CN115201182A - 一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法 - Google Patents

一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115201182A
CN115201182A CN202210831767.3A CN202210831767A CN115201182A CN 115201182 A CN115201182 A CN 115201182A CN 202210831767 A CN202210831767 A CN 202210831767A CN 115201182 A CN115201182 A CN 115201182A
Authority
CN
China
Prior art keywords
growth factor
placenta growth
antibody
diluent
placenta
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202210831767.3A
Other languages
English (en)
Inventor
蒋小龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Chengdu Siruido Medical Technology Co ltd
Original Assignee
Chengdu Siruido Medical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chengdu Siruido Medical Technology Co ltd filed Critical Chengdu Siruido Medical Technology Co ltd
Priority to CN202210831767.3A priority Critical patent/CN115201182A/zh
Publication of CN115201182A publication Critical patent/CN115201182A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
    • G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Plasma & Fusion (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本申请提供一种胎盘生长因子检测试剂盒，其能够用于检测胎盘生长因子，属于检测技术领域。胎盘生长因子检测试剂盒包括：胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液。吖啶标记的胎盘生长因子抗体液中包括两种阻断剂。采用本申请的胎盘生长因子检测试剂盒配合化学发光免疫分析技术可用于检测待测物中的胎盘生长因子，胎盘生长因子检测试剂盒将抗体‑抗原反应的高度特异性与吖啶发光的高度灵敏性结合起来，利用吖啶发光反应产生的光子以检测产物浓度。并且，胎盘生长因子检测试剂盒利用两种阻断剂进行联合使用，减少了假阴/假阳性结果，从而达到提高试剂抗干扰的能力，提高检测结果的稳定性和准确性。

Description

一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长 因子的方法
技术领域
本申请涉及检测技术领域，具体而言，涉及一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。
背景技术
胎盘生长因子(PLGF)最早于1991年由Maglione等从人的胎盘cDNA文库中分离纯化而得。PLGF主要由合体滋养层细胞合成，可与位于滋养层细胞和血管内皮细胞的酪氨酸酶受体结合，是一个对滋养层细胞功能有自分泌作用和对血管生长有旁分泌作用的蛋白。PLGF对滋养层细胞和内皮细胞功能有独特的调节作用，能够促进新生血管生成。检测孕妇血液PLGF水平在临床上可用于识别胎盘合体滋养层细胞存在供氧压力，对子痫前期进行预测、鉴别和治疗监测。
发明内容
本申请提供了一种胎盘生长因子检测试剂盒，其能够用于检测胎盘生长因子，并且提高抗干扰能力。
本申请的实施例是这样实现的：
在第一方面，本申请示例提供了一种胎盘生长因子检测试剂盒，其包括：胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液。
吖啶标记的胎盘生长因子抗体液中包括两种阻断剂。
在上述技术方案中，采用本申请的胎盘生长因子检测试剂盒配合化学发光免疫分析技术可用于检测待测物中的胎盘生长因子，胎盘生长因子检测试剂盒将抗体-抗原反应的高度特异性与吖啶发光的高度灵敏性结合起来，利用吖啶发光反应产生的光子以检测产物浓度。并且，胎盘生长因子检测试剂盒利用两种阻断剂进行联合使用，减少了假阴/假阳性结果，从而达到提高试剂抗干扰的能力，提高检测结果的稳定性和准确性。
结合第一方面，在本申请的第一方面的第一种可能的示例中，上述两种阻断剂满足以下条件a～d中的一种：
a、两种阻断剂包括菲鹏生物阻断剂HIER-E-001，以及菲鹏生物阻断剂HIER-E-010、HIER-E-013和HIER-E-100中的一种；
b、两种阻断剂包括菲鹏生物阻断剂HIER-E-010，以及菲鹏生物阻断剂HIER-E-010-D、HIER-E-013和HIER-E-100中的一种；
c、两种阻断剂包括菲鹏生物阻断剂HIER-E-001，以及Scantibodies阻断剂HBR-PLUS、HBR-1、HBR-27和HBR Pro-1中的一种；
d、两种阻断剂包括菲鹏生物阻断剂HIER-E-010，以及Scantibodies阻断剂HBR-PLUS、HBR-1、HBR-27和HBR Pro-1中的一种。
结合第一方面，在本申请的第一方面的第二种可能的示例中，上述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液包括生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液或胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液。
第二方面，本申请示例提供了一种上述的胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法，其包括：分别制备胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液，然后将胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液分装后组装成胎盘生长因子检测试剂盒。
在上述技术方案中，本申请的制备方法简便，制得的胎盘生长因子检测试剂盒性能稳定，可配合化学发光免疫分析技术用于检测待测物中的胎盘生长因子。
结合第二方面，在本申请的第二方面的第一种可能的示例中，上述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液通过以下方法制得：
将链霉亲和素磁微粒悬液和生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体混合反应30～60min后，制得第一中间物，再将第一中间物和第一封闭剂混合反应30～60min后，制得胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液，胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液为生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液。
链霉亲和素磁微粒悬液包括链霉亲和素磁微粒和第一稀释剂，第一稀释剂为包括牛血清白蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚的5～20mmol/L的PBS缓冲液；
第一封闭剂为0.1～0.5wt％生物素缓冲液。
可选地，第一稀释剂中牛血清白蛋白的浓度为0.1～1wt％。
可选地，第一稀释剂中聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.01～0.05wt％。
可选地，链霉亲和素磁微粒和生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体的质量比为10:0.02～0.2。
结合第二方面，在本申请的第二方面的第二种可能的示例中，上述生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体通过以下方法制得：
将生物素酯的二甲基亚砜溶液和胎盘生长因子单克隆抗体混合反应30～60min后，制得第二中间物，再将第二中间物和第一终止剂混合反应10～30min后，制得第三中间物，将第三中间物经PBS透析12～24h后，制得生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体。
第一终止剂为0.5～1mol/L的Tris缓冲液。
结合第二方面，在本申请的第二方面的第三种可能的示例中，上述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液通过以下方法制得：
将羧基磁微粒悬液和第二稀释剂混合反应30～45min后，制得第四中间物，再将第四中间物和胎盘生长因子单克隆抗体混合反应2～3h后，制得第五中间物，将第五中间物和第二封闭剂混合反应30～45min后，制得胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液，胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液为胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液。
羧基磁微粒悬液包括羧基磁微粒和第一稀释剂，第一稀释剂为包括牛血清白蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚的5～20mmol/L的PBS缓冲液。
第二稀释剂为25mmol/L的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐缓冲液。
第二封闭剂为25mmol/L的氨基乙酸缓冲液。
可选地，羧基磁微粒和胎盘生长因子单克隆抗体的质量比为10:0.02～0.2。
结合第二方面，在本申请的第二方面的第四种可能的示例中，上述吖啶标记的胎盘生长因子抗体液通过以下方法制得：将胎盘生长因子单克隆抗体和吖啶溶液混合避光反应30～60min后，制得第六中间物，再将第六中间物和第二终止剂混合避光反应10～30min，制得第七中间物，将第七中间物经脱盐柱纯化制得第八中间物，将第八中间物和第四稀释剂混合制得吖啶标记的胎盘生长因子抗体液。
第二终止剂为0.1～1wt％赖氨酸缓冲液。
第四稀释剂为包括酪蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚、阻断剂的5～20mmol/L的PBS缓冲液。
可选地，第四稀释剂中酪蛋白的浓度为0.1～1wt％。
可选地，第四稀释剂中聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.01～0.05wt％。
可选地，第四稀释剂中每种阻断剂的浓度为0.01～0.1wt％。
第三方面，本申请示例提供了一种利用上述的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子的方法，其包括：将待测物、胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液混合，并经第一次孵育后制得免疫复合物，再将免疫复合物与预激发液、激发液混合，经第二次孵育后进入到化学发光免疫分析仪检测其发光信号值。
在上述技术方案中，本申请检测胎盘生长因子的方法简便且快速，准确性高。
结合第三方面，在本申请的第三方面的第一种可能的示例中，上述第一次孵育包括在37℃下孵育10～30min，第二次孵育包括在37℃下孵育2～5min。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本申请实施例的第一种胎盘生长因子检测试剂盒的制备流程图；
图2为本申请实施例的第二种胎盘生长因子检测试剂盒的制备流程图；
图3为本申请实施例的胎盘生长因子检测试剂盒的检测流程图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本申请的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
发明人发现，现有的胎盘生长因子检测试剂盒采用双抗体夹心法的原理进行检测目标物，会受到较多干扰的影响，增加非特异反应，导致假阴/假阳性结果。
干扰是体外诊断检测试剂应用过程中造成测量误差的重要原因，主要来源有嗜异性抗体、类风湿因子、HAMA抗体、生物素干扰、脂血、溶血、黄疸等，消除干扰的方法包括添加阻断剂、使用健康正常的标本、稀释等。
以下针对本申请实施例的一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法进行具体说明：
本申请提供一种胎盘生长因子检测试剂盒，其包括：分装的胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液。
吖啶标记的胎盘生长因子抗体液中包括两种阻断剂。
采用本申请的胎盘生长因子检测试剂盒配合化学发光免疫分析技术可用于检测待测物中的胎盘生长因子，胎盘生长因子检测试剂盒将抗体-抗原反应的高度特异性与吖啶发光的高度灵敏性结合起来，利用吖啶发光反应产生的光子以检测产物浓度。并且，胎盘生长因子检测试剂盒利用两种阻断剂进行联合使用，减少了假阴/假阳性结果，从而达到提高试剂抗干扰的能力，提高检测结果的稳定性和准确性。
胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液包括生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液或胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液。
两种阻断剂可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和HIER-E-013，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和HIER-E-100，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-010和HIER-E-010-D，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-010和HIER-E-013，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-010和HIER-E-100，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和Scantibodies阻断剂HBR-PLUS，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和Scantibodies阻断剂HBR-1，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和Scantibodies阻断剂HBR-27，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和Scantibodies阻断剂HBR Pro-1，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-010和Scantibodies阻断剂HBR-PLUS，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-010和Scantibodies阻断剂HBR-1，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-010和Scantibodies阻断剂HBR-27，或可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-010和Scantibodies阻断剂HBR Pro-1。
可选地，两种阻断剂可以为菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010。
本申请还提供一种上述的胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法，其包括：分别制备胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液，然后将胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液分装后组装成胎盘生长因子检测试剂盒。
请参阅图1，当胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液为生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液时，胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：
S1、准备试剂
分别配制第一稀释剂、第四稀释剂、第一终止剂、第二终止剂和第一封闭剂。
其中，第一稀释剂为包括牛血清白蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)的5～20mmol/L的PBS缓冲液，第一稀释剂中牛血清白蛋白的浓度为0.1～1wt％，第一稀释剂中聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.01～0.05wt％。
第四稀释剂为包括酪蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚、阻断剂的5～20mmol/L的PBS缓冲液，第四稀释剂中酪蛋白的浓度为0.1～1wt％，第四稀释剂中聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.01～0.05wt％，第四稀释剂中每种阻断剂的浓度为0.01～0.1wt％。
第一终止剂为0.5～1mol/L的Tris缓冲液。
第二终止剂为0.1～1wt％赖氨酸缓冲液。
第一封闭剂为0.1～0.5wt％生物素缓冲液。
S2、制备生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体
a、将生物素酯溶解于二甲基亚砜中，制得生物素酯溶液。
可选地，生物素酯和二甲基亚砜的质量体积比为1mg:110μL。
b、将胎盘生长因子单克隆抗体和生物素酯溶液混合并反应30～60min后，制得第二中间物。
可选地，胎盘生长因子单克隆抗体和生物素酯溶液的质量体积比为1mg:10～20μL。
c、将制得的第二中间物和第一终止剂混合并反应10～30min后，制得第三中间物。
可选地，胎盘生长因子单克隆抗体和第二中间物的质量体积比为1mg:20～50μL。
d、将制得的第三中间物经PBS透析12～24h后，回收制得的生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体，并计算浓度。
可选地，PBS的浓度为0.02mol/L。
S3、制备生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液
a、将链霉亲和素磁微粒和第一稀释剂混合，然后置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗2～3次后，由10mL第一稀释剂重悬磁微粒，制得第一链霉亲和素磁微粒悬液。
可选地，链霉亲和素磁微粒和第一稀释剂的质量体积比为1mg:1mL。
b、将制得的第一链霉亲和素磁微粒悬液和生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体混合并反应30～60min后，制得第一中间物。
可选地，生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体和链霉亲和素磁微粒的质量比为0.02～0.2:10。
c、将制得的第一中间物置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，由10mL第一稀释剂重悬磁微粒，制得第二链霉亲和素磁微粒悬液。
e、将制得的第二链霉亲和素磁微粒悬液和第一封闭剂混合并反应30～60min后，制得生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒。
可选地，第一封闭剂和链霉亲和素磁微粒的体积质量比为0.5～2mL:10mg。
f、将生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，经第一稀释剂反复清洗2～3次后，由20～50mL第一稀释剂重悬，制得生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液。
S4、制备吖啶标记胎盘生长因子抗体
a、将胎盘生长因子单克隆抗体和吖啶溶液混合，避光混匀反应30～60min后，制得第六中间物。
可选地，胎盘生长因子单克隆抗体和吖啶溶液的质量体积比为1mg:10～50μL，吖啶溶液的浓度为6.5mg/mL。
b、将制得的第六中间物和第二终止剂混合，避光混匀反应10～30min，制得第七中间物。
可选地，第二终止剂和胎盘生长因子单克隆抗体的体积质量比为0.1～0.5mL:1mg。
c、将制得的第七中间物经脱盐柱纯化，回收得到的第八中间物，并计算浓度。
d、将第八中间物经第四稀释剂稀释成浓度为0.05～0.5μg/mL的稀释液。
在上述方法中，使用生物素与链霉亲和素高度特异结合的特性，将生物素酯标记的胎盘生长因子抗体与链霉亲和素磁微粒进行固相结合，形成胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液。且将胎盘生长因子抗体包被在链霉亲和素磁微粒上，形成固相载体，有利于避免生物素干扰。
请参阅图2，当胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液为生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液时，胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法包括以下步骤：
S1、准备试剂
分别配制第二稀释剂、第三稀释剂、第四稀释剂、第二终止剂和第二封闭剂。
第二稀释剂为25mmol/L的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐缓冲液。
第三稀释剂为0.1mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液。
第四稀释剂为包括酪蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚、阻断剂的5～20mmol/L的PBS缓冲液，第四稀释剂中酪蛋白的浓度为0.1～1wt％，第四稀释剂中聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.01～0.05wt％，第四稀释剂中每种阻断剂的浓度为0.01～0.1wt％。
第二终止剂为0.1～1wt％赖氨酸缓冲液。
第二封闭剂为25mmol/L的氨基乙酸缓冲液。
S2、制备胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液
a、将羧基磁微粒和第三稀释剂混合，然后置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗2～3次后，由10mL第三稀释剂重悬磁微粒，制得第一羧基磁微粒悬液。
可选地，羧基磁微粒和第三稀释剂的质量体积比为1mg:1mL。
b、将制得的第一羧基磁微粒悬液和第二稀释剂混合并反应30～45min后，制得第四中间物。
可选地，第二稀释剂和羧基磁微粒的体积质量比为1.5mL:10mg。
c、将制得的第四中间物置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗2～3次后，由10mL第三稀释剂重悬磁微粒，制得第二羧基磁微粒悬液。
d、将制得的第二羧基磁微粒悬液和胎盘生长因子单克隆抗体混合并反应2～3h后，制得第五中间物。
可选地，胎盘生长因子单克隆抗体和羧基磁微粒的质量比为0.02～0.2：10。
e、将制得的第五中间物置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗2～3次后，由5mL第三稀释剂重悬磁微粒，制得第三羧基磁微粒悬液。
f、将制得的第三羧基磁微粒悬液和第二封闭剂混合并反应30～45min后，制得胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒。
可选地，第二封闭剂和羧基磁微粒的体积质量比为5mL:10mg。
g、将胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗2～3次后，由20～50mL第一稀释剂重悬，制得胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液。
S3、制备吖啶标记胎盘生长因子抗体
a、将胎盘生长因子单克隆抗体和吖啶溶液混合，避光混匀反应30～60min后，制得第六中间物。
可选地，胎盘生长因子单克隆抗体和吖啶溶液的质量体积比为1mg:10～50μL，吖啶溶液的浓度为6.5mg/mL。
b、将制得的第六中间物和第二终止剂混合，避光混匀反应10～30min，制得第七中间物。
可选地，第二终止剂和胎盘生长因子单克隆抗体的体积质量比为0.1～0.5mL:1mg。
c、将制得的第七中间物经脱盐柱纯化，回收得到的第八中间物，并计算浓度。
d、将第八中间物经第四稀释剂稀释成浓度为0.05～0.5μg/mL的稀释液。
在上述方法中，使用带羧基的磁微粒固相结合胎盘生长因子抗体，形成胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液。此方法是利用羧基与氨基(抗体中含有氨基)结合形成酰胺键的原理，不使用生物素与链霉亲和素高度特异结合的特性，就可以直接将胎盘生长因子抗体包被到磁微粒上，进而形成抗体包被的磁微粒悬液。
本申请的制备方法简便，制得的胎盘生长因子检测试剂盒性能稳定，可配合化学发光免疫分析技术用于检测待测物中的胎盘生长因子。
请参阅图3，本申请还提供一种利用上述的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子的方法，其包括：将待测物、胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液混合，并经第一次孵育后制得免疫复合物，再将免疫复合物与预激发液、激发液混合，经第二次孵育后进入到化学发光免疫分析仪检测其发光信号值。
可选地，待测物10～50μL，胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液50μL，吖啶标记的胎盘生长因子抗体液100μL。
可选地，第一次孵育包括在37℃下孵育10～30min。
可选地，第一次孵育包括在37℃下孵育10min。
可选地，第二次孵育包括在37℃下孵育2～5min。
可选地，第二次孵育包括在37℃下孵育2min。
可选地，预激发液100μL，激发液100μL。
可选地，预激发液由0.5～1.0wt％的过氧化物和浓度为0.01mol/L的硝酸溶液组成，激发液由0.2～0.5mol/L的NaOH和0.05mol/L的表面活性剂组成。
可选地，制得免疫复合物后，先对化学发光免疫分析仪进行清洗，再检测其发光信号值。
本申请检测胎盘生长因子的方法简便且快速，准确性高。
以下结合实施例对本申请的一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法作进一步的详细描述。
实施例1
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。
1、胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法
S1、准备试剂
分别配制第一稀释剂、第四稀释剂、第一终止剂、第二终止剂和第一封闭剂。
其中，第一稀释剂为包括牛血清白蛋白、Triton X-100的10mmol/L的PBS缓冲液，第一稀释剂中牛血清白蛋白的浓度为0.5wt％，第一稀释剂中Triton X-100的浓度为0.02wt％。
第四稀释剂为包括酪蛋白、Triton X-100、菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010的10mmol/L的PBS缓冲液，第四稀释剂中酪蛋白的浓度为0.5wt％，第四稀释剂中TritonX-100的浓度为0.02wt％，第四稀释剂中菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010的浓度均为0.05wt％。
第一终止剂为0.8mol/L的Tris缓冲液。
第二终止剂为0.5wt％赖氨酸缓冲液。
第一封闭剂为0.2wt％生物素缓冲液。
S2、制备生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体
a、称取生物素酯(Thermo)2mg，经220μL二甲基亚砜溶解，制得生物素酯溶液；
b、取1mg胎盘生长因子单克隆抗体，加入15μL生物素酯溶液,混匀反应45min后，制得第二中间物；
c、在制得的第二中间物中加入35μL第一终止剂，混匀反应20min后，制得第三中间物；
d、将制得的第三中间物经0.02mol/L的PBS透析18h后，回收制得的生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体，并计算浓度。
S3、制备生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液
a、取10mg链霉亲和素磁微粒加入到10mL第一稀释剂中，混匀后，置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗3次后，由10mL第一稀释剂重悬磁微粒，制得第一链霉亲和素磁微粒悬液；
b、取0.1mg生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体加入到第一链霉亲和素磁微粒悬液中，混匀反应45min后，制得第一中间物；
c、将制得的第一中间物置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，由10mL第一稀释剂重悬磁微粒，制得第二链霉亲和素磁微粒悬液；
e、向第二链霉亲和素磁微粒悬液中加入1mL第一封闭剂，混匀反应45min后，制得生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒；
f、将生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，经第一稀释剂反复清洗3次后，由35mL第一稀释剂重悬，制得生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液。
S4、制备吖啶标记胎盘生长因子抗体
a、取1mg胎盘生长因子单克隆抗体，加入35μL吖啶溶液，避光混匀反应45min后，制得第六中间物，吖啶溶液的浓度为6.5mg/mL；
b、在制得的第六中间物中加入0.2mL的第二终止剂，避光混匀反应20min，制得第七中间物；
c、将制得的第七中间物经脱盐柱纯化，回收得到的第八中间物，并计算浓度；
d、将第八中间物经第四稀释剂稀释成浓度为0.25μg/mL的稀释液。
2、检测胎盘生长因子的方法
S1、取待测物30μL，加入50μL胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和100μL吖啶标记的胎盘生长因子抗体，混匀后，于37℃孵育10min后，形成免疫复合物；
S2、全自动化学发光免疫分析仪进行清洗；
S3、加入100μL预激发液和100μL激发液，混匀后，于37℃孵育2min，全自动化学发光免疫分析仪检测其发光信号值。
实施例2
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。
1、胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法
S1、准备试剂
分别配制第二稀释剂、第三稀释剂、第四稀释剂、第二终止剂和第二封闭剂。
第二稀释剂为25mmol/L的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐缓冲液。
第三稀释剂为0.1mol/L的吗啉乙磺酸缓冲液。
第四稀释剂为包括酪蛋白、Triton X-100、菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010的10mmol/L的PBS缓冲液，第四稀释剂中酪蛋白的浓度为0.5wt％，第四稀释剂中TritonX-100的浓度为0.02wt％，第四稀释剂中菲鹏生物阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010的浓度均为0.05wt％。
第二终止剂为0.5wt％赖氨酸缓冲液。
第二封闭剂为25mmol/L的氨基乙酸缓冲液。
S2、制备胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液
a、取10mg羧基磁微粒加入到10mL第三稀释剂中，混匀后，置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗3次后，由10mL第三稀释剂重悬磁微粒，制得第一羧基磁微粒悬液；
b、向磁微粒溶液中加入1.5mL第二稀释剂，混匀反应40min后，制得第四中间物；
c、将制得的第四中间物置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗3次后，由10mL第三稀释剂重悬磁微粒，制得第二羧基磁微粒悬液；
d、向第二羧基磁微粒悬液中加入100μg胎盘生长因子单克隆抗体，混匀反应2.5h后，制得第五中间物；
e、将制得的第五中间物置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗3次后，由5mL第三稀释剂重悬磁微粒，制得第三羧基磁微粒悬液；
f、向制得的羧基磁微粒悬液中加入5mL第二封闭剂，混匀后反应40min后，制得胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒；
g、将胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒置于磁分离器进行磁液分离，去除上清液，如此反复清洗3次后，由35mL第一稀释剂重悬，制得胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液；
S3、制备吖啶标记胎盘生长因子抗体
a、取1mg胎盘生长因子单克隆抗体，加入35μL吖啶溶液，避光混匀反应45min后，制得第六中间物，吖啶溶液的浓度为6.5mg/mL；
b、在制得的第六中间物中加入0.2mL的第二终止剂，避光混匀反应20min，制得第七中间物；
c、将制得的第七中间物经脱盐柱纯化，回收得到的第八中间物，并计算浓度；
d、将第八中间物经第四稀释剂稀释成浓度为0.25μg/mL的稀释液。
2、检测胎盘生长因子的方法
S1、取待测物30μL，加入50μL胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和100μL吖啶标记的胎盘生长因子抗体，混匀后，于37℃孵育10min后，形成免疫复合物；
S2、全自动化学发光免疫分析仪进行清洗；
S3、加入100μL预激发液和100μL激发液，混匀后，于37℃孵育2min，全自动化学发光免疫分析仪检测其发光信号值。
实施例3
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。实施例3在实施例1的基础上改变HIER-E-001和HIER-E-010的浓度为0.01wt％，其他不变。
实施例4
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。实施例4在实施例1的基础上改变HIER-E-001和HIER-E-010的浓度为0.1wt％，其他不变。
实施例5
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。实施例5在实施例2的基础上改变HIER-E-001和HIER-E-010的浓度为0.01wt％，其他不变。
实施例6
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。实施例6在实施例2的基础上改变HIER-E-001和HIER-E-010的浓度为0.1wt％，其他不变。
实施例7
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。实施例7在实施例1的基础上将阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010改为HIER-E-010和HIER-E-010-D，其他不变。
实施例8
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。实施例8在实施例1的基础上将阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010改为HIER-E-001和HBR-27，其他不变。
实施例9
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。实施例9在实施例2的基础上将阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010改为HIER-E-010和HIER-E-010-D，其他不变。
实施例10
本申请实施例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。实施例10在实施例2的基础上将阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010改为HIER-E-001和HBR-27，其他不变。
对比例1
本申请对比例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。对比例1在实施例1的基础上将阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010改为HIER-E-001，其他不变。
对比例2
本申请对比例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。对比例2在实施例1的基础上将阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010改为HIER-E-010，其他不变。
对比例3
本申请对比例提供一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法。对比例3在实施例1的基础上将阻断剂HIER-E-001和HIER-E-010改为HBR-27，其他不变。
试验例1
分别采用实施例1～10和对比例1～3的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子，每种胎盘生长因子检测试剂盒检测10次，并设置纯化水对照组，其结果如表1～13所示。
表1实施例1的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000181
Figure BDA0003745814230000191
表2实施例2的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000192
表3实施例3的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000193
Figure BDA0003745814230000201
表4实施例4的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000202
表5实施例5的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000203
Figure BDA0003745814230000211
表6实施例6的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000212
表7实施例7的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000213
Figure BDA0003745814230000221
表8实施例8的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000222
表9实施例9的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000223
Figure BDA0003745814230000231
表10实施例10的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000232
表11对比例1的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000233
Figure BDA0003745814230000241
表12对比例2的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000242
表13对比例3的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子结果
Figure BDA0003745814230000243
Figure BDA0003745814230000251
由表1～10可知，添加阻断剂后，胎盘生长因子检测试剂盒检测随机阴性样品，其发光值明显降低，在两种阻断剂联合使用过程中，进行部分阻断剂的不同浓度和类型验证，均发挥了降低检测过程中的非特异反应的作用，提高了试剂抗干扰的能力。
由表11～13可知，单一使用某一种阻断剂降低检测过程中的非特异反应的作用小于联合使用两种以上阻断剂。
以上所述仅为本申请的具体实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种胎盘生长因子检测试剂盒，其特征在于，所述胎盘生长因子检测试剂盒包括：胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和吖啶标记的胎盘生长因子抗体液；
所述吖啶标记的胎盘生长因子抗体液中包括两种阻断剂。
2.根据权利要求1所述的胎盘生长因子检测试剂盒，其特征在于，所述两种阻断剂满足以下条件a～d中的一种：
a、所述两种阻断剂包括菲鹏生物阻断剂HIER-E-001，以及菲鹏生物阻断剂HIER-E-010、HIER-E-013和HIER-E-100中的一种；
b、所述两种阻断剂包括菲鹏生物阻断剂HIER-E-010，以及菲鹏生物阻断剂HIER-E-010-D、HIER-E-013和HIER-E-100中的一种；
c、所述两种阻断剂包括菲鹏生物阻断剂HIER-E-001，以及Scantibodies阻断剂HBR-PLUS、HBR-1、HBR-27和HBR Pro-1中的一种；
d、所述两种阻断剂包括菲鹏生物阻断剂HIER-E-010，以及Scantibodies阻断剂HBR-PLUS、HBR-1、HBR-27和HBR Pro-1中的一种。
3.根据权利要求1所述的胎盘生长因子检测试剂盒，其特征在于，所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液包括生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液或胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液。
4.一种权利要求1～3任一项所述的胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法包括：分别制备所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和所述吖啶标记的胎盘生长因子抗体液，然后将所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和所述吖啶标记的胎盘生长因子抗体液分装后组装成所述胎盘生长因子检测试剂盒。
5.根据权利要求4所述的胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液通过以下方法制得：
将链霉亲和素磁微粒悬液和生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体混合反应30～60min后，制得第一中间物，再将所述第一中间物和第一封闭剂混合反应30～60min后，制得所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液，所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液为生物素标记的抗体包被链霉亲和素磁微粒悬液；
所述链霉亲和素磁微粒悬液包括链霉亲和素磁微粒和第一稀释剂，所述第一稀释剂为包括牛血清白蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚的5～20mmol/L的PBS缓冲液；
所述第一封闭剂为0.1～0.5wt％生物素缓冲液；
可选地，所述第一稀释剂中牛血清白蛋白的浓度为0.1～1wt％；
可选地，所述第一稀释剂中聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.01～0.05wt％；
可选地，所述链霉亲和素磁微粒和所述生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体的质量比为10:0.02～0.2。
6.根据权利要求5所述的胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体通过以下方法制得：
将生物素酯的二甲基亚砜溶液和胎盘生长因子单克隆抗体混合反应30～60min后，制得第二中间物，再将所述第二中间物和第一终止剂混合反应10～30min后，制得第三中间物，将所述第三中间物经PBS透析12～24h后，制得所述生物素酯标记的胎盘生长因子单克隆抗体；
所述第一终止剂为0.5～1mol/L的Tris缓冲液。
7.根据权利要求4所述的胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液通过以下方法制得：
将羧基磁微粒悬液和第二稀释剂混合反应30～45min后，制得第四中间物，再将所述第四中间物和胎盘生长因子单克隆抗体混合反应2～3h后，制得第五中间物，将所述第五中间物和第二封闭剂混合反应30～45min后，制得所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液，所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液为胎盘生长因子抗体包被带羧基的磁微粒悬液；
所述羧基磁微粒悬液包括羧基磁微粒和第一稀释剂，所述第一稀释剂为包括牛血清白蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚的5～20mmol/L的PBS缓冲液；
所述第二稀释剂为25mmol/L的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐缓冲液；
所述第二封闭剂为25mmol/L的氨基乙酸缓冲液；
可选地，所述羧基磁微粒和所述胎盘生长因子单克隆抗体的质量比为10:0.02～0.2。
8.根据权利要求4所述的胎盘生长因子检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述吖啶标记的胎盘生长因子抗体液通过以下方法制得：将胎盘生长因子单克隆抗体和吖啶溶液混合避光反应30～60min后，制得第六中间物，再将所述第六中间物和第二终止剂混合避光反应10～30min，制得第七中间物，将所述第七中间物经脱盐柱纯化制得第八中间物，将所述第八中间物和第四稀释剂混合制得所述吖啶标记的胎盘生长因子抗体液；
所述第二终止剂为0.1～1wt％赖氨酸缓冲液；
所述第四稀释剂为包括酪蛋白、聚乙二醇辛基苯基醚、阻断剂的5～20mmol/L的PBS缓冲液；
可选地，所述第四稀释剂中所述酪蛋白的浓度为0.1～1wt％；
可选地，所述第四稀释剂中所述聚乙二醇辛基苯基醚的浓度为0.01～0.05wt％；
可选地，所述第四稀释剂中每种所述阻断剂的浓度为0.01～0.1wt％。
9.一种利用权利要求1～3任一项所述的胎盘生长因子检测试剂盒检测胎盘生长因子的方法，其特征在于，所述检测胎盘生长因子的方法包括：将待测物、所述胎盘生长因子抗体包被的磁微粒悬液和所述吖啶标记的胎盘生长因子抗体液混合，并经第一次孵育后制得免疫复合物，再将所述免疫复合物与预激发液、激发液混合，经第二次孵育后进入到化学发光免疫分析仪检测其发光信号值。
10.根据权利要求9所述的检测胎盘生长因子的方法，其特征在于，所述第一次孵育包括在37℃下孵育10～30min，所述第二次孵育包括在37℃下孵育2～5min。
CN202210831767.3A 2022-07-14 2022-07-14 一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法 Pending CN115201182A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210831767.3A CN115201182A (zh) 2022-07-14 2022-07-14 一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210831767.3A CN115201182A (zh) 2022-07-14 2022-07-14 一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115201182A true CN115201182A (zh) 2022-10-18

Family

ID=83581438

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210831767.3A Pending CN115201182A (zh) 2022-07-14 2022-07-14 一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115201182A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117741165A (zh) * 2023-11-29 2024-03-22 浙江鼎创医疗科技有限公司 一种高特异性、高灵敏度hnl检测用胶体金免疫层析试纸条及其制备方法以及使用方法

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117741165A (zh) * 2023-11-29 2024-03-22 浙江鼎创医疗科技有限公司 一种高特异性、高灵敏度hnl检测用胶体金免疫层析试纸条及其制备方法以及使用方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104897901B (zh) 一种基于金磁微粒的吖啶酯化学发光免疫学检测he4的方法
US5639626A (en) Reagents for specific binding assays
CA2779191C (en) Method and kit for measuring component to be assayed in specimen
CA2514010A1 (en) Assay
EP2295969B1 (en) Method for enhancing sensitivity or method for avoiding influence of hemoglobin in immunological measurement
EP4379377A1 (en) Magnetic bead coating, preparation method therefor, and test kit
CN115201182A (zh) 一种胎盘生长因子检测试剂盒及其制备方法、检测胎盘生长因子的方法
CN112014577B (zh) 一种提高gpc3检测灵敏度的试剂盒及其制备方法
CN112698041A (zh) 一种复合物及其生长分化因子15检测试剂盒与应用
CN112285353A (zh) 一种提高链霉亲和素-生物素反应体系的化学发光试剂盒抗生物素干扰能力和灵敏度的方法
CN115639367A (zh) 一种检测抗角蛋白抗体IgG的化学发光免疫试剂盒及应用
CN110988362A (zh) 抗组蛋白抗体测定试剂、试剂盒及其使用方法
CN107290518B (zh) 一种消除免疫反应假阳性的试剂
CN110672836B (zh) 磁珠包被物及其制备方法和应用、检测试剂盒
WO2002048711A1 (fr) Reactifs d'analyse immunologique et procede d'analyse
CN113376378A (zh) 一种d-二聚体检测试剂盒、制备方法及用途
CN114184793B (zh) 锌转运蛋白8抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
LU500306B1 (en) Method for detecting DNASE1L3 based on magnetic particle chemiluminescence immunoassay
CN115951068A (zh) 一种检测TGF-β1的试剂盒、检测方法及应用
CN108303543B (zh) 一种猪瘟e2蛋白抗体检测试剂盒及其检测方法
CN116106559A (zh) 一种生物素与抗体偶联比检测试剂盒及其应用
CN116027051A (zh) 一种β-HCG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和检测方法
CN105044369B (zh) 一种铅螯合型免疫复合物及其制备方法和应用
Jin et al. Use of α-N, N-bis [carboxymethyl] lysine-modified peroxidase in immunoassays
CN113777326A (zh) 一种高特异检测肝素结合蛋白的试剂盒及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination