CN115161274A - 一种脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法。所述脂肪干细胞提取物的抗皱精华液包括以下步骤：S1.准备材料：脂肪干、I型胶原酶、基础培养基和DMEM培养基；S2.提取工序：(1).将上述S1中准备好的脂肪干剪成小块，并通过PBS缓冲液冲洗2～4次；(2).将上述(1)中处理好的脂肪干小块在27℃的环境下。本发明提供的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法可以使细胞松散，便于干细胞脱落，可以提高胶原酶浓度，缩短消化时间，既可以显著增加干细胞提取量，又可以减少操作时间，降低污染可能性，也不会出现干细胞生物学特性和分化能力的改变的优点。

Description

一种脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法

技术领域

本发明属于外泌体组合制剂的技术领域，尤其涉及一种脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法。

背景技术

在目前肝脏来源短缺的情况下，如何使受损肝脏再生从而恢复正常肝功能对晚期肝病患者十分重要，干细胞的获取和培养是首先需要解决的问题，2001年首次从脂肪组织中提取并培养出ADSCs后，众多的研究发现ADSCs具有和MSCs相似的生物学特性，在相应的诱导环境下可以向骨细胞、软骨细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞、神经元细胞及肝细胞分化,表现出成体干细胞的横向分化能力，此外，ADSCs还具有取材方便、分布广泛等MSCs所不具有的优点,因此ADSCs可以作为干细胞移植的首选种子细胞，有非常重要的研究和应用价值，相关技术中，公开了一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法。所述含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液8-20份、脂肪干细胞细胞内含物8-20份、绿豆肽0.5-2份、罗非鱼多肽0.5-2份、蝎毒多肽0.5-2份、甘油1-6份、乙二醇0.1-4份、黄原胶0.1-4份、透明质酸0.1-4份、苯氧乙醇1-2份、乙基己基0.03-0.05份、EDTA0.1-0.2份、聚山梨醇酯0.3-0.8份、氧化卵磷脂1-2份、生育酚1-5份、蒸馏水55.2-94.92份。本发明提供的抗皱精华液含有脂肪干细胞提取物，经效用测评实验证实其对肌肤抗皱均有一定的实际功效。使用抗皱精华液后，志愿者皮肤弹性和皱纹深度的改善情况均优于对比例和现市售抗皱产品，表现出明显的协同增效的抗皱效果。

但是，上述结构中还存在不足之处，因为上述结构中脂肪干细胞传统提取方法步骤多，随之带来了提取时间长，容易污染，提取过程中细胞损失量多等诸多问题。

因此，有必要提供一种新的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法解决上述技术问题。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种细胞松散，便于干细胞脱落，可以提高胶原酶浓度，缩短消化时间，既可以显著增加干细胞提取量，又可以减少操作时间，降低污染可能性，也不会出现干细胞生物学特性和分化能力的改变的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液包括以下步骤：

S1.准备材料：脂肪干、I型胶原酶、基础培养基和DMEM培养基；

S2.提取工序：

(1).将上述S1中准备好的脂肪干剪成小块，并通过PBS缓冲液冲洗2～4次；

(2).将上述(1)中处理好的脂肪干小块在27℃的环境下，由0.25％的I型胶原酶进行消化，消化时间为30min，然后将含有10％的FBS的DMEM培养基加入，进行中合；

(3).将上述(2)中处理好的产物放置到离心设备中进行离心处理，速度为1000转/min，离心时间为10min，致使弃去上清液；

作为本发明的进一步方案，所述上述S1中准备好的基础培养基重悬细胞接种培养瓶进行培养，时间为48h，之后进行换液工作，并去除未贴壁的细胞，之后每天更换培养基，使细胞生长至亚融合状态。

作为本发明的进一步方案，所述上述培养好之后在温度为37℃的环境下，用0.25％的胰酶消化，然后通过离心力去除上清液，最后在通过基础培养基重悬细胞，使细胞悬液按1:2接种至培养瓶内，且每3天更换一次培养基，最后通过油红O染色，进而得到脂肪干细胞。

作为本发明的进一步方案，所述S1准备的脂肪干需剔除软组织和小血管，并通过PBS缓冲液冲洗3～5次。

另外，本发明还提供一种脂肪干细胞提取物的抗皱精华液制备方法。

作为本发明的进一步方案，本发明的一实施例中，包括以下步骤及脂肪干细胞；

所述步骤如下：

步骤1、按重量份数称取配方成分；

步骤2、将烟酰胺、氨甲环酸和尿囊素进行混合，然后加入少量去离子水进行充分的溶解，之后加入聚谷氨酸钠再次进行充分的溶解，随后再加入透明质酸钠进行充分溶解，最后再加入脂肪干细胞进行混合定容，致使得到精华液。

与相关技术相比较，本发明提供的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法具有如下有益效果：

1、本发明通过在提取脂肪干细胞的过程中，胶原酶主要起到消化脂肪组织中的胶原组织，使细胞松散，便于干细胞脱落的作用，一定程度上提高胶原酶浓度，缩短消化时间，既可以显著增加干细胞提取量，又可以减少操作时间，降低污染可能性，也不会出现干细胞生物学特性和分化能力的改变。

具体实施方式

脂肪干细胞提取物的抗皱精华液包括以下步骤：

S1.准备材料：脂肪干、I型胶原酶、基础培养基和DMEM培养基；

S2.提取工序：

(1).将上述S1中准备好的脂肪干剪成小块，并通过PBS缓冲液冲洗2～4次；

(2).将上述(1)中处理好的脂肪干小块在27℃的环境下，由0.25％的I型胶原酶进行消化，消化时间为30min，然后将含有10％的FBS的DMEM培养基加入，进行中合；

(3).将上述(2)中处理好的产物放置到离心设备中进行离心处理，速度为1000转/min，离心时间为10min，致使弃去上清液；

所述上述S1中准备好的基础培养基重悬细胞接种培养瓶进行培养，时间为48h，之后进行换液工作，并去除未贴壁的细胞，之后每天更换培养基，使细胞生长至亚融合状态。

所述上述培养好之后在温度为37℃的环境下，用0.25％的胰酶消化，然后通过离心力去除上清液，最后在通过基础培养基重悬细胞，使细胞悬液按1:2接种至培养瓶内，且每3天更换一次培养基，最后通过油红O染色，进而得到脂肪干细胞。

所述S1准备的脂肪干需剔除软组织和小血管，并通过PBS缓冲液冲洗3～5次。

本发明提供的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液的工作原理如下：

通过在提取脂肪干细胞的过程中，胶原酶主要起到消化脂肪组织中的胶原组织，使细胞松散，便于干细胞脱落的作用，一定程度上提高胶原酶浓度，缩短消化时间，既可以显著增加干细胞提取量，又可以减少操作时间，降低污染可能性，也不会出现干细胞生物学特性和分化能力的改变。

另外，本发明还提供一种脂肪干细胞提取物的抗皱精华液制备方法。

本发明的一实施例中，包括以下步骤及脂肪干细胞；

所述步骤如下：

步骤1、按重量份数称取配方成分；

步骤2、将烟酰胺、氨甲环酸和尿囊素进行混合，然后加入少量去离子水进行充分的溶解，之后加入聚谷氨酸钠再次进行充分的溶解，随后再加入透明质酸钠进行充分溶解，最后再加入脂肪干细胞进行混合定容，致使得到精华液。

本发明的精华液可用于面部涂抹,且具有明显改善面部皱纹的优点。

Claims (5)

1.一种脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，包括以下步骤：

S1.准备材料：脂肪干、I型胶原酶、基础培养基和DMEM培养基；

S2.提取工序：

(1).将上述S1中准备好的脂肪干剪成小块，并通过PBS缓冲液冲洗2～4次；

(2).将上述(1)中处理好的脂肪干小块在27℃的环境下，由0.25％的I型胶原酶进行消化，消化时间为30min，然后将含有10％的FBS的DMEM培养基加入，进行中合；

(3).将上述(2)中处理好的产物放置到离心设备中进行离心处理，速度为1000转/min，离心时间为10min，致使弃去上清液。

2.根据权利要求1所述的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于：所述上述S1中准备好的基础培养基重悬细胞接种培养瓶进行培养，时间为48h，之后进行换液工作，并去除未贴壁的细胞，之后每天更换培养基，使细胞生长至亚融合状态。

3.根据权利要求2所述的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于：所述上述培养好之后在温度为37℃的环境下，用0.25％的胰酶消化，然后通过离心力去除上清液，最后在通过基础培养基重悬细胞，使细胞悬液按1:2接种至培养瓶内，且每3天更换一次培养基，最后通过油红O染色，进而得到脂肪干细胞。

4.根据权利要求1所述的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于：所述S1准备的脂肪干需剔除软组织和小血管，并通过PBS缓冲液冲洗3～5次。

5.一种脂肪干细胞提取物的抗皱精华液制备方法，其特征在于：包括以下步骤及如权利要求1-2中任一项所述的脂肪干细胞提取物的抗皱精华液用脂肪干细胞；

所述步骤如下：

步骤1、按重量份数称取配方成分；

步骤2、将烟酰胺、氨甲环酸和尿囊素进行混合，然后加入少量去离子水进行充分的溶解，之后加入聚谷氨酸钠再次进行充分的溶解，随后再加入透明质酸钠进行充分溶解，最后再加入脂肪干细胞进行混合定容，致使得到精华液。