CN115298328A - 使用遗传标记、snp和/或indel确定il-10治疗反应性的方法 - Google Patents

使用遗传标记、snp和/或indel确定il-10治疗反应性的方法 Download PDF

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Abstract

本申请涉及发现与受试者对白介素10(IL‑10)或基于IL‑10活性剂治疗的阳性接受性相关的新基因表达谱和/或单核苷酸多态性(SNP)和/或碱基插入或缺失(INDEL)谱。本申请还涉及用IL‑10或基于IL‑10活性剂治疗患者的方法，所述方法通过筛选、检查或确定具有最易接受所述治疗的基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱的患者来实施。

Description

使用遗传标记、SNP和/或INDEL确定IL-10治疗反应性的方法
技术领域
本申请中描述的各种实施方案涉及开发与受试者对白介素10(IL-10)或基于IL-10活性剂治疗的阳性接受性相关的新基因表达谱和单核苷酸多态性(SNP)和/或碱基插入或缺失(INDEL)谱。本申请中描述的其他方面包括，鉴定指示受试者对IL-10或基于IL-10活性剂的反应性的基因谱或表达谱和SNP和/或INDEL谱的方法，以及筛选对IL-10或基于IL-10活性剂治疗接受性更好的受试者、或对IL-10或基于IL-10活性剂治疗反应性或接受性较差的受试者的方法。本申请还描述了筛选患有癌症适应症或患有炎性疾病或病症的受试者并基于某些基因谱或表达谱以及SNP和/或INDEL谱来确定所述受试者是否对IL-10或基于IL-10活性剂治疗具有接受性的方法。最后，本申请描述了治疗癌症患者或炎性疾病患者的方法，包括首先检查、确定或筛选受试者对IL-10或基于IL-10活性剂治疗的反应性或接受性，以及如果患者被确定为对治疗具有反应性或接受性，则向患者施用IL-10或基于IL-10活性剂。
背景技术
IL-10是一种非共价同源二聚体细胞因子，结构与干扰素γ(IFNγ)相似。IL-10受体由两个分子的IL10受体1(IL10R1)和两个分子的IL-10受体2(IL10R2)组成。Moore,2001。IL-10受体在大多数造血细胞表面表达，在单核细胞/巨噬细胞和T细胞上表达最高。
虽然据报道IL-10既是一种免疫抑制性细胞因子(Schreiber，2000)也是一种免疫刺激性细胞因子(Mumm，2011)，但对克罗恩病患者的IL-10治疗的临床评估揭示了反向剂量反应(Fedorak，2000；Schreiber，2000)，而用聚乙二醇化IL-10治疗癌症患者产生了剂量可滴定的有效抗肿瘤反应。Naing，2018。
PEG化IL-10抗肿瘤反应需要内源性CD8+ T细胞和IFNγ。Mumm，2011年。用PEG化IL-10治疗荷瘤动物，导致瘤内CD8+ T细胞增加以及在每细胞基础上IFNγ增加。
由于IL-10的多效性，设计了EBV IL-10同源物的变体，其刺激活化的CD8+ T细胞分泌IFNγ的能力显著降低，同时仍保留其抑制单核细胞/巨噬细胞分泌促炎细胞因子的作用。这是通过评估EBV IL-10同源物的3个差异亲和力变体，称为DV05、DV06和DV07，来完成的。美国专利10,858,412。当与支架双链抗体(diabody)技术融合时，DV06单独表现出最少的CD8+ T细胞刺激作用。同上引文。
临床研究人员最初发现，以每天5微克/千克的剂量施用IL-10治疗克罗恩病患者，导致克罗恩病的症状和炎症缓解约24％。Fedorak，2000，图1a。而每天10和20微克/千克的更高剂量导致了历经缓解的患者数目减少(少于24％)。所有剂量(每天1、5、10和20微克/千克)均使体外脂多糖(LPS)处理的患者外周血的TNFα分泌受到抑制。Tilg，2002，图1b。进一步的调查显示，当用植物血凝素(PHA)刺激时，来自10和20微克/千克IL-10(每天)治疗患者的外周血分泌了更高的新蝶呤(数据未显示)和IFNγ。同上引文，图1c。与说明IL-10能够通过激活CD8+ T细胞以诱导IFNγ来诱导适应性抗肿瘤免疫的报告类似(Mumm，2011；Naing，2018)，这些数据共同表明，在较高浓度下，(10和20微克/千克)IL-10的主要免疫作用是刺激性的，而不是抑制性的。这些数据表明，单核细胞/巨噬细胞和CD8+ T细胞对IL-10的差异反应是这些不同疾病的基础。已经报道，IL-10的抗炎反应依赖于调节单核细胞/巨噬细胞(Malefyt，1991)，而IL-10诱导的抗肿瘤反应已证实需要CD8+ T细胞和IFNγ两者(Mumm，2011)。
使用先前描述的体外单核细胞/巨噬细胞(类似于例如Malefyt，1991中所使用的)和T细胞反应测定试验(Chan，2015)，评估了正常供体单核细胞/巨噬细胞和T细胞对IL-10的反应。在单核细胞/巨噬细胞中，IL-10抑制响应LPS刺激的促炎细胞因子(IL-1β、TNFα和IL-6)分泌。这些数据表明，低至0.1ng/mL的浓度可显著抑制单核细胞/巨噬细胞对促炎刺激的反应。图1。IL-10施用于供体外周血CD8+ T细胞诱导了IFNγ。图2。尽管IL-10在0.1-1ng/mL抑制巨噬细胞/单核细胞反应，但在高于10ng/mL的浓度时刺激CD8+ T细胞分泌更多IFNγ。为确定是否可以根据IL-10反应性来分类/分层患者，本发明人使用了单核细胞/巨噬细胞和T细胞反应测定试验，用于评估IL-10的抑制性和刺激性反应、以及确定是否所有人类单核细胞/巨噬细胞和T细胞都以相同的方式对IL-10作出反应。本发明人令人惊奇地发现，单核细胞/巨噬细胞和CD8+ T细胞对IL-10的反应不同。此外，本发明人发现，对IL-10的反应幅度基于供体或患者的遗传因素的组合，所述遗传因素导致差异表达谱。
优选实施方案概述
本申请描述了基因表达谱和一个或多个单核苷酸多态性(SNP)和/或碱基插入或缺失(INDEL)谱，其可用于鉴定其中的CD8+ T细胞更容易接受IL-10或基于IL-10活性剂治疗的受试者。本申请中还描述了用于鉴定更有可能对IL-10或基于IL-10活性剂重建治疗(reconstitutional treatment)作出反应的受试者或个体的方法，例如那些患有炎性疾病的受试者或个体。在其他方面，本申请涉及在受试者中鉴定基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱的方法，其中所述受试者的单核细胞/巨噬细胞在表型上表现出(响应促炎刺激物)低的IL-10诱导或分泌以及(通过减少TNF-α的诱导或分泌)对IL-10的高反应性。在其他方面，所述基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱与如下表型相关，其中所述受试者的单核细胞/巨噬细胞表现出(响应促炎刺激物)低IL-10产生或分泌以及增加的TNF-α分泌减少表型。最后，本申请描述了用IL-10或基于IL-10活性剂治疗疾病或病症的方法，所述方法包括筛选受试者的某些基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱，其中所述受试者鉴定为IL-10或基于IL-10活性剂的阳性应答者，以及施用治疗有效量的IL-10或基于IL-10活性剂。
因此，本申请的一个实施方案包括鉴定基因表达谱和/或基因分型分析SNP和/或INDEL谱以获得指示治疗反应性的特征谱的方法，其中所述特征谱指示对IL-10或基于IL-10活性剂治疗和/或IL-10与EPO、TGF-β、碱性FGF、FGF、PDGF、IL-4、IL-11或IL-13的组合治疗的反应性，该方法包括将来自患者的细胞样品暴露于LPS或其衍生物或其他Toll样受体激动剂(例如，CpG)以引发IL-10诱导或分泌；和/或测量细胞样品的TNF-α产生水平和IL-10诱导或分泌水平；选择样品表现出如下双重表型的患者：(1)响应IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂刺激，高的TNF-α减少量(或降低的TNF-α产生)；和(2)响应LPS刺激，低的IL-10诱导或分泌；对表现出双重表型的患者的全基因组进行测序，以确定基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱的存在。
本申请的另一个实施方案包括鉴定基因表达谱和/或基因分型分析SNP和/或INDEL谱以获得指示T细胞对治疗的反应性的特征谱的方法，其中所述治疗为使用IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂、或使用IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂与基于IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IFN-α的药物的组合进行的治疗，该方法包括使来自患者的细胞样品暴露于一定浓度范围的上述药物和可溶性抗CD3一段时间，其中所述浓度范围和暴露时间足以引起IFNγ分泌诱导。与响应IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂而从CD8+ T细胞诱导产生高IFN-γ的表型相关的患者样品，将进行基因谱分析以获得基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱。与响应IL-10而从CD8+ T细胞诱导产生高IFN-γ相关的基因表达谱和SNP和/或INDEL谱，将用于选择可接受IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂和/或组合疗法治疗的患者。
本申请的另一个实施方案包括确定受试者是否可能或不太可能对IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂治疗产生反应，其包括：针对指示TNF-α产生减少和低IL-10诱导或分泌的基因表达谱和SNP和/或INDEL谱，测序来自患者的核苷酸，其中减少的TNF-α产生是对基于IL-10的刺激的响应，且低IL-10诱导或分泌是对促炎刺激的响应。
本申请的其他实施方案包括筛选受试者是否存在基因表达谱和SNP和/或INDEL谱，以确定受试者是否是接受IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂治疗的候选者。所述治疗旨在治疗炎性疾病，例如但不限于炎性肠病、克罗恩病或溃疡性结肠炎。其他治疗包括其中需要减少单核细胞/巨噬细胞抑制或刺激的任何疾病或病症。
在另一个实施方案中，本申请涉及对SNP或INDEL进行基因分型分析以获得指示患者对IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂治疗的接受性的特征谱的方法，所述方法包括：使获自患者的活化CD8+ T细胞接触一定量的IL-10或基于IL-10活性剂，以诱导IFN-γ分泌；测量IFN-γ分泌水平；选择表现出CD8+ T细胞有高和/或中等IFN-γ分泌表型的患者样品；并就SNP和/或INDEL谱的存在，对表现出该表型的患者进行全基因组测序。
本申请的一个实施方案涉及与患者、优选炎性疾病患者、对IL-10的反应性相关的特定遗传标记。在其他实施方案中，本申请涉及特定表达谱和/或SNP和/或INDEL谱，其可用于鉴定选择对IL-10或基于IL-10活性剂治疗更具有反应性的患者。
在又一个实施方案中，本申请涉及治疗患有可以通过IL-10或IL-10活性剂缓解的疾病或病症的患者的方法，该方法包括：针对与IL-10或基于IL-10的治疗反应性相关的SNP/INDEL谱，对获自患病患者的样品进行基因谱分析。在另一个实施方案中，治疗方法包括：选择与如下相关的表达谱和/或SNP和/或INDEL谱：(1)响应IL-10、IL-10衍生物或IL-10活性剂刺激，高的TNF-α减少量，以及(2)响应LPS刺激，低的IL-10诱导；选择具有所述表达谱和/或SNP和/或INDEL谱的患者；和向所述患者施用治疗有效量的IL-10或其衍生物、IL-10双链抗体(diabody)或IL-10模拟物。
在又一个实施方案中，本申请涉及一种治疗炎性疾病的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的IL-10、IL-10衍生物、IL-10双链抗体、IL-10微型抗体(minibody)或IL-10活性剂，其中所述患者具有与响应促炎刺激的低IL-10产生以及高IL-10反应性相关的表达谱和/或SNP和/或INDEL谱。在一个优选的实施方案中，炎性疾病或病症是炎性肠病(IBD)、克罗恩病和/或溃疡性结肠炎。
在又一个实施方案中，本申请涉及治疗癌症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的IL-10或基于IL-10活性剂，其中所述患者具有基于表1中提供的基因和蛋白质表达谱的SNP/INDEL谱。
在又一个实施方案中，本申请涉及确定受试者是否可能或不太可能对IL-10或基于IL-10活性剂治疗作出反应的方法，所述方法包括：针对指示CD8+ T细胞有高和/或中等和/或低IFN-γ分泌的SNP或INDEL谱，对患者细胞样品进行测序。在一个优选的方面，与CD8+ T细胞的高和/或中等IFN-γ分泌(即高和/或中等CD8+ T细胞反应)相关的特征谱，指示癌症的成功治疗。另一方面，与CD8+ T细胞的低和/或中等IFN-γ分泌(即，低和/或中等CD8+ T细胞反应)相关的特征谱，指示自身免疫性疾病或病症的成功治疗。
附图简述
图1显示，在单核细胞/巨噬细胞上施加不同剂量(0.1、1、10和100ng/ml)IL-10并测量促炎细胞因子的分泌水平的结果。
图2显示，在CD8+ T细胞上施加不同剂量(0.1、1、10和100ng/ml)IL-10并测量IFN-γ的分泌水平的结果。
图3示意性显示各种IL-10变体，例如在EBV IL-10中产生的变体。图3A(DV05)是在氨基酸31位包含单点突变(V31L)的IL-10变体。图3B(DV06)是在氨基酸75位包含单点突变(A75I)的IL-10变体。图3C(DV07)是在氨基酸位置31和75包含两个点突变(V31L和A75I)的IL-10变体。图3D测定单核细胞/巨噬细胞对各种形式的IL-10的反应，包括野生型人IL-10、EBV-IL-10、DV05、DV06和DV07。所有形式，包括IL-10变体——DV05、DV06、DV07——都抑制响应LPS的TNFα分泌。图3E分析了T细胞对各种形式的IL-10的反应，包括野生型人IL-10、EBV IL-10、DV05、DV06和DV07。所有形式的IL-10均诱导了T细胞分泌IFN-γ。
图4示意性显示各种构型的IL-10融合蛋白/免疫缀合物/双链抗体构建体。图4(a)-(c)显示融合蛋白复合物(即双链抗体)，其中每个融合蛋白包含从两种不同抗体获得的VH和VL区或从单一抗体获得的VH/VL对(其中，在所述VH/VL对中嫁接了来自不同抗体的CDR区，由此使得该双链抗体能够结合与该VH/VL相关的原始CDR区域所结合的蛋白不同的蛋白质)，且其中所述VH和VL区或VH/VL对通过羧基末端接头或氨基末端接头连接到IL-10单体(也可以替代为IL-10变体分子)，所述IL-10单体具有(a)单突变——例如，氨基酸位置31——影响IL-10受体结合；(b)单突变——例如氨基酸位置75——影响IL-10受体结合；(c)双突变——例如氨基酸位置31和75——影响IL-10受体结合。图4(d)-(f)显示融合蛋白复合物(即微型抗体)，其中每个融合蛋白包含从一种抗体获得的单个VH或VL区，其通过羧基末端接头或氨基末端接头连接到IL-10单体(也可以替代为IL-10变体分子)，所述IL-10单体具有(d)单突变——例如，氨基酸位置31——影响IL-10受体结合；(e)单突变——例如，氨基酸位置75——影响IL-10受体结合；和(f)双突变——例如，氨基酸位置31和75——影响IL-10受体结合。
