CN115299541A

CN115299541A - 一种包含人参干细胞的辅助降血脂固体饮料及其制备方法

Info

Publication number: CN115299541A
Application number: CN202111325703.8A
Authority: CN
Inventors: 刘冰; 戚龙斌; 孔祥鹏; 侯春英; 郭继奎; 高帅; 陈今朝
Original assignee: Shandong Anran Nanometre Ind Development Co ltd
Current assignee: Shandong Anran Nanometre Ind Development Co ltd
Priority date: 2021-11-10
Filing date: 2021-11-10
Publication date: 2022-11-08

Abstract

本发明公开了一种包含人参干细胞的辅助降血脂固体饮料及其制备方法。本发明的辅助降血脂固体饮料包括人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白、红曲米、小分子植物肽、酸度调节剂、增稠剂、甜味剂，以及果蔬粉、食用香精、食品色素中的至少一种；所述人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白的质量比为6‑10：5‑9：0.5‑1。本发明提供的固体饮料，组分合理配比，各成分能够起到协同作用，大大提高辅助降血脂的效果，易溶解，易吸收，促消化，还能够提高人体免疫力。

Description

一种包含人参干细胞的辅助降血脂固体饮料及其制备方法

技术领域

本发明属于保健食品领域，具体地说，涉及一种包含人参干细胞的辅助降血脂固体饮料及其制备方法。

背景技术

近年来，随着经济水平的提高，人们的生活方式也发生改变，心脑血管类疾病已经成为人类健康和生命的“头号杀手”。高血脂是指由于脂肪代谢或运转异常使血浆一种或多种脂质高于正常值的情况。脂质不溶或微溶于水必须与蛋白质结合以脂蛋白形式存在，因此，高脂血又称为高脂蛋白血症，其表现为高胆固醇血症、高甘油三酯血症或两者兼有。高脂血症可分为原发性和继发性两类。血脂高不仅会导致血压增高，还会增加脑血管病如脑动脉硬化、脑血栓等发病的危险性。

就目前研究所知，人参的化学成分包括人参皂苷、糖类、氨基酸、维生素、蛋白质、多肽、有机酸、脂溶性成分及微量元素等。目前人参中已发现的单体皂苷有40种之多，挥发油成分中以β-榄香烯等成分含量较高，人参根中氨基酸已发现的有精氨酸等20多种，其中包括赖氨酸在内的近十种人体不能合成的氨基酸，这也是人参对人体营养和健康有显著作用的依据。人参根中含有10％以上的人参多糖，其中80％左右为人参淀粉，20％左右为人参果胶。动物实验证明，人参多糖对肿瘤有4％-80％的抑瘤率。维生素类包括B1、B2、C等多种维生素；微量元素已检出20多种，其中人体必需的有铁、铜、锌、锰、钴、硒、镍等；人体必需的常量元素有钾、钠、钙、镁等。

植物干细胞包含有关于植物发育和生长的所有程式，拥有永恒生命力的细胞，是植物生命力的根源。人参干细胞中含有大量有效活性成分，具有无限分裂能力，能够分离，快速培养，抗逆能力强。

固体饮料呈粉末状、颗粒状或块状，与液体饮料相比，固体饮料具有质量显著减轻，体积显著变小，携带方便；风味好，速溶性好，应用范围广，饮用方便；易于保持卫生；包装简易，运输方便的特点。现有技术中还没有含有人参干细胞的辅助降血脂固体饮料的报道，若能够提供降血脂效果好的固体饮料，则能使消费者于日常生活中轻松降血脂，保持健康。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种包含人参干细胞的辅助降血脂固体饮料及其制备方法。本发明制备的固体饮料，组分合理配比，各成分能够起到协同作用，大大提高辅助降血脂的效果，易溶解，易吸收，促消化，还能够提高人体免疫力。

为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：

本发明的第一目的是提供一种包含人参干细胞的辅助降血脂固体饮料，包括人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白、红曲米、小分子植物肽、酸度调节剂、增稠剂、甜味剂，以及果蔬粉、食用香精、食品色素中的至少一种；所述人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白的质量比为6-10：5-9：0.5-1。

人参干细胞冻干粉包括多种人参皂苷、人参多糖、氨基酸、维生素、蛋白质、人参多肽、有机酸、脂溶性成分及微量元素等，能够激活脂蛋白脂肪酶，清除血液过多的油脂、胆固醇，从而达到降血脂的目的，对抑制脑动脉硬化有一定的作用；能够减少心肌缺血，降低冠脉阻力，对心脏起到保护作用；还具有一定的强身健体功能。

地龙蛋白提取自地龙，含有胶原酶、纤溶酶、蚓激酶、纤溶激活蛋白(FA蛋白)、核酸、微量元素等多种成分，其分子量在5000-10000，属于短链小分子物质，能顺畅的进入微血管，溶解微血管内的微栓，让硬化的微血管恢复弹性，从而解除微血管的堵塞、扭曲变形情况。地龙蛋白可以降低血粘，服用活性地龙蛋白后，随着血栓的溶解，血管的软化、微循环的改善，降低了血液粘稠度，使异常的血液流变学指标恢复正常，使甲皱微循环检测由异常转为正常，从而消除了发生心脑血管意外的隐患。需要说明的是，本发明采用的地龙蛋白不含有蚓激酶。

纳豆粉，为纳豆冻干粉，是固体发酵的纳豆，经过零下40摄氏度冻结后，经真空抽湿干燥、粉碎，成为纳豆冻干粉。纳豆粉中含有纳豆菌、纳豆多肽、纳豆多糖、黏液素、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽、纳豆激酶、吡啶二羧酸、溶菌酶、高弹性蛋白酶、卵磷脂、皂甙、异黄酮、维生素K2、维生素E、B族维生素、多种矿物质等，有150种以上的生理活性物质。纳豆粉可以调整肠道菌群，抑制有害菌，保持有益菌占主导地位；溶化血栓、修复受损的血液细胞、血管细胞；改善免疫系统等。

红曲米是以籼稻、粳稻、糯米等稻米为原料，用红曲霉菌发酵而成，为棕红色或紫红色米粒，具有健脾消食、活血化淤的功效。

小分子植物肽是指具有生物活性的植物来源的多肽，它是一类由20种天然氨基酸以不同的组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同的肽类的总称。多肽类物质可由肠道不经降解直接吸收，且吸收速度和效率比蛋白质和氨基酸都要高。它不仅能够提供人体必需的蛋白营养，还能有效降低血液中胆固醇和甘油三酯的含量。

进一步的方案，所述人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白的质量比为7-10：5：1。

本发明中，人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白控制配比为6-10：5-9：0.5-1，能够共同作用，达到全面、协同降低血脂的效果；尤其当人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白的质量比为7-10：5：1时，起到的降血脂效果最佳，还能够提高人体免疫力。

进一步的方案，所述人参干细胞冻干粉、红曲米和小分子植物肽的质量比为6-10：0.4-0.8：1-4；

优选的，人参干细胞冻干粉、红曲米和小分子植物肽的质量比为7-10：0.4-0.6：2-4。

本发明中，控制人参干细胞冻干粉、红曲米和小分子植物肽的质量比为7-10：0.4-0.8：1-4；优选的方案为7-10：0.4-0.6：2-4，经试验证明，能够提高人体对固体饮料的吸收效果，促进消化，人体容易吸收，能够进一步促进降血脂，为人体补充营养，提高人体免疫力。

本发明经试验证明，当固体饮料中各成分采用上述配比时，能够起到协同作用，易于人体吸收，达到全面、协同降低血脂的效果，还能够提高人体免疫力。

进一步的方案，所述的辅助降血脂固体饮料包括以下重量份的成分：

人参干细胞冻干粉60-100份、纳豆粉50-90份、地龙蛋白5-10份、红曲米4-8份、小分子植物肽10-40份、酸度调节剂3-8份、增稠剂5-10份、甜味剂1-20份，果蔬粉5-10份、食用香精1-5份、食品色素1-3份。

人参干细胞冻干粉70-100份、纳豆粉50份、地龙蛋白10份、红曲米4-6份、小分子植物肽20-40份、酸度调节剂3-6份、增稠剂5-8份、甜味剂1-15份，果蔬粉5-10份、食用香精1-5份、食品色素1-3份。

人参干细胞冻干粉80份、纳豆粉50份、地龙蛋白10份、红曲米6份、小分子植物肽40份、酸度调节剂5份、增稠剂8份、甜味剂10份，果蔬粉8份、食用香精2份、食品色素2份。

进一步的方案，所述小分子植物肽选自大豆肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、豌豆肽、核桃肽、绿豆肽、苦瓜肽中的一种或多种。

进一步的方案，所述酸度调节剂选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的一种或多种。

进一步的方案，所述增稠剂选自羧甲基纤维素钠、抗性糊精、海藻酸钠、魔芋粉、黄原胶、结冷胶、果胶、卡拉胶、刺槐豆胶、瓜尔胶中的一种或者多种。

进一步的方案，所述甜味剂选自赤鲜糖醇、山梨糖醇、木糖醇、低聚果糖、甜菊糖苷、三氯蔗糖、阿斯巴甜中的一种或者多种。

所述果蔬粉选择选自草莓粉，蓝莓粉，酸梅粉，菊粉，橙子粉，橘子粉，葡萄粉，山楂粉中的一种或多种；

所述食用香精选自草莓香精，蓝莓香精，酸梅香精，橙子香精，橘子香精，葡萄香精中的一种或多种；

所述食品色素选自天然胡萝卜素，桅子黄、桅子蓝，甜菜红、红曲红、焦糖色中的一种或多种。

进一步的方案，所述人参干细胞冻干粉的水分含量≤5％。固体饮料的国标GB/T29602中要求固体饮料的水分含量不高于7％。本发明控制人参干细胞冻干粉的水分含量≤5％能够延长固体饮料的保存期限，有利于保证降血脂的效果。

优选的，所述人参干细胞冻干粉的制备方法包括：

(1)预处理：将人参干细胞组织粉碎，得人参干细胞糊状物；

(2)预冷冻：将获得的人参干细胞糊状物在-35～-40℃冷冻1-3h，得冷冻人参干细胞；

(3)将步骤(2)获得的冷冻人参干细胞放置于真空冷冻干燥机中，控制真空度15～30Pa、冷阱温度为-35～-40℃，冷冻干燥11-13小时，取出；

(4)水分含量检测：取步骤(3)得到的冻干物，进行水分含量测定，若水分含量＞5％，则重复步骤(2)、步骤(3)重复；

(5)超微粉碎：取水分含量测定≤5％的冻干物进行超微粉碎，得人参干细胞冻干粉。

本发明中，人参干细胞组织可以采用现有技术中的方法培养获得或者购买获得，或者可以采用本发明的方法培养获得。

作为一种优选的方式，本发明中人参干细胞的培养方法包括：

(1)采用一步法培养人参不定根；

(2)取人参不定根的根尖部分，解剖分离获取干细胞区域；

(3)分离培养：将干细胞区域接种到干细胞诱导培养基中暗培养，获得干细胞团；

(4)继代培养：将(3)获得的干细胞团接种到干细胞继代培养基中，暗培养；

(5)液体培养：将(4)获得的干细胞接种到干细胞液体培养基中，暗培养，获得人参干细胞。

步骤(3)中，所述干细胞诱导培养基包括2-4mg/L赤霉素，0.6-1mg/L激动素，2-4mg/L吲哚乙酸，15-75mg/L抗坏血酸，50-150mg/L柠檬酸，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-2.4g/L1/2MS培养基，1-2.5g/L B5培养基。

作为一种优选的实施方式，所述干细胞诱导培养基包括3mg/L赤霉素，0.8mg/L激动素，2.5mg/L吲哚乙酸，50mg/L抗坏血酸，100mg/L柠檬酸，40g/L蔗糖，3g/L植物凝胶1.8g/L1/2MS培养基，1.5g/L B5培养基。

本发明的干细胞诱导培养基中，含有吲哚乙酸、赤霉素和激动素，可以诱导干细胞生长，抗坏血酸和柠檬酸能够产生协同抗氧化的作用。该诱导培养基中各个成分协同作用，能够使干细胞在初期快速生长。

进一步的方案，步骤(4)中，所述干细胞继代培养基包括2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L赤霉素，0.8-1.2mg/L激动素，20-60g/L蔗糖，1-6g/L植物凝胶，1-2.4g/L 1/2MS培养基和0.6-1.4g/L WPM培养基；

作为一种优选的实施方式，所述干细胞继代培养基包括3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸，2mg/L赤霉素，1mg/L激动素，35g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1.8g/L 1/2MS培养基和0.8g/LWPM培养基。本发明的干细胞继代培养基中，含有2,4-二氯苯氧乙酸、赤霉素和激动素，使干细胞生长速度大大增加。

进一步的方案，步骤(3)和(4)中，在20-25℃下黑暗培养，直至接种干细胞长出大量细胞团。

进一步的方案，步骤(5)中，干细胞液体培养基包括2-4mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，1-3mg/L赤霉素，0.8-1.2mg/L激动素，20-60g/L蔗糖，1-2.4g/L 1/2MS培养基和0.6-1.4g/LWPM培养基；

作为一种优选的实施方式，干细胞液体培养基包括3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸，2mg/L赤霉素，1mg/L激动素，35g/L蔗糖，1.8g/L 1/2MS培养基和0.8g/L WPM培养基。

经试验证明，采用前述优选实施方式配比条件下的干细胞继代、液体培养基，人参干细胞的生长最佳，产生的总皂苷含量最高。

进一步的，步骤(5)中，在20-25℃，100-150rpm下黑暗培养，3-5周传代一次。

进一步的方案，本发明中的干细胞诱导培养基、干细胞继代培养基和干细胞液体培养基的pH为5.6-6.0。

进一步的方案，本发明中干细胞诱导培养基、干细胞继代培养基和干细胞液体培养基的pH采用NaOH或KOH调节，有利于干细胞生长。

本发明的分离后的人参干细胞，依次在组成和配比适宜的干细胞诱导培养基、干细胞继代培养基、干细胞液体培养基上暗培养，人参干细胞生长速度快，能够快速得到人参干细胞。

进一步的方案，步骤(2)中，取(1)中培养的人参不定根的根尖部分，在显微镜下观察根尖部分，根据干细胞的特征确定干细胞区域，显微操作解剖、切割获得根尖干细胞区域。

在显微镜下观察根尖部分，细胞形状、排列不规则部分为生长点，即分生组织细胞聚集区域，此区域细胞中含有多个液泡。显微操作解剖刀切割获得根尖干细胞区域。

本发明采用一步法从成熟人参培养人参不定根，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，可以直接从成熟参一步诱导得到不定根，从而可以简化诱导步骤、缩短诱导时间。

进一步的方案，步骤(1)中，本发明中采用一步法培养人参不定根的培养方法，具体包括：

(1)不定根的诱导

清洗成熟人参的主根部，消毒除菌后，切成宽0.5-0.7cm、长0.5-0.7cm和厚0.2-0.5mm的薄片，接种到含有4mg/L萘乙酸，0.6mg/L赤霉素，0.4mg/L激动素，0.1g/L柠檬酸，0.05g/L抗坏血酸，30g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1.55g/L B5培养基和1.21g/L WPM培养基的诱导培养基中，22±1℃条件下暗培养4～5周诱导出人参不定根。

(2)不定根的继代培养

将步骤(1)获得的人参不定根接种到和步骤(1)中相同的诱导培养基中，相同条件下暗培养4～5周；

(3)不定根的培养

将步骤(2)获得的人参不定根，剪切成长度为1-2cm左右的组织，接种到含有10-55g/L蔗糖，0.6-1.6g/L B5培养基，0.3-1.2g/L 1/2MS培养基，0-5.4mg/L 6-苄氨基腺嘌呤，0-5.4mg/L萘乙酸，0-8mg/L赤霉素，0-5.4mg/L吲哚乙酸的液体培养基中，22±1℃条件下在摇床上培养3～4周获得不定根。

鉴于成熟人参参龄较长，成熟度高，不易再进行分化，目前还没有可以直接从成熟人参诱导不定根的报道。而本发明经过大量的试验，意外的发现在特定诱导培养基上，成熟人参切片可以直接诱导产生不定根，如此，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，可以直接从成熟参一步诱导得到不定根，从而可以简化诱导步骤、缩短诱导时间。

在不定根的诱导培养基中，萘乙酸是植物生长调节剂，赤霉素是植物激素，都可以促进不定根形成。激动素为一种细胞分裂素，可以促进细胞的分裂。柠檬酸和抗坏血酸能够产生协同抗氧化的作用，防止成熟人参离体组织褐变，有利于从成熟参离体组织直接诱导不定根。诱导培养基中各个成分协同作用，最终实现了从成熟参的各个部分直接诱导产生不定根，而不需要诱导愈伤组织的中间步骤。上述优选成分配比下的诱导培养基，对成熟参的产生不定根的诱导效果最好，产生的不定根数量多，质量好，有利于下一步扩繁，提高不定根中的活性成分含量。

采用上述一步法培养的人参不定根，不定根的增长倍数为2-9倍，得到的人参不定根中人参皂苷的总含量为7000mg/kg-约15000mg/kg。

作为优选的实施方式，采用的液体培养基的组成为：45g/L蔗糖，1.28g/L B5培养基，0.905g/L 1/2MS培养基，4.2mg/L 6-苄氨基腺嘌呤，3mg/L萘乙酸，0.8mg/L赤霉素，0.6mg/L吲哚乙酸，0.6mg/L吲哚丁酸时，不定根的增长倍数高，为6.7倍，总皂苷含量最佳，达到15878.75mg/kg。

在一步法培养人参不定根的过程中，本发明采用特定成分配比的液体培养基，使生成的不定根具有较高的皂苷总含量，进而提高了后续培养生成的人参干细胞中的皂苷含量。

采用前述方法，并采用优选实施的不定根液体培养基、优选实施方式的干细胞诱导培养基、干细胞继代培养基和干细胞液体培养基的条件下，培养获得的人参干细胞中总皂苷含量可以达到16000mg/kg以上，人参皂苷Re、Rg1、Ra3、Rb1、Rf、Rb2、Rb3、F3、Rg2、Rd、F1的含量均较高。

本发明的第二目的是提供一种如上任一方案或者组合方案所述的辅助降血脂固体饮料的制备方法，包括：原辅料检测，粉碎或不粉碎，过筛或不过筛，称量，预混，总混，内包装，外包装，成品检测。

具体的，制备方法包括：

原辅料检测：按照质量标准对原辅料进行检测验收，合格后方可使用。

粉碎：使用研磨机对块状原辅料进行粉碎，使之成为粉末状以备后续工序使用。

过筛：使用振荡筛将假性结块及粉碎后的原辅料进行过筛处理，以保持各原辅料的均匀度，使得各原辅料能更好地混合，振荡筛的筛网孔径为80-120目，过筛后的细粉备用。

称量：按配方量要求对原辅材料重量进行称量，并由第二人进行复核，每种原料的取料工具必须专用，取下一种原料时必须更换取料工具，不得混用，防止交叉污染。

预混：对于配方中占比较小的原辅料可先用小装量混合机进行预混，所述混合时间为20～30min，混合搅拌转速为10～20rpm/min。

总混：将配方中全部原辅材料用二维混合机进行总混，所述混合时间为20～30min，混合搅拌转速为10～20rpm/min。

内包装：将混合好的物料在10万洁净环境中通过包装机进行包装，可按照条带状包装、方袋包装或灌装进行包装。

外包装：外包装可采取盒装形式进行包装。

成品检测：按照质量标准对成品进行检测验收，合格后方可入库。

进一步的方案，本发明所述的辅助降血脂固体饮料的制备方法，制备过程中的环境湿度保持在30-40％。

采用上述技术方案后，本发明与现有技术相比具有以下有益效果。

1、本发明提供的辅助降血脂固体饮料，包括人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白、红曲米、小分子植物肽、酸度调节剂、增稠剂、甜味剂，以及果蔬粉、食用香精、食品色素中的至少一种；各成分配比合适，综合作用，能够起到优异的降血脂效果。

其中，本发明中，人参干细胞冻干粉与纳豆粉、地龙蛋白的质量比为6-10：5-9：0.5-1，人参干细胞冻干粉、红曲米和小分子植物肽的质量比为6-10：0.4-0.8:1-4；在该比例范围下，各成分能够起到协同作用，大大提高辅助降血脂的效果，还能够促进消化，易于人体吸收，可以提高人体免疫力。

2、本发明中人参干细胞冻干粉制备方法能够保持干细胞的活性，水分含量≤5％，有利于控制固体饮料水分含量低于7％，能够延长固体饮料的保存期限。本发明的固体饮料颗粒均匀一致，不易结块，遇水溶化快且溶解后无杂质，口感丰富，有利于消费者轻松食用，降血脂效果佳。

3、本发明中人参不定根的分离培养方法，实现了采用一步法，将成熟人参的各部分处理后接种到诱导培养基中直接诱导出人参不定根，不需要诱导愈伤组织的中间步骤，可以简化诱导步骤、缩短诱导时间，降低污染风险；进一步制备人参干细胞的培养方法，采用的培养基成分、配比适合，能够提高人参干细胞中活性成分的含量，有利于提高固体饮料的降血脂、提高人体免疫力的功效。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1-3

实施例1-实施例3各提供一种辅助降血脂组合物，由下表1中重量克数的原料制备而成。

制备方法：称取相应重量的各原料，混合均匀，制成辅助降血脂组合物。

实施例4-实施例10

实施例4-实施例10各提供一种辅助降血脂固体饮料，由下表1中重量克数的原料制备而成。

制备方法：原辅料检测，粉碎，过筛，称取相应重量的原料，预混，总混，内包装，外包装，成品检测，获得固体饮料。

表1

实施例12

实施例1-8中人参干细胞冻干粉的制备方法包括：

(1)预处理：将人参干细胞组织粉碎，得人参干细胞糊状物；

(2)预冷冻：将获得的人参干细胞糊状物在-40℃冷冻1h，得冷冻人参干细胞；

(3)将步骤(2)获得的冷冻人参干细胞放置于真空冷冻干燥机中，控制真空度30Pa、冷阱温度为-35℃，冷冻干燥13小时，取出；

实施例13

实施例9-11中人参干细胞冻干粉的制备方法包括：

(1)预处理：将人参干细胞组织粉碎，得人参干细胞糊状物；

(2)预冷冻：将获得的人参干细胞糊状物在-35℃冷冻3h，得冷冻人参干细胞；

(3)将步骤(2)获得的冷冻人参干细胞放置于真空冷冻干燥机中，控制真空度15Pa、冷阱温度为-40℃，冷冻干燥11小时，取出；

试验例1

(一)辅助降低血脂功能人体试食方法

1、受试者纳入标准

在正常饮食情况下，检测禁食12-14小时后的血脂水平，半年内至少有两次血脂检测，血清总胆固醇在5.18-6.21mmol/L，并且血清甘油三酯在1.70-2.25mmol/L，可作为辅助降低血脂功能备选对象。

2、试验设计及分组要求

采用自身和组间两种对照设计。根据随机盲法的要求进行分组。按受试者血脂水平随机分为试食组和对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别、饮食等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。每组受试者不少于50例。试食组服用实施例2制备的受试样品，对照组可服用安慰剂或采用空白对照。服用受试样品、安慰剂的量为：0.1g/kg/d。试验周期45天。

3、功效判定标准

有效：血清总胆固醇TC降低>10％；甘油三酯TG降低>15％；高密度脂蛋白胆固醇HDL-C上升>0.104mmol/L。

无效：未达到有效标准者。

观察血清总胆固醇(TC)有效率、甘油三酯(TG)有效率、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)有效率及总有效率。

4、辅助降低血脂功能结果判定：

试食组自身比较及试食组与对照组组间比较，受试者血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇降低，差异均有显著性，同时血清高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，试验组总有效率显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低血脂功能人体试食试验结果阳性。

(二)辅助降血脂功能验证结果

1、试食前受试者一般情况

表2试食前两组人群血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量比较

2、样品对高血脂受试者血清总胆固醇(TC)功效性指标的影响

表3试食前后两组受试人群的血清总胆固醇(TC)含量比较

3、样品对高血脂受试者血清甘油三酯(TG)功效性指标的影响

表4试食前后两组受试人群的血清甘油三酯(TG)含量比较

4、样品对高血脂受试者血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)功效性指标的影响

表5试食前后两组受试人群的血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量比较

综上，由表3-表5中结果可以看出，与对照组相比，服用本发明实施例1制备的固体饮料的试食者的，食用45天后，血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)显著下降，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)上升，依据以上试验结果可判定该受试样品具有优异的辅助降低血脂功能。

试验例2

本试验例中，人参干细胞冻干粉、纳豆粉和地龙蛋白的用量按照下表6中调整，其他成分的重量(红曲米、小分子植物肽、酸度调节剂、增稠剂、甜味剂)与实施例5相同。

参照试验例1中的方法，将辅助降低血脂备选对象分组随机分为试食组和对照组，每组50人，试食组服用实施例5、实验组1-6制备的受试样品，对照组可服用安慰剂或采用空白对照。服用受试样品、安慰剂的量为：0.1g/kg/d。试验周期45天。结果如下表6所示。

表6

试验例3

参照试验例1中的方法，将辅助降低血脂备选对象分组随机分为试食组和对照组，每组50人，试食组服用实施例2-11制备的受试样品，对照组可服用安慰剂或采用空白对照。服用受试样品、安慰剂的量为：0.1g/kg/d。试验周期45天。结果如下表7所示。

表7

由上述试验例2和试验例3的结果可知，本发明中，受试者服用本发明的实施例的组合物后，血清总胆固醇TC降低>10％；甘油三酯TG降低>15％；高密度脂蛋白胆固醇HDL-C上升>0.104mmol/L，因此均能够达到有效降低血脂的作用。其中，实施例5的组合物效果最佳，总胆固醇(TC)降低率达到12.76％，甘油三酯(TG)降低率达到18.65％，高密度脂蛋白胆固醇HDL-C上升值达到0.114mmol·L^-1。

其中，在实施例5的基础上调整人参干细胞冻干粉、纳豆粉和地龙蛋白的用量的实验结果可知，当人参干细胞冻干粉：纳豆粉：地龙蛋白的质量比为7-10：5：1时，降血脂效果较好；当人参干细胞冻干粉：纳豆粉：地龙蛋白的质量比为8：5：1时，降血脂效果达到最佳。

试验例4

实施例1-13中，人参干细胞的培养方法包括：

(一)培养不定根

(1)不定根的诱导

(2)不定根的继代培养

(3)不定根的培养

将步骤(2)获得的人参不定根，剪切成长度为1-2cm左右的组织，接种到含有45g/L蔗糖，1.28g/L B5培养基，0.905g/L 1/2MS培养基，4.2mg/L 6-苄氨基腺嘌呤，3mg/L萘乙酸，0.8mg/L赤霉素，0.6mg/L吲哚乙酸，0.6mg/L吲哚丁酸的液体培养基中；22±1℃条件下在摇床上培养3～4周获得不定根。

获得的不定根的增长倍数为6.7倍，总皂苷含量达到15878.75mg/kg。

(二)培养人参干细胞

(1)取得到的人参不定根的根尖部分0.5mm，显微操作解剖、切割下根尖干细胞区域；

(2)将步骤(1)经分离获取的干细胞接种至干细胞诱导培养基中，23℃下暗培养，直至接种干细胞长出大量细胞团；干细胞诱导培养基包括：3mg/L赤霉素，0.8mg/L激动素，2.5mg/L吲哚乙酸，50mg/L抗坏血酸，100mg/L柠檬酸，40g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1.8g/L 1/2MS培养基，1.5g/L B5培养基，pH为5.8；然后收集长出的干细胞，转入干细胞继代培养基中，在23℃下继续避光培养直至接种干细胞长出大量细胞团；干细胞继代培养基包括3mg/L2,4-二氯苯氧乙酸，2mg/L赤霉素，1mg/L激动素，35g/L蔗糖，3g/L植物凝胶，1.8g/L 1/2MS培养基和0.8g/L WPM培养基，pH为5.8；

(3)将步骤(2)经继代培养的干细胞接种至干细胞液体培养基中，在23℃，120rpm摇床条件下继续避光培养，4周传代一次，获得野山参不定根干细胞；干细胞液体培养基包括3mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸，2mg/L赤霉素，1mg/L激动素，35g/L蔗糖，1.8g/L 1/2MS培养基和0.8g/L WPM培养基；pH为5.8，得到人参干细胞。

(4)检测人参干细胞中的人参皂苷含量：

人参干细胞样品制备：

将得到的人参干细胞用水清洗三次、在研钵中磨碎成糊状、超声破壁、冻干后，样品在研钵上研细，准确称取50mg于10ml离心管中，加入70％甲醇溶液，涡旋。于超声振荡器上超声10分钟，重复两次，过滤备用。后与不定根检测方法相同。

成熟人参样品制备：

将切片样品用水清洗三次、在研钵中磨碎成糊状、超声破壁、冻干后，样品在研钵上研细，准确称取50mg于10ml离心管中，加入70％甲醇溶液，涡旋。于超声振荡器上超声10分钟，重复两次，过滤备用。

标准品制备：

储备液的配制(0.8mg/ml)：分别称取8.00mg人参皂苷Re、Rb1、Rg1、Rd、Rf、F3、Rk2、Rb2、Rb3、Rg2、F1共11种标品于10ml容量瓶中，用优级纯甲醇定容。

使用液的配制(32ug/ml)：准确吸取1ml储备液的配制(0.8mg/ml)于25ml的容量瓶中，用优级纯甲醇定容，经过0.22um的有机滤膜过滤，备用。

(4)仪器参考条件

A)色谱柱：C18柱，柱长150mm，柱内径4.6mm，柱填料粒径5μm，或相当者；

B)流动相：a：乙腈，b：水过0.45μm微孔滤膜过滤；

C)流速：0.7mL/min；梯度洗脱程序：0～13min，23％～46％乙腈，体积流量0.7mL/min；13～33min，46～68％乙腈，体积流量0.7mL/min；33～46.5min，68～85％乙腈，体积流量0.7mL/min；

D)柱温：30℃；

E)检测波长：203nm；

F)进样体积：10μL。

(5)分析结果的表述

试样中人参皂苷各组分的含量按式(1)计算:

式中：

X——试样中人参皂苷各组分的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)或毫克每升(mg/L)；

A1——试样中人参皂苷各组分的峰面积

A2——标准品中人参皂苷各组分的峰面积

ρ——标准品中人参皂苷各组分的浓度(ug/ml)

V——试样溶液的最终定容体积，单位为毫升(mL)；

M——试样质量，单位为克(g)；

试样中人参皂苷的含量是将检测的各组分相加得到的总和。

检测结果如下表8所示：

表8

以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。

Claims

1.一种包含人参干细胞的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，包括人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白、红曲米、小分子植物肽、酸度调节剂、增稠剂、甜味剂，以及果蔬粉、食用香精、食品色素中的至少一种；所述人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白的质量比为6-10：5-9：0.5-1。

2.根据权利要求1所述的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，所述人参干细胞冻干粉、纳豆粉、地龙蛋白的质量比为7-10：5：1。

3.根据权利要求1或2所述的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，所述人参干细胞冻干粉、红曲米和小分子植物肽的质量比为6-10：0.4-0.8：1-4；

4.根据权利要求1-3任意一项所述的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，包括以下重量份的成分：人参干细胞冻干粉60-100份、纳豆粉50-90份、地龙蛋白5-10份、红曲米4-8份、小分子植物肽10-40份、酸度调节剂3-8份、增稠剂5-10份、甜味剂1-20份，果蔬粉5-10份、食用香精1-5份、食品色素1-3份。

5.根据权利要求4所述的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，包括以下重量份的成分：人参干细胞冻干粉70-100份、纳豆粉50份、地龙蛋白10份、红曲米4-6份、小分子植物肽20-40份、酸度调节剂3-6份、增稠剂5-8份、甜味剂1-15份，果蔬粉5-10份、食用香精1-5份、食品色素1-3份。

6.根据权利要求5所述的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，包括以下重量份的成分：人参干细胞冻干粉80份、纳豆粉50份、地龙蛋白10份、红曲米6份、小分子植物肽40份、酸度调节剂5份、增稠剂8份、甜味剂10份，果蔬粉8份、食用香精2份、食品色素2份。

7.根据权利要求1-6任意一项所述的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，所述小分子植物肽选自大豆肽、玉米低聚肽、小麦低聚肽、豌豆肽、核桃肽、绿豆肽、苦瓜肽中的一种或多种。

8.根据权利要求5或6所述的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，所述酸度调节剂选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中的一种或多种；

所述增稠剂选自羧甲基纤维素钠、抗性糊精、海藻酸钠、魔芋粉、黄原胶、结冷胶、果胶、卡拉胶、刺槐豆胶、瓜尔胶中的一种或者多种；

所述甜味剂选自赤藓糖醇、山梨糖醇、木糖醇、低聚果糖、麦芽糖醇、罗汉果甜苷、乳糖醇中的一种或者多种；

所述果蔬粉选择选自草莓粉，蓝莓粉，酸梅粉，菊粉，橙子粉，橘子粉，葡萄粉，山楂粉，柠檬粉中的一种或多种；

所述食品色素选自胡萝卜素，桅子黄、桅子兰，甜菜红、红曲红、可可色素、焦糖色素中的一种或多种。

9.根据权利要求1-8任意一项所述的辅助降血脂固体饮料，其特征在于，所述人参干细胞冻干粉的水分含量≤5％；

优选的，所述人参干细胞冻干粉的制备方法包括：

(1)预处理：将人参干细胞组织粉碎，得人参干细胞糊状物；

10.一种如权利要求1-9任意一项所述的辅助降血脂固体饮料的制备方法，其特征在于，包括：原辅料检测，粉碎或不粉碎，过筛或不过筛，称量，预混，总混，内包装，外包装，成品检测；

优选的，制备过程中的环境湿度保持在30-40％。