CN115335404A - 双特异性结合分子 - Google Patents

Abstract

本公开提供了与人存活素和人CD3结合的新型双特异性分子，以及其制备和使用方法。

Description

双特异性结合分子

相关申请的交叉引用

本申请要求2020年2月12日提交的美国临时申请第62/975334号和2020年2月13日提交的美国临时申请第62/976117号的权益，其中每一个的内容通过引用以其整体并入本文。

发明领域

本申请尤其涉及与人存活素(Survivin)和人CD3两者结合的新型的双特异性分子、包含该双特异性分子的组合物、编码双特异性多肽的核酸、以及其制备和使用方法。

序列表

通过引用以其整体并入本文的是包含SEQ ID NO：1到SEQ ID NO：90的题为“ABV12535WOO1_ST25.txt”的序列表，所述序列表包括本文公开的氨基酸和多核苷酸序列。序列表已经通过EFS以ASCII文本格式与本申请一起提交。序列表于2021年2月10日首次创建，并且大小为77,097个字节。

发明背景

癌症疗法包含大范围的治疗方法，包括手术、放射和化学疗法。许多现有的疗法存在缺点，如缺乏靶向癌细胞而不是健康细胞的选择性，以及癌症对治疗产生耐药性。

与例如放射治疗的非靶向疗法相比，基于靶向治疗剂的最新方法(其优先影响癌细胞而不是非正常细胞)已产生具有较少副作用的化学治疗方案。

癌症免疫疗法(包括使患者T细胞能够杀死癌细胞的药剂)已经成为有前途的治疗方法。与抗体不同，T细胞受体已被进化为识别细胞内蛋白，这些蛋白被加工成小肽，这些小肽与细胞表面上的主要组织相容性复合物(MHC)抗原(也被称为人类白细胞抗原(HLA))复合。

可溶性T细胞受体(sTCR)代表了一类新型疗法，具有靶向血液肿瘤和实体瘤中的肿瘤选择性抗原的潜力，这些抗原目前无法使用传统的基于抗体的疗法获得。然而，一些挑战阻碍了治疗性sTCR的发展，包括难以表达可溶性的、稳定的和高亲和力的TCR。存活素是有吸引力的细胞内靶标，其在多种实体癌和血液癌中过度表达，可能被sTCR获得。因此，需要开发一种新的基于sTCR的免疫治疗方法以用于靶向存活素。

发明内容

本文描述了与人存活素和人CD3结合的双特异性分子。

在一个方面中，本发明提供了一种与人存活素和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

a)单链T细胞受体(sTCR)，其包含：

(1)可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQ IDNO：28(CDR3)，和

(2)可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQ IDNO：27(CDR3)，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)Fab，所述Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：21(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)和SEQ ID NO：30(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中所述sTCR的所述V_α和所述Fab的所述V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)Fc区，所述Fc区包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中第一恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列，和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ CH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种与人存活素和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

a)单链T细胞受体(sTCR)，其包含：

(1)可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，和

(2)可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)Fab，所述Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中所述sTCR的所述V_α和所述Fab的所述V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)Fc区，所述Fc区包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中第一恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列，和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ CH2′CH3′。

在另一方面中，本发明提供了一种与人存活素和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)单链T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQ ID NO：28(CDR3)；和

ii可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQ ID NO：27(CDR3)；其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：21(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)和SEQ IDNO：29(CDR3)；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含选自由SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：39组成的组的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-VH-CH1CH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：22(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)和SEQ IDNO：30(CDR3)；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ CH2′CH3′。

在一个实施例中，第一重链恒定区(CH1CH2CH3)包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列。

在另一方面中，本发明提供了一种与人CD3和人存活素两者结合的双特异性分子，其包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)单链T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；和

ii可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-VH-CH1CH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(VL)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在一些实施例中，轻链V_L-C_κ通过二硫键与重链区V_H-CH1共价结合。

在另一方面中，本发明提供了一种与人存活蛋白和人CD3结合的双特异性分子，其由以下组成：

(1)包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的第一重链；

(2)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的第二重链；和

(3)包含SEQ ID NO：76的氨基酸序列的轻链。

在另一方面中，本发明提供了一种与人存活蛋白和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

(1)包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的第一重链；

(2)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的第二重链；和

(3)包含SEQ ID NO：76的氨基酸序列的轻链。

在某些实施例中，轻链通过第一重链的位置489中的半胱氨酸(例如，SEQ ID NO：36的位置489中的半胱氨酸)和轻链的位置213中的半胱氨酸(例如，SEQ ID NO：76的位置213中的半胱氨酸)之间的二硫键与第一重链连接。在实施例中，第一重链和第二重链通过两个二硫键连接，其中两个二硫键位于第一重链的位置495中的半胱氨酸(例如，SEQ IDNO：36的位置495中的半胱氨酸)和第二重链的位置6中的半胱氨酸(例如，SEQ ID NO：16的位置6中的半胱氨酸)之间，并且位于第一重链的位置498中的半胱氨酸(例如，SEQ NO：36的位置498中的半胱氨酸)和第二重链的位置9中的半胱氨酸(例如，SEQ NO：16的位置9中的半胱氨酸)之间。

在一些实施例中，本文提供的双特异性分子在第一重链和/或第二重链中缺乏C-末端赖氨酸，导致C-末端甘氨酸残基。

附图说明

图1A-1E示出了本发明的双特异性结合蛋白的图示。图1A描绘了V_αV_β-FTab；图1B描绘了V_βV_α-FTab-hb-1、V_βV_α-FTab-hb-2、V_βV_α-FTab-hb-3、V_βV_α-FTab-hb-4和V_βV_α-FTab-hb-5；图1C描绘了V_βV_α-FTab-KiH和V_βV_α-FTab-KiH-2；图1D描绘了V_βV_α-FTab-1、V_βV_α-FTab-2和V_βV_α-FTab-3；并且图1E描绘了V_αV_β-FTab-hb-l。

图2示出了存活素TCR/CD3双特异性分子V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导了OCI-AML2的强效杀伤，如实例4中所述。

图3示出了存活素TCR/CD3双特异性分子V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导OCI-AML3的强效杀伤，如实例4中所述。

图4示出了存活素TCR/CD3双特异性分子V_βV_α-FTab-KiH不诱导OCI-Ly19的杀伤，如实例4中所述。

图5示出了存活素TCR/CD3双特异性分子V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导CD3+T细胞针对OCI-AML2的有效活化，如实例6中所述。

图6示出了存活素TCR/CD3双特异性分子V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导CD3+T细胞针对OCI-AML3的有效活化，如实例6中所述。

图7示出了存活素TCR/CD3双特异性分子V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导CD3+T细胞针对OCI-Ly19的最小活化，如实例6中所述。

图8示出了猴血清中的存活素TCR/CD3双特异性半衰期，如实例7中所述。

图9示出了在摩尔当量剂量下，具有KiH的双特异性分子(即V_βV_α-FTab-KiH′，其也被称为V_βV_α-FTab-KiH-2)表现出比不含KiH的双特异性分子(即V_βV_α-FTab-hb-5)更高的体内抗肿瘤功效，如实例3中所述。

图10示出了存活素TCR/CD3双特异性分子V_βV_α-FTab-KiH的示意图。

图11示出了V_βV_α-FTab-KiH TCR特异性筛选。

图12示出了在不同的效应子与靶比率下由V_βV_α-FTab-KiH诱导的T细胞增殖。

具体实施方式

本文描述了新的双特异性分子，其包含抗CD3结合结构域和靶向人存活素的可溶性单链T细胞受体。这些双特异性分子表现出几种出人意料的特性，包括例如出人意料的长半衰期、针对与HLA-A2复合的存活素衍生肽的显著结合特异性以及T细胞活化和增殖的有效诱导。

缩写

在许多实施例中，本文所述的双特异性结合分子和多核苷酸是通过它们相应的多肽或多核苷酸序列来描述的。除非另有说明，否则多肽序列以N端至C端方向提供，并且多核苷酸序列以5′→3′方向提供。对于多肽序列，使用遗传编码的氨基酸的常规三个或一个字母缩写。

实施例

本文描述的是包含结合人CD3的CD3结合部分和结合人存活素的存活素结合部分的双特异性分子。

如本文所使用的术语“人CD3”涉及在UniProt P07766(CD3E-HUMAN)下描述的人分化簇3蛋白(CD3)。

如本文所使用的术语“人存活素”或“存活素”涉及在UniProt O15392(BIRC5_Human)下描述的凋亡蛋白抑制剂(IAP)，其是在人癌细胞中表达的肿瘤相关抗原。

“结合至CD3或人存活素”是指能够以足够的亲和力结合CD3或人存活素的分子，使得该分子可用作靶向CD3或人存活素的治疗剂。

存活素结合部分

在一个实施例中，本发明的双特异性分子的存活素结合部分是指单链可溶性T细胞受体(sTCR)。

如本文所使用的术语“T细胞受体(TCR)”是抗原特异性分子，其负责识别在抗原呈递细胞(APC)或任何有核细胞(例如，除红细胞外的所有人体细胞)的表面上的主要组织相容性复合物(MHC)的产物的上下文中呈递的抗原肽。

在一个实施例中，本发明的sTCR是修饰的TCR，其包含衍生自野生型T细胞受体的可变α区(V_α)和可变β区(V_β)，其中V_α、V_β或两者在一个或多个互补决定区(CDR)中相对于野生型T细胞受体包含至少一个突变，其中修饰的T细胞受体结合至肽(即存活素肽LTLGEFLKL(SEQ ID NO：40))和被称为HLA-A2分子的MHC产物的复合物。

在一个实施例中，本发明的sTCR包含V_β和V_α，其中sTCR与包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列的肽和HLA-A2分子的复合物结合。

在一个实施例中，本发明的sTCR包含V_β和V_α，其中sTCR与衍生自与HLA-A2复合的人存活素的肽(SEQ ID NO：40)结合。

在实施例中，本公开的化合物以1x10^-7M或更小(例如在约1x10^-7M至约1x10^-10M、或约1x10^-8M至约1x10^＝10M)的K_D结合至存活素肽/MHC。在实施例中，本公开的化合物以小于约3x10^-9M、或小于约2.5x10^-9M、或小于约2.0x10^-9M、或小于约1.5x10^-9M的K_D结合至存活素肽/MHC复合物。

在一个实施例中，本发明的sTCR的V_α包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQ ID NO：27(CDR3)。

在一个实施例中，本发明的sTCR的V_α包含选自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQID NO：8组成的组的氨基酸序列。

在一个优选的实施例中，本发明的sTCR的V_α包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的sTCR的V_β包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQ ID NO：28(CDR3)或SEQ ID NO：31(CDR3)。

在一个优选的实施例中，本发明的sTCR的V_β包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ IDNO：24(CDR2)和SEQ ID NO：28(CDR3)。

在一个实施例中，本发明的sTCR的V_β包含选自由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQID NO：4和SEQ ID NO：5组成的组的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的sTCR的V_β包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列。

在一个实施例中，sTCR可变β区(V_β)和sTCR可变α区(V_α)通过第一肽接头(L1)连接。可以选择接头以增加本发明的双特异性分子的表达、溶解度、稳定性(例如，如通过较低的聚集水平、较低的聚集速率、较高的解链温度和/或较长的血浆半衰期来测量)和/或滴度。

在一个实施例中，sTCR的可变β区(V_β)和sTCR的可变α区(V_α)通过包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的第一肽接头(L1)连接。

在某些实施例中，sTCR的可变β区(V_β)通过二硫键被连接到sTCR的可变α区(V_α)。在实施例中，连接V_α区和V_β区的二硫键位于V_α区的半胱氨酸43和V_β区的半胱氨酸235之间。在实施例中，连接V_α区和V_β区的二硫键位于SEQ ID NO：36或SEQ ID NO：88的半胱氨酸43和半胱氨酸235之间。在实施例中，连接V_α区和V_β区的二硫键位于SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：2的半胱氨酸43和SEQ ID NO：6的半胱氨酸100之间。

在一个实施例中，本发明的单链可溶性T细胞受体(sTCR)与肽存活素的复合物结合，其中复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQID NO：28(CDR3)或SEQ ID NO：31(CDR3)，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接。

在一个实施例中，本发明的单链可溶性T细胞受体(sTCR)与肽存活素的复合物结合，其中复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQID NO：28(CDR3)，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接。

在一个实施例中，本发明的单链可溶性T细胞受体(sTCR)结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含选自由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5组成的组的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含选自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8组成的组的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接。

在一个实施例中，本发明的单链可溶性T细胞受体(sTCR)结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含选自由SEQ ID NO：2组成的组的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含选自由SEQ ID NO：6组成的组的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接。

在一个实施例中，本发明的第一肽接头(L1)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。

CD3结合部分

在一个实施例中，本发明的双特异性分子的CD3结合部分是包含重链可变结构域(V_H)和恒定重链结构域1(CH1)的抗体重链和包含轻链可变结构域(V_L)和κ(κ)轻链(恒定结构域C_κ)的抗体轻链的组合，并且优选地如封闭在结合至人CD3(抗CD3-Fab)的抗原结合片段(Fab)中的V_H、CH1、V_L和C_κ，其中轻链(V_L-C_κ)通过二硫键被共价结合至重链(V_H-CH1)。在一些实施例中，C_κ用λ轻链恒定区替换。

如本文所使用的“可变结构域”(轻链的可变结构域(V_L)、重链的可变区(V_H))表示直接参与抗体与靶结合的每对轻链和重链可变人轻链和重链的结构域具有相同的一般结构，并且每个结构域包含至少一个互补决定区(CDR)，优选地三个CDR，其在根据本发明的抗体的结合特异性/亲和力中起特别重要的作用，因此提供了本发明的另外的目的。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab的V_H包含SEQ ID NO：21(CDR1)或SEQ IDNO：32(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)或SEQ ID NO：33(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)或SEQID NO：34(CDR3)。

在一个优选的实施例中，本发明的抗CD3-Fab的V_H包含SEQ ID NO：21(CDR1)、SEQID NO：25(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab的V_H包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列。

在一个优选的实施例中，本发明的抗CD3-Fab的V_H包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab的V_L包含SEQ ID NO：22(CDR1)或SEQ IDNO：81(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)或SEQ ID NO：82(CDR2)，以及SEQ ID NO：30(CDR3)或SEQ ID NO：83(CDR3)。

在一个优选的实施例中，本发明的抗CD3-Fab的V_L包含SEQ ID NO：22(CDR1)、SEQID NO：26(CDR2)和SEQ ID NO：30(CDR3)。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab的V_L包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列。

在一个优选的实施例中，本发明的抗CD3-Fab的V_L包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab的CH1包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列。

在一个优选的实施例中，本发明的抗CD3-Fab的CH1包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab的C_κ包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：21(CDR1)或SEQ ID NO：32(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)或SEQ ID NO：33(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)或SEQ ID NO：34(CDR3)的重链可变区(V_H)；以及包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)；和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)或SEQ ID NO：81(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)或SEQ ID NO：82(CDR2)，和SEQ ID NO：30(CDR3)或SEQ ID NO：83(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)。

在一个优选的实施例中，本发明的抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：21(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)的重链可变区(V_H)；以及包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)；和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)和SEQ ID NO：30(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变区(V_H)和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的kappa恒定轻链(C_κ)。

在一个实施例中，本发明的抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)。

Fc区

在一个实施例中，本发明的双特异性分子进一包含片段可结晶区(Fc)。

术语“Fc”或“Fc区”是技术人员熟知的术语并且涉及补体激活、Clq结合、C3激活和Fc受体结合。

在一个实施例中，本发明的Fc区衍生自人来源。

在一个实施例中，本发明的Fc区是人IgG1 Fc区或衍生自人IgG1 Fc区。

在一个实施例中，本发明的Fc区包含第一CH2CH3区，其包含第一CH2结构域和第一CH3结构域。

在一个实施例中，本发明的Fc区包含第二CH2′CH3′区，其包含第二CH2结构域(CH2′)和第二CH3结构域(CH3′)。

在一个实施例中，本发明的Fc区包含第一恒定区，所述第一恒定区包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)。

在一个实施例中，本发明的Fc区包含第二恒定区，所述第二恒定区包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)。

在实施例中，Fc区包含第一CH2CH3区和第二CH2′CH3′区，其中第一CH2CH3区通过两个二硫键共价结合到第二CH2′CH3′区。

在一个实施例中，本发明的Fc区包含铰链区。术语“铰链区”是指免疫球蛋白抗体的重链的中心部分的柔性氨基酸片段，其通过二硫键连接这2条链。各种铰链区可以用于本发明的双特异性分子，例如，以优化某些特性。在说明性的实例中，可以在人IgG₁、IgG₂、IgG₃或IgG₄的铰链区内引入一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失以降低片段化和/或聚集的水平或速率。

在一个实施例中，本发明的Fc区被工程改造为在其恒定重链结构域3(CH3)中的人IgG1 Fc区中包含至少一个氨基酸取代，以通过“杵臼(knob-in-hole)”技术促进异二聚化(KiH)。在该技术中，通过基因操作，在两条不同Ig重链的CH3结构域中诱导突变，在一条Ig重链的CH3结构域中形成孔结构，在另一条Ig重链的CH3结构域中形成旋钮结构，并且两条Ig重链被诱导以形成异二聚体(例如，Carter，P.，J.Immunol.Meth.248(2001)7-15；Merchant，A.M等人，《自然生物技术(Nat.Biotechnol)》16(1998)677-681；Zhu，Z等人，Prot.Sci.6(1997)781-788；Ridgway，J.B等人，Prot.Eng.9(1996)617-621；Atwell，S等人，《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》270(1997)26-35)。

例如，根据抗体链的氨基酸编号的EU编号(Cunningham，Pflumm等人，1969)，疏水性核心中包括的有助于在人IgG1重链CH3结构域之间形成同型二聚体的氨基酸残基是Leu351、Thr366、Leu368和Tyr407。在杵臼技术中，关于位于CH3结构域界面中疏水性核心的残基，在一个重链CH3结构域中形成孔结构，使得具有大侧链的疏水性氨基酸残基被具有小侧链的疏水性氨基酸取代(Thr366Ser、Leu368Ala、Tyr407Val)，在另一个重链CH3结构域中形成旋钮结构，使得具有小侧链的疏水性氨基酸残基被具有大侧链的疏水性氨基酸取代(Thr366Trp)。当两个突变对，其中引入第一CH3(Thr366Ser、Leu368Ala和Tyr407Val)和第二CH3′(Thr366Trp)的重链恒定区突变对，以形成异二聚体Fc。

在一个实施例中，本发明的Fc区衍生自人IgG1 Fc区，并且包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列，所述氨基酸序列在第一CH3结构域中包含下列氨基酸取代中的至少一种：用丝氨酸取代Thr128、用丙氨酸取代Leu130和用缬氨酸取代Tyr169，根据抗体链的氨基酸编号的EU编号，它们分别对应于人IgG1重链的Thr366Ser、Leu368Ala和Tyr407Val。

在一个实施例中，本发明的Fc区衍生自人IgG1 Fc区并且包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列，所述氨基酸序列在人IgG1 Fc区的第一CH3结构域中包含用丝氨酸对Thr128的氨基酸取代、用丙氨酸对Leul30氨基酸取代和用缬氨酸对Tyr169的氨基酸取代，根据抗体链的氨基酸编号的EU编号，它们分别对应于人IgG1重链的Thr366、Leu368和Tyr407。

在一个实施例中，本发明的Fc区衍生自人IgG1 Fc区并且在第二CH3结构域(CH3′)中包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列，即用色氨酸对Thr146的氨基酸取代，根据抗体链的氨基酸编号的EU编号，其分别对应于人IgG1重链的Thr366。

在一个实施例中，本发明的Fc区包含一个或多个突变以调节Fc区的基于Fc受体的功能。在一个实施例中，本发明的Fc区包含一个或多个突变以调节Fc区的基于FcγR的效应子功能。在一个实施例中，本发明的Fc区衍生自人IgG1 Fc区并且包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列，所述氨基酸序列在第一CH2结构域中包含用丙氨酸对Asn59的氨基酸取代，根据抗体链的氨基酸编号的EU编号，其分别对应于人IgG1重链的Asn297。在一个实施例中，本发明的Fc区衍生自人IgG1 Fc区并且包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列，所述氨基酸序列在第二CH2结构域(CH2′)中包含用丙氨酸对Asn77的氨基酸取代，根据抗体链的氨基酸编号的EU编号，其分别对应人IgG1重链的Asn297。

在一个实施例中，本发明的Fc区包含第一恒定区(CH2CH3)，所述第一恒定区包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)。

在一个实施例中，本发明的Fe区包含：

(1)第一恒定区CH2CH3，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)；和

(2)第二恒定区CH2′CH3′，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)。

在一个实施例中，本发明的Fc区的CH2CH3包含选自由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15组成的组的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的Fc区的CH2CH3包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的Fc区的CH2′CH3′包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的Fe区包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中CH2CH3包含选自由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15组成的组的氨基酸序列；和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中CH2′CH3′包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的Fe区包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中CH2CH3包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列；和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中CH2′CH3′包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列。

在一个实施例中，本发明的Fc区在抗CD3-Fab的CH1和Fc区的CH2之间连接到本发明的抗CD3-Fab，以形成CH1CH2CH3结构域。

在一个实施例中，本发明的CH1CH2CH3包含选自由SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：39组成的组的氨基酸序列。

在一个优选的实施例中，本发明的CH1CH2CH3包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列。

双特异性分子的形式

根据本发明，CD3结合部分、存活素结合部分和Fc区可以以各种方向被格式化。为了帮助理解，双特异性分子的五个示例性实施例示于图1A-1E中。

参考图1A，双特异性分子的一个示例性实施例包含(1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至存活素肽和HLA-A2分子的复合物；和(2)抗原结合片段(Fab)，其与人CD3(抗CD3-Fab)结合。sTCR包含sTCR可变β区(V_α)和sTCR可变α区(V_β)，其中V_α和V_β通过第一肽接头(L1)连接。抗CD3-Fab包含重链可变区(V_H)、重链恒定结构域1(CH1)、轻链可变区(V_L)和κ恒定轻链(C_κ)。sTCR和抗CD3-Fab通过连接sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H的第二肽接头(L2)连接。双特异性分子以V_α-L1-V_β-L2-抗CD3-Fab的形式。

参考图1B，双特异性分子的一个示例性实施例包含(1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至存活素肽和HLA-A2分子的复合物；(2)抗原结合片段(Fab)，其与人CD3(抗CD3-Fab)结合；和(3)片段可结晶区(Fc)。sTCR、抗CD3-Fab和Fc区以sTCR-抗CD3-Fab-Fc的顺序连接。sTCR包含sTCR可变β区(V_β)和sTCR可变α区(V_α)，其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接。抗CD3-Fab包含重链可变区(V_H)、重链恒定结构域1(CH1)、轻链可变区(V_L)和κ恒定轻链(C_κ)。sTCR和抗CD3-Fab通过sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H之间的第二肽接头(L2)连接。Fc区包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)。抗CD3-Fab和Fc区以抗体的半体的形式封闭。双特异性分子以V_β-L1-V_α-L2-抗CD3-Fab-Fc的形式。

参考图1C，双特异性分子的一个示例性实施例包含(1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至存活素肽和HLA-A2分子的复合物，(2)抗原结合片段(Fab)，其与人CD3(抗CD3-Fab)结合；和(3)片段可结晶区(Fc)。sTCR、抗CD3-Fab和Fc区以sTCR-抗CD3-Fab-Fc的顺序连接。sTCR包含sTCR可变β区(V_β)和sTCR可变α区(V_α)，其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接。抗CD3-Fab包含重链可变区(V_H)、重链恒定结构域1(CH1)、轻链可变区(V_L)和κ恒定轻链(C_κ)。sTCR和抗CD3-Fab通过V_α和V_H之间的第二肽接头(L2)连接。Fc区包含第一恒定区和第二恒定区，所述第一恒定区包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，所述第二恒定区包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)。第一CH3和第二CH3通过“杵臼”技术被工程改造以用于异二聚化。双特异性分子以V_β-L1-V_α-L2-抗CD3-Fab-Fc的形式。

参考图1D，双特异性分子的一个示例性实施例包含(1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至存活素肽和HLA-A2分子的复合物；和(2)抗原结合片段(Fab)，其与人CD3(抗CD3-Fab)结合。sTCR包含sTCR可变β区(V_β)和sTCR可变α区(V_α)，其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接。抗CD3-Fab包含重链可变区(V_H)、重链恒定结构域1(CH1)、轻链可变区(V_L)和κ恒定轻链(C_κ)。sTCR和抗CD3-Fab通过连接sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H的第二肽接头(L2)连接。双特异性分子以V_β-L1-V_α-L2-抗CD3-Fab的形式。

参考图1E，双特异性分子的一个示例性实施例包含(1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至存活素肽和HLA-A2分子的复合物；(2)抗原结合片段(Fab)，其与人CD3(抗CD3-Fab)结合；和(3)片段可结晶区(Fc)。sTCR、抗CD3-Fab和Fc区以sTCR-抗CD3-Fab-Fc的顺序连接。sTCR包含sTCR可变β区(V_α)和sTCR可变α区(V_β)，其中V_α和V_β通过第一肽接头(L1)连接。抗CD3-Fab包含重链可变区(V_H)、重链恒定结构域1(CH1)、轻链可变区(V_L)和κ恒定轻链(C_κ)。sTCR和抗CD3-Fab通过sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H之间的第二肽接头(L2)连接。Fc区包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)。抗CD3-Fab和Fc区以抗体的半体的形式封闭。双特异性分子以V_α-L1-V_β-L2-抗CD3-Fab-Fc的形式。

下面列出本发明的具体实施例：

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQID NO：28(CDR3)或SEQ ID NO：31(CDR3)，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)；

其中所述sTCR的所述V_α和V_β区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：21(CDR1)或SEQ ID NO：32(CDR1)、SEQ ID 25(CDR2)或SEQ ID NO：33(CDR2)、和SEQ ID NO：29(CDR3)或SEQ ID NO：34(CDR3)的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，以及，

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)或SEQ ID NO：81(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)或SEQ ID NO：82(CDR2)、和SEQ ID NO：30(CDR3)或SEQ ID NO：83(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含选自由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5组成的组的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含选自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8组成的组的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_α和V_β区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQID NO：28(CDR3)或SEQ ID NO：31(CDR3)，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)；

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：21(CDR1)或SEQ ID NO：32(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)或SEQ ID NO：33(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)或SEQ ID NO：34(CDR3)的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)或SEQ ID NO：81(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)或SEQ ID NO：82(CDR2)、和SEQ ID NO：30(CDR3)或SEQ ID NO：83(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含选自由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5组成的组的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含选自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8组成的组的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQID NO：28(CDR3)或SEQ ID NO：31(CDR3)，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：21(CDR1)或SEQ ID NO：32(CDR1)、SEQ ID NIO：25(CDR2)或SEQ ID NO：33(CDR2)、和SEQ ID NO：29(CDR3)或SEQ ID NO：34(CDR3)的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)或SEQ ID NO：81(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)或SEQ ID NO：82(CDR2)、和SEQ ID NO：30(CDR3)或SEQ ID NO：83(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中CH2CH3包含选自由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15组成的组的氨基酸序列；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-Vα-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含选自由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5组成的组的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含选自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8组成的组的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中CH2CH3包含选自由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15组成的组的氨基酸序列；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQID NO：28(CDR3)或SEQ ID NO：31(CDR3)，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)，

其中所述sTCR的所述V_α和V_β区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：21(CDR1)或SEQ ID NO：32(CDR1)、SEQ ID NIO：25(CDR2)或SEQ ID NO：33(CDR2)、和SEQ ID NO：29(CDR3)或SEQ ID NO：34(CDR3)的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)或SEQ ID NO：81(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)或SEQ ID NO：82(CDR2)、和SEQ ID NO：30(CDR3)或SEQ ID NO：83(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中CH2CH3包含选自由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15组成的组的氨基酸序列；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含选自由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5组成的组的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含选自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8组成的组的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_α和V_β区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中CH2CH3包含选自由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15组成的组的氨基酸序列；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQID NO：28(CDR3)或SEQ ID NO：31(CDR3)，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)包含SEQ ID NO：21(CDR1)或SEQ ID NO：32(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)或SEQID NO：33(CDR2)、和SEQ ID NO：29(CDR3)或SEQ ID NO：34(CDR3)的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)或SEQ ID NO：81(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)或SEQ ID NO：82(CDR2)、和SEQ ID NO：30(CDR3)或SEQ ID NO：83(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中第一恒定区(CH2CH3)包含选自由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15组成的组的氨基酸序列，和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ CH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQID NO：28(CDR3)，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)包含SEQ ID NO：21(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)和SEQ ID NO：30(CDR3)的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中第一恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列；和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含选自由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5组成的组的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含选自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8组成的组的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变区(V_H)，以及包含SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中第一恒定区(CH2CH3)包含选自由SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15组成的组的氨基酸序列；和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中第一恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列；和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQ IDNO：28(CDR3)或SEQ ID NO：31(CDR3)；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)；其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：21(CDR1)或SEQ ID NO：32(CDR1)、SEQ IDNO：25(CDR2)或SEQ ID NO：33(CDR2)、和SEQ ID NO：29(CDR3)或SEQ ID NO：34(CDR3)；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含选自由SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：39组成的组的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-VH-CHlCH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：22(CDR1)或SEQ ID NO：81(CDR1)、SEQ IDNO：26(CDR2)或SEQ ID NO：82(CDR2)、和SEQ ID NO：30(CDR3)或SEQ ID NO：83(CDR3)；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQ IDNO：28(CDR3)；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQID NO：27(CDR3)；其中V_β和V_α经由包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：21(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)和SEQ IDNO：29(CDR3)；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-VH-CH1CH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：22(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)和SEQ IDNO：30(CDR3)；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含选自由SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5组成的组的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含选自由SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8组成的组的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含选自由SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38和SEQ ID NO：39组成的组的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-VH-CH1CH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：12的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-VH-CH1CH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ CH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种与人CD3和肽存活素的复合物结合的双特异性分子，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中所述双特异性分子包含：

a)包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的第一重链，

b)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的第二重链，和

c)包含SEQ ID NO：76的氨基酸序列的轻链。

在一个实施例中，本发明提供了一种与人CD3和肽存活素的复合物结合的双特异性分子，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中所述双特异性分子包含：

a)包含SEQ ID NO：88的氨基酸序列的重链，

b)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的第二重链，和

c)包含SEQ ID NO：76的氨基酸序列的轻链。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)第一恒定区，其包含第一恒定结构域2(CH2)和第一恒定结构域3(CH3)，其中第一恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：13的氨基酸序列，和

(2)第二恒定区，其包含第二恒定结构域2(CH2′)和第二恒定结构域3(CH3′)，其中第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-VH-CHlCH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)恒定区，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)恒定区，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；

其中sTCR的V_β和V_H通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1CH2CH3的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，和

其中sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1)，其包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列；

其中sTCR的V_β和V_H通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_α-L1-V_β-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，和

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：3的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：7的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1)，其包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)恒定区，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：8的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(1)恒定区，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述V_H通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

(2)恒定区，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：14的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：38的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，和

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1)，其包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，和

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：10的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1)，其包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：12的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1

V_L-Cκ。

在一个实施例中，本发明提供了一种双特异性分子，其包含：

a)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

(1)sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列，和

(2)sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)结合至人CD3的抗原结合片段(Fab)(抗CD3-Fab)，其中所述抗CD3-Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的重链可变区(V_H)；和包含SEQ ID NO：35的氨基酸序列的重链恒定结构域1(CH1)，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的轻链可变区(V_L)；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的κ恒定轻链(C_κ)，

其中sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)片段可结晶区(Fc)，其包含：

恒定区，其包含恒定结构域2(CH2)和恒定结构域3(CH3)，其中恒定区(CH2CH3)包含SEQ ID NO：15的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在另一方面中，本发明提供了一种双特异性分子，其结合至人CD3和肽存活素的复合物，其中所述双特异性分子包含：

a)重链区，所述重链区包含：

1)单链可溶性T细胞受体(sTCR)，其结合至肽存活素的复合物，其中所述复合物包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列和HLA-A2分子，其中sTCR包含：

i.sTCR可变β区(V_β)，其包含SEQ ID NO：5的氨基酸序列；和

ii.sTCR可变α区(V_α)，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中V_β和V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)重链可变区(V_H)，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：39的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述VH通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3的形式；和

b)轻链，所述轻链包含：

1)轻链可变区(V_L)，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)κ恒定轻链(C_κ)，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-Cκ。

在一个实施例中，双特异性分子的sTCR与衍生自人存活素的肽结合。

在一个实施例中，双特异性分子的sTCR与衍生自与HLA-A2复合的人存活素的肽结合。

在一个实施例中，双特异性分子的sTCR与包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列的肽结合。

在一个实施例中，双特异性分子的sTCR与包含SEQ ID NO：40的氨基酸序列的肽结合，该肽衍生自于与HLA-A2复合的人存活素。

在一个实施例中，所述sTCR的所述V_β和V_α区通过包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的第一肽接头(L1)连接。

在一个实施例中，所述sTCR的所述V_α和V_β区通过包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的第一肽接头(L1)连接。

在一个实施例中，sTCR的V_α和抗CD3-Fab的V_H通过包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的第二肽接头连接。

在一个实施例中，sTCR的V_β和抗CD3-Fab的V_H通过包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的第二肽接头连接。

如在以下实例所述，已经鉴定了本发明的分子的几个意想不到的方面。例如，本发明的分子对存活素以及对人CD3具有高亲和力。分子的存活素TCR部分对存活素表现出约2nM的表观亲和力，特别是针对与HLA-A2复合的存活素衍生肽(SEQ ID NO：40)的显著高的特异性，同时该分子抑制肿瘤生长并诱导T细胞活化和增殖。此外，具有KiH的分子具有约5天的血清半衰期，与不含有KiH的分子的0.5小时半衰期相比，这是显著的改进。

在另一方面中，本公开涉及一种包含本发明的双特异性分子的药物组合物。

在另一方面中，本公开涉及一种治疗急性髓性白血病或B细胞非霍奇金淋巴瘤的方法，其包含向有需要的患者施用本发明的双特异性分子或其药物组合物。

在另一方面中，本公开涉及编码本发明的双特异性分子的核酸分子，

在另一方面中，本公开涉及包含编码本发明的双特异性分子的核酸分子的载体。

在另一方面中，本公开涉及能够产生本发明的双特异性分子的宿主细胞。

实例

提供以下实例是为了说明的目的而不是限制。

实例1：TCR-CD3双特异性分子生成

产生双特异性分子。双特异性分子的每种组分的多肽序列列于表1中，并鉴定了编码这种多肽的DNA序列。此类多肽内的CDR带有下划线，并且它们的序列被单独鉴定。

在一些实施例中，表1中列出的双特异性分子的CH2CH3、CH2′CH3′、CH1CH2CH3、重链1和/或重链2组分的多肽序列缺少C-末端赖氨酸，导致C-末端甘氨酸残基。

在一些实施例中，表1中列出的V_αV_β-FTab、V_βV_α-FTab-1、V_βV_α-FTab-2或V_βV_α-FTab-3的CH1组分的多肽序列进一步包括6-His标签(HHHHHH，SEQ ID NO：90)，这些标签位于这些双特异性分子的CH1结构域的C端处。

表1

实例2：表达和纯化

内部提供质粒DNA，并使用瞬时转染方法在HEK293-6E细胞中表达蛋白质。使用聚乙烯亚胺Max(PEI Max，Polysciences Inc)，以4∶1的PEI∶DNA比率和3∶2的轻链：重链DNA比率，将0.5mg DNA/升细胞培养物转染到密度为1.4x10⁶个细胞/mL的HEκ293-6E细胞中。HEK293-6E细胞在2.8L摇瓶(125RPM)中在37℃下在含有5％CO₂的悬浮液中在FreeStyle^TM293培养基(Invitrogen)中生长。转染一天后，细胞用0.5％胰蛋白胨N1喂养。在转染后第7天，转染的细胞培养物通过离心清除，然后通过0.2μm PES过滤器(Corning)过滤。

双特异性分子的表达：使用瞬时转染方法在HEK293-6E细胞中表达实例1的所有双特异性蛋白质。使用聚乙烯亚胺Max(PEI Max，Polysciences Inc)，以4∶1的PEI∶DNA比率和1∶1∶1的轻链∶重链1∶重链2DNA比率，将0.5mg DNA/升细胞培养物转染到密度为1.4x10⁶个细胞/mL的HEK293-6E细胞中。HEK293-6E细胞在10升Wave袋(28RPM，7Angle)中在37℃下在含5％CO₂的悬浮液中在FreeStyle^TM293培养基(Invitrogen)中生长。转染一天后，细胞用0.5％胰蛋白胨N1喂养。在转染后第7天，转染的细胞培养物通过离心清除，然后通过0.45/0.2μm过滤器(Sartorius Stedim)过滤。

V_βV_α-FTab-hb-1、V_βV_α-FTab-hb-2、V_βV_α-FTab-hb-3、V_βV_α-FTab-hb-4、V_βV_α-FTab-hb-5、V_βV_α-FTab-KiH和V_βV_α-FTab-KiH-2的纯化：将澄清的培养基加载到用pH 7.4的PBS平衡的MabSelect SuRe^TM柱(GE Healthcare)上。该柱用pH 7.4的PBS洗涤，并且结合的蛋白质用pH 2.7的0.1M乙酸、0.15M NaCl洗脱。用pH 9.0的1M Tris以1∶10的比率中和级分。中和的蛋白质在用pH 7.4的PBS平衡和运行的Superdex 200柱(GE Healthcare)上通过SEC进一步纯化。合并含有蛋白质的级分，通过280nm处的吸光度测量浓度，并通过SEC、SDS-PAGE和质谱法来分析样品。最终材料以等分试样的形式储存在-80℃。

V_βV_α-FTab-1、V_βV_α-FTab-2、V_βV_α-FTab-3和V_αV_β-FTab的纯化：使用配备有10kDa膜(GE Healthcare)的Kvick^TM TFF系统将澄清的培养基缓冲液交换为pH 7.4的PBS，并加载到用pH 7.4的PBS平衡的HisTrap^TM FF柱(GE Healthcare)上。用在pH 7.4的PBS中的25mm咪唑来洗涤柱，并且结合的蛋白质用在pH 7.4的PBS中的250mM咪唑洗脱。洗脱的蛋白质在用pH7.4的PBS平衡和运行的

200柱(GE Healthcare)上通过SEC进一步纯化。合并含有抗CD3-Fab的级分，通过280nm处的吸光度测量浓度，并通过SEC、SDS-PAGE和质谱法来分析样品。最终材料以等分试样的形式储存在-80℃。

实例3：测定和表征

具有Fc区的双特异性分子，其是二聚体杵臼(例如，V_βV_α-FTab KiH′，其也被称为V_βV_α-FTab KiH-2)或半体(例如，V_βV_α-FTab-hb-1)，表现出改善的药代动力学和血清稳定性性质，同时通过单价结合至SURV/HLA-A2和CD3来维持效力和特异性。如图9所示，在HCT-116CRC ES模型中的单剂量比较研究中，意外地发现在摩尔当量剂量下，含有KiH(V_βV_α-FTab-KiH-2)的双特异性分子表现出比V_βV_α-FTab-hb-5更高的抗肿瘤功效。V_βV_α-FTab-KiH-2与V_βV_α-FTab-KiH几乎相同，除了一个氨基酸取代以减轻脱酰胺作用，这预计不对效力具有任何影响。

实例4：用于AML细胞系功能测定的靶细胞标记

细胞系OCI-AML2(ACC-99)、OCI-AML3(ACC-582)和OCI-Ly19(ACC-528)购自DSMZ，并且在补充有20％FBS的α-MEM中培养，并在37℃和5％CO₂下孵育。OCI-M1(ACC-529)也购自DSMZ并且在补充有10％FBS的IMDM中培养并在37℃和5％CO₂下孵育。在与T细胞共培养之前，细胞用CellVue^TM Burgundy(Invitrogen)染色。将靶细胞沉淀并用PBS洗涤一次。根据制造商的说明，将细胞重新悬浮在稀释剂C中，并在室温下在黑暗中与终浓度为2μM BurgundyCellVue^TM染料一起孵育5分钟。通过加入等体积的FBS(Sigma)来终止反应。用细胞系特异性完全培养基洗涤样品3次。在接种到功能测定之前，对细胞进行计数并通过FACS检查标记的效率。APC-Cy7通道用于检测CellVue^TM Burgundy信号。

实例5：用于功能测定的效应T细胞标记

使用T细胞分离试剂盒(Miltenyi)在LS柱(Miltenyi)上通过阴性选择从供体PBMC原液中分离效应T细胞。MACS^TM缓冲液(补充有0.1％BSA和2mM EDTA的PBS)用于分离CD3+T细胞。分离的CD3+T细胞在补充有5％AB血清的AIM V^TM培养基中培养，并在37℃和5％CO₂下孵育过夜。第二天，对细胞进行计数并用CellTrace^TM Violet(Invitrogen)标记。将效应细胞沉淀并用PBS洗涤一次。效应细胞在10mL PBS中每50mL管等分10⁷个。CellTrace^TM储备溶液在使用前通过将20μL体积的DMSO(组分B)添加到一小瓶CellTrace^TM试剂(组分A)中并充分混合被立即制备。将十微升的CellTrace^TM试剂添加到每个含有效应细胞的50mL的管中。效应细胞在37℃和5％CO₂下染色20分钟，并偶尔摇动以确保有效染色。为了停止反应，向每个50mL管中加入40mL的补充有10％FBS的AIM V^TM。反应阻断在室温下在黑暗中进行5分钟；将细胞沉淀并用补充有5％AB血清的AIM V^TM培养基重新悬浮。在接种到功能测定之前，对细胞进行计数并通过FACS检查标记的效率。Pacific Blue通道用于检测CellTrace^TM Violet信号。

实例6：重定向T细胞细胞毒性和活化测定

将CellVue^TM Burgundy标记的靶细胞以每孔20,000个细胞接种到每孔50μl体积的圆底96孔板(BD)中。将CellTrace^TM Violet标记的效应T细胞以每孔200,000个细胞(50μl体积)添加到适当的孔中(一式两份)，效应T细胞/靶比率(E∶T)近似为10∶1。将连续稀释的存活素TCR/CD3双特异性分子以50μl体积添加到适当的孔中，从每孔6nM开始，并在9个孔中以3倍稀释滴定(一式两份)。将混合的培养物在37℃和5％CO₂下放置48小时。发现靶细胞毒性和T细胞活化参数在48小时时最佳。在收获时，收集培养上清液用于细胞因子释放分析，同时将细胞沉淀并用FACS抗体染色以检测靶细胞毒性、T细胞活化和T细胞增殖。简而言之，将含有样品的96孔板盖上盖子并用FACS缓冲液(补充有0.5％BSA和2mM EDTA的PBS)洗涤两次。针对T细胞活化标志物CD25-PE(Biolegend)、CD69-APC(Biolegend)和CD3-PE-Cy7(Biolegend)的抗体以7.5μl/ml FACS缓冲液混合，并且每孔加入25μl。允许样品在4℃下在黑暗中孵育25分钟。样品用FACS缓冲液洗涤两次。将生存力染料Annexin-FITC(Biolegend)和7AAD(Biolegend)分别在Annexin V结合缓冲液(Biolegend)中以7.5μl/ml和15μl/ml混合，并在室温下在黑暗中以25μl/孔加入到孔中持续15分钟。在孵育结束时，向每个孔中加入75μl的Annexin V结合缓冲液。在FACSCanto II^TM上获取数据并使用FlowJo^TM V10分析软件进行分析。使用非线性回归将靶细胞毒性、T细胞活化和T细胞增殖的剂量应答数据拟合成S形曲线，并借助GraphPad 5.0软件计算EC₅₀值。

如图2所示，评估了V_βV_α-FTab-KiH-FTab-KiH重定向CD3+ T细胞针对HLA-A2、存活素阳性AML细胞系OCI-AML2的杀伤的能力。V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导了OCI-AML2的强效杀伤，而在阴性对照(不相关的TCR/CD3双特异性)(Neg Ctrl)的情况下未观察到活性。

如图3所示，评估了V_βV_α-FTab-KiH重定向CD3+ T细胞针对HLA-A2、存活素阳性AML细胞系OCI-AML3的杀伤的能力。V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导了OCI-AML3的强效杀伤，而在不相关的TCR/CD3双特异性(Neg Ctrl)的情况下没有观察到活性。

如图4所示，评估了V_βV_α-FTab-KiH重定向CD3+ T细胞针对HLA-A2阴性、存活素阳性AML细胞系OCI-Ly19的杀伤的能力。V_βV_α-FTab-KiH不诱导OCI-Ly19的杀伤，因为该细胞系缺乏HLA-A2表达。

如图5所示，评估了V_βV_α-FTab-KiH激活CD3+T细胞针对HLA-A2、存活素阳性AML细胞系OCI-AML2的能力，如通过CD69表达测量的。V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导CD3+ T细胞针对OCI-AML2的有效激活，而在不相关的TCR/CD3双特异性(Neg Ctrl)的情况下未观察到活性。

如图6所示，评估了V_βV_α-FTab-KiH激活CD3+T细胞针对HLA-A2、存活素阳性AML细胞系OCI-AML3的能力，如通过CD69表达测量的。V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导CD3+ T细胞针对OCI-AML3的有效激活，而在不相关的TCR/CD3双特异性(Neg Ctrl)的情况下未观察到活性。

如图7所示，评估了V_βV_α-FTab-KiH激活CD3+T细胞针对HLA-A2阴性、存活素阳性AML细胞系OCI-Ly19的能力，如通过CD69表达测量的。V_βV_α-FTab-KiH在4种健康CD3+T细胞供体中诱导CD3+ T细胞针对OCI-Ly19的最小活化，这是由于该细胞系缺乏HLA-A2表达。

如图12所示，评估了V_βV_α-FTab-KiH在不同的效应子与靶比率下诱导T细胞增殖的能力。V_βV_α-FTab-KiH以不同的效应子与靶比率诱导T细胞增殖。

实例7：存活素TCR/CD3双特异性分子的药代动力学表征

存活素/CD3双特异性分子的药代动力学概况在非荷瘤SCID小鼠中使用单个16毫克/千克(mpk)IV推注剂量进行比较。对于V_βV_α-FTab-KiH，收集早期和后期时间点(直到168小时)的全血样品。对其他分子进行分析持续长达48小时。使用山羊抗人IgG-Fc作为捕获试剂并且使用山羊抗硫酸盐作为检测试剂，通过基于Meso Scale Discovery(MSD)的测定法来确定分析物浓度。所有测试分子的半衰期(t_1/2)、曲线下面积(AUC)、清除率(CL)和稳态体积(Vss)值总结在表2中。结果表明，与测试的其他分子相比，V_βV_α-FTab-KiH表现出具有惊人地更长的半衰期(约5天)和更高的暴露量的抗体样药代动力学。

表2.双特异性药物在SCID小鼠中的药代动力学性能

此外，还采用电化学发光检测，在总抗人MSD(Meso Scale Discovery)测定中分析了血清样品的V_βV_α-FTab-KiH浓度(图8)。在该测定中，通过使用Bio anti-id捕获试剂和Sulfo anti-id mAb检测试剂来分析总抗体。该测定的线性范围为0.069μg/mL-50μg/mL，其中定量下限(LLOQ)为0.069μg/mL。第一采样时间点(C_0.5h)的血清浓度直接从每只猴子的浓度数据中读取。毒代动力学参数使用药代动力学实验室自动化管理和分析软件(PLASMA)版本2.6.12(SPaRCS，AbbVie)通过非隔室分析和线性梯形法计算。

实例8：存活素TCR/CD3双特异性分子的二硫键结构

V_βV_α-FTab-KiH由一个重链亚基与一个κ轻链亚基和一个Fc链亚基通过二硫键配对组成(图10)。重链(即，SEQ ID NO：36的重链1)在位置23和91、43和235、158和224、288和362、413和469、530和590中以及最后在位置636和694中的半胱氨酸之间含有七个链内二硫键。在这些链内二硫键中，半胱氨酸43和235之间的二硫键是连接V_α和V_β结构域的结构域间连接，而其余的是结构域内二硫键。轻链(即SEQ ID NO：76的轻链)含有两个链内二硫键；第一二硫键在位置23和87中的半胱氨酸之间，并且第二二硫键在位置133和193中的半胱氨酸之间。Fc链(即SEQ ID NO：16的重链2)含有两个链内二硫键；第一二硫键在位置41和101中的半胱氨酸之间，并且第二二硫键在位置147和205中的半胱氨酸之间。在每个分子中，重链通过重链的位置489中的半胱氨酸和轻链的位置213中的半胱氨酸之间的链间二硫键被连接到轻链。每条重链还通过两个链间二硫键与Fc链配对，一个键在重链的位置495中的半胱氨酸和Fc链的位置6中的半胱氨酸之间，并且另一个键在重链的位置498中的半胱氨酸和Fc链的位置9中的半胱氨酸之间。

实例9：存活素TCR/CD3双特异性分子的结合特异性和亲和力表征

对V_βV_α-FTab-KiH进行TCR特异性筛选(图11)。T2细胞以每孔50,000个细胞被接种在96孔板(Falcon#353077)中，每孔体积为50μLAIM-V/5％hAB(Gibco#12055-091/Sigma#H4522)，并且将亲本存活素肽、43种同源肽和2种对照肽加入到50uL AIM-V/5％hAB中，使T2的最终浓度为20μM，并预孵育3-4小时。在每个孔中接种100,000个CD3+细胞，每孔体积为50μL AIM-V/5％hAB。V_βV_α-FTab-KiH在AIM-V/5％hAB中稀释，使得对于每个供体，在共培养物中的最终浓度为1nM，一式两份。在37℃，5％CO₂下孵育板19小时。从每个板中移除上清液，转移到新鲜的96孔板中并在-80℃下冷冻，直到准备好通过ELISA测定干扰素-γ分泌。V_βV_α-FTab-KiH的TCR部分对存活素衍生肽表现出显著的高特异性(图11)。

所有测试分子的存活素/CD3与存活素肽/MHC的双特异性结合动力学总结在表3中。

表3.存活素/CD3与存活素肽/MHC的双特异性结合动力学

双特异性	ka(1/Ms)	kd(1/s)	t1/2(s)	K<sub>D</sub>(M)
					V<sub>β</sub>V<sub>α</sub>-FTab-KiH	1.8E+05	2.5E-04	2758	1.4E-09
V<sub>β</sub>V<sub>α</sub>-FTab-KiH-2	1.4E+05	2.8E-04	2506	2.0E-09

V_βV_α-FTab-KiH对人CD3也具有高亲和力。在Cole MS等人(1999)《移植(Transplantation)》68：563-571(其内容通过引用以其整体并入本文)中描述了抗CD3部分。

本申请中所引用的所有出版物、专利、专利申请和其他文献都以全文引用的方式并入本文中以用于所有目的，其引用的程度就如同个别地指示将各个别出版物、专利、专利申请或其他文献以引用的方式并入以用于所有目的。

虽然已经示出和描述了各种具体实施例，但是应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种改变。

序列表

<110> 艾伯维公司（AbbVie Inc.）

<120> 双特异性结合分子

<130> AVR-53525

<150> 62/976,117

<151> 2020-02-13

<150> 62/975,334

<151> 2020-02-12

<160> 90

<170> PatentIn 3.5版

<210> 1

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 1

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ser

20

<210> 2

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 2

Ser Gln Thr Ile His Gln Trp Pro Ala Thr Leu Val Gln Pro Val Gly

1 5 10 15

Ser Pro Leu Ser Leu Glu Cys Thr Val Glu Gly Thr Ser Asn Pro Asn

20 25 30

Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Gly Arg Cys Leu Glu Leu Leu Phe

35 40 45

Tyr Ser Val Gly Ile Gly Gln Ile Ser Ser Glu Val Pro Gln Asn Leu

50 55 60

Ser Ala Ser Arg Pro Gln Asp Arg Gln Phe Ile Leu Ser Ser Lys Lys

65 70 75 80

Leu Leu Leu Ser Asp Ser Gly Phe Tyr Leu Cys Ala Trp Ser Ile Gly

85 90 95

Ala Glu Met Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp

100 105 110

Leu Lys Asp

115

<210> 3

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 3

Ser Gln Thr Ile His Gln Trp Pro Ala Thr Leu Val Gln Pro Val Gly

1 5 10 15

Ser Pro Leu Ser Leu Glu Cys Thr Val Glu Gly Thr Ser Asn Pro Asn

20 25 30

Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Gly Arg Gly Pro Glu Leu Leu Phe

35 40 45

Tyr Ser Val Gly Ile Gly Gln Ile Ser Ser Glu Val Pro Gln Asn Leu

50 55 60

Phe Ala Ser Arg Pro Gln Asp Arg Gln Phe Ile Leu Ser Ser Lys Lys

65 70 75 80

Leu Leu Leu Ser Asp Ser Gly Phe Tyr Leu Cys Ala Trp Ser Ile Gly

85 90 95

Ala Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp

100 105 110

Leu Lys Asn

115

<210> 4

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 4

Ser Gln Thr Ile His Gln Trp Pro Ala Thr Leu Val Gln Pro Val Gly

1 5 10 15

Ser Pro Leu Ser Leu Glu Cys Thr Val Glu Gly Thr Ser Asn Pro Asn

20 25 30

Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Gly Arg Cys Leu Glu Leu Leu Phe

35 40 45

Tyr Ser Val Gly Ile Gly Gln Ile Ser Ser Glu Val Pro Gln Asn Leu

50 55 60

Phe Ala Ser Arg Pro Gln Asp Arg Gln Phe Ile Leu Ser Ser Lys Lys

65 70 75 80

Leu Leu Leu Ser Asp Ser Gly Phe Tyr Leu Cys Ala Trp Ser Ile Gly

85 90 95

Ala Glu Gln Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp

100 105 110

Leu Lys Asn

115

<210> 5

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 5

Ser Gln Thr Ile His Gln Trp Pro Ala Thr Leu Val Gln Pro Val Gly

1 5 10 15

Ser Pro Leu Ser Leu Glu Cys Thr Val Glu Gly Thr Ser Asn Pro Asn

20 25 30

Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Gly Arg Cys Leu Glu Leu Leu Phe

35 40 45

Tyr Ser Val Gly Ile Gly Gln Ile Ser Ser Glu Val Pro Gln Asn Leu

50 55 60

Ser Ala Ser Arg Pro Gln Asp Arg Gln Phe Ile Leu Ser Ser Lys Lys

65 70 75 80

Leu Leu Leu Ser Asp Ser Gly Phe Tyr Leu Cys Ala Trp Ser Ile Gly

85 90 95

Ala Glu Met Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp

100 105 110

Leu Lys Asn

115

<210> 6

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 6

Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly

1 5 10 15

Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Tyr Ala Gln Asn

20 25 30

Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Pro Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met

35 40 45

Ser Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln

50 55 60

Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser Gln

65 70 75 80

Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Ser Lys Gly Tyr Lys

85 90 95

Val Phe Gly Cys Gly Thr Gln Leu Val Val Lys Pro Asn Ile Arg

100 105 110

<210> 7

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 7

Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly

1 5 10 15

Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Tyr Ala Gln Asn

20 25 30

Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met

35 40 45

Ser Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln

50 55 60

Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser Gln

65 70 75 80

Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Ser Lys Gly Tyr Lys

85 90 95

Val Phe Gly Asp Gly Thr Gln Leu Val Val Lys Pro Asn Ile Arg

100 105 110

<210> 8

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 8

Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly

1 5 10 15

Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr Ser Asp Arg Tyr Ala Gln Asn

20 25 30

Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Ser Gly Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met

35 40 45

Ser Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln

50 55 60

Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser Leu Leu Ile Arg Asp Ser Gln

65 70 75 80

Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys Ala Val Ser Lys Gly Tyr Lys

85 90 95

Val Phe Gly Cys Gly Thr Gln Leu Val Val Lys Pro Asn Ile Arg

100 105 110

<210> 9

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 9

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr

20 25 30

Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu

50 55 60

Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 10

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 10

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Thr Thr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 11

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 11

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 12

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 12

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 13

<211> 209

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 13

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser

115 120 125

Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 14

<211> 209

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 14

Cys Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Ala Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Arg Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

<210> 15

<211> 209

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 15

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

1 5 10 15

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

20 25 30

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

35 40 45

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val

50 55 60

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

65 70 75 80

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

85 90 95

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

100 105 110

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

115 120 125

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

130 135 140

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

145 150 155 160

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Arg Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

165 170 175

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

180 185 190

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

195 200 205

Lys

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<211> 227

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 16

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly

1 5 10 15

Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

20 25 30

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

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Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

50 55 60

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr

65 70 75 80

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

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Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro

165 170 175

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

180 185 190

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

195 200 205

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

210 215 220

Pro Gly Lys

225

<210> 17

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 17

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

1 5 10 15

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 18

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

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Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

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Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 19

Asp Arg Tyr Ala Gln Asn

1 5

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<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 20

Gly Thr Ser Asn Pro Asn

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 21

Ser Tyr Thr Met His

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 22

Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn

1 5 10

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<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 23