图5示意性显示各种构型的IL-10融合蛋白/免疫缀合物/双链抗体构建体。图5(a)-(c)显示单个融合蛋白(即微型抗体)，其中两个IL-10单体(也可以用IL-10变体分子替代)分别通过羧基末端接头或氨基末端接头与来自同一抗体的VH或VL连接，并且所述VH和VL连接在一起，其中CDR区域已经嫁接了来自不同抗体的CDR，以改变原始CDR对目的组织表达的蛋白质的结合能力。IL-10单体包含(a)单突变——例如氨基酸位置31——影响IL-10受体结合；(b)单突变——例如氨基酸位置75——影响IL-10受体结合；(c)双突变——例如氨基酸位置31和75——影响IL-10受体结合。图5(d)-(f)显示单个融合蛋白，其中两个IL-10单体(也可以用IL-10变体分子替代)连接在一起，并且每个IL-10单体分别通过羧基末端接头或氨基末端接头进一步连接到获自一种抗体的单个VH或VL区。IL-10单体包含(d)单突变——例如氨基酸位置31——影响IL-10受体结合；(e)单突变——例如氨基酸位置75——影响IL-10受体结合；(f)双突变——例如氨基酸位置31和75——影响IL-10受体结合。
图6(a)显示体外测定试验的结果，所述测定试验测量，与IL-10和病毒EBV-IL-10相比，单核细胞/巨噬细胞响应基于IL-10活性剂(DhDe:DV05,DhDe:DV06,DhDe:DV07)刺激产生的TNF-α水平。
图6(b)显示体外测定试验的结果，所述测定试验测量，与IL-10和病毒EBV-IL-10相比，T细胞响应基于IL-10活性剂(DhDe:DV05、DhDe:DV06、DhDe:DV07)刺激产生的IFN-γ水平。
图7(a)显示来自体外测定试验的结果，所述测定试验测量来自不同供体的单核细胞/巨噬细胞响应LPS表现出的IL-10诱导水平。图7(b)显示体外测定试验，其中测量分离的单核细胞/巨噬细胞响应IL-10表现出的TNF-α产生减少。图7(c)显示在IL-10的低生产者中对TNF-α的抑制。图7(d)显示在IL-10的中等生产者中对TNF-α的抑制。
图8示意性显示，确定单核细胞/巨噬细胞中用于炎性疾病的基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱的筛选过程。
图9显示体外测定试验的结果，所述测定试验测量在克罗恩病患者中由单核细胞/巨噬细胞响应LPS而诱导的IL-10水平、以及在克罗恩病患者中由分离的外周血单核细胞/巨噬细胞响应IL-10而减少的TNF-α分泌。
图10A和10B显示体外测定试验的结果，其中在(图10A)130个供体单核细胞/巨噬细胞样品中测定细胞对IL-10的反应，其中测量响应IL-10由单核细胞/巨噬细胞分泌的TNF-α水平；和在(图10B)129个供体CD8+ T细胞样品中测量细胞对IL-10的反应，其中测量响应IL-10的IFN-γ水平。
图11显示，在三个供体(供体240、307和50720)中重复评估单核细胞/巨噬细胞对IL-10的反应。
图12显示，在三个供体(供体240、307和50720)中重复评估IL-10的CD8+ T细胞刺激性反应。
图13显示基因表达谱分析的结果，表明在低、中和高反应者中CD8+ T细胞中表达的基因簇。
图14示意性显示，确定CD8+ T细胞中可用于肿瘤学的基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱的筛选过程。
图15显示结果，表明IL-10和基于IL-10活性剂能够在包含单核细胞/巨噬细胞的大量培养物(bulk culture)中抑制(LPS的)促炎刺激。
图16显示结果，表明在没有纯化的情况下，抗CD3在刺激CD8+ T细胞方面是无效的，这表明必须纯化CD8+ T细胞来评估对IL-10或基于IL-10活性剂的反应。
发明详述
应当理解，本发明的产品(例如基因表达谱、遗传标记或SNP和/或INDEL序列和谱)、和用于确定、基因分型和鉴定的方法以及治疗方法，不限于本文描述的特定方法、程序、测定、技术、细胞类型和试剂。用于描述本申请中的具体实施方案的术语不应被解释为限制本申请的范围，本发明的范围由所附权利要求阐述。本申请中引用的任何出版物、专利和公开的专利申请均通过引用而整体并入本文。
除非另有说明，本文所述的实施方案采用本领域技术人员熟知的分子生物学、生物化学、药理学、化学和免疫学的常规方法和技术。许多用于设计和制造IL-10变体，包括但不限于人、CMV和/或EBV形式的IL-10的通用技术，以及用于测试IL-10变体的测定法，都是众所周知的方法，在本领域中很容易获得并有详细说明。参见例如SAMBROOK等人，MOLECULAR CLONING:A LABORATORY MANUAL(第二版,1989)；酶学方法(S.COLOWICK和N.KAPLAN编辑，ACADEMIC PRESS,INC.)；实验免疫学手册，卷I-IV(D.M.WEIR和C.C.BLACKWELL编辑，BLACKWELL SCIENTIFIC PUBLICATIONS)；A.L.LEHNINGER，生物化学(WORTH PUBLISHERS,INC.,当前版本)；还参见美国专利10,858,412，用于设计包含单体IL-10和/或IL-10变体及其衍生物的IL-10融合蛋白。基于N-末端醛的聚乙二醇化化学在本领域中也是众所周知的。
在本申请之前，并不清楚为什么只有一小部分克罗恩病患者对IL-10重建治疗有反应。在2000年的一项研究中，重组人IL-10(5微克/千克)给药在患有活动性克罗恩病的受试者中诱导了大约25％的缓解。FEDORAK,2000。另一项研究发现，仅在群体的一部分个体中，重组人IL-10降低了单核细胞/巨噬细胞的TNF-α分泌水平，并诱导了T细胞产生IFN-γ，尤其是在较高的IL-10剂量下。TILG，2002。本申请的发明人将这些患者中的IL-10反应归因于遗传倾向，其中主动缓解基于患者拥有某些特定的基因表达谱和/或SNP和/或INDEL序列。
类似地，在2016年至2018年的一项研究中，也不清楚为什么大约25％的癌症患者对IL-10治疗有明显减小肿瘤的反应。NAING A.，2018；NAING A.，2016。本申请的发明人将这些患者的IL-10反应归因于遗传倾向，其中主动缓解是基于患者拥有某些特定的基因表达谱和/或SNP和/或INDEL序列。
因此，本发明人出乎意料地发现，筛选具有正确表型性状的个体，可以优化某些炎性疾病或病症，例如克罗恩病、炎性肠病(IBD)或溃疡性结肠炎的治疗、和/或癌症或肿瘤患者的治疗，例如，对IL-10具有增加的反应率的低IL-10生产者将是最理想的炎性患者治疗亚群。
类似地，本发明人意外地发现，筛选具有正确表型性状的个体，可以优化某些肿瘤疾病的治疗，例如响应IL-10在CD8+ T细胞中具有增加的IFN-γ产生的个体将是最理想的肿瘤患者治疗亚群。
因此，本申请涉及与治疗的反应可能性相关的基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱，其中所述治疗为IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂治疗、或包括IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂与第二细胞因子的组合治疗。本申请的其他方面包括，在健康受试者和患病受试者中确定或测定基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱并比较每个谱以确定导致受试者最易接受如下治疗的最佳谱的方法，所述治疗为IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂治疗、或IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂与第二细胞因子的组合治疗。本发明的一个方面还包括，治疗已被鉴定为具有如下基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱的患病受试者的方法，其中所述基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱最能指示对IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂的阳性反应性，所述方法包括施用重建IL-10、IL-10衍生物或基于IL-10活性剂。
如本文在描述各种实施方案中使用的，除非另有明确规定，单数形式“a”、“an”和“the”包括复数指代。
术语“约”是指，与所示数字或数字范围在0.0001-25％之间的偏差。在一个实施方案中，术语“约”是指，与所示数字或数字范围在1-10％之间的偏差。在一个实施方案中，术语“约”是指，与所示数字或数字范围的偏差不超过25％。在一个更具体的实施方案中，在与野生型序列相比的核苷酸序列同源性或氨基酸序列同源性上，术语“约”是指1-25％的差异。
“蛋白质”、“多肽”或“肽”可互换使用，指由基因表达的产物。
“重组蛋白质”是通过重组DNA技术产生的多肽，其中编码蛋白质的DNA被插入合适的表达载体，然后用于转染、感染或转导宿主细胞以产生该异源蛋白质。
术语“基因型”是指整个细胞或某个基因的具体等位基因组成，而术语“表型”是指具体基因型的可检测到的外在表现。
“多态性”是指共存基因或其部分的一种以上形式。存在至少两种不同形式或两种不同核苷酸序列的基因部分，被称为“基因的多态性区域”。多态性区域可以是单核苷酸，其在不同等位基因中不同。
术语“白介素-10”或“IL-10”是指包含非共价连接以形成同型二聚体的两个亚基的蛋白质。如本文所用，除非另有说明，否则“白介素-10”和“IL-10”可以指人IL-10(“hIL-10”；Genbank登录号NP_000563；或美国专利号6,217,857)蛋白(SEQ ID No:1)或核酸(SEQID No:2)；小鼠IL-10(“mIL-10”；Genbank登录号：M37897；或美国专利号6,217,857)蛋白(SEQ ID No:7)或核酸(SEQ ID No:8)；或病毒IL-10(“vIL-10”)。病毒IL-10同源物可源自EBV或CMV(分别为Genbank登录号NC_007605和DQ367962)。术语EBV-IL10是指IL-10蛋白(SEQ ID No:3)或核酸(SEQ ID No:4)的EBV同源物。术语CMV-IL10是指IL-10蛋白(SEQ IDNo:5)或核酸(SEQ ID No:6)的CMV同源物。
术语“野生型”、“wt”和“天然”在本文中可互换使用，是指，在具体的目的IL-10的来源物种中常见于自然界中的该蛋白质(例如IL-10或EBV-IL10)的序列。例如，术语“野生型”或“天然”EBV-IL10将因此对应于自然界中最常见的氨基酸序列。
术语“衍生”、“源自”、“衍生自”或“来源自”在本文中用于指示分子的原始来源，例如病毒形式的IL-10分子，但这并不意味着对制备、制造、生产或产生该分子的方法构成限制。所述方法将包括，例如但不限于化学或重组方式。
术语“衍生物”旨在包括，对目的参照分子或其类似物的任何合适的修饰，例如硫酸化、乙酰化、糖基化、磷酸化、聚合物缀合、HES化或外源部分的其他添加，只要参照分子或变体的所需生物活性(例如，抗炎作用和/或无T细胞刺激作用)被保留即可。
术语“变体”、“类似物”和“突变蛋白”是指参照分子的生物活性衍生物，其保留期望的活性，例如抗炎活性。一般而言，涉及多肽的术语“变体”、“突变体”、“类似物”和“突变蛋白”是指这样的一种或多种化合物，其相对于天然分子而言，具有引入了一个或多个氨基酸添加、取代(本质上保守的取代)和/或缺失的天然多肽序列和结构。
“变体”可以包括不破坏参照分子的生物活性的修饰(例如，添加、取代和/或缺失)。如下定义，这些变体可以与参照分子“同源”。通常，此类似物的氨基酸序列将与参照序列具有高度的序列同源性，例如，当两个序列比对时，超过50％、通常超过60％-70％、甚至更特别是80％-85％或更多、例如至少90％-95％或更多的氨基酸序列同源性。常常，类似物包括相同数量的氨基酸，但包括取代。变体将保留与天然分子相比增强、减弱或基本相同的生物活性。具体而言，可与术语“工程化”IL-10分子或IL-10变体分子或IL-10变体互换的术语“变体”IL-10分子是指这样的IL-10分子或蛋白质，其包括以下之一或两者的修饰：对(一个或多个)IL-10受体结合结构域的修饰、和/或对负责在IL-10分子或蛋白质中形成结构域间角度的区域的修饰。
“IL-10活性剂”或“基于IL-10活性剂”旨在作为一个集合名词，用于描述不同于野生型IL-10的分子。IL-10活性剂将保留全功能IL-10二聚体的某些生物学方面。因此，IL-10活性剂包括任何非天然形式的IL-10，包括：包含IL-10的部分、区段、片段和/或变体的分子。IL-10活性剂还包括工程化融合蛋白或嵌合蛋白，其中天然单体IL-10或变体形式IL-10(包括EB病毒形式)与抗体片段缀合，如美国专利10,858,412中所描述。
“类似物”可以包括本质上保守的取代。例如，保守取代可包括同类中的取代，例如但不限于(1)天冬氨酸和谷氨酸之间的酸性取代；(2)赖氨酸、精氨酸或组氨酸中任一种之间的碱性取代；(3)丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸或色氨酸中任一种之间的非极性取代；和(4)甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸中任一种之间的不带电荷的极性取代。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时被归类为芳香族氨基酸。也可以分别用异亮氨酸或缬氨酸替换亮氨酸、用谷氨酸替换天冬氨酸、用丝氨酸替换苏氨酸、或用结构上相关的氨基酸进行氨基酸替换的类似保守替换，只要期望的特定生物活性保持即可。例如，感兴趣的多肽可以包括多达约1-10个保守或非保守氨基酸取代，或甚至多达约15-25个保守或非保守氨基酸取代，或包括1-50之间的任何整数的保守或非保守氨基酸取代，条件是所述分子的期望功能保持完整。本领域技术人员可以容易地确定感兴趣的分子中可以容忍变化的区域，这是本领域熟知的。
术语“同源性”、“同源”或“基本上同源”是指至少两个多核苷酸序列或至少两个多肽序列之间的百分比同一性。当序列在定义的分子长度上表现出至少约50％、优选至少约75％、更优选至少约80％-85％、优选至少约90％、最优选至少约95％-98％序列同一性时，所述序列彼此同源。
术语“序列同一性”是指逐个核苷酸或逐个氨基酸的精确对应。百分比同一性可以使用多种方法确定，包括但不限于，通过比对序列来直接比较两个分子(参照序列和与参照序列具有未知百分比同一性的序列)之间的序列信息、计算两个比对序列之间的匹配确切数量、除以参照序列的长度，然后将结果乘以100。可用易于获得的计算机程序帮助识别百分比同一性。
术语“片段”旨在包括具有全长氨基酸或多核苷酸序列和/或结构的分子的一部分。多肽的片段可以包括例如天然多肽的C端缺失、N端缺失和/或内部缺失。特定蛋白质的活性或功能片段通常包括全长分子的至少约5-10个连续氨基酸残基，优选全长分子的至少约15-25个连续氨基酸残基，最优选地全长分子的至少约20-50个或更多个连续氨基酸残基，或5个氨基酸到全长序列之间的任何整数的连续氨基酸残基，条件是所讨论的片段保留生物活性，例如抗炎活性。
术语“基本上纯化的”通常是指物质的分离，使得该物质占其所在样品的主要百分比。基本纯化的组分占样品的50％，优选80％-85％，更优选90-95％。同样，当涉及多肽或多核苷酸时，术语“分离的”是指，所述分子与在自然界中该分子所在的整个生物体分开和分离，或存在于基本上没有相同类型的其它生物大分子存在的情况下。
术语“受试者”、“个体”或“患者”在本文中可互换使用并且是指脊椎动物，优选哺乳动物。哺乳动物包括但不限于鼠类、啮齿动物、猿猴、人、农场动物、运动动物和某些宠物。
术语“给药”或“施用”包括允许本发明的活性成分发挥其预期功能的给药途径。
“治疗有效量”，例如涉及施用本文所述的EBV-IL-10变体时，是指足以促进某些生物学活性的EBV-IL10变体的量。这些可包括，例如，抑制髓系细胞功能、增强Kupffer细胞活性、和/或对CD8+ T细胞缺乏任何影响或增强CD8+ T细胞活性、以及阻断肥大细胞的Fc受体上调或防止脱粒。因此，“有效量”将改善或预防医疗状况的症状或体征。有效量还意指足以允许或促进诊断的量。
术语“治疗”是指减少疾病或病症影响的方法。治疗也可以指减少疾病或病症本身的根本原因而不仅仅是症状的方法。治疗可以是从天然水平的任何降低，并且可以是但不限于完全消融疾病、病症、或疾病或病症的症状。
