CN115232784A - 一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物及其用于体外心肌细胞的容量超负荷模型制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物及其用于体外心肌细胞的容量超负荷模型制备方法，诱导心肌细胞容量超负荷的药物为盐酸多巴胺，所述心肌细胞的细胞系为HL‑1心肌细胞系；本发明的药物使用该药物浓度该作用时间可模仿体内心脏容量超负荷，解决了心脏容量超负荷缺乏体外模型的问题，从而为基因、分子、细胞层面深入阐述心脏容量超负荷内在机制提供了基础；另外操作简单，药物易获得；能够实现模拟体内心脏容量超负荷。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物及其用于体外心肌细胞的容量超负荷模型制备方法。
背景技术
心脏超负荷是心力衰竭的常见重要诱因。心脏负荷分为两种类型，即容量负荷和压力负荷。容量负荷是心肌收缩之前所承受的负荷，相当于心室舒张末期容量或压力，又称前负荷；压力负荷是心肌收缩时所遇到的阻力，即心室射血时所要克服的压力，又称后负荷。容量负荷和压力负荷影响的心脏信号通路不同。在小鼠模型中，主动脉结扎术和主动脉瓣反流术通常用于模拟心脏压力超负荷和容量超负荷。在细胞层面，使用血管紧张素2等药物可以模拟心肌压力超负荷，然而容量超负荷却没有体外模型。为了进一步在基因、分子、细胞等水平阐明容量超负荷的内在机制，有必要建立一套体外模拟容量超负荷的细胞培养模型，从而通过离体实验，找到各种因素所致容量超负荷的详细分子机制，为临床上处治容量超负荷引起的心衰提供新的方法，并丰富相关理论学说。
发明内容
本发明提供了一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物及其用于体外心肌细胞的容量超负荷模型制备方法，以解决现有技术的上述问题。
本发明的方案是：
一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物，诱导心肌细胞容量超负荷的药物为盐酸多巴胺，所述心肌细胞的细胞系为HL-1心肌细胞系。
作为优选的技术方案，通过调节所述盐酸多巴胺浓度为50-500uM，来控制作用与用细胞时间为3-48小时。
作为优选的技术方案，所述盐酸多巴胺浓度浓度为250uM，作用于细胞时间为12小时。
本发明还公开了一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物用于体外心肌细胞的容量超负荷模型制备方法，包括下列步骤：
1)使用培养基重悬细胞，得到均匀细胞悬液；
2)将细胞悬液铺入12细胞培养孔板并摇匀；
3)待细胞增殖至70％密度时，吸出培养液并用PBS清洗一遍，换用无血清的培养基培养24小时以上；
4)加入盐酸多巴胺浓度为250uM的无血清DMEM培养基，加药后12小时即得到体外心肌细胞的容量超负荷模型。
作为优选的技术方案，所述步骤1)的培养基为5％～10％FBS+DMEM培养基，所述细胞为HL-1心肌细胞。
作为优选的技术方案，所述步骤3)中无血清的培养基为0.1％FBS+DMEM培养基。
本发明还一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物用于体外心肌细胞的容量超负荷模型的用途。
由于采用了上述技术方案一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物及其用于体外心肌细胞的容量超负荷模型制备方法，诱导心肌细胞容量超负荷的药物为盐酸多巴胺，所述心肌细胞的细胞系为HL-1心肌细胞系。
本发明的优点：
本发明的药物使用该药物浓度该作用时间可模仿体内心脏容量超负荷，解决了心脏容量超负荷缺乏体外模型的问题，从而为基因、分子、细胞层面深入阐述心脏容量超负荷内在机制提供了基础；另外操作简单，药物易获得；能够实现模拟体内心脏容量超负荷。
附图说明
图1为本发明实施例2实验的超负荷模型各组对比图，其中，Ctrl组为体外容量超负荷模型对照组；DA为体外容量超负荷模型盐酸多巴胺组；Sham组为体内容量超负荷模型假手术组；AR组为体内容量超负荷模型主动脉反流组。
具体实施方式
为了弥补以上不足，本发明提供了一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物及其用于体外心肌细胞的容量超负荷模型制备方法以解决上述背景技术中的问题。
一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物，诱导心肌细胞容量超负荷的药物为盐酸多巴胺，所述心肌细胞的细胞系为HL-1心肌细胞系。
通过调节所述盐酸多巴胺浓度为50-500uM，来控制作用与用细胞时间为3-48小时。
所述盐酸多巴胺浓度浓度为250uM，作用于细胞时间为12小时。
本发明还公开了一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物用于体外心肌细胞的容量超负荷模型制备方法，包括下列步骤：
1)使用培养基重悬细胞，得到均匀细胞悬液；
2)将细胞悬液铺入12细胞培养孔板并摇匀；
3)待细胞增殖至70％密度时，吸出培养液并用PBS清洗一遍，换用无血清的培养基培养24小时以上；
4)加入盐酸多巴胺浓度为250uM的无血清DMEM培养基，加药后12小时即得到体外心肌细胞的容量超负荷模型。
所述步骤1)的培养基为5％～10％FBS+DMEM培养基，所述细胞为HL-1心肌细胞。
所述步骤3)中无血清的培养基为0.1％FBS+DMEM培养基。
本发明还一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物用于体外心肌细胞的容量超负荷模型的用途。
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1：
1、使用5％FBS+DMEM培养基重悬HL1细胞，得到均匀细胞悬液；
2、将细胞悬液铺入Thermo 12细胞培养孔板并摇匀；
3、待细胞增殖至70％密度时，吸出培养液并用PBS清洗一遍，换用0.1％FBS+DMEM培养24小时以上；
4、加入盐酸多巴胺浓度为250uM的无血清DMEM培养基，加药后12小时即得到体外心肌细胞的容量超负荷模型。
实施例2：
1、使用10％FBS+DMEM培养基重悬HL1细胞，得到均匀细胞悬液；
2、将细胞悬液铺入12细胞培养孔板并摇匀；
3、待细胞增殖至70％密度时，吸出培养液并用PBS清洗一遍，换用无血清的DMEM培养24小时以上；
4、加入盐酸多巴胺浓度为250uM的无血清DMEM培养基，加药后12小时即得到体外心肌细胞的容量超负荷模型。
5、提取细胞RNA，并逆转录获取cDNA，使用qRT-PCR的方法验证：将细胞系的表达基因与小鼠主动脉反流模型(体内心脏容量超负荷模型)的表达基因对比，其结果呈现相似趋势(见图1)。
通过对比，认为本发明建模结果可靠，本发明通过盐酸多巴胺建立的体外心肌细胞的容量超负荷模型解决了心脏容量超负荷缺乏体外模型的问题。以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (7)
1.一种诱导心肌细胞容量超负荷的药物，其特征在于：诱导心肌细胞容量超负荷的药物为盐酸多巴胺，所述心肌细胞的细胞系为HL-1心肌细胞系。
2.如权利要去1所述诱导心肌细胞容量超负荷的药物，其特征在于：通过调节所述盐酸多巴胺浓度为50-500uM，来控制作用与用细胞时间为3-48小时。
3.如权利要求2所述的所述诱导心肌细胞容量超负荷的药物，其特征在于：所述盐酸多巴胺浓度浓度为250uM，作用于细胞时间为12小时。
4.一种制备如权利要求1或2所述的诱导心肌细胞容量超负荷的药物用于体外心肌细胞的容量超负荷模型方法，其特征在于，包括下列步骤：
1)使用培养基重悬细胞，得到均匀细胞悬液；
2)将细胞悬液铺入12细胞培养孔板并摇匀；
3)待细胞增殖至70％密度时，吸出培养液并用PBS清洗一遍，换用无血清的培养基培养24小时以上；
4)加入盐酸多巴胺浓度为250uM的无血清DMEM培养基，加药后12小时即得到体外心肌细胞的容量超负荷模型。
5.如权利要求4所述的诱导心肌细胞容量超负荷的药物用于体外心肌细胞的容量超负荷模型方法，其特征在于：所述步骤1)的培养基为5％～10％FBS+DMEM培养基，所述细胞为HL-1心肌细胞。
6.如权利要求2所述的诱导心肌细胞容量超负荷的药物用于体外心肌细胞的容量超负荷模型方法，其特征在于：所述步骤3)中无血清的培养基为0.1％FBS+DMEM培养基。
7.一种如权利要求1或2所述的诱导心肌细胞容量超负荷的药物用于体外心肌细胞的容量超负荷模型的用途。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant |