CN115418345A - 一种猪成纤维细胞培养方法 - Google Patents
一种猪成纤维细胞培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115418345A CN115418345A CN202211254708.0A CN202211254708A CN115418345A CN 115418345 A CN115418345 A CN 115418345A CN 202211254708 A CN202211254708 A CN 202211254708A CN 115418345 A CN115418345 A CN 115418345A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pig
- culture
- ear
- tissue
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 title claims abstract description 25
- 238000012136 culture method Methods 0.000 title claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 60
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims abstract description 23
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 14
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000010009 beating Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 claims description 5
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 claims description 5
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 claims description 3
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 claims description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 claims description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 3
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 2
- 238000007790 scraping Methods 0.000 claims description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 abstract description 6
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 abstract description 6
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 abstract description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000035558 fertility Effects 0.000 abstract description 4
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 abstract description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 abstract description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 abstract description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 abstract description 3
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000010008 shearing Methods 0.000 abstract description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 25
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 19
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 102000013127 Vimentin Human genes 0.000 description 1
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0656—Adult fibroblasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
- C12N2509/10—Mechanical dissociation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种猪成纤维细胞培养方法,包括以下步骤:剪取猪耳组织,加入0.1%胶原蛋白酶消化液将耳组织充分剪碎至匀浆,后将其转移至已加0.1%的胶原蛋白酶消化液的离心管中消化;加入DMEM终止消化,并反复吹打数次至组织块充分散开为单细胞,过滤,离心,弃去上清液,收集细胞沉淀;在细胞沉淀中加入培养基重悬细胞,接种至培养皿中,将培养皿放入培养箱中培养,去除培养基,清洗,再加入培养基,继续培养,获得猪成纤维细胞。本发明利用胶原蛋白酶分离猪耳组织,避免了现有技术中37℃条件下胰蛋白酶水解对细胞表面蛋白质的破坏,避免了细胞损伤。收获的成纤维细胞成活率高,贴壁率高,繁殖力增强,有利于猪种质资源的保存。
Description
技术领域
本发明属于成纤维细胞培养技术领域,具体涉及一种猪成纤维细胞培养方法。
背景技术
虽然我国有许多优秀的畜禽品种资源,但是有许多地方种产量较低,为了满足人们对优质的动物产品的需求,我国引入了外国高产的畜牧品种,与我国地方低产品种交配繁衍后代,以此提高我国的畜牧业生产水平。这一方法虽然达成了目的,提高了畜牧产品的产量,但是使某些地方品种被杂交种取代,导致地方种数量大幅度下降甚至濒临灭绝。以猪种资源为例,我国许多地方猪种由于与外来猪种杂交,导致纯种种群数量急剧下降,甚至濒临灭绝。
为了更好的保存优秀畜类的种质资源,可以采用体细胞保存技术。目前体细胞保存技术已经较为成熟。其方法为取优良畜类的组织细胞,通过组织培养技术,来获得成纤维细胞,然后进行保存。根据培养的组织细胞特点,可以采用酶消化法或是组织块贴壁法,这两种培养方法都能体外培养动物细胞,组织块贴壁法虽然操作简单,但是存在组织块贴附不牢的不足。在酶消化法中,细胞不仅受到机械应力,还会受到胰蛋白酶水解的影响,导致细胞产生损伤,变得不易贴壁或者贴壁时间延长,影响细胞的活力和繁殖力。
发明内容
针对现有技术中的上述不足,本发明提供一种猪成纤维细胞培养方法。
为了达到上述发明目的,本发明采用的技术方案为:
提供一种猪成纤维细胞培养方法,包括以下步骤:
(1)选取猪耳部血管较少的耳边缘组织,清洗、剪取大小为1cm2的耳组织,浸泡、冲洗、保存;
(2)在超净工作台上刮去耳组织表面的毛及污染物,用含5%双抗的PBS清洗20-30次;
(3)加入1mL 0.1%胶原蛋白酶消化液将耳组织充分剪碎至匀浆,将剪碎后的耳组织匀浆转移至已加1mL 0.1%的胶原蛋白酶消化液的15mL离心管中,放入37℃水浴锅中,每隔5min震荡一次,全过程消化时间2h;
(4)加入9mL含2%FBS的DMEM终止消化,并反复吹打数次至组织块充分散开为单细胞,过滤,离心,弃去上清液,收集细胞沉淀;
(5)在细胞沉淀中加入2mL培养基,吹打混匀后过滤,加入2mL培养基混匀后,离心,弃去上清液,收集细胞沉淀;
(6)在细胞沉淀中加入10mL培养基重悬细胞,接种至10cm的培养皿中,将培养皿放入培养箱中培养30min后,去除培养基,用含3%双抗的PBS清洗2次,加入10mL培养基,继续培养,获得猪成纤维细胞。
进一步地,步骤(1)的具体方法为:选取猪耳部血管较少的耳边缘组织,先用含有5%双抗的生理盐水充分冲洗耳朵,再用酒精棉球充分擦拭3-4次去掉表面的污染物,然后用手术刀片或剪刀取下大小1cm2的耳组织,立即放入75%酒精中浸泡1分钟,然后用含有5%抗生素的生理盐水冲洗3遍,放入含5%双抗的DMEM组织保存液中。
进一步地,步骤(3)中,0.1%胶原蛋白酶消化液的制备方法为:取100mg胶原蛋白酶粉末,加入由79mL DMEM培养液、20mL PBS缓冲液和1mL双抗组成的混合溶液中,搅拌使其混合均匀,置于4℃环境内放置一夜,第二天将胶原蛋白酶溶液放在超净台内,抽滤除菌,-20℃下冻存。
进一步地,步骤(4)中,过滤条件为:100μm过滤筛过滤。
进一步地,步骤(4)和步骤(5)中的离心条件为:1500rpm,离心5min。
进一步地,步骤(5)中,过滤条件为:40μm过滤筛过滤。
进一步地,步骤(5)和步骤(6)中,培养基均为含10% FBS,3%双抗的培养基。
本发明的有益效果为:
本发明利用胶原蛋白酶分离猪耳组织,避免了现有技术中37℃条件下胰蛋白酶水解对细胞表面蛋白质的破坏,避免了细胞损伤。收获的成纤维细胞成活率高,贴壁率高,繁殖力增强,有利于猪种质资源的保存。
附图说明
图1为本发明实施例细胞分离培养第1天的生长状况示意图;
图2为本发明实施例细胞分离培养第7天的生长状况示意图;
图3为本发明实施例细胞分离培养第15天的生长状况示意图;
图4为本发明实施例细胞分离培养第20天的生长状况示意图;
图5为本发明实施例细胞分离培养第20天细胞Vimentin鉴定示意图;
图6为本发明实施例与对比例细胞分离培养第15天生长状况对比示意图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式进行描述,以便于本技术领域的技术人员理解本发明,但应该清楚,本发明不限于具体实施方式的范围,对本技术领域的普通技术人员来讲,只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内,这些变化是显而易见的,一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。
实施例
本发明涉及的生物材料是普通的猪,是公众可以方便获取得到的。