Ile Tyr Ser Asn Gly Asp

1 5

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<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 24

Ser Val Gly Ile Gly

1 5

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<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 25

Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu Lys

1 5 10 15

Asp

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 26

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 27

Ala Val Ser Lys Gly Tyr Lys Val

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 28

Ala Trp Ser Ile Gly Ala Glu Met Phe

1 5

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<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 29

Ser Ala Tyr Tyr Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 30

Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr

1 5

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<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 31

Ala Trp Ser Ile Gly Ala Glu Gln Phe

1 5

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 32

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr Thr Met Asn

1 5 10

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<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 33

Leu Ile Asn Pro Tyr Lys Gly Val Thr

1 5

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<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 34

Ser Gly Tyr Tyr Gly Asp Ser Asp Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 35

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 35

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

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Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

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Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

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65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

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Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 36

Ser Gln Thr Ile His Gln Trp Pro Ala Thr Leu Val Gln Pro Val Gly

1 5 10 15

Ser Pro Leu Ser Leu Glu Cys Thr Val Glu Gly Thr Ser Asn Pro Asn

20 25 30

Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Gly Arg Cys Leu Glu Leu Leu Phe

35 40 45

Tyr Ser Val Gly Ile Gly Gln Ile Ser Ser Glu Val Pro Gln Asn Leu

50 55 60

Ser Ala Ser Arg Pro Gln Asp Arg Gln Phe Ile Leu Ser Ser Lys Lys

65 70 75 80

Leu Leu Leu Ser Asp Ser Gly Phe Tyr Leu Cys Ala Trp Ser Ile Gly

85 90 95

Ala Glu Met Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp

100 105 110

Leu Lys Asp Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly

130 135 140

Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr

145 150 155 160

Ser Asp Arg Tyr Ala Gln Asn Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Pro Gly

165 170 175

Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met Ser Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu

180 185 190

Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser

195 200 205

Leu Leu Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys

210 215 220

Ala Val Ser Lys Gly Tyr Lys Val Phe Gly Cys Gly Thr Gln Leu Val

225 230 235 240

Val Lys Pro Asn Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

245 250 255

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln

260 265 270

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Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr

355 360 365

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370 375 380

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser

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Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys

405 410 415

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420 425 430

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465 470 475 480

Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

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Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

500 505 510

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

515 520 525

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

530 535 540

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

545 550 555 560

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

565 570 575

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

580 585 590

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

595 600 605

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

610 615 620

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly

625 630 635 640

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

645 650 655

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

660 665 670

Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

675 680 685

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

690 695 700

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

705 710 715

<210> 37

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 37

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

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Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

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Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

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Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

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Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly Phe Tyr

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<210> 38

<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 38

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

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Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

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50 55 60

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Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Cys Val Phe Leu Phe Pro Pro

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Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

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Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

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Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

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Leu Arg Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

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Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

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<211> 330

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 39

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

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<212> PRT

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<220>

<223> 合成肽

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<212> DNA

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<220>

<223> dna

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ggaggaggag gatccggagg aggaggatct ggcggcggcg gcagcggcgg cggcggctcc 60

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<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 42

tcacagacta ttcatcagtg gcctgctact ctggtgcagc ctgtgggctc tccactgagc 60

ctggagtgca ccgtggaggg cacaagcaac cccaatctgt actggtatag gcaggcagca 120

ggcagatgtc tggagctgct gttctacagc gtgggcatcg gccagatcag ctccgaggtg 180

ccacagaacc tgtccgcatc caggccccag gacaggcagt ttatcctgtc tagcaagaag 240

ctgctgctgt ccgattctgg cttttacctg tgcgcatgga gcatcggagc agagatgttc 300

tttggccctg gcaccaggct gacagtgctg gaggacctga aggac 345

<210> 43

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 43

tcacagacta ttcatcagtg gcctgctact ctggtgcagc ctgtgggctc tccactgagc 60

ctggagtgca ccgtggaggg cacaagcaac cccaatctgt actggtatag gcaggcagca 120

ggaagaggac ctgagctgct gttctacagc gtgggcatcg gccagatcag ctccgaggtg 180

ccacagaacc tgttcgcatc caggccccag gacaggcagt ttatcctgtc tagcaagaag 240

ctgctgctgt ccgattctgg cttttacctg tgcgcatgga gcatcggagc agagcagttc 300

tttggcccag gcaccaggct gacagtgctg gaggacctga agaac 345

<210> 44

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 44

tcacagacta ttcatcagtg gcctgctact ctggtgcagc ctgtgggctc tccactgagc 60

ctggagtgca ccgtggaggg cacaagcaac cccaatctgt actggtatag gcaggcagca 120

ggcagatgtc tggagctgct gttctacagc gtgggcatcg gccagatcag ctccgaggtg 180

ccacagaacc tgttcgcatc caggccccag gacaggcagt ttatcctgtc tagcaagaag 240

ctgctgctgt ccgattctgg cttttacctg tgcgcatgga gcatcggagc agagcagttc 300

tttggccctg gcaccaggct gacagtgctg gaggacctga agaac 345

<210> 45

<211> 345

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 45

tcacagacta ttcatcagtg gcctgctact ctggtgcagc ctgtgggctc tccactgagc 60

ctggagtgca ccgtggaggg cacaagcaac cccaatctgt actggtatag gcaggcagca 120

ggcagatgtc tggagctgct gttctacagc gtgggcatcg gccagatcag ctccgaggtg 180

ccacagaacc tgtccgcatc caggccccag gacaggcagt ttatcctgtc tagcaagaag 240

ctgctgctgt ccgattctgg cttttacctg tgcgcatgga gcatcggagc agagatgttc 300

tttggccctg gcaccaggct gacagtgctg gaggacctga agaac 345

<210> 46

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 46

cagaaggagg tggagcagaa tagcggacca ctgtccgtgc ctgagggagc aatcgcctct 60

ctgaactgta cctacagcga tagatatgcc cagaatttct tttggtaccg ccagtatcct 120

ggcaagtctc ctgagctgat catgagcatc tactccaacg gcgacaagga ggatggccgg 180

ttcacagccc agctgaataa ggcctctcag tatgtgagcc tgctgatcag agactctcag 240

cctagcgatt ccgccaccta cctgtgcgcc gtgagcaagg gctataaggt gtttggctgt 300

ggcacacagc tggtggtgaa gccaaacatc agg 333

<210> 47

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 47

cagaaggagg tggagcagaa tagcggacca ctgtccgtgc ctgagggagc aatcgcctct 60

ctgaactgta cctacagcga tagatatgcc cagaatttct tttggtaccg ccagtattcc 120

ggcaagtctc ccgagctgat catgagcatc tactccaacg gcgacaagga ggatggccgg 180

ttcacagccc agctgaataa ggcctctcag tatgtgagcc tgctgatcag agactctcag 240

cccagcgatt ccgccaccta cctgtgcgcc gtgagcaagg gctataaggt gtttggcgac 300

ggcacacagc tggtggtgaa gcctaacatc agg 333

<210> 48

<211> 333

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 48

cagaaggagg tggagcagaa tagcggacca ctgtccgtgc ctgagggagc aatcgcctct 60

ctgaactgta cctacagcga tagatatgcc cagaatttct tttggtaccg ccagtattcc 120

ggcaagtctc ctgagctgat catgagcatc tactccaacg gcgacaagga ggatggccgg 180

ttcacagccc agctgaataa ggcctctcag tatgtgagcc tgctgatcag agactctcag 240

cctagcgatt ccgccaccta cctgtgcgcc gtgagcaagg gctataaggt gtttggctgt 300

ggcacacagc tggtggtgaa gccaaacatc agg 333

<210> 49

<211> 360

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 49

caggtgcagc tggtgcagag cggagcagag gtgaagaagc caggagcctc cgtgaaggtg 60

tcttgcaagg ccagcggcta caccttcatc tcctatacaa tgcactgggt gaggcaggca 120

cctggacagg gcctggagtg gatgggctac atcaacccac gcagcggcta cacccactat 180

aatcagaagc tgaaggacaa ggccaccctg acagccgata agtctgccag caccgcctat 240

atggagctgt cctctctgag gagcgaggac acagccgtgt actattgcgc ccgctccgcc 300

tactatgact acgatggctt cgcctattgg ggccaaggaa ctctggtcac cgtttcttca 360

<210> 50

<211> 366

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 50

gaggtgcagc tggtggagtc cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggctc tctgaggctg 60

agctgtgcag catccggata ctctttcacc ggctatacaa tgaactgggt gagacaggca 120

ccaggcaagg gcctggagtg ggtggccctg atcaatcctt acaagggcgt gaccacatat 180

gccgacagcg tgaagggccg ctttaccatc tccgtggata agtctaagaa cacagcctac 240

ctgcagatga attccctgag ggccgaggac accgccgtgt actattgcgc acgcagcgga 300

tactatggcg actccgattg gtatttcgac gtgtggggac agggcaccct ggtgacagtg 360

tcctct 366

<210> 51

<211> 321

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 51

gacatccaga tgacccagag cccaagctcc ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtgacc 60

atcacatgtt ctgcctcttc ctccgtgagc tacatgaact ggtatcagca gaagcctggc 120

aaggccccaa agcggctgat ctacgatacc agcaagctgg catccggagt gccaagccgg 180

ttcagcggct ccggctctgg caccgacttt accctgacaa tctctagcct gcagcctgag 240

gatttcgcca catactattg ccagcagtgg tcctctaatc cccctacctt tggcggcggc 300

acaaaggtgg agatcaaacg a 321

<210> 52

<211> 324

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 52

gatatccaga tgacccagtc cccaagctcc ctgtctgcca gcgtgggcga ccgggtgacc 60

atcacatgta gagccagcca ggatatcagg aactacctga attggtatca gcagaagcca 120

ggcaaggccc ccaagctgct gatctactat acatcccgcc tggagtctgg agtgccaagc 180

cggttttccg gatctggaag cggaaccgac tacaccctga caatctctag cctgcagcct 240

gaggatttcg ccacatacta ttgccagcag ggcaacaccc tgccatggac atttggccag 300

ggcaccaagg tggagatcaa gcgc 324

<210> 53

<211> 627

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 53

tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 60

gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac 120

gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc 180

acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag 240

tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 300

gccaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 360

accaagaacc aggtcagcct gtcctgcgct gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc 420

gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 480

gactccgacg gctccttctt cctcgtgagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 540

caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 600

aagagcctct ccctgtctcc gggaaaa 627

<210> 54

<211> 627

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 54

tgcgtgttcc tgtttccacc caagccaaag gacaccctga tgatctcccg gaccccagag 60

gtgacatgcg tggtggtgga cgtgtctcac gaggatcccg aggtgaagtt caactggtac 120

gtggatggcg tggaggtgca caatgccaag accaagcctc gggaggagca gtacaactcc 180

acctatagag tggtgtctgt gctgacagtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 240

tacaagtgca aggtgagcaa taaggccctg cctgccccaa tcgagaagac catctccaag 300

gcaaagggac agccaaggga gccacaggtg tatacactgc ctccatccag agaggagatg 360

accaagaacc aggtgtctct gacatgtctg gtgaagggct tttacccatc tgatatcgcc 420

gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag aacaattata agaccacagc ccctgtgctg 480

gactccgatg gctctttccg gctgagaagc gacctgaccg tggataagtc ccggtggcag 540

cagggcaacg tgttcagctg ttccgtgatg cacgaagcac tgcacaacca ttacacccag 600

aagtcactgt cactgtcccc aggaaag 627

<210> 55

<211> 627

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 55

agcgtgttcc tgtttccacc caagccaaag gacaccctga tgatctcccg gaccccagag 60

gtgacatgcg tggtggtgga cgtgtctcac gaggatcctg aggtgaagtt caactggtac 120

gtggatggcg tggaggtgca caatgccaag accaagccac gggaggagca gtacgcctcc 180

acctatagag tggtgtctgt gctgacagtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 240

tacaagtgca aggtgagcaa taaggccctg cctgccccaa tcgagaagac catctccaag 300

gcaaagggac agccaaggga gccacaggtg tatacactgc ctccatccag agacgagatg 360

accaagaacc aggtgtctct gacatgtctg gtgaagggct tttacccctc tgatatcgcc 420

gtggagtggg agagcaatgg ccagcccgag aacaattata agaccacacc ccctgtgctg 480

gactccgatg gctctttccg gctgtatagc aagctgaccg tggataagtc ccggtggcag 540

cagggcaacg tgttcagctg ttccgtgatg cacgaggcac tgcacaacca ttacactcag 600

aagtcactgt cactgtcacc aggaaaa 627

<210> 56

<211> 681

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 56

gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tgctgggggg accgtcagtc 60

ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 120

tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 180

ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacgc aagcacgtac 240

cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 300

tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 360

gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgcgagga gatgaccaag 420

aaccaggtca gcctgtggtg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 480

tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gctggactcc 540

gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 600

aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 660

ctctccctgt ctccgggaaa a 681

<210> 57

<211> 318

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 57

accgtggcag caccatccgt gttcatcttt ccaccctctg acgagcagct gaagagcggc 60

acagcctccg tggtgtgcct gctgaacaat ttctacccca gagaggccaa ggtgcagtgg 120

aaggtggata acgccctgca gagcggcaat tcccaggagt ctgtgaccga gcaggacagc 180

aaggattcca catattctct gagctccacc ctgacactgt ccaaggccga ctacgagaag 240

cacaaggtgt atgcctgcga ggtgacccac cagggcctgt ctagccctgt gacaaagagc 300

tttaacagag gcgagtgt 318

<210> 58

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 58

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60

ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240

tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300

aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360

ccg 363

<210> 59

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 59

gatagatatg cccagaat 18

<210> 60

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 60

ggcacaagca accccaat 18

<210> 61

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 61

tcctatacaa tgcac 15

<210> 62

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 62

tctgcctctt cctccgtgag ctacatgaac 30

<210> 63

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 63

atctactcca acggcgac 18

<210> 64

<211> 15

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 64

agcgtgggca tcggc 15

<210> 65

<211> 51

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 65

tacatcaacc cacgcagcgg ctacacccac tataatcaga agctgaagga c 51

<210> 66

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 66

gataccagca agctggcatc c 21

<210> 67

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 67

gccgtgagca agggctataa ggtg 24

<210> 68

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 68

gcatggagca tcggagcaga gatgttc 27

<210> 69

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 69

tccgcctact atgactacga tggcttcgcc tat 33

<210> 70

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 70

cagcagtggt cctctaatcc ccctacc 27

<210> 71

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 71

gcatggagca tcggagcaga gcagttc 27

<210> 72

<211> 30

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 72

ggatactctt tcaccggcta tacaatgaac 30

<210> 73

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 73

ctgatcaatc cttacaaggg cgtgacc 27

<210> 74

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 74

agcggatact atggcgactc cgattggtat ttcgacgtg 39

<210> 75

<211> 363

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 75

gccagcacca agggcccttc cgtgtttccc ctggcccctt ctagcaagtc cacctctgga 60

ggaacagccg ccctgggctg tctggtgaag gattacttcc ccgagcctgt gacagtgtct 120

tggaacagcg gcgccctgac ctctggagtg cacacatttc ctgccgtgct gcagtcctct 180

ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtgccatcta gctccctggg cacccagaca 240

tatatctgca acgtgaatca caagccaagc aatacaaagg tggacaagaa ggtggagccc 300

aagtctagcg ataagaccca cacatcccca ccttgcccag caccagagct gctgggcggc 360

cct 363

<210> 76

<211> 213

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 76

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

35 40 45

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 77

<211> 990

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 77

gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 60

ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg 120

tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 180

ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 240

tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttgagccc 300

aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 360

ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 420

gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 480

tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc 540

agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 600

gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 660

aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 720

atgaccaaga accaggtcag cctgtcctgc gctgtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 780

gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840

ctggactccg acggctcctt cttcctcgtg agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 900

cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 960

cagaagagcc tctccctgtc tccgggaaaa 990

<210> 78

<211> 990

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 78

gccagcacca agggcccttc cgtgtttccc ctggcccctt ctagcaagtc cacctctgga 60

ggaacagccg ccctgggctg tctggtgaag gattacttcc ccgagcctgt gacagtgtct 120

tggaacagcg gcgccctgac ctctggagtg cacacatttc ctgccgtgct gcagtcctct 180

ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtgccatcta gctccctggg cacccagaca 240

tatatctgca acgtgaatca caagccaagc aatacaaagg tggacaagaa ggtggagccc 300

aagtctagcg ataagaccca cacatcccca ccttgcccag caccagagct gctgggcggc 360

ccttgcgtgt tcctgtttcc acccaagcca aaggacaccc tgatgatctc ccggacccca 420

gaggtgacat gcgtggtggt ggacgtgtct cacgaggatc ccgaggtgaa gttcaactgg 480

tacgtggatg gcgtggaggt gcacaatgcc aagaccaagc ctcgggagga gcagtacaac 540

tccacctata gagtggtgtc tgtgctgaca gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 600

gagtacaagt gcaaggtgag caataaggcc ctgcctgccc caatcgagaa gaccatctcc 660

aaggcaaagg gacagccaag ggagccacag gtgtatacac tgcctccatc cagagaggag 720

atgaccaaga accaggtgtc tctgacatgt ctggtgaagg gcttttaccc atctgatatc 780

gccgtggagt gggagagcaa tggccagccc gagaacaatt ataagaccac agcccctgtg 840

ctggactccg atggctcttt ccggctgaga agcgacctga ccgtggataa gtcccggtgg 900

cagcagggca acgtgttcag ctgttccgtg atgcacgaag cactgcacaa ccattacacc 960

cagaagtcac tgtcactgtc cccaggaaag 990

<210> 79

<211> 990

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 79

gccagcacca agggaccatc cgtgtttcca ctggcacctt ctagcaagtc cacctctgga 60

ggaacagccg ccctgggctg tctggtgaag gattacttcc ccgagcctgt gacagtgtct 120

tggaacagcg gcgccctgac ctctggagtg cacacatttc cagccgtgct gcagtcctct 180

ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtgccctcta gctccctggg cacccagaca 240

tatatctgca acgtgaatca caagccaagc aatacaaagg tggacaagaa ggtggagccc 300

aagtctagcg ataagaccca cacatcccca ccttgcccag caccagagct gctgggcggc 360

cctagcgtgt tcctgtttcc acccaagcca aaggacaccc tgatgatctc ccggacccca 420

gaggtgacat gcgtggtggt ggacgtgtct cacgaggatc ctgaggtgaa gttcaactgg 480

tacgtggatg gcgtggaggt gcacaatgcc aagaccaagc cacgggagga gcagtacgcc 540

tccacctata gagtggtgtc tgtgctgaca gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 600

gagtacaagt gcaaggtgag caataaggcc ctgcctgccc caatcgagaa gaccatctcc 660

aaggcaaagg gacagccaag ggagccacag gtgtatacac tgcctccatc cagagacgag 720

atgaccaaga accaggtgtc tctgacatgt ctggtgaagg gcttttaccc ctctgatatc 780

gccgtggagt gggagagcaa tggccagccc gagaacaatt ataagaccac accccctgtg 840

ctggactccg atggctcttt ccggctgtat agcaagctga ccgtggataa gtcccggtgg 900

cagcagggca acgtgttcag ctgttccgtg atgcacgagg cactgcacaa ccattacact 960

cagaagtcac tgtcactgtc accaggaaaa 990

<210> 80

<211> 2148

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 80

tcacagacta ttcatcagtg gcctgctact ctggtgcagc ctgtgggctc tccactgagc 60

ctggagtgca ccgtggaggg cacaagcaac cccaatctgt actggtatag gcaggcagca 120

ggcagatgtc tggagctgct gttctacagc gtgggcatcg gccagatcag ctccgaggtg 180

ccacagaacc tgtccgcatc caggccccag gacaggcagt ttatcctgtc tagcaagaag 240

ctgctgctgt ccgattctgg cttttacctg tgcgcatgga gcatcggagc agagatgttc 300

tttggccctg gcaccaggct gacagtgctg gaggacctga aggacggcgg cggaggatct 360

gggggaggcg gaagcggagg cggaggatcc ggcggagggg gatctcagaa ggaggtggag 420

cagaatagcg gaccactgtc cgtgcctgag ggagcaatcg cctctctgaa ctgtacctac 480

agcgatagat atgcccagaa tttcttttgg taccgccagt atcctggcaa gtctcctgag 540

ctgatcatga gcatctactc caacggcgac aaggaggatg gccggttcac agcccagctg 600

aataaggcct ctcagtatgt gagcctgctg atcagagact ctcagcctag cgattccgcc 660

acctacctgt gcgccgtgag caagggctat aaggtgtttg gctgtggcac acagctggtg 720

gtgaagccaa acatcagggg cggcggagga tctgggggag gcggaagcgg aggcggagga 780

tccggcggag ggggatctca ggtgcagctg gtgcagagcg gagcagaggt gaagaagcca 840

ggagcctccg tgaaggtgtc ttgcaaggcc agcggctaca ccttcatctc ctatacaatg 900

cactgggtga ggcaggcacc tggacagggc ctggagtgga tgggctacat caacccacgc 960

agcggctaca cccactataa tcagaagctg aaggacaagg ccaccctgac agccgataag 1020

tctgccagca ccgcctatat ggagctgtcc tctctgagga gcgaggacac agccgtgtac 1080

tattgcgccc gctccgccta ctatgactac gatggcttcg cctattgggg ccaaggaact 1140

ctggtcaccg tttcttcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 1200

tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 1260

gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 1320

gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc 1380

agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 1440

gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 1500

cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 1560

atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 1620

gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 1680

cgggaggagc agtacgccag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1740

gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 1800

atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1860

cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgtcctgcgc tgtcaaaggc 1920

ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1980

aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctcgtgag caagctcacc 2040

gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 2100

ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggaaaa 2148

<210> 81

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 81

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Arg Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 82

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 82

Tyr Thr Ser Arg Leu Glu Ser

1 5

<210> 83

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 83

Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Trp Thr

1 5

<210> 84

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 84

agagccagcc aggatatcag gaactacctg aat 33

<210> 85

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 85

tatacatccc gcctggagtc t 21

<210> 86

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 86

cagcagggca acaccctgcc atggaca 27

<210> 87

<211> 639

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 87

gacatccaga tgacccagag cccaagctcc ctgtccgcct ctgtgggcga tagggtgacc 60

atcacatgtt ctgcctcttc ctccgtgagc tacatgaact ggtatcagca gaagcctggc 120

aaggccccaa agcggctgat ctacgatacc agcaagctgg catccggagt gccaagccgg 180

ttcagcggct ccggctctgg caccgacttt accctgacaa tctctagcct gcagcctgag 240

gatttcgcca catactattg ccagcagtgg tcctctaatc cccctacctt tggcggcggc 300

acaaaggtgg agatcaaacg aaccgtggca gcaccatccg tgttcatctt tccaccctct 360

gacgagcagc tgaagagcgg cacagcctcc gtggtgtgcc tgctgaacaa tttctacccc 420

agagaggcca aggtgcagtg gaaggtggat aacgccctgc agagcggcaa ttcccaggag 480

tctgtgaccg agcaggacag caaggattcc acatattctc tgagctccac cctgacactg 540

tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tatgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600

tctagccctg tgacaaagag ctttaacaga ggcgagtgt 639

<210> 88

<211> 716

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 88

Ser Gln Thr Ile His Gln Trp Pro Ala Thr Leu Val Gln Pro Val Gly

1 5 10 15

Ser Pro Leu Ser Leu Glu Cys Thr Val Glu Gly Thr Ser Asn Pro Asn

20 25 30

Leu Tyr Trp Tyr Arg Gln Ala Ala Gly Arg Cys Leu Glu Leu Leu Phe

35 40 45

Tyr Ser Val Gly Ile Gly Gln Ile Ser Ser Glu Val Pro Gln Asn Leu

50 55 60

Ser Ala Ser Arg Pro Gln Asp Arg Gln Phe Ile Leu Ser Ser Lys Lys

65 70 75 80

Leu Leu Leu Ser Asp Ser Gly Phe Tyr Leu Cys Ala Trp Ser Ile Gly

85 90 95

Ala Glu Met Phe Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu Glu Asp

100 105 110

Leu Lys Asn Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Lys Glu Val Glu Gln Asn Ser Gly

130 135 140

Pro Leu Ser Val Pro Glu Gly Ala Ile Ala Ser Leu Asn Cys Thr Tyr

145 150 155 160

Ser Asp Arg Tyr Ala Gln Asn Phe Phe Trp Tyr Arg Gln Tyr Pro Gly

165 170 175

Lys Ser Pro Glu Leu Ile Met Ser Ile Tyr Ser Asn Gly Asp Lys Glu

180 185 190

Asp Gly Arg Phe Thr Ala Gln Leu Asn Lys Ala Ser Gln Tyr Val Ser

195 200 205

Leu Leu Ile Arg Asp Ser Gln Pro Ser Asp Ser Ala Thr Tyr Leu Cys

210 215 220

Ala Val Ser Lys Gly Tyr Lys Val Phe Gly Cys Gly Thr Gln Leu Val

225 230 235 240

Val Lys Pro Asn Ile Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

245 250 255

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln

260 265 270

Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys

275 280 285

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Ser Tyr Thr Met His Trp Val Arg

290 295 300

Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Arg

305 310 315 320

Ser Gly Tyr Thr His Tyr Asn Gln Lys Leu Lys Asp Lys Ala Thr Leu

325 330 335

Thr Ala Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu

340 345 350

Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ala Tyr Tyr

355 360 365

Asp Tyr Asp Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

370 375 380

Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser

385 390 395 400

Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys

405 410 415

Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu

420 425 430

Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu

435 440 445

Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr

450 455 460

Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val

465 470 475 480

Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro

485 490 495

Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe

500 505 510

Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val

515 520 525

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe

530 535 540

Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro

545 550 555 560

Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr

565 570 575

Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val

580 585 590

Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala

595 600 605

Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg

610 615 620

Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys Gly

625 630 635 640

Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro

645 650 655

Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

660 665 670

Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln

675 680 685

Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His

690 695 700

Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

705 710 715

<210> 89

<211> 2148

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> dna

<400> 89

tcacagacta ttcatcagtg gcctgctact ctggtgcagc ctgtgggctc tccactgagc 60

ctggagtgca ccgtggaggg cacaagcaac cccaatctgt actggtatag gcaggcagca 120

ggcagatgtc tggagctgct gttctacagc gtgggcatcg gccagatcag ctccgaggtg 180

ccacagaacc tgtccgcatc caggccccag gacaggcagt ttatcctgtc tagcaagaag 240

ctgctgctgt ccgattctgg cttttacctg tgcgcatgga gcatcggagc agagatgttc 300

tttggccctg gcaccaggct gacagtgctg gaggacctga agaacggagg aggaggatcc 360

ggaggaggag gatctggcgg cggcggcagc ggcggcggcg gctcccagaa ggaggtggag 420

cagaatagcg gaccactgtc cgtgcctgag ggagcaatcg cctctctgaa ctgtacctac 480

agcgatagat atgcccagaa tttcttttgg taccgccagt atcctggcaa gtctcctgag 540

ctgatcatga gcatctactc caacggcgac aaggaggatg gccggttcac agcccagctg 600

aataaggcct ctcagtatgt gagcctgctg atcagagact ctcagcctag cgattccgcc 660

acctacctgt gcgccgtgag caagggctat aaggtgtttg gctgtggcac acagctggtg 720

gtgaagccaa acatcagggg aggaggagga tccggaggag gaggatctgg cggcggcggc 780

agcggcggcg gcggctccca ggtgcagctg gtgcagagcg gagcagaggt gaagaagcca 840

ggagcctccg tgaaggtgtc ttgcaaggcc agcggctaca ccttcatctc ctatacaatg 900

cactgggtga ggcaggcacc tggacagggc ctggagtgga tgggctacat caacccacgc 960

agcggctaca cccactataa tcagaagctg aaggacaagg ccaccctgac agccgataag 1020

tctgccagca ccgcctatat ggagctgtcc tctctgagga gcgaggacac agccgtgtac 1080

tattgcgccc gctccgccta ctatgactac gatggcttcg cctattgggg ccaaggaact 1140

ctggtcaccg tttcttcagc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcaccctcc 1200

tccaagagca cctctggggg cacagcggcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc 1260

gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc gccctgacca gcggcgtgca caccttcccg 1320

gctgtcctac agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc 1380

agcttgggca cccagaccta catctgcaac gtgaatcaca agcccagcaa caccaaggtg 1440

gacaagaaag ttgagcccaa atcttgtgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 1500

cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 1560

atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 1620

gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 1680

cgggaggagc agtacgccag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1740

gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 1800

atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1860

cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgtcctgcgc tgtcaaaggc 1920

ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 1980

aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctcgtgag caagctcacc 2040

gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 2100

ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggaaaa 2148

<210> 90

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成肽

<400> 90

His His His His His His

1 5

Claims (14)

1.一种与人存活素和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

a)sTCR，所述sTCR包含：

(1)V_β，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQ ID NO：28(CDR3)，和

(2)V_α，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQ ID NO：27(CDR3)，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)Fab，所述Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：21(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)和SEQID NO：29(CDR3)的V_H；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的CH1，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：22(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)和SEQID NO：30(CDR3)的V_L；和包含SEQ ID NO：17的氨基酸序列的C_κ，

其中所述sTCR的所述V_α和所述Fab的所述V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)Fc区，所述Fc区包含：

(1)第一恒定区，其包含第一CH2和第一CH3，其中所述第一恒定区(CH2CH3)包含SEQ IDNO：13的氨基酸序列，和

(2)第二恒定区，其包含第二CH2′和第二CH3′，其中所述第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列，

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

2.根据权利要求1所述的双特异性分子，其中所述第一肽接头(L1)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的双特异性分子，其中所述第二肽接头(L2)包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列。

4.一种与人存活素和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

a)sTCR，所述sTCR包含：

(1)V_β，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，和

(2)V_α，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列，

其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过第一肽接头(L1)连接；

b)Fab，所述Fab包含：

(1)重链区，所述重链区包含有包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列的V_H；和包含SEQ ID NO：18的氨基酸序列的CH1，和

(2)轻链区，所述轻链区包含有包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列的V_L；和包含SEQ IDNO：17的氨基酸序列的C_κ，

其中所述sTCR的所述V_α和所述Fab的所述V_H通过第二肽接头(L2)连接；和

c)Fc区，所述Fc区包含：

(1)第一恒定区，其包含第一CH2和第一CH3，其中所述第一恒定区(CH2CH3)包含SEQ IDNO：13的氨基酸序列；和

(2)第二恒定区，其包含第二CH2′和第二CH3′，其中所述第二恒定区(CH2′CH3′)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；

其中所述双特异性分子是以下的形式：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

5.一种与人存活素和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)sTCR，所述sTCR包含：

i.V_β，其包含SEQ ID NO：20(CDR1)、SEQ ID NO：24(CDR2)和SEQ ID NO：28(CDR3)；和

ii.V_α，其包含SEQ ID NO：19(CDR1)、SEQ ID NO：23(CDR2)和SEQ ID NO：27(CDR3)；

其中所述V_β和所述V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)V_H，其包含SEQ ID NO：21(CDR1)、SEQ ID NO：25(CDR2)和SEQ ID NO：29(CDR3)；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述V_H通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)V_L，其包含SEQ ID NO：22(CDR1)、SEQ ID NO：26(CDR2)和SEQ ID NO：30(CDR3)；和

2)C_κ，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

6.一种与人存活素和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

a)第一重链区，所述第一重链区包含：

1)sTCR，所述sTCR包含：

i.V_β，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列；和

ii.V_α，其包含SEQ ID NO：6的氨基酸序列；

其中所述V_β和所述V_α通过第一肽接头(L1)连接；

2)V_H，其包含SEQ ID NO：9的氨基酸序列；和

3)第一重链恒定区(CH1CH2CH3)，其包含SEQ ID NO：37的氨基酸序列；

其中所述sTCR的所述V_α和所述V_H通过第二肽接头(L2)连接，并且

其中所述第一重链区是V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3的形式；

b)第二重链区(CH2′CH3′)，其包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列；和

c)轻链，所述轻链包含：

1)V_L，其包含SEQ ID NO：11的氨基酸序列；和

2)C_κ，其具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列；

其中所述第一重链的所述CH2CH3和所述第二重链的CH2′CH3′形成二聚体Fc区，以形成具有以下形式的双特异性分子：

V_β-L1-V_α-L2-V_H-CH1CH2CH3

V_L-CκCH2′CH3′。

7.根据权利要求5或6所述的双特异性分子，其中所述sTCR的所述V_β和V_α区通过包含SEQID NO：1的氨基酸序列的第一肽接头(L1)连接。

8.根据权利要求5至7中任一项所述的双特异性分子，其中所述sTCR的所述V_α和所述V_H通过包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列的第二肽接头(L2)连接。

9.根据权利要求1至9中任一项所述的双特异性分子，其中所述轻链V_L-C_κ通过二硫键与重链区V_H-CH1共价结合。

10.一种与人存活素和人CD3结合的双特异性分子，其包含：

1)包含SEQ ID NO：36的氨基酸序列的第一重链；

2)包含SEQ ID NO：16的氨基酸序列的第二重链；和

3)包含SEQ ID NO：76的氨基酸序列的轻链。

11.根据权利要求10所述的双特异性分子，其中所述轻链通过二硫键与所述第一重链连接，并且所述第一重链和所述第二重链通过两个二硫键连接。

12.根据权利要求10所述的双特异性分子，其中所述轻链通过所述第一重链的位置489中的半胱氨酸和所述轻链的位置213中的半胱氨酸之间的二硫键与所述第一重链连接。

13.根据权利要求10所述的双特异性分子，其中所述第一重链和所述第二重链通过两个二硫键连接，并且其中所述两个二硫键在所述第一重链的位置495中的半胱氨酸和所述第二重链的位置6中的半胱氨酸之间，以及在所述重链的位置498中的半胱氨酸和所述第二重链的位置9中的半胱氨酸之间。

14.根据权利要求11所述的双特异性分子，其中所述轻链通过所述第一重链的位置489中的半胱氨酸和所述轻链的位置213中的半胱氨酸之间的二硫键与所述第一重链连接；并且

其中所述第一重链和所述第二重链通过两个二硫键连接，并且其中所述两个二硫键在所述第一重链的位置495中的半胱氨酸和所述第二重链的位置6中的半胱氨酸之间，以及在所述第一重链的位置498中的半胱氨酸和所述第二重链的位置9中的半胱氨酸之间。

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