案中，复合杂合性包含β⁰/β⁺，其中β⁰是指与β珠蛋白链合成缺乏有关的等位基因，且其中β⁺是指与β珠蛋白链合成减少有关的等位基因。在某些实施方案中，复合杂合性包含一个或多个血红蛋白变体。在某些实施方案中，血红蛋白变体是血红蛋白E。在某些实施方案中，对象(i)包含含有2个严重β珠蛋白链突变的共遗传的表型，和(ii)患有α-地中海贫血。在某些实施方案中，对象(i)包含含有2个严重β珠蛋白链突变的共遗传的表型，和(ii)患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症。在某些实施方案中，对象患有有症状的地中海贫血。在某些实施方案中，对象有α-珠蛋白基因的共遗传的重复。在某些实施方案中，对象被诊断患有β-地中海贫血。在某些实施方案中，诊断得到遗传分析证实。

在某些实施方案中，对象显示一种或多种非输血依赖性β-地中海贫血临床并发症。非输血依赖性β-地中海贫血临床并发症的非限制性实例包括内分泌异常例如糖尿病、甲状腺机能减退、性腺功能减退症、血栓性事件、肺动脉高压、高凝性、生命后期发生输血依赖性、无效性红细胞生成、骨髓髓质外造血组织扩增、骨髓外造血包块形成、骨骼畸形、骨质减少、骨质疏松症、骨痛、胆石和腿溃疡。在某些实施方案中，对象显示同种异体免疫。

在某些实施方案中，对象显示β-地中海贫血症状的轻微症状。在某些实施方案中，对象具有几乎正常的生长。

在某些实施方案中，非输血依赖性β-地中海贫血对象显示严重症状。严重症状的非限制性实例包括生长阻滞、发育迟缓和骨骼畸形。

在某些实施方案中，对象患有脾大。在某些实施方案中，脾大发生在对象生命中的前6-12个月中。

在某些实施方案中，对象在对象生命的前10年内有生长受损。

在某些实施方案中，对象显示小红细胞性、低色指数性贫血。在某些实施方案中，与参考人群(例如第7.7节描述的参考人群)中的血红蛋白A2水平相比，在对象按照本文提供的方法治疗前对象的血红蛋白A2水平升高。在某些实施方案中，与参考人群(例如第7.7节描述的参考人群)中的胎儿血红蛋白水平相比，在对象按照本文提供的方法治疗前对象的胎儿血红蛋白水平升高。

在某些实施方案中，对象不表达血红蛋白S。

在某些实施方案中，对象不表达血红蛋白S。在某些实施方案中，对象在按照本文提供的方法治疗前12周内不接受红细胞输入，其中对象患有非输血依赖性β-地中海贫血。在某些实施方案中，对象未患活动性丙型肝炎感染。在某些实施方案中，对象未患活动性乙型肝炎感染。在某些实施方案中，对象对人免疫缺陷病毒不是阳性。在某些实施方案中，对象未患胰岛素依赖性糖尿病。在某些实施方案中，在按照本文提供的方法治疗前3个月内未给予对象红细胞生成刺激剂。在某些实施方案中，在按照本文提供的方法治疗前168天内对象未进行铁螯合疗法。在某些实施方案中，在按照本文提供的方法治疗前168天内对象未进行羟基脲治疗。在某些实施方案中，在按照本文提供的方法治疗前168天内未给予对象双膦酸盐。在某些实施方案中，对象未患不受控制的高血压。按照NCI CTCAE 4.0版，不受控制的高血压是指>1级。在某些实施方案中，对象未患ALT大于正常上限3倍的肝病。在某些实施方案中，对象未患有通过肝组织活检确定的肝硬化/纤维变性的组织病理学证据的肝病。在某些实施方案中，对象未患心脏病。可按照纽约心脏协会(New York Heart Association)将心脏病或心力衰竭归类为3级或更高级。在某些实施方案中，对象未患需要治疗的心律失常。在某些实施方案中，对象未患肺病。肺病的非限制性实例包括肺纤维变性和肺动脉高压。在某些实施方案中，通过Cockroff-Gault方法测定，对象的肌酸酐清除率不小于60mL/分钟。在某些实施方案中，对象未患叶酸缺陷症。在某些实施方案中，对象没有3级或更高级的蛋白尿。在某些实施方案中，对象未患肾上腺功能不全。在某些实施方案中，对象在按照本文提供的方法治疗前30天内未进行重大手术，其中重大手术是脾切除术的例外。在某些实施方案中，对象未患对重组蛋白有严重的变应性或过敏性反应或超敏反应史。在某些实施方案中，对象未进行长期抗凝血疗法。抗凝血疗法的非限制性实例包括肝素和华法林。在某些实施方案中，对象在按照本文提供的方法治疗前28天内未进行用细胞毒性剂、全身皮质甾类、免疫抑制剂或抗凝血疗法的治疗。

在某些实施方案中，对象正进行其它治疗介入。其它治疗介入的非限制性实例包括脾切除术、输血疗法、铁螯合疗法和胎儿血红蛋白诱导剂。在某些实施方案中，对象需要铁螯合疗法。有关组合疗法的描述参见第7.8节。

在某些实施方案中，对象是第8节描述的对象。

如本文所用，措词“患者”和“对象”可互换使用。

7.6 ACTRII信号转导的抑制剂

该节中描述的且本领域已知的ActRII信号转导抑制剂可用于本文提供的方法。在某些实施方案中，该节中描述的ActRII信号转导抑制剂可用于本文提供的方法(参见第7.3节)。

本文所包括的ACTRII信号转导的抑制剂受体包括ActRIIA信号转导抑制剂和ActRIIB信号转导抑制剂(见下)。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂对ActRIIA信号转导有特异性。在其它实施方案中，ActRII信号转导抑制剂对ActRIIB信号转导有特异性。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂优先抑制ActRIIA信号转导。在其它实施方案中，ActRII信号转导抑制剂优先抑制ActRIIB信号转导。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂抑制ActRIIA信号转导和ActRIIB信号转导两者。

在某些实施方案中，ACTRII信号转导的抑制剂可以是包含ActRII的激活素结合结构域的多肽。虽不受理论束缚，但这类激活素结合结构域包含多肽多价螯合剂激活素，因此阻止激活素信号转导。包含这些激活素结合结构域的多肽可包含ActRII的胞外域的全部或一部分(即ActRIIA的胞外域的全部或一部分或ActRIIB的胞外域的全部或一部分)。在具体的实施方案中，ActRII的胞外域是可溶性的。

在某些实施方案中，包含多肽的激活素结合结构域与抗体的Fc部分连接(即产生含有包含ActRII受体的多肽的激活素结合结构域和抗体的Fc部分的缀合物)。虽不受理论束缚，但抗体部分赋予缀合物高的稳定性。在某些实施方案中，激活素结合结构域通过接头(例如肽接头)与抗体的Fc部分连接。

用于本文所述组合物和方法的ACTRII信号转导抑制剂包含直接或间接、胞外或胞内抑制ActRIIA信号转导和/或ActRIIB信号转导的分子。在一些实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIA信号转导和/或ActRIIB信号转导的抑制剂通过与受体本身的相互作用抑制ActRIIA信号转导和/或ActRIIB信号转导。在其它实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIA信号转导和/或ActRIIB信号转导的抑制剂通过与ActRIIA和/或ActRIIB配体(例如激活素)的相互作用抑制ActRIIA信号转导和/或ActRIIB信号转导。

7.6.1 ACTRIIA信号转导的抑制剂

如本文使用，术语“ActRIIA”是指来自任何物种的激活素IIA型受体(ActRIIA)蛋白的家族，以及通过诱变或其他修饰衍生自这些ActRIIA蛋白的变体。本文提及ActRIIA要理解为是提及目前鉴定的形式的任一种。ActRIIA家族的成员一般是跨膜蛋白质，由具有富半胱氨酸区的配体结合胞外域、跨膜结构域以及具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质域组成。

用于本文所述组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂包括而不限于结合激活素的可溶性ActRIIA多肽；结合激活素(特别是激活素A或B亚基，亦称为β_A或β_B)并破坏ActRIIA结合的抗体；结合ActRIIA并破坏激活素结合的抗体；针对激活素或ActRIIA结合选择的非抗体蛋白质(参见，例如WO/2002/088171、WO/2006/055689、WO/2002/032925、WO/2005/037989、US 2003/0133939和US 2005/0238646，其每一个通过引用以其整体并入本文，作为这类蛋白质和设计与选择这类蛋白质的实例)；针对激活素或ActRIIA结合选择的随机肽，它们可与Fc结构域缀合。

在某些实施方案中，具有激活素或ActRIIA结合活性的两种或更多种不同的蛋白质(或其他部分)，特别是分别阻断I型(例如可溶性I型激活素受体)和II型(例如可溶性II型激活素受体)结合位点的激活素结合物可以连接在一起，产生抑制ActRIIA信号转导的双功能或多功能结合分子，因此可用于本文所述组合物和方法。在某些实施方案中，抑制ActRIIA信号转导的激活素-ActRIIA信号转导轴拮抗剂包括用于本文所述组合物和方法中的核酸适体、小分子和其他作用剂。

7.6.1.1包含ActRIIA多肽的ActRIIA信号转导抑制剂

术语“ActRIIA多肽”包括这类多肽，其包含ActRIIA家族成员的任何天然存在的多肽以及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)。例如，ActRIIA多肽包括这类多肽，其衍生自与ActRIIA多肽的序列有至少约80％同一性，任选至少85％、90％、95％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的任何已知ActRIIA的序列。例如，ActRIIA多肽可以结合并抑制ActRIIA蛋白和/或激活素的功能。可以针对其促进骨骼生长和骨矿化的能力选择ActRIIB多肽。ActRIIA多肽的实例包括人ActRIIA前体多肽(SEQ IDNO:1)和可溶性人ActRIIA多肽(例如SEQ ID NO:2、3、7和12)。对于其氨基酸序列以SEQ IDNO:1中描述的ActRIIA前体多肽，人ActRIIA前体多肽的信号肽位于氨基酸1到20位；胞外域位于氨基酸21到135位，人ActRIIA前体多肽(SEQ ID NO:1)的N-联糖基化位点位于SEQ IDNO:1的氨基酸43和56位。编码SEQ ID NO:1的人ActRIIB前体多肽的核酸序列被公开为SEQID NO:4(Genbank条目NM_001616的核苷酸164-1705)。编码SEQ ID NO:2的可溶性人ActRIIA多肽的核酸序列以SEQ ID NO:5公开。有关序列的描述参见表3。

在具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIA多肽是可溶性ActRIIA多肽。ActRIIA蛋白的胞外域可以结合激活素，且一般是可溶性的，因此可称为可溶性激活素结合ActRIIA多肽。因此，如本文所用，术语“可溶性ActRIIA多肽”一般是指包含ActRIIA蛋白的胞外域的多肽，包括ActRIIA蛋白的任何天然存在的胞外域以及其任何变体(包括突变体、片段、肽模拟物形式)。可溶性ActRIIA多肽可以结合激活素；然而，野生型ActRIIA蛋白在结合激活素与GDF8/11方面不显示显著的选择性。可通过使天然的或改变的ActRIIA蛋白与第二激活素选择结合剂偶联，对其赋予对激活素的额外特异性。可溶性激活素结合ActRIIA多肽的实例包括SEQ ID NO:2、3、7、12和13中例举的可溶性多肽。可溶性激活素结合ActRIIA多肽的其它实例除了ActRIIA蛋白的胞外域之外还包括信号序列，例如蜜蜂蜂毒前导序列(SEQ ID NO:8)、组织纤溶酶原激活物(TPA)前导区(SEQ ID NO:9)或天然ActRIIA前导区(SEQ ID NO:10)。SEQ ID NO:13中例举的ActRIIA-hFc多肽使用TPA前导区。

在某些实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIA信号转导的抑制剂包含缀合物/融合蛋白，其包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIA的激活素结合结构域。在某些实施方案中，激活素结合结构域通过接头(例如肽接头)与抗体的Fc部分连接。任选Fc结构域在残基例如Asp-265、赖氨酸322和Asn-434处具有一个或更多个突变。在某些情况下，具有这些突变的一个或多个突变(例如Asp-265突变)的Fc结构域相对于野生型Fc结构域与Fcγ受体结合的能力降低。在其它情况下，具有这些突变的一个或多个突变(例如Asn-434突变)的突变型Fc结构域相对于野生型Fc结构域与MHC I类相关Fc-受体(FcRN)结合的能力提高。SEQ ID NO:6、7、12和13中列出了包含与Fc结构域融合的ActRIIA的可溶性胞外域的示例性融合蛋白。

在一个具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIA信号转导抑制剂包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIA的胞外域或其部分，其中所述ActRIIA信号转导抑制剂包含与选自SEQ ID NO:6、7、12和13的氨基酸序列有至少75％同一性的氨基酸序列。在另一个具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIA信号转导抑制剂包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIA的胞外域或其部分，其中所述ActRIIA信号转导抑制剂包含与选自SEQ ID NO:6、7、12和13的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

在某些实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIA信号转导的抑制剂包含ActRIIA的胞外域的截短形式。所述截短可以是在ActRIIA多肽的羧基端和/或氨基端。在某些实施方案中，相对于成熟的ActRIIB多肽胞外域，所述截短的长可为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸。在某些实施方案中，所述截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个成熟ActRIIA多肽胞外域的N端氨基酸。在某些实施方案中，所述截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个成熟ActRIIA多肽胞外域的C端氨基酸。例如，ActRIIA的截短形式包括具有氨基酸20-119；20-128；20-129；20-130；20-131；20-132；20-133；20-134；20-131；21-131；22-131；23-131；24-131和25-131的多肽，其中所述氨基酸位置参考SEQ ID NO:1中的氨基酸位置。

在某些实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIA信号转导的抑制剂包含具有一个或更多个氨基酸取代的ActRIIA的胞外域。在某些实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIA信号转导的抑制剂包含还带有氨基酸取代的ActRIIA胞外域的截短形式。

在一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂是人ActRIIA受体的胞外域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂是人ActRIIA受体的截短胞外域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIA信号转导抑制剂是人ActRIIA受体的截短胞外域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中所述人ActRIIA受体的截短胞外域具有一个或多个氨基酸取代。

例如，通过筛选重组产生于编码ActRIIA多肽的核酸的相应片段的多肽，可以获得ActRIIA多肽的功能活性片段。此外，片段可以使用本领域已知的技术，例如常规的Merrifield固相f-Moc或t-Boc化学法来化学合成。可产生(重组地或通过化学合成)片段并对其进行测试，以鉴定可以用作ActRIIA蛋白的或激活素介导的信号转导的拮抗剂(抑制剂)的那些肽基片段。

此外，例如，通过筛选重组产生于编码ActRIIA多肽的相应诱变核酸的修饰多肽的文库，可以获得ActRIIA多肽的功能活性变体。可产生变体并对进行测试，以鉴定可以用作ActRIIA蛋白的或激活素介导的信号转导的拮抗剂(抑制剂)的那些。在某些实施方案中，ActRIIA多肽的功能变体包含与选自SEQ ID NO:2或3的氨基酸序列有至少75％同一性的氨基酸序列。在某些情况下，所述功能变体具有与选自SEQ ID NO:2或3的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

例如，可通过修饰ActRIIA多肽的结构产生功能变体用于诸如增强治疗效能或稳定性(例如离体保存限期或对体内蛋白水解降解的抗性)等目的。当经选择以保持激活素结合时，这种修饰的ActRIIA多肽可以被认为是天然存在的ActRIIA多肽的功能等同物。例如，通过氨基酸取代、缺失或添加，也可产生修饰的ActRIIA多肽。例如，有理由认为亮氨酸用异亮氨酸或缬氨酸、天冬氨酸用谷氨酸、苏氨酸用丝氨酸的单独置换，或氨基酸用结构上相关的氨基酸的类似置换(例如保守突变)将不会对所得分子的生物学活性有重大的影响。保守置换是在其侧链相关的氨基酸家族内发生的置换。通过评价变体ActRIIA多肽在细胞中以类似于野生型ActRIIA多肽的方式产生反应的能力，可以容易地确定ActRIIA多肽的氨基酸序列改变是否产生功能同系物。

在某些实施方案中，用于本文提供的组合物和方法中的ActRIIA信号转导抑制剂可包含具有可改变多肽的糖基化的一个或多个特定突变的ActRIIA多肽。这类突变可以引入或除去一个或多个糖基化位点，例如，O-联或N-联糖基化位点。天冬酰胺连接的糖基化识别位点一般包含三肽序列，天冬酰胺-X-苏氨酸(或天冬酰胺-X-丝氨酸)(其中“X”是任意氨基酸)，其被适当的细胞糖基化酶特异性地识别。也可以通过向野生型ActRIIA多肽的序列中添加或取代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基(用于O-联糖基化位点)来进行改变。在糖基化识别位点的第一或第三个氨基酸位置的一个或两个处的多种氨基酸取代或缺失(和/或在第二位置上的氨基酸缺失)引起所述修饰的三肽序列处的非糖基化。增加ActRIIA多肽上糖部分的数量的另一种方式是通过糖苷与ActRIIA多肽的化学或酶促偶联。根据所使用的偶联方式，糖可以连接至(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，例如半胱氨酸的游离巯基；(d)游离羟基，例如丝氨酸、苏氨酸或羟脯氨酸的游离羟基；(e)芳族残基，例如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基；或(f)谷氨酰胺的酰胺基团。这些方法描述于1987年9月11日公开的WO87/05330以及在Aplin and Wriston(1981)CRC Crit.Rev.Biochem.,pp.259-306中，通过引用并入本文。除去ActRIIA多肽上存在的一个或多个糖部分可以化学法或酶法实现。化学的脱糖基化可涉及例如将ActRIIA多肽暴露于化合物三氟甲磺酸或等效化合物中。这种处理引起除了连接糖(N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺)之外大部分或所有的糖裂解，同时保留氨基酸序列完整。Hakimuddin et al.(1987)Arch.Biochem.Biophys.2 59:52和Edge et al.(1981)Anal.Biochem.118:131进一步描述了化学脱糖基化。ActRIIA多肽上糖部分的酶促裂解可以通过使用多种内切和外切糖苷酶来实现，如Thotakura et al.(1987)Meth.Enzymol.138:350所描述的。适当时，可根据所用表达系统的类型，调整ActRIIA多肽的序列，因为哺乳动物、酵母、昆虫和植物细胞都可引入不同的糖基化模式，其可能受肽的氨基酸序列影响。一般而言，用于人类的ActRIIA蛋白可以在提供适当糖基化的哺乳动物细胞系中表达，例如HEK293或CHO细胞系，但预期其他表达系统，例如其他哺乳动物表达细胞系、具有工程改造的糖基化酶的酵母细胞系以及昆虫细胞也是有用的。

本文进一步提供产生突变体，特别是ActRIIA多肽的组合突变体集合以及截短突变体的方法；组合突变体库对于鉴定功能变体序列特别有用。筛选这种组合文库的目的可以是产生例如可以用作激动剂或拮抗剂或备选一起具有新的活性的ActRIIA多肽变体。下文提供多种筛选测定法，这类测定法可用于评价变体。例如，可针对结合ActRIIA配体、防止ActRIIA配体与ActRIIA多肽结合或干扰由ActRIIA配体引起的信号转导的能力，来筛选ActRIIA多肽变体。

可以产生相对于天然存在的ActRIIA多肽具有选择的或通常提高的效能的组合衍生的变体。同样，诱变可产生细胞内半寿期与相应的野生型ActRIIA多肽显著不同的变体。例如，改变的蛋白质可以引起对导致天然ActRIIA多肽破坏或否则灭活的蛋白水解降解或其他细胞过程更稳定或更不稳定。这类变体和编码它们的基因可用于通过调节ActRIIA多肽的半寿期以改变ActRIIA多肽水平。例如，短的半寿期可以产生更短暂的生物作用，可允许更严地控制对象内的重组ActRIIA多肽水平。在Fc融合蛋白中，突变可以在接头(如果有的话)和/或Fc部分进行，以改变蛋白质的半寿期。

通过编码多肽文库的简并基因文库的方式可产生组合文库，所述多肽文库各自包括可能的ActRIIA多肽序列的至少一部分。例如，合成的寡核苷酸的混合物可用酶法连接到基因序列中，使得可能的ActRIIA多肽核苷酸序列的简并集合可以作为单独的多肽表达，或备选地作为更大的融合蛋白的集合(例如用于噬菌体展示)。

有许多方法可以从简并寡核苷酸序列中产生可能的同源物文库。可以在自动DNA合成仪中进行简并基因序列的化学合成，合成的基因然后可以连接到合适的载体中用于表达。简并寡核苷酸的合成是本领域众所周知的(参见例如Narang,S A(1983)Tetrahedron39:3；Itakura et al.,(1981)Recombinant DNA,Proc.3rd ClevelandSympos.Macromolecules,ed.AG Walton,Amsterdam:Elsevier pp 273-289；Itakura etal.,(1984)Annu.Rev.Biochem.53:323；Itakura et al.,(1984)Science 198:1056；Ikeet al.,(1983)Nucleic Acid Res.11:477)。这类技术已用于其它蛋白质的定向进化中(参见例如Scott et al.,(1990)Science 249:386-390；Roberts et al.,(1992)PNAS USA89:2429-2433；Devlin et al.,(1990)Science 249:404-406；Cwirla et al.,(1990)PNASUSA 87:6378-6382；以及美国专利号5,223,409、5,198,346和5,096,815)。

或者，可利用其它诱变形式来产生组合文库。例如，可采用以下方法，通过筛选来从文库中产生和分离ActRIIA多肽变体：例如，丙氨酸扫描诱变等(Ruf et al.,(1994)Biochemistry 33:1565-1572；Wang et al.,(1994)J.Biol.Chem.269:3095-3099；Balintet al.,(1993)Gene137:109-118；Grodberg et al.,(1993)Eur.J.Biochem.218:597-601；Nagashima et al.,(1993)J.Biol.Chem.268:2888-2892；Lowman et al.,(1991)Biochemistry 30:10832-10838；和Cunningham et al.,(1989)Science244:1081-1085)；通过接头扫描诱变(Gustin et al.,(1993)Virology193:653-660；Brown et al.,(1992)Mol.Cell Biol.12:2644-2652；McKnight et al.,(1982)Science 232:316)；通过饱和诱变(Meyers et al.,(1986)Science 232:613)；通过PCR诱变(Leung et al.,(1989)MethodCell Mol Biol 1:11-19)；或通过随机诱变，包括化学诱变等(Miller et al.,(1992)AShort Course in Bacterial Genetics,CSHL Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；和Greener et al.,(1994)Strategies in Mol Biol 7:32-34)。接头扫描诱变，特别是在组合情况下，是鉴定ActRIIA多肽的截短(生物活性)形式的有吸引力的方法。

用于筛选通过点突变和截短制备的组合文库的基因产物和对此用于筛选cDNA库中具有某种性质的基因产物的各种技术是本领域已知的。这类技术一般将适于通过ActRIIA多肽的组合诱变产生的基因库的快速筛选。用于筛选大型基因文库的最广泛使用的技术一般包括将基因文库克隆到可复制的表达载体中，用所得载体库转化合适的细胞，并在一定条件下表达组合基因，在所述条件中所需活性的检测便于相对容易地分离编码其产物被检出的基因的载体。优选的测定法包括激活素结合测定法和激活素介导的细胞信号转导测定法。

在某些实施方案中，本文所述方法和组合物的抑制剂中使用的ActRIIA多肽可另包含翻译后修饰，除了天然存在于所述ActRIIA多肽中的之外。这类修饰可包括但不限于乙酰化、羧化、糖基化、磷酸化、脂质化和酰化。因此经修饰的ActRIIA多肽可含有非氨基酸元件，例如聚乙二醇、脂质、多糖或单糖和磷酸盐。可通过熟练技术人员已知的任何方法测试这类非氨基酸元件对ActRIIA多肽的功能的作用。当通过裂解ActRIIA多肽的新生形式在细胞中产生ActRIIA多肽时，翻译后的加工对于蛋白质的正确折叠和/或功能可能也是重要的。不同的细胞(例如CHO、HeLa、MDCK、293、W138、NIH-3T3或HEK293)具有用于这类翻译后活性的特定细胞机器和特有机制，并可加以选择以确保ActRIIA多肽的正确修饰和加工。

在某些方面，本文所述方法和组合物的抑制剂中使用的ActRIIA多肽的功能变体或修饰形式包括具有至少一部分ActRIIA多肽和一个或多个融合结构域的融合蛋白。这类融合结构域的众所周知的实例包括但不限于多组氨酸、Glu-Glu、谷胱甘肽S转移酶(GST)、硫氧还蛋白、蛋白A、蛋白G、免疫球蛋白重链恒定区(Fc)、麦芽糖结合蛋白(MBP)或人血清白蛋白。可以选择融合结构域以赋予所需性质。例如，某些融合结构域对于通过亲和层析法分离融合蛋白是特别有用的。对于亲和纯化来说，使用亲和层析法的相关基质，例如谷胱甘肽-、淀粉酶-和镍-或钴-缀合的树脂。许多这类基质可以“试剂盒”形式获得，例如，可与(HIS6)融合配偶体一起使用的Pharmacia GST纯化系统以及QIAexpress.TM.系统(Qiagen)。作为另一个实例，可以选择融合结构域以促进ActRIIA多肽的检测。这类检测结构域的实例包括各种荧光蛋白(例如GFP)以及“表位标签”，其通常是针对其可获得特异性抗体的短肽序列。针对其可容易获得的特异性单克隆抗体的众所周知的表位标签包括FLAG、流感病毒血凝素(HA)和c-myc标签。在某些情况下，融合结构域具有蛋白酶切割位点，例如因子Xa或凝血酶的蛋白酶切割位点，其允许相关蛋白酶部分消化该融合蛋白，因此由此释放重组蛋白。释放的蛋白质然后可以通过随后的层析分离从融合结构域中分离。在某些优选的实施方案中，ActRIIA多肽与体内稳定ActRIIA多肽的结构域(“稳定物”结构域)融合。“稳定”是指延长血清半寿期的任何情况，不论是由于降低破坏，减少肾清除，还是其它药代动力学作用。已知与免疫球蛋白的Fc部分融合赋予多种多样的蛋白质所需的药代动力学性质。同样，与人血清白蛋白的融合可以赋予所需性质。可以选择的其它融合结构域类型包括多聚化(例如二聚化、四聚化)结构域和功能结构域(赋予其他生物学功能，例如按需进一步刺激骨骼生长或肌肉生长)。

要了解融合蛋白的不同元件可以与所需功能一致的任何方式排列。例如，ActRIIA多肽可置于异源结构域的C端，或备选，异源结构域可置于ActRIIA多肽的C端。ActRIIA多肽结构域和异源结构域在融合蛋白中不一定相邻，其它结构域或氨基酸序列可以被包括在任一结构域的C端或N端者或结构域之间。

在某些实施方案中，本文描述的方法和组合物的抑制剂中使用的ActRIIA多肽可含有能够稳定ActRIIA多肽的一个或多个修饰。例如，这类修饰可以延长ActRIIA多肽的体外半寿期、延长ActRIIA多肽的循环半寿期或降低ActRIIA多肽的蛋白水解酶降解。这类稳定化修饰可以包括但不限于融合蛋白(包括例如包含ActRIIA多肽和稳定物结构域的融合蛋白)、糖基化位点的修饰(包括例如向ActRIIA多肽添加糖基化位点)以及糖部分的修饰(包括例如从ActRIIA多肽除去糖部分)。对于融合蛋白来说，ActRIIA多肽与稳定物结构域例如IgG分子(例如Fc结构域)融合。如本文所用，术语“稳定物结构域”不仅是指融合蛋白情况下的融合结构域(例如Fc)，而且还包括非蛋白性修饰例如糖部分，或非蛋白性聚合物，例如聚乙二醇。

在某些实施方案中，分离自或否则基本没有其它蛋白质的ActRIIA多肽的分离的和/或纯化的形式可用于本文描述的方法和组合物。一般可通过从重组核酸表达来产生ActRIIA多肽。

在某些方面，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIA多肽使用分离的和/或重组的核酸产生，所述核酸编码任一种ActRIIA多肽(例如可溶性ActRIIA多肽)，包括本文公开的片段、功能变体和融合蛋白。例如，SEQ ID NO:4编码天然存在的人ActRIIA前体多肽，而SEQ ID NO:5编码ActRIIA的加工的胞外域。这类核酸可以是单链的或是双链的。所述核酸可以是DNA或RNA分子。这些核酸可用于例如制备ActRIIA多肽的方法，或作为直接的治疗剂(例如在基因治疗方法中)。

在某些方面，编码ActRIIA多肽的核酸可包括作为SEQ ID NO:4或5的变体的核酸。变体核苷酸序列包括差异在于一个或多个核苷酸取代、添加或缺失的序列，例如等位基因变体。

在某些实施方案中，编码ActRIIA多肽的分离或重组的核酸序列可与SEQ ID NO:4或5有最少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性。本领域普通技术人员应认识到，与SEQ ID NO:4或5互补的核酸序列以及SEQ ID NO:4或5的变体可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIA多肽。在进一步的实施方案中，这类核酸序列可以是分离的、重组的和/或与异源核苷酸序列产生的，或来自DNA文库。

在其它实施方案中，用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIA多肽的核酸可包括在高严格条件下与SEQ ID NO:4或5中标明的核苷酸序列、SEQ ID NO:4或5的互补序列或其片段杂交的核苷酸序列。本领域普通技术人员应了解，可以改变促进DNA杂交的合适严格条件。例如，可以6.0倍氯化钠/柠檬酸钠(SSC)、约45℃下杂交，接着2.0倍SSC在50℃下洗涤。例如，洗涤步骤中的盐浓度可选自在50℃下约2.0倍SSC的低严格性到在50℃下约0.2倍SSC的高严格性。此外，洗涤步骤中的温度可从在室温约22℃下的低严格条件提高到约65℃的高严格条件。温度和盐浓度都可变化，或者温度或盐浓度可保持不变而另一个变量发生改变。在一个实施方案中，在6倍SSC室温下的低严格条件下杂交，接着2倍SSC室温下洗涤的核酸可用于本文所述方法和组合物。

由于遗传密码的简并性而不同于SEQ ID NO:4或5中所列核酸的分离核酸也可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIA多肽。例如，多个氨基酸由超过一种三联体指定。指定相同氨基酸的密码子或同义密码子(例如CAU和CAC是组氨酸的同义密码子)可产生不影响蛋白质的氨基酸序列的“沉默”突变。然而，预期引起主题蛋白质的氨基酸序列变异的DNA序列多态性可存在于哺乳动物细胞中。本领域技术人员应认识到，编码特定蛋白质的核酸的一个或多个核苷酸(多达核苷酸的约3-5％)中的这些变异由于天然等位基因变异所致可存在于指定物种的个体中。

在某些实施方案中，重组核酸可与表达构建体中的一个或多个调节核苷酸序列有效连接。调节核苷酸序列一般将适于用来表达的宿主细胞。对于多种宿主细胞，许多类型的合适的表达载体和合适的调节序列是本领域已知的。通常，所述一个或多个调节核苷酸序列可包括但不限于启动子序列、前导区或信号序列、核糖体结合位点、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列以及增强子或激活物序列。本文预期本领域已知的组成型或诱导型启动子。启动子可以是天然存在的启动子，或组合超过一种启动子的元件的杂合启动子。表达构建体可以存在于细胞中或附加体(例如质粒)上，或者表达构建体可插入染色体中。在一个优选的实施方案中，表达载体含有选择性标记基因，允许选择转化的宿主细胞。选择标记基因是本领域众所周知的，将随所用的宿主细胞而变化。

在某些方面，可在表达载体中提供用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIA多肽的核酸，所述表达载体包含编码ActRIIA多肽且与至少一个调节序列有效连接的核苷酸序列。调节序列是公知的，被选择以指导ActRIIA多肽的表达。因此，术语调节序列包括启动子、增强子和其它表达控制元件。示例性调节序列描述于Goeddel；GeneExpression Technology:Methods in Enzymology,Academic Press,San Diego,Calif.(1990)。例如，当与之有效连接时控制DNA序列的表达的各种表达控制序列的任一种可用于这些载体以表达编码ActRIIA多肽的DNA序列。这类有用的表达控制序列包括例如SV40的早期和晚期启动子、tet启动子、腺病毒或巨细胞病毒即时早期启动子、RSV启动子、lac系统、trp系统、TAC或TRC系统、其表达由T7RNA聚合酶指导的T7启动子、噬菌体λ的主要操纵子和启动子区域、ft外被蛋白的控制区域、3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子、酸性磷酸酶的启动子例如Pho5、酵母.α.交配因子的启动子、杆状病毒系统的多角体启动子和已知控制原核和真核细胞或其病毒的基因表达的其它序列及其各种组合。应了解，表达载体的设计可以取决于待转化宿主细胞的选择和/或所需表达的蛋白质类型等因素。此外，还应当考虑载体的拷贝数、控制拷贝数的能力和载体所编码的任何其它蛋白质(例如抗生素标志物)的表达。

可以通过将克隆的基因或其部分连接到适于在原核细胞、真核细胞(酵母、禽类、昆虫或哺乳动物)或两者中表达的载体中，来产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIA多肽的生产中使用的重组核酸。用于重组ActRIIA多肽产生的表达载体包括质粒和其它载体。例如，合适的载体包括用于在原核细胞例如大肠杆菌(E.coli)中表达以下质粒类型：pBR322衍生质粒、pEMBL衍生质粒、pEX衍生质粒、pBTac衍生质粒和pUC衍生质粒。

某些哺乳动物表达载体含有促进载体在细菌中增殖的原核序列和在真核细胞中表达的一个或多个真核转录单位两者。pcDNAI/amp、pcDNAI/neo、pRc/CMV、pSV2gpt、pSV2neo、pSV2-dhfr、pTk2、pRSVneo、pMSG、pSVT7、pko-neo和pHyg衍生载体是适于转染真核细胞的哺乳动物表达载体的实例。这些载体的一些用来自细菌质粒(例如pBR322)的序列修饰，以促进在原核和真核细胞两者中的复制和药物抗性选择。或者，病毒的衍生物，例如牛乳头状瘤病毒(BPV-1)或Epstein-Barr病毒(pHEBo、pREP-衍生的和p205)可用于蛋白质在真核细胞中的瞬时表达。其它病毒(包括逆转录病毒)表达系统的实例可见于下文基因疗法递送系统的描述中。制备质粒和转化宿主生物体所采用的各种方法是本领域众所周知的。对原核和真核细胞都合适的其它表达系统以及通用重组方法，参见Molecular Cloning ALaboratory Manual,3rd Ed.,ed.by Sambrook,Fritsch and Maniatis(Cold SpringHarbor Laboratory Press,2001)。在某些情况下，可能希望的是通过使用杆状病毒表达系统来表达重组多肽。这类杆状病毒表达系统的实例包括pVL衍生载体(例如pVL1392、pVL1393和pVL941)、pAcUW衍生载体(例如pAcUW1)和pBlueBac衍生载体(例如含有.beta.-gal的pBlueBac III)。

载体可设计成用于在CHO细胞中生产主题ActRIIA多肽，例如，Pcmv-Script载体(Stratagene,La Jolla,Calif.)、pcDNA4载体(Invitrogen,Carlsbad,Calif.)和pCI-neo载体(Promega,Madison,Wis.)。将是显而易见的是，可使用主题基因构建体使主题ActRIIA多肽在培养物中增殖的细胞中表达，以产生例如用于纯化的蛋白质，包括融合蛋白或变体蛋白。

用包括一种或多种主题ActRIIA多肽的编码序列(例如SEQ ID NO:4或5)的重组基因转染的宿主细胞可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIA多肽。所述宿主细胞可以是任何原核或真核细胞。例如，本文提供的ActRIIA多肽可以在细菌细胞例如大肠杆菌、昆虫细胞(例如使用杆状病毒表达系统)、酵母或哺乳动物细胞中表达。其它合适的宿主细胞是本领域技术人员公知的。

因此，本文提供生产ActRIIA多肽的方法。例如，用编码ActRIIA多肽的表达载体转染的宿主细胞可在合适的条件下培养以使ActRIIA多肽的表达发生。ActRIIA多肽可自细胞与含有ActRIIA多肽的培养基的混合物中分泌，并可将其从混合物中分离出来。或者，ActRIIA多肽可保留在胞质或膜部分、收获裂解的细胞和分离的蛋白质中。细胞培养物包括宿主细胞、培养基和其它副产物。用于细胞培养的合适培养基是本领域众所周知的。可采用本领域已知的用于纯化蛋白质的技术，包括离子交换层析法、凝胶过滤层析法、超滤、电泳、用对ActRIIA多肽的特定表位有特异性的抗体的免疫亲和纯化和用结合与ActRIIA多肽融合的结构域的试剂的亲和纯化(例如蛋白A柱可用于纯化ActRIIA-Fc融合物)，将主题ActRIIA多肽从细胞培养介质、宿主细胞或两者中分离出来。在一个优选的实施方案中，ActRIIA多肽是含有有助于其纯化的结构域的融合蛋白。在一个实施方案中，纯化通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：蛋白A层析法、Q琼脂糖层析法、苯基琼脂糖层析法、空间排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可以用病毒过滤和缓冲液交换来完成。如本文所表明的，ActRIIA-hFc蛋白可以纯化到通过大小排阻层析法测定的>98％的纯度，以及通过SDS-PAGE测定的>95％的纯度。这个纯度水平足以在小鼠中对骨骼实现所需作用，以及在小鼠、大鼠和非人灵长类中实现可接受的安全特征。

在另一个实施方案中，编码位于重组ActRIIA多肽的期望部分N端的纯化前导序列例如聚-(His)/肠激酶切割位点序列的融合基因可允许所表达的融合蛋白通过利用Ni2+金属树脂的亲和层析法纯化。纯化前导序列然后通过用肠激酶处理来除去，以提供纯化的ActRIIA多肽(例如参见Hochuli et al.,(1987)J.Chromatography 411:177和Janknechtet al.,PNAS USA 88:8972)。

用于制备融合基因的技术是众所周知的。基本上，按照常规技术，如下进行编码不同多肽序列的各种DNA片段的连接：采用用于连接的平端或交错端，限制性内切酶消化以提供合适末端，适当时补平黏性末端，碱性磷酸酶处理以避免不希望的连接，并酶促连接。在另一个实施方案中，融合基因可以通过常规技术，包括自动DNA合成仪来合成。或者，可以使用锚引物来进行基因片段的PCR扩增，所述锚引物产生两个连续基因片段之间的互补突出端，其随后可退火产生嵌合基因序列(参见例如Current Protocols in MolecularBiology,eds.Ausubel et al.,John Wiley&Sons:1992)。

可使用SEQ ID NO:9的组织血纤蛋白溶酶原前导序列，使ActRIIA-Fc融合蛋白在稳定转染的CHO-DUKX Bl 1细胞中自pAID4载体(SV40ori/增强子、CMV启动子)表达。Fc部分是人IgG1Fc序列，如SEQ ID NO:7所示。在某些实施方案中，在表达时，所含蛋白质具有平均每分子ActRIIA-Fc融合蛋白约1.5到2.5摩尔的唾液酸。

在某些实施方案中，在人类对象中ActRIIA-Fc融合物的长血清半寿期可为25-32天。另外，与所报告的在人293细胞中表达的ActRIIA-hFc融合蛋白相比，CHO细胞表达的产物可对激活素B配体具有更高亲和力(del Re et al.,J Biol Chem.2004Dec 17；279(51):53126-35)。另外，虽不受理论的束缚，但与用天然前导区表达的ActRIIA-Fc不同，比其它前导序列提供更高产量的TPA前导序列的使用可提供高纯度的N端序列。天然前导序列的使用可能产生两种主要种类的ActRIIA-Fc，各自具有不同的N端序列。

7.6.2 ACTRIIB信号转导的抑制剂

如本文所用，术语“ActRIIB”是指来自任何物种的激活素IIB型受体(ActRIIB)蛋白的家族和通过诱变或其它修饰衍生自这类ActRIIB蛋白的变体。本文提及ActRIIB要理解为是提及所述受体的当前已鉴定形式的任一种。ActRIIB家族的成员一般是跨膜蛋白质，由具有富半胱氨酸区的配体结合胞外域、跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的胞质域组成。

本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB信号转导抑制剂包括而不限于激活素结合可溶性ActRIIB多肽；结合激活素(特别是激活素A或B亚基，也称为β_A或β_B)并破坏ActRIIB结合的抗体；结合ActRIIB并破坏激活素结合的抗体；针对激活素或ActRIIB结合选择的非抗体蛋白质和针对激活素或ActRIIB结合选择的随机肽，其可与Fc结构域缀合。

在某些实施方案中，具有激活素或ActRIIB结合活性的两种或更多种不同的蛋白质(或其它部分)，特别是分别阻断I型(例如可溶性I型激活素受体)和II型(例如可溶性II型激活素受体)结合位点的激活素结合物可以连接在一起，产生抑制ActRIIB的双功能或多功能结合分子，因此可用于本文所述组合物和方法。在某些实施方案中，抑制ActRIIB的激活素-ActRIIB信号转导轴拮抗剂包括用于本文所述组合物和方法中的核酸适体、小分子和其它作用剂。

7.6.2.1包含ActRIIB多肽的ActRIIB信号转导抑制剂

如本文所用，术语“ActRIIB多肽”是指包含ActRIIB家族成员的任何天然存在的多肽以及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)的多肽，例如，ActRIIB多肽包括这样的多肽，其衍生自任何已知的ActRIIB受体的序列、与ActRIIB多肽的序列有至少约80％同一性，任选至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列。例如，ActRIIB多肽可以结合并抑制ActRIIB蛋白和/或激活素的功能。ActRIIB多肽的实例包括人ActRIIB前体多肽(SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28)。对于其氨基酸序列以SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28描述的ActRIIB前体多肽(即人ActRIIB前体多肽)，ActRIIB前体多肽的信号肽位于氨基酸1-18；胞外域位于氨基酸19-134，可能的N-联糖基化位点位于氨基酸42和65位。SEQ ID NO:19公开了编码SEQ ID NO:16的人ActRIIB前体多肽的核酸序列(SEQ ID NO:19提供了在对应于氨基酸64位的密码子处的丙氨酸，但本领域技术人员可使用本领域已知的方法容易地对其进行修饰，以提供对应于氨基酸64位的密码子处的精氨酸取而代之)。有关序列的描述参见表3。

本文描述的所有ActRIIB相关多肽的氨基酸编号是基于SEQ ID NO:16和SEQ IDNO:28(其只是在64位表达的氨基酸不同)的氨基酸编号，除非另外指定。例如，如果ActRIIB多肽被描述为在氨基酸79位具有取代/突变，则要理解为该79位是指ActRIIB多肽从中衍生的SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28中的第79个氨基酸。同样，如果ActRIIB多肽被描述为在氨基酸64位具有丙氨酸或精氨酸，则要理解为64位是指ActRIIB多肽从中衍生的SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28中的第64个氨基酸。

在某些实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB信号转导的抑制剂包含含有ActRIIB的激活素结合结构域的多肽。在某些实施方案中，ActRIIB的激活素结合结构域包含ActRIIB的胞外域或其部分。在具体的实施方案中，ActRIIB的胞外域或其部分是可溶性的。ActRIIB多肽的说明性修饰形式公开于美国专利申请公开号20090005308和20100068215，其公开内容通过引用以其整体并入本文。ActRIIB多肽的说明性修饰形式还公开于国际专利申请公布号WO 2008/097541和WO2010/019261，其公开内容通过引用以其整体并入本文。

在具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB多肽是可溶性ActRIIB多肽。术语“可溶性ActRIIB多肽”一般是指包含ActRIIB蛋白的胞外域的多肽，包括ActRIIB蛋白的任何天然存在的胞外域以及其任何变体(包括突变体、片段和肽模拟物形式)。可溶性ActRIIB多肽可结合激活素；然而，在结合激活素与GDF8/11方面野生型ActRIIB蛋白不显示显著的选择性。在某些实施方案中，具有不同结合性质的改变形式的ActRIIB可用于本文提供的方法中。这类改变的形式公开于例如国际专利申请公布号WO 2006/012627和WO 2010/019261，其公开内容通过引用以其整体并入本文。可通过使天然的或改变的ActRIIB蛋白与第二激活素选择性结合剂偶联，赋予它们对激活素的额外特异性。示例性可溶性ActRIIB多肽包括人ActRIIB多肽的胞外域(例如SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43)。

具有Hilden et al.(Blood,1994,83(8):2163-70)公开的ActRIIB胞外序列的Fc融合蛋白，其在对应于ActRIIB前体氨基酸序列即SEQ ID NO:16的氨基酸64位具有丙氨酸(本文称为“A64”)，已被证实对激活素和GDF-11具有相对低的亲和力。相比之下，在ActRIIB前体氨基酸序列的64位具有精氨酸(本文称为“R64”)的Fc融合蛋白对激活素和GDF-11具有范围从低纳摩尔到高皮摩尔的亲和力(参见例如美国专利申请公布号20100068215，其公开内容以其整体并入本文)。另参见国际申请号WO2010/019261，其公开内容以其整体并入本文。SEQ ID NO:28提供在64位具有精氨酸的ActRIIB前体氨基酸序列。因此，在某些实施方案中，根据本文所述组合物和方法使用的ActRIIB多肽可包含(i)在对应于ActRIIB前体氨基酸序列的氨基酸64位的丙氨酸，即SEQ ID NO:16；或(ii)在ActRIIB前体序列的64位的精氨酸，即SEQ ID NO:28。在其它实施方案中，根据本文所述组合物和方法使用的ActRIIB多肽可包含在对应于ActRIIB前体氨基酸序列即SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸64位处不是丙氨酸或精氨酸的氨基酸。

已表明，ActRIIB胞外域C端的脯氨酸结的缺失降低受体对激活素的亲和力(参见例如Attisano et al.,Cell,1992,68(1):97-108)。相对于包括脯氨酸结区域和完整近膜结构域、含有SEQ ID NO:28的氨基酸20-134(即SEQ ID NO:31)的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-134)-Fc”，含有SEQ ID NO:28的氨基酸20-119(即SEQ ID NO:32)的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-119)-Fc”对GDF-11和激活素的结合亲和力降低。然而，相对于ActRIIB的未截短的胞外域，含有SEQ ID NO:28的氨基酸20-129的ActRIIB-Fc融合蛋白“ActRIIB(20-129)-Fc”保持了相似但稍微降低的活性，尽管其脯氨酸结区域被破坏。因此，预期包含止于SEQ ID NO:28(或SEQ ID NO:16)的氨基酸134、133、132、131、130和129的胞外域的ActRIIB多肽都是有活性的，但是止于氨基酸134或133的构建体可能具有最大活性。类似地，预期残基129-134任一个的突变不会大幅改变配体结合亲和力，如SEQ ID NO:28的P129和P130的突变实质上不降低配体结合的事实所表明的。因此，根据本文所述方法和组合物使用的ActRIIB多肽可止于早至SEQ ID NO:28(或SEQ ID NO:16)的氨基酸109(即最后的半胱氨酸)，然而，预期止于SEQ ID NO:28(或SEQ ID NO:16)的氨基酸109和119位处或其之间的形式的配体结合能力降低。

SEQ ID NO:16和SEQ ID NO:28的氨基酸29代表ActRIIB前体序列中的最初的半胱氨酸。预期始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28N端的氨基酸29或这些氨基酸位置之前的ActRIIB将保持配体结合活性。在SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的24位处丙氨酸至天冬酰胺的突变引入N-联糖基化位点而不实质性地影响配体结合。这证实了在对应于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29的信号裂解肽和半胱氨酸交联区之间的突变是完全容许的。特别地，始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20、21、22、23和24位的ActRIIB多肽将保持活性，还预期始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸25、26、27、28和29位的ActRIIB多肽保持活性。始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸22、23、24或25位的ActRIIB多肽可具有最大活性。

总之，根据本文所述方法和组合物使用的ActRIIB前体蛋白(即SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28)的活性部分(即ActRIIB多肽)一般可包含SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸29-109，这类ActRIIB多肽可始于例如与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸19-29的任一个对应的残基，止于与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-134的任一个对应的位置。本文所包括的ActRIIB多肽的具体实例包括始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的19-29、20-29或21-29的氨基酸位置和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的119-134、119-133或129-134、129-133的氨基酸位置的那些。本文所包括的ActRIIB多肽的其它具体实例包括始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的20-24(或21-24或22-25)的氨基酸位置和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的109-134(或109-133)、119-134(或119-133)或129-134(或129-133)的氨基酸位置的那些。还预期落入这些范围的变体ActRIIB多肽，特别是与SEQID NO:16或SEQ ID NO:28的相应部分具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性或序列同源性的那些。

在某些实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB信号转导的抑制剂包含ActRIIB的胞外域的截短形式。截短可以是在ActRIIB多肽的羧基端和/或氨基端。在某些实施方案中，相对于成熟的ActRIIB多肽胞外域，所述截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个氨基酸长度。在某些实施方案中，所述截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个成熟ActRIIB多肽胞外域的N端氨基酸。在某些实施方案中，所述截短可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个成熟ActRIIB多肽胞外域的C端氨基酸。例如，ActRIIB的截短形式包括具有氨基酸20-119；20-128；20-129；20-130；20-131；20-132；20-133；20-134；20-131；21-131；22-131；23-131；24-131和25-131的多肽，其中氨基酸位置参考SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28中的氨基酸位置。

ActRIIB的其它示例性截短形式包括(i)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸21-29的任一个的氨基酸(任选始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的21-25)和止于SEQID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-134的任一个的多肽；(ii)始于SEQ ID NO:16或SEQID NO:28的氨基酸20-29的任一个(任选始于SEQ ID NO:16或SEQID NO：28的20-25)和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-133的任一个的多肽；(iii)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-24的任一个(任选始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的20-25)和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-133的任一个的多肽；(iv)始于SEQID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸21-24的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸109-134的任一个的多肽；(v)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-24的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸118-133的任一个的多肽；(vi)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸21-24的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸118-134的任一个的多肽；(vii)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-24的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸128-133的任一个的多肽；(viii)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-24的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸128-133的任一个的多肽；(ix)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸21-29的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸118-134的任一个的多肽；(x)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸118-133的任一个的多肽；(xi)始于SEQ ID NO:16或SEQ IDNO:28的氨基酸21-29的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸128-134的任一个的多肽；和(xii)始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29的任一个和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸128-133的任一个的多肽。在一个具体的实施方案中，ActRIIB多肽包含始于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸25位和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸131位的氨基酸序列、基本由其组成或由其组成。在另一个具体的实施方案中，ActRIIB由或基本上由SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42或43的氨基酸序列组成。

本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB多肽的任一个可以作为同二聚体生产。本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB多肽的任一个可配制成具有异源部分的融合蛋白，所述异源部分包含来自IgG重链的恒定区，例如Fc结构域。本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB多肽的任一个可包含处在对应于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的79位的位置处的酸性氨基酸，任选与相对于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的一个或多个其它氨基酸取代、缺失或插入组合。

在具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB信号转导的抑制剂包含具有一个或多个氨基酸取代/突变的ActRIIB的胞外域。这类氨基酸取代/突变可以是例如SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸79位的亮氨酸交换为酸性氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸。例如，在ActRIIB胞外域多肽中SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的L79位可改变，以赋予改变的激活素-肌肉生长抑制素(GDF-11)结合性质。与激活素结合相比，L79A和L79P突变更大程度地降低GDF-11结合。L79E和L79D突变保持GDF-11结合，同时表明激活素结合大大降低。

在某些实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB信号转导的抑制剂包含截短形式的ActRIIB胞外域，其还带有氨基酸取代，例如SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸79位交换为酸性氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸。在具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的还带有氨基酸取代的ActRIIB多肽的胞外域的截短形式是SEQ IDNO:23。截短的和/或带有一个或多个氨基酸取代的ActRIIB的形式可与上文论述的抗体的Fc结构域连接。

例如，可通过筛选重组产生于编码ActRIIB多肽的核酸的相应片段的多肽，获得ActRIIB多肽的功能活性片段。此外，片段可采用本领域已知的技术，例如常规的Merrifield固相f-Moc或t-Boc化学以化学法合成。可产生片段(重组地或通过化学合成)，并对其进行测试，以鉴定可用作ActRIIB蛋白或激活素介导的信号转导的拮抗剂(抑制剂)的那些肽片段。

此外，可通过例如筛选重组产生于编码ActRIIB多肽的相应诱变核酸的修饰多肽的文库，获得ActRIIB多肽的功能活性的变体。可产生变体，并对其进行测试，以鉴定可以用作ActRIIB蛋白或激活素介导的信号转导的拮抗剂(抑制剂)的那些。在某些实施方案中，ActRIIB多肽的功能变体包括与选自SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的氨基酸序列有至少75％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，功能变体具有与选自SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

可通过例如修饰ActRIIB多肽的结构产生功能变体用于诸如提高治疗效能或稳定性(例如离体保存限期或对体内蛋白水解降解的抗性)等目的。当经选择以保持激活素结合时，这种修饰的ActRIIB多肽可视为是天然存在的ActRIIB多肽的功能等同物。还可通过例如氨基酸取代、缺失或添加，产生修饰的ActRIIB多肽。例如，有理由认为，亮氨酸用异亮氨酸或缬氨酸、天冬氨酸用谷氨酸、苏氨酸用丝氨酸单独置换，或氨基酸用结构相关氨基酸的相似置换(例如保守突变)将不会对所得分子的生物学活性有重大的影响。保守性置换是在其侧链相关的氨基酸家族内发生的置换。通过评价变体ActRIIB多肽在细胞中以类似于野生型ActRIIB多肽的方式产生反应的能力，可容易地测定ActRIIB多肽的氨基酸序列改变是否产生功能同系物。

ActRIIB多肽突变体，特别是ActRIIB多肽的组合突变体的集合以及截短突变体；组合突变体库，对于鉴定可用于本文所述方法和组合物的功能变体序列是特别有用的。筛选这种组合文库的目的可以是产生例如可用作激动剂或拮抗剂的ActRIIB多肽变体，或备选，其一起具有新的活性。

已经表明，由SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的残基Y31、N33、N35、L38到T41、E47、E50、Q53到K55、L57、H58、Y60、S62、K74、W78到N83、Y85、R87、A92和E94到F101限定了ActRIIB的配体结合袋。在这些位置上，预期是保守性突变将是容许的，但K74A突变是完全容许的，R40A、K55A、F82A和L70位的突变也是。在非洲蟾蜍(Xenopus)中R40是K，表明这个位置的碱性氨基酸是容许的。在牛ActRIIB中Q53是R，在非洲蟾蜍ActRIIB中是K，因此包括R、K、Q、N和H的氨基酸在这个位置将是容许的。因此，用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽的通式是包含SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸29-109，但任选始于SEQ ID NO:16或SEQID NO:28的20-24或22-25的氨基酸位置和止于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的范围为129-134的氨基酸位置，且在配体结合袋中包含不超过1、2、5或15个保守氨基酸改变，以及在配体结合袋中SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸40、53、55、74、79和/或82位的零、一个或多个非保守改变。这类ActRIIB多肽可以保持与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸29-109的序列大于80％、90％、95％或99％序列同一性或序列同源性。结合袋之外的位点，在此变异性是特别完全容许的，包括ActRIIB的胞外域的氨基和羧基端和位置42-46和65-73。SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的65位处天冬酰胺到丙氨酸的改变(N65A)实际上改进了A64背景下的配体结合，因此预期在R64背景下对配体结合没有有害作用。这种改变可能除去A64背景下N65处的糖基化，因此表明这个区域的重大改变可能是容许的。虽然R64A改变是不太容许的，R64K是完全容许的，因此另一种碱性残基，例如可容许64位为H。

作为在配体结合结构域中有突变的ActRIIB多肽的具体实例，ActRIIB的配体结合结构域的带正荷电氨基酸残基Asp(D80)可以突变为不同的氨基酸残基，使得变体ActRIIB多肽优先结合GDF8而不结合激活素。在一个具体的实施方案中，使D80残基变为选自以下的氨基酸残基：不带电荷的氨基酸残基、负电氨基酸残基和疏水性氨基酸残基。作为更多的具体实例，可将疏水性残基L79变为酸性氨基酸天冬氨酸或谷氨酸，来大大降低激活素结合而保持GDF11结合。正如本领域技术人员公认的，大多数的所述突变、变异或修饰可在核酸水平上实现，或在某些情况下，通过翻译后修饰或化学合成实现。这类技术是本领域众所周知的。

在具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB信号转导的抑制剂包含缀合物/融合蛋白，其包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIB受体的胞外域(例如激活素结合结构域)。这类缀合物/融合蛋白可包含本文公开的任何ActRIIB多肽(例如SEQ IDNO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42或43的任一个)、本领域已知的任何ActRIIB多肽或采用本领域已知的和/或本文提供的方法产生的任何ActRIIB多肽。

在某些实施方案中，胞外域通过接头(例如肽接头)与抗体的Fc部分连接。示例性接头包括短多肽序列，例如2-10、2-5、2-4、2-3个氨基酸残基(例如甘氨酸残基)，例如，Gly-Gly-Gly接头。在一个具体的实施方案中，接头包含氨基酸序列Gly-Gly-Gly(GGG)。在另一个具体的实施方案中，接头包含氨基酸序列Thr-Gly-Gly-Gly(TGGG)。任选Fc结构域在残基例如Asp-265、赖氨酸322和Asn-434处具有一个或多个突变。在某些情况下，相对于野生型Fc结构域，具有一个或多个这些突变(例如Asp-265突变)的突变型Fc结构域结合Fcγ受体的能力降低。在其它情况下，相对于野生型Fc结构域，具有一个或多个这些突变(例如Asn-434突变)的突变型Fc结构域结合MHC I类相关Fc受体(FcRN)的能力提高。SEQ ID NO:20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46和47中列出包含与Fc结构域融合的ActRIIB的可溶胞外域的示例性融合蛋白。

在一个具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB信号转导抑制剂包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIB的胞外域或其部分，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含与选自SEQ ID NO:20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46和47的氨基酸序列有至少75％同一性的氨基酸序列。在另一个具体的实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRIIB信号转导抑制剂包含与抗体的Fc部分连接的ActRIIB的胞外域或其部分，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含与选自SEQ ID NO:20、21、24、25、34、35、38、39、40、41、44、46和47的氨基酸序列有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

在一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是人ActRIIB受体的胞外域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是人ActRIIB受体的截短胞外域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白。在另一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是人ActRIIB受体的截短胞外域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中所述人ActRIIB受体的截短胞外域在对应于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸79的氨基酸位置处具有氨基酸取代。在一个实施方案中，在对应于SEQ ID NO:16或SEQID NO:28的氨基酸79的氨基酸位置处的氨基酸取代是亮氨酸用天冬氨酸取代(即L79D突变)。

在一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是SEQ ID NO:24或25，其代表人ActRIIB受体的胞外域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中所述ActRIIB胞外域包含带有L79D突变的SEQ ID NO:28的氨基酸25-131。SEQ ID NO:45列出编码SEQ ID NO:24的ActRIIB-Fc融合蛋白的核酸序列。

在另一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRIIB信号转导抑制剂是SEQ ID NO:34或35，其代表人ActRIIB受体的胞外域与IgG1的Fc部分之间的融合蛋白，其中所述ActRIIB胞外域包含带有L79D突变的SEQ ID NO:16的氨基酸25-131。

天冬酰胺连接的糖基化识别位点一般包含三肽序列，天冬酰胺-X-苏氨酸(或天冬酰胺-X-丝氨酸)(其中“X”是任意氨基酸)，其被合适的细胞糖基化酶特异性识别。也可以通过向野生型ActRIIB多肽的序列中添加或取代一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基(用于O-联糖基化位点)来进行改变。在糖基化识别位点的第一或第三个氨基酸位置的一个或两个上的各氨基酸取代或缺失(和/或在第二位置上的氨基酸缺失)引起所述修饰的三肽序列处的非糖基化。增加ActRIIB多肽上糖部分的数量的另一种方式是通过糖苷与ActRIIB多肽的化学或酶促偶联。根据所用的偶联方式，可将糖连接至(a)精氨酸和组氨酸；(b)游离羧基；(c)游离巯基，例如半胱氨酸的游离巯基；(d)游离羟基，例如丝氨酸、苏氨酸或羟脯氨酸的羟基；(e)芳族残基，例如苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸的芳族残基；或(f)谷氨酰胺的酰胺基团。这些方法描述于1987年9月11日公开的WO 87/05330中以及在Aplin and Wriston(1981)CRC Crit.Rev.Biochem.,pp.259-306中，通过引用并入本文。除去ActRIIB多肽上存在的一个或多个糖部分可以化学法或酶法实现。化学的脱糖基化可能包括例如将ActRIIB多肽暴露于化合物三氟甲磺酸或等效化合物。这种处理引起除了连接糖(N-乙酰葡糖胺或N-乙酰半乳糖胺)之外大部分或所有的糖裂解，同时保留氨基酸序列完整。Hakimuddin et al.(1987)Arch.Biochem.Biophys.259:52和Edge et al.(1981)Anal.Biochem.118:131进一步描述了化学脱糖基化。ActRIIB多肽上糖部分的酶促裂解可以通过使用多种内切和外切糖苷酶来实现，如Thotakura et al.(1987)Meth.Enzymol.138:350中所述。根据所使用的表达系统的类型，适当时，可调整ActRIIB多肽的序列，因为哺乳动物、酵母、昆虫和植物细胞可能都引入不同的糖基化模式，其可能受肽的氨基酸序列的影响。一般地，用于人类的ActRIIB蛋白可在提供适当的糖基化的哺乳动物细胞系中表达，例如HEK293或CHO细胞系，但预期其它表达系统，例如其它哺乳动物表达细胞系、具有工程改造的糖基化酶的酵母细胞系和昆虫细胞也是有用的。

在具体的实施方案中，相对于ActRIIB(R64)-Fc形式，包含延长ActRIIB-Fc融合蛋白的血清半寿期的更多N-联糖基化位点(N-X-S/T)的突变的ActRIIB多肽可用于本文所述方法和组合物中。在一个具体的实施方案中，在SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的24位处引入天冬酰胺(A24N)产生赋予更长半寿期的NXT序列。其它NX(T/S)序列可存在于42-44(NQS)和65-67(NSS)中，但后者无法用64位的R有效糖基化(即在R64多肽中)。一般可将N-X-S/T序列引入ActRIIB的配体结合口袋之外的位置，上文对其进行了详细描述。对引入非内源N-X-S/T序列特别合适的位点包括SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28的氨基酸20-29、20-24、22-25、109-134、120-134或129-134。还可将N-X-S/T序列引入ActRIIB序列与Fc或其它融合组件之间的接头中。可通过将N引入相对于预先存在的S或T的正确位置或通过将S或T引入对应于预先存在的N的位置，以最小努力引入这类部位。因此，产生N-联糖基化位点的可取的改变是：A24N、R64N、S67N(可能与N65A改变组合)、E106N、R112N、G120N、E123N、P129N、A132N、R112S和R112T(所有氨基酸位置对应于它们可存在于SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:28中的位置)。预期可将待糖基化的任何S变为T，因为由糖基化提供了保护而不产生免疫原性位点。同样地，预期可将待糖基化的任何T变为S。因此，本文包括S67T和S44T变化。同样，在A24N变体中，可以使用S26T改变。因此，ActRIIB多肽可包括一个或多个额外的非内源N-联糖基化共有序列。

可采用多种筛选测定法评价ActRIIB多肽变体。例如，可针对与ActRIIB配体结合、防止ActRIIB配体与ActRIIB多肽结合或干扰由ActRIIB配体引起的信号转导的能力，筛选ActRIIB多肽变体。ActRIIB多肽或其变体的活性也可以在基于细胞或体内测定法中测试。

可以产生组合衍生的变体，其相对于天然存在的ActRIIB多肽具有选择的或一般提高的效能。同样，诱变可导致细胞内半寿期显著不同于相应的野生型ActRIIB多肽的变体。例如，可赋予改变的蛋白质对造成天然ActRIIB多肽破坏或否则失活的蛋白水解降解或其它细胞代谢过程更稳定或更不稳定。可通过调节ActRIIB多肽的半寿期，利用这类变体和编码它们的基因来改变ActRIIB多肽水平。例如，短的半寿期可以产生更短暂的生物作用，可允许更严地控制对象体内的重组ActRIIB多肽水平。在Fc融合蛋白中，突变可以在接头(如果有的话)和/或Fc部分中进行，以改变蛋白质的半寿期。

通过编码多肽文库的简并基因文库的方式可以产生组合文库，所述多肽文库各自包括可能的ActRIIB多肽序列的至少一部分。例如，可用酶法将合成寡核苷酸的混合物与基因序列连接，从而可能的ActRIIB多肽核苷酸序列的简并集合可以作为单独的多肽表达，或备选，作为更大的融合蛋白的集合(例如用于噬菌体展示)。

有许多方法可从简并寡核苷酸序列中产生可能的同系物的文库。可以在自动DNA合成仪中进行简并基因序列的化学合成，然后可将合成的基因连接至合适的载体中用于表达。简并寡核苷酸的合成是本领域众所周知的(参见例如Narang,S A(1983)Tetrahedron39:3；Itakura et al.,(1981)Recombinant DNA,Proc.3rd ClevelandSympos.Macromolecules,ed.AG Walton,Amsterdam:Elsevier pp 273-289；Itakura etal.,(1984)Annu.Rev.Biochem.53:323；Itakura et al.,(1984)Science 198:1056；Ikeet al.,(1983)Nucleic Acid Res.11:477)。这类技术已经应用于其它蛋白质的定向进化中(参见例如Scott et al.,(1990)Science 249:386-390；Roberts et al.,(1992)PNASUSA 89:2429-2433；Devlin et al.,(1990)Science 249:404-406；Cwirla et al.,(1990)PNAS USA 87:6378-6382；以及美国专利号5,223,409、5,198,346和5,096,815)。

或者，可利用其它诱变形式来产生组合文库。例如，可采用以下方法，通过筛选来从文库中产生和分离ActRIIB多肽变体：例如丙氨酸扫描诱变等(Ruf et al.,(1994)Biochemistry 33:1565-1572；Wang et al.,(1994)J.Biol.Chem.269:3095-3099；Balintet al.,(1993)Gene 137:109-118；Grodberg et al.,(1993)Eur.J.Biochem.218:597-601；Nagashima et al.,(1993)J.Biol.Chem.268:2888-2892；Lowman et al.,(1991)Biochemistry30:10832-10838；和Cunningham et al.,(1989)Science 244:1081-1085)；通过接头扫描诱变(Gustin et al.,(1993)Virology 193:653-660；Brown et al.,(1992)Mol.Cell Biol.12:2644-2652；McKnight et al.,(1982)Science232:316)；通过饱和诱变(Meyers et al.,(1986)Science 232:613)；通过PCR诱变(Leung et al.,(1989)MethodCell Mol Biol 1:11-19)；或通过随机诱变，包括化学诱变等(Miller et al.,(1992)AShort Course in Bacterial Genetics,CSHL Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；和Greener et al.,(1994)Strategies in Mol Biol 7:32-34)。接头扫描诱变，特别是在组合情况下，是鉴定ActRIIB多肽的截短(生物活性)形式的有吸引力的方法。

用于筛选通过点突变和截短制备的组合文库的基因产物和对此用于筛选cDNA库中具有某种性质的基因产物的各种技术是本领域已知的。这类技术一般将适于通过ActRIIB多肽的组合诱变产生的基因库的快速筛选。用于筛选大型基因文库的最广泛使用的技术一般包括将基因文库克隆到可复制的表达载体中，用所得载体库转化合适的细胞，并在一定条件下表达组合基因，在所述条件中所需活性的检测便于相对容易地分离编码其产物被检出的基因的载体。优选的测定法包括激活素结合测定法和激活素介导的细胞信号转导测定法。

在某些实施方案中，本文所述方法和组合物的抑制剂中使用的ActRIIB多肽可以进一步包含翻译后修饰，除了天然存在于所述ActRIIB多肽中的之外。这类修饰包括但不限于乙酰化、羧基化、糖基化、磷酸化、脂质化和酰化。因此，修饰的ActRIIB多肽可含有非氨基酸元件，例如聚乙二醇、脂质、聚糖或单糖和磷酸盐。可通过熟练技术人员已知的任何方法测试这种非氨基酸元件对ActRIIB多肽的功能的作用。当通过裂解ActRIIB多肽的新生形式来在细胞中产生ActRIIB多肽时，翻译后的加工对于蛋白质的正确折叠和/或功能可能也是重要的。不同的细胞(例如CHO、HeLa、MDCK、293、W138、NIH-3T3或HEK293)具有这种翻译后活性的特定细胞机器和特有机制，并可加以选择以确保ActRIIB多肽的正确修饰和加工。

在某些方面，ActRIIB多肽的功能变体或修饰形式包括具有至少一部分ActRIIB多肽和一个或多个融合结构域的融合蛋白。这类融合结构域的众所周知的实例包括但不限于多组氨酸、Glu-Glu、谷胱甘肽S转移酶(GST)、硫氧还蛋白、蛋白A、蛋白G、免疫球蛋白重链恒定区(Fc)、麦芽糖结合蛋白(MBP)或人血清白蛋白。可以选择融合结构域以赋予所需性质。例如，某些融合结构域对于通过亲和层析法分离融合蛋白是特别有用的。对于亲和纯化来说，使用亲和层析法的相关基质，例如谷胱甘肽-、淀粉酶-和镍-或钴-缀合的树脂。许多这类基质可以“试剂盒”形式获得，例如，可与(HIS6)融合配偶体一起使用的Pharmacia GST纯化系统以及QIAexpress.TM.系统(Qiagen)。作为另一个实例，可以选择融合结构域以促进ActRIIB多肽的检测。这类检测结构域的实例包括各种荧光蛋白(例如GFP)以及“表位标签”，其通常是针对其可获得特异性抗体的短肽序列。针对其可容易获得的特异性单克隆抗体的众所周知的表位标签包括FLAG、流感病毒血凝素(HA)和c-myc标签。在某些情况下，融合结构域具有蛋白酶切割位点，例如因子Xa或凝血酶的蛋白酶切割位点，其允许相关蛋白酶部分消化该融合蛋白，因此由此释放重组蛋白。释放的蛋白质然后可以通过随后的层析分离从融合结构域中分离。在某些优选的实施方案中，ActRIIB多肽与体内稳定ActRIIB多肽的结构域(“稳定物”结构域)融合。“稳定”是指延长血清半寿期的任何情况，不论是由于降低破坏，减少肾清除，还是其它药代动力学作用。已知与免疫球蛋白的Fc部分融合赋予多种多样的蛋白质所需的药代动力学性质。同样，与人血清白蛋白的融合可以赋予所需性质。可以选择的其它融合结构域类型包括多聚化(例如二聚化、四聚化)结构域和功能结构域(赋予其他生物学功能，例如按需进一步刺激骨骼生长或肌肉生长)。

要了解融合蛋白的不同元件可以与所需功能一致的任何方式排列。例如，ActRIIB多肽可置于异源结构域的C端，或备选，异源结构域可置于ActRIIB多肽的C端。ActRIIB多肽结构域和异源结构域在融合蛋白中不一定相邻，其它结构域或氨基酸序列可以被包括在任一结构域的C端或N端者或结构域之间。

在某些实施方案中，本文所述方法和组合物中使用的ActRIIB多肽含有能够稳定ActRIIB多肽的一个或多个修饰。例如，这类修饰可以延长ActRIIB多肽的体外半寿期、延长ActRIIB多肽的循环半寿期或降低ActRIIB多肽的蛋白水解酶降解。这类稳定化修饰可以包括但不限于融合蛋白(包括例如包含ActRIIB多肽和稳定物结构域的融合蛋白)、糖基化位点的修饰(包括例如向ActRIIB多肽添加糖基化位点)以及糖部分的修饰(包括例如从ActRIIB多肽除去糖部分)。对于融合蛋白来说，ActRIIB多肽与稳定物结构域例如IgG分子(例如Fc结构域)融合。如本文所用，术语“稳定物结构域”不仅是指融合蛋白情况下的融合结构域(例如Fc)，而且还包括非蛋白性修饰例如糖部分，或非蛋白性聚合物，例如聚乙二醇。

在某些实施方案中，本文所述方法和组合物利用分离的和/或纯化的ActRIIB多肽，即分离自或否则基本没有其它蛋白质的ActRIIB多肽可用于本文所述方法和组合物。一般可通过从重组核酸表达来产生ActRIIB多肽。

在某些方面，本文所述方法和组合物中使用的ActRIIB多肽由分离的和/或重组的核酸编码，包括本文公开的片段、功能变体和融合蛋白。例如，SEQ ID NO:19编码天然存在的人ActRIIB前体多肽。主题核酸可以是单链的或双链的。这类核酸可以是DNA或RNA分子。这些核酸可用于例如制备ActRIIB多肽的方法，或作为直接的治疗剂(例如在基因治疗方法中)。

在某些方面，要进一步了解，可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽的核酸包括作为SEQ ID NO:19的变体的核酸以及编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列的变体(例如编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)。变体核苷酸序列包括差异在于一个或多个核苷酸取代、添加或缺失的序列，例如等位基因变体。

在某些实施方案中，可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽的分离的或重组的核酸序列与SEQ ID NO:19或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)有至少80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％或100％同一性。本领域普通技术人员应认识到，与SEQID NO:19或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)互补的核酸序列以及SEQ ID NO:19或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)的变体可用于本文所述方法和组合物。在进一步的实施方案中，所述核酸序列可以是分离的、重组的和/或与异源核苷酸序列融合，或可在DNA文库中。

在其它实施方案中，可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽的核酸包括在高度严格条件与SEQ ID NO:19中指定的核苷酸序列或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)、SEQ ID NO:19的互补序列或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)的互补序列或其片段杂交的核苷酸序列。本领域普通技术人员应认识到，可以改变促进DNA杂交的合适的严格条件。例如，可以在6.0倍氯化钠/柠檬酸钠(SSC)、约45℃下杂交，接着2.0倍SSC在50℃下洗涤。例如，洗涤步骤中的盐浓度可选自50℃下约2.0倍SSC的低严格性，到50℃下约0.2倍SSC的高严格性。此外，洗涤步骤中的温度可以从室温约22℃下的低严格条件，提高到大约65℃的高严格条件。温度和盐可以都变化，或者温度或盐浓度保持不变而另一个变量发生改变。在一个实施方案中，在6倍SSC室温下的低严格条件下杂交、接着在室温下2倍SSC洗涤的核酸可用于本文所述方法和组合物。

由于遗传密码方面的简并性而不同于SEQ ID NO:19所列核酸或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)的分离的核酸也可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽。例如，许多氨基酸由超过一种三联体指定。指定相同氨基酸的密码子，或同义密码子(例如CAU和CAC对于组氨酸是同义的)可产生不影响蛋白质的氨基酸序列的“沉默”突变。然而，预期引起主题蛋白质的氨基酸序列改变的DNA序列多态性可存在于哺乳动物细胞中。本领域技术人员应认识到，编码特定蛋白质的核酸的一个或多个核苷酸(达到核苷酸的约3-5％)中的这些变异由于天然等位基因变异所致可存在于指定物种的个体中。任何和所有的这类核苷酸变异和所得氨基酸多态性均可用于本文所述方法和组合物。

在某些实施方案中，重组核酸可与表达构建体中的一个或多个调节核苷酸序列有效连接。调节核苷酸序列一般将适于用来表达的宿主细胞。对于多种宿主细胞，许多类型的合适的表达载体和合适的调节序列是本领域已知的。通常，所述一个或多个调节核苷酸序列可包括但不限于启动子序列、前导区或信号序列、核糖体结合位点、转录起始和终止序列、翻译起始和终止序列以及增强子或激活物序列。本领域已知的组成型或诱导型启动子可用于本文所述方法和组合物。启动子可以是天然存在的启动子，或组合超过一种启动子的元件的杂合启动子。表达构建体可以存在于细胞中或附加体(例如质粒)上，或者表达构建体可插入染色体中。在一个优选的实施方案中，表达载体含有选择性标记基因，允许选择转化的宿主细胞。选择标记基因是本领域众所周知的，将随所用的宿主细胞而变化。

在某些方面，提供表达载体中的可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽的核酸，所述表达载体包含编码ActRIIB多肽且与至少一个调节序列有效连接的核苷酸序列。调节序列是公知的，被选择以指导ActRIIB多肽的表达。因此，术语调节序列包括启动子、增强子和其它表达控制元件。示例性调节序列描述于Goeddel；GeneExpression Technology:Methods in Enzymology,Academic Press,San Diego,Calif.(1990)。例如，当与之有效连接时控制DNA序列的表达的各种表达控制序列的任一种可用于这些载体以表达编码ActRIIB多肽的DNA序列。这类有用的表达控制序列包括例如SV40的早期和晚期启动子、tet启动子、腺病毒或巨细胞病毒即时早期启动子、RSV启动子、lac系统、trp系统、TAC或TRC系统、其表达由T7RNA聚合酶指导的T7启动子、噬菌体λ的主要操纵子和启动子区域、ft外被蛋白的控制区域、3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子、酸性磷酸酶的启动子例如Pho5、酵母.α.交配因子的启动子、杆状病毒系统的多角体启动子和已知控制原核和真核细胞或其病毒的基因表达的其它序列及其各种组合。应了解，表达载体的设计可以取决于待转化宿主细胞的选择和/或所需表达的蛋白质类型等因素。此外，还应当考虑载体的拷贝数、控制拷贝数的能力和载体所编码的任何其它蛋白质(例如抗生素标志物)的表达。

可通过将克隆的基因或其部分连接到适于在原核细胞、真核细胞(酵母、禽类、昆虫或哺乳动物)或两者中表达的载体中，来产生重组核酸。用于重组ActRIIB多肽产生的表达载体包括质粒和其它载体。例如，合适的载体包括用于在原核细胞例如大肠杆菌中表达以下质粒类型：pBR322衍生质粒、pEMBL衍生质粒、pEX衍生质粒、pBTac衍生质粒和pUC衍生质粒。

在一个实施方案中，载体可设计成用于在CHO细胞中本文所述方法和组合物中使用的生产ActRIIB多肽，例如，Pcmv-Script载体(Stratagene,La Jolla,Calif.)、pcDNA4载体(Invitrogen,Carlsbad,Calif.)和pCI-neo载体(Promega,Madison,Wis.)。将是显而易见的是，可使用主题基因构建体使主题ActRIIB多肽在培养物中增殖的细胞中表达，以产生例如用于纯化的蛋白质，包括融合蛋白或变体蛋白。

用包括一种或多种主题ActRIIB多肽的编码序列(例如SEQ ID NO:19或编码可溶性ActRIIB多肽的那些核酸序列(例如编码SEQ ID NO:17、18、23、26、27、29、30、31、32、33、36、37、42和43的核酸)的重组基因转染的宿主细胞可用于产生适用于本文所述方法和组合物的ActRIIB多肽。所述宿主细胞可以是任何原核或真核细胞。例如，ActRIIB多肽可以在细菌细胞例如大肠杆菌、昆虫细胞(例如使用杆状病毒表达系统)、酵母或哺乳动物细胞中表达。其它合适的宿主细胞是本领域技术人员公知的。

因此，本文提供生产本文所述方法和组合物中使用的ActRIIB多肽的方法。例如，用编码ActRIIB多肽的表达载体转染的宿主细胞可在合适的条件下培养以使ActRIIB多肽的表达发生。ActRIIB多肽可自细胞与含有ActRIIB多肽的培养基的混合物中分泌，并可将其从混合物中分离出来。或者，ActRIIB多肽可保留在胞质或膜部分、收获裂解的细胞和分离的蛋白质中。细胞培养物包括宿主细胞、培养基和其它副产物。用于细胞培养的合适培养基是本领域众所周知的。可采用本领域已知的用于纯化蛋白质的技术，包括离子交换层析法、凝胶过滤层析法、超滤、电泳、用对ActRIIB多肽的特定表位有特异性的抗体的免疫亲和纯化和用结合与ActRIIB多肽融合的结构域的试剂的亲和纯化(例如蛋白A柱可用于纯化ActRIIB-Fc融合物)，将主题ActRIIB多肽从细胞培养介质、宿主细胞或两者中分离出来。在一个优选的实施方案中，ActRIIB多肽是含有有助于其纯化的结构域的融合蛋白。在一个实施方案中，纯化通过一系列柱层析法步骤实现，包括例如以下任何顺序的三种或更多种：蛋白A层析法、Q琼脂糖层析法、苯基琼脂糖层析法、空间排阻层析法和阳离子交换层析法。纯化可以用病毒过滤和缓冲液交换来完成。如本文所表明的，ActRIIB-hFc蛋白可以纯化到通过大小排阻层析法测定的>98％的纯度，以及通过SDS-PAGE测定的>95％的纯度。这个纯度水平足以在小鼠中对骨骼实现所需作用，以及在小鼠、大鼠和非人灵长类中实现可接受的安全特征。

在另一个实施方案中，编码位于重组ActRIIB多肽的所需部分的N端的纯化前导序列例如聚-(His)/肠激酶切割位点序列的融合基因可以允许所表达的融合蛋白通过利用Ni2+金属树脂的亲和层析法来纯化。纯化前导序列然后通过用肠激酶处理来除去，以提供纯化的ActRIIB多肽(例如参见Hochuli et al.,(1987)J.Chromatography 411:177和Janknecht et al.,PNAS USA 88:8972)。

可使用SEQ ID NO:8的组织血纤蛋白溶酶原前导序列，使ActRIIB-Fc融合蛋白在稳定转染的CHO-DUKX Bl 1细胞中自pAID4载体(SV40ori/增强子、CMV启动子)表达。Fc部分可包含人IgG1Fc序列，如SEQ ID NO:7所示。在某些实施方案中，在表达时，所含蛋白质具有平均每分子ActRIIB-Fc融合蛋白约1.5到2.5摩尔的唾液酸。

在某些实施方案中，在人类对象中ActRIIB-Fc融合物的长血清半寿期可为25-32天。另外，与所报告的在人293细胞中表达的ActRIIB-hFc融合蛋白相比，CHO细胞表达的产物可对激活素B配体具有更高亲和力(del Re et al.,J Biol Chem.2004Dec 17；279(51):53126-35)。另外，虽不受理论的束缚，但与用天然前导区表达的ActRIIB-Fc不同，比其它前导序列提供更高产量的TPA前导序列的使用可提供高纯度的N端序列。天然前导序列的使用可能产生两种主要种类的ActRIIB-Fc，各自具有不同的N端序列。

7.6.3其它ACTRII受体信号转导抑制剂

在某些实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ACTRII信号转导抑制剂是核酸化合物。

抑制ActRII受体的核酸化合物类别的实例包括反义核酸、siRNA或RNAi构建体以及催化性核酸构建体。核酸化合物可以是单链的或双链的。双链化合物还可包括突出的或非互补的区域，其中链的一条或另一条是单链的。单链化合物可包括自我互补的区域，这意味着所述化合物可以形成带有双螺旋结构区域所谓的“发夹”或“茎-环”结构。

在某些实施方案中，抑制ActRII受体的核酸化合物可包含与某一区域互补的核苷酸序列，所述区域由全长ActRII受体核酸序列或激活素核酸序列(例如激活素A或激活素B亚基，也称为β_A或β_B的核酸序列)不超过1000个、不超过500个、不超过250个、不超过100个或不超过50、35、30、25、22、20或18个核苷酸组成。在一个具体的实施方案中，互补的区域可为至少8个核苷酸，任选至少10个或至少15个核苷酸，任选在15到25个核苷酸之间。互补的区域可以落入内含子、目标转录产物的编码序列或非编码序列，例如编码序列部分。通常，抑制ActRII受体的核酸化合物可具有约8-约500个核苷酸或碱基对的长度，任选长度为约14-约50个核苷酸。抑制ActRII受体的核酸化合物可以是DNA(特别用作反义物)、RNA或RNA:DNA杂交物。任一条链可包括DNA和RNA的混合物以及不容易归类为DNA或RNA的修饰形式。同样，双链核酸化合物可以是DNA:DNA、DNA:RNA或RNA:RNA，任一条链还可包括DNA和RNA的混合物以及不容易归类为DNA或RNA的修饰形式。

抑制ActRII受体的核酸化合物可包括各种修饰的任一种，包括对主干(天然核酸中的糖-磷酸部分，包括核苷酸间连键)或碱基部分(天然核酸的嘌呤或嘧啶部分)的一个或多个修饰。在某些实施方案中，反义核酸化合物可具有约15-约30个核苷酸的长度，通常将含有一个或多个修饰以改进某些特性，例如血清中的稳定性、细胞中的稳定性、化合物可能被递送部位中的稳定性，例如就口服递送来说是胃部，对于吸入的化合物来说是肺部。对于RNAi构建体来说，与目标转录产物互补的链一般可为RNA或其修饰体。其它链可以是RNA、DNA或任何其它变异体。在某些实施方案中，双链的或单链的“发夹”RNAi构建体的双螺旋部分可以具有18到40个核苷酸的长度，任选约21到23个核苷酸长度，只要它起到Dicer底物的作用。催化性或酶性核酸可以是核酶或DNA酶，还可含有修饰的形式。在某些实施方案中，在生理条件下以及在无义或有义对照几乎没有或没有作用的浓度下，抑制ActRII受体的核酸化合物可以抑制其目标的表达约50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更高，测试核酸化合物的作用的浓度包括1、5、10微摩尔或更高。

在其它实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRII信号转导抑制剂是抗体。这类抗体包括结合激活素(特别是激活素A或B亚基，也称为β_A或β_B)并破坏ActRII受体结合的抗体；以及结合ActRII受体多肽(例如可溶性ActRIIA或可溶性ActRIIB多肽)并破坏激活素结合的抗体。

可通过使用衍生自ActRII受体多肽或激活素多肽的免疫原，通过标准方案产生抗蛋白质/抗肽的抗血清或单克隆抗体(参见例如Antibodies:A Laboratory Manual ed.byHarlow and Lane(Cold Spring Harbor Press:1988))。哺乳动物，例如小鼠、仓鼠或兔可以用ActRII受体多肽的免疫原性形式、能够引发抗体反应的抗原性片段或融合蛋白来免疫。赋予蛋白质或肽免疫原性的技术包括与载体缀合或本领域众所周知的其它技术。ActRII受体或激活素多肽的免疫原性部分可在佐剂存在的情况下施用。免疫的进展可以通过检测血浆或血清中的抗体效价来监测。可以免疫原作为抗原，采用标准ELISA或其它免疫测定法评价抗体的水平。

在将动物用ActRII受体多肽的抗原性制品免疫之后，可以获得抗血清，如有需要，可以从血清中分离多克隆抗体。为了产生单克隆抗体，抗体生产细胞(淋巴细胞)可从免疫的动物中收获，并通过标准体细胞融合程序与永生化细胞(如骨髓瘤细胞)融合来产生杂交瘤细胞。这类技术是本领域众所周知的，包括例如产生人单克隆抗体的杂交瘤技术(最早由Kohler and Milstein,(1975)Nature,256:495-497开发)、人B细胞杂交瘤技术(Kozbar etal.,(1983)Immunology Today,4:72)以及EBV杂交瘤技术(Cole et al.,(1985)Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.pp.77-96)。可针对与ActRII受体多肽特异性反应的抗体生产以免疫化学法筛选杂交瘤细胞，并从包含这类杂交瘤细胞的培养物中分离单克隆抗体。

本文所用术语“抗体”旨在包括也与目标多肽特异性反应的抗体的片段。抗体可以使用常规技术片段化，按上文对完整抗体描述的相同的方式针对实用性筛选片段。例如，F(ab)2片段可以通过用胃蛋白酶处理抗体产生。可对所得F(ab)2片段以进行处理以还原二硫键，产生Fab片段。抗体旨在进一步包括双特异性、单链、嵌合、人源化和完全的人分子，其具有由抗体的至少一个CDR区赋予的对ActRII受体或激活素多肽的亲和力。抗体可进一步包含与之连接并能检出的标记(例如标记可以是放射性同位素、荧光化合物、酶或酶辅因子)。

在某些实施方案中，抗体是重组抗体，该术语涵盖部分通过分子生物学技术产生的任何抗体，包括CDR移植的或嵌合的抗体、从文库选择的抗体结构域中组装的人抗体或其它抗体、单链抗体和单结构域抗体(例如人V_H蛋白或驼类V_HH蛋白)。在某些实施方案中，抗体可以是单克隆抗体。例如，产生特异性结合ActRII受体多肽或激活素多肽的单克隆抗体的方法可包括给予小鼠一定数量的包含有效刺激可检测免疫应答的抗原多肽的免疫原性组合物，从小鼠获得抗体生产细胞(例如来自脾的细胞)，将所述抗体生产细胞与骨髓瘤细胞融合以获得抗体生产杂交瘤，并测试所述抗体生产杂交瘤以鉴定产生与所述抗原特异性结合的单克隆抗体的杂交瘤。一旦获得杂交瘤，便可将杂交瘤在细胞培养物中增殖，任选在杂交瘤衍生的细胞产生与抗原特异性结合的单克隆抗体的培养条件下增殖。可将单克隆抗体从细胞培养物中纯化。

正如本领域一般理解的，提及抗体时使用的形容词“与……特异性反应”欲指抗体在目标抗原(例如ActRII受体多肽)和非目标的其它抗原之间中有足够选择性，使得该抗体至少在检测特定类型的生物样品中的目标抗原的存在中是有用的。在采用抗体的某些方法例如治疗应用中，较高程度的结合特异性是合乎需要的。单克隆抗体一般较趋向于(与多克隆抗体相比)有效区分所需抗原和交叉反应的多肽。影响抗体:抗原相互作用的特异性的一个特征是抗体对抗原的亲和力。虽然可以在各种不同亲和力下实现所需特异性，但一般优选的抗体可具有约10^-6、10^-7、10^-8、10^-9或更低的亲和力(解离常数)。鉴于激活素与ActRII受体之间非常紧密的结合，预期是中和性抗激活素或抗ActRII受体抗体一般应具有10^-10或更低的解离常数。

此外，用于筛选抗体以鉴定所需抗体的技术可影响所获得的抗体的性质。例如，如果抗体用于结合溶液中的抗原，则测试溶液结合可能是合乎需要的。可获得用于测试抗体与抗原之间相互作用以鉴定特别期望的抗体的多种不同技术。这类技术包括ELISA、表面等离振子共振结合测定法(例如Biacore.TM.结合测定法，Biacore AB，Uppsala，Sweden)、夹心测定法(例如顺磁性珠子系统，IGEN International Inc.,Gaithersburg，Md.)、蛋白质印迹、免疫沉淀测定法和免疫组织化学。

在某些实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRII信号转导抑制剂包括备选形式的激活素，特别是在I型受体结合结构域中具有改变、可以结合II型受体并且不能形成活性的三元复合体的那些。在某些实施方案中，抑制激活素A、B、C或E或特别是ActRII受体表达的核酸，例如反义分子、siRNA或核酶，可用于本文所述组合物和方法中。在某些实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRII信号转导抑制剂显示对抑制GDF11介导的信号转导相对于TNF-β家族的其它成员、特别是对于GDF8和激活素的选择性。

在其它实施方案中，本文所述组合物和方法中使用的ActRII信号转导抑制剂是具有ActRII受体拮抗剂活性的非抗体蛋白，包括抑制素(即抑制素α亚基)、促滤泡素抑制素(例如促滤泡素抑制素-288和促滤泡素抑制素-315)、Cerberus、促滤泡素抑制素相关蛋白(“FSRP”)、内皮糖蛋白(endoglin)、激活素C、α(2)-巨球蛋白和M108A(108位处甲硫氨酸到丙氨酸的改变)突变的激活素A。

在一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRII信号转导抑制剂是拮抗激活素生物活性和/或结合激活素的促滤泡素抑制素多肽。术语“促滤泡素抑制素多肽”包括这些多肽，其包含促滤泡素抑制素的任何天然存在的多肽以及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)，进一步包括促滤泡素抑制素的任何功能单体或多聚体。可根据之前涉及促滤泡素抑制素和激活素相互作用的研究，鉴定保持激活素结合性质的促滤泡素抑制素多肽变体。例如，WO2008/030367公开了显示对激活素结合重要的特定的促滤泡素抑制素结构域(“FSD”)，通过引用以其整体纳入本文。促滤泡素抑制素多肽包括衍生自任何已知促滤泡素抑制素的序列、与促滤泡素抑制素多肽的序列有至少约80％同一性、任选至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的多肽。促滤泡素抑制素多肽的实例包括成熟的促滤泡素抑制素多肽或人促滤泡素抑制素前体多肽的较短同种型或其它变体，例如WO2005/025601中所述，通过引用以其整体纳入本文。

在一个具体的实施方案中，用于本文所述组合物和方法的ActRII信号转导抑制剂是拮抗激活素生物活性和/或结合激活素的促滤泡素抑制素样相关基因(FLRG)。术语“FLRG多肽”包括这些多肽，其包含FLRG的任何天然存在的多肽以及其保持有用活性的任何变体(包括突变体、片段、融合物和肽模拟物形式)。可采用测定FLRG和激活素相互作用的常规方法鉴定保持激活素结合性质的FLRG多肽变体。参见例如美国专利No.6,537,966，通过引用以其整体纳入本文。FLRG多肽包括衍生自任何已知FLRG的序列、与FLRG多肽的序列具至少约80％同一性、任选至少85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高同一性的序列的多肽。

在某些实施方案中，促滤泡素抑制素多肽和FLRG多肽的功能变体或修饰形式包括具有促滤泡素抑制素多肽或FLRG多肽的至少一部分和一个或多个融合结构域的融合蛋白，所述融合结构域例如促进多肽的分离、检测或稳定化或多聚化的结构域。上文参考ActRIIA和ActRIIB多肽详细论述了合适的融合结构域。在一个实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是包含与Fc结构域融合的促滤泡素抑制素多肽的激活素结合部分的融合蛋白。在另一个实施方案中，ActRII信号转导抑制剂是包含与Fc结构域融合的FLRG多肽的激活素结合部分的融合蛋白。

7.7测定法

可测试各种ActRII多肽变体或可溶性ActRII多肽变体抑制ActRII的能力。此外，可测试化合物抑制ActRII的能力。一旦证实ActRII信号转导活性的抑制剂，这些化合物便可用于本文提供的方法。ActRII可以是ActRIIA或ActRIIB。以下测定法针对ActRIIA进行描述，但对于ActRIIB也可类似地进行。

7.7.1参考人群

在某些实施方案中，参考人群的大小可以是1、5、10、25、50、75、100、200、250、300、400、500或1000个个体。在某些实施方案中，参考人群由随机志愿者组成。在某些实施方案中，参考人群由健康人士组成。在某些实施方案中，参考人群与如第7.5节所述患者人群相同的年龄、体重和/或性别的人组成。在某些实施方案中，参考人群由未患β-地中海贫血的组成。

7.7.2评价蛋白质水平和/或活性

可通过本领域已知的或本文描述的任何方法测定例如血红蛋白、胎儿血红蛋白或GDF11等蛋白质的水平。例如，可采用例如RNA印迹法、PCR分析、实时PCR分析或本领域已知的或本文描述的任何技术，通过评价(例如定量测定)样品中蛋白质的转录RNA，来测定组织样品中例如血红蛋白、胎儿血红蛋白或GDF11等蛋白质的水平。在一个实施方案中，可通过评价(例如定量测定)样品中蛋白质的mRNA，来测定组织样品中蛋白质的水平。

还可采用例如免疫组织化学分析、蛋白质印迹法、ELISA、免疫沉淀法、流式细胞术分析或本领域已知的或本文描述的任何技术，通过评价(例如定量测定)样品中蛋白质的蛋白质表达水平，来测定组织样品中例如血红蛋白、胎儿血红蛋白或GDF11等蛋白质的水平。在具体的实施方案中，蛋白质的水平通过能够定量测定存在于患者组织样品(例如人血清)中蛋白质的量和/或能够检测在用激活素II型受体信号转导抑制剂治疗后蛋白质水平的纠正的方法来测定。在一个实施方案中，组织样品中蛋白质的水平通过采用ELISA评价(例如定量测定)样品中蛋白质的蛋白质表达来测定。

7.7.3血清铁蛋白水平降低

血清铁蛋白水平可根据本领域技术人员已知的测定法测定。通常，成年男性具有介于24和336ng/mL之间的血清铁蛋白浓度。通常，成年女性的介于11和307ng/mL之间。

7.7.4铁水平

铁水平，例如肝或心肌铁水平可根据本领域技术人员已知的测定法测定。例如，铁水平(例如肝铁浓度或心肌铁浓度)可通过磁共振成像测定。

7.7.5红细胞形态

可根据本领域技术人员已知的测定法(例如血涂片)评价红细胞形态。对象的异常红细胞数与对象的红细胞总数的比率可如下测定：通过例如获取血样，进行血涂片，计算涂片中的异常红细胞数，计算涂片中的红细胞总数，通过将涂片中异常红细胞数除以红细胞总数求出比率。对象的嗜碱性点彩红细胞数与对象的红细胞总数的比率可如下测定：例如，获取血样，进行血涂片，计算涂片中带有嗜碱性点彩的红细胞数，计算涂片中的红细胞总数，通过将涂片中带有嗜碱性点彩的红细胞数除以红细胞总数求出比率。对象的异形红细胞数与对象的红细胞总数的比率可如下测定：例如，获取血样，进行血涂片，计算涂片中的异形红细胞数，计算涂片中的红细胞总数，通过将涂片中的异形红细胞数除以红细胞总数求出比率。对象的裂细胞数与对象的红细胞总数的比率可如下测定：例如，获取血样，进行血涂片，计算涂片中的裂细胞数，计算涂片中的红细胞总数，通过将涂片中的裂细胞数除以红细胞总数求出比率。对象的不规则收缩的红细胞数与对象的红细胞总数的比率可如下测定：例如，获取血样，进行血涂片，计算涂片中不规则收缩的红细胞数，计算涂片中的红细胞总数，通过将涂片中的不规则收缩的红细胞数除以红细胞总数求出比率。

7.7.6红细胞反应

可计算实现反应的对象的红细胞反应的持续时间。用于计算反应的持续时间的算法如下：(1)第一反应日＝显示反应的前12周间隔的第一日。最后反应日＝显示反应的最后连续129周间隔的最后一日。最后评价日期＝继续用药对象的最后随访日期或终止治疗的对象的终止日期。可根据反应在最后评价日期之前终止与否，如下计算红细胞反应的持续时间：(1)其反应未持续到治疗期结束时、反应的持续时间不删失的对象，如下计算：反应持续时间＝最后反应日-第一反应日+1；(2)在治疗期结束时继续显示红细胞反应、反应终止日期删失的对象，反应的持续时间如下计算：反应持续时间＝最后反应评价日期-第一反应日+1。

第一红细胞反应的时间可如下计算：第一剂研究药物日到反应开始的第一日可应用以下计算：到反应的时间＝第一反应日-第一次研究药物日+1。

7.7.7输血负担

据估计1单位的红细胞含有约200mg的铁，而身体通常每天只损失1.5mg的铁。可通过测定对象的输血需求(即红细胞输入的量和频率)，来测定按照本文提供的方法治疗的对象的输血负担。作为一个非限制性实例，如果每3周需要输入2个单位红细胞的对象在按照本文提供的方法治疗时输血频率减到每4周，则对象的输血负担减轻25％。

7.7.8临床并发症的评价

可通过本领域技术人员已知的测定法，例如磁共振成像(MRI)和计算机断层扫描，评价对象的髓外造血(EMH)团块。在某些实施方案中，可通过MRI评价对象的髓外造血团块。

可通过本领域技术人员已知的测定法，例如磁共振成像(MRI)，评价脾大。

可按照本领域技术人员已知的测定法例如超声心动描记术(ECHO)，评价三尖瓣返流速度(TRV)。

可通过本领域技术人员已知的测定法，例如磁共振成像(MRI)，评价对象的肝铁浓度。

7.7.9骨质疏松症和骨盐密度

骨质疏松症症状的非限制性实例包括背痛、身高随时间丢失、驼背姿势、易骨折和骨盐密度降低。可通过本领域技术人员已知的测定法，例如通过骨密度扫描(亦称为双能X射线吸光测定法(DXA或DEXA)或骨光密度测定法)和超声，测定按照本文提供的方法治疗的对象的骨盐密度。在某些实施方案中，按照本文提供的方法治疗的对象的骨盐密度通过DXA测定。

7.7.10骨骼畸形

可通过本领域技术人员已知的测定法，例如通过X光和成像技术，例如磁共振成像(MRI)和计算机体层摄影术，测定按照本文提供的方法治疗的对象的骨骼畸形。

7.7.11骨周转

骨周转的各种循环标志物可用于诊断骨失调，例如低骨周转。骨周转的循环标志物是骨形成的标志物，例如骨特异性碱性磷酸酶(bAP)、骨钙蛋白、前胶原I型C端前肽(PICP)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)，一些是骨吸收的标志物，例如吡啶啉、脱氧吡啶啉、酒石酸抗性酸性磷酸酶(TRAP)、5b型TRAP、吡啶啉、脱氧吡啶啉和前胶原I型C端端肽(ICTP)、血清或尿胶原交联物(N-端肽或C-端肽)和25羟基维生素D。也可以使用测量整个甲状旁腺激素(PTH)分子的测定法。熟练的技术人员了解允许评价骨矿物密度(BMD)、骨体积、骨小梁体积和骨小梁厚度的成象方法。参见例如Tilman B.Drueke and Sharon M.Moe,Disturbances of bone and mineral metabolism in chronic kidney disease:aninternational initiative to improve diagnosis and treatment,Nephrol DialTransplant(2004)19:534-536；Okuno S,Inaba M.,Biochemical markers of boneturnover.New aspect.Dialysis and bone metabolic marker,Clin Calcium.2009Aug；19(8):1084-91；Herberth J,Monier-Faugere MC,Mawad HW,Branscum AJ,Herberth Z,Wang G,Cantor T,Malluche HH,The five most commonly used intact parathyroidhormone assays are useful for screening but not for diagnosing bone turnoverabnormalities in CKD-5subjects,Clin Nephrol.2009Jul；72(1):5-14；Lehmann G,OttU,Kaemmerer D,Schuetze J,Wolf G.,Bone histomorphometry and biochemicalmarkers of bone turnover in subjects with chronic kidney disease Stages 3-5,Clin Nephrol.2008Oct；70(4):296-305；Drüeke TB.,Is parathyroid hormonemeasurement useful for the diagnosis of renal bone disease？,KidneyInt.2008Mar；73(6):674-6；Yamada S,Inaba M,Kurajoh M,Shidara K,Imanishi Y,Ishimura E,Nishizawa Y.,Utility of serum tartrate-resistant acid phosphatase(TRACP5b)as a bone resorption marker in subjects with chronic kidney disease:非依赖性from renal dysfunction.,Clin Endocrinol(Oxf).2008Aug；69(2):189-96.Epub 2008Jan 23.See also,Paul D.Miller,Diagnosis and Treatment ofOsteoporosis in Chronic Renal Disease,2009。

监测患有轻微肾功能障碍的CKD对象的骨吸收的另一个标志物是I型胶原N-端肽(S-NTX)的血清浓度。参见例如Hamano T,Fujii N,Nagasawa Y,Isaka Y,Moriyama T,Okada N,Imai E,Horio M,Ito T.,Serum NTX is a practical marker for assessingantiresorptive therapy for glucocorticoid treated subjects with chronickidney disease.,Bone.2006Nov；39(5):1067-72.Epub 2006Jun 16。

还可采用定量计算机体层摄影术(QCT)，测定骨周转。

可对例如Runx2和Alp等标志物进行评价以监测对象中的成骨细胞转变。可对例如Sm22-α等标志物进行评价，以监测血管平滑肌功能和分化的血管平滑肌细胞的水平。

7.7.12心脏大小和心脏肥大

可通过熟练技术人员已知的任何方法，例如磁共振成像、心电描记术、超声心动描记术和非对比增强的心脏计算机体层摄影术，来测定心脏大小和心脏肥大。

7.7.13生命质量

为了评价按照本文提供的方法治疗的对象的生命质量，可利用(36)健康调查简表(SF-26)和/或癌症疗法-贫血的功能评价(FACT-An)。

SF-36(2.0版)是一种自我实施的工具，由评价以下8个健康领域的8个多项量表组成：(1)身体功能(PF)，10项从3a到3j；(2)角色-身体(RP)，4项从4a到4d；(3)身体疼痛(BP)，第7和8项；(4)一般健康状况(GH)，第1和11a到11d项，(5)活力(VT)，第9a、9e、9g和9i项；(6)社交功能(SF)，第6和10项；(7)角色-情绪(RE)，第5a、5b和5c项；和(8)心理健康(MH)，5项9b、9c、9d、9f和9h。还可获得两个整体总评分：(1)身体分量总分(PCS)；和(2)精神分量总分(MCS)。将健康领域评分以及PCS和MCS评分转换成规范型评分(平均值为50，SD为10)，其中评分越高表明健康越佳。SF-36的主要益处是健康领域规范型评分及PCS和MCS规范型评分。可以评价健康领域规范型评分、PCS和MCS规范型评分以及这些规范型评分自基线的变化的概括统计量(n、均值、标准差、中位值、最小值和最大值)。可按照工具开发商提供的用法说明完成SF-36的评分和解决遗漏值的方法。

或者，可利用FACT-An测定按照本文提供的方法治疗的对象的生命质量。FACT-An是一种47项癌症专用问卷，由测量生命质量的4个一般域(身体、社会/家庭、情绪和功能健康)的核心27项一般问卷(FACT-General或FACT-G Total)组成。FACT-An量表的格式为按分量表域安排在1-4页中，用于使用5分Likert评定量表(0＝毫无；1＝少许；2＝有些；3＝相当多；和4＝非常多)自我执行。可按照工具开发商提供的用法说明，完成总量表水平上的FACT工具的评分。可通过汇总一般HRQoL工具的4个领域，来评价FACT-G总评分。

7.7.14不良事件的通用命名标准(CTCAE，4.0版)

1级是指轻微不良事件。具体地讲，1级是指短暂的或轻微的不适。对于1级不良事件不需要限制活动和医学干预/疗法。2级是指中等不良事件。具体地讲，2级是指活动受轻微至中等限制。可能需要一些辅助，然而，对于2级不良事件不需要或需要最少的医学干预/疗法。3级是指严重不良事件。具体地讲，3级是指活动受明显限制。通过需要一些辅助，并需要医学干预/疗法，同时对于3级不良事件住院是可能的。4级是指危及生命的不良事件。具体地讲，4级是指活动受极度限制，需要大量辅助，需要大量医学干预/疗法，并且对于4级不良事件住院或济贫病院是可能的。5级不良事件是死亡。

7.7.15血细胞比容

血细胞比容衡量指定体积的全血中红细胞的百分比，可纳入作为标准全血计数的一部分。血细胞比容对于男性正常为约45％，对于女性约40％。然而，β-地中海贫血患者通常具有低于正常所见血细胞比容的血细胞比容。因此，正按照本文提供的方法治疗的β-地中海贫血患者中血细胞比容的测定允许测定这类治疗的功效。

7.7.16血红蛋白

血红蛋白浓度可按照本领域技术人员已知测定法测定。β-地中海贫血患者通常具有低于通常所见血红蛋白浓度的血红蛋白浓度。因此，of in a正按照本文提供的方法治疗的β-地中海贫血患者血红蛋白浓度的测定允许测定这类治疗的功效。

7.7.17筛选测定法

例如，可对ActRIIA多肽变体对涉及骨产生或骨破坏的基因表达的影响进行评价。根据需要，这可在一种或多种重组ActRIIA配体蛋白(例如激活素)存在下进行，细胞可被转染，以产生ActRIIA多肽和/或其变体，任选产生ActRIIA配体。同样地，可将ActRIIA多肽给予小鼠或其它动物，并可评价一种或多种骨性质，例如密度或体积。还可以评价骨折的愈合速率。双能X射线吸收测定法(DEXA)是一种用于评价动物骨密度的成熟的非侵入性定量技术。在人类中，中枢DEXA系统可用于评价脊柱和骨盆的骨密度。这些是总体骨密度的最佳预测值。外周DEXA系统可用于评价外周骨的骨密度，包括例如手、腕部、踝和脚的骨骼。传统的X射线成像系统，包括CAT扫描，可用于评价骨生长和骨折愈合。此外，骨密度可以使用定量计算机体层摄影术(qCT)来测量。还可以评价骨的机械强度。

在某些方面，本文提供ActRIIA多肽(例如可溶性ActRIIA多肽)和激活素多肽鉴定作为激活素-ActRIIA信号转导途径的激动剂或拮抗剂的化合物(作用剂)的用途。可以测试通过这种筛选鉴定的化合物，以评价其在体外调节骨生长或矿化的能力。任选可在动物模型中进一步测试这些化合物，以评价其在体内调节组织生长的能力。

有多种筛选通过靶向激活素和ActRIIA多肽调节组织生长的治疗剂的方法。在某些实施方案中，可以进行化合物的高通量筛选，以鉴定干扰激活素或ActRIIA介导的对骨的作用的作用剂。在某些实施方案中，进行测定以筛选或鉴定特异性抑制或降低ActRIIA多肽与激活素结合的化合物。或者，可采用测定法鉴定提高ActRIIA多肽与激活素结合的化合物。在进一步的实施方案中，可通过其与激活素或ActRIIA多肽相互作用的能力来鉴定化合物。

多种测定形式将是足够的，且根据本公开内容，本领域普通技术人员仍可了解本文没有明确描述的那些。如本文描述的，本文使用的试验化合物(作用剂)可以通过任何组合化学方法制备。或者，主题化合物可以是体内或体外合成的天然存在的生物分子。例如，待针对其作为组织生长调节物的能力测试的化合物(作用剂)可通过例如细菌、酵母、植物或其它生物体(例如天然产物)产生、以化学法产生(例如小分子，包括肽模拟物)或重组产生。本文预期的试验化合物包括非肽基有机分子、肽、多肽、肽模拟物、糖、激素和核酸分子。在一个具体的实施方案中，试验作用剂是具有小于约2000道尔顿分子量的有机小分子。

试验化合物可以作为单个离散实体提供，或以例如通过组合化学作用制备的较大复杂性的文库提供。这些文库可包含例如醇、烷基卤化物、胺、酰胺、酯、醛、醚和其它有机化合物类别。向试验系统提供的试验化合物可呈分离的形式，或作为化合物的混合物，特别在初步筛选步骤中。任选化合物可以用其它化合物衍生化，并具有便于化合物分离的衍生基团。衍生基团的非限制性实例包括生物素、荧光素、洋地黄毒苷、绿色荧光蛋白、同位素、多组氨酸、磁珠、谷胱甘肽S转移酶(GST)、光活化性交联剂或其任何组合。

在测试化合物和天然提取物的文库的许多药物筛选程序中，高通量测定是期望的，以使在规定时间内调查的化合物数目最大化。在例如可用纯化的或半纯化的蛋白质获得无细胞系统中进行的测定法作为“初步”筛选通常是优选的，因为它们可产生以允许快速开发和相对容易地检测由试验化合物介导的分子靶标中的改变。此外，试验化合物的细胞毒性和/或生物利用率的作用一般在体外系统中可忽略，该测定法反而主要集中于药物对分子靶标的作用，正如在ActRIIA多肽和激活素之间结合亲和力的改变方面这可能是明显的。

仅为了说明，在示例性筛选测定法中，使目标化合物与分离的和纯化的ActRIIA多肽接触，所述ActRIIA多肽通常能够结合激活素。然后向化合物和ActRIIA多肽的混合物中加入含有ActRIIA配体的组合物。ActRIIA/激活素复合物的检测和定量提供用于测定化合物抑制(或强化)ActRIIA多肽与激活素之间形成复合物的能力的手段。可通过从使用各种浓度的试验化合物获得的数据制成剂量反应曲线来评定化合物的功效。此外，还可进行对照测定以提供用于对比的基线。例如，在对照测定中，将分离的和纯化的激活素加入到含有ActRIIA多肽的组合物中，在不存在试验化合物时测定ActRIIA/激活素复合物的形成。要了解，将反应物混合的顺序一般可变化，可以同时地混合。此外，可使用细胞提取物和裂解物代替纯化的蛋白质以提供合适的无细胞测定系统。

ActRIIA多肽与激活素之间的复合物形成可以通过多种技术来检测。例如，可使用例如可检测标记的蛋白质，例如放射性标记的(例如32P、35S、14C或3H)、荧光标记的(例如FITC)或酶标记的ActRIIA多肽或激活素，通过免疫测定法，或通过层析检测，定量测定复合物形成的调节。

在某些实施方案中，在直接或间接测量ActRIIA多肽与其结合蛋白之间相互作用的程度时，本文预期使用荧光偏振测定法和荧光共振能量转移(FRET)测定法。此外，其它检测方式，例如基于光波导(PCT公开文本WO 96/26432和美国专利号5,677,196)、表面等离振子共振(SPR)、表面电荷传感器和表面力传感器的那些，与本文描述的许多实施方案是兼容的。

此外，相互作用陷阱测定法，也称为“双杂交测定法”可用于鉴定破坏或强化ActRIIA多肽与它的结合蛋白之间相互作用的作用剂。参见例如美国专利号5,283,317；Zervos et al.(1993)Cell 72:223-232；Madura et al.(1993)J Biol Chem 268:12046-12054；Bartel et al.(1993)Biotechniques14:920-924；以及Iwabuchi et al.(1993)Oncogene 8:1693-1696)。在一个具体的实施方案中，本文预期使用反向双杂交系统来鉴定解除ActRIIA多肽与其结合蛋白之间的相互作用的化合物(例如小分子或肽)。参见例如Vidal and Legrain,(1999)Nucleic Acids Res 27:919-29；Vidal and Legrain,(1999)Trends Biotechnol 17:374-81；以及美国专利号5,525,490、5,955,280和5,965,368。

在某些实施方案中，通过其与ActRIIA或激活素多肽相互作用的能力来鉴定主题化合物。化合物与ActRIIA或激活素多肽之间的相互作用可以是共价的或是非共价的。例如，在蛋白质水平上鉴定这类相互作用，可使用体外生物化学方法，包括光交联、放射性标记的配体结合和亲和层析法(Jakoby W B et al.,1974,Methods in Enzymology 46:1)。在某些情况下，可在基于机制的分析法，例如检测与激活素或ActRIIA多肽结合的化合物的测定法中，筛选化合物。这可包括固相或液相结合事件。或者，编码激活素或ActRIIA多肽的基因可与报告基因系统(例如β-半乳糖苷酶、萤光素酶或绿色荧光蛋白)一起转染到细胞中，并优选通过高通量筛选针对文库进行筛选，或用文库的独立成员进行筛选。可使用其它基于机制的结合测定法，例如检测自由能变化的测定法。结合测定法可用与孔、珠粒或芯片固定的或通过固定化抗体捕获的或通过毛细管电泳分离的靶标来进行。通常可使用比色或荧光或表面等离振子共振检测结合的化合物。

在某些方面，本文提供调节(刺激或抑制)骨形成和提高骨质量的方法和作用剂。因此，所鉴定的任何化合物可以在完整细胞或组织中体外或体内测试，以证实其调节骨生长或矿化的能力。为此目的可利用本领域已知的各种方法。特别是，可针对化合物提高骨周转的能力对其进行测试。

例如，可通过在基于细胞的测定中测量Msx2的诱导或骨祖细胞向成骨细胞的分化来测定ActRIIA或激活素多肽或试验化合物对骨或软骨生长的作用(参见例如Daluiski etal.,Nat Genet.2001,27(1):84-8；Hino et al.,Front Biosci.2004,9:1520-9)。基于细胞的测定法的其它实例包括分析主题ActRIIA或激活素多肽和试验化合物在间充质祖细胞和成骨细胞中的成骨活性。举例来说，可以构建表达激活素或ActRIIA多肽的重组腺病毒，以感染多能间充质祖代C3H10T1/2细胞、前成骨细胞性C2Cl2细胞和成骨细胞性TE-85细胞。然后通过测量碱性磷酸酶的诱导、骨钙素和基质矿化来测定成骨活性(参见例如Cheng etal.,J bone Joint Surg Am.2003,85-A(8):1544-52)。

本文还提供测量骨或软骨生长的体内测定法。例如，Namkung-Matthaiet al.,Bone,28:80-86(2001)公开了大鼠骨质疏松模型，在其中研究了骨折后早期的骨修复。Kuboet al.,Steroid Biochemistry&Molecular Biology,68:197-202(1999)也公开了大鼠骨质疏松模型，在其中研究了骨折后后期的骨修复。Andersson et al.,J.Endocrinol.170:529-537描述了小鼠骨质疏松症模型，其中小鼠卵巢被切除，这引起小鼠丢失相当的骨矿物含量和骨矿物密度，其骨小梁损失大约50％的骨矿物密度。通过给予例如甲状旁腺激素等因子，可提高卵巢切除小鼠的骨密度。在某些方面，可以使用本领域已知的骨折愈合测定法。这些测定法包括骨折技术、组织学分析和生物力学分析，其描述于例如美国专利号6,521,750，通过引用以其有关其引起以及测量骨折的程度和修复过程的实验方案的公开内容的整体并入本文。

7.8组合疗法

在某些实施方案中，本文提供的方法与第二药物活性剂组合进行。这类组合疗法可以通过各治疗成分同时、序贯或单独给药的方式来实现。此外，当作为这种组合疗法的成分给予时，ActRII信号转导抑制剂与第二药物活性剂可以是协同的，从而与通常作为单一疗法给予的任一成分的剂量相比，可以降低两种成分的任一种或两种的日剂量。或者，当作为这种组合疗法的成分给予时，本文提供的ActRII信号转导抑制剂与第二药物活性剂可以是加成的，从而与通常作为单一疗法给予的任一成分的剂量相比，每种成分的日剂量是相似的或相同的。

在某些实施方案中，本文提供的ActRII信号转导抑制剂与第二药物活性剂或疗法在同一天给予。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂在第二药物活性剂或疗法之前一天、两天、三天或更多天给予。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂在第二药物活性剂或疗法之后一天、两天、三天或更多天给予。在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂在第二药物活性剂或疗法的一周、两周、三周或更多周之内给予。

在某些实施方案中，第二药物活性剂或疗法分别是用于治疗β-地中海贫血的活性剂或疗法。用于治疗β-地中海贫血的药物活性剂或疗法的非限制性实例包括红细胞输入、铁螯合疗法例如去铁胺、去铁酮和/或地拉罗司、胎儿血红蛋白诱导剂例如羟基脲和造血干细胞移植。

7.9药物组合物

在某些实施方案中，ActRII信号转导抑制剂(例如ActRII多肽)与药学上可接受的载体一起配制用于本文描述的方法。例如，ActRII多肽可以单独给予或作为药物制剂的成分(治疗组合物)给予。可配制主题化合物以用于人类或兽医学的任何便利方式给予。ActRII可以是ActRIIA或ActRIIB。

在一个优选的实施方案中，配制ActRII信号转导抑制剂用于皮下给药。

在另一个优选的实施方案中，ActRII信号转导抑制剂作为无菌、无防腐剂的冻干粉或块封装入容器中。在某些实施方案中，容器包含25mg的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，包含25mg的ActRII信号转导抑制剂的容器包含共37.5mg的蛋白质。在某些实施方案中，包含25mg的ActRII信号转导抑制剂的容器中的ActRII信号转导抑制剂用0.68mL注射用水复溶。在某些实施方案中，容器包含75mg的ActRII信号转导抑制剂。在某些实施方案中，包含75mg的ActRII信号转导抑制剂的容器包含共87.5mg的蛋白质。在某些实施方案中，包含75mg的ActRII信号转导抑制剂的容器中的ActRII信号转导抑制剂用1.6mL注射用水复溶。在某些实施方案中，容器中的ActRII信号转导抑制剂用一定体积的注射用水复溶，使得注射用水中复溶ActRII信号转导抑制剂的终浓度为50mg/mL，其pH约6.5。在某些实施方案中，在复溶的10小时内将ActRII信号转导抑制剂给予对象。在某些实施方案中，容器包含10mM基于柠檬酸盐缓冲液的溶液中浓度为50mg/mL的ActRII信号转导抑制剂，其中10mM基于柠檬酸盐缓冲液的溶液包含10mM柠檬酸盐(pH 6.5)、9％蔗糖和0.02％聚山梨醇酯80。在某些实施方案中，将容器保存在2℃和8℃之间。在某些实施方案中，将容器保存在2℃和8℃之间18个月。在某些实施方案中，容器是带有灰色丁基涂层塞的3mL玻璃小瓶。在某些实施方案中，容器是带有灰色橡胶塞的3mL玻璃小瓶。在某些实施方案中，用带有颜色塑料钮的波纹铝掀盖将橡胶塞在适当位置上固定。在某些实施方案中，3mL玻璃小瓶包含25mg的ActRII信号转导抑制剂，且彩色塑料钮是红色的。在某些实施方案中，3mL玻璃小瓶包含75mg的ActRII信号转导抑制剂，且彩色塑料钮是白色的。

在一个具体的实施方案中，将ActRII信号转导抑制剂作为无菌、无防腐剂冻干粉或块封装在容器中。在一个具体的实施方案中，容器包含10mM柠檬酸盐缓冲液(pH 6.5)中的50mg/mL的ActRII信号转导抑制剂。在一个具体的实施方案中，容器包含56mg的ActRII信号转导抑制剂、0.19mg的一水合柠檬酸、3.03mg的柠檬酸三钠二水合物、0.24mg的聚山梨醇酯80和100.80mg的蔗糖。

在某些实施方案中，本文提供的治疗方法包括全身或作为植入物或装置局部给予所述组合物(包含ActRII信号转导抑制剂)。当给予时，用于本文提供的用途的治疗组合物是无热原的、生理学可接受的形式。ActRII拮抗剂之外的也可任选被包括在上述组合物中的治疗上有用的作用剂可与主题化合物(例如ActRII多肽，例如ActRIIA和/或ActRIIB多肽(参见第7.6节)同时或序贯给予。

通常，ActRII信号转导拮抗剂将胃肠外给予。在一个优选的实施方案中，ActRII信号转导拮抗剂将皮下给予。适于胃肠外给予的药物组合物可包含一种或多种ActRII多肽与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性溶液、分散体、悬浮液或乳剂或无菌粉末组合，所述无菌粉末可恰在临用前复溶为无菌可注射溶液剂或分散体，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使得制剂与既定接受者的血液等渗的溶质或者助悬剂或增稠剂。在用于本文描述的方法中的药物组合物中可采用的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油例如橄榄油和可注射有机酯，例如油酸乙酯。例如，通过使用包衣材料例如卵磷脂、在分散体的情况下通过维持所需的粒子大小以及通过使用表面活性剂，可维持适当的流动性。

本文所述组合物还可含有辅助剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。可以通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟苯甲酸、氯代丁醇、苯酚、山梨酸等，来实现对微生物作用的保护。还可能需要组合物中包括等渗剂，例如糖、氯化钠等。此外，通过包含延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以得到可注射药物形式的延长吸收。

要了解，可由主治医生考虑改进本文所述化合物(例如ActRII多肽，例如ActRIIA和/或ActRIIB多肽(参见第7.6节)，如上文第7.3.2节表1和表2所述)的作用的各种因素，来确定剂量方案。

在某些实施方案中，药物组合物中的ActRII信号转导抑制剂是基本纯的。具体地讲，药物组合物中至多20％、10％、5％、2.5％、1％、0.1％或至多0.05％的化合物是ActRII信号转导抑制剂和药学上可接受的载体以外的化合物。

在某些实施方案中，按照本文提供的方法，将ActRII信号转导抑制剂在室温下给予患者(例如如第7.5节中所列)。

8.实施例

8.1实施例1：测定患有输血依赖性Β地中海贫血的成年人中MACTRIIB-FC的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究

该实施例提供测定因β-地中海贫血需要定期红细胞输入的成人中ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究的概述。3期研究的适应症是患有输血依赖性β-地中海贫血、患有经确诊的β-地中海贫血或血红蛋白E/β-地中海贫血、排除了血红蛋白S/β-地中海贫血的成人。

8.1.1目标

3期研究的主要目标是测定有红细胞反应的对象的比例，所述红细胞反应定义为与ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)最佳支持治疗(BSC)相对于安慰剂加BSC的随机分配之前的12周间隔相比，在最少6个月治疗后在连续12周内输血负担(随时间而变的单位红细胞)减轻≥33％。

3期研究的次要目标包括：(1)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的安全性和免疫原性；(2)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对不输血≥8周的对象的比例的作用；(3)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对肝铁浓度(LIC)的变化的作用；(4)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗对生命质量(QoL)度量(例如新的非输血依赖性特异性PRO，SF-36)的作用；(5)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对骨质疏松症(骨盐密度)的作用；(6)评价ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)在健康资源利用中的用途；(7)评价与随机分配前的12周间隔相比，在主要终点分析中所用相同的12周时间内，相对于安慰剂加BSC，ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对输血负担变化的平均百分比的作用；(8)评价输血负担减轻或输血非依赖性的持续时间；(9)评价到红细胞反应的时间；(10)评价ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对血清铁蛋白变化的作用；(11)评价ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对心脏铁过载的变化的作用；和(12)评价患有β-地中海贫血的对象中ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的群体药代动力学(PK)。

探索性目标为：(1)分析基线和对用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗有反应的血清GDF11的变化的关系；和(2)分析ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对胎儿血红蛋白(HbF)的变化的作用。

8.1.2研究设计

该实施例提供患有输血依赖性β-地中海贫血的成人中测定相对于最佳支持治疗(BSC)的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)(ACE-536)加最佳支持治疗的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究。研究分为(i)筛查期，(ii)双盲治疗期，(iii)开放标记延长期，和(iv)随访期。

在测定适合性的筛查期确定患者适合性，所述筛查期在第一日第一剂之前28天内。患者根据以下因素分级：(1)基线的输血负担，其中高输血负担为在随机分配之前24周≥15个RBC单位，且其中低输血负担为在随机分配之前24周7-14个RBC单位；和(2)地理区域。

在治疗期内，可将合适的对象以2:1比率随机分配到实验组(ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25))加BSC或对照组(安慰剂)加BSC。双盲治疗期被视为在研究第1日(即第一日第一剂)后的前48周，独立于剂量延期。对于各对象用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的治疗始于研究第1日。对象将以每3周一次通过皮下(SC)注射给予的约0.8mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25)的剂量水平开始治疗持续48周。可将ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的剂量滴定直到最大约1.25mg/kg。

在治疗期内以及在延长期内，可逐步将对象的剂量从起始剂量约0.8mg/kgActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)递增到约1mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)然后到约1.25mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)，直到需要剂量变动。在前两个周期(即前6周)内，剂量递增可以输血频率为基础。

可按上文表1和表2中所述，遵照剂量变动指导原则，延迟和/或减少各对象ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)或安慰剂的剂量。

所有对象都将有权选择成为开放标记延长期的成员，并在完成48周双盲治疗期时接受ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)，这由研究者斟酌决定。开放标记延长期将持续96周(即2年)，并经历上表1和表2中描述的剂量递增、剂量变动、剂量延期和减少。延长期可根据演变的安全性数据延长。

完成开放标记延长期或不招募到开放标记延长期或提早终止治疗的对象将转入治疗后随访期。随访期将持续到对象最后一剂研究药物之后12周。

8.1.2.1对象群体

对象群体由诊断为输血依赖性β-地中海贫血(包括血红蛋白E/β-地中海贫血)、年龄≥18岁并且是输血依赖性的对象组成。输血依赖性定义为在随机分配之前24周每24周定期输血≥7个红细胞单位且非输血期≥35天。在某些方面，输血依赖性定义为在随机分配之前24周每24周定期输血>6个红细胞单位且非输血期≥35天。在某些方面，输血依赖性定义为在随机分配之前24周每24周定期输血>5个红细胞单位且非输血期≥35天。

8.1.2.2研究时长

各对象的研究参与为约至多160周(40个月)，包括：至多4周(1个月)筛查期，48周(12个月)安慰剂对照治疗期，接着将持续约直到96周(2年)的开放标记延长期。治疗后随访期将在最后一次剂量后持续12周(3个月)。

每个个别对象的治疗结束定义为治疗期或开放标记延长期中的最后一次随访的日期，无论哪个是最后日期。研究结束定义为治疗期或开放标记延长期中每个个别对象的最后一次随访的日期，无论哪个是最后日期，以及完成治疗后随访期的12周。试验结束定义为对象完成治疗后随访的最后一次随访的日期，或按方案和/或统计分析计划的预先规定，对于主要、次要和/或探查性分析需要的最后一名对象的最后一个数据点的接收日期，无论哪个是最后日期。

8.1.2.3研究治疗

ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)将作为冻干粉提供，将该冻干粉在复溶后作为给对象皮下(SC)注射给予对象。如适用的话，将皮下注射在治疗期内和在开放标记延长期每3周给予上臂、腹部或大腿。对象将以约0.8mg/kg剂量水平开始ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)，并且可将对象的剂量递增直到最大约1.25mg/kg(参见上表1和表2)。

研究人员在临床地点可将安慰剂(生理盐水)作为给对象的皮下(SC)注射给予对象。在治疗期内每3周将皮下注射给予上臂、腹部或大腿。

8.1.2.4关键功效评价概述

主要功效评价是对于ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)相对于安慰剂加BSC，与随机分配前的12周间隔相比，在治疗最少6个月后评价的在连续12周内输血负担减轻≥33％(随时间而变的单位红细胞)的对象的比例。

次要功效评价包括：(1)在治疗期间不输血≥8周的对象的比例；(2)通过磁共振成像(MRI)测定的肝铁浓度的变化(LIC，mg/g干重)；(3)生命质量的变化(QoL；采用TranQoL)；和(4)铁螯合疗法平均日剂量的变化。

其它功效评价可包括：(1)通过DXA测定的全髋和腰脊柱骨盐密度；(2)医疗保健资源利用；(3)使用相同的12周时间作为主要终点的输血负担百分比变化；(4)输血负担减轻或输血非依赖性的持续时间；(5)到红细胞反应的时间；(6)血清铁蛋白变化；和(7)通过MRI测定的心脏铁过载的变化；通过SF-36测定的QoL的变化.

8.1.2.5关键安全性评价概述

可通过监测AE、临床实验室试验、生命体征、心电图(ECG)、心脏多普勒(cardiacDoppler)、抗药物抗体(ADA)测试和ECOG体能状况，针对安全性对所有患者进行评价。

8.1.2.6关键探索性评价的概述

将评价用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗对象降低对象的血清GDF11浓度/水平和/或提高胎儿血红蛋白浓度/水平的能力。

8.2实施例2：测定患有非输血依赖性Β地中海贫血的成人中ACTRIIB-HFC(SEQ IDNO:25)的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究

该实施例提供测定患有非输血依赖性Β地中海贫血的成人的ACTRIIB-HFC(SEQID NO:25)的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究概述。3期研究的适应症为患有非输血依赖性Β地中海贫血的成人，其确诊为β-地中海贫血或血红蛋白E/β-地中海贫血。

8.2.1目标

3期研究的主要目标是测定ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)在诊断为非输血依赖性β-地中海贫血、有记录的β-地中海贫血或血红蛋白E/β-地中海贫血诊断、年龄≥18岁且在随机分配之前的24周时间内已接受0-6个红细胞单位、平均基线血红蛋白水平<10.0g/dL的对象中的作用。在某些方面，对象在随机分配之前的24周时间内已接受0-5个红细胞单位。

3期研究的次要目标包括：(1)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的安全性和免疫原性；(2)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对肝铁浓度(LIC)的变化的作用；(3)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗对生命质量(QoL)度量(例如新的非输血依赖性特异性PRO，SF-36)的作用；(4)评价相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对包括髓外造血团块、腿溃疡、脾大、肺动脉高压(PAH；通过三尖瓣反流速度(TRV)测量)和骨质疏松症(通过骨盐密度测量)等在内的地中海贫血的并发症(当存在时)的改善的作用；(5)评价相对于安慰剂相对于随机分配之前的4周时间最后4周治疗中使用的铁螯合疗法(ICT)平均日剂量的变化；(6)评价ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对血清铁蛋白变化的作用；(7)评价相对于安慰剂在治疗期间在连续12周间隔内ActRIIB-hFc(SEQID NO:25)对血红蛋白水平自基线的平均变化；(8)评价红细胞反应的持续时间；和(9)评价患有β-地中海贫血的对象中ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的群体药代动力学(PK)。

探索性目标为：(1)分析基线和对用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗有反应的血清GDF11的变化的关系；(2)分析ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对胎儿血红蛋白(HbF)的变化的作用；(3)分析ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对RBC质量的体内功效；和(4)分析ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对健康资源利用的作用。

8.2.2研究设计

该实施例提供测定相对于最佳支持治疗患有非输血依赖性β-地中海贫血的成人中ACTRIIB-HFC(SEQ ID NO:25)(ACE-536)加最佳支持治疗的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究。研究分为(i)筛查期，(ii)双盲治疗期，(iii)开放标记延长期，和(iv)随访期。

在测定适合性的筛查期确定患者适合性，所述筛查期在随机分配之前28天内。患者根据以下因素分级：(1)基线血红蛋白水平(≥8.5g/dL或<8.5g/dL)，和(2)ICT应用。

在治疗期内，可将合适的对象以2:1比率随机分配到实验组(ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25))加BSC或对照组(安慰剂)加BSC。双盲治疗期被视为在研究第1日(即第一日第一剂)后的前48周，独立于剂量延期。对于各对象用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的治疗始于研究第1日。对象将以每3周一次通过皮下(SC)注射给予的约0.8mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25)的剂量水平开始治疗持续持续48周。可将ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的剂量滴定直到最大约1.25mg/kg。

在治疗期内以及在延长期内，可逐步使对象的剂量从起始剂量约0.8mg/kgActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)递增至约1mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)然后到约1.25mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)，除非需要剂量变动。在前两个周期(即前6周)内，剂量递增可以输血频率为基础。

8.2.2.1对象群体

对象群体由诊断为非输血依赖性β-地中海贫血、有记录的β-地中海贫血或血红蛋白E/β-地中海贫血诊断、年龄≥18岁且在随机分配之前的24周时间内已接受0-6个RBC单位、平均基线血红蛋白水平<10.0g/dL的对象组成。在某些方面，在随机分配之前的24周时间内对象曾接受0-5个RBC单位。

8.2.2.2研究时长

8.2.2.3研究治疗

8.2.2.4关键功效评价概述

主要功效评价是显示以下红细胞反应的对象的比例：相对于安慰剂加BSC，在最少6个月治疗期后，对象是不输血的，且血红蛋白从≥1.0g/dL的基线(通过在连续12周间隔内血红蛋白值的均值测量)增加。这类评价需要在4周周期内由中心实验室在≥1周间隔进行的至少2个血红蛋白测量结果。

次要功效评价包括：(1)通过磁共振成像(MRI)测定的肝铁浓度的变化(LIC，mg/g干重)；(2)生命质量的变化(QoL；新的非输血依赖性特异性患者报告的结果(PRO))；(3)铁螯合疗法每日剂量的变化；(4)血清铁蛋白浓度的变化；(5)在12周内血红蛋白自基线的平均变化；(6)在不存在输血的情况下平均血红蛋白自基线增加≥1.0g/dL的持续时间；(7)药代动力学参数和暴露-反应关系；和(8)下列一种或多种病态的变化：(i)通过MRI测定的髓外造血团块体积；(ii)腿溃疡大小；(iii)通过MRI测定的脾体积；(iv)通过超声心动图测量的TRV；和(v)通过DXA测量的骨盐密度。

8.2.2.5关键安全性评价概述

可通过监测AE、临床实验室试验、生命体征、心电图(ECG)、心脏多普勒、抗药物抗体(ADA)测试和ECOG体能状况，针对安全性对所有患者进行评价。

8.2.2.6关键探索性评价概述

将评价用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗对象对降低对象的血清GDF11浓度/水平和/或提高胎儿血红蛋白浓度/水平的能力。此外，还将评价用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗对象对红细胞质量的影响。最后，还将评价用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗对象对对象的健康资源利用的影响。

8.3实施例3：ACTRIIB-HFC(SEQ ID NO:25)信号转导抑制剂在患有β地中海贫血的成人中增加血红蛋白和减轻输血负担和降低肝铁浓度

8.3.1引言

正在开发用于治疗β-地中海贫血的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)，一种含有修饰的激活素受体的融合蛋白。在β-地中海贫血中，贫血和并发症因过量α-珠蛋白驱动的无效性红细胞生成而产生。ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)与GDF11和TGF-β超家族中的其它配体结合以促进晚期红细胞分化。非临床和临床研究表明ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)具有无效性红细胞生成的耐受良好和纠正的作用(Suragani R，Blood 2014，Attie K，Am JHematol 2014)。

该实施例提供来自进行中的2期多中心开放标记剂量探索研究以评价患有输血依赖性或非输血依赖性β-地中海贫血的成人中ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的数据。功效结果包括患有非输血依赖性β-地中海贫血的患者的血红蛋白(Hb)增加、患有输血依赖性β-地中海贫血的患者的RBC输入负担减轻和由磁共振成像(MRI)所得的肝铁浓度(LIC)。

8.3.2方法

纳入标准包括≥18岁患有定义为输血依赖性或非输血依赖性、基线Hb<10.0g/dL的贫血的人。ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)每3周给予直到5剂与2个月随访研究。时序组(每个n＝6)以0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.25mg/kg给药。延期组(n＝30)正在进行中；完成研究的患者可招募到正进行中的12个月延期研究中。

8.3.3结果

可获得治疗持续3个月的35名患者(25名非输血依赖性患者和10名输血依赖性患者)的初步数据(截至日期)。患者年龄中值为35.0岁(20-57岁)，86％的患者有既往脾切除术。非输血依赖性患者的平均(SD)基线Hb为8.4(±0.9)g/dL。输血依赖性患者在治疗前的输血负担范围为6-8个单位/12周。20名患者处于在基线上稳定的铁螯合疗法(ICT)中。

与用0.2-0.6mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25；n＝17)治疗的患者中的1.2g/dL相比，用0.8-1.25mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25；n＝8)治疗的非输血依赖性患者中的Hb的平均(SD)最大增加为1.7g/dL。与较低剂量组中17名患者中的零患者相比，较高剂量组中6名中3名(38％)患者Hb的平均增加>1.5g/dL，这持续≥2周(平均持续时间为9周)。与12周治疗前相比，用0.8-1.25mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的所有9名输血依赖性患者在12周治疗期间输血负担减轻>20％(平均72％，范围43-100％)。

在输血依赖性患者中，尽管铁螯合疗法，但平均基线肝铁浓度为7.4mg Fe/g干重(n＝9)，且到ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗第16周肝铁浓度的平均降低为16.3％。在基线肝铁浓度≥5mg/g干重的非输血依赖性患者中，与给予0.2-0.4mg/kg ActRIIB-hFc(SEQID NO:25；n＝5)剂量的患者的7.0％相比，给予0.6-1.25mg/kg ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25；n＝5)剂量的患者的肝铁浓度的平均降低为18.2％。在基线肝铁浓度<5mg/kg干重的非输血依赖性患者中，平均肝铁浓度的变化为-1.2％(n＝10)。在基线长期存在的腿溃疡的3名患者(2名非输血依赖性患者，1名输血依赖性患者)在开始ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗后4-6周内基本愈合。

ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)一般是耐受良好的，迄今无报告的相关严重不良事件。最常见的相关不良事件包括骨痛、头痛、肌痛、四肢痛和虚弱。未观察到血小板或白细胞的明显改变。

8.3.4结论

每3周皮下给予患者多达5剂的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)一般是安全的和耐受良好的，在非输血依赖性β-地中海贫血患者中Hb水平升高，在输血依赖性β-地中海贫血患者中输血需求降低。输血依赖性和非输血依赖性患者两者在治疗期间肝铁浓度大大降低，腿溃疡的愈合发生在3名患者的3人中。ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对患有输血依赖性或非输血依赖性β-地中海贫血的患者是有前景的疗法。

8.4实施例4：在患有β地中海贫血的成人中ACTRIIB-HFC(SEQ ID NO:25)信号转导抑制剂增加血红蛋白和减轻输血负担并降低肝铁浓度(续)

8.4.1引言

见引言(第8.3.1节)和材料与方法(第8.3.2节)。该实施例提供来自第8.3节、在2期研究的最后日期获得的额外数据。简单地说，剂量递增组(共35名患者)接受0.2-1.25mg/kg(每组3-6名患者)。具体地讲，剂量递增组群的剂量为0.2(6名患者)；0.4(6名患者)；0.6(6名患者)；0.8(6名患者)；1.0(6名患者)和1.25mg/kg(5名患者)。延期组以0.8mg/kg开始(4名患者；剂量水平在2名患者中增加到1.0mg/kg；可能的给药剂量高达1.25mg/kg)。每3周皮下给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)达3个月。额外12个月治疗的延期研究正在进行中。主要功效终点如下。对于非输血依赖性患者(NTD；小于4U/8周，血红蛋白小于10g/dl)：≥1.5g/dL的Hb增加≥2周；对于输血依赖性患者(TD；等于或超过4U/8周证实超过6个月)：输血负担减轻≥20％超过12周。次要功效终点为肝铁浓度(通过MRI测量)、血清铁蛋白和红细胞生成的生物标志物。

8.4.2结果

可获得用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗进行治疗了3个月的39名患者(25名非输血依赖性患者和14名输血依赖性患者)的初步数据(截至日期)，4名患者在随后12个月延长期继续用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗进一步治疗。患者年龄中值为40.0岁(20-57岁)，49％为男性，32％患者有既往脾切除术。非输血依赖性患者(NTD)的平均(SD)基线Hb为8.3(±0.9)g/dL。NTD中的平均肝铁浓度(通过MRI)为5.8±3.8mg/g dw。输血依赖性患者接受平均7.3(±0.9)个RBC单位/12周，并具有5.2(±5.7)mg/g dw的平均肝铁浓度(LIC)。至于LIC，临床目标是在非输血依赖性患者中维持LIC低于5mg/g dw，在输血依赖性患者中维持7mg/g dw。

与较低剂量组(即0.2＝0.6mg/kg)中17名患者中的零患者相比，较高剂量组(即0.8-1.25mg/kg)中，8名非输血依赖性患者中4人(50％)的Hb平均增加>1.5g/dL，这持续≥2周。与较低剂量组(即0.2-0.6mg/kg)中17名患者中的零患者相比，较高剂量组(即0.8-1.25mg/kg)中8名非输血依赖性患者中3人(38％)的Hb平均增加>1.5g/dL，这持续≥9周。

基线LIC<5mg/g dw的10名非输血依赖性患者中10人(100％)维持LIC<5mg/g dw。在3名患者中，在4个月治疗期进程中LIC下降介于约0.5mg/g dw和约2mg/g dw之间。在2名患者中，在4个月治疗期内LIC增加介于约0.5mg/g dw和约1.0mg/g之间，而在5名患者中，在4个月治疗期内LIC基本保持不变。接受铁螯合剂2名患者发现其LIC降低达0.5mg/g dw或更少。

基线LIC≥5mg/g dw的12名非输血依赖性患者中8人(67％)在16周治疗期内降低≥1mg/g dw(介于至少1mg/g dw和多达4.6mg/g干重之间)。8名患者中5人在这段时间接受铁螯合剂。8名患者中5人在16周治疗期内降低约≥2mg/g dw，所述患者中的3人还接受了铁螯合剂。在16周治疗期内，12名患者中的2人LIC增加≥1mg/g dw，1名患者LIC增加≥2mg/gdw。

在非输血依赖性患者中，发现血红蛋白增加与LIC降低相关(R²＝0.305，p值＝0.063)。

在12周内接受剂量水平为0.6-1.25mg/kg的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗的10名输血依赖性患者中10人经历了>40％输血负担减轻。9/10的这些患者经历>60％减轻，2/10患者经历>80％输血负担减轻。

基线LIC<7mg/g dw的7名输血依赖性患者中7人(100％)在4个月ActRIIB-hFc(SEQID NO:25)治疗期内维持LIC<7mg/g dw。5名患者经历约0.5mg/g dw至约2.0mg/g dw的降低，2名患者在4个月ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗期内经历约0.5mg/g dw和约1.0mg/gdw之间的增加。除ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)以外，所有7名患者还接受了铁螯合剂。

基线LIC≥7mg/g dw的3名输血依赖性患者中2人在16周ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗期内经历≥1mg/g dw(1.96mg/g dw和4.7mg/g dw)的降低。除ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25)以外，所有3名患者还接受了铁螯合剂。

患有长期持续性腿溃疡的3名患者中3人在用ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)治疗时经历愈合。1名非输血依赖性患者以0.4mg/kg的剂量接受ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)，在6周后经历完全愈合。1名输血依赖性患者以1.0mg/kg的剂接受ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)，在18周后经历完全愈合。1名输血依赖性患者以1.25mg/kg的剂量接受ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)，在5周后经历完全愈合。

ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)一般是耐受良好的，迄今没有报告的相关严重不良事件。最常见的相关不良事件包括骨痛(23.1％的患者)、肌痛(17.9％的患者)、头痛(15.4％的患者)、虚弱(10.3％的患者)、四肢痛(7.7％的患者)、流感(5.1％的患者)、斑点(5.1％的患者)和肌肉骨骼痛(5.1％的患者)。

8.4.3结论

每3周皮下给予患者多达16周的ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)一般是安全的和耐受良好的。发现在非输血依赖性患者中用较高剂量ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25；0.8-1.25mg/kg)治疗的>50％患者血红蛋白持续增加。在接受ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的大多数输血依赖性患者中观察到>33％的输血负担减轻。在用或不用铁螯合疗法的大多数输血依赖性和非输血依赖性患者中观察到肝铁浓度降低。接受ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)的3名患者中3人显示腿溃疡的快速愈合。

8.5实施例5：因β地中海贫血需要定期红细胞输入的成人中测定相对于安慰剂ACTRIIB-HFC(SEQ ID NO:25)的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究

该实施例是在实施例1所述因β-地中海贫血需要定期红细胞输入的成人中测定ACTRIIB-HFC(SEQ ID NO:25)的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究概述的更新(第8.1节8.1)。3期研究的适应症是患有输血依赖性β-地中海贫血、有记录的β-地中海贫血或血红蛋白E/β-地中海贫血诊断、排除了血红蛋白S/β-地中海贫血的成人。

8.5.1简述

这是一项在因β-地中海贫血需要定期红细胞输入的成人中测定相对于安慰剂加BSC，ACTRIIB-HFC(SEQ ID NO:25)加最佳支持治疗(BSC)的功效和安全性的3期双盲随机安慰剂对照多中心研究。

研究分为筛查/磨合期、双盲治疗期、双盲长期治疗期和治疗后随访期。

8.5.2主要结局指标

该研究的主要结局测量是与随机分配之前12周相比从第13周到第14周血液学改善(HI)的对象的比例，其中HI定义为与12周相比从第13周到第14周红细胞计数(RBC)从基线降低大于或等于33％，输血负担减轻至少2个单位；报告为从第13周到第14周及在随机分配之前的12周输入的RBC单位数。该测量的时间范围直到约第24周。

8.5.3次要结局指标

该研究的次要结局测量是与随机分配前的12周间隔相比从第37周到第48周血液学改善(HI)的对象的比例，其中HI定义为与12周相比从第37周到第48周红细胞计数(RBC)从基线降低≥33％，输血负担减轻至少2个单位，报告为从第37周到第48周及在随机分配之前的12周输入的RBC单位数。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量是对于luspatercept加BSC相对于安慰剂加BSC，与随机分配前的12周间隔相比从第37周到第48周从RBC的基线降低大于或等于50％、输血负担减轻至少2个单位的对象的比例，其中输血负担减轻大于或等于50％定义为对于luspatercept加(最佳支持治疗)BSC相对于安慰剂加BSC与随机分配前的12周间隔相比从第37周到第48周减少至少个2个单位；报告为从第37周到第48周及在随机分配之前的12周输入的RBC单位数。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量是对于luspatercept加BSC相对于安慰剂加BSC，与随机分配前的12周间隔相比从第13周到第14周从RBC的基线降低大于或等于50％、输血负担减轻至少2个单位的对象的比例，其中输血负担减轻大于或等于50％定义为对于luspatercept加(最佳支持治疗)BSC相对于安慰剂加BSC，与随机分配前的12周间隔相比从第13周到第14周减轻至少2个单位；报告为从第37周到第48周及在随机分配之前的12周输入的RBC单位数。该测量的时间范围多达约24周。

该研究的另一个次要结局测量为从第13周到第14周输血负担(RBC单位)自基线的平均变化。该测量的时间范围多达约24周。

该研究的另一个次要结局测量为通过磁共振成像(MRI)所得的肝铁浓度(LIC，mg/g干重)自基线的平均变化。该测量的时间范围多达约24周。

该研究的另一个次要结局测量为铁螯合疗法的平均日剂量自基线的平均变化。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为血清铁蛋白自基线的平均变化。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为通过双能X射线吸光测定法(DXA)所得的全髋和腰脊柱骨盐密度(BMD)自基线的平均变化。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为通过MRI(例如T2MRI)所得的心肌铁自基线的平均变化。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为在第一日第一剂之前4周内；第12、24、36和48周；然后在长期时间内每12周给予的TranQOL生命质量工具。将评价评分自基线的变化。TranQol是特别用于该群体的工具。TranQol是一种针对成年β-地中海贫血患者开发的新的疾病专用生命质量工具。将针对总样品和各治疗组，在每个给药时间点(基线，第12、24、36和48周然后在长期治疗期每12周)计算来自预规定的情绪领域和学业/职业领域的评分和总评分的概括统计量。该测量的时间范围多达约3年。

该研究的另一个次要结局测量为在第一日第一剂之前4周内；第12、24、36和48周；然后在长期时间内每12周给予的生命质量工具。SF-362.0版是一个自我实施的工具，由评价以下8个健康领域的8个多项量表组成：身体功能、角色-身体、身体疼痛、一般健康状况、活力、社交功能、角色-情绪和心理健康。还可获得两个整体汇总评分(身体分量和精神分量)。该测量的时间范围多达约3年。

该研究的另一个次要结局测量为相对于安慰剂ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)对医疗保健资源利用的作用。将评价住院集合、既往同步治疗和手术以及RBC输入利用。该测量的时间范围多达约3年。

该研究的另一个次要结局测量为在治疗期间是不依赖于输血大于或等于8周的对象的比例。这可通过由MRI(例如T2MRI)测定的心肌铁水平评价。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为输血负担减轻的持续时间。可评价实现反应的每个对象的第一次反应的持续时间。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为不依赖于输血的持续时间，例如在治疗期的任何连续进展的8周时间间隔内(即第1-56天、第2-57天等)没有任何输血。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为到红细胞反应的时间。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为相对于安慰剂的基线后输血事件频率。将根据治疗组汇总自输血事件基线次数的年化平均变化。该测量的时间范围多达约48周。

该研究的另一个次要结局测量为血浆浓度时间曲线下药代动力学面积。该测量的时间范围多达最后一剂之后9周。

该研究的另一个次要结局测量为血浆药代动力学最大观测浓度。该测量的时间范围多达最后一剂之后9周。

8.5.4安全性结局指标

将评价有不良事件的参与者的数目直到约3.5年。

8.5.5组/干预

将给予ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)加最佳支持治疗(BSC)。将每21天一次皮下给予对象ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)。对象将以1mg/kg剂量水平开始ActRIIB-hFc(SEQ IDNO:25)。

或者，可给予对象安慰剂加最佳支持治疗(BSC)。安慰剂可以是每21天一次皮下给予对象的生理盐水溶液。

8.5.6纳入标准

对象必须满足下列标准以成为研究的成员：(1)男性或女性，在签署知情同意文件(ICF)时至少18岁；(2)在正进行的任何研究相关评价/程序之前，对象必须理解并志愿签署知情同意表；(3)对象愿意并且能够坚持遵循研究随访计划和其它方案要求；(4)有记录的β-地中海贫血或血红蛋白E/β-地中海贫血的诊断；(5)定期输血，定义为：在随机分配之前24周6-20个红细胞(RBC)单位且在该期非输血期≥35天；该方案中的1个单位是指来自约400-500mL捐赠血的浓集RBC的量；(6)体能状况：Eastern Cooperative Oncology Group(ECOG)评分为0或1；(7)该研究的育龄期女性(FCBP)定义为以下女性：(a)在某一点达到初潮，(b)未进行子宫切除术或双侧卵巢切除术或(c)不是天然绝经后(癌症治疗后的闭经不排除分娩可能)连续至少24个月(即在之前连续24个月的任一时间行经)；参与研究的FCBP必须：(a)在开始研究疗法之前有两次经研究者证实的妊娠试验阴性；她必须同意在研究进程中和在研究结束治疗之后进行妊娠试验；即使对象实施免于异性接触的真正禁欲，这也适用；和(b)承诺免于异性接触的真正禁欲(这必需按每月基础检查并且有记录的资料)或在开始研究产品前28天，在研究疗法(包括剂量中断)期间和在终止研究疗法后持续12周(根据多剂量药代动力学PK数据，约luspatercept的平均终末半寿期的5倍)同意使用且能够遵从有效的无间断避孕；(8)男性对象即使进行了成功的输精管切除术，但在参与研究时、在剂量中断期间和在研究产品终止后持续至少12周(根据多剂量PK数据，约luspatercept的平均终末半寿期的5倍)，他也必须实行真正禁欲或在与妊娠女性或育龄女性有性接触时同意使用避孕套。

8.5.7排除标准

以下任一项的存在都将把对象排除在招募以外：(1)可能阻止对象参与研究的任何医学病况、实验室异常情况或精神疾病；(2)如果他/她要参与研究会使对象置于不可接受的风险下的实验室异常情况存在的任何情况；(3)混淆解释来自研究的数据的能力的任何情况；(4)血红蛋白S/β-地中海贫血或α(α)-地中海贫血(例如血红蛋白H)的诊断；允许β-地中海贫血并发α-地中海贫血；(5)活动性丙型肝炎(HCV)感染、或活动性感染性乙型肝炎、或已知人免疫缺陷病毒(HIV)阳性的证据；(6)随机分配之前≤24周需要医学干预的深静脉血栓形成(DVT)或卒中；(7)允许随机分配之前≤28天的慢性抗凝血疗法、用于静脉窦血栓形成(SVT)的低分子量(LMW)肝素和长期阿司匹林；(8)血小板计数>1000x 10⁹/L；(9)胰岛素依赖性糖尿病，即用胰岛素长期治疗；(10)随机分配之前≤28天用另一种研究药物或装置治疗；(11)之前暴露于ActRIIA-hFc(SEQ ID NO:7)或ActRIIB-hFc(SEQ ID NO:25)；(12)随机分配之前≤24周使用红细胞生成刺激剂(ESA)；(13)如果随机分配之前≤24周开始的铁螯合疗法(如果在治疗之前或期间>24周开始则允许)；(14)随机分配之前≤24周的羟基脲治疗；(15)妊娠或哺乳期女性；(16)不受控制的高血压。按照不良事件的NCI普通命名标准(CTCAE)4.0版(目前有效的小型版)，对于该方案不受控制的高血压被视为≤1级；(17)主要器官损害，包括：(a)具有丙氨酸氨基转移酶(ALT)>3x正常上限(ULN)或肝组织活检时肝硬化/纤维变性的组织病理学证据的肝病；(b)心脏病、按照纽约心脏协会(NYHA)归类为3级或更高级的心力衰竭，或需要治疗的重大心律失常，或随机分配6个月内的近期心肌梗塞；(c)肺病，包括有临床显著性的肺纤维变性或肺动脉高压；和/或(d)肌酸酐清除率<60mL/分钟(按Cockroff-Gault方法)；(18)按照NCI CTCAE 4.0版(目前有效的小型版)蛋白尿≥3级；(19)肾上腺功能不全；(20)随机分配前≤12周的重大手术(对象必须从在随机分配分配之前的任何既往手术完全恢复)；(21)对研究产品中的重组蛋白或赋形剂的严重变应性或过敏性反应或超敏反应史(参见研究者小册子)；(22)随机分配之前≤28天的细胞毒性剂、免疫抑制剂。

9.序列描述

表3：序列信息

10.等同形式

虽然参考具体的实施方案详细描述了本发明，但要了解功能上等价的变体在本发明的范围之内。实际上，根据上文说明和附图，除本文显示和描述的之外，本发明的各种改动对于本领域技术人员而言将是显而易见的。这些改动也将落入附随权利要求的范围之内。本领域技术人员应认识到或能够利用不超出常规的实验来确定本文描述的本发明的具体实施方案的许多等同形式。预期随附权利要求书将涵盖这类等同形式。

在本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本说明书中，其程度与每个单独的出版物、专利或专利申请具体而单独指明通过引用以其整体并入一样。

序列表

<110> 细胞基因公司

埃克赛勒隆制药公司

<120> 使用ACTRII配体陷阱治疗β-地中海贫血

<130> 12827-952-228

<140> TBA

<141> On even date herewith

<150> 62/161,136

<151> 2015-05-13

<150> 62/173,836

<151> 2015-06-10

<150> 62/243,457

<151> 2015-10-19

<160> 50

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1

<211> 513

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIA前体多肽

<400> 1

Met Gly Ala Ala Ala Lys Leu Ala Phe Ala Val Phe Leu Ile Ser Cys

1 5 10 15

Ser Ser Gly Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe

20 25 30

Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu

35 40 45

Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp

50 55 60

Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu

65 70 75 80

Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp

85 90 95

Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu

100 105 110

Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn

115 120 125

Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Tyr Tyr Asn Ile Leu Leu Tyr Ser Leu

130 135 140

Val Pro Leu Met Leu Ile Ala Gly Ile Val Ile Cys Ala Phe Trp Val

145 150 155 160

Tyr Arg His His Lys Met Ala Tyr Pro Pro Val Leu Val Pro Thr Gln

165 170 175

Asp Pro Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Leu Gly Leu Lys Pro Leu

180 185 190

Gln Leu Leu Glu Val Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys

195 200 205

Ala Gln Leu Leu Asn Glu Tyr Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Ile Gln

210 215 220

Asp Lys Gln Ser Trp Gln Asn Glu Tyr Glu Val Tyr Ser Leu Pro Gly

225 230 235 240

Met Lys His Glu Asn Ile Leu Gln Phe Ile Gly Ala Glu Lys Arg Gly

245 250 255

Thr Ser Val Asp Val Asp Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Glu Lys

260 265 270

Gly Ser Leu Ser Asp Phe Leu Lys Ala Asn Val Val Ser Trp Asn Glu

275 280 285

Leu Cys His Ile Ala Glu Thr Met Ala Arg Gly Leu Ala Tyr Leu His

290 295 300

Glu Asp Ile Pro Gly Leu Lys Asp Gly His Lys Pro Ala Ile Ser His

305 310 315 320

Arg Asp Ile Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Asn Asn Leu Thr Ala

325 330 335

Cys Ile Ala Asp Phe Gly Leu Ala Leu Lys Phe Glu Ala Gly Lys Ser

340 345 350

Ala Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro

355 360 365

Glu Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg

370 375 380

Ile Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Ala Ser Arg

385 390 395 400

Cys Thr Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu

405 410 415

Glu Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Asp Met Gln Glu Val Val

420 425 430

Val His Lys Lys Lys Arg Pro Val Leu Arg Asp Tyr Trp Gln Lys His

435 440 445

Ala Gly Met Ala Met Leu Cys Glu Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His

450 455 460

Asp Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Gly Glu Arg Ile Thr

465 470 475 480

Gln Met Gln Arg Leu Thr Asn Ile Ile Thr Thr Glu Asp Ile Val Thr

485 490 495

Val Val Thr Met Val Thr Asn Val Asp Phe Pro Pro Lys Glu Ser Ser

500 505 510

Leu

<210> 2

<211> 115

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIA可溶性(胞外), 加工的多肽序列

<400> 2

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly

20 25 30

Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser

35 40 45

Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr

85 90 95

Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro

100 105 110

Lys Pro Pro

115

<210> 3

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIA可溶性(胞外), C端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列

<400> 3

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly

20 25 30

Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser

35 40 45

Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr

85 90 95

Phe Pro Glu Met

100

<210> 4

<211> 1542

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<223> 编码人ActRIIA前体蛋白的核酸序列

<400> 4

atgggagctg ctgcaaagtt ggcgtttgcc gtctttctta tctcctgttc ttcaggtgct 60

atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg ggaaaaagac 120

agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt 180

tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg 240

gatgatatca actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta 300

tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccagagatg 360

gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccctatta caacatcctg 420

ctctattcct tggtgccact tatgttaatt gcggggattg tcatttgtgc attttgggtg 480

tacaggcatc acaagatggc ctaccctcct gtacttgttc caactcaaga cccaggacca 540

cccccacctt ctccattact agggttgaaa ccactgcagt tattagaagt gaaagcaagg 600

ggaagatttg gttgtgtctg gaaagcccag ttgcttaacg aatatgtggc tgtcaaaata 660

tttccaatac aggacaaaca gtcatggcaa aatgaatacg aagtctacag tttgcctgga 720

atgaagcatg agaacatatt acagttcatt ggtgcagaaa aacgaggcac cagtgttgat 780

gtggatcttt ggctgatcac agcatttcat gaaaagggtt cactatcaga ctttcttaag 840

gctaatgtgg tctcttggaa tgaactgtgt catattgcag aaaccatggc tagaggattg 900

gcatatttac atgaggatat acctggccta aaagatggcc acaaacctgc catatctcac 960

agggacatca aaagtaaaaa tgtgctgttg aaaaacaacc tgacagcttg cattgctgac 1020

tttgggttgg ccttaaaatt tgaggctggc aagtctgcag gcgataccca tggacaggtt 1080

ggtacccgga ggtacatggc tccagaggta ttagagggtg ctataaactt cgaaagggat 1140

gcatttttga ggatagatat gtatgccatg ggattagtcc tatgggaact ggcttctcgc 1200

tgtactgctg cagatggacc tgtagatgaa tacatgttgc catttgagga ggaaattggc 1260

cagcatccat ctcttgaaga catgcaggaa gttgttgtgc ataaaaaaaa gaggcctgtt 1320

ttaagagatt attggcagaa acatgctgga atggcaatgc tctgtgaaac cattgaagaa 1380

tgttgggatc acgacgcaga agccaggtta tcagctggat gtgtaggtga aagaattacc 1440

cagatgcaga gactaacaaa tattattacc acagaggaca ttgtaacagt ggtcacaatg 1500

gtgacaaatg ttgactttcc tcccaaagaa tctagtctat ga 1542

<210> 5

<211> 345

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIA可溶性(胞外)多肽

<400> 5

atacttggta gatcagaaac tcaggagtgt cttttcttta atgctaattg ggaaaaagac 60

agaaccaatc aaactggtgt tgaaccgtgt tatggtgaca aagataaacg gcggcattgt 120

tttgctacct ggaagaatat ttctggttcc attgaaatag tgaaacaagg ttgttggctg 180

gatgatatca actgctatga caggactgat tgtgtagaaa aaaaagacag ccctgaagta 240

tatttttgtt gctgtgaggg caatatgtgt aatgaaaagt tttcttattt tccagagatg 300

gaagtcacac agcccacttc aaatccagtt acacctaagc caccc 345

<210> 6

<211> 228

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的ActRIIA的可溶性胞外域的融合蛋白

<220>

<221> 变体

<222> 44

<223> Xaa = Asp或Ala

<220>

<221> 变体

<222> 102

<223> Xaa = Lys或Ala

<220>

<221> 变体

<222> 215

<223> Xaa = Asn或Ala

<400> 6

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

1 5 10 15

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

20 25 30

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Xaa Val Ser His Glu

35 40 45

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

50 55 60

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

65 70 75 80

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

85 90 95

Glu Tyr Lys Cys Lys Xaa Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Val Pro Ile

100 105 110

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

115 120 125

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

130 135 140

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

145 150 155 160

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Pro Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn Xaa His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

210 215 220

Ser Pro Gly Lys

225

<210> 7

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 与人Fc结构域融合的人ActRIIA的胞外域

<400> 7

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly

20 25 30

Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser

35 40 45

Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr

85 90 95

Phe Pro Glu Met Glu Val Thr Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro

100 105 110

Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

115 120 125

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

130 135 140

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

145 150 155 160

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

165 170 175

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

180 185 190

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

195 200 205

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

210 215 220

Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

225 230 235 240

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

245 250 255

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

260 265 270

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

275 280 285

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

290 295 300

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

305 310 315 320

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

325 330 335

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 8

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 蜜蜂蜂毒(HBML)的前导序列

<400> 8

Met Lys Phe Leu Val Asn Val Ala Leu Val Phe Met Val Val Tyr Ile

1 5 10 15

Ser Tyr Ile Tyr Ala

20

<210> 9

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 组织纤溶酶原激活物(TPA)的前导序列

<400> 9

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro

20

<210> 10

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 天然的ActRIIA前导区

<400> 10

Met Gly Ala Ala Ala Lys Leu Ala Phe Ala Val Phe Leu Ile Ser Cys

1 5 10 15

Ser Ser Gly Ala

20

<210> 11

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> ActRIIA-hFc和mActRIIA-Fc N端序列

<400> 11

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu

1 5

<210> 12

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> ActRIIA的胞外域的C端15个氨基酸缺失的ActRIIA-Fc蛋白

<400> 12

Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly

20 25 30

Asp Lys Asp Lys Arg Arg His Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser

35 40 45

Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr

85 90 95

Phe Pro Glu Met Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 13

<211> 369

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有TPA前导序列的未加工的ActRIIA-hFc

<400> 13

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Ile Leu Gly Arg Ser Glu Thr

20 25 30

Gln Glu Cys Leu Phe Phe Asn Ala Asn Trp Glu Lys Asp Arg Thr Asn

35 40 45

Gln Thr Gly Val Glu Pro Cys Tyr Gly Asp Lys Asp Lys Arg Arg His

50 55 60

Cys Phe Ala Thr Trp Lys Asn Ile Ser Gly Ser Ile Glu Ile Val Lys

65 70 75 80

Gln Gly Cys Trp Leu Asp Asp Ile Asn Cys Tyr Asp Arg Thr Asp Cys

85 90 95

Val Glu Lys Lys Asp Ser Pro Glu Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly

100 105 110

Asn Met Cys Asn Glu Lys Phe Ser Tyr Phe Pro Glu Met Glu Val Thr

115 120 125

Gln Pro Thr Ser Asn Pro Val Thr Pro Lys Pro Pro Thr Gly Gly Gly

130 135 140

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

145 150 155 160

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

165 170 175

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

180 185 190

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

195 200 205

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

210 215 220

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

225 230 235 240

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys

245 250 255

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

260 265 270

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

275 280 285

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

290 295 300

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

305 310 315 320

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

325 330 335

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

340 345 350

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

355 360 365

Lys

<210> 14

<211> 1113

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码带有TPA前导序列的未加工的ActRIIA-hFc的核酸序列

<400> 14

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60

tcgcccggcg ccgctatact tggtagatca gaaactcagg agtgtctttt tttaatgcta 120

attgggaaaa agacagaacc aatcaaactg gtgttgaacc gtgttatggt gacaaagata 180

aacggcggca ttgttttgct acctggaaga atatttctgg ttccattgaa tagtgaaaca 240

aggttgttgg ctggatgata tcaactgcta tgacaggact gattgtgtag aaaaaaaaga 300

cagccctgaa gtatatttct gttgctgtga gggcaatatg tgtaatgaaa agttttctta 360

ttttccggag atggaagtca cacagcccac ttcaaatcca gttacaccta agccacccac 420

cggtggtgga actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg ggggaccgtc 480

agtcttcctc ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt 540

cacatgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt 600

ggacggcgtg gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac 660

gtaccgtgtg gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta 720

caagtgcaag gtctccaaca aagccctccc agtccccatc gagaaaacca tctccaaagc 780

caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac 840

caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt 900

ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga 960

ctccgacggc tccttcttcc tctatagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca 1020

ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa 1080

gagcctctcc ctgtctccgg taaatgagaa ttc 1113

<210> 15

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有EC结构域N端6个氨基酸缺失和EC结构域C端4个氨基酸缺失(SEQ ID NO:28的氨基酸25-130)并带有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列

<400> 15

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105

<210> 16

<211> 512

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIB前体蛋白序列(A64)

<400> 16

Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp

1 5 10 15

Pro Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr

20 25 30

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg

35 40 45

Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala

50 55 60

Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn

85 90 95

Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg

100 105 110

Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro

115 120 125

Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu

130 135 140

Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr

145 150 155 160

Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu

180 185 190

Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln

195 200 205

Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys

210 215 220

Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys

225 230 235 240

His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn

245 250 255

Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser

260 265 270

Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys

275 280 285

His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp

290 295 300

Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg

305 310 315 320

Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val

325 330 335

Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro

340 345 350

Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu

355 360 365

Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile

370 375 380

Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys

385 390 395 400

Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu

405 410 415

Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val

420 425 430

His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro

435 440 445

Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp

450 455 460

Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu

465 470 475 480

Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu

485 490 495

Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile

500 505 510

<210> 17

<211> 116

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸19-134)

<400> 17

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr

115

<210> 18

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)的、C端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列(SEQ IDNO:16的氨基酸19-119)

<400> 18

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala

100

<210> 19

<211> 1539

<212> DNA

<213> 智人

<220>

<223> 编码人ActRIIB (A64)前体蛋白的核酸序列

<400> 19

atgacggcgc cctgggtggc cctcgccctc ctctggggat cgctgtggcc cggctctggg 60

cgtggggagg ctgagacacg ggagtgcatc tactacaacg ccaactggga gctggagcgc 120

accaaccaga gcggcctgga gcgctgcgaa ggcgagcagg acaagcggct gcactgctac 180

gcctcctggg ccaacagctc tggcaccatc gagctcgtga agaagggctg ctggctagat 240

gacttcaact gctacgatag gcaggagtgt gtggccactg aggagaaccc ccaggtgtac 300

ttctgctgct gtgaaggcaa cttctgcaac gagcgcttca ctcatttgcc agaggctggg 360

ggcccggaag tcacgtacga gccacccccg acagccccca ccctgctcac ggtgctggcc 420

tactcactgc tgcccatcgg gggcctttcc ctcatcgtcc tgctggcctt ttggatgtac 480

cggcatcgca agccccccta cggtcatgtg gacatccatg aggaccctgg gcctccacca 540

ccatcccctc tggtgggcct gaagccactg cagctgctgg agatcaaggc tcgggggcgc 600

tttggctgtg tctggaaggc ccagctcatg aatgactttg tagctgtcaa gatcttccca 660

ctccaggaca agcagtcgtg gcagagtgaa cgggagatct tcagcacacc tggcatgaag 720

cacgagaacc tgctacagtt cattgctgcc gagaagcgag gctccaacct cgaagtagag 780

ctgtggctca tcacggcctt ccatgacaag ggctccctca cggattacct caaggggaac 840

atcatcacat ggaacgaact gtgtcatgta gcagagacga tgtcacgagg cctctcatac 900

ctgcatgagg atgtgccctg gtgccgtggc gagggccaca agccgtctat tgcccacagg 960

gactttaaaa gtaagaatgt attgctgaag agcgacctca cagccgtgct ggctgacttt 1020

ggcttggctg ttcgatttga gccagggaaa cctccagggg acacccacgg acaggtaggc 1080

acgagacggt acatggctcc tgaggtgctc gagggagcca tcaacttcca gagagatgcc 1140

ttcctgcgca ttgacatgta tgccatgggg ttggtgctgt gggagcttgt gtctcgctgc 1200

aaggctgcag acggacccgt ggatgagtac atgctgccct ttgaggaaga gattggccag 1260

cacccttcgt tggaggagct gcaggaggtg gtggtgcaca agaagatgag gcccaccatt 1320

aaagatcact ggttgaaaca cccgggcctg gcccagcttt gtgtgaccat cgaggagtgc 1380

tgggaccatg atgcagaggc tcgcttgtcc gcgggctgtg tggaggagcg ggtgtccctg 1440

attcggaggt cggtcaacgg cactacctcg gactgtctcg tttccctggt gacctctgtc 1500

accaatgtgg acctgccccc taaagagtca agcatctaa 1539

<210> 20

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的ActRIIB的可溶性胞外域(A64；SEQ ID NO:17)的融合蛋白

<400> 20

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

115 120 125

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

130 135 140

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

145 150 155 160

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

165 170 175

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

180 185 190

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

195 200 205

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

210 215 220

Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

225 230 235 240

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

245 250 255

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

260 265 270

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

275 280 285

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

290 295 300

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

305 310 315 320

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

325 330 335

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 21

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的带有C端15氨基酸缺失的ActRIIB的可溶性胞外域(A64)(SEQ ID NO:18)的融合蛋白

<400> 21

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 22

<211> 105

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有EC结构域N端6个氨基酸缺失和EC结构域C端5个氨基酸缺失(SEQ ID NO:28的氨基酸25-129)并带有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列

<400> 22

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro

100 105

<210> 23

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有EC结构域N端6个氨基酸缺失和EC结构域C端3个氨基酸缺失(SEQ ID NO:28的氨基酸25-131)并带有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列

<400> 23

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105

<210> 24

<211> 360

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有EC结构域N端6个氨基酸缺失和EC结构域C端3个氨基酸缺失(SEQ ID NO:28的氨基酸25-131)且带有L79D突变并带有TPA前导序列的未加工的ActRIIB-Fc融合蛋白

<400> 24

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr

20 25 30

Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu

35 40 45

Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp

65 70 75 80

Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu

85 90 95

Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu

100 105 110

Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu

115 120 125

Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

130 135 140

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

145 150 155 160

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

165 170 175

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

180 185 190

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

195 200 205

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

210 215 220

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

225 230 235 240

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

245 250 255

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

260 265 270

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

275 280 285

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

290 295 300

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

305 310 315 320

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

325 330 335

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

340 345 350

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360

<210> 25

<211> 335

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有EC结构域N端6个氨基酸缺失和EC结构域C端3个氨基酸缺失(SEQ ID NO:28的氨基酸25-131)并带有L79D突变的加工的ActRIIB-Fc融合蛋白

<400> 25

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His

100 105 110

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

130 135 140

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

145 150 155 160

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

165 170 175

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

180 185 190

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

195 200 205

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

210 215 220

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

225 230 235 240

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

245 250 255

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

260 265 270

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

275 280 285

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

290 295 300

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

305 310 315 320

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330 335

<210> 26

<211> 115

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外), 加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-134)

<400> 26

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 27

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外), C端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-119)

<400> 27

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala

100

<210> 28

<211> 512

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人ActRIIB前体蛋白序列(R64)

<400> 28

Met Thr Ala Pro Trp Val Ala Leu Ala Leu Leu Trp Gly Ser Leu Trp

1 5 10 15

Pro Gly Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr

20 25 30

Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg

35 40 45

Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg

50 55 60

Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp

65 70 75 80

Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn

85 90 95

Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg

100 105 110

Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro

115 120 125

Pro Pro Thr Ala Pro Thr Leu Leu Thr Val Leu Ala Tyr Ser Leu Leu

130 135 140

Pro Ile Gly Gly Leu Ser Leu Ile Val Leu Leu Ala Phe Trp Met Tyr

145 150 155 160

Arg His Arg Lys Pro Pro Tyr Gly His Val Asp Ile His Glu Asp Pro

165 170 175

Gly Pro Pro Pro Pro Ser Pro Leu Val Gly Leu Lys Pro Leu Gln Leu

180 185 190

Leu Glu Ile Lys Ala Arg Gly Arg Phe Gly Cys Val Trp Lys Ala Gln

195 200 205

Leu Met Asn Asp Phe Val Ala Val Lys Ile Phe Pro Leu Gln Asp Lys

210 215 220

Gln Ser Trp Gln Ser Glu Arg Glu Ile Phe Ser Thr Pro Gly Met Lys

225 230 235 240

His Glu Asn Leu Leu Gln Phe Ile Ala Ala Glu Lys Arg Gly Ser Asn

245 250 255

Leu Glu Val Glu Leu Trp Leu Ile Thr Ala Phe His Asp Lys Gly Ser

260 265 270

Leu Thr Asp Tyr Leu Lys Gly Asn Ile Ile Thr Trp Asn Glu Leu Cys

275 280 285

His Val Ala Glu Thr Met Ser Arg Gly Leu Ser Tyr Leu His Glu Asp

290 295 300

Val Pro Trp Cys Arg Gly Glu Gly His Lys Pro Ser Ile Ala His Arg

305 310 315 320

Asp Phe Lys Ser Lys Asn Val Leu Leu Lys Ser Asp Leu Thr Ala Val

325 330 335

Leu Ala Asp Phe Gly Leu Ala Val Arg Phe Glu Pro Gly Lys Pro Pro

340 345 350

Gly Asp Thr His Gly Gln Val Gly Thr Arg Arg Tyr Met Ala Pro Glu

355 360 365

Val Leu Glu Gly Ala Ile Asn Phe Gln Arg Asp Ala Phe Leu Arg Ile

370 375 380

Asp Met Tyr Ala Met Gly Leu Val Leu Trp Glu Leu Val Ser Arg Cys

385 390 395 400

Lys Ala Ala Asp Gly Pro Val Asp Glu Tyr Met Leu Pro Phe Glu Glu

405 410 415

Glu Ile Gly Gln His Pro Ser Leu Glu Glu Leu Gln Glu Val Val Val

420 425 430

His Lys Lys Met Arg Pro Thr Ile Lys Asp His Trp Leu Lys His Pro

435 440 445

Gly Leu Ala Gln Leu Cys Val Thr Ile Glu Glu Cys Trp Asp His Asp

450 455 460

Ala Glu Ala Arg Leu Ser Ala Gly Cys Val Glu Glu Arg Val Ser Leu

465 470 475 480

Ile Arg Arg Ser Val Asn Gly Thr Thr Ser Asp Cys Leu Val Ser Leu

485 490 495

Val Thr Ser Val Thr Asn Val Asp Leu Pro Pro Lys Glu Ser Ser Ile

500 505 510

<210> 29

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外), 加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸19-134)

<400> 29

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr

115

<210> 30

<211> 101

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)的、C端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列(SEQ IDNO:28的氨基酸19-119)

<400> 30

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala

100

<210> 31

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)、加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-134)

<400> 31

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 32

<211> 100

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人ActRIIB可溶性(胞外)、C端15个氨基酸缺失的加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-119)

<400> 32

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala

100

<210> 33

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有EC结构域N端6个氨基酸缺失和EC结构域C端3个氨基酸缺失(SEQ ID NO:16的氨基酸25-131)并带有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列

<400> 33

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105

<210> 34

<211> 360

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有EC结构域N端6个氨基酸缺失和EC结构域C端3个氨基酸缺失(SEQ ID NO:16的氨基酸25-131)并带有L79D突变和带有TPA前导序列的未加工的ActRIIB-Fc融合蛋白

<400> 34

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr

20 25 30

Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu

35 40 45

Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp

50 55 60

Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp

65 70 75 80

Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu

85 90 95

Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu

100 105 110

Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu

115 120 125

Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

130 135 140

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

145 150 155 160

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

165 170 175

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

180 185 190

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

195 200 205

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

210 215 220

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

225 230 235 240

Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

245 250 255

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

260 265 270

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

275 280 285

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

290 295 300

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

305 310 315 320

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

325 330 335

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

340 345 350

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360

<210> 35

<211> 335

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有EC结构域N端6个氨基酸缺失和EC结构域C端3个氨基酸缺失(SEQ ID NO:16的氨基酸25-131)并带有L79D突变的加工的ActRIIB-Fc融合蛋白

<400> 35

Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg

1 5 10 15

Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg

20 25 30

Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu

35 40 45

Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln

50 55 60

Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys

65 70 75 80

Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly

85 90 95

Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Gly Gly Gly Thr His

100 105 110

Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

130 135 140

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu

145 150 155 160

Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

165 170 175

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

180 185 190

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

195 200 205

Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile

210 215 220

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

225 230 235 240

Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

245 250 255

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

260 265 270

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

275 280 285

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

290 295 300

Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

305 310 315 320

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330 335

<210> 36

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-134)

<400> 36

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 37

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 带有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-134)

<400> 37

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr

115

<210> 38

<211> 343

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 与含GGG接头的Fc结构域融合的带有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-134)

<400> 38

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

115 120 125

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

130 135 140

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

145 150 155 160

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

165 170 175

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

180 185 190

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

195 200 205

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

210 215 220

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

225 230 235 240

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

245 250 255

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

260 265 270

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

275 280 285

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

290 295 300

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

305 310 315 320

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

325 330 335

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 39

<211> 343

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 与Fc结构域融合的带有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-134)

<400> 39

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr

100 105 110

Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

115 120 125

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

130 135 140

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

145 150 155 160

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

165 170 175

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

180 185 190

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

195 200 205

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

210 215 220

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

225 230 235 240

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys

245 250 255

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

260 265 270

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

275 280 285

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

290 295 300

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

305 310 315 320

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

325 330 335

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 40

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 与Fc结构域融合的带有L79D突变且带有TPA前导序列的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列(SEQ ID NO:28的氨基酸20-134)

<400> 40

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr

20 25 30

Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn

35 40 45

Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His

50 55 60

Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys

65 70 75 80

Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys

85 90 95

Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly

100 105 110

Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro

115 120 125

Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr

130 135 140

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

145 150 155 160

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

165 170 175

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

180 185 190

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

195 200 205

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

210 215 220

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

225 230 235 240

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

245 250 255

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

260 265 270

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

290 295 300

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

305 310 315 320

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

325 330 335

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

340 345 350

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360 365

<210> 41

<211> 368

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 与Fc结构域融合的带有L79D突变且带有TPA前导序列的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列(SEQ ID NO:16的氨基酸20-134)

<400> 41

Met Asp Ala Met Lys Arg Gly Leu Cys Cys Val Leu Leu Leu Cys Gly

1 5 10 15

Ala Val Phe Val Ser Pro Gly Ala Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr

20 25 30

Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn

35 40 45

Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His

50 55 60

Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys

65 70 75 80

Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys

85 90 95

Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly

100 105 110

Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro

115 120 125

Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr

130 135 140

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

145 150 155 160

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

165 170 175

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

180 185 190

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

195 200 205

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

210 215 220

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

225 230 235 240

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

245 250 255

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

260 265 270

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

275 280 285

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

290 295 300

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

305 310 315 320

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

325 330 335

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

340 345 350

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

355 360 365

<210> 42

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 具有变体C端序列(公开于WO2007/053775)的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列

<400> 42

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu

130 135 140

<210> 43

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 具有L79D突变、具有变体C端序列(公开于WO2007/053775)的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列

<400> 43

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu

130 135 140

<210> 44

<211> 370

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 与含TGGG接头的Fc结构域融合的具有变体C端序列(公开于WO2007/053775)、具有L79D突变的人ActRIIB可溶性(胞外)的、加工的多肽序列

<400> 44

Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn

1 5 10 15

Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly

20 25 30

Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser

35 40 45

Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Asp Asp Asp Phe Asn

50 55 60

Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His

85 90 95

Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Gly Pro Trp Ala Ser Thr Thr Ile

100 105 110

Pro Ser Gly Gly Pro Glu Ala Thr Ala Ala Ala Gly Asp Gln Gly Ser

115 120 125

Gly Ala Leu Trp Leu Cys Leu Glu Gly Pro Ala His Glu Thr Gly Gly

130 135 140

Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly

145 150 155 160

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

165 170 175

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu

180 185 190

Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

195 200 205

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg

210 215 220

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

225 230 235 240

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu

245 250 255

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

260 265 270

Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

275 280 285

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

290 295 300

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

305 310 315 320

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp

325 330 335

Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

340 345 350

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro

355 360 365

Gly Lys

370

<210> 45

<211> 1083

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 编码SEQ ID NO:24的核酸序列

<400> 45

atggatgcaa tgaagagagg gctctgctgt gtgctgctgc tgtgtggagc agtcttcgtt 60

tcgcccggcg ccgccgaaac ccgcgaatgt atttattaca atgctaattg ggaactcgaa 120

cggacgaacc aatccgggct cgaacggtgt gagggggaac aggataaacg cctccattgc 180

tatgcgtcgt ggaggaactc ctccgggacg attgaactgg tcaagaaagg gtgctgggac 240

gacgatttca attgttatga ccgccaggaa tgtgtcgcga ccgaagagaa tccgcaggtc 300

tatttctgtt gttgcgaggg gaatttctgt aatgaacggt ttacccacct ccccgaagcc 360

ggcgggcccg aggtgaccta tgaacccccg cccaccggtg gtggaactca cacatgccca 420

ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 480

aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 540

cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 600

aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 660

gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 720

ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 780

gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 840

ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 900

gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctat 960

agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1020

atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc cccgggtaaa 1080

tga 1083

<210> 46

<211> 344

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的ActRIIB的可溶性胞外域(R64；SEQ ID NO:29)的融合蛋白

<400> 46

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro

100 105 110

Thr Ala Pro Thr Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala

115 120 125

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

130 135 140

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

145 150 155 160

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val

165 170 175

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

180 185 190

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

195 200 205

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala

210 215 220

Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

225 230 235 240

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr

245 250 255

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

260 265 270

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

275 280 285

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

290 295 300

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe

305 310 315 320

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

325 330 335

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

340

<210> 47

<211> 329

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 包含与Fc结构域融合的C端15个氨基酸缺失的的ActRIIB的可溶性胞外域(R64)(SEQ ID NO:30)的融合蛋白

<400> 47

Ser Gly Arg Gly Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala

1 5 10 15

Asn Trp Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu

20 25 30

Gly Glu Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser

35 40 45

Ser Gly Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe

50 55 60

Asn Cys Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln

65 70 75 80

Val Tyr Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr

85 90 95

His Leu Pro Glu Ala Gly Gly Gly Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro

100 105 110

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

115 120 125

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

130 135 140

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

145 150 155 160

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

165 170 175

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

180 185 190

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

195 200 205

Ala Leu Pro Val Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

210 215 220

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

225 230 235 240

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 48

<211> 141

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 示例性人血红蛋白α亚基

<400> 48

Val Leu Ser Pro Ala Asp Lys Thr Asn Val Lys Ala Ala Trp Gly Lys

1 5 10 15

Val Gly Ala His Ala Gly Glu Tyr Gly Ala Glu Ala Leu Glu Arg Met

20 25 30

Phe Leu Ser Phe Pro Thr Thr Lys Thr Tyr Phe Pro His Phe Asp Leu

35 40 45

Ser His Gly Ser Ala Gln Val Lys Gly His Gly Lys Lys Val Ala Asp

50 55 60

Ala Leu Thr Asn Ala Val Ala His Val Asp Asp Met Pro Asn Ala Leu

65 70 75 80

Ser Ala Leu Ser Asp Leu His Ala His Lys Leu Arg Val Asp Pro Val

85 90 95

Asn Phe Lys Leu Leu Ser His Cys Leu Leu Val Thr Leu Ala Ala His

100 105 110

Leu Pro Ala Glu Phe Thr Pro Ala Val His Ala Ser Leu Asp Lys Phe

115 120 125

Leu Ala Ser Val Ser Thr Val Leu Thr Ser Lys Tyr Arg

130 135 140

<210> 49

<211> 146

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 示例性人血红蛋白β亚基

<400> 49

Gly His Phe Thr Glu Glu Asp Lys Ala Thr Ile Thr Ser Leu Trp Gly

1 5 10 15

Lys Val Asn Val Glu Asp Ala Gly Gly Glu Thr Leu Gly Arg Leu Leu

20 25 30

Val Val Tyr Pro Trp Thr Gln Arg Phe Phe Asp Ser Phe Gly Asn Leu

35 40 45

Ser Ser Ala Ser Ala Ile Met Gly Asn Pro Lys Val Lys Ala His Gly

50 55 60

Lys Lys Val Leu Thr Ser Leu Gly Asp Ala Thr Lys His Leu Asp Asp

65 70 75 80

Leu Lys Gly Thr Phe Ala Gln Leu Ser Glu Leu His Cys Asp Lys Leu

85 90 95

His Val Asp Pro Glu Asn Phe Lys Leu Leu Gly Asn Val Leu Val Thr

100 105 110

Val Leu Ala Ile His Phe Gly Lys Glu Phe Thr Pro Glu Val Gln Ala

115 120 125

Ser Trp Gln Lys Met Val Thr Ala Val Ala Ser Ala Leu Ser Ser Arg

130 135 140

Tyr His

145

<210> 50

<211> 146

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 示例性人血红蛋白γ亚基

<400> 50

Val His Leu Thr Pro Glu Glu Lys Ser Ala Val Thr Ala Leu Trp Gly

1 5 10 15

Lys Val Asn Val Asp Glu Val Gly Gly Glu Ala Leu Gly Arg Leu Leu

20 25 30

Val Val Tyr Pro Trp Thr Gln Arg Phe Phe Glu Ser Phe Gly Asp Leu

35 40 45

Ser Thr Pro Asp Ala Val Met Gly Asn Pro Lys Val Lys Ala His Gly

50 55 60

Lys Lys Val Leu Gly Ala Phe Ser Asp Gly Leu Ala His Leu Asp Asn

65 70 75 80

Leu Lys Gly Thr Phe Ala Thr Leu Ser Glu Leu His Cys Asp Lys Leu

85 90 95

His Val Asp Pro Glu Asn Phe Arg Leu Leu Gly Asn Val Leu Val Cys

100 105 110

Val Leu Ala His His Phe Gly Lys Glu Phe Thr Pro Pro Val Gln Ala

115 120 125

Ala Tyr Gln Lys Val Val Ala Gly Val Ala Asn Ala Leu Ala His Lys

130 135 140

Tyr His

145

Claims

1.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂。

2.一种用于治疗有需要的对象的输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂。

3.一种用于治疗有需要的对象的非输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂。

4.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂，其中所述对象的表型选自β⁰/β⁰、β⁺/β⁺、β⁰/β⁺、β⁰/HbE和β⁺/HbE。

5.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂，其中所述对象的表型包括2个严重的血红蛋白β链突变的共遗传，且其中所述对象患有α-地中海贫血。

6.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，其中在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂，其中所述对象的表型包括2个严重的血红蛋白β链突变的共遗传，且其中所述对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症。

7.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予对象ActRII信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

8.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予对象ActRII信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述对象的表型选自β⁰/β⁰、β⁺/β⁺、β⁰/β⁺、β⁰/HbE和β⁺/HbE。

9.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予ActRII信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症。

10.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体II型(ActRII)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予对象ActRII信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述给予足以在给予之间可检测地降低所述对象血清中的GDF-11水平。

11.权利要求6-10中任一项的方法，其中所述β-地中海贫血是输血依赖性β-地中海贫血。

12.权利要求6-10中任一项的方法，其中所述β-地中海贫血是非输血依赖性β-地中海贫血。

13.权利要求1-12中任一项的方法，所述方法进一步包括进行对象血红蛋白浓度的第一次测量；在第一段时间之后进行对象血红蛋白浓度的第二次测量；根据血红蛋白浓度的第二次测量和血红蛋白浓度的第一次测量之间的差异给予ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

14.权利要求1-12中任一项的方法，所述方法进一步包括进行对象血细胞比容的第一次测量；在第一段时间之后进行对象血细胞比容的第二次测量；根据血细胞比容的第二次测量和血细胞比容的第一次测量之间的差异给予ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

15.权利要求1-12中任一项的方法，所述方法进一步包括进行对象胎儿血红蛋白的第一次测量；在第一段时间之后进行对象胎儿血红蛋白浓度的第二次测量；根据胎儿血红蛋白浓度的第二次测量和胎儿血红蛋白浓度的第一次测量之间的差异给予ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

16.权利要求1-12中任一项的方法，所述方法进一步包括

(a)进行对象的血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量；

(b)在第一段时间之后进行对象的血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第二次测量；

(c)在第二段时间之后，终止给予初始剂量并给予对象ActRII信号转导抑制剂的后续剂量，其中后续剂量在对象的上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予。

17.权利要求11-16中任一项的方法，其中所述血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量在给予对象ActRII信号转导抑制剂的初始剂量之前进行。

18.权利要求11-17中任一项的方法，其中所述血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量紧接在将ActRII信号转导抑制剂的初始剂量给予对象之后或在之后至多1天、2天、3天、4天、5天、6天或1周内。

19.权利要求11-18中任一项的方法，其中所述血红蛋白、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第二次测量在将ActRII信号转导抑制剂的初始剂量给予对象后约3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月进行。

20.权利要求11-19中任一项的方法，其中所述第二段时间在当进行第二次测量时的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周内。

21.权利要求11-20中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂的后续剂量为约0.3mg/kg、约0.45mg/kg、约0.6mg/kg、约1.0mg/kg或约1.25mg/kg。

22.权利要求11-21中任一项的方法，其中所述方法进一步包括进行对象的血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第三次测量。

23.权利要求16-20中任一项的方法，其中

(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；

(b)血红蛋白浓度的第二次测量大于血红蛋白浓度的第一次测量小于或等于1.5g/dL；和

(c)后续剂量等于初始剂量。

24.权利要求16-20中任一项的方法，其中

(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；

(b)血红蛋白浓度的第二次测量大于血红蛋白浓度的第一次测量大于1.5g/dL；和

(c)后续剂量为小于初始剂量的约25％。

25.权利要求16-20中任一项的方法，其中

(a)血红蛋白浓度的第二次测量(i)大于12.5g/dL且小于或等于14g/dL；和(ii)大于血红蛋白浓度的第一次测量小于或等于1.5g/dL；

(b)后续剂量等于初始剂量；和

(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量小于或等于12.5g/dL。

26.权利要求16-20中任一项的方法，其中

(a)血红蛋白浓度的第二次测量(i)大于12.5g/dL且小于或等于14g/dL，和(ii)大于血红蛋白浓度的第一次测量大于1.5g/dL；

(b)后续剂量为小于初始剂量的约25％；和

(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量测定为(i)小于或等于12.5g/dL，和(ii)血红蛋白浓度的第一次测量和血红蛋白浓度的第三次测量之间的变化小于或等于1.5g/dL。

27.权利要求16-20中任一项的方法，其中

(a)血红蛋白浓度的第二次测量大于14g/dL；

(b)后续剂量为小于初始剂量的约25％；和

(c)第二段时间包括多达12周的剂量延期直到血红蛋白浓度的第三次测量小于12.5g/dL。

28.权利要求1-27中任一项的方法，其中所述初始剂量每21天一次给予。

29.权利要求11-28中任一项的方法，其中所述后续剂量每21天一次给予。

30.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法进一步包括降低对象的GDF11水平。

31.前述权利要求中任一项的方法，其中所述方法进一步包括提高对象的胎儿血红蛋白水平。

32.权利要求1-31中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIA信号转导的抑制剂。

33.权利要求1-31中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIA的胞外域和人IgG1Fc结构域组成的人源化融合蛋白。

34.权利要求32的方法32，其中ActRIIA信号转导抑制剂是包含选自以下氨基酸序列的多肽：

(a)与SEQ ID NO:2有90％同一性；

(b)与SEQ ID NO:2有95％同一性；

(c)与SEQ ID NO:2有98％同一性；

(d)SEQ ID NO:2；

(e)与SEQ ID NO:3有90％同一性；

(f)与SEQ ID NO:3有95％同一性；

(g)与SEQ ID NO:3有98％同一性；

(h)SEQ ID NO:3；

(i)与SEQ ID NO:6有90％同一性；

(j)与SEQ ID NO:6有95％同一性；

(k)与SEQ ID NO:6有98％同一性；

(l)SEQ ID NO:6；

(m)与SEQ ID NO:7有90％同一性；

(n)与SEQ ID NO:7有95％同一性；

(o)与SEQ ID NO:7有98％同一性；和

(p)SEQ ID NO:7。

35.权利要求32的方法32，其中所述ActRII信号转导抑制剂是包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的多肽。

36.权利要求1-31中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是ActRIIB信号转导的抑制剂。

37.权利要求1-31中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂是由ActRIIB的胞外域和人IgG1Fc结构域组成的人源化融合蛋白。

38.权利要求36的方法，其中所述ActRIIB抑制剂是包含选自以下氨基酸序列的多肽：

(a)与SEQ ID NO:17有90％同一性；

(b)与SEQ ID NO:17有95％同一性；

(c)与SEQ ID NO:17有98％同一性；

(d)SEQ ID NO:17；

(e)与SEQ ID NO:20有90％同一性；

(f)与SEQ ID NO:20有95％同一性；

(g)与SEQ ID NO:20有98％同一性；

(h)SEQ ID NO:20；

(i)与SEQ ID NO:21有90％与同一性；

(j)与SEQ ID NO:21有95％同一性；

(k)与SEQ ID NO:21有98％同一性；

(l)SEQ ID NO:21；

(m)与SEQ ID NO:25有90％同一性；

(n)与SEQ ID NO:25有95％同一性；

(o)与SEQ ID NO:25有98％同一性；和

(p)SEQ ID NO:25。

39.权利要求36的方法36，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂是包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的多肽。

40.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中所述激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

41.一种用于治疗有需要的对象的输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中所述激活素受体II型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

42.一种用于治疗有需要的对象的非输血依赖性β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中所述激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

43.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中所述激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述对象的表型选自β⁰/β⁰、β⁺/β⁺、β⁰/β⁺、β⁰/HbE和β⁺/HbE，且其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

44.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中所述激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述对象的表型包括2个严重的血红蛋白β链突变的共遗传，其中对象患有α-地中海贫血，且其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

45.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，其中所述激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂每21天在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述对象的表型包括2个严重的血红蛋白β链突变的共遗传，其中对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症，且其中所述ActRIIB信号转导抑制剂包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列。

46.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次将ActRIIB信号转导抑制剂给予对象，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

47.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次将ActRIIB信号转导抑制剂给予对象，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述对象的表型选自β⁰/β⁰、β⁺/β⁺、β⁰/β⁺、β⁰/HbE和β⁺/HbE。

48.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次给予ActRIIB信号转导抑制剂，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述对象患有遗传性胎儿血红蛋白持续存在症。

49.一种用于治疗有需要的对象的β-地中海贫血的方法，所述方法包括给予对象约0.8mg/kg或约1.0mg/kg激活素受体IIB型(ActRIIB)信号转导抑制剂的初始剂量，随后以21天间隔一次或多次将ActRIIB信号转导抑制剂给予对象，使得β-地中海贫血得以治疗，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予，且其中所述给予足以在给予之间可检测地降低所述对象血清中的GDF-11水平。

50.权利要求46-49中任一项的方法，其中所述β-地中海贫血是输血依赖性β-地中海贫血。

51.权利要求46-49中任一项的方法，其中所述β-地中海贫血是非输血依赖性β-地中海贫血。

52.权利要求40-51中任一项的方法，所述方法进一步包括进行对象血红蛋白浓度的第一次测量；在第一段时间之后进行对象血红蛋白浓度的第二次测量；根据血红蛋白浓度的第二次测量和血红蛋白浓度的第一次测量之间的差异给予ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

53.权利要求40-51中任一项的方法，所述方法进一步包括进行对象血细胞比容的第一次测量；在第一段时间之后进行对象血细胞比容的第二次测量；根据血细胞比容的第二次测量和血细胞比容的第一次测量之间的差异给予ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

54.权利要求40-51中任一项的方法，所述方法进一步包括进行对象胎儿血红蛋白浓度的第一次测量；在第一段时间之后进行对象胎儿血红蛋白浓度的第二次测量；根据胎儿血红蛋白浓度的第二次测量和胎儿血红蛋白浓度的第一次测量之间的差异给予ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述给予包括在对象的上臂、腹部或大腿中皮下给予。

55.权利要求40-51中任一项的方法，所述方法进一步包括

(a)进行对象血红蛋白浓度的第一次测量；

(b)在第一段时间之后进行对象血红蛋白浓度的第二次测量；

(c)在第二段时间之后，终止给予初始剂量并给予对象ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量，其中所述后续剂量在对象的上臂、腹部或大腿中通过皮下注射给予。

56.权利要求52-55中任一项的方法，其中所述血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量在给予对象ActRIIB信号转导抑制剂的初始剂量之前进行。

57.权利要求52-56中任一项的方法，其中所述血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第一次测量在紧接将ActRIIB信号转导抑制剂的初始剂量给予对象之后或在之后至多1天、2天、3天、4天、5天、6天或1周内。

58.权利要求52-57中任一项的方法，其中所述血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第二次测量在将ActRIIB信号转导抑制剂的初始剂量给予对象后约3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月进行。

59.权利要求52-58中任一项的方法，其中所述第二段时间在当进行第二次测量时的1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周、10周、11周或12周内。

60.权利要求52-59中任一项的方法，其中所述ActRIIB信号转导抑制剂的后续剂量为约0.3mg/kg、约0.45mg/kg、约0.6mg/kg、约1.0mg/kg或约1.25mg/kg。

61.权利要求52-60中任一项的方法，其中所述方法进一步包括进行对象的血红蛋白浓度、血细胞比容或胎儿血红蛋白浓度的第三次测量。

62.权利要求52-59中任一项的方法，其中

(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；

(c)后续剂量等于初始剂量。

63.权利要求52-59中任一项的方法，其中

(a)血红蛋白浓度的第二次测量小于或等于12.5g/dL；

(c)后续剂量为小于初始剂量的约25％。

64.权利要求52-59中任一项的方法，其中

(b)后续剂量等于初始剂量；和

65.权利要求52-59中任一项的方法，其中

(b)后续剂量为小于初始剂量的约25％；和

66.权利要求52-59中任一项的方法，其中

(a)血红蛋白浓度的第二次测量大于14g/dL；

(b)后续剂量为小于初始剂量的约25％；和

67.权利要求40-66中任一项的方法，其中所述初始剂量每21天一次给予。

68.权利要求52-67中任一项的方法，其中所述后续剂量每21天一次给予。

69.权利要求40-68中任一项的方法，其中所述方法进一步包括降低对象的GDF11水平。

70.权利要求40-69中任一项的方法，其中所述方法进一步包括提高对象的胎儿血红蛋白水平。

71.一种提高对象的胎儿血红蛋白水平的方法，所述方法包括将ActRIIB信号转导抑制剂给予对象。

72.前述权利要求中任一项的方法，其中所述对象表达血红蛋白E。

73.前述权利要求中任一项的方法，其中所述对象不表达血红蛋白S。

74.前述权利要求中任一项的方法，其中所述红细胞反应由以下组成：(i)输血负担减轻大于或等于33％持续12周，和(ii)在12周时间内减少至少2个单位的红细胞。

75.权利要求1-73中任一项的方法，其中所述红细胞反应由与基线血红蛋白浓度相比血红蛋白浓度增加大于1g/dL组成，其中所述血红蛋白浓度的增加通过在连续12周时间内没有输血时的血红蛋白浓度值来衡量。

76.前述权利要求中任一项的方法，其中所述对象是人。

77.前述权利要求中任一项的方法，其中所述ActRII信号转导抑制剂以无菌无防腐剂的冻干块装入容器中，从而在给予对象之前保存在2℃和8℃之间。

78.权利要求77的方法77，其中所述容器装有37.5mg的ActRII信号转导抑制剂。

79.权利要求77的方法77，其中所述容器装有75mg的ActRII信号转导抑制剂。