CN115286550A - 一种用于治疗肥胖的化合物、组合物及其用途 - Google Patents

一种用于治疗肥胖的化合物、组合物及其用途 Download PDF

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CN115286550A CN202210880331.3A CN202210880331A CN115286550A CN 115286550 A CN115286550 A CN 115286550A CN 202210880331 A CN202210880331 A CN 202210880331A CN 115286550 A CN115286550 A CN 115286550A
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Abstract

本发明公开一种式I化合物及其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体。进一步的，本发明公开了化合物ZL001作为GLP‑1受体激动剂在制备预防和/或治疗肥胖中的用途。本发明研究结果证实，化合物ZL001具有显著的降低体重，减少体脂的效果，将其作为一种新型的治疗肥胖的药物具有潜在的科研价值和商业价值。
Figure DDA0003763976520000011

Description

一种用于治疗肥胖的化合物、组合物及其用途
技术领域
本发明属于医药化学领域，具体涉及一种用于治疗肥胖的化合物、组合物及其用途。
背景技术
肥胖是指一定程度的体内脂肪堆积而导致的一种身体状态。肥胖的发生和发展病理过程十分复杂，通常是多因素造成的肥胖，包括饮食、遗传因素、内分泌失调、压力、胰岛素抵抗等。近年来，肥胖在全球流行。世界卫生组织称，2016年有超过19亿成人超重，6.5亿多人肥胖，每年至少有280万人死亡可归咎于超重或肥胖，并呈现低龄化趋势。肥胖已然成为21世纪最重要的公共卫生问题之一。
研究表明，肥胖症与许多疾病的发生有关，例如心血管疾病、二型糖尿病、非酒精性脂肪肝、癌症等。2013年，美国医学会正式把肥胖症认定为一种疾病。因此预防和治疗肥胖已成为现代社会面临的主要健康挑战。
目前市场上仅有五种减肥药，分别是奥利司他、盐酸劳卡色林、芬特明/托吡酯复方制剂及降糖药物安非他酮纳曲酮缓释片和利拉鲁肽。减肥药在使用中副作用明显，比如奥利司他发生肠胃副作用的几率较高，很大程度上限制了药物使用。因此，开发一种作用效果明显，副作用小的减肥药非常符合市场需求。
发明人在前的专利CN 202110103556.3，报道了一种已知的化合物(以下命名为ZL001)，作为GLP-1R激动剂的作用。胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)可增强β细胞胰岛素分泌，还能通过作用于α细胞减少胰高血糖素分泌，进而减少肝糖输出，以及作用于中枢和胃，抑制食欲并减缓胃排空，从而降低β细胞负荷。因此GLP-1R受体激动剂是一种有效的降血糖药物。
发明内容
化合物ZL001是发明人在先发明专利CN 202110103556.3记载的化合物，其呈现出与GLP-1受体的相关性，能够有效刺激胰岛素分泌。基于ZL001可能是一种小分子GLP-1受体激动剂，并且相比于多肽类GLP-1受体激动剂具有可以口服，增加患者依从性的优势；而且相对于多肽类药物，小分子药物更容易透过血脑屏障，作用于下丘脑弓状核中的GLP-1R，而降低食欲，起到更优的减轻体重的效果。在本发明中，发明人对ZL001化合物作为GLP-1受体激动剂在治疗肥胖中的用途进行进一步探究。研究结果表明，ZL001具有显著的降低体重，减少体脂的效果，是一种新型的治疗肥胖的药物，具有潜在的科研意义和商业价值。
本发明的一个目的是提供一种化合物，以及包含所述化合物的药物组合物；本发明的另一个目的是提供一种所述化合物和药物组合物在制备治疗肥胖药物中的用途。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
第一方面，一种用于治疗肥胖式I化合物，或其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体，
Figure BDA0003763976500000021
R1选自氢、任选取代的C1-6烷基、-C(O)R4；
R2选自氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、-NH-R4；
R3选自氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的杂芳基、-C(O)R4；
R4选自H、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基；
R5、R6、R7、R8独立地选自卤原子、硝基、-COOR9、CONHR9、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基；
R9选自H，任选取代的C1-6烷基。
优选的，所述化合物结构式Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ所示：
Figure BDA0003763976500000031
R1为H，R2为甲基、乙基中的一种，R3为H；
Figure BDA0003763976500000032
Ra选自H、任选取代的C1-6烷基；
Figure BDA0003763976500000033
Rb选自H、任选取代的C1-6烷基。
在本发明的最优选实施方式中，所述化合物结构如下：
Figure BDA0003763976500000041
本发明将如上结构的化合物命名为ZL001，其CAS号为22862-76-6。
本发明所述的“任选取代”是指任意的H原子被羟基、卤原子、硝基、C1-4的烷基，C1-4的烷氧基所取代。
第二方面，本发明提供一种组合物，所述组合物中包含式I化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体，以及药剂学上可接受的辅料。
所述药剂学上可接受的辅料选自赋形剂、稳定剂、载体、矫味剂，溶剂、增溶剂、乳化剂、粘合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、渗透压调节剂、防腐剂、助悬剂、pH调节剂、缓冲剂、增稠剂、保湿剂、稀释剂中一种或两种以上的组合。
所述药物组合物可以制备成如下形式的药物制剂：片剂、胶囊剂、糖浆剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、霜剂、膏剂、凝胶剂、乳剂。
所述药物制剂优选为单位剂量制剂，单位剂量制剂中式Ⅰ所示的化合物，或其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体含量为0.01-1000mg，优选地，式Ⅰ所示的化合物，或其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体含量为1-100mg。
所述单位剂量制剂可以是包装好的制剂，诸如包装在瓶、袋、盒或者安瓿中的片剂、胶囊或者粉剂。单位剂量制剂可以是胶囊，片剂或者其可以是在包装形式中的适当数目的任何剂型。
第三方面，本发明提供一种式I化合物，或其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体和/或含有式I化合物，或其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体的组合物在制备预防和/或治疗肥胖的药物中的用途。
所述药物具有降低体重和体脂的作用。
进一步地，上述制备预防和/或治疗肥胖的药物中的用途中，式I化合物(其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体)，以及组合物的用量以式I化合物(其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体)计对人的剂量为1-10mg/kg/d，优选为2-5mg/kg/d。
在本发明的实践中，所述药物可通过经口给药方式进行给药。ZL001作为一种小分子的GLP-1R激动剂，相比于现有技术中多肽大分子的GLP-1R激动剂，具有更好的稳定性和对患者的依从性，非常适合口服给药。比如胶囊剂、颗粒剂、片剂、冲剂、丸剂、悬浮剂、糖浆剂、乳液剂、喷雾剂。但是其他非口服的给药方式也在本发明的实质内容中，比如注射、鞘内等给药方式。
ZL001分子量＜300，涉及ZL001化合物的专利已经到期。ZL001作为一种已知的p38MAPK和JNKs信号通路的工具药，其通过p38和JNK信号通路参与多种细胞活动，如细胞增殖与分化、凋亡等，暗示ZL001具有潜在的抗肿瘤活性，可用于抗肿瘤药物的开发。ZL001具有激动GLP-1受体的作用是发明人首次发现，可以作为GLP-1受体激动剂在药物中使用。基于ZL001的GLP-1受体激动剂作用，本发明提出了ZL001在制备治疗肥胖药物的新用途，并且通过实验验证发现ZL001具有显著的降低体重，减少体脂的效果，将其作为一种新型的治疗肥胖的药物具有潜在的科研价值和商业价值。
附图说明
图1ForteBio Octet分子互作检测ZL001与GLP-1R的亲和力结果；
图2在有或没有GLP-1R阻断剂Exendin(9-39)干预的情况下，ZL001对大鼠胰岛素分泌的影响；
图3不同剂量ZL001对C57BL/6小鼠葡萄糖耐量(OGTT)的影响；
图4GLP-1R基因敲除小鼠分别灌胃生理盐水、ZL001或皮下注射Liraglutide的血葡萄糖水平检测；
图5不同剂量的ZL001和利拉鲁肽对小鼠体重变化的影响；
图6不同剂量的ZL001和利拉鲁肽对小鼠体重百分比变化的影响；
图7不同剂量的ZL001和利拉鲁肽给药后小鼠照片；
图8不同剂量的ZL001和利拉鲁肽给药后小鼠CT图；
图9不同剂量的ZL001和利拉鲁肽给药后小鼠体脂比含量图；
图10不同剂量的ZL001和利拉鲁肽给药后小鼠附睾脂肪图片；
图11不同剂量的ZL001和利拉鲁肽给药后小鼠附睾脂肪重量。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1化合物ZL001与GLP-1受体的相关性验证
1、ForteBio Octet分子互作检测ZL001与GLP-1R的亲和力
构建大鼠GLP-1R载体：从NCBI中获取GLP-1R CDS区的mRNA序列，将全基因合成法与PCR技术连用，来获得大鼠GLP-1R的序列片段。琼脂糖凝胶电泳并切胶回收GLP-1R rat基因片段。将目的基因GLP-1R克隆到载体pEX-3中，用EcoRI和BamHI酶对PEX-3进行酶切，电泳，用DNA凝胶回收试剂盒回收载体pEX-3，将扩增好的片段克隆到线性化的pEX-3载体上。用氯化钙法制备感受态细胞。把重组连接产物转化为感受态细胞，挑取克隆菌落，小抽质粒并做鉴定挑出阳性克隆。重组质粒测序验证并大量抽提，取200ul的阳性克隆的菌液进行测序，并用甘油保存剩余的菌液，比对测序结果和目的基因序列，完全正确后，用剩余的菌液接菌至LB培养基，大量抽提至足够量的重组质粒。无细胞GLP-1R蛋白的表达：采用杭州谨澳生物科技Z1高保真DNA聚合酶G-POL-001或Z2超保真DNA聚合酶G-POL-002对目的基因进行扩增，TOB无细胞真核表达系统成功过表达目的蛋白，后用SDS-PAGE观测表达结果。Westernblot验证表达结果。
GLP-1R蛋白纯化与浓缩：1)构建N端含his-tag和Tev酶切位点的大鼠GLP-1R载体:采用杭州谨澳生物科技公司的QR分子克隆和诱变试剂盒，在已构建的GLP-1R质粒的目的基因片段的N端加6个his标签和Tev酶切位点，并将其亚克隆至PET载体，以此来构建新的大鼠GLP-1R载体。2)N端含His标签和Tev酶切位点的GLP-1R蛋白的表达及纯化：采用杭州谨澳生物科技有限公司的E.coli透析式无细胞蛋白表达体系成功表达GLP-1R蛋白；使用Histrap柱对目的蛋白进行纯化。获得纯化样品后，取3μl，上样至SDS-PAGE观测纯化结果。
使用杭州双天生物技术有限公司购入的Fortebio Octet RE96E检测仪来进行检测。1)纯化的GLP-1R蛋白的生物素化，按照1：1的摩尔比对目的蛋白进行生物素化。加入适量生物素化试剂于30℃水浴2h，反应结束后，用重力脱盐柱去除多余生物素，用PBS进行洗脱，来进行SSA芯片的固化。2)稀释化合物ZL001，用DMSO溶解ZL001，直至完全溶解，溶解后用PBST稀释100倍，再用1％DMSO+PBST稀释成100μM,用于后续检测。3)SSA芯片固化GLP-1R蛋白来检测ZL001，将21.2μM、42.4μM、84.8μM、169.5μM、339μM的ZL001溶液和相关试剂按照一定顺序加入样品板，设定仪器程序并运行。4)采用Fortebio data analysis 10.0软件来处理实验数据。
实验结果：对小分子(分子量<2kDa)来说，亲和力一般在10-4-10-7M。KD值体现了客观存在的亲和力水平。为了准确的计算化合物与GLP-1R的亲和力，实验选用了5个浓度点(21.2μM、42.4μM、84.8μM、169.5μM、339μM)来进行拟合。图1ForteBio Octet分子互作检测ZL001与GLP-1R的亲和力，ZL001与GLP-1R的结合是一个可逆的过程，二者的结合时间为60s，解离时间为60s，呈现快速结合和快速解离的特点。ZL001与GLP-1R的亲和力常数KD值为2.41×10-4。
2、胰岛素分泌试验
一、溶液配制：
1)Collagenase P的配制：称取50mg Collagenase P粉末和500mg BSA粉末于50mL无菌离心管内，在超净工作台内加入50mL RPMI 1640培养基溶解，混合均匀后即配制成1mg/mL Collagenase P。用0.22μm的无菌滤器过滤，每管10mL分装，密封后放置于-20℃冰箱中备用。
2)DispaseⅡ溶液的配制：称取50mg DispaseⅡ粉末于50mL离心管中，无菌状态下加入10mL PBS(含EDTA,无Ca2+、Mg2+)，混合均匀后即配制成5mg/mL的DispaseⅡ溶液。过滤，每管200μL分装，密封后放置于-20℃冰箱中备用。
3)EDTA溶液的配制：称取0.05583g EDTA粉末于50mL离心管中，无菌状态下加入50mL PBS(含EDTA,无Ca2+、Mg2+)，混匀后即配制成30mmol/L的EDTA溶液。过滤，每管1mL分装，密封后放置于-20℃冰箱中备用。
4)KRBH(Krebs-Ringer Bicarbonate HEPES)缓冲液的配制:128.8mmol/L NaCl，10HEPES，4.8KCl，2.5mmol/L CaCl2，1.2mmol/LKH2PO4，1.2mmol/L MgSO4，5mmol/L NaHCO3，调节溶液pH至7.4，根据实验需要添加2％BSA。
5)1mol/L葡萄糖的配制：称取9g葡萄糖粉末于50mL离心管中，无菌状态下加入50mL三蒸水，混合均匀。过滤，每管1mL分装，密封后放置于-20℃冰箱中备用。
6)含10％胎牛血清的1640培养基的配制：取500mL RPMI 1640培养基于超净工作台内，取出55mL后加入50mL胎牛血清和5mL 100×青链霉素混合液，充分摇匀后封口，置于4℃冰箱中备用。
二、大鼠胰岛组织的分离与培养
1)准备工作：a)打开恒温振荡器使之温度上升且保持至37℃，调节振荡频率至80r/min。b)于-20℃冰箱中取出Collagenase P至常温解冻后，抽至20mL注射器内，将PE导管连接在注射器针头处，排除空气后放至冰块上备用。c)准备无菌工作台，放置好实验所需的手术器械。
2)取雄性wistar大鼠处死，腹部用75％的乙醇酒精消毒后，用手术剪将腹部剖开至暴露出心脏。将大鼠转移至体视显微镜下找到胆总管，用止血钳夹住胆总管与十二指肠的交界处。在体式显微镜下游离胆总管，用眼科剪剪一“V”型小口以备插管。
3)将连有PE导管的注射器小心插入胆总管，将Collagenase P匀速注入胆总管，并将插管处结扎。
4)松开止血钳，将完整的胰腺剥离至培养皿中，去除杂质后倒入50mL离心管中，在恒温振荡器内消化11min。
5)于超净台内加入10mL含10％胎牛血清的1640培养基终止消化，再加入10mLHanks缓冲液(HBSS)，用力摇晃使管内混悬液呈泥沙状。350μm的滤网过滤至新的无菌50mL离心管内，3min,1200r离心。
6)弃上清，加入10mL Hitopaque-1077分离液，用移液枪将沉淀吹打均匀。再用10mL注射器吸取10mL RPMI 1640培养基，沿离心管壁匀速注入使之出现明显的分层。23min，3200r离心。
7)用移液枪吸取上清液于培养皿中，在体视显微镜下用10μL移液枪将胰岛挑至另一个含10％胎牛血清1640培养基的培养皿中，置37℃，5％CO2培养箱中培养。
三、实验步骤
1)实验前准备：①实验分为4组，Ep管编号(每组7个)；②配制KRBH溶液，置培养箱中孵育30min，用NaOH调制pH至7.4；③配制待测样品：11.1mmol/L葡萄糖溶液(11.1G)、11.1G+100nM Exendin(9-39)、11.1G+10μM ZL001、11.1G+10μM ZL001+100nM Exendin(9-39)。
2)正式实验：①向每个Ep管中加入500μL 2.8mmol/L葡萄糖溶液(2.8G)，在体式显微镜下挑取5个胰岛(大小均一，边缘光滑)至Ep管中，放至培养箱内孵育30min；②用移液枪将上清液吸出弃掉(注意不要吸走胰岛)，然后每组依次各加入500μL 11.1G、11.1G+100nMExendin(9-39)、11.1G+10μM ZL001、11.1G+100nM Exendin(9-39)+10μM ZL001，置培养箱中孵育30min；③用移液枪将上清液吸出至提前标记好的Ep管中，混匀，封口，并进行胰岛素(INS)放射免疫检测。
四、实验结果
实验结果如图2所示，在11.1G浓度下，Exendin(9-39)部分阻断了ZL001促胰岛素分泌作用，表明ZL001促胰岛素分泌作用与激动GLP-1R有关。
3、ZL001对C57BL/6小鼠血糖的影响
1)6周龄雄性C57BL/6小鼠，体重18～22g,购自于山西省人民医院实验动物中心，适应性饲养一周，每日正常饮食饮水；
2)实验前将小鼠以耳钉固定，进行分组和序号标记。随机分为以下3组：Control组：灌胃生理盐水；15mg/kg ZL001组：灌胃15mg/kg ZL001溶液；30mg/kg ZL001组：灌胃30mg/kg ZL001溶液。每组n＝6。
3)实验前一天将小鼠禁食12h，可自由饮水，并去除动物笼内木屑垫料；
4)实验当天，配制20％葡萄糖溶液：称量1g无水葡萄糖，溶于5ml无菌三蒸水，混匀，0.22μm滤器过滤除菌，现用现配；
5)配制ZL001溶液(5mg/ml)：称取ZL001，加入生理盐水，加入盐酸并用涡旋超声至均一溶液，然后用NaOH调整PH至6.8-7，现配现用。
6)称量小鼠空腹体重；
7)按照实验设计，分别灌胃生理盐水或ZL001，操作动作轻柔，避免反复刺激小鼠。每组小鼠分别给予葡萄糖溶液(2g/Kg)进行灌胃，操作动作轻柔，避免反复刺激小鼠。灌胃后，分别在0分钟(基线水平)、15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟采集尾静脉血进行血葡萄糖水平检测。以血糖仪分别检测不同时间点的血葡萄糖水平，并进行统计处理。
实验结果如图3所示，与control组比较，ZL001给药组在给予口服葡萄糖后，对糖负荷的耐受出现不同程度的提高，其中30mg/kg ZL001比15mg/kg ZL001降糖效果更明显。
4GLP-1R基因敲除小鼠的口服葡萄糖耐量试验
1)GLP-1R-/-小鼠，购自于赛业生物科技公司，适应性饲养一周，每日正常饮食饮水；
2)实验前将小鼠以耳钉固定，进行分组和序号标记。GLP-1R-/-+saline组：给予GLP-1R-/-小鼠灌胃生理盐水；GLP-1R-/-+ZL001组：给予GLP-1R-/-小鼠灌胃30mg/kg ZL001溶液；GLP-1R-/-+Liraglutide组：给予GLP-1R-/-小鼠皮下注射0.2mg/kg Liraglutide溶液。每组n＝4。
3)实验前一天将小鼠禁食12h，可自由饮水，并去除动物笼内木屑垫料；
4)实验当天，配制20％葡萄糖溶液：称量1g无水葡萄糖，溶于5ml无菌三蒸水，混匀，0.22μm滤器过滤除菌，现用现配；
5)配制ZL001溶液(5mg/ml)：称取ZL001，加入生理盐水，加入盐酸并用涡旋超声至均一溶液，然后用NaOH调整PH至6.8-7；配制Liraglutide溶液(0.04mg/ml)：称取Liraglutide，加入三蒸水，超声至完全溶解。ZL001和Liraglutide溶液都是现配现用
6)称量小鼠空腹体重；
7)按照实验设计，分别灌胃生理盐水、ZL001或皮下注射Liraglutide，操作动作轻柔，避免反复刺激小鼠。每组小鼠分别给予葡萄糖溶液(2g/Kg)进行灌胃，操作动作轻柔，避免反复刺激小鼠。灌胃完成后，分别在0分钟(基线水平)、15分钟、30分钟、60分钟、90分钟、120分钟采集尾静脉血进行血葡萄糖水平检测。以血糖仪分别检测不同时间点的血葡萄糖水平，并进行统计处理。
实验结果如图4所示，当小鼠GLP-1R被敲除后，ZL001、Liraglutide对小鼠血糖的影响与生理盐水组无显著差异，说明化合物ZL001和已知的GLP-1R激动剂Liraglutide作用基本相同，表明化合物ZL001为GLP-1R激动剂。
实施例2化合物ZL001对小鼠体重和体脂的影响
主要材料与试剂
Figure BDA0003763976500000111
主要实验仪器
Figure BDA0003763976500000112
Figure BDA0003763976500000121
动物与实验分组
雄性C57/BL6小鼠，24周龄，体重30-33g，适应性喂养一周后，喂食普通饲料，给予生理盐水(CD组)。
雄性DIO小鼠(高脂造模20周)，24周龄，体重50-55g，DIO小鼠喂食高脂饲料，根据体重、血糖均匀原则将DIO小鼠分成4组，给药9周：
Figure BDA0003763976500000122
QD表示每天给药1次，BID表示每天给药2次。
1、化合物ZL001对小鼠体重的影响
体重是判断个体肥胖的直观指标。在给药期间，每天对5组小鼠进行称重，记录实验期间小鼠体重变化趋势，结果如图5-7所示。CD组小鼠的体重在实验过程中明显低于HFD组；HFD组小鼠体重相对稳定且保持组间最高。HFD+ZL001 30mg/kg/BID组和HFD+ZL00150mg/kg/BID组小鼠的体重显著低于HFD组和利拉鲁肽组，并且给药剂量大的一组小鼠(HFD+ZL001 50mg/kg/BID组)体重下降更显著。综上说明，化合物ZL001呈浓度依赖性降低小鼠体重。图5和图6是进行了用药剂量爬坡实验，50mg/kg BID剂量组初始爬坡剂量是15mg/kgQD，经过20mg/kg BID至最终剂量50mg/kg BID；30mg/kg BID剂量组初始爬坡剂量是30mg/kg QD。可以看出，化合物ZL001对HFD饲养小鼠在10-100mg/kg/d的剂量下是能够起到减重作用，优选在30-50mg/kg/d的剂量，按照基于体表面积折算法，化合物ZL001对人达到减肥的有效剂量为1-10mg/kg/d，优先为2-5mg/kg/d。
2、化合物ZL001对小鼠体脂的影响
给药完成后，进行小鼠体脂测定。将小鼠放入麻醉箱，用1.8％异氟烷气体全身麻醉2.5min(用于全身麻醉诱导及维持)，将麻醉后的小鼠放入小动物PET/CT，用胶布固定躯体和四肢；进行扫描；体脂比计算公式：脂肪体积*脂肪密度(0.9)/小鼠体重。
PET-CT检测小鼠体脂的图像结果及数据统计结果如图8和图9所示，HFD组体脂显著高于CD组，与HFD组小鼠体脂相比，利拉鲁肽组、HFD+ZL001 30mg/kg/BID组和HFD+ZL00150mg/kg/BID组小鼠体脂水平均有所降低，并且给予ZL001组的小鼠体脂明显低于利拉鲁肽组，ZL001高剂量组(HFD+ZL001 50mg/kg/BID组)效果更显著，说明ZL001呈浓度依赖性减少小鼠的体脂，结果与化合物ZL001对体重的影响是一致的。
3、化合物ZL001对小鼠附睾脂肪组织的影响
小鼠处死后，收集附睾脂肪组织称重。图10和11可见，HFD组与CD组相比附睾脂肪较大、较重，与HFD组相比，利拉鲁肽组、HFD+ZL001 30mg/kg/BID组和HFD+ZL00150mg/kg/BID组小鼠附睾脂肪体积均较小，其中HFD+ZL001 50mg/kg/BID组小鼠附睾脂肪体积和重量最接近CD组。
实施例3以化合物ZL001为活性成分的注射剂的制备
S1：配液，取100mg化合物ZL001溶于20mL氯化钠注射液中，配成药物浓度为5mg/mL的药液；
S2：活性炭处理，向药液中加入溶液总量0.2％的针用活性炭吸附处理0.5小时；
S3：初滤，用滤纸将药液进行过滤；
S4：过滤除菌，用孔径为0.22μm的微孔滤膜对药液进行除菌，除热源；
S5：以2mL为单位对药液进行分装，灌封，得到注射液。
实施例4化合物ZL001为活性成分的片剂的制备
S1：将化合物ZL001 100g按递增法添加乳糖200g的方法混合研磨80min，然后混入微晶纤维素30g和山梨醇10g再次研磨30min，研磨温度低于30℃，得到药物-乳糖混合物；
S2：将混合物投入到湿法制粒机混合5min，按制剂重量每千克4ml的比例取吐温-80(溶于95％乙醇中)，然后与0.5％聚维酮K30水溶液按1:20的混合作为黏合剂加到湿法颗粒机混合物中进行制粒；
S3：向S2制得的颗粒中混合加入硬脂酸镁，压片机硬度控制在4-5kgf法以内，压片得到片剂1000片。

Claims (10)

1.一种用于治疗肥胖的式I化合物，及其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体，
Figure FDA0003763976490000011
R1选自氢、任选取代的C1-6烷基、-C(O)R4；
R2选自氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、-NH-R4；
R3选自氢、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基、任选取代的C6-12芳基、任选取代的杂芳基、-C(O)R4；
R4选自H、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基；
R5、R6、R7、R8独立地选自卤原子、硝基、-COOR9、CONHR9、任选取代的C1-6烷基、任选取代的C1-6烷氧基；
R9选自H，任选取代的C1-6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物结构为式Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ所示：
Figure FDA0003763976490000012
R1为H，R2为甲基、乙基中的一种，R3为H；
Figure FDA0003763976490000021
Ra选自H、任选取代的C1-6烷基；
Figure FDA0003763976490000022
Rb选自H、任选取代的C1-6烷基。
3.根据权利要求2所述的化合物，其特征在于，所述化合物结构如下：
Figure FDA0003763976490000023
4.一种药物组合物，所述组合物中包含权利要求1所述的式I化合物或者权利要求2所述的式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ化合物，或者权利要求3所述的化合物ZL001，及其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体，以及药剂学上可接受的辅料。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药剂学上可接受的辅料选自赋形剂、稳定剂、载体、矫味剂，溶剂、增溶剂、乳化剂、粘合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、渗透压调节剂、防腐剂、助悬剂、pH调节剂、缓冲剂、增稠剂、保湿剂、稀释剂中一种或两种以上的组合。
6.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物可以制备成如下形式的药物制剂：片剂、胶囊剂、糖浆剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、霜剂、膏剂、凝胶剂、乳剂。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述药物制剂优选为单位剂量制剂，单位剂量制剂中式Ⅰ所示的化合物含量为0.001-1000mg。
8.权利要求1所述的式I化合物，或者权利要求2所述的式Ⅱ、式Ⅲ、式Ⅳ化合物，或者权利要求3所述的化合物ZL001，或权利要求4-7任一所述的药物组合物在制备预防和/或治疗肥胖的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物的剂量按照式I化合物(其药学上可接受的盐、氘代化合物、溶剂合物、立体异构体)计，对人的剂量为1-10mg/kg/d，优选为2-5mg/kg/d。
10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物通过静脉输注、口服、局部、腹膜内、鞘内给药方式进行给药；优选为口服给药。
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