CN115282098B - 一种具有抑菌和去屑功效的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及日用化妆品领域，具体涉及一种具有抑菌和去屑功效的组合物及其制备方法和应用。本发明提供的具有抗菌和去屑功效的组合物的制备方法，包括如下步骤：S1、将远志根和栝楼根加入至液体发酵培养基中，得到植物发酵培养基；S2、将约氏乳杆菌种子液接入至步骤S1所述的植物发酵培养基中发酵培养，得到植物发酵液；S3、对步骤S2所述的植物发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有抑菌和去屑功效的组合物。本发明提供一种具有抑菌和去屑功效的组合物，具有良好的抑制马拉色菌、去屑、止痒和清洁效果，且本发明提供的组合物对人体安全和环境无害，有利于环保。

Description

一种具有抑菌和去屑功效的组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及日用化妆品领域，具体涉及一种具有抑菌和去屑功效的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
在头皮相关的各种疾病中，头皮屑是常见且频发的头皮疾病，全世界约有50%的成年人受到头皮屑的影响，男性也比女性更普遍。头皮屑开始于青春期，在大约 20 岁时达到发病率和严重程度的峰值，在超过50 岁的人群中变得较少流行。皮肤医学领域将头皮屑称之为“头皮糠疹”，临床表现为头皮或头发上过多的细小灰白色干燥或稍油腻的糠秕样屑片，大多数情况下伴随瘙痒症状。目前对于头皮屑的具体发病机制及其生化改变尚不完全清楚，但多数研究表明，微生物学因素及局部免疫反应在头皮屑的发病过程中起到了主要作用，健康的头皮生态环境由三大平衡维持：油脂、菌群和代谢平衡。当头皮油脂分泌失衡，头皮就会出油变得油腻。当头皮菌群环境失衡，有害菌如马拉色菌、葡萄球菌大量滋生，就会出现头痒的现象。而头皮角质层代谢过快，脱落就形成头屑，有害菌过多，就会造成头皮角质层代谢过快，脱落的头屑就会增多。
目前，市面上去屑洗发水的种类较多。去屑洗发水中的主要去屑成分为化学物质，如吡硫鎓锌（ZPT）、吡罗克酮乙醇胺盐（OCT）、己脒定二（羟乙基磺酸）盐等，上述去屑成分不仅对头皮和眼睛的刺激性较大，对水生环境有较强危害，且去屑效果不尽如人意。
中国专利CN104622764B公开了一种去屑香波组合物，该发明提供的去屑香波组合物，采用天然植物来源的肉桂油，当归蒿本内酯，木香油去屑混合物替代现有的化学小分子作为抑菌剂。中国专利申请CN107822970A公开了一种去屑精华液及其制备方法，包括：水：100份；金属螯合剂：0.01-0.1份；活性物：0.0001-0.05份；去屑剂：0.1-0.8份；保湿剂：1-5份；乳化剂：0.01-0.1份；香精：0.005-0.01份；赋脂剂：0.1~2份；防腐剂：0.2-0.5份；pH调节剂：加入量为调节去屑精华液的pH值为4.5-7.0。上述的洗护产品中虽然添加了部分植物提取物，但是其添加的提取物由每一植物单独提取得到，每一植物的提取工艺均不相同，导致去屑组合物的制备工艺十分繁琐，并且去屑止痒效果不甚理想，长期使用，对于其是否会对人体产生刺激性及副作用的情况不得而知。
因此，有必要研制一种从天然植物中提取的组合物，能够具有优异的抑菌、去屑、止痒等功效，同时应用于洗护产品中安全性高，对人体无刺激性、无副作用。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种具有抑菌和去屑功效的组合物及其制备方法和应用。本发明提供的具有抑菌和去屑功效的组合物具有很好的去屑功效，抑菌止痒效果优异，且安全无副作用，对皮肤无刺激。
一种具有抑菌和去屑功效的组合物的制备方法，包括如下步骤：
S1、将远志根和栝楼根加入至液体发酵培养基中，得到植物发酵培养基；
S2、将约氏乳杆菌种子液接入至步骤S1所述的植物发酵培养基中发酵培养，得到植物发酵液；
S3、对步骤S2所述的植物发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有抑菌和去屑功效的组合物。
可选的，在一些实施方式中，在进行所述将约氏乳杆菌种子液接入至所述植物发酵培养基中发酵，得到植物发酵液的步骤之前，还可以包括制备约氏乳杆菌种子液：
将约氏乳杆菌种配制成约氏乳杆菌悬液；
将所述约氏乳杆菌悬液接种于固体培养基活化培养，得到活化的约氏乳杆菌；
将所述活化的约氏乳杆菌接种至种子培养基中进行扩培，得到所述约氏乳杆菌种子液。
可选的，在一些实施方式中，所述固体培养基为MRS琼脂培养基、营养琼脂培养基、LB肉汤培养基中的至少一种；优选为MRS琼脂培养基；
所述种子培养基选自MRS肉汤培养基、M17培养基、LBS培养基、酵母膏培养基、麦芽汁液体培养基中的至少一种；优选为MRS肉汤培养基。
可选的，在一些实施方式中，所述约氏乳杆菌的菌种编号为GDMCC 1.730，所述约氏乳杆菌购于广东省微生物菌种保藏中心。
可选的，在一些实施方式中，约氏乳杆菌悬液活化培养的温度为30~40℃，优选为37℃；
约氏乳杆菌悬液活化培养的时间为24~72h，优选为48h；
活化的约氏乳杆菌在种子培养基的扩培温度为30~40℃，优选为37℃；
活化的约氏乳杆菌在种子培养基的扩培时间为24~72h，优选为48h；
可选的，在一些实施方式中，约氏乳杆菌种子液的菌种浓度在107~1010 CFU/mL之间。
可选的，在一些实施方式中，所述步骤S2中约氏乳杆菌种子液的接种量为植物发酵液质量的0.5~3%，优选为1%。
可选的，在一些实施方式中，所述步骤S1中远志根和栝楼根占所述植物发酵液的总质量的0.5~5%；优选为2%；
所述远志根和栝楼根质量比为1~5：1；优选为3：1。
可选的，在一些实施方式中，所述液体发酵培养基包括水、碳源、氮源和无机盐；
所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、糊精中的至少一种，优选为蔗糖；所述碳源的加入量为液体发酵培养基质量的0.5~3%，优选为1.5%；
所述氮源选自大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米浆中的至少一种，优选为酵母膏；所述氮源的加入量为液体发酵培养基质量的0.2~2%，优选为1%；
所述无机盐选自NaCl、Na2HPO4、NaH2PO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4中的至少一种，优选为KH2PO4；所述无机盐的加入量为液体发酵培养基质量的0.1~0.6%，优选为0.25%。
可选的，在一些实施方式中，所述步骤S2中的发酵培养的温度为30~40℃，优选为36℃；
所述发酵时间为24 h~72 h，优选为48h；
发酵培养时搅拌桨的转速为50~350 r/min；优选为150 r/min；
可选的，在一些实施方式中，在所述对步骤S2所述的植物发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有抑菌和去屑功效的组合物的步骤中：
所述灭活处理的温度为60~90℃，所述灭活处理的时间为15~30min；
所述纯化处理包括对所述植物发酵液进行过滤去渣和/或过微滤膜；所述过滤去渣是指利用板框压滤机过滤去渣；所述过微滤膜的步骤包括将所述发酵液依次经过10 μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱以除去所述植物发酵液的杂质。
本发明还提供一种具有抑菌和去屑功效的组合物，所述具有抑菌和去屑功效的组合物采用如前所述的制备方法制备得到。
本发明还提供一种具有抑菌和去屑功效的组合物的应用，尤其是在发用护理产品中的应用。
在本发明中，具有抑菌和去屑功效的组合物在发用护理产品中的质量百分比为0.5~10%。
远志，又名葽绕、蕀蒬等。远志为多年生草本，主根粗壮，韧皮部肉质。具有安神益智、祛痰、消肿的功能，用于心肾不交引起的失眠多梦、健忘惊悸，神志恍惚，咳痰不爽，疮疡肿毒，乳房肿痛。远志根提取物富含皂苷类、口山酮和寡糖酯，具有益智安神、镇静催眠、抑菌抗炎、抗氧化、抗衰老的作用。
栝楼是一种传统中药材。整个干果实入药称为全栝楼，有润肺祛痰、滑肠散结功效。栝楼果实中含皂甙、有机酸、脂肪油等，有润肺祛痰、利气宽胸作用。栝楼可以治疗咳嗽痰粘，胸闷作痛。栝楼制剂治冠心病心绞痛有一定疗效。现代研究表明，栝楼提取物富含三萜皂苷、生物碱、黄酮、多糖等有效成分，具有显著的抑菌作用，对细菌和真菌均有较好的抑制效果，并可扩张血管，改善微循环，增加血流量。
本发明通过将远志根和栝楼根按照特定比例与约氏乳杆菌共同发酵，得到的组合物富含活性物质，可以有效抑制马拉色菌，具有优异的去屑、止痒功效，可以应用在发用护理产品中。与此同时，本发明选用约氏乳杆菌对远志根和栝楼根共生发酵，得到的组合物安全性高，对人体无副作用，无刺激性且对环境无污染。
本发明提供的制备方法制备得到的具有抑菌和去屑功效的组合物具有如下的优点及功效：
（1）本发明提供的制备方法得到的组合物中富含远志根和栝楼根中的活性物质。采用约氏乳杆菌发酵远志根和栝楼根得到的组合物的抗菌效果和去屑效果优于水提法和醇提法。
（2）本发明提供的制备方法中将远志根和栝楼根与约氏乳杆菌种共生发酵，不仅避免了单独将每一种植物进行发酵，大大简化了制备工艺，缩短制程时间，降低生产成本，而且两种植物之间存在协同作用得到的组合物的效果优于单一植物发酵的效果。
（3）本发明提供的具有抑菌和去屑功效的组合物的制备过程不使用任何有机溶剂，对人体安全和环境无害，有利于环保。
附图说明
为了更清楚地说明本发明中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明提供的实施例和对比例的马拉色菌的抑制效果图。
图2为本发明提供的实施例和对比例的去屑效果图。
图3为本发明提供的实施例和对比例的止痒效果图。
图4为本发明提供的实施例和对比例的清洁效果图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的保护范围之内。
以下实施例和对比例中，未作特别说明的试剂为常规试剂，均可在常规试剂生产销售公司购买。
实施例1
一种具有抗菌和去屑功效的组合物的制备方法，包括如下步骤：
1）制备约氏乳杆菌种子液
将约氏乳杆菌溶于无菌水制成约氏乳杆菌悬液，移取10 μL约氏乳杆菌悬液在MRS琼脂培养基表面划线，活化培养，培养温度37℃，培养时间48 h，获得活化后的约氏乳杆菌。
将活化后的约氏乳杆菌通过接种环接种至MRS肉汤培养基的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度为37℃。培养48 h后，得到约氏乳杆菌种子液。在种子液中，约氏乳杆菌的浓度约为108CFU/mL。
2）制备植物发酵培养基
将质量分数为液体发酵培养基1.5%的蔗糖、质量分数为液体发酵培养基1%的酵母膏、质量分数为液体发酵培养基0.25%的KH2PO4和质量分数为液体发酵培养基97.25%的水加入至锥形瓶中，混合均匀，得到液体发酵培养基。
称取1.5kg干燥的远志根、0.5kg干燥的栝楼根，打碎，过60目筛网，注入97kg的液体发酵培养基，将发酵罐密闭，升温至121℃，保持30 min进行灭菌处理，然后降温至室温，得到植物发酵培养基。
3）制备植物发酵液
1kg的约氏乳杆菌接种至植物发酵培养基中，在36℃、自然pH、搅拌桨的转速为150r/min下发酵48 h，得到植物发酵液。
4）对植物发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有抑菌和去屑功效的组合物
在80℃的条件下对植物发酵液进行灭活处理，灭活处理的时间为20min。待植物发酵液完成降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10 μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱除杂质，得到抑菌和去屑功效的组合物。
实施例2
将实施例1中1.5kg干燥的远志根、0.5kg干燥的栝楼根改为1.0kg干燥的远志根、1.0 kg干燥的栝楼根，其余的步骤与实施例1均相同。
实施例3
将实施例1中1.5kg干燥的远志根、0.5kg干燥的栝楼根改为0.5kg干燥的远志根、1.5 kg干燥的栝楼根，其余的步骤与实施例1均相同。
实施例4
将实施例1步骤3）中发酵温度为36℃改为37℃，其余的步骤与实施例1均相同。
实施例5
将实施例1步骤3）中发酵温度为36℃改为35℃，其余的步骤与实施例1均相同。
实施例6
一种具有抗菌和去屑功效的组合物的制备方法，包括如下步骤：
1）制备约氏乳杆菌种子液
将约氏乳杆菌溶于无菌水制成约氏乳杆菌悬液，移取10 μL约氏乳杆菌悬液在营养琼脂培养基表面划线，活化培养，培养温度36℃，培养时间60 h，获得活化后的约氏乳杆菌。
将活化后的约氏乳杆菌通过接种环接种至M17培养基的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度为36℃。培养48 h后，得到约氏乳杆菌种子液。在种子液中，约氏乳杆菌的浓度约为107CFU/mL。
2）制备植物发酵培养基
将质量分数为液体发酵培养基2.0%的葡萄糖、质量分数为液体发酵培养基1.2%的大豆蛋白胨、质量分数为液体发酵培养基0.2%的Na2HPO4和质量分数为液体发酵培养基96.6%的水加入至锥形瓶中，混合均匀，得到液体发酵培养基。
称取1.5kg干燥的远志根、0.5kg干燥的栝楼根，打碎，过60目筛网，注入97kg的液体发酵培养基，将发酵罐密闭，升温至121℃，保持30 min进行灭菌处理，然后降温至室温，得到植物发酵培养基。
3）制备植物发酵液
1kg的约氏乳杆菌接种至植物发酵培养基中，在37℃、自然pH、搅拌桨的转速为200r/min下发酵36 h，得到植物发酵液。
4）对植物发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有抑菌和去屑功效的组合物
在70℃的条件下对植物发酵液进行灭活处理，灭活处理的时间为30min。待植物发酵液完成降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10 μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱除杂质，得到抑菌和去屑功效的组合物。
实施例7
一种具有抗菌和去屑功效的组合物的制备方法，包括如下步骤：
1）制备约氏乳杆菌种子液
将约氏乳杆菌溶于无菌水制成约氏乳杆菌悬液，移取10 μL约氏乳杆菌悬液在LB肉汤培养基表面划线，活化培养，培养温度38℃，培养时间36h，获得活化后的约氏乳杆菌。
将活化后的约氏乳杆菌通过接种环接种至酵母膏培养基的发酵摇瓶中进行扩培，培养温度为38℃。培养48 h后，得到约氏乳杆菌种子液。在种子液中，约氏乳杆菌的浓度约为109CFU/mL。
2）制备植物发酵培养基
将质量分数为液体发酵培养基2%的麦芽糖、质量分数为液体发酵培养基1.8%的胰蛋白胨、质量分数为液体发酵培养基0.3%的K2HPO4和质量分数为液体发酵培养基95.9%的水加入至锥形瓶中，混合均匀，得到液体发酵培养基。
称取1.5kg干燥的远志根、0.5kg干燥的栝楼根，打碎，过60目筛网，注入97kg的液体发酵培养基，将发酵罐密闭，升温至121℃，保持30 min进行灭菌处理，然后降温至室温，得到植物发酵培养基。
3）制备植物发酵液
1kg的约氏乳杆菌接种至植物发酵培养基中，在37℃、自然pH、搅拌桨的转速为250r/min下发酵40 h，得到植物发酵液。
4）对植物发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有抑菌和去屑功效的组合物
在90℃的条件下对植物发酵液进行灭活处理，灭活处理的时间为15min。待植物发酵液完成降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10 μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱除杂质，得到抑菌和去屑功效的组合物。
对比例1
采用水提法制备远志根和栝楼根的提取液
称取干燥的远志根1.5kg，干燥的栝楼根0.5kg，用粉碎机打碎，过60目筛网，加入水至总质量为100kg。在90℃、匀速150 r/min搅拌条件下提取6 h。待提取液降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10 μm、5.0 μm及2.5 μm的聚丙烯微滤膜滤柱除去杂质，得到远志根和栝楼根的提取液。
对比例2
采用醇提法制备远志根和栝楼根的提取液
称取干燥的远志根1.5kg，干燥的栝楼根0.5kg，用粉碎机打碎，过60目筛网，加入70%的乙醇至总质量为100kg。在90℃、匀速150 r/min搅拌条件下提取6 h。待提取液降温至25℃后，利用板框压滤机过滤，将滤液再依次经过10μm、5.0μm及2.5μm的聚丙烯微滤膜滤柱除去杂质，得到远志根和栝楼根的提取液。
对比例3
将实施例1中1.5kg干燥的远志根、0.5kg干燥的栝楼根改为2kg干燥的远志根，其余的步骤与实施例1均相同。
对比例3与实施例1的区别在于：对比例3仅用远志根进行发酵。
对比例4
将实施例1中1.5kg干燥的远志根、0.5kg干燥的栝楼根改为2kg干燥的栝楼根，其余的步骤与实施例1均相同。
对比例4与实施例1的区别在于：对比例4仅用栝楼根进行发酵。
对比例5
将实施例1中0.5kg干燥的栝楼根改为0.5kg干燥的栝楼籽，其余的步骤与实施例1均相同。
对比例5与实施例1的区别在于：对比例5用栝楼籽与远志根共生发酵。
对比例6
将实施例1中的约氏乳杆菌更换为酿酒酵母菌（菌种编号：GDMCC 2.36，购于广东省微生物保藏中心），将实施例1中的在MRS琼脂培养基改为马铃薯葡萄糖琼脂培养基，MRS肉汤培养基改为马铃薯液体培养基，其余的步骤与实施例1均相同。
对比例6与实施例1的区别在于：对比例6用酿酒酵母菌发酵远志根和栝楼根。
对比例7
将实施例1中的约氏乳杆菌更换为植物乳杆菌（菌种编号：GDMCC 1.1516，购于广东省微生物保藏中心），其余的步骤与实施例1均相同。
对比例7与实施例1的区别在于：对比例7用植物乳杆菌发酵远志根和栝楼根。
试验例一、皮肤刺激性测试
1. 试验对象：本发明实施例1-5和对比例1-7（配置成10%的水溶液）。
2. 试验方法：依据《化妆品安全技术规范》（2015年版）中的标准进行试验，具体方法如下：
准备满足试验条件的白色家兔48只（每一样品使用4只白色家兔），于试验前将家兔背部脊椎两侧的被毛剪掉（去毛范围各为3 cm *3 cm）。
取受试物0.5 mL涂抹在一侧皮肤上（涂抹面积为2.5 cm*2.5 cm），另一侧不作处理作为对照。每天涂抹一次，连续涂抹14天。从第二天开始，每次涂抹前剪毛。用纯水清除残留受试物。1 h后观察结果。
按《化妆品安全技术规范》（2015年版）的皮肤刺性/腐蚀性试验表1评分，对照区和试验区同样处理。
3. 结果评价：按下列公式计算每天家兔每只家兔平均积分，按《化妆品安全技术规范》（2015年版）的皮肤刺激性/腐蚀性试验表2判定家兔皮肤刺激强度。试验中观察皮肤是否有皮肤刺激性以外的其他症状。
每天每只动物平均积分=（∑红斑和水肿积分/受试动物数）/14
4. 本发明实施例和对比例制得的组合物对皮肤的刺激性测试结果如表3所示。
表1 皮肤刺激反应评分
皮肤反应 积分
红斑和焦痂形成
无红斑 0
轻微红斑（勉强可见） 1
明显红斑 2
中度-重度红斑 3
严重红斑（紫红色）至轻微焦痂形成 4
水肿形成
无水肿 0
轻微水肿（勉强可见） 1
轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚） 2
中度水肿（皮肤隆起约lmm) 3
重度水肿（皮肤隆起超过lmm,范围扩大） 4
最高积分 8
表2 皮肤刺激性强度分级
积分均值 强度
0 ~< 0.5 无刺激性
0.5~< 2.0 轻刺激性
2.0~< 6.0 中刺激性
6.0 ~ 8.0 强刺激性
表3
样品（10%水溶液） 每天每只动物积分均值 刺激性强度
对照组 0 无刺激
实施例1 0.13 无刺激
实施例2 0.21 无刺激
实施例3 0.16 无刺激
实施例4 0.23 无刺激
实施例5 0.18 无刺激
对比例1 0.20 无刺激
对比例2 0.72 轻刺激
对比例3 0.34 无刺激
对比例4 0.25 无刺激
对比例5 0.35 无刺激
对比例6 0.42 无刺激
对比例7 0.26 无刺激
如表3所示，实施例1-5和对比例1、3-7的组合物或提取物均是无刺激性，对比例2的提取物是轻刺激性。
试验例二、马拉色菌抑制率测试
1. 试验对象：以本发明实施例1-5和对比例1-7（配置成3%的水溶液）作为试验样品。
2. 试验方法：依据《QBT 2738-2012(7.3)-日化产品抗菌抑菌效果的评价方法》对本发明的实施例的组合物或对比例的提取物进行马拉色菌抑菌测试。
在无菌条件下，用PBS液将马拉色菌悬液稀释，浓度为1×104cfu/mL~9×104cfu/mL。将本发明实施例1-5和对比例1-7稀释至3%的水溶液。吸取稀释后的本发明实施例1-5和对比例1-7的3%的水溶液5mL分别放入灭菌试管中，20℃恒温30min。吸取试验菌液0.1mL加入至5mL样品的试管中，并计时。作用至设定时间后（5min），取试验菌与样品的混合液0.5mL加入至4.5mL的中和剂中，混合均匀，中和10min后，吸取样液至培养基中培养48h，计算活菌菌落数。以PBS代替试验样品，重复上述步骤，作为对照样品。
所述中和剂的制备方法如下：取吐温-80 20g、硫代硫酸钠10g，PBS溶剂1000ml，混合均匀即得。
所述抑菌率（%）的计算公式如下：
抑菌率（%）=（Ⅰ-Ⅱ/Ⅰ）×100
式中：Ⅰ为对照样品平均菌落数；Ⅱ为试验样品平均菌落数
3. 本发明实施例和对比例制得的组合物的马拉色菌抑菌率试验结果如表4和图1所示。
表4
样品 抑菌率（%）
实施例1 95.3
实施例2 93.5
实施例3 92.3
实施例4 94.1
实施例5 94.6
对比例1 15.4
对比例2 32.8
对比例3 55.7
对比例4 46.4
对比例5 73.5
对比例6 36.7
对比例7 68.1
如图1和表4所示，实施例1-5抑制马拉色菌效果要优于对比例1和2，说明以微生物发酵方式制备远志根和栝楼根的组合物的抑菌效果优于水提法和醇提法制备得到的提取物。实施例1-5抑制马拉色菌效果优于对比例3-5，说明远志根和栝楼根共生发酵存在协同作用，两者共同发酵得到的组合的效果优于其中一种植物的效果，也优于栝楼籽与远志根共生发酵的效果。实施例1-5抑制马拉色菌效果优于对比例6和7，说明选用约氏乳杆菌的发酵效果最优。对比实施例1-3的结果可知，远志根和栝楼根的质量比为3:1时，发酵效果最好。对比实施例1、4、5的结果可知，在本发明中，在36℃的条件下发酵效果最好。
试验例三、去屑效果测试
1. 试验对象：将实施例1-5，对比例1-7的组合物或提取物。将实施例1-5对比例1-7制备成洗发香波，作为本次测试的样品。所述洗发香波的配方如表5所示。
表5
原料 加入量（质量百分比%）
实施例1-5，对比例1-7的组合物或提取物，或以去离子水代替（空白对照） 3
月桂醇聚醚硫酸酯钠 8
椰油酰胺甲基MEA 4
月桂酰胺丙基甜菜碱 6
十二烷基苯磺酸钠 2
柠檬酸 适量
苯甲酸钠 1
氯化钠 0.1~0.5(依据粘度进行调整)
香精 适量
去离子水 至100
所述洗发香波的制备方法如下
将去离子水加入至主锅中，加热至60℃，加入十二烷基苯磺酸钠并不断搅拌至全部溶解。保持温度在60~65℃，在搅拌的条件下加入月桂醇聚醚硫酸酯钠、椰油酰胺甲基MEA、月桂酰胺丙基甜菜碱至全部溶解。降温至40℃以下加入实施例1-5，对比例1-7的组合物或提取物、空白对照组、香精、苯甲酸钠，搅拌均匀。用柠檬酸调节pH至5.5~6.0。用氯化钠调节粘度，所述粘度（25℃，mPa.s）为5000-6000。冷却至室温，脱泡过滤，出料，得到洗发香波。
2. 志愿者的选取：130名；年龄在19至50岁；头皮具有较多的头屑；志愿者进行试验前3个月不得进行染发。
3. 试验方法：130名志愿者自行使用本发明提供的洗发香波（每10位志愿者使用一款洗发香波，其中10志愿者使用空白对照的洗发香波），每次使用量至少一枚一元硬币大小，可根据头发量与长度自行取用，每2天使用1次。在使用前和使用4周后进行回访，评价洗发香波的效果。
评价的效果包括：去屑效果、止痒效果、清洁效果，从没有效果（0分）至效果显著（10分）进行打分。
5. 采用本发明实施例和对比例制得的洗发香波的使用效果如表6和图2~4所示。
表6
组别 去屑效果 止痒效果 清洁效果
空白对照 1.8 3.2 4.7
实施例1 9.2 8.7 8.6
实施例2 9.0 8.7 8.3
实施例3 8.8 8.5 8.4
实施例4 8.9 8.3 8.0
实施例5 9.0 8.5 8.4
对比例1 3.2 4.6 5.1
对比例2 4.0 5.2 5.3
对比例3 5.3 6.6 6.5
对比例4 4.9 6.3 7.0
对比例5 7.1 7.6 7.3
对比例6 5.7 6.5 6.8
对比例7 7.2 7.4 7.6
如表6和图2-4所示，实施例1-5和对比例1-7的效果均优于空白对照组，说明加入植物提取物的洗发香波具有去屑、止痒和清洁的效果。其中，实施例1-5的去屑、止痒和清洁的效果优于对比例1-2，说明以微生物发酵方式制备远志根和栝楼根的组合物的抑菌效果优于水提法和醇提法制备得到的提取物。实施例1-5的去屑、止痒和清洁的效果优于对比例3~5，说明远志根和栝楼根共生发酵存在协同作用，两者共同发酵得到的组合的效果优于其中一种植物的去屑、止痒和清洁效果，也优于栝楼籽与远志根共生发酵的去屑、止痒和清洁效果。实施例1~3的去屑、止痒和清洁的效果优于对比例6和7，说明选用约氏乳杆菌的发酵效果去屑、止痒和清洁效果最优。对比实施例1-3可知，远志根和栝楼根的质量比为3:1时，组合物的去屑、止痒和清洁的效果最优。对比实施例1、4、5可知，当发酵温度为36℃时，组合物的去屑、止痒和清洁的效果最优。
综上，本发明将干燥的远志根和栝楼根，用约氏乳杆菌共生发酵，最终制备得到的组合物对马拉色菌具有很好的抑制效果，同时，将本发明提供的具有抑菌和去屑功效的组合物，应用于发用护理产品中，添加的质量百分比为0.5~10%时，
具有很好的去屑、止痒和清洁的效果，且本发明提供的组合物对人体安全和环境无害，有利于环保。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (4)

1.一种具有抑菌和去屑功效的组合物的制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
S1、将远志根和栝楼根加入至液体发酵培养基中，得到植物发酵培养基；
S2、将约氏乳杆菌种子液接入至步骤S1所述的植物发酵培养基中发酵培养，得到植物发酵液；
S3、对步骤S2所述的植物发酵液进行灭活处理和纯化处理，得到具有抑菌和去屑功效的组合物；
所述步骤S1中的远志根和栝楼根的质量比为1~5：1；
所述步骤S1中的远志根和栝楼根占所述植物发酵液的总质量的0.5~5%；
所述步骤S1中的液体发酵培养基包括水、碳源、氮源和无机盐；
所述碳源选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、糊精中的至少一种；所述碳源的加入量为液体发酵培养基质量的0.5~3%；
所述氮源选自大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米浆中的至少一种；所述氮源的加入量为液体发酵培养基质量的0.2~2%；
所述无机盐选自NaCl、Na2HPO4、NaH2PO4、KCl、K2HPO4、KH2PO4中的至少一种；所述无机盐的加入量为液体发酵培养基质量的0.1~0.6%；
所述步骤S2中的发酵培养的温度为30~40℃；所述发酵时间为24 h~72 h；发酵培养时搅拌桨的转速为50~350 r/min；
所述步骤S2中约氏乳杆菌种子液的制备方法，包括如下步骤：
将约氏乳杆菌种配制成约氏乳杆菌悬液；
将所述约氏乳杆菌悬液接种于固体培养基活化培养，得到活化的约氏乳杆菌；
将所述活化的约氏乳杆菌接种至种子培养基中进行扩培，得到所述约氏乳杆菌种子液；
所述固体培养基为MRS琼脂培养基、营养琼脂培养基、LB肉汤培养基中的至少一种；所述种子培养基选自MRS肉汤培养基、M17培养基、LBS培养基、酵母膏培养基、麦芽汁液体培养基中的至少一种；
所述约氏乳杆菌悬液活化培养的温度为30~40℃，活化培养的时间为24~72h；
所述活化的约氏乳杆菌在种子培养基的扩培温度为30~40℃，扩培时间为24~72h；
所述约氏乳杆菌种子液的菌种浓度在107~1010 CFU/mL之间；
所述步骤S2中约氏乳杆菌种子液的接种量为植物发酵液质量的0.5~3%；
所述步骤S3中，所述灭活处理的温度为60~90℃，所述灭活处理的时间为15~30min；
所述纯化处理包括对所述植物发酵液进行过滤去渣和/或过微滤膜；
所述过滤去渣是利用板框压滤机过滤去渣；
所述过微滤膜的步骤包括将所述发酵液依次经过10μm、5.0μm及2.5μm的聚丙烯微滤膜滤柱以除去所述植物发酵液的杂质。
2.如权利要求1所述的具有抑菌和去屑功效的组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中的远志根和栝楼根的质量比为3：1。
3.一种如权利要求1或2所述的制备方法制得的具有抑菌和去屑功效的组合物。
4.一种如权利要求3所述的组合物在制备具有抑菌和去屑功效的发用护理产品中的应用。
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