CN115308325B - 一种维格列汀的残留溶剂检测方法 - Google Patents

一种维格列汀的残留溶剂检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种维格列汀的残留溶剂检测方法，属于药品检测领域，采用液相色谱‑三重四级杆质谱联用仪检测维格列汀的残留溶剂，通过限定液相色谱‑三重四级杆质谱联用仪的色谱检测条件和质谱检测条件，可以准确检测出维格列汀中的残留溶剂，检测方法灵敏度高，分离度好。

Description

一种维格列汀的残留溶剂检测方法
技术领域
本发明涉及化学物质的检测方法，尤其是维格列汀中残留溶剂的检测方法，属于药品检测领域。
背景技术
维格列汀是一种具有选择性、竞争性、可逆的DPP24抑制剂。葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(GIP)和胰高血糖素样多肽21(GLP21)是维持体内葡萄糖浓度的重要激素，都具有肠促胰岛素作用。2型糖尿病患者GIP的促胰岛素分泌作用受损，仅有GLP21能发挥促胰岛激素分泌作用，它通过作用于胰岛β细胞膜上的受体，促进胰岛素的分泌。GLP21还可抑制胰高血糖素的分泌以及抑制胃排空从而增加饱足感(抑制食欲)。DPP24与蛋白结合存在于许多组织中，如肾、肝、小肠膜的刷状边缘、胰管、淋巴细胞、内皮细胞，其能通过水解GLP21的N端第2位丙氨酸迅速使其失活。维格列汀通过与DPP24结合形成DPP24复合物而抑制该酶的活性，在提高GLP21浓度，促使胰岛β细胞产生胰岛素的同时，降低胰高血糖素浓度，从而降低血糖，且对体重无明显影响。
维格列汀(vildagliptin)化合物的化学式为(-)-(2S)-1-[[(3-羟基三环[3.3.1.1[3,7]]硅烷-1-基)氨基]乙酰基]吡咯烷-2-甲腈。在合成生产过程中会存在残留溶剂的影响，主要是(2S)-1-(2，2-二氯乙酰基)-吡咯烷-2-甲腈(简称：IMP1)、1-(2-碘代乙酰基)-吡咯烷-2-甲腈(简称：IMP2)、(2S)-1-(2，2二氯乙酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺(简称：IMP3)和1-(2-碘代乙酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺(简称IMP4)的残留可能会影响产品的质量，因此为保障高质量生产，需要对维格列汀进行残留溶剂的检测，目前针对维格列汀中各种化学物质的各项检测方法，还未能够准确、灵敏地检测出维格列汀中的残留溶剂。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是提供一种维格列汀的残留溶剂检测方法，采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪检测维格列汀的残留溶剂。本发明方法能够准确地检测出维格列汀的残留溶剂，且灵敏度高，分离度好。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一种维格列汀的残留溶剂检测方法，采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪检测维格列汀的残留溶剂。
进一步地，包括以下色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse Plus phenyl-Hexyl 5μm，4.6*150mm，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液，柱温为40℃，进样体积为5μl，样品盘温度为15℃，流速为0.5mL/min，洗针液为甲醇：水＝1：1溶液(V：V)，梯度洗脱。
进一步地，梯度洗脱程序为0min，90％A，10％B；6min，25％A，75％B；12min，25％A，75％B；13min，90％A，10％B；14min，90％A，10％B。
进一步地，包括以下质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正离子检测模式(ESI+)，扫描模式为正离子扫描(MRM)；气帘气30psi，碰撞气9psi，温度600℃，离子化电压5500V，喷雾气50psi，加热气45psi。
进一步地，在正离子检测模式下，选择m/z 207→180，265→238，225→208，283.1→238.1和207→70，265→70，225→180，283.1→70.1作为检测离子对。
进一步地，维格列汀的残留溶剂包括(2S)-1-(2，2-二氯乙酰基)-吡咯烷-2-甲腈(简称：IMP1)、1-(2-碘代乙酰基)-吡咯烷-2-甲腈(简称：IMP2)、(2S)-1-(2，2二氯乙酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺(简称：IMP3)和1-(2-碘代乙酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺(简称IMP4)。
进一步地，包括以下步骤：
S1.L-1000％溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4对照品各10mg加10mL溶剂溶解，取0.3mL溶液稀释至10mL，取稀释后的溶液0.2mL进一步稀释至20mL，得到浓度为300ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液；
S2.对照品溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液各1.0mL，加溶剂进一步稀释至10mL，摇匀，得100％限度浓度均为30ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4对照品溶液；
S3.灵敏度溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液各0.2mL，加溶剂进一步稀释至10mL，摇匀，得20％限度浓度均为6ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP4的灵敏度溶液；
S4.样品溶液的制备：精密称取20mg维格列汀样品，加入10mL溶剂溶解，摇匀，得浓度均为2mg/mL的样品溶液；
S5.将对照品溶液和样品溶液分别采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪进行检测，得到对照品溶液和样品溶液的色谱图数据；
S6.通过对照品和样品的色谱图数据，计算出样品中残留溶剂的量。
进一步地，溶剂为甲醇和水混合物，甲醇：水＝1：9(V：V)。
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：
本发明的方法能够准确地检测出维格列汀的残留溶剂，且灵敏度高，分离度好。
首先，本发明采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪能够检测出维格列汀中的残留溶剂，灵敏度高，基线分离，分离度好；若采用高效液相色谱法或其他方法进行测定分析，其灵敏度低，未能检出色谱图，方法不适用。
其次，本发明通过限定谱条件中的梯度洗脱程序，可以更好将样品中化合物IMP1、IMP 2、IMP 3和IMP 4分离检测，获得相应色谱图，基线分离，分离度好；若采用其他色谱条件的梯度洗脱程序，不能够很好的将样品中的化合物分离，检测得出的化合物色谱图，部分基线未分离，分离度差。
最后，本发明还通过限定质谱条件，能够准确检测出残留溶剂，获得的色谱图清晰，且基线分离，分离度好；若采用其他质谱条件，未能准确检出残留溶剂，得到的色谱图存在干扰，且基线未分离，分离度差。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1是本发明样品溶液中化合物IMP 1提取色谱图；
图2是本发明样品溶液中化合物IMP 2提取色谱图；
图3是本发明样品溶液中化合物IMP 3提取色谱图；
图4是本发明样品溶液中化合物IMP 4提取色谱图；
图5是本发明专属性试验中IMP 1空白溶液色谱图；
图6是本发明专属性试验中IMP 1 100％对照品溶液色谱图；
图7是本发明专属性试验中IMP 1 100％加标样品溶液色谱图；
图8是本发明专属性试验中IMP 2空白溶液色谱图；
图9是本发明专属性试验中IMP 2 100％对照品溶液色谱图；
图10是本发明专属性试验中IMP 2 100％加标样品溶液色谱图；
图11是本发明专属性试验中IMP 3空白溶液色谱图；
图12是本发明专属性试验中IMP 3 100％对照品溶液色谱图；
图13是本发明专属性试验中IMP 3 100％加标样品溶液色谱图；
图14是本发明专属性试验中IMP 4空白溶液色谱图；
图15是本发明专属性试验中IMP 4 100％对照品溶液色谱图；
图16是本发明专属性试验中IMP 4 100％加标样品溶液色谱图；
附图中，纵坐标为Intensity，cps；其中e4代表*10000，e5代表*100000；横坐标为Time，min。
具体实施方式
下面结合实施例和图1至图16对本发明做进一步详细说明：
一种维格列汀的残留溶剂检测方法，包括：采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪检测维格列汀的残留溶剂。维格列汀的残留溶剂包括(2S)-1-(2，2-二氯乙酰基)-吡咯烷-2-甲腈(简称：IMP1)、1-(2-碘代乙酰基)-吡咯烷-2-甲腈(简称：IMP2)、(2S)-1-(2，2二氯乙酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺(简称：IMP3)和1-(2-碘代乙酰基)-吡咯烷-2-甲酰胺(简称IMP4)。
检测条件如下：
色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse Plus phenyl-Hexyl 5μm，4.6*150mm，流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液，柱温为40℃，进样体积为5μl，样品盘温度为15℃，流速为0.5mL/min，洗针液为甲醇：水＝1：1溶液(V：V)，梯度洗脱。梯度洗脱程序为0min，90％A，10％B；6min，25％A，75％B；12min，25％A，75％B；13min，90％A，10％B；14min，90％A，10％B。
质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正离子检测模式(ESI+)，扫描模式为正离子扫描(MRM)。气帘气30psi，碰撞气9psi，温度600℃，离子化电压5500V，喷雾气50psi，加热气45psi。
在正离子检测模式下，选择m/z 207→180，265→238，225→208，283.1→238.1和207→70，265→70，225→180，283.1→70.1作为IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的检测离子对。如下表：
表1：化合物检测离子对信息表
备注：*表示定量离子
操作步骤如下：
S1.L-1000％溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4对照品各10mg加10mL溶剂溶解，取0.3mL溶液稀释至10mL，取稀释后的溶液0.2mL进一步稀释至20mL，得到浓度为300ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液；
S2.对照品溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液各1.0mL，加溶剂进一步稀释至10mL，摇匀，得100％限度浓度均为30ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4对照品溶液；
S2.灵敏度溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液各0.2mL，加溶剂进一步稀释至10mL，摇匀，得20％限度浓度均为6ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP4的灵敏度溶液；
S3.样品溶液的制备：精密称取20mg维格列汀样品，加入10mL溶剂溶解，摇匀，得浓度均为2mg/mL的样品溶液；
S4.将对照品溶液和样品溶液分别采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪进行检测，得到对照品溶液和样品溶液的色谱图数据；
S5.通过对照品和样品的色谱图数据，计算出样品中残留溶剂的量。
上述溶剂为甲醇和水混合物，甲醇：水＝1：9(V：V)。
实施例1
本实施例1的具体试验过程如下：
1、仪器设备、试剂和样品
1.1仪器设备
表2：仪器设备信息
1.2试剂耗材
表3：试剂耗材信息
名称 级别 供应商 批号/编号
纯化水 一级水 ICAS 20200907
纯化水 一级水 ICAS 20200907
甲醇 HPLC 默克 11087507017
乙腈 HPLC 默克 JA098230
甲酸 HPLC 默克 Z0579104935
1.3样品和对照品
表4：样品和对照品信息
备注：N/A表示“不适用”。
2、检测条件
表5：仪器检测参数信息
备注：*表示定量离子
3、溶液配制
3.1溶剂
溶剂为甲醇和水混合物，甲醇：水＝1：9(V：V)。取100mL甲醇和900mL水放入1L锥形瓶中混合均匀，密封，备用。
3.2储备溶液
配制L-1000％溶液：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4对照品各10mg加10mL溶剂溶解，取0.3mL溶液稀释至10mL，取稀释后的溶液0.2mL进一步稀释至20mL，得到浓度为300ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液；
表6：L-1000％溶液配制信息
3.3对照品溶液
配制对照品溶液：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液1.0mL，加溶剂进一步稀释至10mL，摇匀，得100％限度浓度均为30ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4对照品溶液；
表7：对照品溶液配制信息
3.4灵敏度溶液
配制灵敏度溶液：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000％溶液0.2mL，加溶剂进一步稀释至10mL，摇匀，得20％限度浓度均为6ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的灵敏度溶液；
表8：灵敏度溶液配制信息
3.5样品溶液
配制样品溶液：精密称取20mg维格列汀样品，加入10mL溶剂溶解，摇匀，得浓度均为2mg/mL的样品溶液，两份样品溶液标记为SS#1和SS#2。
由于实际操作过程中，无法保证刚好精确称取到需要克重的IMP 1、IMP2、IMP 3和IMP 4样品，故在进行相应的结果验证的时候，实际进样的IMP1、IMP 2、IMP 3和IMP 4溶液亦无法保证准确配制为300ng/mL、30ng/mL或6ng/mL，在下文各验证环节，均完善有实际配制的相应的溶液浓度。
4、检测结果及计算
将对照品溶液和样品溶液分别采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪进行检测，得到对照品溶液和样品溶液的色谱图数据；通过对照品和样品的色谱图数据，计算出样品中残留溶剂的量。
计算：
(1)响应因子
按照下列公式计算响应因子：
RF＝ASTD/CSTD
式中：
ASTD指初始6针对照品溶液中待测物的平均峰面积。
CSTD指对照溶液中待测物的浓度(ng/mL)。
RF指待测物的响应因子。
(2)残留计算
按下列公式计算待测物的残留量：
Residue(ppm)＝(VSPL×ASPL)/(WSPL×RF)
式中：
ASPL指样品色谱图中待测物的峰面积。
WSPL指样品的称样量(g)。
VSPL指样品中的稀释体积(mL)。
RF指待测物的响应因子。
结果：
参见图1至图4，维格列汀样品溶液中，均未检出IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的残留量。
5、方法验证
5.1系统适应性
接受标准：(1)系统干净稳定，在各组分的出峰位置没有干扰。若有干扰，干扰峰的峰面积应不大于灵敏度溶液中主峰的峰面积。(2)灵敏度溶液中，目标峰的信噪比(S/N)应不小于10。(3)连续6针目标峰峰面积的RSD应不大于10.0％，保留时间RSD应不大于1.0％。
配制100％限度的对照品溶液连续进样6次，以20％限度的对照品溶液作为灵敏度溶液，以溶剂作为空白溶液，并上机测试。
结果显示：系统干净稳定，在各自目标峰的出峰位置无明显干扰，灵敏度溶液测试结果信噪比不小于10，连续6针目标峰峰面积的RSD不大于10.0％，保留时间RSD不大于1.0％。系统适应性符合要求，具体结果如下表所示：
表9：系统适应性测试结果
表9中，浓度(STD ng/mL)为实际配制的进样溶液的浓度。
5.2专属性
接受标准：(1)空白溶液色谱图中在目标峰处无干扰，若有干扰，干扰峰的峰面积应不大于灵敏度溶液中主峰面积。(2)100％限度的对照品溶液显示目标峰。(3)100％限度的加标样品溶液中显示目标峰，所有大于灵敏度溶液的相邻峰与目标峰的分离度应不小于1.5。
配制100％限度的对照品溶液和100％限度的加标样品溶液，即在样品溶液中加入100％限度的对照品溶液混合均匀得100％限度的加标样品溶液，以溶剂作为空白溶液，并上机测试。100％限度的对照品溶液中待测物显示目标峰，保留时间(RT)见表10。以及第一针100％限度的加标样品溶液中目标峰与相邻峰的分离度结果见表10。
结果显示：(1)IMP 1空白溶液色谱图中在目标峰处有干扰，但干扰峰的峰面积不大于灵敏度溶液中主峰面积，其他三个物质无干扰。(2)100％限度的对照品溶液显示目标峰IMP 1RT＝7.44min，IMP 2RT＝6.90min，IMP 3RT＝5.39min，IMP 4RT＝5.13min。(3)100％限度的加标样品溶液中显示目标峰，无相邻峰。参见图5至图16，横坐标为Time，纵坐标为Intensity。专属性试验符合要求，本方法具有专属性。
表10：专属性试验结果
5.3检测限
接受标准：每针LOD溶液的信噪比(S/N)不小于3。
配制1份10％限度的对照品溶液作为LOD溶液(参照灵敏度溶液的制备方法)，并上机测试，进样3次。结果显示：得到测试结果信噪比S/N均大于3。检测限试验符合要求，具体结果如下表所示：
待测化合物的浓度和在样品中的相对含量，见表11：
表11：待测化合物的浓度和在样品中的相对含量数据
名称 浓度(ng/mL) 样品中的相对含量(ppm)
IMP 1 3.00 1.50
IMP 2 3.03 1.52
IMP 3 2.91 1.46
IMP 4 2.98 1.49
表11中，浓度为实际配制的进样溶液的浓度。
测试结果的信噪比S/N结果，见表12：
表12：测试结果的信噪比S/N数据
名称 IMP 1 IMP 2 IMP 3 IMP 4
LOD-1 13 125 10 5
LOD-2 17 199 9 10
LOD-3 19 148 8 10
5.4定量限
接受标准：每针LOQ溶液的信噪比(S/N)≥10；连续6针LOQ中目标峰峰面积的RSD不大于15.0％。
配制1份20％限度的对照品溶液作为LOQ溶液(参照灵敏度溶液的制备方法)，并上机测试，进样6次。结果显示：得到测试结果信噪比均大于10；连续6针LOQ中目标峰峰面积的RSD不大于15.0％。定量限试验符合要求，附验证结果如下表13：
表13：待测化合物的浓度和在样品中的相对含量数据
名称 浓度(ng/mL) 样品中的相对含量(ppm)
IMP 1 6.00 3.00
IMP 2 6.06 3.03
IMP 3 5.82 2.91
IMP 4 5.96 2.98
表13中，浓度为实际配制的进样溶液的浓度。
定量限结果，见表14：
表14：目标峰峰面积的数据
5.5线性和范围
接受标准：回归系数(r)≥0.990。
配制从LOQ到200％限度浓度的一系列线性测试溶液(20％，50％，100％，150％，200％)，每份溶液进样分析一次，计算方程和回归系数(r)，结果显示：得到回归系数(r)≥0.990。线性结果符合要求，验证结果如下表15：
表15：线性数据信息
表15中，浓度为实际配制的进样溶液的浓度。
范围根据准确度和线性的数据确定，具体结果见下表：
表16：方法检测范围
名称 范围
IMP 1 14.99ng/mL-44.98ng/mL
IMP 2 15.15ng/mL-45.45ng/mL
IMP 3 14.54ng/mL-43.63ng/mL
IMP 4 14.91ng/mL-44.72ng/mL
5.6准确度
接受标准：(1)50％，100％和150％三个限度水平中每个浓度水平的加标回收率在70％-120％之间。(2)9份加标样品溶液回收率的RSD应不大于15.0％。
配制50％，100％和150％三个限度水平的加标样品溶液各三份，并配制两份样品溶液，并上机测试，每份溶液进样分析一次。结果显示：得到每个浓度水平的加标回收率在70％-120％之间，9份加标样品溶液回收率的RSD不大于15.0％。准确度试验符合要求，附验证结果如下表：
表17：IMP 1准确度
表17中，SS#1及SS#2代表配制浓度为2mg/ml的维格列汀样品溶液，样品溶液中不加入IMP 1化合物；样品浓度及加入浓度分别对应实际配制的样品溶液浓度和IMP 1浓度，表18-表20做相同理解。
表18：IMP 2准确度
表19：IMP 3准确度
表20：IMP 4准确度
5.7重复性
接受标准：6份100％加标溶液回收率RSD不大于15.0％。
配制6份100％限度水平的加标样品溶液，并上机测试，每份溶液进样分析一次。结果显示：得到6份100％加标溶液回收率的RSD不大于15.0％。重复性试验符合要求，附验证结果如下：
表21：IMP 1重复性
表22：IMP 2重复性
表23：IMP 3重复性
表24：IMP 4重复性
表21-表24中，加入浓度为实际配制的溶液的浓度。
5.8溶液稳定性
接受标准：稳定性溶液的含量在初始含量的80-120％之间。
分别配制100％限度水平对照溶液和加标样品溶液各一份，在24小时或其他时间段分析这些溶液，并与新鲜配制的对照品溶液进行对比。结果显示：稳定性溶液的含量在初始含量的80-120％之间。溶液稳定性试验符合要求，附验证结果如下：
表25：溶液稳定性结果
5.9耐用性
接受标准：单一条件下的6份测试峰面积的RSD不大于20.0％。
分别改变表5中的起始有机相比例，柱温，流速，配制100％限度的加标样品溶液(100％Spiked)，每改变一个条件考察100％限度的加标样品溶液2次。结果显示：耐用性条件下，单一条件下的6份测试峰面积的RSD不大于20.0％。耐用性试验符合要求，附验证结果如下：
表26：耐用性数据
备注：I1为柱温-2℃，I2为柱温+2℃；O1为起始有机相-2％的起始有机相，O2为起始有机相+2％的起始有机相；F1为流速-0.02mL/min，F2为流速+0.02mL/min。
5.10中间精密度
接受标准：第二名研究员配制的6份100％加标样品溶液的回收率RSD应不大于15.0％，12份加标样品溶液回收率RSD应不大于20.0％。
由两名研究员在不同时间配制6份100％限度水平的加标样品溶液，进行测试。结果显示：第二名研究员配制的6份100％加标样品溶液的回收率RSD不大于15.0％，12份加标样品溶液回收率RSD不大于20.0％。中间精密度试验符合要求，附验证结果如下：
表27：IMP 1中间精密度测试结果
表27中，样品浓度为实际配制的样品溶液的浓度，加入浓度为实际配制的IMP1的浓度。表28-表30亦做相似理解。
表28：IMP 2中间精密度测试结果
表29：IMP 3中间精密度测试结果
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表30：IMP 4中间精密度测试结果
5.12结论
综合上述试验可知：系统适应性符合要求，因此本发明方法使用的系统是有效的，适用的；专属性试验符合要求，说明本发明方法能够准确地、选择性地分析检识出残留物质；检测限试验符合要求，说明本发明方法检测限设定合理，且检测方法灵敏度较高；定量限试验符合要求，说明本发明方法能够准确的测定残留物质的残留量，具备灵敏的定量检测能力；准确度试验符合要求，说明本发明方法精密度较好，分析结果的准确度较高；重复性试验符合要求，说明本本发明方法具有可重复性，可行性；溶液稳定性试验符合要求，即当试验条件(溶液放置时间)发生变化时，本发明方法仍然能够保持测定的准确；耐用性试验符合要求，即当试验条件(柱温、起始有机相、流速)发生变化时，本发明方法仍然能够保持测定的准确，说明本发明方法的色谱系统适用于本方法；中间精密度试验符合要求，即重复性条件与再现性条件之间的条件下得到的精密度较高，说明本发明方法的测量精密度较好。
上述各验证项目均符合要求，本申请的方法可用于维格列汀中IMP 1、IMP 2、IMP3和IMP 4的残留量检测。其IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4在维格列汀中的限度接受标准如下表：
表31：限度接受标准
检测项目 限度接受标准
IMP 1 15ppm
IMP 2 15ppm
IMP 3 15ppm
IMP 4 15ppm
对比例1
取实施例1中IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的对照品溶液各1mL，采用高效液相色谱法进行测定分析，检测条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶
流动相A：0.1％甲酸水溶液
流动相B：0.1％甲酸乙腈溶液
柱温：柱温为40℃
流速：1.0mL/min
进样量：10μl
梯度洗脱程序：0-5min，1％-10％A；5-11min，10％-28％A；11-18min，28％-48％A；18-20min，48％-70％A；20-22min，70％-100％A；22-24min，100％-100％A；24-24.5min，100％-1％A；24.5-27min，1％-1％A。
结论：对比例1是实施例1的对比试验，对比例1的方法是采用高效液相色谱法进行测定分析，结果：未能检出残留溶剂色谱图，该方法不适用。实施例1的方法是采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪检测维格列汀的残留溶剂，根据对比例1的试验结果与实施例1对比可知：在相同色谱检测条件下，使用不同的仪器，也未能残留溶剂色谱图。相比之下，实施例1采用的方法能够检测出维格列汀中的残留溶剂，灵敏度高，基线分离，分离度好。
对比例2
取实施例1中IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的对照品溶液各1mL，采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪测定分析，色谱条件：
色谱柱：Agilent Eclipse Plus phenyl-Hexyl 5μm，4.6*150mm
流动相A：0.1％甲酸水溶液
流动相B：0.1％甲酸乙腈溶液
柱温：柱温为40℃
流速：0.5mL/min
进样量：5μl
梯度洗脱程序：0min，2％A，98％B；2min，20％A，80％B；10min，55％A，45％B；12min，60％A，40％B；16min，30％A，70％B；17min，10％A，90％B。
质谱条件：与实施例1相同。
结论：对比例2是实施例1的对比试验，对比例2和实施例1的采用的检测方法相同，不同的是检测条件中的梯度洗脱程序不同。根据对比例2的检测结果与实施例1对比可知：在相同检测方法中，改变梯度洗脱程序，检测得到的物质明显不同。相比之下，实施例1采用的梯度洗脱程序能够更好的将维格列汀中的残留溶剂分离，准确检测出残留物，获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
对比例3
取实施例1中IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的对照品溶液各1mL，采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪测定分析，色谱条件：与实施例1相同。
质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正、负离子检测模式(ESI+、ESI-)，扫描模式为全扫描。气帘气50psi，碰撞气15psi，温度300℃，离子化电压4500V，喷雾气60psi，加热气50psi。
结论：对比例3是实施例1的对比试验，对比例3和实施例1的采用的实验方法相同，不同的是检测条件中质谱条件不相同。根据对比例3的检测结果与实施例1对比可知：在相同检测方法中，质谱条件不相同，检测得到的物质不同。相比之下，实施例1采用的质谱条件，能够检测出残留物，获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
对比例4
取实施例1中IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的对照品溶液各1mL，采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪测定分析，色谱条件：与实施例1相同。
质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正离子检测模式(ESI+)，扫描模式为正离子扫描(MRM)。气帘气30psi，碰撞气9psi，温度600℃，离子化电压5500V，喷雾气50psi，加热气45psi。
在正离子检测模式下，选择m/z 312.3→181.0，144.1→58.2，225.3→207.5，191.3→173.2和193.3→147.3，381.4→191.2，233.2→187.3，231.4→185.1作为检测离子对。
结论：对比例4是实施例1的对比试验，对比例4和实施例1的采用的实验方法相同，不同的是检测条件的质谱条件中选择的检测离子对不相同。根据对比例4的检测结果与实施例1对比可知：在相同检测方法中，质谱条件的选择检测离子对不相同，无法准确检测出残留物。相比之下，实施例1采用的质谱条件，能够准确检测出残留物，获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
由上述对比例1-4可知：
第一，在相同色谱检测条件下，使用不同的仪器，能够检测出来的化合物不相同，本申请采用的采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪，检测灵敏度更高。
第二，在相同检测方法中，改变梯度洗脱程序，能够检测出来的化合物不相同，本申请采用的梯度洗脱程序能够更好的将维格列汀中的残留溶剂分离，检测出残留物，从而获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
第三，在相同检测方法中，质谱条件不相同，检测结果明显不同，本申请采用的质谱条件，能够准确检测出残留物，获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
第四，在相同检测方法中，质谱条件的检测离子对不相同，能够检测到的化合物明显不同，本申请采用的检测离子对，能够准确检测出残留物，获得相应的色谱图，基线分离，分离度好。
综上可知，本实施例证实采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪，并通过限定色谱条件和质谱条件相结合，能够准确检测出维格列汀中的残留溶剂，检测方法灵敏度高，分离度好。
以上所述实施例仅用以说明本申请的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本申请进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本申请各实施例技术方案的精神和范围，均属于本申请的保护范围。

Claims (4)

1.一种维格列汀的残留溶剂检测方法，其特征在于：采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪检测维格列汀的残留溶剂，包括以下色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse Plusphenyl-Hexyl 5 μm，4.6*150mm，流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为0.1%甲酸乙腈溶液，柱温为40℃，进样体积为5μl，样品盘温度为15℃，流速为0.5mL/min，洗针液为甲醇：水=1：1溶液，V：V，梯度洗脱，梯度洗脱程序为0min，90%A，10%B；6min，25%A，75%B；12min，25%A，75%B；13min，90%A，10%B；14min，90%A，10%B；
包括以下质谱条件：电喷雾电离源（ESI），正离子检测模式，扫描模式为MRM；气帘气30psi，碰撞气9 psi，温度600 ℃，离子化电压5500 V，喷雾气50 psi，加热气45 psi；
所述维格列汀的残留溶剂包括（2S）-1-（2，2-二氯乙酰基）-吡咯烷-2-甲腈、1-（2-碘代乙酰基）-吡咯烷-2-甲腈、（2S）-1-（2，2二氯乙酰基）-吡咯烷-2-甲酰胺和1-（2-碘代乙酰基）-吡咯烷-2-甲酰胺，分别简称为IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4。
2.根据权利要求1所述的一种维格列汀的残留溶剂检测方法，其特征在于，在正离子检测模式下，选择m/z 207→180，265→238，225→208，283.1→238.1和207→70，265→70，225→180，283.1→70.1作为检测离子对。
3.根据权利要求1所述的一种维格列汀的残留溶剂检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.L-1000%溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4对照品各10mg加10mL溶剂溶解，取0.3mL溶液稀释至10mL，取稀释后的溶液0.2mL进一步稀释至20mL，得到浓度为300ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000%溶液；
S2.对照品溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000%溶液各1.0mL，加溶剂进一步稀释至10mL，摇匀，得100%限度浓度均为30 ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4对照品溶液；
S3.灵敏度溶液的制备：取IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的L-1000%溶液各0.2mL，加溶剂进一步稀释至10mL，摇匀，得20%限度浓度均为6 ng/mL的IMP 1、IMP 2、IMP 3和IMP 4的灵敏度溶液；
S4.样品溶液的制备：精密称取20mg维格列汀样品，加入10mL溶剂溶解，摇匀，得浓度为2mg/mL的样品溶液；
S5.将对照品溶液和样品溶液分别采用液相色谱-三重四级杆质谱联用仪进行检测，得到对照品溶液和样品溶液的色谱图数据；
S6.通过对照品和样品的色谱图数据，计算出样品中残留溶剂的量。
4.根据权利要求3所述的一种维格列汀的残留溶剂检测方法，其特征在于所述溶剂为甲醇和水混合物，甲醇：水=1：9，V：V。
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