IL-10或基于IL-10活性剂(或其衍生物和变体)的反应性基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱、或指示IL-10(或IL-10活性剂)反应性的表达谱和/或遗传标记和/或SNP和/或INDEL谱，被定义为在如下个体的基因组中发现的一种或多种表达蛋白质和/或遗传标记和/或SNP和/或INDEL序列的情况，所述个体更有可能对IL-10或IL-10活性剂治疗有反应。
“促炎刺激”意指诱导炎症细胞如巨噬细胞的促炎反应的物质或情况。促炎反应的特征在于一种或多种促炎分子，例如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-12、IL-23的分泌。促炎刺激物可以包括物质诸如细菌或其组分，包括细菌细胞壁，诸如脂多糖(LPS)。通过促炎刺激激活炎性细胞，例如单核细胞/巨噬细胞，产生受刺激的细胞。
术语“双特异性分子”旨在包括具有两种不同结合特异性的任何物质，例如蛋白质、肽、或蛋白质或肽复合物。术语“多特异性分子”或“杂特异性分子”旨在包括具有多于两种不同结合特异性的任何物质，例如蛋白质、肽、或蛋白质或肽复合物。
术语“反应”意味着临床或非临床的任何类型的改善或正反应，例如但不限于，疾病或病症例如炎性疾病的可测量的减少或治疗、肿瘤大小的减小、或疾病迹象或疾病进展的减少、完全反应、部分反应、疾病稳定、无进展生存期增加或延长、总生存期增加或延长、或毒性降低。
术语“可能反应”、“增加的反应可能性”、“更高的可能性”或“反应可能性增加”是指，就特定标志物、蛋白质、细胞因子等的可量化测量值而言，与没有任何可测量的改善或变化的类似情况的患者或受试者相比，患者或受试者更有可能表现出至少一个可测量的改善或变化。
表述单核细胞/巨噬细胞响应促炎刺激的“高”肿瘤坏死因子-α(TNF-α)减少或抑制或反应或反应性，是指由单核细胞/巨噬细胞分泌的TNF-α减少约10至15％(优选12％)。表述单核细胞/巨噬细胞响应促炎刺激的“中等”或“中”TNF-α减少或抑制或反应或反应性，是指由单核细胞/巨噬细胞分泌的TNF-α减少约20％至30％(优选26％)。表述单核细胞/巨噬细胞响应促炎刺激的“低”TNF-α减少或抑制或反应或反应性，是指由单核细胞/巨噬细胞分泌的TNF-α减少约40％至50％(优选44％)。
表述单核细胞/巨噬细胞响应促炎刺激的“高”IL-10诱导或产生或分泌是指，在1-100ng/ml促炎刺激物(例如LPS)下，如通过标准ELISA测量的，约1550至3000皮克(pg)/ml(优选1658至2802pg/ml)。表述单核细胞/巨噬细胞响应促炎刺激的“中等”或“中”IL-10诱导或产生或分泌是指，在1-100ng/ml促炎刺激物(例如LPS)下，如通过标准ELISA测量的，约630至1500pg/ml(优选630至1242pg/ml)。表述单核细胞/巨噬细胞响应促炎刺激的“低”IL-10诱导或产生或分泌是指，在1-100ng/ml促炎刺激物(例如LPS)下，如通过标准ELISA测量的，约300至615pg/ml(优选318至615pg/ml)。
表述CD8+ T细胞的“高”干扰素-γ(IFN-γ)水平或分泌或诱导或反应是指，在1-100ng/ml IL-10、基于IL-10活性剂或其衍生物或变体刺激下，如通过标准IFN-γELISA测量的，约大于或等于850pg/ml(优选852至4277pg/ml)IFN-γ水平。表述CD8+ T细胞的“中等”或“中”IFN-γ水平或分泌或诱导或反应是指，在1-100ng/ml IL-10、基于IL-10活性剂或其衍生物或变体刺激下，如通过标准IFN-γELISA测量的，约大于或等于350-849pg/ml(优选368-842pg/ml)IFN-γ水平。表述CD8+ T细胞的“低”IFN-γ水平或分泌或诱导或反应是指，在1-100ng/ml IL-10、基于IL-10活性剂或其衍生物或变体刺激下，如通过标准IFN-γELISA测量的，约大于或等于0-349pg/ml(优选0-375pg/ml)IFN-γ水平。
如上所述，本发明人发现，某些基因表达谱和/或SNP和/或INDEL与更高的IL-10或基于IL-10活性剂治疗反应可能性相关。所述基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱与如下个体群体相关，所述个体在表型上是IL-10的较低生产者，但仍具有对来自IL-10的抑制或刺激作出反应的能力。这包括在表型上具有如下单核细胞/巨噬细胞的个体，所述单核细胞/巨噬细胞具有：(1)低IL-10产量和(2)抑制TNF-α的高能力(在受到促炎刺激物刺激下)；或在表型上具有如下CD8+ T细胞的个体，所述CD8+ T细胞当受到IL-10(或基于IL-10活性剂)刺激时诱导高水平的IFN-γ。因此，本申请的一个实施方案包括一种用于选择或筛选更易接受IL-10或基于IL-10活性剂治疗的患者的方法，包括检查与更高的IL-10或基于IL-10活性剂反应可能性相关的基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱。在另一个实施方案中，本申请涉及包含可用于确定所述基因表达谱和/或遗传SNP和/或INDEL谱存在的引物和探针的试剂盒。
为了确定与增加的IL-10或基于IL-10活性剂反应可能性相关的必需基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱，本发明人设计了一种体外模型系统来测量IL-10反应性。在该模型系统中评估遗传成分方法的需要一个两层次的过程：(1)从细胞测定试验中收集响应数据，然后(2)对细胞测定试验中表现出的某些表型性状进行遗传分析。
细胞测定试验：炎性疾病反应性
用于炎性疾病的细胞测定试验涉及，从健康和患病的供体中分离单核细胞/巨噬细胞，以确定炎性疾病中的反应者特征谱。刺激来自供体的单核细胞/巨噬细胞，并检测(1)IL-10的产生或分泌和(2)通过TNF-α水平量度的对IL-10的反应性。对于IL-10的产生、分泌或诱导，向供体单核细胞/巨噬细胞施用促炎刺激物，例如LPS，并测量产生、分泌或诱导的IL-10的量。通常，响应促炎刺激物例如LPS，单核细胞/巨噬细胞被诱导产生IL-10。用促炎刺激物(例如LPS)刺激单核细胞/巨噬细胞，导致了三个不同的供体群体，即IL-10的低、中和高生产者或分泌者。同样，用促炎细胞因子刺激，如通过TNF-α水平测量的，也表现出不同的IL-10抑制性反应，并导致了TNF-α分泌的高、中和低程度的减少(即，以TNF-α分泌水平衡量的高、中、和低IL-10反应者)。可以对这些不同的表型性状(即高、中、低的IL-10产生或分泌，和/或高、中、低的TNF-β分泌减少)进行分类和分组，用于后续遗传分析。
在该测定试验的一个单独实施方案中，将大量外周血单核细胞(PBMC)(即，未纯化各种细胞)暴露于IL-10或基于IL-10活性剂，然后将LPS添加到培养物中12-24小时。对上清液中发现的TNF-α水平进行量化。令人惊讶地发现，在通过促炎剂刺激以评估TNF-α量前，不需要从大量PBMC培养物中纯化单核细胞/巨噬细胞。图15。
细胞测定试验：肿瘤反应
用于肿瘤学的细胞测定试验涉及，从健康和患病的供体中分离CD8+ T细胞，并评估细胞对IL-10或基于IL-10活性剂刺激作出反应的能力。通常，向CD8+ T细胞施用IL-10或基于IL-10活性剂会刺激CD8+ T细胞产生、分泌或诱导IFN-γ分泌。该细胞测定试验包括从PBMC中分离CD8+ T细胞。来自供体的CD8+ T细胞用抗CD3/抗CD28激活/刺激，然后暴露于IL-10或基于IL-10活性剂。暴露于IL-10或基于IL-10活性剂后，洗涤细胞并暴露于可溶性抗CD3共4小时，然后对上清液中的IFN-γ进行定量。
在一个单独实施方案中，将大量PBMC暴露于IL-10或基于IL-10活性剂。在暴露于IL-10或基于IL-10活性剂后，分离CD8+ T细胞，并暴露于可溶性抗CD3共4小时，然后对上清液中的IFN-γ进行定量。令人惊奇地发现，在该模型细胞系统中评估CD8+ T细胞对IL-10或基于IL-10活性剂的反应性时，需要在抗CD3/抗CD28激活前进行细胞分离。
还令人惊讶地发现，用IL-10或基于IL-10活性剂刺激CD8+ T细胞导致了三种不同的供体群体，即，对IL-10的高、中和低反应者。可以对这些不同的表型性状(即对IL-10的高、中、低反应者)进行分选和分组以进行后续遗传分析。
某些表型反应的遗传分析
为了确定与单核细胞/巨噬细胞和CD8+ T细胞中不同表型反应相关的潜在遗传成分，检查(1)高、中和低群体(巨噬细胞/单核细胞中响应促炎刺激而展示的IL-10产生或分泌和通过TNF-α分泌展示的对IL-10或基于IL-10活性剂反应，以及CD8+ T细胞中通过IFN-γ分泌或诱导展示的对IL-10或基于IL-10活性剂的反应性)之间基因表达标签(geneexpression signatures)的差异；和(2)基因中潜在的或背景的基因突变。从基因表达标签和潜在背景基因突变数据中收集的数据生成了一个混合数据集，该数据集允许识别在单核细胞/巨噬细胞中以及在CD8+ T细胞中与高、中、低群体中的每一个相关的共同通路。此外，对具有不同表型性状(即，单核细胞/巨噬细胞中响应促炎刺激的高、中、低TNF-α分泌者和IL-10产生/分泌者，以及CD8+ T细胞中IL-10或基于IL-10活性剂反应者)的各种患者样品进行汇总分析，建立标准基因表达标签和突变频率谱，通过与之进行比较，确定样品是否属于高、中和低群体。
为了确定基因表达标签的差异，比较单核细胞/巨噬细胞中三种表型反应之间的基因表达标签(即，响应促炎刺激，IL-10产生或分泌的高、中和低群体，以及通过TNF-α分泌展示的对IL-10或基于IL-10活性剂的高、中和低反应性)和/或比较CD8+ T细胞中三种表型反应之间的基因表达标签(即，通过IFN-γ分泌或诱导展示的对IL-10或基于IL-10活性剂的高、中和低反应性)。在高和低、高和中、和/或中和低群体之间具有差异表达的基因(其中差异基因表达为五倍、四倍、三倍或两倍差异)，将被认为是与鉴定、筛选或分类对IL-10或基于IL-10活性剂治疗有反应或无反应的患者相关的基因。优选地，与促炎刺激后单核细胞/巨噬细胞中低IL-10产生或分泌以及TNF-α分泌高度减少(即,对IL-10或基于IL-10活性剂的高反应)相关的基因表达标签，指示患者将对IL-10或基于IL-10活性剂治疗炎症性疾病产生反应。同样优选地，与CD8+ T细胞中通过IFN-γ分泌或诱导展示的对IL-10或基于IL-10活性剂的高反应性相关的基因表达标签，指示患者将对IL-10或基于IL-10活性剂治疗肿瘤产生反应。表3-8提供了分别与如下方面相关的基因表达谱列表：与CD8+T细胞中通过IFN-γ的产生或分泌来度量的IL-10或基于IL-10活性剂高反应者(表3)或IL-10或基于IL-10活性剂低反应者(表4)相关；与单核细胞/巨噬细胞中响应促炎刺激的高IL-10产生或分泌(表5)或低IL-10产生或分泌(表6)相关、或通过TNF-α产生来度量的高IL-10反应性(表7)或低IL-10反应性(表8)相关。
联合基因表达标签数据，进行潜在遗传信息分析，检查单核细胞/巨噬细胞中三种表型反应之间的基因突变频率(即，响应促炎刺激，IL-10产生或分泌的高、中和低群体，以及通过TNF-α分泌展示的对IL-10或基于IL-10活性剂的高、中和低反应性)和/或CD8+ T细胞中三种表型反应之间的基因突变频率(即，通过IFN-γ分泌或诱导展示的对IL-10或基于IL-10活性剂的高、中和低反应性)。对于在高与低、高与中、和/或中与低群体之间具有最大差异突变的基因，检查SNP和/或INDEL谱。在高和低、高和中、和/或中和低群体之间具有五倍、四倍、三倍或两倍差异的突变频率的基因，将被认为是与鉴定、筛选或分类对IL-10或基于IL-10活性剂治疗有反应或无反应的患者相关的基因。表9-10提供了分别与如下相关的SNP和/或INDEL基因突变频率：与CD8+ T细胞中通过IFN-γ的产生或分泌来度量的IL-10或基于IL-10活性剂高反应者(表9)或IL-10或基于IL-10活性剂低反应者(表10)相关；与单核细胞/巨噬细胞中响应促炎刺激的高IL-10产生或分泌(表11)或低IL-10产生或分泌(表12)相关、或通过TNF-α产生来度量的高IL-10反应性(表13)或低IL-10反应性(表14)相关。
最后，将从基因表达标签和突变频率信息(统称为“命中计数”)中获得的数据混合在一起，并参考已知和公开可用的分子通路数据库(例如Reactome Pathway数据库)，以确定差异基因表达标签和具有最高突变频率的基因所参与的共同分子通路。通路中的共性由统计学p值确定。除了基因表达标签，表3-8还提供了分子通路和与分子通路相关的相关基因表达标签。
确定差异基因表达和筛选基因突变频率的方法是常规的，并且可以通过本领域通常已知的任何方式来完成。这可包括差异展示、基因的直接测序、全基因组测序、和/或表征基因表达产物，例如mRNA、肽或蛋白质。
遗传成分可以包括例如基因组DNA、扩增的基因组DNA、cDNA、扩增的cDNA、RNA、扩增的RNA、或本领域技术人员已知的其他遗传成分。分子通路和相应的基因表达标签如下：通过IFN-γ的产生或分泌来衡量，CD8+ T细胞对IL-10或基于IL-10活性剂的高反应者(表3)以及对IL-10或基于IL-10活性剂的低反应者(表4)；单核细胞/巨噬细胞中响应促炎刺激的高IL-10产生或分泌(表5)或低IL-10产生或分泌(表6)，以及通过TNF-α产生来衡量的高IL-10反应性(表7)或低IL-10反应性(表8)。
针对高、中和低群体中的每一个的基因表达标签、基因突变频率和混合共同分子通路数据的组合，可以用于确定一个标准，根据该标准对患者进行分类以确定对IL-10或基于IL-10活性剂治疗的反应性。
基因突变频率可以是在核苷酸水平上与天然或野生型或普遍接受的参照序列、多核苷酸序列不同的任何数量的差异。优选地，基因突变是SNP和/或INDEL，但基因突变还可以包括简单序列重复(SSR)、限制性片段长度多态性(RFLP)和扩增片段长度多态性(AFLP)。可以通过mRNA或qPCR或mRNA谱的命中计数分析，确定差异基因表达水平。遗传标记可包括与插入、缺失、重复、重复元件、点突变、重组事件、或转座元件的存在和序列相关的变异性。分子标记可以来源于基因组核酸或表达的核酸(例如，EST)，也可以指用作(能够通过使用基于PCR的方法扩增序列片段的)引物对或探针的核酸。
使用组合的基因表达标签和/或SNP和/或INDEL遗传频率数据，可以确定基因谱，指示更有可能对IL-10或基于IL-10活性剂作出反应的受试者。对于炎性疾病的治疗，与IL-10的低产生或分泌以及具有最显著减少的TNF-α分泌的IL-10或基于IL-10活性剂高反应性相关的基因表达标签和遗传频率数据，将是确定患者最易接受IL-10或基于IL-10活性剂抗炎治疗的标准。对于肿瘤的治疗，与具有最显著的IFN-γ分泌产生的IL-10或基于IL-10活性剂高反应性相关的基因表达标签和遗传频率数据，将是确定患者最易接受IL-10或基于IL-10活性剂肿瘤治疗的标准。
在一个实施方案中，本申请涉及确定患有炎性疾病的患者将对IL-10或基于IL-10活性剂作出反应的可能性的方法，包括从受试者中分离遗传成分，和就与IL-10或基于IL-10活性剂治疗的表型反应相关的基因表达谱(例如，评估mRNA水平)和/或SNP和/或INDEL谱或标签的存在，分析所述遗传成分。在一个优选的实施方案中，基因表达数据涉及表3-8中发现的分子通路和基因表达谱数据。
在另一个实施方案中，本申请涉及筛选患者对IL-10或基于IL-10活性剂治疗的反应性的方法，该方法包括：分析来自患者的遗传成分以确定是否存在与表型性状相关的SNP和/或INDEL谱，所述表型性状是指，炎性细胞具有低的IL-10诱导以及高的IL-10反应性(基于单核细胞/巨噬细胞中增加的TNF-α减少程度)或CD8+ T细胞中由暴露IL-10或基于IL-10活性剂导致的IFN-γ分泌显著增加。
抗炎细胞可以包括与炎性反应相关的任何细胞。这些包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、粒细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、浆细胞和组织细胞。优选地，抗炎细胞是单核细胞/巨噬细胞。
抗癌细胞可以包括与靶向和破坏肿瘤细胞相关的任何细胞。这些包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、CD4+ T细胞、CD8+ T细胞和NK细胞。优选地，抗癌细胞是CD8+T细胞。
在本申请的一个实施方案中，对患有炎性疾病的受试者进行筛选、选择和施用IL-10或基于IL-10活性剂治疗。炎症患者对IL-10治疗的不同反应可以通过特异性选择表现出本文描述的表达谱和/或遗传标记和/或SNP和/或INDEL谱的那些患者来改善。在给予IL-10或基于IL-10活性剂治疗之前，选择经确定对IL-10具有接受性的患者将提高治疗成功的机会。这适用于肿瘤和IBD。因此，当与本文所述的筛选方法结合时，经确定具有与IL-10接受性反应相关的表达谱和/或遗传标记和/或SNP和/或INDEL谱的患者，将被施用IL-10或基于IL-10活性剂。当表达谱和/或遗传标记如本文所述用于选择进行治疗的受试者时，在治疗之前和/或期间测量所述遗传标记或SNP和/或INDEL，并且临床医生使用获得的值评估治疗成功、失败、对治疗产生接受性、无接受性、或继续治疗的概率或可能性。
IL-10、其组合物或制剂可以包括人或病毒形式。在一个方面，IL-10可以是SEQ IDNos：1-8中的任何一个。IL-10可以进一步修饰以包括修饰，例如硫酸化、乙酰化、糖基化、磷酸化、聚合物缀合、HES化，或外源部分的其他添加，只要参照分子或变体的所需生物活性(例如，对于IBD，抗炎作用和/或无T细胞刺激，或对于肿瘤，有效CD8+ T细胞刺激)被保留。IL-10也可以是衍生物或变体，其是指可以在任何位置上与野生型IL-10在序列同一性或同源性上相差1-25％的IL-10氨基酸(或核酸)序列。因此，例如，EBV IL-10变体分子是与野生型EBV IL-10相差一个或多个氨基酸(或编码所述氨基酸的核苷酸序列)添加、替换和/或缺失的分子。因此，在一种形式中，EBV IL-10变体与SEQ ID No.：3的野生型序列的不同之处在于在序列同源性方面具有约1％至25％的差异，这相当于约1-42个氨基酸的差异。
在另一个方面，IL-10是一种功能变体，包括不破坏参照分子的生物活性的修饰(例如，添加、替换和/或缺失)。这些变体可以与如下定义的参照分子“同源”。通常，此类似物的氨基酸序列将与参照序列具有高度的序列同源性，例如，当比对所述两个序列时，超过50％、通常超过60％-70％、甚至更特别是80％-85％或更多，例如至少90％-95％或更多的氨基酸序列同源性。通常，所述类似物将包括相同数量的氨基酸，但包括氨基酸替换。功能变体将保留与天然分子相比增强、减弱或基本相同的生物活性。特别地，可与术语“工程化”IL-10分子或IL-10变体分子或IL-10变体互换的术语“变体”IL-10分子是指，该IL-10分子或蛋白包含对(一个或多个)IL-10受体结合域和/或负责在IL-10分子或蛋白质中形成结构域间角度的区域之一者或两者的修饰。变体IL-10“融合蛋白”或“双链抗体”或“融合物”通常是指，形成包含变体IL-10(单体形式或同源二聚体形式)和至少一种其他蛋白质的融合蛋白(或融合蛋白复合物)。如本文所用，变体IL-10“或其融合蛋白”可以在整个说明书中用于描述这种变体IL-10融合蛋白。
在一个优选的实施方案中，如美国专利10,858,412中所述的，IL-10融合蛋白将包括对融合蛋白的IL-10部分的特定修饰。在一个优选的实施方案中，融合蛋白的IL-10部分将包括在SEQ ID No.：3中具有V31L取代的EBV IL-10。这种修饰已被证明可以降低巨噬细胞反应，并被命名为DV05。(图3A)。在另一个优选的实施方案中，融合蛋白的IL-10部分将包括在SEQ ID No.：3中具有A87I取代的EBV IL-10。这种修饰已被证明可以减少T细胞刺激，并被命名为DV06。(图3B)。
融合蛋白可以是包含IL-10部分、接头或间隔区、和VH和/或VL部分的工程化蛋白。接头或间隔区可以是随机氨基酸序列(例如SSGGGGS(SEQ ID No.：30，或GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID No.：31))、抗体的恒定区、scFv、双链抗体或微型抗体。恒定区可以衍生自，但不限于，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgD或IgE。接头或间隔区可以优选地是恒定重链(CH)区1、CH2或CH3。在一个更优选的实施方案中，间隔区或接头是SEQ ID Nos:30和/或31的随机氨基酸序列。
融合蛋白还可以包括缀合在融合蛋白的N-末端、C-末端或两者处的IL-10或IL-10变体分子的至少一个单体。在另一个实施方案中，包含IL-10或IL-10变体的融合蛋白还可以包括至少一个细胞因子缀合在与IL-10或IL-10变体相对的末端，并且所述细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-15、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-10、IL-10变体分子、IFN-α、EPO、TGF-β、b-FGF、EGF、PDGF、IL-4、IL-11、IL-13或其任何组合。在一些优选的实施方案中，融合蛋白包含缀合在融合蛋白N末端的两个单体形式的IL-10或IL-10变体分子以及缀合在融合蛋白C末端的两个IL-10或IL-10变体分子；融合蛋白包含缀合在融合蛋白的N末端的两个单体形式的IL-10或IL-10变体分子以及缀合在融合蛋白C末端的至少一个IL-2分子(或其他细胞因子/生长因子)；融合蛋白包含缀合在融合蛋白N末端的两个IL-10或IL-10变体分子以及缀合在融合蛋白C末端的至少一个IL-15分子。在另一个实施方案中，融合蛋白的C末端可以是至少两种不同的细胞因子，选自IL-10或变体IL-10以及IL-2、IL-7、IL-15、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-10、IL-10变体分子、IFN-α、EPO、TGF-β、b-FGF、EGF、PDGF、IL-4、IL-11、IL-13、或其任何组合。
在另一个实施方案中，使用scFv、双链抗体、Fab或任何抗体片段作为基础支架，制造融合蛋白，其中在所述支架上缀合IL-10的一个或两个单体、IL-10变体分子的一个或两个单体、IL-2、IL-7、IL-15、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IFN-α、EPO、TGF-β、碱性-FGF、EGF、PDGF、IL-4、IL-11或IL-13或其组合。融合蛋白的scFv、双链抗体、微型抗体、Fab或抗体片段部分可以具有非靶向功能或靶向功能。靶向能力可取决于特定抗原结合方式的存在，例如CDR区域的存在。这些CDR区域来源于针对特定靶蛋白(例如EGFR、VEGFR、FGFR、PDGFR、Her2Neu、GPC3、MAdCAM、VCAM、ICAM)开发的单克隆抗体，可以通过已建立的分子生物学技术移植到作为支架系统的抗埃博拉病毒VH VL中，替换抗埃博拉病毒VH VL中的同源CDR区域(cognate CDR regions)。
在一个特别优选的实施方案中，融合蛋白包含至少一个可变区，其具有可变重链(VH)和/或可变轻链(VL)，与IL-10或IL-10变体分子连接。在这种构型中，融合蛋白包含与抗体的至少一个可变区连接的IL-10单体或变体IL-10单体。一方面，该融合蛋白是线性连续序列，其包含IL-10单体或IL-10单体变体分子，连接到VH、连接到VL、连接到IL-10单体。抗体的可变区可以是可变重(VH)链区、可变轻(VL)链区或两者。第一融合蛋白包含具有线性连续构型的蛋白质序列，其中IL-10单体或变体IL-10单体缀合至可变区(VH或VL或两者)的羧基末端。第二融合蛋白可包含具有线性连续构型的蛋白质序列，其中IL-10单体或变体IL-10单体与可变区(VH或VL或两者)的氨基末端连接。上述第一融合蛋白的代表性例子可以包括以下构型：
a)NH2(Ab1VL)COOH-(接头)-NH2(monoIL10)COOH
上述第二融合蛋白的代表性例子可以包括以下构型：
b)NH2(monoIL10)COOH-(接头)-NH2(Ab1VH)COOH
第一(a)和第二(b)融合蛋白一起以反平行方式形成功能性蛋白质复合物，由此末端连接的IL-10或变体IL-10单体形成功能性同源二聚体，而可变区组合能够形成功能性抗原结合位点(“ABS”)(参见例如图4(a)-(f))。
在一个替代实施方案中，IL-10单体或变体IL-10单体可以与来自相同抗体或来自两种不同抗体的至少两个可变区缀合。在这种构型中，所述至少两个可变区是VH和VL。这种构型的一个例子包括具有线性连续蛋白序列的第一融合蛋白，其中第一抗体的VH区在其羧基末端连接到第二抗体的VL区的氨基末端，随后连接到IL-10单体或IL-10变体分子单体的氨基末端。一个替代构型包括具有线性连续蛋白序列的第二融合蛋白，其中IL-10单体或IL-10变体分子单体在其羧基末端连接到第二抗体的VH区的氨基末端，随后连接至第一抗体的VL区的氨基末端。上述第一融合蛋白的代表性例子可以包括以下构型：
a)NH2(Ab1-VH)COOH--(接头)-NH2(Ab2VL)COOH-(接头)-NH2(monoIL10)COOH
上述第二融合蛋白的代表性例子可以包括以下构型：
b)NH2(monoIL10)COOH-(接头)-NH2(Ab2VH)COOH-(接头)-NH2(Ab1-VL)COOH
第一(a)和第二(b)融合蛋白以反平行方式一起形成功能性蛋白质复合物，由此末端连接的IL-10或变体IL-10单体形成功能性同源二聚体，而可变区组合能够形成ABS(参见例如图4(a)–(c))。
在又一个实施方案中，融合蛋白包含融合在一起的两个IL-10单体或两个变体IL-10单体以及一个或多个VH和VL区。每个单体单独连接到抗体的一个或多个VH区和/或VL区。当在这种融合蛋白构型中使用一个以上VH和/或VL区时，VH和VL区可以来自相同的抗体或来自至少两种不同的抗体。在这种融合蛋白的一个特定构型中，VH或VL区连接到第一单体的氨基末端，然后通过它的羧基末端连接到第二个单体的氨基末端，然后连接到VL或VH的氨基末端。任选地，额外的VH或VL区可以连接到氨基或羧基末端，其中所述VH或VL区可以来自相同的抗体或来自不同的抗体。上述融合蛋白的代表性实例可包括以下构型(参见例如图5(d)–(f))：
NH2(Ab1-VH)COOH--(接头)-NH2(monoIL10)COOH-(接头)-NH2(monoIL10)COOH-(接头)-NH2(Ab1-VL)COOH
上述融合蛋白将能够折叠，以允许IL-10的单体形成同源二聚体和抗体的可变结构域(VH和VL)形成功能性ABS。
在另一个实施方案中，融合蛋白包含位于融合蛋白相对末端的两个IL-10单体或两个变体IL-10单体和至少一个VH和VL区，其中VH和VL区连接在一起.在该构型中，VH和VL区融合在一起并且每个单体单独连接至第一抗体的VL区或VH区。在该构型中，IL-10单体或变体IL-10单体各自单独连接至第一抗体的VH或VL。上述融合蛋白的代表性实例可包括以下构型(参见例如图5(a)-(c))：
a)NH2(monoIL10)COOH-(接头)-NH2(Ab1-VH)COOH-(接头)-NH2(Ab1-VL)COOH-(接头)-NH2(monoIL10)COOH
b)NH2(monoIL10)COOH-(接头)-NH2(Ab1-VL)COOH-(接头)-NH2(Ab1-VH)COOH-(接头)-NH2(monoIL10)COOH
IL-10单体或变体IL-10单体可以通过接头序列与VH或VL序列连接。接头可以是将可变链区(VH或VL)的羧基末端连接到IL-10单体或IL-10变体分子单体的氨基末端的羧基末端接头。或者，接头可以是氨基末端接头，由此IL-10单体或IL-10变体分子单体的羧基末端连接至可变链区(VH或VL)的氨基末端。
因此，在一种形式中，融合蛋白包含与来自至少两种不同抗体的两个可变区连接的单体IL-10分子或变体IL-10分子，其中所述两个可变区被配置为来自第一抗体的VH区连接到来自第二抗体的VL区或来自第一抗体的VL连接到来自第二抗体的VH。根据这种形式的融合蛋白可以包括单体IL-10分子或其变体，所述变体包括增加或降低对IL-10受体的亲和力的至少一个氨基酸取代。影响IL-10受体结合的氨基酸取代可以发生在人、CMV或EBV IL-10中。氨基酸取代可以优选地在EBV IL-10中并且包括在位置31、75或两者处的氨基酸取代。氨基酸取代可包括V31L或A75I取代或两者中的任何一个或多个。除了影响IL-10受体结合亲和力的氨基酸取代之外，IL-10变体还可以包括影响结构域间角度度的修饰。在另一个实施方案中，融合蛋白包含选自以下的构型：(a)第一抗体的VH区在其羧基末端连接到第二抗体的VL区的氨基末端，随后连接到IL-10或其变体单体的羧基末端；或(b)IL-10分子或其变体在其羧基末端连接到第二抗体的VH区的氨基末端，随后连接到第一抗体的VL区的氨基末端。在一个优选的实施方案中，这些融合蛋白构型包括SEQ ID No.：24-28或29的序列。这些融合蛋白序列能够形成复合物，其中IL-10的单体或变体IL-10的单体能够形成同源二聚体。这种复合物可以包括和/或配置为双链抗体复合物。
在另一种形式中，融合蛋白可以形成为包含第一融合蛋白和第二融合蛋白的免疫缀合物，其中该第一融合蛋白在其氨基末端包含第一抗体的重链可变区(VH)，其连接到第二抗体的轻链可变区(VL)，并进一步连接到IL-10单体；该第二融合蛋白在其氨基末端包含IL-10单体，其连接到第二抗体的VH，并进一步连接到第一抗体的VL，其中所述第一和第二抗体的VH和VL缔合成双链抗体且所述IL-10单体形成功能性二聚体IL-10分子。在另一个优选的实施方案中，免疫缀合物复合物包含第一融合蛋白和第二融合蛋白，其中该第一融合蛋白包含在其氨基末端的第一抗体的VH区和通过其羧基末端连接的单体IL-10分子；该第二融合蛋白包含在其氨基末端的IL-10单体和与之连接的第一抗体的VL，其中第一抗体的VH区与第一抗体的VL区缔合，从而允许在每个肽链上的单体IL-10分子形成功能性IL-10二聚体。如上所述，IL-10的单体或变体IL-10的单体可以包括影响IL-10受体结合和/或结构域间角度度的氨基酸修饰。
在另一个优选的实施方案中，免疫缀合物复合物包含第一融合蛋白和第二融合蛋白，其中该第一融合蛋白包含在其氨基末端的第一抗体的VH区和与之连接的单体IL-10分子；第二融合蛋白包含在其氨基末端的IL-10单体和与之连接的第一抗体的VL，其中第一抗体的VH区与第一抗体的VL区缔合，从而允许在每个肽链上的单体IL-10分子形成功能性IL-10二聚体。在又一个实施方案中，免疫缀合物包含在其氨基末端的第一IL-10(或IL-10变体分子)单体，其连接到第一抗体的VH区，连接到第一抗体的VL区，并进一步连接到第二IL-10(或IL-10变体分子)单体，其中所述两个IL-10单体能够结合在一起形成IL-10功能性二聚体。所描述的VH和VL区能够形成特异性靶向抗原(例如，受体、蛋白质、核酸等)的抗原结合位点。因此，有两条链，链1和链2，它们一起形成融合蛋白复合物，由此产生功能性IL-10(或IL-10变体分子)同源二聚体。表2中描述了代表性的融合蛋白链(即，链1和链2)：
Figure BDA0003850656900000211
融合蛋白包括来自至少一种抗体的VH和VL。融合蛋白可包含1-4个可变区。可变区可以来自相同的抗体或来自至少两种不同的抗体。抗体可变链可以从多种抗体(例如，靶向蛋白质、细胞受体和/或肿瘤相关抗原的那些抗体)中获得或衍生。在另一个实施方案中，可变区从靶向与各种疾病(例如癌症)相关的抗原或通常不存在或很少存在于健康受试者的血清中的抗原的抗体获得，例如来自针对EGFR、MadCam、HIV和/或埃博拉病毒的抗体的可变区。因此，在一个实施方案中，可变区从例如抗-EGFR、抗-MadCam、抗-HIV(Chan et al,J.Virol,2018,92(18):e006411-19)或抗埃博拉病毒抗体(美国公布申请2018/0180614，通过引用将其全部并入，尤其是表2、3和4中描述的mAb)获得或衍生。在另一个实施方案中，可变区从能够富集细胞因子例如IL-10在特定靶区域的浓度以使IL-10能够引发其生物学效应的抗体获得或衍生。这种抗体可以包括靶向某些病变区域中过表达或上调的受体或抗原的抗体、或者在某些受影响区域特异性表达的抗原的抗体。例如，可变区可以来自针对如下分子的特异性抗体：表皮生长因子受体(EGFR)；CD52；各种免疫检查点靶点，例如但不限于PD-L1,PD-1,TIM3,BTLA,LAG3或CTLA4；CD20；CD47；GD-2；HER2；GPC3；EpCAM；FAPα；5T4；Trop2；EDB-FN；TGFβTrap；MadCam,β7整联蛋白亚基；α4β7整联蛋白；α4整联蛋白SR-A1；SR-A3；SR-A4；SR-A5；SR-A6；SR-B；dSR-C1；SR-D1；SR-E1；SR-F1；SR-F2；SR-G；SR-H1；SR-H2；SR-I1；和SR-J1等等。IL-10(例如，人、CMV或EBV)或变体IL-10分子(本文所述)的单体可以与可变区(VH或VL)的氨基末端或羧基末端缀合，由此所述IL-10或变体IL-10分子能够彼此二聚化。
融合蛋白或融合蛋白复合物还可以具有抗原靶向功能。融合蛋白或融合蛋白复合物将包含能够结合在一起形成抗原结合位点或ABS的VH和VL区。在一些构型中，IL-10或IL-10变体分子或其单体将共价连接到包含抗原结合位点的末端。这些靶向融合蛋白可以在融合蛋白的一端包含至少一个功能可变区或配对的VH和VL，使得融合蛋白保留靶向抗原的能力以及具有IL-10或IL-10变体分子的功能性同源二聚体(参见图4(a)-(f)和5(a)-(f))。可变区可以通过改变一个或多个氨基酸以降低受试者中的抗原性来进一步修饰(例如，通过添加、扣除或取代)。VH和VL对形成支架，其上可以移植获自多种抗体的CDR区。这样的抗体CDR区包括那些已知和上面描述的抗体的CDR区。例如，来自任何抗体的CDR区可以移植到VH和VL对上，例如SEQ ID No：37、44或45中描述的那些，或能够形成融合蛋白复合物的那些融合蛋白，例如在SEQ ID Nos：46和47；48和49；或50和51中描述的那些。上述VH和VL支架中的CDR区包括以下数量的可用于CDR移植/插入的氨基酸位置(表3)：
Figure BDA0003850656900000221
Figure BDA0003850656900000231
另一方面，上述融合蛋白可以由以下通式之一表示：
1)IL10-L1-X1-L1-X2-L1-IL10 (式I)；
2)(Z)n-X1-L2-Y2-L1-IL10 (式II)；
3)IL10-L1-Y1-L2-X2-(Z)n (式III)；
4)X1-L2-X2-L1-IL10 (式IV)；
5)IL10-L1-X1-L2-X2 (式V)；
6)X1-L1-IL10 (式VI)；和/或
7)IL10-L1-X2 (式VII)
其中
“IL-10”是人Il-10(SEQ ID No:1)；EBV IL-10(SEQ ID No:3),DV05(SEQ ID No:14或18),DV06(SEQ ID No:15或19),或DV07(SEQ ID No:16或20)；
“L1”是接头SEQ ID No:31；
“L2”是接头SEQ ID No:30；
“X1”是从特异性针对以下物质的第一抗体获得的VH区：表皮生长因子受体(EGFR)；CD52；各种免疫检查点靶点，例如但不限于PD-L1,PD-1,TIM3,BTLA,LAG3或CTLA4；CD20；CD47；GD-2；HER2；GPC3；EpCAM；ICAM(ICAM-1,-2,-3,-4,-5),VCAM,FAPα；5T4；Trop2；EDB-FN；TGFβTrap；MadCam,β7整联蛋白亚基；α4β7整联蛋白；α4整联蛋白SR-A1；SR-A3；SR-A4；SR-A5；SR-A6；SR-B；dSR-C1；SR-D1；SR-E1；SR-F1；SR-F2；SR-G；SR-H1；SR-H2；SR-I1；SR-J1；HIV,或埃博拉病毒；
“X2”是从与X1相同的抗体获得的VL区；
“Y1”是从特异性针对以下物质的第二抗体获得的VH区：表皮生长因子受体(EGFR)；CD52；各种免疫检查点靶点，例如但不限于PD-L1,PD-1,TIM3,BTLA,LAG3或CTLA4；CD20；CD47；GD-2；HER2；GPC3；EpCAM；ICAM(ICAM-1,-2,-3,-4,-5),VCAM,FAPα；5T4；Trop2；EDB-FN；TGFβTrap；MadCam,β7整联蛋白亚基；α4β7整联蛋白；α4整联蛋白SR-A1；SR-A3；SR-A4；SR-A5；SR-A6；SR-B；dSR-C1；SR-D1；SR-E1；SR-F1；SR-F2；SR-G；SR-H1；SR-H2；SR-I1；SR-J1；HIV,或埃博拉病毒；
“Y2”是从与Y1相同的抗体获得的VL区；
其中X和Y获自相同或不同的抗体；
“Z”是选自以下的细胞因子：IL-6,IL-4,IL-1,IL-2,IL-3,IL-5,IL-7,IL-8,IL-9,IL_15,IL-26,IL-27,IL-28,IL-29,GM-CSF,G-CSF,干扰素-α,-β,-γ,EPO,TGF-β,或肿瘤坏死因子-α,-β,碱性FGF,EGF,PDGF,IL-4,IL-11,或IL-13；
“n”是选自0-2的整数。
在一个实施方案中，上述式I-VII的成分优选选自以下：IL-10优选为DV05、DV06或DV07；X1和X2优选为抗EGFR、抗PDGFR、抗FGFR、抗VEGF、抗Her2Neu、抗GPC3、抗MAdCAM、抗ICAM-1、-2、-3、-4、抗-VCAM、抗HIV或抗埃博拉病毒；Y1和Y2优选是抗EGFR、抗MAdCAM、抗ICAM-1、-2、-3、-4、抗VCAM、抗HIV或抗埃博拉病毒；Z选自IL-2、IL-7或IL-15；n是1。在一个最优选的实施方案中，融合蛋白是SEQ ID Nos：33-51中的任何一个。本领域技术人员将理解，组氨酸标签的存在可以用于融合蛋白的纯化过程，并且可以完整保留在最终产物中或从最终产物中去除。本领域技术人员还将理解，上述任何抗体的VH和VL框架区可以被其他互补决定区(CDR)区取代。例如，如果VH和VL区来自抗埃博拉抗体，六个CDR区(即VH和VL的CDR 1-3)可以用抗EGFR抗体(例如，西妥昔单抗)的6个CDR区取代。因此，在一个优选的实施方案中，融合蛋白是SEQ ID Nos：34-36。在另一个优选的实施方案中，融合蛋白是具有由SEQ ID Nos:37；44；45；46-47；48-49；或50-51表示的支架的融合蛋白，其中可以移植来自任何抗体的任何6个CDR区。在其他优选的实施方案中，来自抗埃博拉抗体的VH和VL区的CDR区可以嫁接来自抗MAdCAM、抗VCAM或抗ICAM-1、-2、-3、-4抗体的CDR区，其中在一个优选的实施方案中，CDR区可以移植到SEQ ID No：37的融合蛋白中。如上面的式II和III；式IV和V；和式VI和VII所述的融合蛋白，被设计成结合在一起形成IL-10(或其变体)的生物活性同源二聚体。上述融合蛋白被设计成非靶向的或靶向的，这取决于所选择的VH和VL区对和/或移植到VH和VL中的CDR区。术语“非靶向”旨在描述，VH和VL区由于抗原不存在或抗原结合位点(ABS)已被失效或修饰以清除ABS功能，而不能靶向位于体内的特定抗原。
上述融合蛋白还可包括在制造过程中有助于融合蛋白的回收或纯化的额外氨基酸序列。这些可以包括各种亲和标签，例如但不限于蛋白A、白蛋白结合蛋白、碱性磷酸酶、FLAG表位、半乳糖结合蛋白、组氨酸标签和本领域熟知的任何其他标签。参见，例如，Kimple等人(Curr.Protoc.Protein Sci.,2013,73:Unit 9.9,表9.91,通过引用整体并入)。一方面，亲和标签是具有氨基酸序列HHHHHH(SEQ ID No.：32)的组氨酸标签。组氨酸标签可以从最终产品中去除或保持完整。在另一个实施方案中，亲和标签是结合到融合蛋白中(例如，结合到本文所述的融合蛋白的VH区中)的蛋白A修饰，例如在SEQ ID Nos：34或44-51中描述的那些。本领域技术人员将理解，本文所述的任何融合蛋白序列均可以通过如本领域所述在抗体框架区内插入氨基酸点取代而被修饰，以掺入蛋白A修饰。
实施例
实施例1–单核细胞/巨噬细胞评价
为了确定与IL-10或基于IL-10活性剂治疗的阳性反应相关的遗传标记，需要对各种IL-10反应的表型表达进行评估和分类。是从几个健康的供体和患病的患者中分离出PBMCs。分离单核细胞/巨噬细胞并测试(1)IL-10的诱导或产生和(2)响应IL-10而减少TNF-β分泌的能力。
IL-10诱导、产生或分泌
通过磁珠分离，从全外周血中分离外周血单核细胞/巨噬细胞，并在96孔板中以2x106个细胞/mL接种于200μL中。分离的外周血单核细胞/巨噬细胞(2x106)也被快速冷冻并接受下一代测序(NGS)，以确认与高、中或低的IL-10反应和IL-10表达相关的基因表达和遗传标签。用促炎刺激物LPS(0、0.001、0.01、0.1、1、10、100ng/mL IL-10和10ng/mL)刺激分离的单核细胞/巨噬细胞18小时。18小时后，收集上清液并测量产生的IL-10的量。参考图7(a)，来自供体的LPS刺激的单核细胞/巨噬细胞表现出不同程度的IL-10产生，其中大约40％产生高水平(大于2000pg/ml)的IL-10，28％产生中等水平(大约1000pg/ml)的IL-10，大约32％产生低水平的IL-10(低于1000pg/ml)。
TNF-α反应
同样，分离的单核细胞/巨噬细胞也用LPS(10ng/ml)和IL-10(0,0.001,0.01,0.1,1,10,100ng/mL)刺激18小时。18小时后，收集上清液并评估IL-10介导的炎性细胞因子分泌控制。参考图7(b)，IL-10不同程度地降低了供体池中TNF-α的水平。约22％为低反应者(IL-10能够抑制约50％的TNF-α分泌)，47％为中等反应者(IL-10能够抑制约50-75％的TNF-α分泌)，31％为高反应者(IL-10能够抑制约75％以上的TNF-α分泌)。
供体分层
表现出低IL-10产量(即，图6(a)中的低和中等IL-10生产者)但对IL-10的反应性(具有最显著的TNF-α分泌减少)(即，图6(b)中的高反应者)的患者，是IL-10治疗的理想候选者。大约50％的供体被表征为低/中等IL-10生产者，而此50％的低/中等IL-10生产者中，一半是高反应者。(图7)。因此，为治疗炎性疾病，目标群体将包括那些有能力对IL-10作出反应但不能内源性产生足够高水平IL-10的患者。表现出这两种表型性状的供体分类，将具有与阳性治疗接受性患者群相关的遗传标签或构成(例如，基因表达谱和/或SNP和/或INDEL标签形式的突变频率)。(图8)。然后对表现出这两种表型性状的供体的基因表达谱和突变频率进行测序，并评估来自这些供体的基因表达谱和/或SNP和/或INDEL谱以确定遗传模式。这些遗传模式将成为患有炎性疾病的患者最易接受和响应IL-10或基于IL-10活性剂治疗的特征。
克罗恩病评估
自克罗恩病患者分离单核细胞/巨噬细胞，和使用(1)IL-10产生测定法和(2)TNF-α反应测定法分析。参考图9，所有克罗恩病患者的特征是IL-10的低产生者(即低于1000pg/ml)，75％的克罗恩病患者的特征是对IL-10的高反应者(其中IL-10能够抑制约75％以上的TNF-α分泌)。
因此，表现出低IL-10诱导、产生或分泌以及高IL-10反应性的组合表型特征的那些患者(约50％的受试克罗恩病患者)，将具有遗传组成，与筛选自健康供体人群的相似。因此，对这些克罗恩病患者的基因组进行测序，并评估来自这些供体的遗传标记(基因表达标签和/或SNP和/或INDEL谱)以确定遗传模式。然后将这些模式与来自健康供体基因谱的模式进行交叉比较，以生成符合IL-10重建治疗条件并对IL-10重建治疗有反应的潜在目标患者的谱。
实施例2
为了确定是否可以根据患者对IL-10或基于IL-10活性剂的表型反应来对患者进行分类/分层，使用单核细胞/巨噬细胞和T细胞反应测定来评估IL-10的抑制和刺激反应。采集多个新鲜供体外周血样品以评估是否所有人类单核细胞/巨噬细胞和T细胞以相同方式对IL-10作出反应。
来自130个(单核细胞)和129个(CD8+ T细胞)供体外周血的IL-10细胞反应数据表明，单核细胞中存在幅度不同的IL-10抑制反应，且类似地CD8+ T细胞中存在不同幅度的IL-10激活反应。参见图10A(单核细胞)和10B(T细胞)。为了确定这些反应是否与测定法相关，我们从相同供体获得了重复的样品。图11显示了对3个供体单核细胞的IL-10反应的评估，而图12显示了对3个供体CD8+ T细胞的IL-10刺激反应的评估。
数据表明，单核细胞/巨噬细胞和CD8+ T细胞对IL-10的反应在多个测试时间点上是一致的。这些数据表明，对IL-10的反应可能由导致差异表达谱的供体或患者遗传因素的组合来控制。
为了评估这种可能性，我们利用CD8+ T细胞测定试验，选择对IL-10表现出不同反应的供体CD8+ T细胞，以进行下一代测序。我们将来自高、中和低反应供体的样品分箱，以确定是否在来自该分组反应的任何样品中存在任何共同的表达基因。图13中提供了表达谱分析的结果。数据表明，在CD8+ T细胞中存在明显的表达基因簇，例如来自无反应供体。对单核细胞/巨噬细胞也进行了相同的分析，其中按照响应促炎刺激LPS的高、中、低IL-10分泌和高、中、低IL-10反应性(导致TNF-α分泌减少)进行样品分组。
我们使用标准人类参考基因组通过下一代测序评估我们的样品是否具有单核苷酸多态性(SNP)和/或RNA插入或缺失(INDEL)。然后，我们汇总了上述基因表达分析、SNP和INDEL，并使用Reactome Pathway数据库评估了该混合数据是否簇集到已知通路上。
T细胞高反应者的混合数据说明了以下组合标签(表3)，其中提供了通过命中计数(Hit Count,HC)(即mRNA表达水平)、INDEL(ID)和SNP(SNP)识别的基因：
Figure BDA0003850656900000271
Figure BDA0003850656900000281
CD8+ T细胞低反应者的混合数据说明了以下组合标签(表4)：
Figure BDA0003850656900000282
单核细胞/巨噬细胞高IL-10产生/分泌的混合数据说明了以下组合标签(表5)：
Figure BDA0003850656900000283
Figure BDA0003850656900000291
单核细胞/巨噬细胞低IL-10产生/分泌的混合数据说明了以下组合标签(表6)：
Figure BDA0003850656900000292
Figure BDA0003850656900000301
单核细胞/巨噬细胞高IL-10反应的混合数据说明了以下组合标签(表7)：
Figure BDA0003850656900000302
单核细胞/巨噬细胞低IL-10反应的混合数据说明了以下组合标签(表8)：
Figure BDA0003850656900000303
Figure BDA0003850656900000311
此外，也在CD8+ T细胞和单核细胞/巨噬细胞中评估了与如下相关的全基因组突变频率：CD8+ T细胞中的高和低IL-10反应者；促炎刺激后单核细胞/巨噬细胞中的高和低IL-10分泌者；以及促炎刺激后的高和低IL-10反应者。下表9-14提供了基因、染色体、染色体位置、参照序列/核苷酸、以及突变或替代序列(SNP或INDEL)。
Figure BDA0003850656900000321
Figure BDA0003850656900000331
Figure BDA0003850656900000341
Figure BDA0003850656900000351
Figure BDA0003850656900000361
Figure BDA0003850656900000371
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Figure BDA0003850656900000401
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Figure BDA0003850656900000441
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Figure BDA0003850656900003231
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序列表
<110> 德卡生物科学公司(DEKA BIOSCIENCES, INC.)
<120> 使用遗传标记、SNP和/或INDEL确定 IL-10治疗反应性的方法
<130> 039451.00036
<140>
<141>
<160> 69
<170> PatentIn 版本3.5
<210> 1
<211> 178
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met His Ser Ser Ala Leu Leu Cys Cys Leu Val Leu Leu Thr Gly Val
1 5 10 15
Arg Ala Ser Pro Gly Gln Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His
20 25 30
Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe
35 40 45
Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu
50 55 60
Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys
65 70 75 80
Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro
85 90 95
Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu
100 105 110
Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg
115 120 125
Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn
130 135 140
Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu
145 150 155 160
Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile
165 170 175
Arg Asn
<210> 2
<211> 1629
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
acacatcagg ggcttgctct tgcaaaacca aaccacaaga cagacttgca aaagaaggca 60
tgcacagctc agcactgctc tgttgcctgg tcctcctgac tggggtgagg gccagcccag 120
gccagggcac ccagtctgag aacagctgca cccacttccc aggcaacctg cctaacatgc 180
ttcgagatct ccgagatgcc ttcagcagag tgaagacttt ctttcaaatg aaggatcagc 240
tggacaactt gttgttaaag gagtccttgc tggaggactt taagggttac ctgggttgcc 300
aagccttgtc tgagatgatc cagttttacc tggaggaggt gatgccccaa gctgagaacc 360
aagacccaga catcaaggcg catgtgaact ccctggggga gaacctgaag accctcaggc 420
tgaggctacg gcgctgtcat cgatttcttc cctgtgaaaa caagagcaag gccgtggagc 480
aggtgaagaa tgcctttaat aagctccaag agaaaggcat ctacaaagcc atgagtgagt 540
ttgacatctt catcaactac atagaagcct acatgacaat gaagatacga aactgagaca 600
tcagggtggc gactctatag actctaggac ataaattaga ggtctccaaa atcggatctg 660
gggctctggg atagctgacc cagccccttg agaaacctta ttgtacctct cttatagaat 720
atttattacc tctgatacct caacccccat ttctatttat ttactgagct tctctgtgaa 780
cgatttagaa agaagcccaa tattataatt tttttcaata tttattattt tcacctgttt 840
ttaagctgtt tccatagggt gacacactat ggtatttgag tgttttaaga taaattataa 900
gttacataag ggaggaaaaa aaatgttctt tggggagcca acagaagctt ccattccaag 960
cctgaccacg ctttctagct gttgagctgt tttccctgac ctccctctaa tttatcttgt 1020
ctctgggctt ggggcttcct aactgctaca aatactctta ggaagagaaa ccagggagcc 1080
cctttgatga ttaattcacc ttccagtgtc tcggagggat tcccctaacc tcattcccca 1140
accacttcat tcttgaaagc tgtggccagc ttgttattta taacaaccta aatttggttc 1200
taggccgggc gcggtggctc acgcctgtaa tcccagcact ttgggaggct gaggcgggtg 1260
gatcacttga ggtcaggagt tcctaaccag cctggtcaac atggtgaaac cccgtctcta 1320
ctaaaaatac aaaaattagc cgggcatggt ggcgcgcacc tgtaatccca gctacttggg 1380
aggctgaggc aagagaattg cttgaaccca ggagatggaa gttgcagtga gctgatatca 1440
tgcccctgta ctccagcctg ggtgacagag caagactctg tctcaaaaaa taaaaataaa 1500
aataaatttg gttctaatag aactcagttt taactagaat ttattcaatt cctctgggaa 1560
tgttacattg tttgtctgtc ttcatagcag attttaattt tgaataaata aatgtatctt 1620
attcacatc 1629
<210> 3
<211> 147
<212> PRT
<213> 人类γ疱疹病毒 4
<400> 3
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg
145
<210> 4
<211> 632
<212> DNA
<213> 人类γ疱疹病毒 4
<400> 4
tataaatcac ttccctatct caggtaggcc tgcacacctt aggtatggag cgaaggttag 60
tggtcactct gcagtgcctg gtgctgcttt acctggcacc tgagtgtgga ggtacagacc 120
aatgtgacaa ttttccccaa atgttgaggg acctaagaga tgccttcagt cgtgttaaaa 180
cctttttcca gacaaaggac gaggtagata accttttgct caaggagtct ctgctagagg 240
actttaaggg ctaccttgga tgccaggccc tgtcagaaat gatccaattc tacctggagg 300
aagtcatgcc acaggctgaa aaccaggacc ctgaagccaa agaccatgtc aattctttgg 360
gtgaaaatct aaagacccta cggctccgcc tgcgcaggtg ccacaggttc ctgccgtgtg 420
agaacaagag taaagctgtg gaacagataa aaaatgcctt taacaagctg caggaaaaag 480
gaatttacaa agccatgagt gaatttgaca tttttattaa ctacatagaa gcatacatga 540
caattaaagc caggtgataa ttccataccc tggaagcagg agatgggtgc atttcacccc 600
aaccccccct ttcgactgtc atttacaata aa 632
<210> 5
<211> 177
<212> PRT
<213> 人类β疱疹病毒 5
<400> 5
Met Leu Ser Val Met Val Ser Ser Ser Leu Val Leu Ile Val Phe Phe
1 5 10 15
Leu Gly Ala Ser Glu Glu Ala Lys Pro Ala Ala Thr Thr Thr Thr Ile
20 25 30
Lys Asn Thr Lys Pro Gln Cys Arg Pro Glu Asp Tyr Ala Ser Arg Leu
35 40 45
Gln Asp Leu Arg Val Thr Phe His Arg Val Lys Pro Thr Leu Gln Arg
50 55 60
Glu Asp Asp Tyr Ser Val Trp Leu Asp Gly Thr Val Val Lys Gly Cys
65 70 75 80
Trp Gly Cys Ser Val Met Asp Trp Leu Leu Arg Arg Tyr Leu Glu Ile
85 90 95
Val Phe Pro Ala Gly Asp His Val Tyr Pro Gly Leu Lys Thr Glu Leu
100 105 110
His Ser Met Arg Ser Thr Leu Glu Ser Ile Tyr Lys Asp Met Arg Gln
115 120 125
Cys Pro Leu Leu Gly Cys Gly Asp Lys Ser Val Ile Ser Arg Leu Ser
130 135 140
Gln Glu Ala Glu Arg Lys Ser Asp Asn Gly Thr Arg Lys Gly Leu Ser
145 150 155 160
Glu Leu Asp Thr Leu Phe Ser Arg Leu Glu Glu Tyr Leu His Ser Arg
165 170 175
Lys
<210> 6
<211> 693
<212> DNA
<213> 人类β疱疹病毒 5
<400> 6
atgctgtcgg tgatggtctc ttcctctctg gtcctgatcg tcttttttct aggcgcttcc 60
gaggaggcga agccggcggc gacgacgacg acgataaaga atacaaagcc gcagtgtcgt 120
ccggaggatt acgcgagcag attgcaagat ctccgcgtca cctttcatcg agtaaaacct 180
acgttggtag gtcatgtagg tacggtttat tgcgacggtc tttcttttcc gcgtgtcggg 240
tgacgtagtt ttcctcttgt agcaacgtga ggacgactac tccgtgtggc tcgacggtac 300
ggtggtcaaa ggctgttggg gatgcagcgt catggactgg ttgttgaggc ggtatctgga 360
gatcgtgttc cccgcaggcg accacgtcta tcctggactt aagacggaat tgcatagtat 420
gcgctcgacg ctagaatcca tctacaaaga catgcggcaa tgcgtaagtg tctctgtggc 480
ggcgctgtcc gcgcagaggt aacaacgtgt tcatagcacg ctgttttact tttgtcgggc 540
tcccagcctc tgttaggttg cggagataag tccgtgatta gtcggctgtc tcaggaggcg 600
gaaaggaaat cggataacgg cacgcggaaa ggtctcagcg agttggacac gttgtttagc 660
cgtctcgaag agtatctgca ctcgagaaag tag 693
<210> 7
<211> 178
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 7
Met Pro Gly Ser Ala Leu Leu Cys Cys Leu Leu Leu Leu Thr Gly Met
1 5 10 15
Arg Ile Ser Arg Gly Gln Tyr Ser Arg Glu Asp Asn Asn Cys Thr His
20 25 30
Phe Pro Val Gly Gln Ser His Met Leu Leu Glu Leu Arg Thr Ala Phe
35 40 45
Ser Gln Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Gln Leu Asp Asn Ile
50 55 60
Leu Leu Thr Asp Ser Leu Met Gln Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys
65 70 75 80
Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Val Glu Val Met Pro
85 90 95
Gln Ala Glu Lys His Gly Pro Glu Ile Lys Glu His Leu Asn Ser Leu
100 105 110
Gly Glu Lys Leu Lys Thr Leu Arg Met Arg Leu Arg Arg Cys His Arg
115 120 125
Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Ser
130 135 140
Asp Phe Asn Lys Leu Gln Asp Gln Gly Val Tyr Lys Ala Met Asn Glu
145 150 155 160
Phe Asp Ile Phe Ile Asn Cys Ile Glu Ala Tyr Met Met Ile Lys Met
165 170 175
Lys Ser
<210> 8
<211> 1314
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 8
gggggggggg atttagagac ttgctcttgc actaccaaag ccacaaagca gccttgcaga 60
aaagagagct ccatcatgcc tggctcagca ctgctatgct gcctgctctt actgactggc 120
atgaggatca gcaggggcca gtacagccgg gaagacaata actgcaccca cttcccagtc 180
ggccagagcc acatgctcct agagctgcgg actgccttca gccaggtgaa gactttcttt 240
caaacaaagg accagctgga caacatactg ctaaccgact ccttaatgca ggactttaag 300
ggttacttgg gttgccaagc cttatcggaa atgatccagt tttacctggt agaagtgatg 360
ccccaggcag agaagcatgg cccagaaatc aaggagcatt tgaattccct gggtgagaag 420
ctgaagaccc tcaggatgcg gctgaggcgc tgtcatcgat ttctcccctg tgaaaataag 480
agcaaggcag tggagcaggt gaagagtgat tttaataagc tccaagacca aggtgtctac 540
aaggccatga atgaatttga catcttcatc aactgcatag aagcatacat gatgatcaaa 600
atgaaaagct aaaacacctg cagtgtgtat tgagtctgct ggactccagg acctagacag 660
agctctctaa atctgatcca gggatcttag ctaacggaaa caactccttg gaaaacctcg 720
tttgtacctc tctccgaaat atttattacc tctgatacct cagttcccat tctatttatt 780
cactgagctt ctctgtgaac tatttagaaa gaagcccaat attataattt tacagtattt 840
attattttta acctgtgttt aagctgtttc cattggggac actttatagt atttaaaggg 900
agattatatt atatgatggg aggggttctt ccttgggaag caattgaagc ttctattcta 960
aggctggcca cacttgagag ctgcagggcc ctttgctatg gtgtcctttc aattgctctc 1020
atccctgagt tcagagctcc taagagagtt gtgaagaaac tcatgggtct tgggaagaga 1080
aaccagggag atcctttgat gatcattcct gcagcagctc agagggttcc cctactgtca 1140
tcccccagcc gcttcatccc tgaaaactgt ggccagtttg ttatttataa ccacctaaaa 1200
ttagttctaa tagaactcat ttttaactag aagtaatgca attcctctgg gaatggtgta 1260
ttgtttgtct gcctttgtag cagcatctaa ttttgaataa atggatctta ttcg 1314
<210> 9
<211> 168
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 9
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu
50 55 60
Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln
65 70 75 80
Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu
85 90 95
Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Leu Arg Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys
115 120 125
Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly
130 135 140
Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu
145 150 155 160
Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165
<210> 10
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 10
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Gln Cys Pro Leu Leu Gly Cys Gly Asp Lys Ala
115 120 125
Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile
130 135 140
Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala
145 150 155 160
Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165
<210> 11
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 11
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Gln Cys Pro Leu Leu Gly Cys Gly Asp Lys Ala
115 120 125
Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile
130 135 140
Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala
145 150 155 160
Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165
<210> 12
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 12
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Gln Cys Pro Leu Leu Gly Cys Gly Asp Lys Ala
115 120 125
Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile
130 135 140
Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala
145 150 155 160
Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165
<210> 13
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 13
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Gln Cys Pro Leu Leu Gly Cys Gly Asp Lys Ala
115 120 125
Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile
130 135 140
Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala
145 150 155 160
Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165
<210> 14
<211> 170
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 14
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys
115 120 125
Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu
130 135 140
Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr
145 150 155 160
Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165 170
<210> 15
<211> 170
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 15
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys
115 120 125
Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu
130 135 140
Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr
145 150 155 160
Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165 170
<210> 16
<211> 170
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 16
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys
115 120 125
Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu
130 135 140
Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr
145 150 155 160
Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165 170
<210> 17
<211> 184
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 17
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala
130 135 140
Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe
145 150 155 160
Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165 170 175
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
180
<210> 18
<211> 184
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 18
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala
130 135 140
Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe
145 150 155 160
Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165 170 175
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
180
<210> 19
<211> 184
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 19
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala
130 135 140
Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe
145 150 155 160
Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165 170 175
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
180
<210> 20
<211> 184
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 20
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala
130 135 140
Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe
145 150 155 160
Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
165 170 175
Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
180
<210> 21
<211> 192
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 21
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His
20 25 30
Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe
35 40 45
Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu
50 55 60
Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys
65 70 75 80
Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro
85 90 95
Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu
100 105 110
Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg
115 120 125
Phe Leu Pro Cys Glu Asn Gly Gly Gly Ser Gly Gly Lys Ser Lys Ala
130 135 140
Val Glu Gln Val Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala
165 170 175
Tyr Met Thr Met Lys Ile Arg Asn Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
180 185 190
<210> 22
<211> 186
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 22
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Gln Ser Glu Asn Ser Cys Thr His
20 25 30
Phe Pro Gly Asn Leu Pro Asn Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe
35 40 45
Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Met Lys Asp Gln Leu Asp Asn Leu
50 55 60
Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys
65 70 75 80
Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro
85 90 95
Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Asp Ile Lys Ala His Val Asn Ser Leu
100 105 110
Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg
115 120 125
Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Val Lys Asn
130 135 140
Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu
145 150 155 160
Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Met Lys Ile
165 170 175
Arg Asn Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
180 185
<210> 23
<211> 178
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 23
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Leu Arg Gly Ala Arg Cys Gly Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln
20 25 30
Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe
35 40 45
Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu
50 55 60
Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile
65 70 75 80
Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro
85 90 95
Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu
100 105 110
Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys
115 120 125
Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu
130 135 140
Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr
145 150 155 160
Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg Asp Tyr Lys Asp Asp Asp
165 170 175
Asp Lys
<210> 24
<211> 398
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Gly Gly Asn Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Leu Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Asp Tyr Tyr Ser Glu Ile Ser Gly Ala Leu Asp
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
130 135 140
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Pro Arg Asn
145 150 155 160
Tyr Ile Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
165 170 175
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ala Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
180 185 190
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu
195 200 205
Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Asp Arg Leu Pro
210 215 220
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp
245 250 255
Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val
260 265 270
Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys
275 280 285
Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu
290 295 300
Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu
305 310 315 320
Asn Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn
325 330 335
Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro
340 345 350
Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn
355 360 365
Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile
370 375 380
Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
385 390 395
<210> 25
<211> 397
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 25
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
180 185 190
Thr Thr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
195 200 205
Trp Ile Gly Glu Val Asn Tyr Ser Gly Asn Ala Asn Tyr Asn Pro Ser
210 215 220
Leu Lys Gly Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
225 230 235 240
Ser Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
245 250 255
Cys Thr Ser Arg Ile Arg Ser His Ile Ala Tyr Ser Trp Lys Gly Asp
260 265 270
Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly
290 295 300
Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Val Leu Pro Lys Lys Tyr
305 310 315 320
Ala Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Leu Ala Pro Val Leu Val Ile
325 330 335
Tyr Glu Asp Asn Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
340 345 350
Ser Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val
355 360 365
Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Thr Asp Ser Ser Gly Asp
370 375 380
His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
385 390 395
<210> 26
<211> 398
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Gly Gly Asn Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Leu Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Asp Tyr Tyr Ser Glu Ile Ser Gly Ala Leu Asp
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
130 135 140
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Pro Arg Asn
145 150 155 160
Tyr Ile Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
165 170 175
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ala Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu
195 200 205
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210 215 220
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp
245 250 255
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260 265 270
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Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu
290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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355 360 365
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370 375 380
Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
385 390 395
<210> 27
<211> 397
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 27
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
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His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
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Thr Thr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
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Leu Lys Gly Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
225 230 235 240
Ser Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
245 250 255
Cys Thr Ser Arg Ile Arg Ser His Ile Ala Tyr Ser Trp Lys Gly Asp
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Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly
290 295 300
Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Val Leu Pro Lys Lys Tyr
305 310 315 320
Ala Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Leu Ala Pro Val Leu Val Ile
325 330 335
Tyr Glu Asp Asn Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
340 345 350
Ser Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val
355 360 365
Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Thr Asp Ser Ser Gly Asp
370 375 380
His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
385 390 395
<210> 28
<211> 398
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Asn Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Gly Gly Asn Gly Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu His Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Leu Phe Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Gly Asp Tyr Tyr Ser Glu Ile Ser Gly Ala Leu Asp
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
130 135 140
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Pro Arg Asn
145 150 155 160
Tyr Ile Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
165 170 175
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ala Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser
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Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu
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Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp
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275 280 285
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290 295 300
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Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile
370 375 380
Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
385 390 395
<210> 29
<211> 397
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 29
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp
20 25 30
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85 90 95
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100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
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Trp Ile Gly Glu Val Asn Tyr Ser Gly Asn Ala Asn Tyr Asn Pro Ser
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Leu Lys Gly Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
225 230 235 240
Ser Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
245 250 255
Cys Thr Ser Arg Ile Arg Ser His Ile Ala Tyr Ser Trp Lys Gly Asp
260 265 270
Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly
290 295 300
Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Val Leu Pro Lys Lys Tyr
305 310 315 320
Ala Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Leu Ala Pro Val Leu Val Ile
325 330 335
Tyr Glu Asp Asn Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly
340 345 350
Ser Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val
355 360 365
Glu Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Thr Asp Ser Ser Gly Asp
370 375 380
His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
385 390 395
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
肽
<400> 30
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 31
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
肽
<400> 31
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 32
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
6xHis tag
<400> 32
His His His His His His
1 5
<210> 33
<211> 567
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 33
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1 5 10 15
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115 120 125
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Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
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165 170 175
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195 200 205
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210 215 220
Leu Lys Gly Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
225 230 235 240
Ser Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser
290 295 300
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305 310 315 320
Arg Ala Ser Gln Ser Val Pro Arg Asn Tyr Ile Gly Trp Phe Gln Gln
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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485 490 495
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Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala
545 550 555 560
Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
565
<210> 34
<211> 561
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 34
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1 5 10 15
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Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
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Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
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245 250 255
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Thr Thr Val Thr Val Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
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370 375 380
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp
405 410 415
Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe
420 425 430
Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu
435 440 445
Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys
450 455 460
Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro
465 470 475 480
Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu
485 490 495
Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg
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Arg
<210> 35
<211> 396
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 35
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1 5 10 15
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130 135 140
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145 150 155 160
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
165 170 175
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180 185 190
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu
195 200 205
Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr Thr
210 215 220
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly
225 230 235 240
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe
245 250 255
Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr
260 265 270
Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser
275 280 285
Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu
290 295 300
Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln
305 310 315 320
Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys
325 330 335
Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu
340 345 350
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355 360 365
Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile
370 375 380
Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
385 390 395
<210> 36
<211> 403
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 36
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp
20 25 30
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35 40 45
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Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Asn
180 185 190
Tyr Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
195 200 205
Ile Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Asn Thr Pro Phe
210 215 220
Thr Ser Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
225 230 235 240
Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
245 250 255
Thr Ser Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Trp Lys Gly Asp Val
260 265 270
Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
275 280 285
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
290 295 300
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Thr Asn
305 310 315 320
Ile His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
325 330 335
Tyr Tyr Ala Ser Glu Ser Ile Ser Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser Gly
340 345 350
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro
355 360 365
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr
370 375 380
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Asp Tyr Lys Asp Asp
385 390 395 400
Asp Asp Lys
<210> 37
<211> 581
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (193)..(199)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (193)..(199)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (214)..(231)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (214)..(231)
<223> 此区域可以包括14-18个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (264)..(274)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (264)..(274)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (329)..(342)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (329)..(342)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (358)..(366)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (358)..(366)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (399)..(409)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (399)..(409)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 37
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
180 185 190
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
195 200 205
Leu Glu Trp Ile Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
210 215 220
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser
225 230 235 240
Lys Asn Gln Phe Ser Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr
245 250 255
Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
260 265 270
Xaa Xaa Trp Lys Gly Asp Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val
275 280 285
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
290 295 300
Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro
305 310 315 320
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
325 330 335
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
340 345 350
Arg Leu Leu Ile Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe
355 360 365
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
370 375 380
Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa
385 390 395 400
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
405 410 415
Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
420 425 430
Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu
435 440 445
Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu
450 455 460
Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly
465 470 475 480
Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu
485 490 495
Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His
500 505 510
Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg
515 520 525
Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu
530 535 540
Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys
545 550 555 560
Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met
565 570 575
Thr Ile Lys Ala Arg
580
<210> 38
<211> 397
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 38
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr Thr Thr
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Val Asn Tyr Ser Gly Asn Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Gly Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Ser Arg Ile Arg Ser His Ile Ala Tyr Ser Trp Lys Gly Asp Val Trp
100 105 110
Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
115 120 125
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu
130 135 140
Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Pro Arg Asn Tyr
145 150 155 160
Ile Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
165 170 175
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ala Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser Gly
180 185 190
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro
195 200 205
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Asp Arg Leu Pro Tyr
210 215 220
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp Asn
245 250 255
Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys
260 265 270
Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu
275 280 285
Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser
290 295 300
Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn
305 310 315 320
Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu
325 330 335
Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys
340 345 350
Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys
355 360 365
Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe
370 375 380
Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
385 390 395
<210> 39
<211> 405
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 39
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
180 185 190
Thr Thr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
195 200 205
Trp Ile Gly Glu Val Asn Tyr Ser Gly Asn Ala Asn Tyr Asn Pro Ser
210 215 220
Leu Lys Gly Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
225 230 235 240
Ser Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
245 250 255
Cys Thr Ser Arg Ile Arg Ser His Ile Ala Tyr Ser Trp Lys Gly Asp
260 265 270
Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro
290 295 300
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Pro Arg
305 310 315 320
Asn Tyr Ile Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
325 330 335
Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ala Gly Phe Pro Asp Arg Phe
340 345 350
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu
355 360 365
Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Asp Arg Leu
370 375 380
Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Asp Tyr Lys
385 390 395 400
Asp Asp Asp Asp Lys
405
<210> 40
<211> 569
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 40
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
180 185 190
Thr Thr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
195 200 205
Trp Ile Gly Glu Val Asn Tyr Ser Gly Asn Ala Asn Tyr Asn Pro Ser
210 215 220
Leu Lys Gly Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
225 230 235 240
Ser Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
245 250 255
Cys Thr Ser Arg Ile Arg Ser His Ile Ala Tyr Ser Trp Lys Gly Asp
260 265 270
Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr
290 295 300
Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu
305 310 315 320
Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Pro Arg Asn Tyr Ile Gly Trp Phe
325 330 335
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser
340 345 350
Ser Arg Ala Ala Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
355 360 365
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala
370 375 380
Met Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Asp Arg Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln
385 390 395 400
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
405 410 415
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met
420 425 430
Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln
435 440 445
Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu
450 455 460
Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln
465 470 475 480
Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu
485 490 495
Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg
500 505 510
Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser
515 520 525
Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys
530 535 540
Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile
545 550 555 560
Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
565
<210> 41
<211> 399
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Val Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Val
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Ser Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro
130 135 140
Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Pro Arg
145 150 155 160
Asn Tyr Ile Gly Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
165 170 175
Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ala Gly Phe Pro Asp Arg Phe
180 185 190
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu
195 200 205
Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Asp Arg Leu
210 215 220
Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys
245 250 255
Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
260 265 270
Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu
275 280 285
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
290 295 300
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
305 310 315 320
Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu
325 330 335
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
340 345 350
Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe
355 360 365
Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp
370 375 380
Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
385 390 395
<210> 42
<211> 401
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 42
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
180 185 190
Thr Thr Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
195 200 205
Trp Ile Gly Glu Val Asn Tyr Ser Gly Asn Ala Asn Tyr Asn Pro Ser
210 215 220
Leu Lys Gly Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
225 230 235 240
Ser Leu Arg Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr
245 250 255
Cys Thr Ser Arg Ile Arg Ser His Ile Ala Tyr Ser Trp Lys Gly Asp
260 265 270
Val Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro
290 295 300
Gly Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His
305 310 315 320
Thr Asp Gly Thr Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
325 330 335
Pro Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val
340 345 350
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
355 360 365
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln
370 375 380
Asn Ile Gln Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
385 390 395 400
Lys
<210> 43
<211> 575
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<400> 43
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro
165 170 175
Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
180 185 190
Ser Tyr Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu
195 200 205
Trp Met Gly Trp Ile Ser Val Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln
210 215 220
Lys Val Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr
225 230 235 240
Ala Tyr Met Asp Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr
245 250 255
Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Ser Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Tyr Tyr Gly
260 265 270
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
275 280 285
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val
290 295 300
Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Gln Pro Ala
305 310 315 320
Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Thr Asp Gly Thr
325 330 335
Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Gln Leu
340 345 350
Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
355 360 365
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val
370 375 380
Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Asn Ile Gln Leu
385 390 395 400
Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly
405 410 415
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys
420 425 430
Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg
435 440 445
Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn Leu Leu Leu
450 455 460
Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala
465 470 475 480
Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala
485 490 495
Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu
500 505 510
Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu
515 520 525
Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe
530 535 540
Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp
545 550 555 560
Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
565 570 575
<210> 44
<211> 573
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (193)..(199)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (193)..(199)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (213)..(230)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (213)..(230)
<223> 此区域可以包括14-18个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (263)..(273)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (263)..(273)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (321)..(334)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (321)..(334)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (350)..(358)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (350)..(358)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (391)..(401)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (391)..(401)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 44
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Arg Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
180 185 190
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
195 200 205
Leu Glu Trp Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
210 215 220
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys
225 230 235 240
Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala
245 250 255
Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
260 265 270
Xaa Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser
290 295 300
Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
305 310 315 320
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Phe
325 330 335
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Xaa Xaa Xaa
340 345 350
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly
355 360 365
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp
370 375 380
Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
385 390 395 400
Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
405 410 415
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp Asn
420 425 430
Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys
435 440 445
Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu
450 455 460
Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser
465 470 475 480
Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn
485 490 495
Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu
500 505 510
Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys
515 520 525
Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys
530 535 540
Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe
545 550 555 560
Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
565 570
<210> 45
<211> 573
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (193)..(199)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (193)..(199)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (213)..(230)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (213)..(230)
<223> 此区域可以包括14-18个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (263)..(273)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (263)..(273)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (321)..(334)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (321)..(334)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (350)..(358)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (350)..(358)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (391)..(401)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (391)..(401)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 45
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Arg Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr
180 185 190
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly
195 200 205
Leu Glu Trp Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
210 215 220
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys
225 230 235 240
Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala
245 250 255
Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
260 265 270
Xaa Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Gly Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser
290 295 300
Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
305 310 315 320
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Phe
325 330 335
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Xaa Xaa Xaa
340 345 350
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly
355 360 365
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp
370 375 380
Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
385 390 395 400
Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
405 410 415
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr Asp Gln Cys Asp Asn
420 425 430
Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala Phe Ser Arg Val Lys
435 440 445
Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn Leu Leu Leu Lys Glu
450 455 460
Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly Cys Gln Ala Leu Ser
465 470 475 480
Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met Pro Gln Ala Glu Asn
485 490 495
Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser Leu Gly Glu Asn Leu
500 505 510
Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His Arg Phe Leu Pro Cys
515 520 525
Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys Asn Ala Phe Asn Lys
530 535 540
Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser Glu Phe Asp Ile Phe
545 550 555 560
Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys Ala Arg
565 570
<210> 46
<211> 402
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(37)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(37)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (52)..(62)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (52)..(62)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (95)..(105)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (95)..(105)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (150)..(163)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (150)..(163)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (179)..(187)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (179)..(187)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (220)..(230)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (220)..(230)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 46
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Arg Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Val
50 55 60
Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn
65 70 75 80
Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa Xaa
85 90 95
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Lys Gly Asp Val Trp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile
115 120 125
Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg
130 135 140
Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
145 150 155 160
Xaa Xaa Xaa Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
165 170 175
Ile Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg
195 200 205
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
210 215 220
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr
245 250 255
Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala
260 265 270
Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn
275 280 285
Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly
290 295 300
Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met
305 310 315 320
Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser
325 330 335
Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His
340 345 350
Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys
355 360 365
Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser
370 375 380
Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys
385 390 395 400
Ala Arg
<210> 47
<211> 409
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (192)..(198)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (192)..(198)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (213)..(223)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (213)..(223)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (256)..(266)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (256)..(266)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (311)..(324)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (311)..(324)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (340)..(348)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (340)..(348)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (381)..(391)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (381)..(391)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 47
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Arg Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Xaa
180 185 190
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
195 200 205
Glu Trp Ile Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
210 215 220
Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu
225 230 235 240
Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa
245 250 255
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Lys Gly Asp Val Trp
260 265 270
Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
275 280 285
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu
290 295 300
Arg Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
305 310 315 320
Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
325 330 335
Leu Ile Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe Pro Asp
340 345 350
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr
355 360 365
Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa
370 375 380
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
385 390 395 400
Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
405
<210> 48
<211> 402
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(37)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(37)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (52)..(62)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (52)..(62)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (95)..(105)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (95)..(105)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (150)..(163)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (150)..(163)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (179)..(187)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (179)..(187)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (220)..(230)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (220)..(230)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 48
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Arg Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Val
50 55 60
Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn
65 70 75 80
Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa Xaa
85 90 95
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Lys Gly Asp Val Trp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile
115 120 125
Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg
130 135 140
Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
145 150 155 160
Xaa Xaa Xaa Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
165 170 175
Ile Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg
195 200 205
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
210 215 220
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr
245 250 255
Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala
260 265 270
Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp Asn
275 280 285
Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly
290 295 300
Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met
305 310 315 320
Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn Ser
325 330 335
Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His
340 345 350
Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys
355 360 365
Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser
370 375 380
Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys
385 390 395 400
Ala Arg
<210> 49
<211> 409
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (192)..(198)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (192)..(198)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (213)..(223)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (213)..(223)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (256)..(266)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (256)..(266)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (311)..(324)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (311)..(324)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (340)..(348)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (340)..(348)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (381)..(391)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (381)..(391)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 49
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Val Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ile Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Arg Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Xaa
180 185 190
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
195 200 205
Glu Trp Ile Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
210 215 220
Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu
225 230 235 240
Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa
245 250 255
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Lys Gly Asp Val Trp
260 265 270
Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
275 280 285
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu
290 295 300
Arg Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
305 310 315 320
Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
325 330 335
Leu Ile Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe Pro Asp
340 345 350
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr
355 360 365
Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa
370 375 380
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
385 390 395 400
Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
405
<210> 50
<211> 402
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (31)..(37)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(37)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (52)..(62)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (52)..(62)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (95)..(105)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (95)..(105)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (150)..(163)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (150)..(163)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (179)..(187)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (179)..(187)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (220)..(230)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (220)..(230)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 50
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Arg Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Thr Xaa Xaa
20 25 30
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Val
50 55 60
Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn
65 70 75 80
Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa Xaa
85 90 95
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Lys Gly Asp Val Trp Gly
100 105 110
Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile
115 120 125
Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg
130 135 140
Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
145 150 155 160
Xaa Xaa Xaa Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
165 170 175
Ile Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Arg
195 200 205
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
210 215 220
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
225 230 235 240
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Thr
245 250 255
Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp Ala
260 265 270
Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp Asn
275 280 285
Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu Gly
290 295 300
Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val Met
305 310 315 320
Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn Ser
325 330 335
Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys His
340 345 350
Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile Lys
355 360 365
Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met Ser
370 375 380
Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile Lys
385 390 395 400
Ala Arg
<210> 51
<211> 409
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述: 合成的
多肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (192)..(198)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (192)..(198)
<223> 此区域可以包括3-7个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (213)..(223)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (213)..(223)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (256)..(266)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (256)..(266)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (311)..(324)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (311)..(324)
<223> 此区域可以包括9-14个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (340)..(348)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (340)..(348)
<223> 此区域可以包括5-9个残基
<220>
<221> MOD_RES
<222> (381)..(391)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (381)..(391)
<223> 此区域可以包括7-11个残基
<220>
<223> 参见提交的说明书关于取代和优选实施方案的详细描述
<400> 51
Thr Asp Gln Cys Asp Asn Phe Pro Gln Met Leu Arg Asp Leu Arg Asp
1 5 10 15
Ala Phe Ser Arg Val Lys Thr Phe Phe Gln Thr Lys Asp Glu Leu Asp
20 25 30
Asn Leu Leu Leu Lys Glu Ser Leu Leu Glu Asp Phe Lys Gly Tyr Leu
35 40 45
Gly Cys Gln Ala Leu Ser Glu Met Ile Gln Phe Tyr Leu Glu Glu Val
50 55 60
Met Pro Gln Ala Glu Asn Gln Asp Pro Glu Ala Lys Asp His Val Asn
65 70 75 80
Ser Leu Gly Glu Asn Leu Lys Thr Leu Arg Leu Arg Leu Arg Arg Cys
85 90 95
His Arg Phe Leu Pro Cys Glu Asn Lys Ser Lys Ala Val Glu Gln Ile
100 105 110
Lys Asn Ala Phe Asn Lys Leu Gln Glu Lys Gly Ile Tyr Lys Ala Met
115 120 125
Ser Glu Phe Asp Ile Phe Ile Asn Tyr Ile Glu Ala Tyr Met Thr Ile
130 135 140
Lys Ala Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro
165 170 175
Ser Glu Thr Leu Arg Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Xaa
180 185 190
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu
195 200 205
Glu Trp Ile Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg
210 215 220
Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu
225 230 235 240
Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Ser Xaa
245 250 255
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Lys Gly Asp Val Trp
260 265 270
Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
275 280 285
Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu
290 295 300
Arg Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
305 310 315 320
Xaa Xaa Xaa Xaa Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
325 330 335
Leu Ile Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Phe Pro Asp
340 345 350
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr
355 360 365
Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Xaa Xaa Xaa Xaa
370 375 380
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
385 390 395 400
Lys Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys
405
<210> 52
<211> 19
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 52
ggcgggcagg gcctgaagt 19
<210> 53
<211> 13
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 53
cagagtagct gaa 13
<210> 54
<211> 10
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 54
tcggcggcgg 10
<210> 55
<211> 10
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 55
ctcctcccct 10
<210> 56
<211> 13
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 56
tagcagcagc agc 13
<210> 57
<211> 11
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 57
cttttttttt t 11
<210> 58
<211> 21
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 58
cactgactga gatgttctct t 21
<210> 59
<211> 15
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 59
aaattttgaa gtgtt 15
<210> 60
<211> 10
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 60
cgcagcgcca 10
<210> 61
<211> 10
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 61
cggcccccca 10
<210> 62
<211> 16
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 62
ttgtggacag ggagtg 16
<210> 63
<211> 10
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 63
ttgggggagg 10
<210> 64
<211> 19
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 64
attttctttt ctttctttc 19
<210> 65
<211> 12
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 65
gtcaacattt at 12
<210> 66
<211> 18
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 66
tacatgagtt ggtgcagg 18
<210> 67
<211> 11
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 67
ccagaatggc a 11
<210> 68
<211> 16
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 68
gtaaccttta actcaa 16
<210> 69
<211> 11
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 69
taaaacaaaa c 11

Claims (36)

1.一种对单核苷酸多态性(SNP)或碱基插入或缺失(INDEL)进行基因分型以获得指示患者对IL-10或基于IL-10活性剂治疗的接受性的特征谱的方法，所述方法包括：
-将患者的细胞样品与促炎刺激物接触以引发IL-10诱导；
-测量来自细胞样品的TNF-α产生水平和IL-10诱导水平；
-选择表现出如下双重表型的患者样品：
响应IL-10或基于IL-10活性剂刺激的高TNF-α减少，和
低IL-10诱导；和
-对表现出双重表型的患者的全基因组进行测序以确定SNP和/或INDEL谱的存在。
2.权利要求1所述的方法，其中所述细胞样品是从外周血获得的。
3.权利要求1所述的方法，其中所述细胞样品是巨噬细胞。
4.权利要求1所述的方法，其中所述IL-10是IL-10衍生物。
5.权利要求1所述的方法，其中所述IL-10活性剂是IL-10融合蛋白，其中所述融合蛋白是与微型抗体或双链抗体融合的IL-10。
6.权利要求1所述的方法，其中所述促炎刺激物是脂多糖(LPS)。
7.权利要求1所述的方法，其中所述治疗用于炎性疾病。
8.权利要求1所述的方法，其中所述炎性疾病是炎性肠病(IBD)、克罗恩病或溃疡性结肠炎。
9.权利要求1所述的方法，其中患者是健康患者或患病患者。
10.权利要求1所述的方法，进一步包括选择表现出低或中等CD8+T细胞IFN-γ分泌的患者样品。
11.一种对单核苷酸多态性(SNP)或碱基插入或缺失(INDEL)进行基因分型以获得指示患者对IL-10或基于IL-10活性剂治疗的反应性的特征谱的方法，所述方法包括：
-使从患者获得的活化CD8+T细胞与一定量的IL-10或基于IL-10活性剂接触，以诱导IFN-γ的分泌；
-测量IFN-γ分泌水平；
-选择表现出CD8+T细胞的高和/或中等IFN-γ分泌表型的患者样品；和
-对表现出所述表型的患者的全基因组测序以确定SNP和/或INDEL谱的存在。
12.权利要求11所述的方法，其中所述CD8+T细胞是从外周血样品中纯化的。
13.权利要求12所述的方法，其中在用IL-10或基于IL-10活性剂刺激之前，用抗CD3抗体激活CD8+T细胞。
14.权利要求12所述的方法，其中所述IL-10是IL-10衍生物。
15.权利要求12所述的方法，其中所述IL-10活性剂是IL-10融合蛋白，其中所述融合蛋白是与微型抗体或双链抗体融合的IL-10。
16.权利要求11所述的方法，其中所述治疗用于癌症或自身免疫疾病/病症。
17.权利要求11所述的方法，其中患者是健康患者或患病患者。
18.权利要求11所述的方法，其中所述特征谱是表3和4中提供的基因和蛋白质表达谱。
19.一种治疗患有由IL-10或基于IL-10活性剂缓解的疾病或病症的患者的方法，所述方法包括
-对从患病患者获得的样品进行SNP/INDEL谱的遗传分析，其中所述SNP/INDEL谱与表型性状相关，在所述表型性状中巨噬细胞通过降低TNF-α水平对IL-10作出反应并响应LPS刺激而产生低量IL-10；
-选择具有所述SNP/INDEL谱的患者；和
-向所述患者施用治疗有效量的IL-10或基于IL-10活性剂。
20.一种治疗炎性肠病(IBD)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的IL-10或基于IL-10活性剂，其中所述患者具有与低IL-10产生和高IL-10反应性相关的SNP/INDEL谱，其中所述高IL-10反应性通过单核细胞的TNF-β分泌减少来衡量。
21.权利要求20所述的方法，其中所述低IL-10产生从响应促炎刺激的单核细胞/巨噬细胞测量。
22.权利要求20所述的方法，其中高IL-10反应性被测量为IL-10减少TNF-α分泌的能力。
23.权利要求19所述的方法，其中所述IBD是克罗恩病或溃疡性结肠炎。
24.一种确定受试者是否可能或不太可能对IL-10或基于IL-10活性剂治疗有反应的方法，所述方法包括：针对SNP或INDEL谱，对患者细胞样品进行测序，所述SNP或INDEL谱指示TNF-α产生减少和低IL-10诱导，其中减少的TNF-β产生是对基于IL-10的刺激的反应，而低IL-10诱导是对促炎刺激的反应。
25.一种治疗炎性疾病的方法，包括向有需要的受试者施用IL-10或基于IL-10活性剂，其中通过遗传分析，该受试者具有与如下双重表型相关的单核苷酸多态性(SNP)或碱基插入或缺失(INDEL)谱：响应基于IL-10的刺激的高TNF-α减少和响应促炎刺激的低IL-10诱导。
26.权利要求25所述的方法，其中所述双重表型由单核细胞/巨噬细胞展示。
27.权利要求25所述的方法，其中所述促炎刺激物是脂多糖(LPS)。
28.权利要求25所述的方法，其中炎性疾病是IBD、克罗恩病、溃疡性结肠炎。
29.一种治疗患有由IL-10或基于IL-10活性剂缓解的疾病或病症的患者的方法，所述方法包括：
-对从患病患者获得的样品进行SNP/INDEL谱的遗传分析，其中所述SNP/INDEL谱与活化的CD8+T细胞响应IL-10或基于IL-10活性剂刺激的高和/或中等分泌IFN-γ分泌表型性状相关；
-选择具有所述SNP/INDEL谱的患者；和
-向所述患者施用治疗有效量的IL-10或基于IL-10活性剂。
30.权利要求29所述的方法，其中所述谱基于表3和4中提供的基因和蛋白质表达标签。
31.一种治疗癌症的方法，包括向有需要的患者施用治疗有效量的IL-10或基于IL-10活性剂，其中所述患者具有基于表3和表4提供的表达谱的表9和10中的SNP/INDEL谱。
32.一种确定受试者是否可能或不太可能对IL-10或基于IL-10活性剂治疗作出反应的方法，所述方法包括：针对SNP或INDEL谱，对患者细胞样品进行测序，其中所述SNP或INDEL谱指示CD8+T细胞的高和/或中和/或低IFN-γ分泌。
33.权利要求32所述的方法，其中所述治疗用于癌症或自身免疫疾病。
34.权利要求32所述的方法，其中所述谱基于表3和4中提供的基因表达标签。
35.权利要求32所述的方法，其中与CD8+T细胞的高和/或中IFN-γ分泌相关的SNP和/或INDEL谱指示对癌症治疗的反应性。
36.权利要求32所述的方法，其中与CD8+T细胞的低和/或中IFN-γ分泌相关的SNP和/或INDEL谱指示对自身免疫性疾病治疗的反应性。
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