CN115227711A - 一种利用红外光增加小干扰rna序列在皮肤中生物活性的给药方法 - Google Patents
一种利用红外光增加小干扰rna序列在皮肤中生物活性的给药方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种利用红外光增加小干扰RNA序列在皮肤中生物活性的给药方法，包括以下步骤：(1)将脂质体溶于优化培养液中，静置；(2)将小干扰RNA序列溶于优化培养液中，静置；(3)将步骤(1)和步骤(2)的溶液混合，静置；(4)将步骤(3)的溶液溶解于载体溶液中；(5)对皮肤需要给药位置，使用一定剂量红外光照射后，将步骤(4)所述溶液均匀涂在照射位置上；所述红外光波长范围为1500nm‑2000nm。本发明利用红外光照射皮肤，增加小干扰RNA序列对皮肤的生物学活性，为临床使用小干扰RNA序列治疗皮肤疾病建立基础，可以使患者得到更有效的治疗。
Description
本申请是申请日为2016年12月29日、申请号为201611243422.7、发明名称为“一种利用红外光增加小干扰RNA序列在皮肤中生物活性的给药方法”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及利用一定波段的红外光增加小干扰RNA序列在皮肤中生物学效应的给药方法。
背景技术
一些小干扰RNA已经被证明可以用来治疗如皮肤黑素瘤、先天性厚甲、皮肤炎症、皮肤癌等皮肤疾病。但是由于胃肠道中复杂的生理环境，最终会导致RNA序列降解，而且生物大分子很难通过胃肠道膜。静脉注射的给药方法，会造成病人极强的疼痛感，同时RNA序列在到达皮肤前，还会被代谢或者排泄。一次这些传统的给药方法都没有显著疗效。目前最常用的皮肤给药方法是直接将RNA序列给到皮肤，从而调控原位的皮肤组织的基因表达，从而起到治疗效果。
由于角质层以及表皮层的紧密结构，是药物的通透性大幅降低的重要因素。所以提高皮肤的通透性，从而使RNA序列进入皮肤起到治疗效果，显得尤为重要。目前比较研究比较多的提高皮肤通透性的方法主要分为化学性增强剂和物理学增强剂。化学性增强剂是使用纳米材料、脂质体等从而提高RNA序列对皮肤的通透性。这类增强剂对RNA序列的长度，结构要求很高，同时制备工艺繁琐复杂。研究比较热门的物理性增强剂有微针给药，电学给药等方法。但微针给药和电学给药会给病人造成极大的疼痛感。
至今在对于运用激光增强RNA序列对皮肤通透性的研究方面，没有任何报道称可以运用激光有效地提升RNA序列在皮肤中的生物活性。这些生物活性只有通过RNA沉默目标蛋白的含量检测、目标蛋白产生的荧光检测等方法才能够获得证明。
发明内容
本发明的目的是克服上述现有技术的不足，提出一种可以有效、显著地提升外源性RNA序列在皮肤中的生物活性的方法，具有重大的临床意义。
本发明人研究发现，皮肤经过红外光照射后，显著增加小干扰RNA序列对皮肤产生生物学作用。该作用通过RNA沉默目标蛋白的含量检测、目标蛋白产生的荧光的检测获得了证明。因此，本发明基于这一全新发现，突破了现有技术的难题，找到了一种可以提高小干扰RNA序列对皮肤生物学效应的方法。
本发明的具体技术方案是：一种利用红外光增加小干扰RNA序列在皮肤中生物活性的给药方法，包括以下步骤：
(1)将脂质体溶于优化培养液中，静置；
(2)将小干扰RNA序列溶于优化培养液中，静置；
(3)将步骤(1)和步骤(2)的溶液混合，静置；
(4)将步骤(3)的溶液溶解于载体溶液中；
(5)对皮肤需要给药位置，使用一定剂量红外光照射后，将步骤(4)所述溶液均匀涂在照射位置上；所述红外光波长范围为1500nm-2000nm。
进一步的，所述脂质体与优化培养液的比例，可以根据给药效果调节。
进一步的，所述小干扰RNA序列与优化培养液的比例，可以根据给药效果调节。
进一步的，所述脂质体与小干扰RNA序列的比例，可以根据给药效果调节。
进一步的，所述所有静置时间，可以根据给药效果调节。
本发明利用红外光照射皮肤，增加小干扰RNA序列对皮肤的生物学活性，为临床使用小干扰RNA序列治疗皮肤疾病建立基础，可以使患者得到更有效的治疗。
附图说明
图1荧光标记的小干扰RNA序列进入皮肤的荧光三视图。
图2荧光标记的小干扰RNA序列进入皮肤的荧光投影图。
图3小干扰RNA序列使目标蛋白的表达量降低。
图4小干扰RNA序列降低经过紫外光照射后损伤的生物效应图。
具体实施方式
下面将通过具体描述，对本发明作进一步的说明。
除非另有限定，本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解相同的含义。
确定了红外光可以增加小干扰RNA序列在皮肤中生物活性，建立了一种新型的皮肤小干扰RNA序列给药治疗方法。
根据本发明，使用雄性C57小鼠，重量在15-25g范围之间，RNA序列给药完成后，小鼠在动物房中进行饲养，条件为22-24℃，12小时的明/暗循环，并可自由进食取水。
24小时内，使用激光共聚焦显微镜对使用荧光标记的RNA序列的小鼠皮肤进行成像。
24小时内，检测使用目标蛋白的RNA序列的小鼠皮肤进行目标蛋白含量分析。
24小时内，对小鼠皮肤进行紫外光损伤，检测使用RNA序列的生物学效果。
皮肤组织的储存：皮肤取出后，取出适量组织浸泡于4％多聚甲醛，用于制作石蜡切片，剩余组织用铝箔纸包裹好，使用液氮冷冻，之后转移到-80℃冰箱长期保存。
针对皮肤目标蛋白含量，进行量化。
统计分析：所有数据按照平均值±标准差的方式给出，数据使用单因素方差分析进行评估，P值小于0.05认为是统计学显著的。
小鼠实验的结果如下所述：
图1：荧光标记的小干扰RNA序列进入皮肤的荧光三视图，用红外光处理的皮肤，荧光标记的小干扰RNA序列进入了更多。
图2：荧光标记的小干扰RNA序列进入皮肤的荧光投影图，用红外光处理的皮肤，荧光标记的小干扰RNA序列进入了更多。
图3：用红外光处理的皮肤，目标蛋白表达量显著下降。
图4：不用红外光处理的皮肤，对于损伤没有保护效果。用红外光处理的皮肤之后，小干扰RNA序列对皮肤损伤具有保护效果。
由以上实验可以得出，皮肤经过红外光照射后，增加小干扰RNA序列对皮肤产生生物学作用。因此，可以使用这种方法进行更有效的皮肤疾病治疗。
本发明基于这一发现，建立了一种利用红外光增加小干扰RNA序列在皮肤中生物活性的给药方法。该方法包括以下步骤：
(1)将脂质体溶于优化培养液中，静置一定时间；
(2)将小干扰RNA序列溶于优化培养液中，静置一定时间；
(3)将步骤(1)和步骤(2)的溶液混合，静置一定时间；
(4)将步骤(3)的溶液溶解于载体溶液中；
(5)对皮肤需要给药位置，使用一定剂量红外光照射后，将步骤(4)所述溶液均匀涂在照射位置上；所述红外光的波长范围为1500nm-2000nm。
本发明小干扰RNA序列配制方法中，所述小干扰RNA序列与优化培养液的比例，可以根据给药效果调节。
本发明小干扰RNA序列配制方法中，所述脂质体与优化培养液的比例，可以根据给药效果调节。
本发明小干扰RNA序列配制方法中，所述小干扰RNA序列与脂质体的比例，可以根据给药效果调节。
本发明是基于运用一定波段的红外光照射皮肤，从而显著地提高脂质体和小干扰RNA序列的混合物对皮肤的生物学效应。该作用通过RNA沉默目标蛋白的含量检测、目标蛋白产生的荧光的检测等方法获得了证明。该方法可以显著增加小干扰RNA序列治疗皮肤疾病的效果。
本领域的技术人员应当明了，尽管为了举例说明的目的，本文描述了本发明的具体实施方式，但可以对其进行各种修改而不偏离本发明的精神和范围。因此，本发明的具体实施方式和实施例不应当视为限制本发明的范围。本发明仅受所附权利要求的限制。本申请中引用的所有文献均完整地并入本文作为参考。
Claims (2)
1.一种产品的用途，所述产品含小干扰RNA序列的混合物和微波照射装置，其特征在于，用于制备治疗皮肤疾病的装置；其中，所述的混合物采用以下方法制备：
(1)将脂质体溶于优化培养液中，静置；
(2)将小干扰RNA序列溶于优化培养液中，静置；
(3)将步骤(1)和步骤(2)的溶液混合，静置；
(4)将步骤(3)的溶液溶解于载体溶液中，从而制得所述混合物；
所述微波照射的波长范围为1500nm-2000nm。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的皮肤疾病为紫外光损伤。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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