CN115176609A - 一种古侧柏嫁接方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及种植领域，具体公开了一种古侧柏嫁接方法，包括如下步骤：以地径6‑8cm的侧柏苗木为砧木，以古侧柏的2年生枝条为接穗，在6月以腹接的方法进行嫁接，砧木与接穗的夹角为15‑30°。本发明通过对侧柏古树嫁接时间、砧木、接穗等的处理提升高龄侧柏古树嫁接的成活率，从而高质量的保存侧柏古树的种质资源。本发明还针对古侧柏的生理生化特点，通过嫁接方法、嫁接角度、生长物质调节剂处理、消毒杀菌、防止接穗褐化、涂抹愈伤膏等嫁接参数的优化组合，实现了缩短嫁接时间，提高了嫁接成活率，最终实现古树的快速利用。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种提高侧柏古树嫁接繁殖生根率、缩短嫁接生根时间的方法。
背景技术
轩辕柏和挂甲柏是著名的古树，具有很高的历史文化价值和科研价值。这些古树携带长寿类、抗逆类等优良基因资源，抢救大量即将消失的优良基因资源已迫在眉睫。
无性繁殖技术是保存古树种质资源的技术保障，但是很多古树，如松柏科树木的扦插生根率极低。而用嫁接的方法先将古树的枝条幼化，经过嫁接幼化过的枝条扦插生根率显著提高。
古树枝条珍贵，枝条生长与幼树相比有独特性，古树枝条生长缓慢与幼树侧柏的接穗相差很大。侧柏古树含有大量的次生代谢产物负调控生长进程，细胞潜在分裂能力逐渐降低，树龄越高嫁接成活率越低。因此，提高侧柏古树的嫁接成活率显得尤为重要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何进一步提高侧柏古树的嫁接成活率。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种古侧柏嫁接方法，包括如下步骤：以地径6-8cm的侧柏苗木为砧木，以古侧柏的2年生枝条为接穗，在6月以腹接的方法进行嫁接，砧木与接穗的夹角为15-30°。
本文所述古侧柏，树龄在100年(含)以上，可选为100年(含)以上、300年(含)以上、700年(含)以上、1000年(含)以上。
上述方法中，所述接穗的基部直径为2.8(不含)-3.2(含)mm，叶面积为4900±150mm2。
上述方法中，当接穗来自树龄100(含)-300(不含)年的古侧柏时，所述接穗总长度为25±1cm，嫁接修剪后的长度为11±1cm。
上述方法中，当接穗来自树龄300(含)年以上古侧柏时，所述接穗总长度为23±1cm，嫁接修剪后的长度为10±1cm。
上述方法中，所述嫁接，可包括使用植物生长调节剂，所述植物生长调节剂由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为ABT1、没食子酸、阿魏酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的没食子酸、1g的阿魏酸和1g的Vc。
上述方法中，所述嫁接，可包括嫁接后在嫁接处涂刷愈伤膏(德沃公司产品、商品编号：100012445784)。
上述方法中，所述嫁接，可包括嫁接后对接穗喷抑制蒸腾剂。
本发明的古侧柏嫁接方法，具体可包括如下步骤：以地径6-8cm的侧柏苗木为砧木，以古侧柏的2年生枝条为接穗，在6月进行嫁接；
使用植物生长调节剂浸泡接穗1min，所述植物生长调节剂由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为ABT1、没食子酸、阿魏酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的没食子酸、1g的阿魏酸和1g的Vc；
以腹接的方法进行嫁接，嫁接时砧木与接穗的夹角为15-30°，嫁接后在嫁接处涂刷愈伤膏，并对接穗喷抑制蒸腾剂。
上述方法中，所述嫁接，还可包括修剪接穗，所述接穗的基部直径为2.8(不含)-3.2(含)mm，叶面积为4900±150mm2，并按照采集接穗的古侧柏树龄确定接穗长度标准，具体标准如下：
古侧柏树龄100年(含)-300年(不含)，所述接穗总长度为25±1cm，嫁接修剪后的长度为11±1cm；
古侧柏树龄300年(含)以上，所述接穗总长度为23±1cm，嫁接修剪后的长度为10±1cm。
发明人通过对侧柏古树嫁接时间、砧木、接穗等的处理提升高龄侧柏古树嫁接的成活率，从而高质量的保存侧柏古树的种质资源。通过嫁接方法、嫁接角度的筛选优化嫁接细节。用生长物质调节剂处理接穗起到消毒杀菌，去除接穗的抑制物防止接穗褐化的作用，接穗底部涂抹愈伤膏促进接口愈合。使用抑制蒸腾剂防止接穗叶片水分蒸发处理提高侧柏古树的接穗的萌芽能力。通过这些嫁接的优化组合方法能缩短嫁接时间，提高嫁接成活率，实现古树的快速利用。
附图说明
图1为实施例8中2000年、3000年侧柏嫁接成活情况照片。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
影响侧柏古树嫁接成活的原因有：砧木树龄、地径、古树接穗的选择和修剪程度等因素。哪种嫁接方法更适合侧柏古树也还需要进行实验验证；对于适合侧柏古树嫁接时间的实验证据不多；接穗生长调节物质处理实验还没有报道。因此，本研究以不用树龄侧柏古树为研究对象，通过筛选不同树龄侧柏古树的嫁接条件，建立一种周期短、成活率高、重复性好的侧柏古树嫁接体系，对保存古树的完整基因具有重要意义。以下实施例为本发明对侧柏古树嫁接条件的详细筛选过程：
实施例1不同地径侧柏砧木对嫁接成活率的影响
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
2014年在北京，设置3种不同地径侧柏砧木，研究不同地径侧柏砧木对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响，具体地径设置如下：
地径6-8cm的侧柏苗木：约3年生，实测平均地径6.78cm，平均株高50.54cm。
地径平均10-12cm的侧柏苗木：约4～5年生，实测平均地径11.37cm，平均株高86.17cm。
地径平均15-17cm的侧柏苗木：约5～6年生，实测平均地径16.83cm，平均株高101.23cm。
每种接穗在每种地径的砧木上嫁接30个，除了接穗来源和砧木地径，保持其它条件相同。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
嫁接实验结果如表1，不同地径砧木间嫁接成活率相差较大，平均地径为6.78cm的砧木嫁接成活率最高，5年生侧柏的接穗成活率为56.35％，3个侧柏古树年龄段的成活率分别为41.86％、34.34％、23.69％，显著高于其他地径的嫁接成活率，砧木砧木地径为11.37cm的嫁接成活率次之，这与生产实践的结果相似。这是因为砧木地径越大其硬度大，不易对严。侧柏古树嫁接的砧木地径为6-8cm的苗木作砧木，砧木树龄小树枝内源生长激素含量高，细胞分裂能力强，对伤口愈合有利。
表1不同地径砧木对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
实施例2不同嫁接时间对侧柏古树嫁接成活率的影响
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
2015年在北京，设置3种不同嫁接时间，研究不同嫁接时间对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响，具体嫁接时间设置如下：
4月、6月、8月。
每种接穗在每种嫁接时间嫁接30个，除了嫁接时间，保持其它条件相同，具体为砧木地径为6-8cm的侧柏砧木，采用腹接方式。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
合适的嫁接时间接穗不易发生萎蔫，有利于愈伤组织的形成。结果如表2所示，5年生侧柏4月嫁接的成活率为53.45％，6月嫁接的成活率则为65.28％，4月和6月份嫁接成活率差异较大，6月份和8月份嫁接差异较小。3个古树年龄段的嫁接成活率最高的是6月份，分别为：42.49％、33.37％和30.45％。6月份的嫁接成活率高可能是因为此时植物分生组织活跃，接穗新梢组织幼嫩，嫁接后接穗不易发生萎蔫，愈合组织容易形成。但4月份枝条还没有发育好，分生组织不发达。8月份嫁接的成活率低，这是因为8月份正是我国北方地区的雨季，土壤含水率高，蒸发量大，接穗失水快。因此，最佳的嫁接时间为6月份。
表2不同嫁接时间对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
实施例3嫁接方法对侧柏古树嫁接成活率的影响
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
2016年在北京，设置4种不同嫁接方法，研究不同嫁接方法对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响，具体嫁接方法为腹接(参考文献“韩贵友.燕山板栗腹接常用方法[J].林果园艺,2017,262:47-49.”)、切接(参考文献“秦彩云，陈士刚，才巨锋，高芳，陶晶.山杏良种枝接繁殖技术体系优化[J].北方园艺，2017(21):56-61.”)、T型接(参考文献“关欣，牟娇，王玉红.不同嫁接方式对山槐嫁接成活率及生长的影响[J].林业科技，2017，4(42):8-9.”)、枝接(参考文献“陈建华，董胜君，安国杰，刘明国，吴月亮，刘立新.北美蓝云杉异砧嫁接方法研究[J].吉林林业科技,2020,4(49):8-9.”)。
每种接穗以每种嫁接方法嫁接30个，除了嫁接方法，保持其它条件相同，具体为地径为6-8cm的侧柏砧木、采用腹接方式。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
嫁接方法对不同树龄侧柏的成活率影响较大，尤其是在侧柏古树嫁接时相差较大。由表3可以看出不同树龄侧柏腹接的成活率最高。嫁接方法对5年生幼树影响不显著(P>0.05)，100年、300年和700年的腹接的成活率分别为：45.07％、36.99％、33.18％，显著高于其他嫁接方法(P<0.05)。其次是切接，这3个年龄段的成活率分别为：35.85％、23.86％、22.26％。这主要是因为古树嫁接需要的时间长，嫁接后接穗需要砧木提供水分和养分，腹接的砧木在短时期内能够提供给接穗生长所需的营养物。侧柏古树的枝条木质化程度深，硬度加重导致枝接成活率低，T型接和切接虽然和与接穗的形成层接触面积相对较大，但是砧木不能给接穗提供较多的营养物质，所以成活率也相对较低。
表3、嫁接方法对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
实施例4接穗修剪程度、接穗嫁接角度对侧柏古树嫁接成活率的影响
对不同的枝条的成活率进行了量化，对每个嫁接的古树枝条提供最大可能的生根条件。侧柏古树嫁接需要2-4个月的时间，全光照喷雾在夏季嫁接，伤口很容易被感染病菌或者烂根，对嫁接条件要求苛刻，在这个过程当中，对嫁接的每一步都做到精益求精提高生根率，哪种生长类型古树的枝条、修剪的接穗长度、留枝长度、叶面积等细节修剪等细节容易被忽视，但是在实际嫁接过程中却直接影响嫁接的成活率。同时，也会对古树的树势造成直接影响。
在如下参数基础上发明人继续优化接穗修剪程度：地径为6-8cm的侧柏砧木，6月份嫁接，采用腹接方式。
嫁接时古树幼嫩的枝条内源生长激素含量高，细胞分裂能力强对生根有利。老化的枝条木质化程度高、组织过硬，根原基少造成生根困难。但是枝条太细时，木质化程度不够，营养物质少也不利于生根，因此接穗选择和剪取对生根率影响较大。
1、接穗基部直径的优化
2017年在北京，以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。接穗基部直径按如下3种标准剪取：
3.2(不含)-3.6(含)mm、2.8(不含)-3.2(含)mm、2.4(含)-2.8(含)mm
每种标准的接穗嫁接30个。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
结果如表4，5年生侧柏的接穗直径为3.2-3.6mm的成活率为61.78％，100年、300年和700生侧柏的接穗为2.8-3.2mm的成活率分别达到了37.45％、32.27％、25.97％。古树嫁接时接穗直径为2.8-3.2mm的嫁接成活率显著高于3.2-3.6mm和2.4-2.8mm(P<0.05)，说明选择合适的接穗并进行精细的修剪能提高侧柏古树的嫁接成活率。
表4、接穗基部直径(mm)对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
2、留叶量的优化
嫁接对叶片的面积要求严格，这主要是因为留下的叶面积过大会使接穗蒸发力度增强，造成失水干枯；留叶量太小时枝条缺乏生根所需的营养。
2017年在北京，以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。接穗修剪后留下的叶面积(以下称为留叶量)按如下3种标准设置：
6500±150mm2、6200±150mm2、4900±150mm2。
每种标准的接穗嫁接30个。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
根据留叶量和嫁接后的生长状况统计显示(表5)，有利于提高5年生、古树的接穗留叶量的最佳叶面积为6500±150mm2、4900±150mm2，3个年龄段的古树的留叶量都为4900±150mm2时嫁接成活率最高。说明古树枝条的生长状况差异不显著。因此合适的叶面积能制造营养物质和合成生长类激素，从而提高嫁接成活率。
表5、留叶量对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
3、接穗总长度和留枝长度的优化
嫁接时需要本身的枝条储备一定的营养，又能具有长出愈伤组织和生根的潜力。很多实验表明接穗长度对嫁接生根率影响显著。
2017年在北京，以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。接穗总长度和留枝长度按如下3种标准设置：
接穗总长度27±1cm(采集时的长度)，留枝长度(嫁接后修剪的长度)12±1cm；
接穗总长度25±1cm，留枝长度11±1cm；
接穗总长度23±1cm，留枝长度10±1cm。
每种标准的接穗嫁接30个。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
对不同树龄的侧柏接穗与生根率的关系发现(表6)，5年生的侧柏接穗总长度为27±1cm，留枝长度为12±1cm时嫁接成活率最高为62.45％，100年侧柏的接穗总长度为25±1cm，留枝长度为11±1cm嫁接成活率最高为41.64％，300年生和700年生侧柏接穗总长度为23±1cm，留枝长度为10±1cm嫁接成活率显著高于其他留枝长度(P<0.05)。
表6、接穗总长度对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
4、接穗嫁接角度对侧柏古树嫁接成活率的影响
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
2017年在北京，设置3种不同的嫁接角度，研究不同嫁接角度对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响，具体嫁接角度为：15-30°、30-45°、45-60°。
每种接穗以每种嫁接角度嫁接30个。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
接穗嫁接角度对侧柏古树嫁接成活率的影响显著。由表7可以看出，4个年龄段的侧柏砧木与接穗的夹角在15-30°时接穗成活率最高，5年生侧柏的成活率为61.49％，显著高于夹角为45-60°的成活率。3个年龄段的侧柏古树与侧柏幼树的结果一致，嫁接部位在15-30°时接穗成活率分别为45.47％、34.94％、32.93％，显著高于其他角度的枝条(P<0.05)。
表7接穗嫁接角度对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
因此，对于侧柏古树的插穗修剪的量化指标而言，接穗基部直径的优化后的标准为3.00±0.25mm，留叶量优化后的标准为4900±150mm2、接穗总长度优化后的标准为25±1cm或23±1cm、留枝长度为11±1cm或10±1cm，接穗嫁接角度15-30°，通过试验结果说明选择合适的接穗并进行精细的修剪能提高侧柏古树的嫁接成活率。
实施例5植物生长调节剂处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
在实施例1-4优化的嫁接参数的基础上进行植物生长调节剂的筛选，具体嫁接参数为地径为6-8cm的侧柏砧木，在6月嫁接，采用腹接方式、接穗基部直径标准为3.00±0.25mm，留叶量标准为4900±150mm2，100年生古树的接穗总长度的标准为25±1、留枝长度为11±1，300年、700年生的古侧柏的接穗总长度的标准为23±1、留枝长度为10±1，接穗嫁接角度15-30°。具体筛选过程如下：
1、防止接穗褐化对侧柏古树嫁接成活率的影响
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
2018年在北京，设置4种不同的防止接穗褐化方法，研究不同嫁接角度对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响，具体防止接穗褐化方法为：
AC(活性炭)处理：以质量百分含量为0.1％的AC水溶液浸泡处理接穗12h。
Vc(抗坏血酸)处理：以质量百分含量为0.1％的Vc水溶液浸泡处理接穗12h。
NaClO(次氯酸钠)处理：以质量百分含量为0.1％的NaClO水溶液浸泡处理接穗12h。
CK：以水浸泡处理接穗12h。
每种接穗以每种防止接穗褐化方法嫁接30个。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
侧柏古树随着年龄的增加而接穗生根能力下降的原因，抑制物含量逐渐增多造成枝条底部褐变。AC、Vc、NaClO可防止枝条底部褐变，促进接穗愈合，提高接穗的成活率。通过表5可知，侧柏古树接穗经过Vc和NaClO处理对不同树龄侧柏接穗嫁接的成活率均有不同程度的提高。其中Vc处理5年生、100年生、300年生、700年生侧柏的接穗成活率分别为：62.61％、43.99％、36.73％和32.37％。尤其是100年侧柏古树接穗的成活率显著高于其他两个树龄(P<0.05)，说明Vc处理不同树龄侧柏接穗能防止接穗褐化，有利于接穗成活。AC处理不同树龄侧柏接穗提高的成活率幅度小于Vc和NaClO处理。
表8防止接穗褐化处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
2、接穗生长物质调节剂处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
接穗中含有阻碍生根的物质有单宁树脂和氧化酶等，没食子酸和阿魏酸、抗氧化具有抗炎作用。阿魏酸抗氧化作用显著，对自由基、过氧化硝基等都有良好的清除效果。
2019年在北京，设置5种不同的接穗生长物质调节剂处理，研究不同接穗生长物质调节剂对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响，具体接穗生长物质调节剂处理为：
ABT1生根粉处理：以1000mg/L的ABT1生根粉水溶液浸泡处理接穗1min。
槲皮黄素处理：以1000mg/L的槲皮黄素水溶液浸泡处理接穗1min。
阿魏酸处理：以1000mg/L的阿魏酸水溶液浸泡处理接穗1min。
没食子酸处理：以1000mg/L的没食子酸水溶液浸泡处理接穗1min。
CK：以水浸泡处理接穗1min。
每种接穗以每种接穗生长物质调节剂处理后嫁接30个。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。结果见表9：
表9生长物质调节剂处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
通过表9可知，ABT1和槲皮黄素对不同树龄侧柏嫁接成活率都有提高作用，不过提高幅度小于阿魏酸和没食子酸。对于5年生阿魏酸和没食子酸处理对接穗成活率差异不大(P>0.05)，但对于3个年龄段侧柏古树而言没食子酸比阿魏酸更能提高古树接穗的嫁接成活率，100年、300年和700年的成活率分别为：43.16％、33.48％、31.13％。这可能是因为没食子酸能起到杀菌消毒的作用。
3、混合植物生长调节剂处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
古侧柏中含有大量的次生代谢物质，除了生活力衰退外，生根所必需的物质减少。在上述1和2筛选的基础上，调配混合植物生长调节剂，具体过程如下：
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
2020年在北京，设置5种不同的混合植物生长调节剂处理，以水为对照，研究不同混合植物生长调节剂对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响。
调配如下混合植物生长调节剂：
ABT1+没食子酸：溶剂为水，溶质为ABT1和没食子酸，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1和1g的没食子酸，处理接穗1min；
ABT1+阿魏酸：溶剂为水，溶质为ABT1和阿魏酸，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1和1g的阿魏酸，处理接穗1min；
ABT1+没食子酸+Vc：溶剂为水，溶质为ABT1、没食子酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的没食子酸和1g的Vc，处理接穗1min；
ABT1+阿魏酸+Vc：溶剂为水，溶质为ABT1、阿魏酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的阿魏酸和1g的Vc，处理接穗1min；
ABT1+没食子酸+阿魏酸+Vc：溶剂为水，溶质为ABT1、没食子酸、阿魏酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的没食子酸、1g的阿魏酸和1g的Vc，处理接穗1min。
CK：水。
所有处理的混合植物生长调节剂的处理方法均为浸泡处理接穗1min。
每种接穗以每种混合植物生长调节剂处理嫁接30个，除了混合植物生长调节剂，保持其它条件相同。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
表10混合植物生长调节剂处理对侧柏古树嫁接成活率的
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
通过混合生长调剂处理的结果可知(表10)，用ABT1+没食子酸+阿魏酸+Vc处理处理5年生幼树接穗，能使其成活率达61.02％。而就100年、300年以及700年侧柏接穗而言，用ABT1+没食子酸+阿魏酸+Vc处理处理则能达到较好的成活率，成活率分别为41.67％、35.34％以及32.73％。结果显示，不同年龄、不同的抑制物清除方式对侧柏接穗生根影响有较大差异。总体而言，抑制物清除提高古树的成活率的幅度显著高于侧柏幼树(P<0.05)。用ABT1+没食子酸+阿魏酸+Vc处理处理接穗，不仅能抑制褐变，又能促使伤口愈合和不定根形成。
实施例6接穗消毒处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
嫁接过程中伤口的细菌影响接穗和砧木的愈合程度。
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
2021年在北京，设置3种不同的接穗消毒处理，以不消毒为对照，研究不同接穗消毒处理对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响。
高锰酸钾：在嫁接处用毛刷均匀涂刷2％的高锰酸钾液。
酒精：在嫁接处用毛刷均匀涂刷75％的酒精。
愈伤膏(德沃、商品编号：100012445784)：在嫁接处用毛刷均匀涂刷愈伤膏。
CK：不消毒。
每种接穗以每种不同接穗消毒处理后嫁接30个，除了不同接穗消毒处理，保持其它条件相同，具体为：地径为6-8cm的侧柏砧木，在6月嫁接，采用腹接方式、接穗基部直径标准为3.00±0.25mm，留叶量标准为4900±150mm2，100年生古树的接穗总长度的标准为25±1、留枝长度为11±1，300年、700年生的古侧柏的接穗总长度的标准为23±1、留枝长度为10±1，接穗嫁接角度15-30°，接穗以ABT1+没食子酸+阿魏酸+Vc(溶剂为水，溶质为ABT1、没食子酸、阿魏酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的没食子酸、1g的阿魏酸和1g的Vc)处理接穗1min。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
从表11可以看出，2％高锰酸钾、75％酒精和愈伤膏处理侧柏接穗和伤口，对其嫁接成活率效果有一定作用。5年生侧柏接穗涂抹酒精的成活率高达64.78％。100年、300年、700年侧柏用愈伤膏处理的嫁接成活率则高于其他处理，分别为：41.67％、35.34％、32.73％。75％酒精处理5年和300年接穗，对其接穗成活率影响不大。而就700年侧柏接穗而言，愈伤膏和75％酒精涂抹更利于提高成活率。但总体上愈伤膏有利于提高不同树龄的侧柏接穗的成活率。
表11消毒处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
实施例7叶片防失水处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
嫁接时期的气温较高，会造成接穗脱水干梢现象，因此应采取必要措施对接穗进行保水防护，降低水分散失达到保鲜效果。
以5年生幼龄侧柏为对照，采取中国林业科学研究院院内的100年、300年、700年生的3种古侧柏的枝条采集接穗，选择生长发育健壮，优质的2年生枝条为接穗。
2021年在北京，设置4种不同的接穗叶片防失水处理，以不处理为对照，研究不同接穗叶片防失水处理对100年、300年、700年生的古侧柏接穗嫁接成活率的影响。
裹薄膜衣：用保险膜包裹接穗中间。
抑制蒸腾剂：将抑制蒸腾剂(国光抑蒸、商品编号：10020982169639)以水稀释800-1000倍后整株喷施。
叶面肥：叶面肥(德沃、商品编号：100008519864)以水按照1:500的体积比进行稀释后喷施叶面。
套袋黑暗：用黑色塑料袋套接穗。
CK：不处理。
每种接穗以每种接穗叶片防失水处理后嫁接30个，除了不同接穗叶片防失水处理，保持其它条件相同，具体为：地径为6-8cm的侧柏砧木，在6月嫁接，采用腹接方式、接穗基部直径标准为3.00±0.25mm，留叶量标准为4900±150mm2，100年生古树的接穗总长度的标准为25±1、留枝长度为11±1，300年、700年生的古侧柏的接穗总长度的标准为23±1、留枝长度为10±1，接穗嫁接角度15-30°，接穗以ABT1+没食子酸+阿魏酸+Vc(溶剂为水，溶质为ABT1、没食子酸、阿魏酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的没食子酸、1g的阿魏酸和1g的Vc)处理接穗1min。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
对接穗的成活率情况统计结果显示(表12)，裹薄膜衣能防止水分散失过快，但同时也减低了光合作用的面积，因此对不同年龄侧柏接穗的成活率影响不大，只有100年侧柏的接穗成活率提高了4.09％。而叶面肥的作用相对也较小，没有提高幼树的接穗成活率，对3个侧柏古树的接穗成活率有帮助，但是提高幅度小于施加抑制蒸腾剂。3个年龄段的古树接穗成活率分别为42.02％、38.64％、36.57％。抑制蒸腾剂处理能减缓接穗叶片的水分蒸发速度，提高接穗成活率。
表12接穗叶片防失水处理对侧柏古树嫁接成活率的影响
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
实施例8提高侧柏生根率的组合方法
经过8年的侧柏古树嫁接，2021年在北京，参考实施例1-7的结果，利用前期5年、100年、300年、700年生侧柏古树所得的嫁接优化组合方式(表13)，以5年生侧柏为对照，对接穗来自2000年、3000年侧柏(2000年侧柏为陕西黄帝陵挂甲柏，3000年侧柏为陕西黄帝陵轩辕柏)进行嫁接。
嫁接后进行合理的肥水、温湿度和光照管理，使嫁接后的伤口尽快愈合。在嫁接后45d内检查接芽成活情况，若芽已萌动抽叶或芽已转绿变大时，则证明接芽已成活。统计成活率：成活率＝成活接穗的量/嫁接接穗的总量。
表13提高侧柏嫁接成活率的组合方法
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
结果如表14所示，优化后的嫁接组合方法能显著提高侧柏的嫁接成活率，5年生侧柏嫁接成活率分别比对照方法显著提高了25.14％(P<0.05)，成活时间缩短了12.27天。优化后的嫁接组合方法使2000、3000年生侧柏的嫁接成活率分别显著提高了11.87％和12.39％(P<0.05)，成活时间缩短了10.57天和13.57天。结果说明，优化后的嫁接组合方法能显著提高侧柏古树的嫁接成活率。
表14侧柏古树嫁接成活率及缩短嫁接成活时间
注：不同小写字母代表处理之间在0.05水平存在显著性差异；数值为平均值±标准差。
综上，发明人通过对侧柏古树嫁接时间、砧木、接穗等的处理提升高龄侧柏古树嫁接的成活率，从而高质量的保存侧柏古树的种质资源。通过嫁接方法、嫁接角度的筛选优化嫁接细节。用生长物质调节剂处理接穗起到消毒杀菌，去除接穗的抑制物防止接穗褐化的作用，接穗底部涂抹愈伤膏促进接口愈合。使用抑制蒸腾剂防止接穗叶片水分蒸发处理提高侧柏古树的接穗的萌芽能力。通过这些嫁接的优化组合方法能缩短嫁接时间，提高嫁接成活率，实现古树的快速利用。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
Claims (9)
1.一种古侧柏嫁接方法，其特征在于，包括如下步骤：以地径6-8cm的侧柏苗木为砧木，以古侧柏的2年生枝条为接穗，在6月以腹接的方法进行嫁接，砧木与接穗的夹角为15-30°。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接穗的基部直径为2.8(不含)-3.2(含)mm，叶面积为4900±150mm2。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，当接穗来自树龄100(含)-300(不含)年的古侧柏时，所述接穗总长度为25±1cm，嫁接修剪后的长度为11±1cm。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，当接穗来自树龄300(含)年以上古侧柏时，所述接穗总长度为23±1cm，嫁接修剪后的长度为10±1cm。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嫁接，包括使用植物生长调节剂，所述植物生长调节剂由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为ABT1、没食子酸、阿魏酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的没食子酸、1g的阿魏酸和1g的Vc。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嫁接，包括嫁接后在嫁接处涂刷愈伤膏。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嫁接，包括嫁接后对接穗喷抑制蒸腾剂。
8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：以地径6-8cm的侧柏苗木为砧木，以古侧柏的2年生枝条为接穗，在6月进行嫁接；
使用植物生长调节剂浸泡接穗1min，所述植物生长调节剂由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为ABT1、没食子酸、阿魏酸和Vc，具体1L混合植物生长调节剂中包含1g的ABT1、1g的没食子酸、1g的阿魏酸和1g的Vc；
以腹接的方法进行嫁接，嫁接时砧木与接穗的夹角为15-30°，嫁接后在嫁接处涂刷愈伤膏，并对接穗喷抑制蒸腾剂。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述嫁接包括修剪接穗，所述接穗的基部直径为2.8(不含)-3.2(含)mm，叶面积为4900±150mm2，并按照采集接穗的古侧柏树龄确定接穗长度标准，具体标准如下：
古侧柏树龄100年(含)-300年(不含)，所述接穗总长度为25±1cm，嫁接修剪后的长度为11±1cm；
古侧柏树龄300年(含)以上，所述接穗总长度为23±1cm，嫁接修剪后的长度为10±1cm。
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