本发明中涉及的主要实验试剂如下表所示:
一种猪成纤维细胞培养方法,包括以下步骤:
(1)选取猪耳部血管较少的耳边缘组织,先用含有5%双抗的生理盐水充分冲洗耳朵,再用酒精棉球充分擦拭3-4次去掉表面的污染物,然后用手术刀片或剪刀取下大小约1cm2的耳组织,立即放入75%酒精中浸泡1分钟,然后用含有5%抗生素的生理盐水冲洗3遍,放入含5%双抗的DMEM组织保存液中(15mL无菌离心管)。带回实验室,在2小时内进行培养。
(2)在超净工作台上用手术剪刮去耳组织表面的毛及污染物,用含5%双抗的PBS清洗25次。
(3)加入1mL 0.1%胶原蛋白酶将耳组织充分剪碎至匀浆,将剪碎的耳组织匀浆转移至已加1mL 0.1%的胶原蛋白酶15mL离心管中,放入37℃水浴锅中,每隔5min震荡一次,全过程消化时间约2h。
(4)加入9mL含2%FBS的DMEM终止消化,并反复吹打数次至组织块充分散开为单细胞,100μm过滤筛过滤,室温1500rpm,离心5min,弃去上清液,收集细胞沉淀。
(5)在细胞沉淀中加入2mL培养基(含10% FBS,3%双抗),吹打混匀后过40μm过滤筛,加入2mL培养基(含10% FBS,3%双抗)混匀后,1500rpm离心5min,弃去上清液,收集细胞沉淀。
(6)在细胞沉淀中加入10mL(含10% FBS,3%双抗)培养基重悬细胞,接种至10cm的培养皿中,将培养皿放入培养箱中培养30min后,去除培养基,用含3%双抗的PBS清洗2次,加入10mL(含10% FBS,3%双抗)培养基,继续培养。
具体地说,步骤(3)中,0.1%胶原蛋白酶消化液的制备方法为:取100mg胶原蛋白酶粉末,加入由79mL DMEM培养液、20mL PBS缓冲液和1mL双抗组成的混合溶液中,搅拌使其混合均匀,置于4℃环境内放置一夜,第二天将胶原蛋白酶溶液放在超净台内,抽滤除菌,-20℃下冻存。
对比例
一种猪成纤维细胞培养方法,将上述步骤(3)中使用的0.1%胶原蛋白酶消化液替换成0.1%胰蛋白酶,其余步骤同实施例。
在倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况,分离培养的第1天细胞呈圆形,培养一周即可明显看到细胞形态,细胞主要呈长条梭形。随后细胞进入快速生长阶段,在第15天左右时,实施例胶原蛋白酶组细胞基本铺满培养皿。利用细胞免疫荧光染色标记成纤维细胞标记蛋白Vimentin,细胞阳性率100%。在倒置显微镜下观察,可见细胞以梭形和多角形为主,细胞饱满,胞核成卵圆形,细胞向四周呈放射状生长,形成致密单层细胞,细胞数量为6.5×106个,细胞成活率95.7%。对比例胰蛋白酶组细胞尚未长满整个培养皿,细胞轮廓明显,细胞数量为2.2×106个,细胞成活率90.2%。因此,使用胶原蛋白酶分离培养猪成纤维细胞的效果更好。
本发明利用胶原蛋白酶分离猪耳组织,避免了现有技术中37℃条件下胰蛋白酶水解对细胞表面蛋白质的破坏,避免了细胞损伤。收获的成纤维细胞成活率高,贴壁率高,繁殖力增强,有利于猪种质资源的保存。
于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (7)
1.一种猪成纤维细胞培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)选取猪耳部血管较少的耳边缘组织,清洗、剪取大小为1cm2的耳组织,浸泡、冲洗、保存;
(2)在超净工作台上刮去耳组织表面的毛及污染物,用含5%双抗的PBS清洗20-30次;
(3)加入1mL 0.1%胶原蛋白酶消化液将耳组织充分剪碎至匀浆,将剪碎后的耳组织匀浆转移至已加1mL 0.1%的胶原蛋白酶消化液的15mL离心管中,放入37℃水浴锅中,每隔5min震荡一次,全过程消化时间2h;
(4)加入9mL含2%FBS的DMEM终止消化,并反复吹打数次至组织块充分散开为单细胞,过滤,离心,弃去上清液,收集细胞沉淀;
(5)在细胞沉淀中加入2mL培养基,吹打混匀后过滤,加入2mL培养基混匀后,离心,弃去上清液,收集细胞沉淀;
(6)在细胞沉淀中加入10mL培养基重悬细胞,接种至10cm的培养皿中,将培养皿放入培养箱中培养30min后,去除培养基,用含3%双抗的PBS清洗2次,加入10mL培养基,继续培养,获得猪成纤维细胞。
2.根据权利要求1所述的猪成纤维细胞培养方法,其特征在于,步骤(1)的具体方法为:选取猪耳部血管较少的耳边缘组织,先用含有5%双抗的生理盐水充分冲洗耳朵,再用酒精棉球充分擦拭3-4次去掉表面的污染物,然后用手术刀片或剪刀取下大小1cm2的耳组织,立即放入75%酒精中浸泡1分钟,然后用含有5%抗生素的生理盐水冲洗3遍,放入含5%双抗的DMEM组织保存液中。
3.根据权利要求1所述的猪成纤维细胞培养方法,其特征在于,步骤(3)中,0.1%胶原蛋白酶消化液的制备方法为:取100mg胶原蛋白酶粉末,加入由79mL DMEM培养液、20mL PBS缓冲液和1mL双抗组成的混合溶液中,搅拌使其混合均匀,置于4℃环境内放置一夜,第二天将胶原蛋白酶溶液放在超净台内,抽滤除菌,-20℃下冻存。
4.根据权利要求1所述的猪成纤维细胞培养方法,其特征在于,步骤(4)中,过滤条件为:100μm过滤筛过滤。
5.根据权利要求1所述的猪成纤维细胞培养方法,其特征在于,步骤(4)和步骤(5)中的离心条件为:1500rpm,离心5min。
6.根据权利要求1所述的猪成纤维细胞培养方法,其特征在于,步骤(5)中,过滤条件为:40μm过滤筛过滤。
7.根据权利要求1所述的猪成纤维细胞培养方法,其特征在于,步骤(5)和步骤(6)中,培养基均为含10%FBS,3%双抗的培养基。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211254708.0A CN115418345A (zh) | 2022-10-13 | 2022-10-13 | 一种猪成纤维细胞培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211254708.0A CN115418345A (zh) | 2022-10-13 | 2022-10-13 | 一种猪成纤维细胞培养方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115418345A true CN115418345A (zh) | 2022-12-02 |
Family
ID=84206978
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211254708.0A Pending CN115418345A (zh) | 2022-10-13 | 2022-10-13 | 一种猪成纤维细胞培养方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115418345A (zh) |
-
2022
- 2022-10-13 CN CN202211254708.0A patent/CN115418345A/zh active Pending
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
X. M. ZHOU 等: "Establishment and Identification of a Debao Pony Ear Marginal Tissue Fibroblast Cell Line", ASIAN-AUST. J. ANIM. SCI., vol. 17, no. 10, pages 1338 - 1343 * |
吴中红, 邢凤英, 刘国世, 曾申明, 张忠诚: "猪输卵管上皮细胞、颗粒细胞、耳上皮细胞及胎儿成纤维细胞的培养", 中国畜牧杂志, no. 06, pages 5 - 6 * |
奎华 等: "不同年龄二狼山绒山羊 耳组织成纤维细胞的生物学特性", 养殖与饲料, no. 4, pages 3 - 7 * |
张大鹏;李跃民;栗楠;邱小燕;杨波;肖雄;: "广西巴马小型猪皮肤成纤维细胞的分离培养体系优化", 生物学杂志, no. 02 * |
查星琴 等: "版纳微型猪近交系成纤维细胞系的建立及冻存方法研究", 云南农业大学学报, vol. 29, no. 5, pages 661 - 665 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106967674B (zh) | 一种绵羊瘤胃上皮细胞的分离培养方法 | |
CN101611139A (zh) | 利用微载体的产后来源的细胞的体外扩增 | |
CN111139221B (zh) | 一种羊膜间充质干细胞的培养及冻存方法 | |
CN114045255B (zh) | 一种肾小管上皮细胞分离与培养方法 | |
CN110964693A (zh) | 一种脐带间充质干细胞的分离方法 | |
CN110791474A (zh) | 一种髓核细胞的分离及体外培养方法 | |
CN109234230B (zh) | 一种皮肤间充质干细胞的原代分离方法 | |
CN113913375A (zh) | 一种人源胎盘来源间充质干细胞的优化培养基、试剂盒和培养方法 | |
CN101597592B (zh) | 人角膜内皮细胞培养液及其制备方法和应用 | |
CN112159796A (zh) | 一种人脐带来源的间充质干细胞原代分离的方法及应用 | |
CN113293128A (zh) | 大泷六线鱼的精原细胞培养基及培养方法 | |
CN109022350B (zh) | 一种提取及培养小鼠高纯度原代肾小管上皮细胞的方法及培养基 | |
CN114107181B (zh) | 一种鲟鱼胚胎细胞系、培养基及其制备方法 | |
CN115418345A (zh) | 一种猪成纤维细胞培养方法 | |
CN107858322B (zh) | 一种海马原代细胞培养体系的建立方法 | |
CN105907707A (zh) | 一种原代小鼠或大鼠软骨细胞的分离培养方法 | |
CN115109745A (zh) | 一种黄颡鱼肝细胞高效分离和原代培养方法 | |
CN113186155B (zh) | 一种高效率的绵羊胚胎骨骼肌原代细胞培养方法 | |
CN114317412A (zh) | 一种绵羊皮肤成纤维细胞及其制备方法 | |
CN115584338A (zh) | 一种拟南芥叶片样本组织解离液及解离方法 | |
CN114276986A (zh) | 一种分离纯化水牛原代成肌细胞的方法及其应用 | |
CN114606183A (zh) | 一种动物源脂肪干细胞分离提取方法 | |
CN114807008A (zh) | 一种番茄叶片原生质体单细胞悬液的制备方法及应用 | |
WO2022056991A1 (zh) | 脐带来源的间充质干细胞及其制备方法和应用 | |
CN109771697B (zh) | 一种真皮成纤维细胞皮片及其构建方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |