CN115151257A - 用于治疗与dux4表达相关的疾病的新颖化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及化合物，这些化合物充当DUX4阻遏物，适用于治疗与DUX4表达相关的疾病例如肌营养不良。它还涉及这样的化合物的用途，或这样的化合物的使用方法。

Description

用于治疗与DUX4表达相关的疾病的新颖化合物
技术领域
本发明涉及化合物，这些化合物充当DUX4阻遏物，适用于治疗与DUX4表达相关的疾病例如肌营养不良和癌症。它还涉及这样的化合物的用途，或这样的化合物的使用方法。
背景技术
面肩肱型肌营养不良(FSHD)是最常见的遗传性肌营养不良。症状在20岁之前开始出现，眼和嘴、肩膀、上臂和小腿周围的肌肉无力和萎缩。随后，无力会蔓延到腹部肌肉，有时甚至是臀部肌肉，大约20％的患者最终会坐轮椅。患者目前依靠治疗疼痛和疲劳等症状，包括使用止痛药、认知疗法和体育锻炼，有时还辅以用于保持患者活动能力的医疗设备。此外，可以通过肩胛骨的手术治疗来获得增加的肩胛骨功能。最好的情况下，这些干预措施本质上仍然是对症的，不会影响疾病进展，这说明需要能够改变疾病进展的疗法。
近年来，在对FSHD分子基础的理解方面已经取得了重大进展。这导致了引起FSHD的基本遗传病变的鉴定和表征，产生了发病机制模型，其中肌肉细胞中双同源框4(DUX4)逆基因的功能获得是FSHD病因学的基础(Lemmers等人,2010,DOI:10.1126/science[科学].1189044；Sharma等人,2016,DOI:10.4172/2157-7412.1000303,Snider等人,2010,DOI:10.1371/journal.pgen.1001181；Tawil等人,2014,DOI:10.1186/2044-5040-4-12)。DUX4是转录因子，它靶向几个基因并通过启动转录失调级联来触发病理学，该级联抑制肌生成并导致肌肉萎缩、炎症和氧化应激，最终导致进行性肌肉细胞功能障碍和死亡(Kowaljow等人,2007,DOI:10.1016/j.nmd.2007.04.002；Vanderplanck等人,2011,doi:10.1371/journal.pone.0026820；Geng等人,2012,DOI:10.1016/j.devcel.2011.11.013；Yao等人,2014,DOI:10.1093/hmg/ddu251；Wallace等人,2011,DOI:10.1002/ana.22275)。DUX4通常在人睾丸的生殖细胞中大量表达，而在体细胞组织中受到表观遗传阻遏。DUX4基因位于DNA串联阵列(D4Z4)内，该阵列位于染色体4q35的亚端粒区域。
FSHD有时分为两种亚型，即FSHD1和FSHD2。在大多数患者(FSHD1)中，该疾病与D4Z4阵列内的大缺失有关。健康、遗传未受影响的个体被定义为在两个4q染色体臂上具有10到100个D4Z4重复单元，而具有FSHD1的个体在一个4q染色体臂上具有1到10个D4Z4重复单元。表征FSHD的D4Z4重复序列的缺失从该区域去除了大部分调节染色质，包括数百个组蛋白和大量富含CpG的DNA。这些元件在DNA甲基化和异染色质的建立中是必不可少的，它们的缺失会显著改变D4Z4阵列的表观遗传状态，从而导致该区域的去阻遏。携带较少重复序列数目(1-3个单元)的患者平均比那些重复序列数目较多(8-9个单元)的患者受到更严重的影响(Tawil等人,1996,DOI:10.1002/ana.410390610)。D4Z4的缩小本身没有致病性。只有当D4Z4的缩小发生在允许疾病的4qA等位基因上时(该等位基因包含可能影响远端DUX4转录物的多腺苷酸化的多态性)，改变的表观遗传背景与可变剪接和DUX4在FSHD1患者骨骼肌中的表达增加有关。在更为罕见的FSHD2形式中，患者表现出相似的症状，但在基因上与FSHD1不同。这些患者具有更长的D4Z4重复序列，但表现出D4Z4基因座的类似去阻遏，导致DUX4表达(Calandra等人,2016；Jones等人,2014；2015)。这种染色质阻遏的丧失是由表观遗传因子(例如SMCHD1或DNMT3B)的突变形式引起的。两种形式的FSHD都集中在过度的DUX4表达上(Van den Boogaard等人,2016,DOI:10.1016/j.ajhg.2016.03.013)。
在健康个体中，DUX4在生殖系中表达，但在体细胞组织中表观遗传沉默。在FSHD患者中，只有一小部分肌纤维中的爆发样DUX4表达导致肌细胞死亡，最终导致肌肉无力和消瘦(Lemmers等人，2010)。简而言之，DUX4过表达是FSHD的主要致病性损伤，其阻遏是针对FSHD的一种有前途的治疗方法。为了支持这一点，短的重复序列大小通常与严重的FSHD表型相关。中度重复序列缩小的临床严重程度较轻且变化较大。具有少于10个D4Z4重复单元(FSHD1)且在SMCHD1(FSHD2)中也具有突变的患者具有非常严重的临床表型，这说明重复序列大小和表观遗传修饰剂的活性(两者都有助于DUX4的去阻遏)的组合决定了FSHD的最终疾病严重程度。
由于其在FSHD中的致病作用，抑制DUX4是阻止疾病进展的主要治疗方法。这种方法也可用于治疗其他疾病，例如癌症，包括急性淋巴细胞白血病(Yasuda等人,2016,doi:10.1038/ng.3535)和肉瘤(Oyama等人,2017DOI:10.1038/s41598-017-04967-0；Bergerat等人,2017,DOI:10.1016/j.prp.2016.11.015)等。最近表明，DUX4也在多种实体癌中重新表达。顺式作用遗传性基因变异和反式作用阻遏因子中的体细胞获得性突变都促成癌症中的DUX4重新表达。表达DUX4的癌症的特征是抗肿瘤溶细胞活性标志物减少和主要组织相容性复合物(MHC)I类基因表达降低。DUX4表达阻断干扰素-γ介导的MHC I类诱导，暗示抗原呈递的抑制和DUX4在肿瘤免疫逃避中的潜在作用。转移性黑色素瘤的临床数据显示，DUX4表达与响应于抗CTLA-4的无进展生存和总生存显著降低有关。这些数据表明，癌症可以通过重新活化DUX4表达来逃避免疫监视，并且DUX4介导的MHC I类依赖性抗原呈递的抑制是对免疫检查点阻断的响应的临床相关生物标志物。这意味着阻遏DUX4也是几种肿瘤适应症的治疗相关方法，并且可以作为辅助治疗以增加对肿瘤免疫疗法的响应(Chew等人,2019,DOI:10.1016/j.devcel.2019.06.011)。
DUX4表达背后的机制知之甚少，并且相应的药物靶标定义不清。因此，目前没有针对FSHD的治疗方法，需要可用于抑制DUX4表达的化合物和组合物。
发明内容
本发明提供通式(I-cyc)或(I)的化合物：
Figure BDA0003743572290000021
其中cyc是苯基环、5元杂芳基环或6元杂芳基环；R1是H、卤素、腈、-C1-4烷基、-C1-3烷基-腈、-C1-4卤代烷基、-C1-3卤代烷基-腈、-O-C1-4烷基、-O-C1-3烷基-腈、-O-C1-4卤代烷基、-O-C1-3卤代烷基-腈、-S-C1-4烷基、-S-C1-3烷基-腈、-S-C1-4卤代烷基、或-S-C1-3卤代烷基-腈；m是0、1、2或3；n1是N、CH或C(CH3)；R2是H、卤素、腈、-C1-4烷基、-C1-3烷基-腈、-C1-4卤代烷基、-C1-3卤代烷基-腈、-O-C1-4烷基、-O-C1-3烷基-腈，-O-C1-4卤代烷基，-O-C1-3卤代烷基-腈、-S-C1-4烷基、-S-C1-3烷基-腈、-S-C1-4卤代烷基、-S-C1-3卤代烷基-腈，或R2与Q一起形成桥接部分；n是0、1或2；R3是卤素或C1-4烷基；p是0、1或2；X1是CH、C(R2)、N或C(Q)；X2是CH、C(R2)或N；Q是H、卤素、C1-6烷基、-OH、-O-C1-6烷基、-O-C1-6酰基、-NH2、-NH-(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-NH(C1-8酰基)、-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-OH、-C1-4烷基-O-C1-6烷基、-C1-4烷基-O-C1-6酰基、-C1-4烷基-NH2、-C1-4烷基-NH-(C1-6烷基)、-C1-4烷基-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-NH(C1-8酰基)、-C1-4烷基-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-NH-C1-6烷基、-C1-4烷基-N-C(O)-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-O-C(O)-NH-C1-6烷基、-C1-4烷基-O-C(O)-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-O-C1-6烷基，或Q与R2一起形成选自以下的桥接部分：-NH-CH＝CH-、-NH-(C2-4烷基)-和-(C1-3烷基)-NH-(C1-3烷基)-；c1是H并且c2是C4-8环烷基、C4-8杂环烷基、C4-8环烷基-C1-3烷基、C4-8杂环烷基-C1-3烷基、C1-3烷基-C4-8环烷基、或C1-3烷基-C4-8杂环烷基，或c1和c2一起形成环状结构A；A是C5-12环烷基，其可以是环状、双环和三环，并且任选地是不饱和的，并且任选地被卤素、C1-4烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、-O-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、羟基、-C(＝O)-NH2、-C(＝O)-NH(CH3)、-C(＝O)-N(CH3)2、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)2取代；其中酰基、烷基、环烷基或杂环烷基的每个情况单独地任选地是不饱和的，并且任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基或三氟甲基取代，或任选地被一个或多个杂原子中断；或其盐。
优选地，R1是H、氟、氯、-CH3、-CF3、-O-CH3或腈；m是0或1；n1是N或CH；R2是H、氟、氯，或形成桥接部分；n是0；R3是-CH3；p是0或1；X1是C(Q)；X2是H；Q是H、F、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH-C(O)-哌啶基、-NH-C(O)-吡啶基、-NH-C(O)-吗啉基、-NH-C(O)-环氧乙烷基、-NH2、-NH(CH3)、-NH(环戊基)、-CH2-NH-C(O)-CH3、-CH2-N(CH3)2、-CH2-NH2、-CH2-NH-(CH3)、-CH2-NH-(环戊基)、或与R2一起形成-NH-CH＝CH-；和/或c1是H并且c2是吡啶基、-CH2-吡啶基、哌啶基、N-甲基哌啶基、-CH2-哌啶基、-CH2-(N-甲基哌啶基)、环戊基、羟基环戊基、-CH2-环戊基、-CH2-羟基环戊基、吡咯烷基、N-甲基吡咯烷基、-CH2-吡咯烷基、-CH2-(N-甲基吡咯烷基)，或c1和c2一起形成环状结构A。更优选地R1是H、氟或氯；R2是H或形成桥接部分；p是0；和/或其中Q是H、-CH3、-CHF2、-OCH3、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH-C(O)-哌啶基、-NH-C(O)-吡啶基、-NH-C(O)-吗啉基、-NH-C(O)-环氧乙烷基、-NH2、-CH2-NH-(CH3)、或与R2一起形成-NH-CH＝CH-。在优选实施例中，A是任选地取代且任选地不饱和的氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂环庚基、二氮杂环庚基或氧杂氮杂环庚基；其中每个任选的取代可以是用卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、-O-C1-4烷基、羟基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代；优选每个任选的取代独立地选自甲基、二甲胺、甲氧基、丙基、羟基、桥接C1-3烷基部分、螺氮杂环丁烷基、螺N-甲基氮杂环丁烷基、螺氧杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、螺哌啶基、二氟哌啶基、螺N-甲基哌啶基、螺环丙基、稠合吡咯烷基或稠合N-甲基吡咯烷基。
化合物可以具有通式(I-A-cyc)或(I-A)：
Figure BDA0003743572290000031
在优选实施例中，化合物具有通式(II-cyc)或(II)，更优选具有通式(II-A-cyc)或(II-A)：
Figure BDA0003743572290000032
Figure BDA0003743572290000041
在优选实施例中，化合物具有通式(III-cyc)或(III)，更优选具有通式(III-A-cyc)或(III-A)：
Figure BDA0003743572290000042
优选地，A是双环、螺环或桥接的，优选选自A3-A9、A12、A13、A15-A19和A22；更优选它是双环或桥接的，甚至更优选选自A3-A6和A9。优选地，m是1且其中R1在化合物的双环核心的邻位、间位或对位，优选其中R1是卤素，更优选氟或氯，更优选氟。该化合物优选选自表1中列出的化合物1-203。更优选它选自表1中列出的化合物5、22、25、26、28、45、47、1、3、4、12、13、16、17、18、19、27、29、32、42、44，2、6、7、8、9、10、11、15、20、21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46；更优选选自化合物1、3、4、12、13、16、17、18、19、27、29、32、42、44、2、6、7、8、9、10、11、15、20，21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46；最优选选自化合物2、6、7、8、9、10、11、15、20、21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46。
本发明还提供了一种组合物，其包含至少一种如上定义的通式(I)的化合物、和药学上可接受的赋形剂。本发明还提供如上定义的化合物或组合物，用作药物，其中药物优选用于治疗与DUX4表达相关的疾病或病症，并且其中通式(I)的化合物降低DUX4表达，其中更优选地，所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良或癌症，甚至更优选地，其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良，最优选面肩肱型肌营养不良(FSHD)。
本发明还提供用于降低DUX4表达的体内、体外或离体方法，该方法包括使细胞与如上定义的通式(I)的化合物或如上定义的组合物接触的步骤。本发明还提供了一种在有需要的受试者中降低DUX4表达的方法，该方法包括施用有效量的如上定义的通式(I)的化合物或如上定义的组合物的步骤。
具体实施方式
化合物
发明人已经鉴定出充当DUX4阻遏因子的新化合物。本发明提供通式(I-cyc)或(I)的化合物：
Figure BDA0003743572290000051
其中
cyc是苯基环、5元杂芳基环或6元杂芳基环；
R1是H、卤素、腈、-C1-4烷基、-C1-3烷基-腈、-C1-4卤代烷基、-C1-3卤代烷基-腈、-O-C1-4烷基、-O-C1-3烷基-腈、-O-C1-4卤代烷基、-O-C1-3卤代烷基-腈、-S-C1-4烷基、-S-C1-3烷基-腈、-S-C1-4卤代烷基、或-S-C1-3卤代烷基-腈；
m是0、1、2或3；
n1是N、CH或C(CH3)；
R2是H、卤素、腈、-C1-4烷基、-C1-3烷基-腈、-C1-4卤代烷基、-C1-3卤代烷基-腈、-O-C1-4烷基、-O-C1-3烷基-腈，-O-C1-4卤代烷基，-O-C1-3卤代烷基-腈、-S-C1-4烷基、-S-C1-3烷基-腈、-S-C1-4卤代烷基、-S-C1-3卤代烷基-腈，或R2与Q一起形成桥接部分；
n是0、1或2；
R3是卤素或C1-4烷基；
p是0、1或2；
X1是CH、C(R2)、N或C(Q)；
X2是CH、C(R2)或N；
Q是H、卤素、C1-6烷基、-OH、-O-C1-6烷基、-O-C1-6酰基、-NH2、-NH-(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-NH(C1-8酰基)、-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-OH、-C1-4烷基-O-C1-6烷基、-C1-4烷基-O-C1-6酰基、-C1-4烷基-NH2、-C1-4烷基-NH-(C1-6烷基)、-C1-4烷基-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-NH(C1-8酰基)、-C1-4烷基-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-NH-C1-6烷基、-C1-4烷基-N-C(O)-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-O-C(O)-NH-C1-6烷基、-C1-4烷基-O-C(O)-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-O-C1-6烷基，或Q与R2一起形成选自以下的桥接部分：-NH-CH＝CH-、-NH-(C2-4烷基)-和-(C1-3烷基)-NH-(C1-3烷基)-；
c1是H并且c2是C4-8环烷基、C4-8杂环烷基、C4-8环烷基-C1-3烷基、C4-8杂环烷基-C1-3烷基、C1-3烷基-C4-8环烷基、或C1-3烷基-C4-8杂环烷基，或c1和c2一起形成环状结构A；
A是C5-12环烷基，其可以是环状、双环和三环，并且任选地是不饱和的，并且任选地被卤素、C1-4烷基、-O-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、羟基、-C(＝O)-NH2、-C(＝O)-NH(CH3)、-C(＝O)-N(CH3)2、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代；
其中酰基、烷基、环烷基或杂环烷基的每个情况单独地任选地是不饱和的，并且任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基或三氟甲基取代，或任选地被一个或多个杂原子中断；
或其盐。这样的化合物在本文中称为根据本发明的化合物。在优选实施例中，化合物是盐，更优选酸加成盐，最优选药学上可接受的酸加成盐。
优选c1和c2一起形成环状结构A。在优选实施例中，通式(I-cyc)或(I)的化合物具有通式(I-A-cyc)或(I-A)，更优选(I-A)：
Figure BDA0003743572290000061
化合物的双环核心
根据本发明的化合物具有与六元环稠合的中心五元环，形成包含至少两个氮原子的双环芳族系统。该部分在下文中称为双环核心。该核心在n1中有变量，并且它可以任选地被R3的0、1或2个实例取代。R3取代的量用p表示，可以是0、1或2。在优选实施例中，p是0或1。在优选实施例中，p是1或2。在优选实施例中，p是0或2。在优选实施例中，p是1。在优选实施例中，p是2。最优选p是0。
R3是卤素或C1-4烷基取代基。该C1-4烷基优选是甲基、异丙基、乙基或叔丁基。更优选C1-3烷基，甚至更优选C1-2烷基，最优选甲基。作为卤素，优选氟化物或氯化物，最优选氟化物。在特定实施例中，R3是甲基或F。
在优选实施例中，R3中的烷基的情况不是不饱和的。在优选实施例中，R3中的烷基的情况任选地是不饱和的。在优选实施例中，R3中的烷基的情况是不饱和的。在优选实施例中，R3中的烷基的情况未被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，并且未被一个或多个杂原子任选地中断。在优选实施例中，R3中的烷基的情况任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，并且未被一个或多个杂原子中断。在优选实施例中，R3中的烷基的情况任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，和/或被一个或多个杂原子任选地中断，和/或任选地是不饱和的。
n1是N、CH或C(CH3)。在一些实施例中，n1是N或C(CH3)。在一些实施例中，n1是CH或C(CH3)。在优选实施例中，n1是N或CH。在其他优选实施例中，n1是C(CH3)。在其他优选实施例中，n1是CH。最优选n1是N。优选地，当R3存在时，n1是CH或C(CH3)，优选CH。优选地，当R3不存在时，n1是N。
在优选实施例中，化合物的双环核心如下所示(参考名称显示在结构下方)。优选BC-1BC7，特别优选BC1-BC4，甚至更优选BC1、BC2和BC4，最优选BC1。
Figure BDA0003743572290000062
Figure BDA0003743572290000071
通式(I-cyc)或(I)的化合物优选具有通式(III-cyc)或(III)，更优选具有通式(III-A-cyc)或(III-A)，最优选(III-A)：
Figure BDA0003743572290000072
化合物的C键合环部分
该化合物具有苯基、5-元杂芳基或6-元杂芳基部分，其附接至分隔本发明化合物的双环核心的五元部分中的两个氮原子的碳。它被0、1、2或3个R1实例取代。该部分在本文中称为C键合环部分。如果C键合环部分是(取代的)苯基基团，则C键合环部分也可以称为化合物的苯基部分。R1取代的量用m表示，可以是0、1、2或3。在优选实施例中，m是0、1或2。在优选实施例中，m是1、2或3。在优选实施例中，m是1或2。在优选实施例中，m为0。在优选实施例中，m是1。在优选实施例中，m是2。在优选实施例中，m是3。最优选地，m是0或1。
cyc是苯基环、5元杂芳基环或6元杂芳基环。5元杂芳环可以是任何包含环内杂原子的芳族5元有机环，其中所述杂原子优选选自氮、氧和硫。在一个优选的实施例中，5元杂芳基环是吡咯、咪唑、吡唑、呋喃、噁唑、异噁唑、噻吩、噻唑或异噻唑。在更优选实施例中，5元环是噻吩或噻唑。6元杂芳环可以是任何包含环内杂原子的芳族6元有机环，其中所述杂原子优选选自氮、氧和硫。在优选实施例中，6元杂芳基环是吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪或吡喃鎓。在更优选实施例中，6元杂芳基环是吡啶。5元杂芳基环优选2-连接至本发明化合物的核心。6元杂芳基环优选2-或3-连接至本发明化合物的核心。
在优选实施例中，cyc是2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-噻吩基或2-噻唑基。在更优选实施例中，cyc是2-吡啶基、3-吡啶基或4-吡啶基。在更优选实施例中，cyc是2-噻吩基或2-噻唑基。
R1是取代基，其是H、卤素、腈、-C1-4烷基、-C1-3烷基-腈、-C1-4卤代烷基，-C1-3卤代烷基-腈、-O-C1-4烷基、-O-C1-3烷基-腈、-O-C1-4卤代烷基、-O-C1-3卤代烷基-腈、-S-C1-4烷基、-S-C1-3烷基-腈、-S-C1-4卤代烷基、或-S-C1-3卤代烷基-腈；优选地其是H、卤素、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基，-S-C1-4烷基，或-S-C1-4卤代烷基；在优选实施例中，R1是H、氟、氯、-CH3、-CF3、-O-CH3、或腈；更优选地其是H、氟、氯、-CH3、-CF3或-O-CH3。在此，-C1-4烷基和-C1-4卤代烷基优选地是-C1-3烷基或C1-3卤代烷基，更优选C1变体或异丙基，最优选C1变体。
在优选实施例中，R1是卤素、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、-S-C1-4烷基或-S-C1-4卤代烷基。在优选实施例中，R1是H、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、-S-C1-4烷基或-S-C1-4卤代烷基。在优选实施例中，R1是H、卤素、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基、-S-C1-4烷基，或-S-C1-4卤代烷基。在优选实施例中，R1是H、卤素、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-S-C1-4烷基，或-S-C1-4卤代烷基。在优选实施例中，R1是H、卤素、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-C1-4烷基或-O-C1-4卤代烷基。
当m不是0时，C键合环部分具有至少一个R1。当存在R1时，它优选在双环核心的间位或对位。在优选实施例中，它在双环核心的邻位。在优选实施例中，它在双环核心的间位。在优选实施例中，它在双环核心的对位。在优选实施例中，它在双环核心的邻位或间位。在优选实施例中，它在双环核心的邻位或对位。最优选单个R1当存在时在双环核心的对位。在优选实施例中，m是1并且R1在化合物的双环核心的邻位、间位或对位，优选本文中R1是卤素，更优选氟或氯，优选氟。在优选实施例中，提供了根据本发明的化合物，其中m是1，并且其中R1在双环核心的对位，优选其中R1是卤素，更优选氟。
在优选实施例中，C键合环部分是苯基部分。根据这些实施例的化合物可以由通式(I)表示。在更优选实施例中，由通式(I)表示的化合物的苯基部分如下所示，每个结构下方显示参考名称。特别优选Ph1-Ph9和Ph10-Ph19，更优选Ph1-Ph9和Ph17，甚至更优选Ph1-Ph8和Ph17，非常优选Ph4、Ph6、Ph8和Ph17，甚至更优选Ph6、Ph8和Ph17。在一些高度优选的实施例中，Ph是Ph6。在一些高度优选的实施例中，Ph是Ph8。在一些高度优选的实施例中，Ph是Ph17。
Figure BDA0003743572290000081
Figure BDA0003743572290000091
在优选实施例中，C键合环部分是5元杂芳基环或6元杂芳基环。在更优选实施例中，C键合环部分如下所示，每个结构下方显示参考名称。在更优选实施例中，C键合环部分是Ph35、Ph36、Ph41、Ph42或Ph43。在更优选实施例中，C键合环部分是Ph37、Ph38、Ph39或Ph40。
Figure BDA0003743572290000092
在优选实施例中，C键合环部分选自Ph1-Ph43组。
在优选实施例中，R1中的烷基或卤代烷基的情况不是不饱和的。在优选实施例中，R1中的烷基或卤代烷基的情况任选地是不饱和的。在优选实施例中，R1中的烷基或卤代烷基的情况是不饱和的。在优选实施例中，R1中的烷基或卤代烷基的情况未被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，并且未被一个或多个杂原子任选地中断。在优选实施例中，R1中的烷基或卤代烷基的情况任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，并且未被一个或多个杂原子中断。在优选实施例中，R1中的烷基或卤代烷基的情况任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，和/或被一个或多个杂原子任选地中断，和/或任选地是不饱和的。
化合物的吡啶部分
根据本发明的化合物具有与根据本发明的化合物的双环核心的氮原子附接的吡啶基样部分。它被0、1或2个R2情况取代。应当理解，这不包括当被包含在X1或X2中时的R2。该芳族杂环在本文中称为吡啶部分。R2取代的量用n表示，可以是0、1或2。在优选实施例中，n是0或1。在优选实施例中，n是1或2。在优选实施例中，n是1。在优选实施例中，n是2。最优选n是0。当n是0时，R2仍然可以存在于X1或X2中。
当n不是0时，吡啶部分具有至少一个R2。当存在这样的R2时，它在双环核心的邻位或间位。在优选实施例中，它在双环核心的邻位。在优选实施例中，它在双环核心的间位。
R2是取代基，其是H、卤素、腈、-C1-4烷基、-C1-3烷基-腈、-C1-4卤代烷基、-C1-3卤代烷基-腈、-O-C1-4烷基、-O-C1-3烷基-腈，-O-C1-4卤代烷基，-O-C1-3卤代烷基-腈、-S-C1-4烷基、-S-C1-3烷基-腈、-S-C1-4卤代烷基、-S-C1-3卤代烷基-腈，或R2与Q一起形成桥接部分；优选地其是H、卤素、-C1-4烷基、-C1-4卤代烷基、-O-C1-4烷基、-O-C1-4卤代烷基，-S-C1-4烷基，-S-C1-4卤代烷基，或R2与Q一起形成桥接部分；在优选实施例中，R2是H、氟、氯、或与Q一起形成桥接部分；更优选地其是H、氟或氯。在此，-C1-4烷基和-C1-4卤代烷基优选地是-C1-3烷基或C1-3卤代烷基，更优选C1变体或异丙基，最优选C1变体。
在优选实施例中，R2中的烷基或卤代烷基的情况不是不饱和的。在优选实施例中，R2中的烷基或卤代烷基的情况任选地是不饱和的。在优选实施例中，R2中的烷基或卤代烷基的情况是不饱和的。在优选实施例中，R2中的烷基或卤代烷基的情况未被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，并且未被一个或多个杂原子任选地中断。在优选实施例中，R2中的烷基或卤代烷基的情况任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，并且未被一个或多个杂原子中断。在优选实施例中，R2中的烷基或卤代烷基的情况任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，和/或被一个或多个杂原子任选地中断，和/或任选地是不饱和的。
X1是CH、C(R2)、N或C(Q)；在优选实施例中，X1是CH、C(R2)或N；在优选实施例中，X1是CH、C(R2)或N；在优选实施例中，X1是CH、C(R2)或C(Q)；在优选实施例中，X1是CH、N或C(Q)；在优选实施例中，X1是C(R2)、N或C(Q)；在优选实施例中，X1是CH或C(R2)；在优选实施例中，X1是CH或C(Q)；在优选实施例中，X1是CH或N；在优选实施例中，X1是N或C(R2)；在优选实施例中，X1是C(Q)或C(R2)；在优选实施例中，X1是N或C(Q)；在优选实施例中，X1是CH；在优选实施例中，X1是C(R2)；在优选实施例中，X1是N；在最高度优选实施例中，X1是C(Q)。
X2是CH、C(R2)或N；在优选实施例中，X1是C(R2)或N；在优选实施例中，X1是CH或N；在优选实施例中，X1是CH或C(R2)；在优选实施例中，X1是C(R2)；在优选实施例中，X1是N；最优选X2是CH。当X2是C(R2)时，R2优选与Q形成桥接部分。
优选地，X1和X2至多之一是N。更优选地，当X1和X2之一不是CH时，X1和X2中的另一个是CH。
Q是H、卤素、C1-6烷基、-OH、-O-C1-6烷基、-O-C1-6酰基、-NH2、-NH-(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-NH(C1-8酰基)、-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-OH、-C1-4烷基-O-C1-6烷基、-C1-4烷基-O-C1-6酰基、-C1-4烷基-NH2、-C1-4烷基-NH-(C1-6烷基)、-C1-4烷基-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-NH(C1-8酰基)、-C1-4烷基-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-NH-C1-6烷基、-C1-4烷基-N-C(O)-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-O-C(O)-NH-C1-6烷基、-C1-4烷基-O-C(O)-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-O-C1-6烷基，或Q与R2一起形成选自以下的桥接部分：-NH-CH＝CH-、-NH-(C2-4烷基)-和-(C1-3烷基)-NH-(C1-3烷基)-；优选地Q是H、F、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH-C(O)-哌啶基、-NH-C(O)-吡啶基、-NH-C(O)-吗啉基、-NH-C(O)-环氧乙烷基、-NH2、-NH(CH3)、-NH(环戊基)、-CH2-NH-C(O)-CH3、-CH2-N(CH3)2、-CH2-NH2、-CH2-NH-(CH3)、-CH2-NH-(环戊基)、或与R2一起形成优选为-NH-CH＝CH-的桥接部分；更优选地，Q是H、-CH3、-CHF2、-OCH3、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH-C(O)-哌啶基、-NH-C(O)-吡啶基、-NH-C(O)-吗啉基、-NH-C(O)-环氧乙烷基、-NH2、-CH2-NH-(CH3)、或与R2一起形成优选为-NH-CH＝CH-的桥接部分；甚至更优选地，Q是H、F、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH2、-NH(CH3)、-NH(环戊基)、-CH2-NH-C(O)-CH3、-CH2-NH-(环戊基)、或与R2一起形成优选是-NH-CH＝CH-的桥接部分。此处，-烷基和-酰基当位于部分的末端时优选地是-C1-4烷基或C2-4酰基或C3-6环烷基或C5-6芳基，更优选地是C3-6环烷基或C5-6芳基。在此，-C1-4烷基-在杂原子之前时优选地是C1-2烷基，更优选地是-CH2-或-CH2CH2-，最优选地是-CH2-。应理解，对于-N(C1-6烷基)2、-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-N(C1-6烷基)2和-C1-4烷基-O-C(O)-N(C1-6烷基)2，后两个烷基或酰基部分可以与它们所附接的N一起形成杂环，优选C4-6杂环或C5-6杂芳基，最优选C5-6杂环或C5-6杂芳基，最优选C5-6杂环。
由Q和R2形成的桥接部分选自-NH-CH＝CH-、-NH-(C2-4烷基)-和-(C1-3烷基)-NH-(C1-3烷基)-。优选的实例是-NH-CH＝CH-、-NH-CH2-CH2-、-NH-CH2-、-N＝CH-CH2-CH2-、-CH2-CH2-NH-CH2-CH2和-CH2-NH-CH2。
在优选实施例中，Q中的烷基或酰基的情况不是不饱和的。在优选实施例中，Q中的烷基或酰基的情况任选地是不饱和的。在优选实施例中，Q中的烷基或酰基的情况是不饱和的。在优选实施例中，Q中的烷基或酰基的情况未被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，并且未被一个或多个杂原子任选地中断。在优选实施例中，Q中的烷基或酰基的情况任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，并且未被一个或多个杂原子中断。在优选实施例中，Q中的烷基或酰基的情况任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，和/或被一个或多个杂原子任选地中断，和/或任选地是不饱和的。
在优选实施例中，化合物的吡啶部分如下所示，每个结构下方显示参考名称。特别优选Py1-Py27，甚至更优选Py1-Py18，再更优选Py1-Py12，非常优选Py1-Py4，最优选Py1。
Figure BDA0003743572290000111
通式(I-cyc)或(I)的化合物优选具有通式(II-cyc)或(II)，更优选具有通式(II-A-cyc)或(II-A)，最优选(II-A)：
Figure BDA0003743572290000121
化合物的芳基胺部分
根据本发明的化合物具有芳基胺部分，其与根据本发明的化合物的双环核心的n1相邻附接。它被c1和c2N,N’-二取代。
c1是H并且c2是C4-8环烷基、C4-8杂环烷基、C4-8环烷基-C1-3烷基、C4-8杂环烷基-C1-3烷基、C1-3烷基-C4-8环烷基、或C1-3烷基-C4-8杂环烷基，或c1和c2一起形成环状结构A；当c1是H时，优选c2是吡啶基、-CH2-吡啶基、哌啶基、N-甲基哌啶基、-CH2-哌啶基、-CH2-(N-甲基哌啶基)、环戊基、羟基环戊基、-CH2-环戊基、-CH2-羟基环戊基、吡咯烷基、N-甲基吡咯烷基、取代的哌啶基例如羟基哌啶基(例如哌啶-3-醇-5-基)或烷基化哌啶基(例如1-甲基哌啶-3-基)、烷基化吡咯烷基例如1-(2,2-二氟乙基)吡咯烷-3-基或1-甲基吡咯烷-3-基或4,4-二氟-1-甲基吡咯烷-3-基、氧杂环戊烷基例如氧杂环戊烷-3-基、-CH2-吡咯烷基、-CH2-(N-甲基吡咯烷基)。最优选c1和c2一起形成环状结构A。
在c2中，C1-3烷基优选是-CH2CH2-或-CH2-，最优选-CH2-。在c2中，烷基优选不是不饱和的或取代的。在优选实施例中，C4-8环烷基和C4-8杂环烷基当包含在c2中时是不饱和的。在优选实施例中，C4-8环烷基和C4-8杂环烷基当包含在c2中时不是不饱和的。在优选实施例中，C4-8环烷基和C4-8杂环烷基当包含在c2中时未被取代。在优选实施例中，C4-8环烷基和C4-8杂环烷基当包含在c2中时如本文其他地方所述被取代。
当c1是H时，c2的优选实施例如下所示，每个结构下方显示参考名称。在优选实施例中，c2是C2_1-C2_4。在优选实施例中，c2是C2_5-C2_8。在优选实施例中，c2是C2_3-C2_7。在优选实施例中，c2是C2_1-C2_3或C2_8。在优选实施例中，c2是C2_1-C2_3。
Figure BDA0003743572290000122
Figure BDA0003743572290000131
在优选实施例中，C2_1具有绝对构型(3R)或(3S)。在优选实施例中，C2_13具有绝对构型(3R)或(3S)。A是C4-12杂环烷基，其可以是环状、双环和三环，并且任选地是不饱和的，并且任选地被卤素、C1-6烷基、C2-4酰基、-O-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、羟基、-C(＝O)-NH2、-C(＝O)-NH(CH3)、-C(＝O)-N(CH3)2、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)2取代。在优选实施例中，不存在这样的任选取代。在这些任选的取代中，烷基优选是C1-3烷基，更优选C1-2烷基，最优选-CH3。多环结构可以是稠合的、桥接的或螺环的。在优选实施例中，A不是多环的。在优选实施例中，A是环状或多环的，其中它是稠合的或桥接的。在优选实施例中，A是环状或多环的，其中它是稠合的或螺环的。在优选实施例中，A是环状或多环的，其中它是螺环的或桥接的。在优选实施例中，A是环状或多环的，其中它是稠合的。作为螺环附接的部分优选是3-或4-元的。与A稠合的环优选是4-6元的，更优选为5-6元的。桥接部分优选是1或2个原子长，最优选是1。应当理解，当A不饱和时，它可以是C5-12杂芳基。在优选实施例中，A是C4-12杂环烷基或C5-12杂芳基，其可以是环状、双环和三环，并且任选地被卤素、C1-6烷基、-O-C1-4烷基、羟基、-NH2、-NH(C1-4烷基)，或-N(C1-4烷基)2取代。在此，C4-12优选是C5-12，更优选是C5-10，进一步优选是C5-8，最优选是C5-6。在优选实施例中，为了确定A部分中C的量，仅对包含通式(I)的酰胺的N的单环中的碳原子进行计数。在其他优选实施例中，对部分A的所有环中的所有碳原子进行计数。在其他优选实施例中，对整个部分A中的所有碳原子进行计数。
优选地，A选自任选地取代且任选地不饱和的氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂环庚基、二氮杂环庚基或氧杂氮杂环庚基(优选吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂环庚基、二氮杂环庚基或氧杂氮杂环庚基)；其中每个任选的取代可以是用卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、-O-C1-4烷基、羟基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代；优选每个任选的取代独立地选自甲基、二甲胺、甲氧基、丙基、羟基、桥接C1-3烷基部分、螺氮杂环丁烷基、螺N-甲基氮杂环丁烷基、螺氧杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、螺哌啶基、二氟哌啶基、螺N-甲基哌啶基、螺环丙基、稠合吡咯烷基或稠合N-甲基吡咯烷基。在更优选实施例中，A未被取代并且不是不饱和的。在其他更优选实施例中，A被取代并且不是不饱和的。在其他更优选实施例中，A未被取代并且是不饱和的。在其他更优选实施例中，A被取代并且是不饱和的。优选A不是芳族的。
在优选实施例中，环状结构A如下所示，每个结构下方显示参考名称。特别优选A1-A9，甚至更优选A1-A7，再更优选A1-A3、A6和A9，甚至更优选A1、A6和A9，最优选A1。在其他优选实施例中，环状结构A包含胺或碱性氮，更优选环状结构A选自A1-A9、A11-A13、A16-A20、A22、A23、A25-A38、A41和A43。更优选的这样的环状结构A是A1、A2、A3、A5、A6和A25-A31。其他优选的这样的实施例A是A1或A2；在其他优选的这样的实施例中，A是A3、A5、A6或A25-A32。在其他优选实施例中，环状结构A包含第二杂原子，更优选环状结构A选自A1-A9和A11-A43。在其他优选实施例中，环状结构A是双环、螺环或桥接的，优选选自A3-A9、A12、A13、A15-A19、A22、A25-A35和A37-A42；甚至更优选它是双环或桥接的，优选选自A3-A6、A9、A25-A31、A33和A41。如下定义的A1-A43可任选被甲基化，优选N-甲基化，其中N-甲基化优选在未附接至双环核心的氮处。
Figure BDA0003743572290000132
Figure BDA0003743572290000141
Figure BDA0003743572290000151
在优选实施例中，A3具有绝对构型(1S,4S)或(1R,4R)。在优选实施例中，A6具有绝对构型(1S,4S)或(1R,4R)。在优选实施例中，A28具有绝对构型(1R,5S)。在优选实施例中，A29具有绝对构型(1R,5S)。在优选实施例中，A33具有绝对构型(1R,5S)。在优选实施例中，A47具有绝对构型(1R,4R)。在优选实施例中，A48具有绝对构型(1R,4R)。在优选实施例中，A50具有绝对构型(3R)或(3S)。在优选实施例中，A52具有绝对构型(3R,5S)或(3S,5S)。A54具有绝对构型(2R)或(2S)。在优选实施例中，A57具有绝对构型(1R,6S)。在优选实施例中，A59具有绝对构型(1S,6R)。在优选实施例中，A60具有绝对构型(3R)或(3S)。在优选实施例中，A65具有绝对构型(8aR)或(8aS)。在优选实施例中，A66具有绝对构型(2R,6R)。在优选实施例中，A69具有绝对构型(1R,5S)。在优选实施例中，A70具有绝对构型(1R,4R)。在优选实施例中，A74具有绝对构型(3S)。在优选实施例中，A76具有绝对构型(3R)或(3S)。
化合物的进一步定义
在优选实施例中，提供了根据本发明的化合物，其中
R1是H、氟、氯、-CH3、-CF3、-O-CH3或腈；
m是0或1；
n1是N或CH；
R2是H、氟、氯，或形成桥接部分；
n是0；
R3是-CH3；
p是0或1；
X1是C(Q)；
X2是CH；
Q是H、F、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH-C(O)-哌啶基、-NH-C(O)-吡啶基、-NH-C(O)-吗啉基、-NH-C(O)-环氧乙烷基、-NH2、-NH(CH3)、-NH(环戊基)、-CH2-NH-C(O)-CH3、-CH2-N(CH3)2、-CH2-NH2、-CH2-NH-(CH3)、-CH2-NH-(环戊基)、或与R2一起形成-NH-CH＝CH-；和/或其中
c1是H并且c2是吡啶基、-CH2-吡啶基、哌啶基、N-甲基哌啶基、-CH2-哌啶基、-CH2-(N-甲基哌啶基)、环戊基、羟基环戊基、-CH2-环戊基、-CH2-羟基环戊基、吡咯烷基、N-甲基吡咯烷基、-CH2-吡咯烷基、-CH2-(N-甲基吡咯烷基)，或c1和c2一起形成环状结构A。
在优选实施例中，提供了根据本发明的化合物，其中R1是H、氟或氯；R2是H或形成桥接部分；p是0；和/或其中Q是H、-CH3、-CHF2、-OCH3、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH-C(O)-哌啶基、-NH-C(O)-吡啶基、-NH-C(O)-吗啉基、-NH-C(O)-环氧乙烷基、-NH2、-CH2-NH-(CH3)、或与R2一起形成-NH-CH＝CH-。
在优选实施例中，根据本发明的化合物包含：
i)环A选自A1-A73或c1是H，并且c2选自C2_1-C2_13；优选地，化合物包含选自A1-A73的环A；
ii)选自Py1-Py31的吡啶部分；
iii)选自Ph1-Ph43的C键合环部分；和/或
iv)选自BC1-BC11的双环核心。
在更优选实施例中，i)和ii)都适用。在其他更优选实施例中，i)和iii)都适用。在其他更优选实施例中，i)和iv)都适用。在其他更优选实施例中，ii)和iii)都适用。在其他更优选实施例中，ii)和iv)都适用。在其他更优选实施例中，iii)和iv)都适用。在甚至更优选实施例中，i)、ii)和iii)中的每一个都适用。在其他甚至更优选实施例中，i)、ii)和iv)中的每一个都适用。在其他甚至更优选实施例中，i)、iii)和iv)中的每一个都适用。在其他甚至更优选实施例中，ii)、iii)和iv)中的每一个都适用。在最优选实施例中，i)、ii)、iii)和iv)中的每一个都适用。
在其他优选实施例中，根据本发明的化合物具有通式(IV)或(IV-A)，最优选(IV-A)：
Figure BDA0003743572290000161
其中环状结构A如上定义，优选选自A1-A73，更优选选自A1-A24，甚至更优选选自A1-A9，再更优选选自A1-A7，甚至更优选A1-A3，最优选是A1；
其中c2如上定义，优选选自C2_1-C2_8，更优选是C2_1-C2_4或C2_5-C2_8或C2_3-C2_7，最优选是C2_1-C2_3；
其中吡啶部分Py如上定义，优选选自Py1-Py27，更优选选自Py1-Py18，甚至更优选选自Py1-Py12，再更优选选自Py1-Py4，最优选是Py1；
其中C键合环部分Ph如上定义，优选选自Ph1-Ph10，更优选选自Ph1-Ph9和Ph11-Ph19，甚至更优选选自Ph1-Ph8，再更优选选自Ph4和Ph8，最优选是Ph8；
其中双环核心BC如上定义，优选选自BC1-BC11，更优选选自BC1-BC3，最优选是BC1。
在优选实施例中，根据本发明的化合物是化合物1-203，更优选化合物1-47，甚至更优选列于下表1中的化合物1-36，或其盐。更优选的化合物是化合物1-34或更优选化合物1-31，甚至更优选化合物1-30，再更优选化合物1-26，甚至更优选化合物1-20，再更优选化合物1-12，最优选的是化合物1-4，特别是化合物1。在其他优选实施例中，根据本发明的化合物选自表1中列出的化合物5、22、25、26、28、45、47、1、3、4、12、13、16、17、18、19、27、29、32、42、44，2、6、7、8、9、10、11、15、20、21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46；更优选选自化合物1、3、4、12、13、16、17、18、19、27、29、32、42、44、2、6、7、8、9、10、11、15、20，21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46；最优选选自化合物2、6、7、8、9、10、11、15、20、21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46。
表1-根据本发明的优选化合物
Figure BDA0003743572290000171
Figure BDA0003743572290000181
Figure BDA0003743572290000191
Figure BDA0003743572290000201
Figure BDA0003743572290000211
Figure BDA0003743572290000221
Figure BDA0003743572290000231
Figure BDA0003743572290000241
Figure BDA0003743572290000251
Figure BDA0003743572290000261
优选地，8是8-SS。优选地，10是10-SS。优选地，11是11-SS。优选地，21是21-RR。优选地，21是21-SS。优选地，23是23-RS。优选地，24是24-RS。优选地，35是35-RR。优选地，35是35-SS。优选地，36是36-SS。优选地，36是36-RR。优选地，38是38-RS。优选地，41是41-RS。优选地，53是53-RS。优选地，56是56-RR。优选地，56是56-SS。优选地，58是58-RS。优选地，60是60-R。优选地，60是60-S。优选地，70是70-R。优选地，70是70-S。优选地，71是71-RR。优选地，72是72-RR。优选地，73是73-RR。优选地，77是77-RS。优选地，78是78-RS。优选地，79是79-RS。优选地，80是80-RS。优选地，81是81-RS。优选地，82是82-SS。优选地，82是82-RR。优选地，83是83-SS。优选地，83是83-RR。优选地，84是84-SS。优选地，86是86-RR。优选地，87是87-RR。优选地，89是89-RR。优选地，90是90-RR。优选地，93是93-RR。优选地，94是94-RR。优选地，96是96-RR。优选地，99是99-RR。优选地，104是104-RR。优选地，104是104-SS。优选地，105是105-RR。优选地，108是108-S。优选地，108是108-R。优选地，114是114-RR。优选地，115是115-RR。优选地，116是116-RR。优选地，117是117-RR。优选地，118是118-RR。优选地，119是119-RR。优选地，121是121-RR。优选地，122是122-RR。优选地，123是123-RR。优选地，124是124-RR。优选地，127是127-RR。优选地，128是128-RR。优选地，129是129-RR。优选地，130是130-RR。优选地，131是131-RS。优选地，132是132-RR。优选地，133是133-S。优选地，133是133-R。优选地，135是135-RS。优选地，135是135-SS。优选地，142是142-RR。优选地，143是143-RR。优选地，145是145-S。优选地，145是145-R。优选地，152是152-RR。优选地，154是154-SR。优选地，157是157-R。优选地，157是157-S。优选地，169是169-R。优选地，169是169-S。优选地，170是170-R。优选地，170是170-S。优选地，171是171-RR。优选地，172是172-S。优选地，172是172-R。优选地，174是174-S。优选地，174是174-R。优选地，175是175-R。优选地，176是176-R。优选地，177是177-R。优选地，180是180-R。优选地，181是181-R。优选地，182是182-RS。优选地，183是183-R。优选地，184是184-R。优选地，184是184-S。优选地，185是185-RR。优选地，186是186-R。优选地，187是187-R。优选地，188是188-R。优选地，189是189-RR。优选地，190是190-RR。优选地，191是191-RR。优选地，192是192-R。优选地，193是193-R。优选地，196是196-R。优选地，197是197-R。优选地，198是198-R。优选地，200是200-R。优选地，201是201-R。优选地，202是202-R。优选地，203是203-S。
在本发明的上下文中，根据本发明的化合物的盐优选是药学上可接受的盐。这样的盐包括衍生自无机碱如Li、Na、K、Ca、Mg、Fe、Cu、Zn和Mn的盐；有机碱(例如N,N’-二乙酰乙二胺、葡糖胺、三乙胺、胆碱、二环己胺、苄胺、三烷基胺、硫胺素、胍、二乙醇胺、α-苯乙胺、哌啶、吗啉、吡啶、羟乙基吡咯烷、羟乙基哌啶)等的盐。这样的盐还包括氨基酸盐，例如甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、胍等。这样的盐可包括适当时的酸加成盐，例如硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、高氯酸盐、硼酸盐、氢卤化物例如HCl或HBr盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、棕榈酸盐、甲磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、羟基萘酸盐、苯磺酸盐、抗坏血酸盐、甘油磷酸盐、酮戊二酸盐等。优选的盐是HCl盐、甲酸盐、乙酸盐和三氟乙酸盐。更优选的盐是HCl盐、乙酸盐和甲酸盐，最优选HCl盐。
根据本发明的化合物优选是水合物或溶剂化物。在本发明的上下文中，水合物是指其中溶剂是水的溶剂化物。如本文所用，术语溶剂化物是指含有溶剂的物质的晶体形式。溶剂化物优选是药学上可接受的溶剂化物并且可以是水合物或可以包含其他结晶溶剂，例如醇、醚等。
酰基、烷基、环烷基或杂环烷基的每个情况单独地任选地是不饱和的，并且任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基取代，或任选地被一个或多个杂原子中断。技术人员将理解原子的化合价总是要满足的。在这种上下文中，杂环烷基被解释为已被一个或多个杂原子中断的环烷基。在本发明的上下文中，酰基部分是其中近端碳原子被氧代部分(＝O)取代的烷基部分。在这种上下文中，卤代烷基被解释为已被卤素取代的烷基。优选的卤代烷基是氟化烷基，更优选全氟化烷基，最优选三氟甲基。在本发明的上下文中，卤素是氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。针对根据本发明的化合物优选的卤素是氟、氯和溴，更优选的卤素是氟或氯，最优选的卤素是氟。
在本发明的上下文中，诸如烷基、酰基、环烷基、杂环烷基的部分中的碳原子数表示为例如C1-6，在该非限制性情况下表示设想从1至6个碳原子，例如1、2、3、4、5或6个碳原子。类似地，C2-4烷基具有2、3或4个碳原子。碳原子数可以表示为不计算进一步取代的碳原子总数、碳原子总数或可以在最长的连续碳原子内部序列中找到的碳原子数。优选地，碳原子数表示为不计算进一步取代的碳原子总数。
在本发明的上下文中，桥接部分连接两个位点。桥接部分在两个位置与根据本发明的化合物连接。当桥接部分是不对称的时，它可以以两个取向存在于本发明的化合物中；优选地，它以它呈现的取向存在于根据本发明的化合物中，其中左侧对应于首先命名为形成桥接部分的构成取代基，而右侧对应于最后命名为形成桥接部分的构成取代基。
在本发明的上下文中，未取代的烷基基团具有通式CnH2n+1并且可以是直链或支链的。未取代的烷基基团还可以包含环状部分，因此具有伴随的通式CnH2n-1。任选地，烷基基团被本文中进一步规定的一个或多个取代基取代。合适的烷基基团的实例包括但不限于-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-C(CH3)3、1-己基等。优选的烷基基团是直链或支链的，最优选是直链的。环烷基基团是环状烷基基团；优选的环烷基基团是环丙基、环丁基、环戊基和环己基，最优选环戊基。杂环烷基基团是其中至少一个CH2部分被杂原子替代的环烷基基团。优选的杂原子是S、O和N。优选的杂环烷基基团是吡咯烷基、哌啶基、环氧乙烷基和氧杂环戊烷基。优选的C1-4烷基基团是-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-C(CH3)3、环丙基和环丁基，更优选-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3和-C(CH3)3。
本发明的烷基基团任选地是不饱和的。在优选实施例中，烷基不是不饱和的。不饱和烷基基团优选是烯基或炔基基团。在本发明的上下文中，未取代的烯基基团具有通式CnH2n-1并且可以是直链或支链的。合适的烯基基团的实例包括但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、戊烯基等。未取代的烯基基团还可以包含环状部分，因此具有伴随的通式CnH2n-3。优选的烯基基团是直链或支链的，最优选是直链的。高度优选的不饱和环烷基基团是芳基基团，例如苯基。
在本发明的上下文中，未取代的炔基基团具有通式CnH2n-3并且可以是直链或支链的。未取代的炔基基团还可以包含环状部分，因此具有伴随的通式CnH2n-5。任选地，炔基基团被本文中进一步规定的一个或多个取代基取代。合适的炔基基团的实例包括但不限于乙炔基、炔丙基、n-丁-2-炔基、n-丁-3-炔基和辛炔例如环辛炔。优选的烷基基团是直链或支链的，最优选是直链的。
在本发明的上下文中，芳基基团是芳族的并且通常包含至少六个碳原子并且可以包括单环、双环和多环结构。任选地，芳基基团可以被本文中进一步规定的一个或多个取代基取代。芳基基团的实例包括例如苯基、萘基、蒽基等。杂芳基基团是芳族的并且包含一到四个选自由S、O和N组成的组的杂原子。由于杂原子，它可以具有小于六的环尺寸。
在本发明中，烷基、酰基、环烷基和杂环烷基的每个情况任选被取代，优选被一个或多个选自卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基的部分取代，其中每个情况还可以被诸如N、O或S的杂原子中断，并且其中烷基、酰基、烷氧基、环基和杂环基的每个情况任选地是不饱和的。被杂原子中断是指被一个或多个杂原子中断。在这种上下文中，优选不超过20个，更优选1、2、3、4或5个杂原子中断，甚至更优选1、2或3个，优选1或2个，最优选1个杂原子中断。优选地，所有中断杂原子属于相同的元素。作为非限制性实例，C5烷基-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3当被杂原子打断时可以是-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH3。在优选实施例中，没有任选的取代。在优选实施例中，存在取代和不饱和两者。
在优选实施例中，当任选地不饱和和任选地被取代时，C1-6烷基可以是C1-6烷基、C1-6酰基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、或C5-6芳基，任选被一个或多个选自卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基和三氟甲基的部分取代。在优选实施例中，当任选地不饱和和任选地被取代时，C1-4烷基可以是C1-4烷基、C1-4酰基、C2-4烯基，C2-4炔基，C3-4环烷基，或C3-4杂环烷基，任选被一个或多个选自卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基和三氟甲基的部分取代。
本发明提供的分子可以任选地被取代。合适的任选取代是-H被卤素替代。优选的卤素是F、Cl、Br和I，最优选F。其他合适的任选取代是一个或多个-H被氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基和三氟甲基取代。
组合物和组合
在另一方面，本发明提供了组合物，其包含至少一种通式I的化合物和药学上可接受的赋形剂，优选用于根据本发明的用途(用途在本文别处描述)。这种组合物在本文中称为根据本发明的组合物。根据本发明的优选组合物是药物组合物。在优选实施例中，根据本发明的组合物被配制用于口服、舌下、肠胃外、血管内、静脉内、皮下或透皮施用，任选地用于吸入施用；优选用于口服施用。施用方法的更多特征和定义在配制品和施用部分提供。
本发明还提供了根据本发明的化合物与已知用于治疗或改善与DUX4相关的疾病或病症的进一步措施(例如已知用于治疗FSHD或癌症的措施)的组合。在此类组合的优选实施例中，提供了根据本发明的化合物和化疗剂的组合。化疗剂是众所周知的。在另一个优选的组合中，根据本发明的化合物与p38抑制剂、β2肾上腺素受体激动剂、CK1抑制剂和/或BET抑制剂组合。在一些优选的组合中，化合物可以与临床管理(例如涉及物理疗法、有氧运动、呼吸功能疗法或整形外科干预)组合。
用于使用的化合物
遵循DUX4在FSHD共识疾病假说中的核心作用，具有改善疾病潜力的治疗方法预计将依赖于DUX4的抑制。发明人已经鉴定出根据本发明的化合物能够在肌肉细胞中实现DUX4阻遏。本发明是使用FSHD患者来源的原代肌肉细胞完成的。由于FSHD基因座的灵长类动物特异性以及重组、永生化或致瘤细胞或动物模型与研究内源性DUX4调节机制的可疑相关性，患者来源的原代肌肉细胞是最相关的疾病模型。基于永生化细胞的测定具有改变的表观基因组的风险，从而限制了它们在研究DUX4表达的内源性调控中的相关性。特别是D4Z4的亚端粒位置和D4Z4表观基因组在DUX4阻遏稳定性中的重要性(Stadler等人,2013,DOI:10.1038/nsmb.2571)强调了使用原代肌肉细胞发现调节DUX4表达的生理相关药物靶标的必要性。
DUX4历来被认为在FSHD肌肉中检测具有挑战性。它在来自FSHD患者的原代成肌细胞中的表达已被证明是随机的。研究报道，在增殖的FSHD成肌细胞和成肌细胞分化过程中，1000个细胞核中只有1个或200个细胞核中只有1个是DUX4阳性。由于DUX4的丰度特别低，据报道检测DUX4蛋白是一项技术挑战。虽然原发性FSHD肌肉细胞已在FSHD文献中广泛使用，但似乎没有任何报告适用于超出工作台规模水平。使用原代细胞带来的限制和公认的检测低水平内源性DUX4的复杂性说明了将原代FSHD肌肉细胞应用于更高通量格式的相关挑战。尽管DUX4表达在增殖的FSHD成肌细胞体外分化为多核肌管后增加，但水平仍然很低，并且动态变异性被广泛认为对于稳健的大规模筛选方法极具挑战性(Campbell等人,2017)。
因此，本发明提供根据本发明的化合物用于治疗与(过度)DUX4表达相关的疾病或病症，其中化合物降低DUX4表达。本发明提供通式(I)的化合物或根据本发明的组合物，用作药物，其中药物优选用于治疗与DUX4表达相关的疾病或病症，并且其中通式(I)的化合物降低DUX4表达，其中更优选地，所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良或癌症，甚至更优选地，其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良，最优选面肩肱型肌营养不良(FSHD)。这样的化合物在本文中称为根据本发明使用的化合物。
本文所述的医学用途被构想成用作治疗所述一种或多种病症的药物的化合物(例如，通过施用有效量的化合物)，但同样可以构想成i)使用本文定义的化合物治疗所述一种或多种病症的方法，包括向受试者施用有效量的化合物的步骤，ii)用于制备治疗所述一种或多种病症的药物的本文定义的化合物，其中优选化合物以有效量施用，和iii)本文定义的化合物用于治疗所述一种或多种病症的用途，优选通过施用有效量。这些医学用途都为本发明所设想。优选的受试者是需要治疗的受试者。治疗优选导致疾病或病症的延迟、改善、缓解、稳定、治愈或预防。换言之，根据本发明使用的化合物可以是用于治疗、延迟、改善、减轻、稳定、治愈或预防所述疾病或病症的化合物。
根据本发明的化合物降低DUX4表达。DUX4表达优选地是被治疗受试者的整体DUX4表达。DUX4表达可以使用本领域已知的或在实例中举例说明的方法来确定。如本领域已知的，DUX4表达也可以通过确定其靶基因的表达来确定。例如，DUX4表达可以使用PCR技术如RT-PCR，或使用免疫染色、质谱或ELISA，例如在含有优选获自受试者的细胞或细胞提取物的样品上确定。在这种上下文中，降低优选地是与预定值或参考值相比的降低。优选的参考值是通过确定含有细胞或细胞提取物的未处理样品中的DUX4表达而获得的参考值。这种未处理的样品可以来自同一受试者或来自不同的健康受试者，更优选地，它是以相同方式获得的样品，因此含有相同类型的细胞。方便地，测试样品和参考样品都可以是获得的单个较大样品的一部分。可替代地，在治疗开始之前从受试者获得测试样品。高度优选的参考值是在第一次施用根据本发明的化合物之前从受试者获得的样品中DUX4的表达水平。另一个优选的参考值是代表不存在DUX4表达的固定值。
DUX4表达的降低优选意味着表达降低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％。如果DUX4的表达降低例如100％，则不再能检测到DUX4的表达。降低可以在蛋白质水平上评估，例如通过免疫染色、ELISA或质谱法，或者它可以在mRNA水平上评估，例如通过PCR技术如RT-PCR。在优选实施例中，本发明提供了根据本发明使用的化合物，其中使用PCR或免疫染色来确定DUX4表达的降低，其中优选的PCR技术是RT-PCR。在优选实施例中，本发明提供了根据本发明使用的化合物，其中DUX4表达降低至少20％、40％、60％、80％或更多，更优选至少30％、40％、60％、80％或更多。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少10％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少20％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少30％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少40％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少50％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少60％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少70％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少80％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少90％。在进一步优选实施例中，DUX4表达降低至少95％。在最优选实施例中，DUX4表达降低约100％，优选降低100％。
在优选实施例中，本发明提供根据本发明使用的化合物，其中化合物降低DUX4在肌肉细胞、免疫细胞或癌细胞中的表达，优选在肌肉细胞或免疫细胞中，最优选在肌肉细胞中的表达。优选的肌肉细胞是成肌细胞、卫星细胞、肌管和肌纤维。优选的免疫细胞是B细胞、T细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞、自然杀伤细胞、粒细胞、先天淋巴细胞、巨核细胞、髓源性抑制细胞、单核细胞/巨噬细胞和胸腺细胞，以及任选的肥大细胞。其他优选的细胞是血小板和红细胞。在其他实施例中，DUX4表达在癌细胞中降低。
在优选实施例中，根据本发明的化合物用于治疗患有DUX4相关病症和肌肉炎症的患者。肌肉炎症促成肌营养不良例如FSHD的病理生理学。它先于肌肉破坏和脂肪替代，因此代表了疾病活动的早期标志。可以使用本领域已知的方法鉴定肌肉炎症。优选地，肌肉炎症通过使用活检和使用具有短TI反转恢复(STIR)的MRI序列中的至少一种来鉴定，优选地使用具有STIR的MRI。STIR高信号(STIR+)显示与炎症相关的水肿。优选的发炎肌肉是STIR+肌肉。优选的肌肉活检是来自STIR+肌肉的活检。优选的肌肉炎症是MAPK相关的肌肉炎症，更优选与编码诸如TNF-a、IL-1b、IL-6和IL-8的蛋白质的炎症反应相关基因的转录和翻译相关的肌肉炎症。肌肉炎症预示着更快的脂肪替代肌肉。
患有肌肉炎症的优选受试者具有至少一个发炎的肌肉，更优选至少2个，甚至更优选至少3个，甚至更优选至少4个，甚至更优选至少5个，最优选至少6、7、8、9、10或11个。优选地，发炎的肌肉是骨骼肌，更优选地，它是面部、肩胛或上臂的骨骼肌。患有肌肉炎症的优选受试者是还患有肌营养不良，更优选还患有FSHD的受试者。优选地，这种患有FSHD的受试者具有至少一个发炎的肌肉，更优选地具有至少一个STIR+肌肉。
本发明提供了根据本发明的化合物，用于治疗受试者中与DUX4表达相关的疾病或病症，其中受试者患有肌肉炎症。在优选实施例中，本发明提供根据本发明的化合物，用于治疗FSHD，其中受试者患有肌肉炎症。在优选实施例中，本发明提供根据本发明的化合物，用于治疗FSHD，其中受试者具有至少一个发炎的肌肉，优选面部、肩胛或上臂的至少一个发炎的骨骼肌。该肌肉优选是STIR+。已知肌肉炎症先于脂肪浸润。因此，本发明提供了根据本发明的化合物，用于预防或延迟患有FSHD的受试者的肌肉中的脂肪浸润。
在优选实施例中，根据本发明的化合物或本文定义的组合用于促进肌源性融合和/或用于促进肌源性分化。发明人已经确定根据本发明的化合物促进健康的或恢复中的肌肉的这些重要特征。用于促进肌源性融合和/或肌源性分化有助于肌肉再生。
骨骼肌是组织的实例，它部署了自我更新的干细胞，卫星细胞，以实现再生。这些卫星细胞与骨骼肌纤维相邻，位于肌膜和肌内膜基底膜(将肌束分成单个纤维的结缔组织覆盖物)之间。为了激活肌生成，必须刺激卫星细胞分化成新的纤维。卫星细胞显示出不对称分裂以更新稀有的“永生”干细胞并产生具有分化能力的成肌细胞的克隆群。因此，成肌细胞是由肌源性卫星细胞产生的肌肉祖细胞。成肌细胞分化产生肌肉细胞。分化受肌源性调节因子(包括但不限于MyoD、Myf5、生肌素和MRF4)的调节。GATA4和GATA6在肌细胞分化中也起作用。当成肌细胞融合在一起或与现有的肌纤维融合时，就会形成骨骼肌纤维；因此，肌纤维是具有多个核(称为肌核)的细胞。肌源性融合过程特定于骨骼肌(例如，肱二头肌)，而不是心肌或平滑肌。发明人已经确定根据本发明的化合物促进卫星细胞的这种分化，从而最终促进肌管形成和肌生成。
本发明提供根据本发明的化合物，用于治疗与受试者中的DUX4表达相关的疾病或病症，其中化合物用于促进肌源性融合和/或分化。这种促进的融合和分化有助于恢复健康的骨骼肌生物学。在优选实施例中，根据本发明的化合物用于促进肌源性融合。肌源性融合是肌肉形成和肌肉再生的典型，它可以使用任何已知的方法进行评估。优选地，使用图像分析进行评估，更优选使用高含量图像分析进行评估。在优选实施例中，根据本发明的用于促进肌原性融合的化合物增加肌原性融合至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15，20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、90、95、100％或更多，优选至少10％或更多，更优选至少30％或更多，甚至更优选至少50％或更多。可能是受试者或肌肉或样品中不存在肌源性融合。在这种情况下，根据本发明的用于促进肌源性融合的化合物优选恢复肌源性融合，更优选恢复至健康对照的至少1％、5％、10％、20％、25％、30％、35％、40％、45％，50％或更多，甚至更优选健康对照的至少5％，更优选健康对照的至少15％，最优选健康对照的至少25％。
在优选实施例中，根据本发明的化合物用于促进肌原性分化，其可以是体外、体内或离体，优选体外或离体，更优选体外。在这些实施例中，细胞优选地是原代细胞。在这些实施例中，细胞优选地不是永生化细胞。可以使用本领域已知的方法评估肌原性分化，例如定量肌原性分化标志物，例如MYH2、MyoD、Myf5、生肌素和15MRF4，优选例如生肌素或MYH2。在优选实施例中，根据本发明的用于促进肌原性分化的化合物增加肌原性分化至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15，20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、90、95、100％或更多，优选至少10％或更多，更优选至少30％或更多，甚至更优选至少50％或更多。可能是受试者或肌肉或样品中不存在肌源性分化。在这种情况下，根据本发明的用于促进肌源性分化的化合物优选恢复肌源性分化，更优选恢复至健康对照的至少1％、5％、10％、20％、25％、30％、35％、40％、45％，50％或更多，甚至更优选健康对照的至少5％，更优选健康对照的至少15％，最优选健康对照的至少25％。
在优选实施例中，根据本发明的化合物用于促进肌源性融合，其中特征和定义如本文别处所定义。在优选实施例中，根据本发明的化合物用于促进肌源性分化，其中特征和定义如本文别处所定义。在优选实施例中，根据本发明的化合物用于促进肌源性融合和/或分化，其中特征和定义如本文别处所定义。
在优选实施例中，本发明提供了根据本发明使用的化合物，其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良或癌症或全身性恶病质，优选其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良，最优选是面肩肱型肌营养不良(FSHD)。在其他优选实施例中，根据本发明的化合物用于治疗、改善或预防全身性恶病质。
在这种上下文中，首选的肌营养不良是FSHD；优选的癌症是前列腺癌(WO2014081923)、多发性骨髓瘤(US 20140221313)、肺癌(Lang等人,2014,DOI:10.14205/2310-8703.2014.02.01.1)、结肠癌(Paz等人,2003,DOI:10.1093/hmg/ddg226)肉瘤或白血病；优选的肉瘤是小圆细胞肉瘤(Oyama等人,2017DOI:10.1038/s41598-017-04967-0；Bergerat等人,2017,DOI:10.1016/j.prp.2016.11.015；Chebib和Jo,2016,DOI:10.1002/cncy.21685)；优选的白血病是急性淋巴细胞白血病(ALL)，更特别是B细胞前体ALL(Yasuda等人,2016,doi:10.1038/ng.3535；
Figure BDA0003743572290000301
&Fioretos,2017,DOI:10.1182/blood-2017-05-742643；Zhang等人,2017,DOI:10.1038/ng.3691)。
因此，在优选实施例中，本发明提供了根据本发明使用的化合物，其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良或癌症，优选其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是FSHD、前列腺癌、多发性骨髓瘤、肺癌、结肠癌(优选结肠直肠癌)、肉瘤(优选小圆细胞肉瘤)、白血病(优选急性淋巴细胞白血病，更优选B细胞前体急性淋巴细胞白血病)，优选所述与DUX4表达相关的疾病或病症是FSHD。在更优选实施例中，本发明提供根据本发明使用的化合物，其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良或癌症，优选其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是FSHD或癌症，其中癌症优选为前列腺癌、多发性骨髓瘤、肺癌、结肠癌(优选结肠直肠癌)、肉瘤(优选小圆细胞肉瘤)、白血病(优选急性淋巴细胞白血病，更优选B细胞前体急性淋巴细胞白血病)，其中癌症更优选肉瘤，最优选小圆细胞肉瘤。
在优选实施例中，本发明提供了根据本发明使用的化合物，其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是癌症，其中癌症优选为前列腺癌、多发性骨髓瘤、肺癌、结肠癌(优选结肠直肠癌)、肉瘤(优选小圆细胞肉瘤)、白血病(优选急性淋巴细胞白血病，更优选B细胞前体急性淋巴细胞白血病)，其中癌症更优选肉瘤，最优选小圆细胞肉瘤。
其他DUX4靶标被称为“癌症睾丸抗原”(CTAs)，它们是通常仅在睾丸中表达的基因，但在某些癌症中会被去阻遏，从而引发免疫应答。这些观察表明癌症中的DUX4去阻遏介导了HSATII、CTA和/或THE1B启动子的激活(Young等人,2013,doi:10.1371/journal.pgen.1003947)。与此一致，Dmitriev等人(2014,DOI:10.1111/jcmm.12182)证明了FSHD和癌细胞表达谱之间的相似性，表明这些疾病发病机制中的共同步骤。
已知DUX4的表达与肿瘤中的免疫抑制有关(Guo-Liang Chew等人,2019,Developmental Cell[发育细胞]50,658-671,DOI:10.1016/j.devcel.2019.06.011)。DUX4在许多癌症中重新表达，它通过阻断干扰素-γ介导的MHC I类诱导来抑制抗癌免疫活性，并与免疫检查点阻断疗法的功效降低有关。表达DUX4的癌症的特征在于低抗肿瘤免疫活性。DUX4阻断干扰素-γ介导的MHC I类诱导和抗原呈递。因此，DUX4与抗CTLA-4治疗无应答显著相关。
在优选实施例中，根据本发明的化合物或组合物用于治疗癌症，其中化合物或组合物增加对癌细胞的免疫应答。这可能意味着它会在不存在免疫应答的情况下启动免疫应答。在本申请中，优选的癌症是具有DUX4表达的癌症，更优选具有降低的MHC I类表达的癌症。
在增加免疫应答的更优选实施例中，根据本发明的化合物或组合物用于增加免疫系统活化型细胞因子如干扰素-γ的产生。优选地，细胞因子产生增加1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多，并且优选通过FACS进行检测。细胞因子的增加导致癌症的免疫抑制增加，并且可以导致免疫介导的癌症抑制或部分免疫介导的癌症抑制，在其他情况下这些癌症对免疫介导的抑制不敏感。在优选实施例中，根据本发明的化合物或组合物用于增加T细胞功能，例如增加干扰素-γ的产生。
在增加免疫应答的优选实施例中，根据本发明的化合物或组合物用于增加T细胞频率。优选地，这样的增加是1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多。这样的增加可以通过测量CD8或CD4来确定。例如，如Guo-LiangChew等人所述。在增加免疫应答的其他优选实施例中，根据本发明的化合物或组合物用于增加特异性T细胞亚群。这样的亚群可以通过TCR测序来确定。在用于增加免疫应答的优选实施例中，根据本发明的化合物或组合物用于诱导T细胞功能，优选用于通过诱导IFNγ产生来诱导T细胞功能。最优选地，根据本发明的化合物或组合物用于增加T细胞频率并同时诱导T细胞功能，优选同时减少调节性T细胞群。Treg减少和CD8+T效应细胞增加的肿瘤被称为“热”肿瘤，它们是没有免疫抑制微环境的肿瘤。相反，免疫抑制微环境中的肿瘤被称为“冷”肿瘤。
此外，根据本发明的化合物和组合物可以降低免疫抑制性靶基因(例如但不限于CTLA-4或PD-1或PD-1L)的表达。这种降低优选为1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多。表达可以通过qPCR确定。CTLA-4和PD-1是免疫检查点阻断疗法可以作用的T细胞抑制性受体。这种疗法在易感患者的各种癌症中诱导持久应答。在优选实施例中，根据本发明的化合物或组合物用于降低CTLA-4或PD-1的表达或用于降低CTLA-4和PD-1的表达。
此外，根据本发明的化合物和组合物可以与抑制免疫检查点(例如但不限于CTLA-4、PD-1或PD-L1)的化合物组合。在优选实施例中，提供了组合，其包含根据本发明的化合物或组合物以及进一步的用于抑制CTLA-4、PD-1或PD-L1的化合物。这种进一步的药剂的实例是派姆单抗、斯巴达珠单抗、纳武单抗(PD-1抑制剂)和伊匹单抗(CTLA-4抑制剂)。这种抑制优选为1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％或75％或更多。抑制可以通过本领域已知的方法确定，例如Guo-Liang Chew等人,2019.中描述或提及的方法。
本发明的化合物还适用于哺乳动物，特别是人中作为抗增殖剂(例如癌症)、抗肿瘤剂(例如对抗实体瘤的作用)的治疗用途。特别地，本发明的化合物可用于预防和治疗多种人过度增殖性障碍，包括恶性和良性异常细胞生长。本文提供的化合物、组合物和方法可用于治疗癌症和制备治疗癌症的药物，包括但不限于以下的癌症：
循环系统，例如心脏(肉瘤[血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肪肉瘤]、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂肪瘤和畸胎瘤)，纵隔和胸膜，以及其他胸腔内器官，血管肿瘤和肿瘤相关血管组织；
呼吸道，例如鼻腔和中耳、副鼻窦、喉、气管、支气管和肺，例如小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、支气管癌(鳞状细胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤、间皮瘤；胃肠道，例如，食管(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)、胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胃部、胰(管腺癌、胰岛素瘤、高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌肿瘤、舒血管肠肽瘤)、小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌肿瘤、卡波西肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)、大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；
泌尿生殖道，例如，肾(腺癌、维尔姆斯瘤(Wilm's tumor)[肾母细胞瘤(nephroblastoma)]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和/或尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)、前列腺(腺癌、肉瘤)、睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；
肝，例如，肝癌(肝细胞癌)、胆管癌、肝母细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤、胰腺内分泌肿瘤(例如嗜铬细胞瘤、胰岛素瘤、血管活性肠肽瘤、胰岛细胞瘤和胰高血糖素瘤)；
骨，例如，骨原性肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性骨髓瘤、恶性巨细胞瘤脊索瘤、骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、软骨母细胞瘤、软骨粘液样纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞瘤；
神经系统，例如，中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、颅骨癌(骨瘤、血管瘤、肉芽肿、黄色瘤、畸形性骨炎)、脑脊膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质过多)、脑癌(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、胶质瘤、室管膜瘤、生殖细胞瘤[松果体瘤]、多形性胶质母细胞瘤、少突胶质瘤、神经鞘瘤、视网膜母细胞瘤、先天性肿瘤)、脊髓神经纤维瘤、脑膜瘤、胶质瘤、肉瘤)；
生殖系统，例如妇科、子宫(子宫内膜癌)、宫颈(宫颈癌、前肿瘤子宫颈不典型增生)、卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类的癌症]、粒膜细胞肿瘤、塞-莱二氏细胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor)、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)、阴门(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)、阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄状肉瘤(胚胎性横纹肌肉瘤)、输卵管(上皮癌)和其他与女性生殖器官有关的部位；胎盘、阴茎、前列腺、睾丸和其他与男性生殖器官有关的部位；
血液学，例如，血液(髓细胞性白血病[急性和慢性]、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、骨髓增生性疾病、多发骨髓瘤、骨髓增生异常综合征)、何杰金氏病、非何杰金氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；
口腔，例如，唇、舌、牙龈、口底、上颚和口腔的其他部位、腮腺和唾液腺的其他部位、扁桃体、口咽、鼻咽、梨状窝、下咽和唇、口腔和咽部的其他部位；
皮肤，例如恶性黑色素瘤、皮肤黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、发育不良性痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤和瘢痕瘤；
肾上腺：神经母细胞瘤；并且
涉及其他组织的癌症，包括结缔组织和软组织、腹膜后和腹膜、眼、眼内黑色素瘤和附件、乳房、头部或/和颈部、肛门区域、甲状腺、甲状旁腺、肾上腺和其他内分泌腺和相关结构，继发性和未指定的淋巴结恶性肿瘤、呼吸系统和消化系统继发性恶性肿瘤和其他部位继发性恶性肿瘤。
更具体地，在本文中与本发明结合使用时，“癌症”的实例包括选自以下的癌症：肺癌(NSCLC和SCLC)、头颈癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、肛门区域癌、胃癌、乳腺癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统(CNS)肿瘤、原发性CNS淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脊柱肿瘤或一种或多种上述癌症的组合。更具体地，在本文中与本发明结合使用时，“癌症”的实例包括选自以下的癌症：肺癌(NSCLC和SCLC)、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、肛门区域癌或一种或多种上述癌症的组合。在本发明的一个实施例中，非癌性病症包括增生性病症，例如皮肤良性增生(例如，牛皮癣)和前列腺良性增生(例如，BPH)。
在另一个实施例中，本发明提供了用于在治疗神经和精神障碍的方法中使用的通式(I)的化合物，这些方法包括：向哺乳动物施用一定量的可有效治疗这样的障碍的通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。神经和精神障碍包括但不限于：急性神经和精神障碍，例如心脏搭桥手术和移植后的脑缺陷、中风、脑缺血、脊髓外伤、头部外伤、围产期缺氧、心脏骤停、低血糖性神经元损伤、痴呆、艾滋病诱发的痴呆、血管性痴呆、混合性痴呆、与年龄相关的记忆障碍、阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩侧索硬化症、眼损伤、视网膜病变，认知障碍，包括与精神分裂症和双相情感障碍相关的认知障碍、特发性和药物诱发的帕金森病、肌肉痉挛和与肌肉痉挛相关的障碍，包括震颤、癫痫、抽搐、偏头痛、偏头疼痛、尿失禁、物质耐受、物质戒断、阿片类药物、尼古丁、烟草制品、酒精、苯二氮卓类药物、可卡因、镇静剂和催眠药的戒断、精神病、轻度认知障碍、遗忘认知障碍、多领域认知障碍、肥胖症、精神分裂症、焦虑症、广泛性焦虑症、社交焦虑症、恐慌症、创伤后应激障碍、强迫症、情绪障碍、抑郁症、躁狂症、双相情感障碍、三叉神经痛、听力损失、耳鸣、眼黄斑退化、呕吐、脑水肿、疼痛、急性和慢性疼痛状态、剧烈疼痛、顽固性疼痛、神经性疼痛、创伤后疼痛、迟发性运动障碍、睡眠障碍、发作性睡病、注意力缺陷/多动障碍、自闭症、阿斯伯格病(Asperger'sdisease)和哺乳动物的行为障碍。因此，在一个实施例中，本发明提供了用于治疗哺乳动物(例如人)的选自上述病症的病症的方法，该方法包括向哺乳动物施用通式(I)的化合物。哺乳动物优选是需要这种治疗的哺乳动物。例如，本发明提供了通式(I)的化合物，其用于在治疗注意力缺陷/多动障碍、精神分裂症和阿尔茨海默病或制备用于治疗注意力缺陷/多动障碍、精神分裂症和阿尔茨海默病的药物的方法中使用。
本发明涉及通式(I)的化合物，其用于在治疗选自由抑郁症和双相情感障碍组成的组的情绪障碍的方法中使用。在本发明的另一个实施例中，抑郁症是重度抑郁症。在本发明的进一步实施例中，情绪障碍是双相情感障碍。在另一个实施例中，双相障碍选自由以下组成的组：双相I型障碍和双相II型障碍。
通式(I)的化合物还可用于在治疗选自由神经和精神障碍组成的组的病症中使用，包括但不限于：急性神经和精神障碍，例如心脏搭桥手术和移植后的脑缺陷、中风、脑缺血、脊髓外伤、头部外伤、围产期缺氧、心脏骤停、低血糖性神经元损伤、痴呆、艾滋病诱发的痴呆、血管性痴呆、混合性痴呆、与年龄相关的记忆障碍、阿尔茨海默病、亨廷顿舞蹈病、肌萎缩侧索硬化症、眼损伤、视网膜病变，认知障碍，包括与精神分裂症和双相情感障碍相关的认知障碍、特发性和药物诱发的帕金森病、肌肉痉挛和与肌肉痉挛相关的障碍，包括震颤、癫痫、抽搐、偏头痛、偏头疼痛、尿失禁、物质耐受、物质戒断、阿片类药物、尼古丁、烟草制品、酒精、苯二氮卓类药物、可卡因、镇静剂和催眠药的戒断、精神病、轻度认知障碍、遗忘认知障碍、多领域认知障碍、肥胖症、精神分裂症、焦虑症、广泛性焦虑症、社交焦虑症、恐慌症、创伤后应激障碍、强迫症、情绪障碍、抑郁症、躁狂症、双相情感障碍、三叉神经痛、听力损失、耳鸣、眼黄斑退化、呕吐、脑水肿、疼痛、急性和慢性疼痛状态、剧烈疼痛、顽固性疼痛、神经性疼痛、创伤后疼痛、迟发性运动障碍、睡眠障碍、发作性睡病、注意力缺陷/多动障碍、自闭症、阿斯伯格病和哺乳动物的行为障碍，包括施用有效量的通式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。组合物任选地进一步包含非典型抗精神病药、胆碱酯酶抑制剂、Dimebon或NMDA受体拮抗剂。这样的非典型抗精神病药包括但不限于齐拉西酮、氯氮平、奥氮平、利培酮、喹硫平、阿立哌唑、帕潘立酮；这样的NMDA受体拮抗剂包括但不限于美金刚；并且这样的胆碱酯酶抑制剂包括但不限于多奈哌齐和加兰他敏。
本发明的化合物也可用于治疗自身免疫障碍。在这种上下文中特别合适的病症是例如类风湿性关节炎、哮喘、牛皮癣、慢性肺部炎症、慢性阻塞性肺病、哮喘、肾小球肾炎、克罗恩病、ICF(免疫缺陷、着丝粒区域不稳定性和面部异常)和肌炎例如骨化性肌炎、(特发性)炎性肌病、皮肌炎、幼年皮肌炎、多发性肌炎、包涵体肌炎、良性急性儿童肌炎、他汀类药物相关的自身免疫性肌病和脓肌炎。在这种上下文中优选的是ICF和肌炎，其中肌炎是最优选的。
已知许多靶标与DUX4阻遏有关。实例是BET蛋白(例如BRD2、BRD3、BRD4、BRDT)和β2-肾上腺素能受体(Campbell等人,Skeletal Muscle[骨骼肌].2017年9月4日；7(1))；SMCHD1(Balog等人,Epigenetics[表观遗传学].2015；10(12):1133-42)；PARP1(Sharma V等人,J.Genetic syndromes and Gene Therapy[遗传综合征和基因治疗杂志].2016年8月；7(4))；WNT信号传导蛋白(例如WNT1-16、Axin、β-连环蛋白、卷曲蛋白(Frizzled)和GSK3)和端锚聚合酶(Block等人,Hum Mol Genet.[人类分子遗传学]2013Dec 1；22(23):4661-72)PRC2/EZH2和SUV39H1(Haynes等人,Epigenetics&Chromatin[表观遗传学和染色质].2018,11(47))；MBD2/NuRD复合物、MBD1/CAF-1、TRIM28、SETDB1、KDM1A、SIN3复合物(Campbell等人,eLife.2018,7:e31023)；ASH1L、BAP1、BAZ1A、BAZ1B、BAZ2A、BPTF、BRD2、BRD3、BRD4、BRDT、BRPF1、BRPF3、CARM1、KDM4A、KDM4B、KDM4C、KDM4D、KDM6A、KDM6B、KMT2A、KMT2C、KMT2E、MYSM1、NEK6、PHF2、PRMT1、SETD1A、SETD1B、SF3B1、SMARCA5、SMARCB1、SMYD3、UFL1、USP3、USP7、USP16(Himeda等人,Molecular Therapy[分子疗法].2018年4月20日,26(7))；Src家族(例如Src、Yes、Fyn和Fgr、Lck、Hck、Blk、Lyn、Frk、WO 2019084499)；Syk家族(例如Syk，WO 2019084499)；Abl家族(例如Abl1，WO 2019084499)；Tie系列(例如Tie1、Tie2、TEK、WO 2019084499)；Flt家族(例如VEGFR1，WO 2019084499)；CK1(例如CK1d、CK1e、WO2019115711)；ErbB家族(例如Her1(EGFR，ErbB1)、Her2(Neu，ErbB2)、Her3(ErbB3)和Her4(ErbB4)，WO 2019084499)；p38(WO 2019071147)；Trk家族(例如TrkA、TrkB、TrkC、WO2019084499)；和PI3K家族(例如ATM、ATR、PRKDC、mTOR、SMG1、TRRAP，WO 2019084499)。
鉴于以上所述，在优选实施例中，化合物用于调节BET蛋白活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节β2-肾上腺素能受体活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SMCHD1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节PARP1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节WNT信号传导活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节端锚聚合酶活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节PRC2/EZH2活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SUV39H1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节MBD2/NuRD复合物活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节MBD1/CAF-1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节TRIM28活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SETDB1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KDM1A活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SIN3复合物活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节ASH1L活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BAP1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BAZ1A活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BAZ1B活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BAZ2A活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BPTF活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BRD2活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BRD3活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BRD4活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BRDT活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BRPF1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节BRPF3活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节CARM1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KDM4A活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KDM4B活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KDM4C活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KDM4D活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KDM6A活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KDM6B活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KMT2A活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KMT2C活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节KMT2E活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节MYSM1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节NEK6活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节PHF2活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节PRMT1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SETD1A活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SETD1B活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SF3B1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SMARCA5活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SMARCB1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节SMYD3活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节UFL1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节USP3活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节USP7活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节USP16活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节Src家族活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节Syk家族活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节Abl家族活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节Tie家族活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节Flt家族活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节CK1活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节ErbB家族活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节p38活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节Trk家族活性；在其他优选实施例中，化合物用于调节PI3K家族活性。在这种上下文中，活性的调节优选地是活性的抑制。可以如上文引用的相应来源中所述测定调节和抑制。
配制与施用
包含上述化合物的组合物可以作为药物或化妆品制剂或在各种其他介质中制备，例如用于人或动物的食物，包括医疗食物和膳食补充剂。“医疗食物”是产品，旨在对存在独特营养需求的疾病或病症进行特定的饮食管理。作为示例而非限制，医疗食物可以包括通过饲管喂食(称为肠内施用)的维生素和矿物质配制品。“膳食补充剂”是指旨在补充人饮食的产品，通常以丸剂、胶囊剂、片剂或类似制剂的形式提供。作为示例而非限制，膳食补充剂可包括以下成分中的一种或多种：维生素、矿物质、草药、植物性治疗药物；氨基酸、旨在通过增加总膳食摄入量来补充膳食的膳食物质，以及上述任何物质的浓缩物、代谢物、组分、提取物或组合。膳食补充剂也可掺入食物中，包括但不限于食物棒、饮料、粉末、谷物、熟食、食品添加剂和糖果；或其他旨在促进健康或预防或阻止与DUX4表达相关的退行性疾病进展的功能性食物。
主题化合物和组合物可以与其他生理上可接受的物质混合，这些物质可以被摄取，包括但不限于食物。此外，或可替代地，本文所述的组合物可以与(单独的)食物施用组合口服施用。
根据本发明的组合物或化合物可以单独施用或与其他药物或美容剂组合施用，并且可以与其生理学上可接受的载体组合。特别地，本文所述的化合物可以通过与添加剂例如药学或生理学上可接受的赋形剂载体和媒剂一起配制而配制成药物或化妆品组合物。合适的药学或生理学可接受的赋形剂、载体和媒剂包括加工剂和药物递送调节剂和增强剂，例如磷酸钙、硬脂酸镁、滑石、单糖、二糖、淀粉、明胶、纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、右旋糖、羟丙基-P-环糊精、聚乙烯吡咯烷酮、低熔点蜡、离子交换树脂等，以及其中任何两种或更多种的组合。其他合适的药学上可接受的赋形剂描述于“Remington'sPharmaceutical Sciences[雷明顿制药科学],”Mack Pub.Co.(麦克出版公司),新泽西州(1991),和“Remington:The Science and Practice of Pharmacy[雷明顿：药学的科学与实践],”Lippincott Williams&Wilkins(利平科特·威廉姆斯和威尔金斯公司),费城,第20版(2003),第21版(2005)和第22版(2012)，通过引用并入本文。
根据本发明使用的组合物可以通过本领域公知的方法制造；例如，通过常规的混合、溶解、制粒、制糖衣丸、研磨、乳化、包封、包埋或冻干过程，这可能产生脂质体配制品、团聚体、水包油乳剂、纳米微粒/微粒粉末或任何其他形状或形式。因此，根据本发明使用的组合物可以使用一种或多种生理学上可接受的载体以常规方式配制，这些载体包括促进将活性化合物加工成可药用制剂的赋形剂和助剂。合适的配制品取决于所选择的施用途径。
对于注射，据本发明使用的化合物和组合物可以在水性溶液中进行配制，优选地在生理相容性缓冲液中，例如汉克斯(Hanks's)溶液、格林斯(Ringer's)溶液、或生理盐水缓冲液。对于穿粘膜施用，在配制品中使用适合有待渗透的障碍的渗透剂。这种渗透剂在本领域中通常是已知的。
可以使用口服和非肠道施用，其中所用的化合物和组合物通过将它们与本领域公知的药学上可接受的载体组合或通过将它们用作食品添加剂来配制。这样的策略使得根据本发明使用的化合物和组合物能够被配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，以供待治疗的受试者口服摄取。可使用固体赋形剂制备口服制剂或药理学制剂，任选研磨所得混合物，并加工颗粒混合物，如果需要，在添加合适的助剂后获得片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂尤其是填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可添加崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂、或海藻酸或其盐如海藻酸钠。此外，可以用本领域已知的摄取增强剂制备共配制品。
糖衣丸芯配有合适的包衣。为此目的，可以使用浓缩糖溶液，其可以任选地包含阿拉伯树胶、滑石、PVP、卡波姆凝胶、聚乙二醇和/或二氧化钛、漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。聚甲基丙烯酸酯可用于提供pH响应性释放谱以便通过胃。可以将着色剂或色素添加到片剂或糖衣丸包衣中，以用于标识或表征活性化合物剂量的不同组合。
可口服施用的化合物和组合物包括由明胶制成的插接式胶囊(push-fitcapsule)、以及由明胶和增塑剂(如甘油或山梨醇)制成的密封式软胶囊。插接式胶囊可以含有与填充剂(诸如乳糖)、粘合剂(诸如淀粉类)、和/或润滑剂(诸如滑石或硬脂酸镁)以及任选的稳定剂混合的多种活性成分。在软胶囊中，这些活性化合物可以溶解或悬浮在合适的液体中，例如脂肪油、液体石蜡、或液体聚乙二醇。此外，还可以添加稳定剂。用于口服施用的所有配制品可以处于适于这种施用的剂量。
对于口腔施用，根据本发明使用的化合物和组合物可以以按常规方式配制的片剂或锭剂的形式施用。
根据本发明使用的化合物和组合物可以配制为用于通过注射(例如，通过推注或连续输注)进行肠胃外施用。通过这种方式，还可以靶向特定器官、组织、肿瘤部位、炎症部位等。用于感染的配制品可以以单位剂型而存在，例如在添加有防腐剂的安瓿中或在多剂量容器中。组合物可以采取例如处于油性或水性媒剂中的混悬液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制剂(如混悬剂、稳定剂和/或分散剂)。这种配制品是优选的，因为它能够特异性靶向肌肉组织。
用于肠胃外施用的组合物包括水溶性形式的组合物水性溶液。另外，可以将悬浮液制备为适当的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或媒剂包括脂肪油(如芝麻油)、或合成的脂肪酸酯(如油酸乙酯或甘油三酯)、或脂质体。水性注射混悬液可包含增加混悬液的粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇、或葡聚糖。任选地，悬浮液还可含有合适的稳定剂或增加组合物的溶解度的药剂，以允许制备高度浓缩的溶液。
可替代地，组合物的一种或多种组分在使用前可处于粉末形式以与合适的媒剂(例如无菌无热原质水)组构。
根据本发明使用的组合物还可被配制成直肠组合物(如栓剂或保留灌肠剂)，例如包含多种常规的栓剂基质(如可可脂或其他甘油酯类)。
除了前面描述的配制品，根据本发明使用的化合物和组合物还可以配制成贮库制剂。此类长效型配制品可通过植入(例如，皮下或肌内)或通过肌内注射进行施用。因此，例如，它们可以与合适的聚合物或疏水材料一起配制(例如作为可接受的油中的乳液)，或作为在体内可能会或可能不会自动降解的固体或半固体植入物的一部分，或组合物的一种或多种组分可以配制成微溶衍生物，例如微溶盐。合适的聚合物材料的实例是本领域技术人员已知的并且包括PLGA和聚内酯例如聚己酸。
根据本发明使用的组合物还可以包含合适的固相或凝胶相载体或赋形剂。这些载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖类、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物(例如聚乙二醇)。
根据本发明使用的组合物也可以包含在透皮贴剂中。根据本发明使用的优选透皮贴剂选自单层粘合剂包药贴剂，或多层粘合剂包药贴剂，或储库贴剂，或基质贴剂，或蒸汽贴剂。
根据本发明使用的组合物包括其中以有效实现其预期目的的量包含活性成分的化合物和组合物。更具体地，治疗有效量是指有效预防、稳定、减轻、恢复或改善疾病的原因或症状，或延长被治疗的受试者的存活、活动性或独立性的化合物的量。治疗有效量的确定，尤其是根据在此提供的详细披露，在本领域技术人员的能力之内。对于本发明中使用的任何化合物和组合物，治疗有效量或剂量可以最初从细胞培养测定来估计，例如如本文所例示的。剂量可以在该范围内变化，这取决于所使用的剂型和使用的施用途径。个体医生可以根据患者的状况选择确切的配制品、施用途径和剂量。(参见例如Fingl等人,1975,在“The Pharmacological Basis of Therapeutics[治疗学的药理学基础]”第1章,第1页)。施用的化合物和组合物的量将当然取决于被治疗的受试者、受试者的体重、病痛的严重程度、施用方式和开药的医师的判断。
可以提供根据本发明使用的组合物，使得根据本发明使用的化合物和本文定义的一种或多种其他组分在同一容器中，呈溶液、悬浮液或粉末形式。还可以提供根据本发明使用的组合物，其中彼此分开提供的所有组分，例如在施用之前彼此混合，或者单独或顺序施用。各种包装选择是可能的并且对于本领域技术人员来说是已知的，尤其取决于施用途径和机制。鉴于上述施用方法，本发明提供了根据本发明使用的化合物或根据本发明使用的组合物，其特征在于口服、舌下、血管内、静脉内、皮下、透皮或任选地通过吸入施用；优选口服。
化合物或组合物的“有效量”是以下量，该量当施用于受试者时足以减轻或消除一种或多种疾病症状或延缓一种或多种疾病症状进展，或减轻一种或多种疾病症状的严重程度，或抑制疾病的表现，或抑制疾病的不利症状的表现。可以在一个或多个施用中给予“有效量”。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的“有效量”将取决于施用活性成分的宿主和特定的施用方式。所选择的单位剂量通常被制造和施用以提供化合物在血液中的期望最终浓度。
优选对于成人的有效量(即有效总日剂量)在本文中定义为约0.01至2000mg、或约0.01至1000mg、或约0.01至500mg、或约5至1000mg、或约20至800mg、或约30至800mg或约30至700mg、或约20至700mg或约20至600mg、或约30至600mg、或约30至500mg、约30至450mg或约30至400mg、或约30至350mg或约30至300mg或约50至600mg、或约50至500mg、或约50至450mg、或约50至400mg或约50至300mg、或约50至250mg、或约100至250mg或约150至250mg的总日剂量。在最优选的实施例中，有效量是约200mg。在优选实施例中，本发明提供了根据本发明使用的化合物或根据本发明使用的组合物，其特征在于它以0.1至1500mg/天，优选0.1至1000mg/天，更优选0.1至400mg/天，还更优选0.25至150mg/天，例如约100mg/天的量施用给受试者。
可替代地，化合物的有效量，优选对于成人，优选以每kg体重施用。因此，优选对于成人的总日剂量是约0.05至约40mg/kg、约0.1至约20mg/kg、约0.2mg/kg至约15mg/kg、或约0.3mg/kg至约15mg/kg或约0.4mg/kg至约15mg/kg或约0.5mg/kg至约14mg/kg或约0.3mg/kg至约14mg/kg或约0.3mg/kg至约13mg/kg或约0.5mg/kg至约13mg/kg或约0.5mg/kg至约11mg/kg。
对于儿童的总日剂量优选最多为200mg。更优选地，总日剂量为约0.1至200mg、约1至200mg、约5至200mg、约20至200mg、约40至200mg、或约50至200mg。优选地，对于儿童的总日剂量为约0.1至150mg、约1至150mg、约5至150mg、约10至150mg、约40至150mg、或约50至150mg。更优选地，总日剂量为约5至100mg、约10至100mg、约20至100mg约30至100mg约40至100mg、或约50至100mg。甚至更优选地，总日剂量为约5至75mg、约10至75mg、约20至75mg约30至75mg约40至75mg、或约50至75mg。
可以使用的剂量的替代实例是根据本发明使用的化合物的有效量，其在约0.1μg/kg至约300mg/kg、或约1.0μg/kg至约40mg/kg体重、或约1.0μg/kg至约20mg/kg体重、或约1.0μg/kg至约10mg/kg体重、或约10.0μg/kg至约10mg/kg体重、或约100μg/kg至约10mg/kg体重、或约1.0mg/kg至约10mg/kg体重、或约10mg/kg至约100mg/kg体重、或约50mg/kg至约150mg/kg体重、或约100mg/kg至约200mg/kg体重、或约150mg/kg至约250mg/kg体重、或约200mg/kg至约300mg/kg体重、或约250mg/kg至约300mg/kg体重的剂量范围内。可以使用的其他剂量是约0.01mg/kg体重、约0.1mg/kg体重、约1mg/kg体重、约10mg/kg体重、约20mg/kg体重、约30mg/kg体重、约40mg/kg体重、约50mg/kg体重、约75mg/kg体重、约100mg/kg体重、约125mg/kg体重、约150mg/kg体重、约175mg/kg体重、约200mg/kg体重、约225mg/kg体重、约250mg/kg体重、约275mg/kg体重或约300mg/kg体重。
根据本发明使用的化合物或组合物可以以单次日剂量施用，或者总日剂量可以以每日两次、三次或四次的分开剂量施用。
在本发明的优选实施例中，“受试者”、“个体”或“患者”被理解为个体有机体，优选脊椎动物，更优选哺乳动物，甚至更优选灵长类动物，最优选人。
在本发明的另一个优选实施例中，人是成年人，例如18岁或以上的人。此外，本文理解成人的平均体重为62kg，尽管已知平均体重在国家之间有所不同。在本发明的另一个实施例中，成年人的平均体重因此在约50-90kg之间。本文应理解，本文定义的有效剂量不限于具有平均体重的受试者。优选地，受试者具有介于18.0至40.0kg/m2之间的BMI(身体质量指数)，更优选地具有介于18.0至30.0kg/m2之间的BMI。
可替代地，待治疗的受试者是儿童，例如17岁或以下的人。此外，待治疗的受试者可以是出生和青春期之间或青春期和成年之间的人。在此可以理解，女性的青春期开始于10-11岁，男性的青春期开始于11-12岁。此外，待治疗的受试者可以是新生儿(出生后头28天)、婴儿(0-1岁)、学步儿童(1-3岁)、学龄前儿童(3-5岁)；学龄儿童(5-12岁)或青少年(13-18岁)。
为了在治疗期间保持有效范围，化合物或组合物可以每天一次或每两天、三天、四天或五天一次施用。然而优选地，化合物可以每天至少施用一次。因此，在优选实施例中，本发明涉及根据本发明使用的化合物或根据本发明使用的组合物，其特征在于将它每天施用给受试者4、3、2或1次或更少，优选每天1次。总日剂量可以作为单次日剂量施用。可替代地，化合物每天施用至少两次。因此，如本文所定义的化合物可以一天一次、两次、三次、四次或五次施用。因此，总日剂量可以划分为几个剂量(单位)，从而导致施用如本文所定义的总日剂量。在优选实施例中，化合物每天两次施用。还应理解，术语“每天两次”、“bid”和“bis indie”在本文中可以互换使用。
在优选实施例中，总日剂量被划分成每天几个剂量。这些单独的剂量可能在数量上有所不同。例如，对于每个总日剂量，第一剂量可具有比第二剂量更大量的化合物，或反之亦然。然而优选地，化合物以相似或相等的剂量施用。因此，在最优选实施例中，化合物以两个相似或相等的剂量每天施用两次。
在本发明的另一个优选实施例中，如上文所定义的化合物的总日剂量以至少两个单独的剂量施用。至少两个单独的剂量的施用之间的间隔是至少约0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个小时，优选地，至少两个单独的剂量之间的间隔是至少约4、5、6、7、8、9、10、11或12个小时，并且更优选地，至少两个单独的剂量之间的间隔是至少约8、9、10、11或12个小时。
用途
在本发明的一个方面，提供了根据本发明的通式I的化合物或组合物的用途。所述用途是用于治疗有需要的受试者的与DUX4表达相关的疾病或病症，并且包括向受试者施用有效剂量的根据本发明的通式I的化合物或组合物，其中通式I的化合物或组合物如本文前面所定义。
在该方面的一个实施例中，提供了根据本发明的通式I的化合物或组合物的用途。所述用途用于治疗有需要的受试者的肌营养不良或癌症，并且包括向受试者施用有效剂量的根据本发明的通式I的化合物或组合物，其中通式I的化合物或组合物如本文前面所定义。进一步的特征和定义优选如本文别处所定义，特别是对于待治疗的疾病或病症，或对于例如使用化合物用于促进肌源性融合和/或用于促进肌源性分化(其可以是体外、体内或离体)的用途。
方法
本发明的一个方面提供了用于降低DUX4表达的体内、体外或离体方法，该方法包括使细胞与本文前面定义的通式I化合物或本文前面定义的组合物接触的步骤。优选地，所述方法用于治疗与DUX4表达相关的疾病或病症，例如肌营养不良或癌症，最优选地，所述疾病或病症是面肩肱型肌营养不良(FSHD)。该方法优选包括如本文前面定义的用途。优选的方法包括使细胞与本文前面定义的通式I的化合物或组合物接触。在本发明的上下文中，使细胞与通式I的化合物或组合物接触可以包括将这样的通式I的化合物或组合物添加到培养细胞的培养基中。使细胞与通式I的化合物或组合物接触还可以包括将这样的通式I的化合物或组合物添加到悬浮细胞或覆盖细胞的培养基、缓冲液或溶液中。接触细胞的其他优选方法包括用通式I的化合物或组合物注射细胞，或将细胞暴露于包含通式I化合物或根据本发明的组合物的材料。进一步的施用方法在本文别处定义。优选的细胞是已知表达DUX4的细胞、怀疑表达DUX4的细胞或已知受本文前面定义的疾病或病症影响的细胞。
在这方面的一个实施例中，该方法是体外方法。在这方面的另一个实施例中，该方法是离体方法。在这方面的另一个实施例中，该方法是体内方法。在这方面的优选实施例中，该方法是体外或离体方法。
在这方面的实施例中，细胞可以是来自从受试者获得的样品的细胞。这样的样品可以是先前已经从受试者获得的样品。在这方面的实施例中，样品可能先前已经从人受试者获得。在这方面的实施例中，样品可能已经从非人受试者获得。在这方面的优选实施例中，获得样品不是根据本发明的方法的一部分。
在优选实施例中，根据本发明的方法是用于降低有需要的受试者中DUX4表达的方法，该方法包括施用有效量的本文前面定义的通式I的化合物或本文前面定义的组合物的步骤。在更优选实施例中，该方法用于治疗与DUX4表达相关的疾病或病症，优选肌营养不良或癌症，最优选所述疾病或病症是面肩肱型肌营养不良(FSHD)。进一步的特征和定义优选地如本文别处所定义。该方法可以用于任何用途，优选用于本文所述的任何非医疗用途，例如用于促进肌源性融合和/或用于促进肌源性分化，这可以是体外、体内或离体的。
一般定义
在本文件及其权利要求中，动词“包含”及其变体以其非限制性意义使用以表示包括该词之后的项，但不排除未特别提及的项。此外，动词“组成”可以替换为“基本上由……组成”，意思是如本文所定义的组合或组合物可以包含除具体指明的组分之外的一种或多种另外组分，所述一种或多种另外组分不改变本发明的独特特征。另外，通过不定冠词“一个/一种”(“a”或“an”)指代要素并不排除存在多于一个/一种要素的可能性，除非上下文明确要求存在一个/一种并且仅一个/一种要素。因此，不定冠词“一”(“a”或“an”)通常意指“至少一个/一种”。
当技术人员将结构式或化学名称理解为具有手性中心但未指明手性时，对于每个手性中心，单独提及是指外消旋混合物、纯R对映异构体或纯S对映异构体中的所有三种。
每当在本发明的上下文中讨论物质的参数时，假定除非另有说明，否则该参数是在生理条件下确定、测量或显现的。生理条件对本领域技术人员来说是已知的，并且包括水性溶剂体系、大气压、介于6和8之间的pH值、从室温到约37℃(约20℃至约40℃)的温度，以及适当浓度的缓冲盐或其他组分。
如本文所述，物质用作药物的用途也可以解释为所述物质在药物制造中的用途。类似地，每当物质用于治疗或作为药物时，它也可以用于制造用于治疗的药物。用作本文所述的药物的产品可用于在治疗方法中使用，其中这样的治疗方法包括施用产品以供使用。根据本发明的通式I的化合物或组合物优选用于在根据本发明的方法或用途中使用。
在整个本申请中，表达被认为是将基因转录成功能性mRNA，从而产生多肽，例如酶或转录因子或例如DUX4多肽。多肽可以表现作用或具有活性。在这种上下文中，多肽的表达或活性增加或减少可以认为是编码所述多肽的mRNA水平增加或减少，多肽分子水平或量增加或减少，或所述多肽分子的总活性增加或减少。优选地，多肽的表达的增加或减少分别导致所述多肽的活性增加或减少，这可能是由多肽分子的水平或量增加或减少引起的。更优选地，DUX4表达的降低是DUX4基因转录的降低、DUX4 mRNA的去稳定化或降解、DUX4多肽分子的量的降低、DUX4多肽分子活性的降低、DUX4多肽的去稳定化或降解，或其组合。去稳定化的mRNA会导致其编码的多肽的表达降低，可能它不能导致这种表达。降解的mRNA被破坏并且不能导致其编码的多肽的表达。与未去稳定化的相同多肽相比，去稳定化的多肽表现较少的作用或具有较低的活性，可能它不表现作用或不具有活性。去稳定化的多肽可以变性或错误折叠。降解的多肽被破坏并且不表现作用或不具有活性。
在本发明的上下文中，要评估的参数的减少或增加是指对应于该参数的值的至少5％的变化。更优选地，该值的减小或增加是指至少10％、甚至更优选至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少70％、至少90％或100％的变化。在后一种情况下，可能不再有与参数相关的可检测值。
当与数值(例如约10)结合使用时，词语“约”或“大约”优选地表示该值可以是给定值(10)加或减该值的5％。
除非另有说明，否则如本文所述的每个实施例可以组合在一起。上面已经参考多个实施例描述了本发明。技术人员可以设想实施例的一些要素的微小变化。这些都包括在所附权利要求书所定义的保护范围内。引用的所有专利和文献参考通过引用以其整体并入本文。
实例
实例1-通式(I)的化合物的合成
1.1-通用方法
在实验部分中未描述其合成的所有试剂或者是市售的，或者是已知化合物或者可以通过已知方法由已知化合物形成。
根据本发明方法制备的化合物和中间体可能需要纯化。有机化合物的纯化对于本领域技术人员是公知的，并且可以有几种纯化相同化合物的方法。在一些情况下，可能不需要纯化。在一些情况下，化合物可以通过结晶纯化。在一些情况下，可以使用合适的溶剂将杂质搅拌出来。在一些情况下，化合物可以通过以下纯化：色谱法，特别是快速柱色谱法，使用预装硅胶柱(例如Biotage SNAP柱
Figure BDA0003743572290000391
或
Figure BDA0003743572290000392
)与Biotage自动纯化系统(
Figure BDA0003743572290000393
或Isolera
Figure BDA0003743572290000394
)和洗脱液(例如己烷/EtOAc或DCM/MeOH梯度)组合。在一些情况下，可以使用所述方法通过制备型HPLC纯化化合物。
如本文所述的纯化方法可以提供以盐形式的具有足够碱性或酸性官能度的本发明化合物，例如，在足够碱性的本发明化合物的情况下，三氟乙酸盐或甲酸盐，或在足够酸性的本发明化合物的情况下，铵盐。这种类型的盐可以通过本领域技术人员已知的各种方法分别转化为其游离碱或游离酸形式，或者在随后的生物测定中用作盐。应当理解，如本文所述的分离的本发明化合物的特定形式不一定是所述化合物可应用于生物测定以定量特定生物活性的唯一形式。
所有起始材料和试剂都是可商购的并按原样使用。除非另有说明，否则1H核磁共振(NMR)光谱使用按规定在400MHz或500MHz下操作的Bruker仪器使用所述的溶剂在大约室温下进行。在所有情况下，NMR数据都与建议的结构一致。特征化学位移(δ)以百万分率给出，使用常规缩写来指定主要峰：例如s，单峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；dd，双二重峰；dt，双三重峰m，多重峰；br，宽峰。使用沃特世Fractionlynx制备型HPLC系统(2525泵、2996/2998UV/VIS检测器、2767液体处理器)或等效的HPLC系统例如吉尔森Trilution UV导向系统，通过反相HPLC进行制备型HPLC纯化。沃特世2767液体处理器既可用作自动进样器，也可用作级分收集器。用于化合物的制备型纯化的柱是沃特世Sunfire OBD PhenomenexLuna苯基己基(10μm 21.2×150mm，10μm)或沃特世Xbridge苯基(10μm 19×150mm，5μm)。在酸性或碱性条件下，根据乙腈和甲醇溶剂系统选择适当的聚焦梯度。在酸性/碱性条件下使用的改性剂分别是甲酸(0.1％V/V)和碳酸氢铵(10mM)。纯化由沃特世Fractionlynx软件通过在210-400nm处进行监测来控制，并在260nm处触发阈值收集，以及当使用Fractionlynx时，在APi条件下观察到目标分子离子的存在。通过LCMS(配备沃特世SQD的沃特世Acquity系统)分析收集的级分。使用Biotage Isolera系统进行正相快速柱色谱。二氧化硅柱购自中间化学公司(Interchim)或拜泰齐公司(Biotage)。流动相是己烷中的乙酸乙酯或二氯甲烷中的甲醇，具有不同的比例，由254nm处的UV吸收触发级分收集。使用HP或沃特世DAD+Micromass ZQ、单四极杆LC-MS或Quattro Micro LC-MS-MS进行分析型高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)。方法1：RP-HPLC柱是Phenomenex Luna 5μm C18(2),(100x4.6mm)。流动相在水(0.1％甲酸)中的5％-95％乙腈梯度，流速2.0mL/min，运行时间6.5分钟。方法2：RP-HPLC柱是沃特世Xterra MS 5μm C18，100x4.6mm。流动相在水(10mM酸式碳酸铵(碳酸氢铵))中的5％-95％乙腈。
化学名称是使用Chem Axon Ltd公司的JChem Excel命名软件(版本16.7.1800.1000)生成的。在一些情况下，使用普遍接受的市售试剂的名称来代替命名软件生成的名称。
分析型LC-MS方法：方法A
柱：Phenomenex Kinetix-XB C18 1.2x100mm，1.7μm；洗脱液A：水+0.1vol％甲酸，洗脱液B：乙腈+0.1vol％甲酸；梯度：0-5.3min 5-100％B，5.3-5.8min 100％B，5.8-5.82min 100-5％B，5.82-7.00min 5％B；流速0.6mL/min；注射体积1μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：200-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：150-850。
方法B柱：沃特世
Figure BDA0003743572290000401
BEHTMC18 2.1x100mm，1.7μm；洗脱液A：2mM碳酸氢铵，缓冲至pH 10，洗脱液B：乙腈；梯度：0-5.3min 5-100％B，5.3-5.8min 100％B，5.8-5.82min100-5％B，5.8-7.0min 5％B；流速0.6mL/min；注射体积2μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：200-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：150-850。
方法C柱：Phenomenex Gemini-NX C18 2.01x100mm，3μm；洗脱液A：2mM碳酸氢铵，缓冲至pH10，洗脱液B：乙腈；梯度：0-5.5min 5-100％B，5.5-5.9min 100％B，5.9-5.92min100-5％B，5.92-7.00min 5％B；流速0.6mL/min；注射体积3μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：210-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：150-850。
方法D柱：沃特世Atlantis dC18 2.1x100mm，3μm洗脱液A：水+0.1vol％甲酸，洗脱液B：乙腈+0.1vol％甲酸；梯度：0-5.0min 5-100％B，5.0-5.4min 100％B，5.4-5.42min100-5％B，5.42-7.00min 5％B；流速0.6mL/min；注射体积3μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：200-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：150-1000。
方法E柱：Kinetex Core-Shell C18 2.1x50mm，5μm洗脱液A：水+0.1vol％甲酸，洗脱液B：乙腈+0.1vol％甲酸；梯度：0-1.2min 5-100％B，1.3-1.3min 100％B，1.3-1.31min100-5％B，1.31-1.65min 5％B；流速1.2mL/min；注射体积3μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：210-420nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：100-1000。
方法F柱：沃特世
Figure BDA0003743572290000402
CSHTMC18 2.1x100mm，1.7μm；洗脱液A：水+0.1vol％甲酸，洗脱液B：乙腈+0.1vol％甲酸；梯度：0-1.1min 5-100％B，1.1-1.35min 100％B，1.35-1.4min100-5％B，1.4-1.5min 5％B；流速0.9mL/min；注射体积2μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：200-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：150-850。
方法G柱：Phenomenex Gemini-NX C18 2.0x50mm，3μm；洗脱液A：2mM氢氧化铵，缓冲至pH 10，洗脱液B：乙腈；梯度：0-1.8min 1-100％B，1.8-2.1min 100％B，2.1-2.3min100-1％B；流速1mL/min；注射体积3μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：210-420nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：150-850。
方法H柱：沃特世
Figure BDA0003743572290000403
BEHTMC18 2.1x30mm，1.7μm；洗脱液A：2mM碳酸氢铵，缓冲至pH 10，洗脱液B：乙腈；梯度：0-0.75min 5-100％B，0.75-0.85min 100％B，0.85-0.9min100-5％B，0.9-1.0min 5％B；流速1mL/min；注射体积2μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：200-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：100-1000。
方法I柱：沃特世
Figure BDA0003743572290000404
BEHTM C18 2.1x50mm，1.7μm；洗脱液A：水+0.1vol％甲酸，洗脱液B：乙腈+0.1vol％甲酸；梯度：0-1.1min 5-100％B，1.1-1.35min 100％B，1.35-1.4min100-5％B，1.4-1.5min 5％B；流速0.9mL/min；注射体积1μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：200-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：100-1000。
方法J柱：沃特世
Figure BDA0003743572290000405
CORTECSTM C8 2.1x100mm，1.6μm；洗脱液A：水+0.1vol％甲酸，洗脱液B：乙腈+0.1vol％甲酸；梯度：0-1.1min 5-100％B，1.1-1.40min 100％B，1.40-1.42min 100-5％B，1.42-1.70min 5％B；流速0.9mL/min；注射体积1μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：200-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：100-1000。
方法K柱：沃特世
Figure BDA0003743572290000406
BEHTM C18 2.1x30mm，1.7μm；洗脱液A：2mM碳酸氢铵，缓冲至pH 10，洗脱液B：乙腈；梯度：0-1.1min 1-100％B，1.1-1.35min 100％B，1.35-1.40min100-1％B，1.40-1.8min 1％B；流速1mL/min；注射体积1μL；温度：40℃；UV扫描：215nm；PDA光谱范围：200-400nm步长：1nm；MSD信号设置-扫描位置：100-1000。
纯化方法：
Biotage IsoleraTM色谱系统(参见www.biotage.com/product-area/flash-purification)使用预装二氧化硅和预装改性二氧化硅柱。
制备型HPLC，方法A1：仪器：泵：吉尔森331&332；自动注射器：吉尔森GX281；UV检测器：吉尔森159；收集器：吉尔森GX281或泵：吉尔森333&334；自动注射器：吉尔森GX281；UV检测器：吉尔森155；收集器：吉尔森GX281；柱：沃特世Xbridge C18 30x100mm，10μm；洗脱液A：水+0.2vol％氢氧化铵，洗脱液B：乙腈+0.2vol％氢氧化铵；梯度：0-0.8min 10％B，0.8–14.5min 10-95％B，14.5-16.7min 95％B；流速40mL/min；注射体积1500μL；温度：25℃；UV扫描：215nm。
制备型HPLC，方法A2：仪器：泵：吉尔森331&332；自动注射器：吉尔森GX281；UV检测器：吉尔森159；收集器：吉尔森GX281或泵：吉尔森333&334；自动注射器：吉尔森GX281；UV检测器：吉尔森155；收集器：吉尔森GX281；柱：沃特世Xbridge C18 30x100mm，10μm；洗脱液A：水+0.2vol％氢氧化铵，洗脱液B：乙腈+0.2vol％氢氧化铵；梯度：0-1.1min 30％B，1.1-10.05min 30-95％B，10.05-11.5min 95％B；流速40mL/min；注射体积1500μL；温度：25℃；UV扫描：215nm。
制备型HPLC，方法B1：仪器泵：吉尔森331&332；自动注射器：吉尔森GX281；UV检测器：吉尔森159；收集器：吉尔森GX281；柱：沃特世Sunfire C18 30x100mm，10μm；洗脱液A：水+0.1vol％甲酸，洗脱液B：乙腈+0.1vol％甲酸；梯度：0-0.8min 10％B，0.8-14.5min 5-95％B，14.5-16.7min 95％B；流速40mL/min；注射体积1500μL；温度：25℃；UV扫描：215nm。
制备型HPLC，方法B2：仪器泵：吉尔森331&332；自动注射器：吉尔森GX281；UV检测器：吉尔森159；收集器：吉尔森GX281；柱：沃特世Sunfire C18 30x100mm，10μm；洗脱液A：水+0.1vol％甲酸，洗脱液B：乙腈+0.1vol％甲酸；梯度：0-1.1min 30％B，1.1-10.05min 30-95％B，10.05-11.5min 95％B；流速40mL/min；注射体积1500μL；温度：25℃；UV扫描：215nm。
1.2-中间体的合成
N-(5-氟-2-硝基苯基)吡啶-4-胺/中间体1-1的合成将KOtBu(2.05g，18.2mmol)添加到4-氨基吡啶(0.86g，9.11mmol)在THF(10mL)中的冰冷溶液中。将反应搅拌15分钟，然后添加2,4-二氟-1-硝基-苯(1.0mL，9.11mmol)在THF(10mL)中的溶液。将反应搅拌45分钟，然后在饱和NH4Cl(水性)中淬灭。将水层萃取至EtOAc(2x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(50g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(950mg，44％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),8.42-8.37(m,2H),8.23(dd,J＝9.3,6.0Hz,1H),7.36(dd,J＝11.0,2.7Hz,1H),7.24-7.19(m,2H),7.01(ddd,J＝9.4,7.5,2.7Hz,1H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.62min，MS(ESIpos)：m/z 234.0[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-{4-硝基-3-[(吡啶-4-基)氨基]苯基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体1-2的合成将N-(5-氟-2-硝基-苯基)吡啶-4-胺(中间体1-1)(0.29g，1.24mmol)、N-Boc-哌嗪(255mg，1.37mmol)和DIPEA(0.33mL，1.87mmol)在THF(10mL)中的溶液加热至65℃持续24小时。添加另外的N-boc-哌嗪(100mg，0.53mmol)和DIPEA(0.12mL，0.68mmol)并继续加热24小时。将反应冷却并在至饱和NaHCO3(水性)中淬灭。将水层萃取至EtOAc(2x)中，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用30％-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(310mg，62％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.48(s,1H),8.38-8.33(m,2H),8.05(d,J＝9.6Hz,1H),7.27-7.19(m,2H),6.78(d,J＝2.6Hz,1H),6.72(dd,J＝9.6,2.6Hz,1H),3.50-3.42(m,8H),1.41(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.98min，MS(ESIpos)：m/z 400.2[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-{4-氨基-3-[(吡啶-4-基)氨基]苯基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体1-3的合成将叔丁基4-[4-硝基-3-(4-吡啶基氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体1-2)(155mg，0.388mmol)、铁(108mg，1.94mmol)和NH4Cl(166mg，3.10mmol)在MeOH(7mL)和水(3mL)中的悬浮液加热至80℃持续3小时。将混合物冷却并通过硅藻土过滤，然后真空浓缩。将残余物吸收在DCM/MeOH中并加载到SCX-2离子交换柱上。将柱用MeOH洗涤，然后将化合物用MeOH中的2M NH3洗脱，并且真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用0-25％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(96mg，60％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(s,1H),8.10(d,J＝6.3Hz,2H),6.72(s,2H),6.65(d,J＝1.9Hz,1H),6.61(d,J＝5.5Hz,2H),4.52(s,2H),3.44-3.40(m,4H),2.90-2.84(m,4H),1.41(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.82min，MS(ESIpos)：m/z 370.1[M+H]+，纯度＝89％。
叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-1-(吡啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-6-基]哌嗪-1-甲酸 酯/中间体1的合成将4-氟苯甲醛(16μL，0.149mmol)、CAN(7.4mg，0.0135mmol)和过氧化氢(35％，47μL，0.541mmol)依次添加到叔丁基4-[4-氨基-3-(4-吡啶基氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体1-3)(50mg，0.135mmol)在EtOH(2mL)中的悬浮液中。将反应加热至45℃持续2小时，然后冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(2x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用30％-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(29mg，45％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.82-8.74(m,2H),7.77(d,J＝8.8Hz,1H),7.48(dd,J＝8.8,5.3Hz,2H),7.25-7.23(m,2H),7.08(dd,J＝8.8,2.1Hz,1H),7.03(t,J＝8.6Hz,2H),6.78(s,1H),3.65-3.57(m,4H),3.17-3.06(m,4H),1.48(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.16min，MS(ESIpos)：m/z 474.1[M+H]+，纯度＝100％。
N-(5-氟-2-硝基苯基)-2-甲基吡啶-4-胺/中间体2-1的合成将KOtBu(818mg，7.29mmol)添加到2-甲基吡啶-4-胺(395mg，3.65mmol)在THF(6mL)中的冰冷溶液中。将反应搅拌15分钟，然后添加2,4-二氟-1-硝基-苯(400μL，3.65mmol)在THF(6mL)中的溶液。将混合物搅拌1.5小时，然后用饱和NH4Cl溶液淬灭并用EtOAc(2x)萃取。将有机物合并，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(621mg，69％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),8.27(d,J＝5.6Hz,1H),8.22(dd,J＝9.3,6.0Hz,1H),7.32(dd,J＝11.0,2.7Hz,1H),7.08(d,J＝1.8Hz,1H),7.04(dd,J＝5.6,2.1Hz,1H),6.98(ddd,J＝9.9,7.5,2.7Hz,1H),2.40(s,3H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.71min，MS(ESIpos)：m/z 247.9[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-{3-[(2-甲基吡啶-4-基)氨基]-4-硝基苯基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体2-2 的合成将N-(5-氟-2-硝基-苯基)-2-甲基-吡啶-4-胺(中间体2-1)(621mg，2.51mmol)、N-boc-哌嗪(700mg，3.76mmol)和DIPEA(700μL，4.01mmol)在MeCN(10mL)中的溶液在80℃搅拌20小时。将混合物用水稀释并且用DCM萃取。将有机物经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(50g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷然后用0-40％MeOH/EtOAc洗脱)纯化，得到标题化合物(876mg，83％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.45(s,1H),8.24(d,J＝5.6Hz,1H),8.04(d,J＝9.6Hz,1H),7.10(d,J＝2.1Hz,1H),7.08(dd,J＝5.6,2.2Hz,1H),6.75(d,J＝2.6Hz,1H),6.70(dd,J＝9.7,2.6Hz,1H),3.48-3.39(m,8H),2.39(s,3H),1.41(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.98min，MS(ESIpos)：m/z 414.2[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-{4-氨基-3-[(2-甲基吡啶-4-基)氨基]苯基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体2-3 的合成向叔丁基4-[3-[(2-甲基-4-吡啶基)氨基]-4-硝基-苯基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体2-2)(870mg，2.06mmol)在脱气的EtOH(10mL)中的悬浮液中添加10％Pd/C(80mg，0.625mmol)，并将混合物在氢气气氛下搅拌5小时。将氢气真空除去并将反应混合物通过硅藻土过滤。将滤液真空浓缩，得到标题化合物(706mg，47％产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.0-7.9(m,1H),7.9(s,1H),6.7-6.6(m,3H),6.4(d,J＝4.8Hz,2H),4.4(s,2H),3.4(s,4H),2.9-2.8(m,4H),2.3(s,3H),1.4(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.84min，MS(ESIpos)：m/z 384.2[M+H]+，纯度＝90％。
叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-1-(2-甲基吡啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-6-基]哌嗪- 1-甲酸酯/中间体2的合成向叔丁基4-[4-氨基-3-[(2-甲基-4-吡啶基)氨基]苯基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体2-3)(130mg，0.305mmol)在EtOH(3mL)中的溶液中依次添加4-氟苯甲醛(36μL，0.336mmol)、CAN(17mg，0.0311mmol)和过氧化氢(35％，107μL，1.22mmol)。将反应在30℃加热1小时，然后在45℃再加热1小时。将反应物冷却至室温、用水稀释，并且用EtOAc(2x)萃取。将有机物合并，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷然后用0-20％MeOH/EtOAc洗脱)纯化，得到标题化合物(68mg，39％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.65(d,J＝5.3Hz,1H),7.74(d,J＝8.8Hz,1H),7.50-7.45(m,2H),7.08-6.99(m,5H),6.73(d,J＝2.2Hz,1H),3.63-3.54(m,4H),3.13-3.07(m,4H),2.61(s,3H),1.47(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.15min，MS(ESIpos)：m/z 488.2[M+H]+，纯度＝99％。
N-(5-氟-2-硝基苯基)嘧啶-4-胺/中间体3-1的合成将NaH(60％，566mg，14.1mmol)添加到4-氨基嘧啶(0.90g，9.43mmol)在DMF(20mL)中的冰冷溶液中。将反应搅拌10分钟，然后滴加2,4-二氟-1-硝基苯(1.0mL，9.43mmol)并将反应搅拌1小时。将该反应通过滴加水进行淬灭。将水层萃取至EtOAc(2x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(100g，二氧化硅)(用0-85％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(600mg，16％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.07(s,1H),8.68-8.65(m,1H),8.45(d,J＝5.8Hz,1H),8.18(dd,J＝9.2,5.9Hz,1H),8.01(dd,J＝11.1,2.8Hz,1H),7.17(ddd,J＝9.2,7.5,2.8Hz,1H),7.08(dd,J＝5.9,1.2Hz,1H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.85min，MS(ESIpos)：m/z 235.0[M+H]+，纯度＝60％。
叔丁基4-{4-硝基-3-[(嘧啶-4-基)氨基]苯基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体3-2的合成将N-(5-氟-2-硝基-苯基)嘧啶-4-胺(中间体3-1)(800mg，2.56mmol)、N-boc-哌嗪(1.43g，7.69mmol)和DIPEA(1.8mL，10.2mmol)在THF(25mL)中的溶液加热至65℃持续18小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(2x)中，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(50g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(292mg，29％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.17(s,1H),8.70-8.66(m,1H),8.40(d,J＝5.9Hz,1H),8.04(d,J＝9.6Hz,1H),7.76(d,J＝2.7Hz,1H),7.09(dd,J＝5.9,1.2Hz,1H),6.79(dd,J＝9.6,2.8Hz,1H),3.48(s,8H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.07min，MS(ESIpos)：m/z 401.1[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-{4-氨基-3-[(嘧啶-4-基)氨基]苯基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体3-3的合成将EtOH(5mL)添加到含有叔丁基4-[4-硝基-3-(嘧啶-4-基氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体3-2)(150mg，0.375mmol)和Pd/C(10％，14mg，0.112mmol)的烧瓶中。将反应在氢气气氛下搅拌18小时。将氢气真空除去，并且将混合物通过硅藻土垫过滤，用MeOH洗涤，然后真空浓缩，得到纯标题化合物(130mg，87％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.70(s,1H),8.48(s,1H),8.15(d,J＝6.0Hz,1H),6.81(d,J＝1.9Hz,1H),6.74-6.67(m,2H),6.47(d,J＝5.6Hz,1H),3.45-3.41(m,4H),2.90-2.84(m,4H),1.42(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.79min，MS(ESIpos)：m/z 371.1[M+H]+，纯度＝93％。
叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-1-(嘧啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑-6-基]哌嗪-1-甲酸 酯/中间体3的合成将CAN(硝酸铈铵，10mg，0.0175mmol)和过氧化氢(35％，61μL，0.702mmol)依次添加到4-氟苯甲醛(21μL，0.193mmol)和叔丁基4-[4-氨基-3-(嘧啶-4-基氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体3-3)(65mg，0.175mmol)在EtOH(2mL)中的溶液中。将反应加热至40℃持续1小时，然后冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(2x)中，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用20％-90％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(48mg，58％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.27(d,J＝1.0Hz,1H),8.95(d,J＝5.4Hz,1H),7.67(d,J＝8.8Hz,1H),7.55-7.50(m,2H),7.48(dd,J＝5.4,1.2Hz,1H),7.27(t,J＝8.9Hz,2H),7.23(d,J＝2.2Hz,1H),7.13(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),3.49(s,4H),3.14-3.08(m,4H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.18min，MS(ESIpos)：m/z 475.1[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸酯/中间体4-1的合成将6-氯-3-硝基-吡啶-2-胺(2.50g，14.4mmol)、N-boc-哌嗪(2.95g，15.8mmol)和DIPEA(5.0mL，28.8mmol)在MeCN(50mL)中的悬浮液加热至70℃持续18小时。将反应冷却并在水和EtOAc之间分配。将有机层分离并将水层萃取到EtOAc(2x)中。将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。将残余物与EtOAc研磨，通过过滤收集，用EtOAc洗涤，真空干燥，得到标题化合物(4.49g，94％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09(d,J＝9.5Hz,1H),8.03-7.62(m,2H),6.33(d,J＝9.5Hz,1H),3.80-3.65(m,4H),3.47-3.37(m,4H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.13min，MS(ESIpos)：m/z 324.1[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-{5-硝基-6-[(吡啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体4的 合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(1.30g，4.02mmol)、4-碘吡啶(824mg，4.02mmol)、Pd2(dba)3(92mg，0.101mmol)、xantphos(116mg，0.201mmol)和Cs2CO3(2.62g，8.04mmol)在1,4-二噁烷(13mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应加热至100℃持续14小时。将反应冷却，并且将固体物质通过过滤除去，用1,4-二噁烷洗涤。将滤液在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(50g，二氧化硅)(用0-7％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(1.1g，58％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),8.48(dd,J＝4.9,1.4Hz,2H),8.28(d,J＝9.6Hz,1H),7.72-7.66(m,2H),6.59(d,J＝9.6Hz,1H),3.82-3.72(m,4H),3.52-3.45(m,4H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.72min，MS(ESIpos)：m/z 401.2[M+H]+，纯度＝84％。
叔丁基4-{6-[(2-甲基吡啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸酯/中间 体5的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(0.50克，1.55mmol)、4-溴-2-甲基吡啶(266mg，1.55mmol)、Pd2(dba)3(35mg，0.0387mmol)、xantphos(45mg，0.0773mmol)和Cs2CO3(1.01g，3.09mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应加热至100℃持续16小时。将反应冷却并在EtOAc和水之间分配，并将水层萃取到EtOAc中。将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(1.54g，100％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ10.76(s,1H),8.42(d,J＝5.6Hz,1H),8.34(d,J＝9.5Hz,1H),7.44-7.39(m,2H),6.23(d,J＝9.5Hz,1H),3.79(s,4H),3.63-3.54(m,4H),2.55(s,3H),1.50(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.73min，MS(ESIpos)：m/z 415.3[M+H]+，纯度＝98％。
叔丁基4-{6-[(2-甲氧基吡啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸酯/中 间体6的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(0.50克，1.55mmol)、4-溴-2-甲氧基吡啶(291mg，1.55mmol)、Pd2(dba)3(35mg，0.0387mmol)、Xantphos(45mg，0.0773mmol)和Cs2CO3(1.01g，3.09mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应加热至100℃持续16小时。将反应冷却并在EtOAc和水之间分配，并将水层萃取到EtOAc中。将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-70％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(600mg，88％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ10.79(s,1H),8.34(d,J＝9.5Hz,1H),8.07(d,J＝5.7Hz,1H),7.21(d,J＝1.7Hz,1H),6.99(dd,J＝5.7,1.9Hz,1H),6.22(d,J＝9.5Hz,1H),3.95(s,3H),3.79(s,4H),3.64-3.53(m,4H),1.50(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.98min，MS(ESIpos)：m/z 431.3[M+H]+，纯度＝98％。
叔丁基4-(6-{[2-(二氟甲基)吡啶-4-基]氨基}-5-硝基吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸 酯/中间体7的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(0.25g，0.773mmol)、Pd2(dba)3(18mg，0.0193mmol)、xantphos(22mg，0.0387mmol)、Cs2CO3(0.50g，1.55mmol)和4-溴-2-(二氟甲基)吡啶(161mg，0.773mmol)在1,4-二噁烷(2.5mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应加热至100℃持续16小时。将反应冷却并将混合物在EtOAc和水之间分配并将水层萃取到EtOAc中。将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-75％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(330mg，95％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),8.55(d,J＝5.5Hz,1H),8.30(d,J＝9.5Hz,1H),8.24(d,J＝1.9Hz,1H),7.72(dd,J＝5.5,2.0Hz,1H),6.93(t,J＝55.1Hz,1H),6.62(d,J＝9.6Hz,1H),3.77(s,4H),3.53-3.42(m,4H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝1.05min，MS(ESIpos)：m/z 451.2[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基5-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)-八氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-甲酸酯/中间 体8-1的合成将叔丁基-六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸酯(500mg，2.35mmol)和6-氯-3-硝基-吡啶-2-胺(379mg，2.14mmol)在MeCN(10mL)中的悬浮液在70℃加热1小时。将反应冷却，并且将沉淀通过过滤收集，用MeCN洗涤，得到标题化合物(677mg，91％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.07(d,J＝9.4Hz,1H),8.01(s,1H),7.66(s,1H),6.02(d,J＝9.4Hz,1H),3.88-3.62(m,2H),3.61-3.48(m,2H),3.48-3.34(m,2H),3.15(s,2H),2.98(m,2H),1.39(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.89min，MS(ESIpos)：m/z 350.2[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基5-{5-硝基-6-[(吡啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}-八氢吡咯并[3,4-c]吡咯- 2-甲酸酯/中间体8的合成向叔丁基5-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)-八氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-甲酸酯(中间体8-1)(100mg，0.234mmol)和Na2S2O4(124mg，0.703mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中的混合物中添加4-氟苯甲醛(38μL，0.352mmol)，并且将反应在100℃搅拌20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层用EtOAc萃取，然后用DCM萃取一次。将合并的有机物用盐水洗涤，然后通过相分离过滤器并真空浓缩。将粗产物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用5-30％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(28mg，29％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75-8.65(m,2H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.57-7.47(m,2H),7.47-7.40(m,2H),7.26(t,J＝8.9Hz,2H),6.58(d,J＝8.8Hz,1H),3.61(dd,J＝10.7,7.9Hz,2H),3.21(dd,J＝10.8,3.5Hz,2H),2.92(dd,J＝10.6,6.6Hz,2H),2.81(s,2H),2.66-2.59(m,2H),2.36-2.31(m,1H)。LCMS(分析方法B)Rt＝1.38min，MS(ESIpos)：m/z401.3[M+H]+，纯度＝97％。
叔丁基5-{6-[(2-甲基吡啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}-八氢吡咯并[3,4-c] 吡咯-2-甲酸酯/中间体9的合成将叔丁基2-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸酯(中间体8-1)(200mg，0.572mmol)、4-溴-2-甲基吡啶(100mg，0.572mmol)、Pd2(dba)3(13mg，0.0143mmol)、xantphos(17mg，0.0286mmol)和Cs2CO3(0.37g，1.14mmol)在1,4-二噁烷(1.8mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应在100℃搅拌20小时。将反应冷却，并且将固体物质通过过滤除去，用1,4-二噁烷洗涤，然后用DCM洗涤。将滤液真空浓缩，并且将粗产物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(207mg，80％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.76(s,1H),8.34(d,J＝5.8Hz,1H),8.24(d,J＝9.5Hz,1H),7.75-7.61(m,2H),6.25(d,J＝9.5Hz,1H),4.00-3.89(m,1H),3.83-3.70(m,1H),3.65-3.49(m,3H),3.49-3.38(m,1H),3.27-3.18(m,2H),3.11-3.01(m,2H),2.44(s,3H),1.40(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.84min，MS(ESIpos)：m/z 441.3[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-{5-硝基-6-[(哒嗪-4-基)氨基]吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体10的 合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(250mg，0.773mmol)、4-溴哒嗪(125mg，0.786mmol)、xantphos(50mg，0.0864mmol)和Cs2CO3(500mg，1.53mmol)悬浮在1,4-二噁烷(4mL)中，并且将混合物用氮气脱气5分钟，然后添加Pd2(dba)3(40mg，0.0437mmol)。将混合物脱气5分钟，然后密封并在微波辐射下在100℃搅拌4小时。将反应用4-溴哒嗪(80mg，0.503mmol)、Pd2(dba)3(40mg，0.0437mmol)和Cs2CO3(250mg，0.767mmol)再处理并在微波辐射下于100℃搅拌4小时。将混合物用水淬灭并用EtOAc萃取。将有机物合并并真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化。将产物与Et2O一起研磨，并且将固体通过过滤收集，得到标题化合物(318mg，87％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.60(s,1H),9.48(dd,J＝2.8,0.9Hz,1H),9.07(dd,J＝5.9,0.7Hz,1H),8.30(d,J＝9.6Hz,1H),8.03(dd,J＝5.9,2.8Hz,1H),6.64(d,J＝9.6Hz,1H),3.79-3.73(m,4H),3.52-3.45(m,4H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.77min，MS(ESIpos)：m/z 402.3[M+H]i+，纯度＝85％。
叔丁基3-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸酯/ 中间体11-1的合成将叔丁基3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸酯(616mg，3.11mmol)和6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(500mg，2.82mmol)在MeCN(13.2mL)中的悬浮液在70℃加热2小时。将反应冷却并将溶剂真空除去，得到呈黄色固体的标题化合物(1.14g，定量产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.12(d,J＝9.4Hz,1H),7.93(s,2H),6.22(d,J＝9.4Hz,1H),4.19(d,J＝6.1Hz,2H),3.64-3.49(m,4H),3.18-3.06(m,2H),1.29(s,9H)。LCMS(分析方法H)Rt＝0.57min，MS(ESIpos)：m/z 336.3[M+H]+，纯度＝90％。
叔丁基3-{5-硝基-6-[(吡啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚 烷-6-甲酸酯/中间体11的合成将叔丁基3-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸酯(中间体11-1)(500mg，1.34mmol)、4-碘吡啶(289mg，1.41mmol)、Pd2(dba)3(31mg，0.034mmol)、xantphos(39mg，0.067mmol))和Cs2CO3(874mg，2.68mmol)在1,4-二噁烷(4mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应在100℃搅拌18小时。将反应冷却，并且将固体物质通过过滤除去。将滤液真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(457mg，76％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),8.51-8.45(m,2H),8.34(d,J＝9.5Hz,1H),7.82(dd,J＝4.9,1.5Hz,2H),6.49(d,J＝9.4Hz,1H),4.32-4.18(m,3H),3.80-3.57(m,2H),3.18(d,J＝5.2Hz,2H),2.59(d,J＝8.2Hz,1H),1.27(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.73min，MS(ESIpos)：m/z 413.3[M+H]+，纯度＝92％。
叔丁基5-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯/ 中间体12-1的合成将叔丁基2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(396mg，1.86mmol)和6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(300mg，1.69mmol)在MeCN(8mL)中的悬浮液在70℃加热1小时。将反应冷却并将溶剂真空除去。将残余物溶解在DCM中，用水(3x)和盐水洗涤，通过Telos分相器过滤并真空蒸发，得到呈黄色固体的标题化合物(548mg，91％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.15(d,J＝9.2Hz,1H),5.77(d,J＝9.0Hz,1H),5.14(d,J＝13.8Hz,1H),4.32(d,J＝63.5Hz,1H),3.71-3.32(m,4H),2.13-1.87(m,2H),1.83-1.69(m,2H),1.39(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.94min，MS(ESIpos)：m/z 350.2[M+H]+，纯度＝98％。
叔丁基5-{5-硝基-6-[(吡啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛 烷-2-甲酸酯/中间体12的合成将叔丁基5-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(中间体12-1)(200mg，0.57mmol)、4-碘吡啶(123mg，0.601mmol)、Pd2(dba)3(13mg，0.014mmol)、xantphos(17mg，0.029mmol))和Cs2CO3(373mg，1.14mmol)在1,4-二噁烷(1.7mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应在100℃搅拌16小时。将反应冷却，并且将固体物质通过过滤除去，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-5％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(223mg，89％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.88-10.52(m,1H),8.52-8.41(m,2H),8.35-8.19(m,1H),7.81(d,J＝5.1Hz,1H),7.68(d,J＝6.1Hz,1H),6.70-6.18(m,1H),5.04-4.50(m,1H),4.41-4.21(m,1H),3.81(s,1H),3.76-3.59(m,1H),3.59-3.45(m,2H),2.03-1.77(m,4H),1.49-1.37(m,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.73min，MS(ESIpos)：m/z 413.3[M+H]+，纯度＝92％。
叔丁基4-{6-[(2-苯甲酰胺基吡啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸 酯/中间体13的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(0.50g，1.55mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)苯甲酰胺(628mg，1.70mmol)和Cs2CO3(1.01g，3.09mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物通过用氮气喷射1分钟进行脱气。然后，添加Pd2(dba)3(35mg，0.0387mmol)和xantphos(45mg，0.0773mmol)，并且将反应物在密封管中加热至100℃持续2小时。将反应冷却，用水(10mL)稀释并用EtOAc(3x20mL)萃取。将有机萃取物合并，用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(55g，KP-NH)(用0-100％TBME/庚烷洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(112mg，14％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.85(s,1H),10.74(s,1H),8.87(s,1H),8.35-8.23(m,2H),8.07-8.03(m,2H),7.61(t,J＝7.4Hz,1H),7.52(t,J＝7.7Hz,2H),7.27(d,J＝4.8Hz,1H),6.62(d,J＝9.6Hz,1H),3.86(br s,4H),3.51(br s,4H),1.40(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.25min，MS(ESIpos)：m/z 520.1[M+H]+，纯度＝89％。
N-(4-溴吡啶-2-基)-4-氟苯甲酰胺/中间体14-1的合成将4-氟苯甲酰氯(0.40mL，3.40mmol)添加到4-溴吡啶-2-胺(300mg，1.70mmol)和DIPEA(0.59mL，3.40mmol)在无水DCM(3mL)中的溶液中，并将反应混合物在室温搅拌18小时。添加MeOH(3mL)和2M NaOH(3.0mL，6.00mmol)并将反应在室温搅拌3.5小时。将混合物用水(3mL)稀释并用DCM萃取(3x20mL)。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-40％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(442mg，88％产率)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.66(d,J＝1.5Hz,1H),8.58(s,1H),8.13(d,J＝5.3Hz,1H),8.00-7.91(m,2H),7.27(dd,J＝5.4,1.8Hz,1H),7.25-7.18(m,2H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.95min，MS(ESIpos)：m/z294.9[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-(6-{[2-(4-氟苯甲酰胺基)吡啶-4-基]氨基}-5-硝基吡啶-2-基)哌嗪- 1-甲酸酯/中间体14的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(300mg，0.928mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)-4-氟苯甲酰胺(中间体14-1)(279mg，0.946mmol)、xantphos(54mg，0.0928mmol)和Cs2CO3(605mg，1.86mmol))在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。然后添加Pd2(dba)3(42mg，0.0464mmol)并将反应在氮气下密封并在100℃搅拌2小时。将反应物用水淬灭并且用EtOAc(2x)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与MeCN一起研磨，得到呈黄色固体的标题化合物(480mg，77％产率)，其不经进一步纯化即可用于下一步骤。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.80(s,2H),8.75(s,1H),8.31-8.21(m,2H),8.18-8.07(m,2H),7.35-7.29(m,2H),7.23-7.17(m,1H),6.57(d,J＝9.5Hz,1H),3.88-3.72(m,4H),3.50-3.44(m,4H),1.39(s,9H)。LCMS(分析方法H)Rt＝0.73min，MS(ESIpos)：m/z 538.3[M+H]+，纯度＝80％。
N-(4-溴吡啶-2-基)吡啶-3-甲酰胺/中间体15-1的合成将HATU(850mg，2.24mmol)添加到烟酸(250mg，2.03mmol)和DIPEA(1.0mL，5.73mmol)在DMF(5mL)中的搅拌溶液中。在室温搅拌10分钟后，添加4-溴吡啶-2-胺(370mg，2.10mmol)并将反应在室温搅拌16小时。将反应用水淬灭，用EtOAc萃取，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化。将所得产物与MeOH一起研磨，得到呈白色固体的标题化合物(145mg，25％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.31(s,1H),9.12(d,J＝2.2Hz,1H),8.76(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.46(d,J＝1.7Hz,1H),8.36-8.30(m,2H),7.55(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),7.47(dd,J＝5.3,1.8Hz,1H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.97min，MS(ESIpos)：m/z 277.95，279.95[M+H]+，纯度＝99％。
叔丁基4-(5-硝基-6-{[2-(吡啶-3-酰胺基)吡啶-4-基]氨基}吡啶-2-基)哌嗪-1- 甲酸酯/中间体15-2的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(150mg，0.464mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)吡啶-3-甲酰胺(中间体15-1)(145mg，0.521mmol)、xantphos(28mg，0.0484mmol)和Cs2CO3(305mg，0.936mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。然后添加Pd2(dba)3(22mg，0.0240mmol)并将反应物在氮气下密封并在微波辐射下在100℃搅拌3小时。添加另外的叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(50mg，0.464mmol)和Pd2(dba)3(425mg，0.464mmol)并将混合物在微波辐射下在100℃搅拌1小时。将反应物用水淬灭并且用EtOAc(2x)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-5％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(265mg，98％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.05(s,1H),10.85(s,1H),9.15(d,J＝1.6Hz,1H),8.86(s,1H),8.76(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.37(dt,J＝8.0,1.9Hz,1H),8.32-8.27(m,2H),7.54(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),7.28(d,J＝4.1Hz,1H),6.61(d,J＝9.6Hz,1H),3.97-3.75(m,4H),3.53-3.46(m,4H),1.39(s,9H)。LCMS(分析方法H)Rt＝0.62min，MS(ESIpos)：m/z 521.4[M+H]+，纯度＝91％。
叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-3-[2-(吡啶-3-氨基)吡啶-4-基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡 啶-5-基]哌嗪-1-甲酸酯/中间体15的合成将Na2S2O4(275mg，1.56mmol)添加到叔丁基4-(5-硝基-6-{[2-(吡啶-3-酰胺基)吡啶-4-基]氨基}吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体15-2)(300mg，0.519mmol)和4-氟苯甲醛(70μL，0.653mmol)在DMSO(5mL)和EtOH(1mL)中的搅拌溶液中，并将混合物在密封小瓶中在100℃加热16小时。将反应冷却至室温并用饱和NaHCO3淬灭，用EtOAc(2x)萃取，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-8％MeOH/DCM洗脱)纯化，然后通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(94mg，27％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.34(s,1H),9.13-9.11(m,1H),8.76(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.54(d,J＝1.6Hz,1H),8.46(d,J＝5.3Hz,1H),8.35-8.31(m,1H),8.01(d,J＝8.9Hz,1H),7.61-7.57(m,2H),7.57-7.52(m,1H),7.32-7.25(m,2H),7.03(dd,J＝5.4,1.9Hz,1H),6.95(d,J＝9.0Hz,1H),3.59-3.54(m,4H),3.47-3.39(m,4H),1.40(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.98min，MS(ESIpos)：m/z 595.3[M+H]+，纯度＝93％。
N-(4-溴吡啶-2-基)环氧乙烷-3-甲酰胺/中间体16-1的合成向四氢吡喃-3-甲酸(285mg，2.12mmol)和4-溴吡啶-2-胺(250mg，1.42mmol)在DMF(2mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(742μL，4.25mmol)和HATU(592mg，1.56mmol)，并将混合物在室温搅拌72小时。将反应用水(15mL)淬灭并用TBME(3x20mL)萃取。将有机萃取物合并，用水(3x15mL)和盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈无色油状物的标题化合物(192.7mg，45％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),8.32(d,J＝1.7Hz,1H),8.22(d,J＝5.3Hz,1H),7.36(dd,J＝5.3,1.8Hz,1H),3.97-3.90(m,1H),3.84-3.75(m,1H),3.45-3.38(m,2H),2.86-2.71(m,1H),1.95-1.89(m,1H),1.75-1.45(m,3H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.03min，MS(ESIpos)：m/z 284.8，286.8[M+H]+，纯度＝98％。
叔丁基4-(5-硝基-6-{[2-(环氧乙烷-3-酰胺基)吡啶-4-基]氨基}吡啶-2-基)哌 嗪-1-甲酸酯/中间体16的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(215mg，0.666mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)环氧乙烷-3-甲酰胺(中间体16-1)(190mg，0.666mmol)和Cs2CO3(434mg，1.33mmol)在1,4中-二噁烷(2.2mL)中的混合物用氮气脱气1分钟。然后，添加Pd2(dba)3(15mg,0.0167mmol)和xantphos(19mg,0.0333mmol)，并且将反应物在密封管中在100℃加热2小时。将反应用水稀释并用EtOAc(3x20mL)萃取。将有机萃取物合并，用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-50％IPA/DCM洗脱)纯化，然后通过制备型HPLC(方法A2)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(125.6mg，36％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.79(s,1H),10.48(s,1H),8.76(s,1H),8.29(d,J＝9.6Hz,1H),8.19(d,J＝5.5Hz,1H),7.19-7.07(m,1H),6.60(d,J＝9.7Hz,1H),4.00-3.93(m,1H),3.90-3.71(m,3H),3.50(s,8H),2.86-2.76(m,1H),1.99-1.91(m,1H),1.75-1.66(m,1H),1.65-1.59(m,1H),1.58-1.50(m,1H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.16min，MS(ESIpos)：m/z 528.35[M+H]+，纯度＝100％。
N-(4-溴吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺/中间体17-1的合成向4-溴吡啶-2-胺(300mg，1.70mmol)在干DCM(3mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.59mL，3.40mmol)，随后添加环丙烷甲酰氯(0.31mL，3.40mmol)，并将所得混合物在室温搅拌过夜。添加MeOH(3mL)和2M NaOH(3.0mL，6.00mmol)并将混合物在室温搅拌3.5小时。将混合物用水(3mL)稀释并用DCM萃取(3x20mL)。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-40％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(426mg，定量产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.49(d,J＝1.6Hz,1H),8.34(s,1H),8.10(d,J＝5.4Hz,1H),7.20(dd,J＝5.4,1.7Hz,1H),1.62-1.51(m,1H),1.17-1.11(m,2H),0.97-0.90(m,2H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.77min，MS(ESIpos)：m/z 241.0[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-{6-[(2-环丙烷酰胺基吡啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}哌嗪-1-甲 酸酯/中间体17的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(300mg，0.928mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(中间体17-1)(228mg，0.946mmol)、xantphos(54mg，0.0928mmol)和Cs2CO3(605mg，1.86mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。然后添加Pd2(dba)3(42mg，0.0464mmol)并将反应在氮气下密封并在100℃搅拌2小时。将反应物用水淬灭并且用EtOAc(2x)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈橙色固体的标题化合物(440mg，88％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.77(d,J＝17.2Hz,2H),8.75(s,1H),8.27(d,J＝9.6Hz,1H),8.18(d,J＝5.6Hz,1H),7.10(d,J＝4.3Hz,1H),6.57(d,J＝9.6Hz,1H),3.79(s,4H),3.46(s,4H),2.05-1.99(m,1H),1.44(s,9H),0.83-0.82(m,2H),0.82-0.80(m,2H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.92min，MS(ESIpos)：m/z484.2[M+H]+，纯度＝90％。
N-(4-溴吡啶-2-基)乙酰胺/中间体18-1的合成将4-溴吡啶-2-胺(450mg，2.55mmol)在THF(8mL)中的冰冷溶液中添加DIPEA(1.1mL，6.44mmol)，然后添加乙酰氯(324μL，5.54mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，然后真空浓缩。将残余物溶解在MeOH(3mL)中，添加2M NaOH(1.5mL，3.00mmol)，并且将反应搅拌1小时，然后用2M HCl(1.5mL)淬灭。将混合物用水稀释并且用DCM(2x)萃取。将有机萃取物合并并真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)，得到呈白色固体的标题化合物(595mg，97％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),8.32(d,J＝1.4Hz,1H),8.21(d,J＝5.3Hz,1H),7.34(dd,J＝5.3,1.8Hz,1H),2.10(s,3H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.62min，MS(ESIpos)：m/z 215.0，217.0[M+H]+，纯度＝89％。
叔丁基4-{6-[(2-乙酰胺基吡啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸酯/ 中间体18的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(350mg,1.08mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)乙酰胺(中间体18-1)(250mg,1.16mmol)、xantphos(63mg,0.108mmol)和Cs2CO3(705mg,2.16mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。然后添加Pd2(dba)3(50mg，0.0541mmol)，并将反应在微波辐射下在100℃加热2小时。将反应物用水淬灭并且用EtOAc(2x)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(303mg，54％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.74(s,1H),10.43(s,1H),8.59(d,J＝1.5Hz,1H),8.27(d,J＝9.6Hz,1H),8.19(d,J＝5.6Hz,1H),7.22(dd,J＝5.6,2.0Hz,1H),6.58(d,J＝9.6Hz,1H),3.86-3.74(m,4H),3.51-3.43(m,4H),2.09(s,3H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.80min，MS(ESIpos)：m/z 458.3[M+H]+，纯度＝89％。
叔丁基(1S,4S)-5-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2- 甲酸酯/中间体19-1的合成将6-氯-3-硝基-吡啶-2-胺(0.73g，4.19mmol)、叔丁基(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(0.83g，4.19mmol)和DIPEA(1.5mL，8.39mmol)在MeCN(15mL)中的悬浮液加热至70℃持续18小时。将反应冷却，并且将沉淀物通过过滤收集并用EtOAc洗涤，得到呈亮黄色固体的标题化合物(1.29g，92％产率)，其不经进一步纯化即可用于下一步骤。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.07(d,J＝9.3Hz,1H),7.62(s,2H),6.07(s,1H),4.96(s,1H),4.51(s,1H),3.57(dd,J＝10.4,1.9Hz,1H),3.48-3.37(m,2H),3.21(d,J＝9.9Hz,1H),1.99-1.88(m,2H),1.42(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.86min，MS(ESIpos)：m/z 336.2[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基(1S,4S)-5-{6-[(2-苯甲酰胺基吡啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}-2, 5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯/中间体19的合成将叔丁基(1S,4S)-5-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(中间体19-1)(250mg，0.745mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)苯甲酰胺(211mg，0.760mmol)、xantphos(22mg，0.0373mmol)、Pd2(dba)3(17mg，0.0186mmol)和Cs2CO3(486mg，1.49mmol)在1,4-二噁烷(7.2mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。在微波辐射下将反应在100℃加热3小时。将反应物用水稀释并且用EtOAc(3x)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈亮黄色固体的标题化合物(332mg，84％产率)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.98min，MS(ESIpos)：m/z 532.2[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基(1S,4S)-5-(6-{[2-(4-氟苯甲酰胺基)吡啶-4-基]氨基}-5-硝基吡啶-2- 基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯/中间体20的合成将叔丁基(1S,4S)-5-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(中间体19-1)(200mg，0.596mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)-4-氟苯甲酰胺(中间体14-1)(180mg，0.608mmol)、xantphos(17mg，0.0298mmol)、Pd2(dba)3(14mg，0.0149mmol)和Cs2CO3(389mg，1.19mmol)在1,4-二噁烷(5.8mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。使用密封管将反应在100℃加热3小时。将反应物用水稀释并且用EtOAc(3x)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与MeCN一起研磨，得到呈黄色固体的标题化合物(260mg，76％产率)，其不经进一步纯化即可用于下一步骤。LCMS(分析方法F)Rt＝1.01min，MS(ESIpos)：m/z 550.2[M+H]+，纯度＝96％。
叔丁基(1S,4S)-5-{6-[(2-环丙烷酰胺基吡啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}- 2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯/中间体21的合成将叔丁基(1S,4S)-5-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(中间体19-1)(200mg，0.596mmol)、N-(4-溴吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(中间体17-1)(147mg，0.608mmol)、xantphos(17mg，0.0298mmol)、Pd2(dba)3(14mg，0.0149mmol)和Cs2CO3(389mg，1.19mmol)在1,4-二噁烷(5.8mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。使用密封管将反应在100℃加热3小时。将反应物用水稀释并且用EtOAc(3x)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物与MeCN一起研磨，得到呈黄色固体的标题化合物(165mg，55％产率)，其不经进一步纯化即可用于下一步骤。LCMS(分析方法F)Rt＝0.84min，MS(ESIpos)：m/z 496.2[M+H]+，纯度＝99％。
叔丁基4-(6-{[2-({[(叔丁氧基)羰基](甲基)氨基}甲基)吡啶-4-基]氨基}-5-硝 基吡啶-2-基)哌嗪-1-甲酸酯/中间体22的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(450mg，1.39mmol)、叔丁基N-[(4-溴吡啶-2-基)甲基]-N-甲基氨基甲酸酯(中间体22-2)(428mg，1.42mmol)、xantphos(40mg，0.0696mmol)、Pd2(dba)3(32mg，0.0348mmol)和Cs2CO3(907mg，2.78mmol)在1,4-二噁烷(13.5mL)中的混合物用氮气脱气5分钟。在微波辐射下将反应在100℃加热6小时。将反应物用水稀释并且用EtOAc(3x)萃取。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈亮黄色固体的标题化合物(656mg，87％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.67(s,1H),8.42(d,J＝5.6Hz,1H),8.29(d,J＝9.6Hz,1H),7.66-7.47(m,2H),6.60(d,J＝9.6Hz,1H),4.44(s,2H),3.77(s,4H),3.50(s,4H),2.88(s,3H),1.44-1.31(m,18H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.89min，MS(ESIpos)：m/z 544.3[M+H]+，纯度＝100％。
N-(4-溴吡啶-2-基)吗啉-4-甲酰胺/中间体23-1的合成向4-溴吡啶-2-胺(250mg，1.42mmol)和吡啶(0.13mL，1.56mmol)在THF(2mL)中的溶液中添加(4-硝基苯基)碳氯酸盐(314mg，1.56mmol)并将反应混合物在室温搅拌1小时。添加在THF(1mL)中的吗啉(0.22mL，1.84mmol)和DIPEA(0.37mL，2.12mmol)并将反应混合物在室温搅拌1小时。将混合物真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(332mg，65％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),8.17-8.13(m,1H),8.05(d,J＝1.4Hz,1H),7.23(dd,J＝5.3,1.8Hz,1H),3.64-3.53(m,4H),3.47-3.43(m,4H)。LCMS(分析方法E)Rt＝0.86min，MS(ESIpos)：m/z 285.8，287.7[M+H]+，纯度＝99％。
叔丁基4-[6-({2-[(吗啉-4-羰基)氨基]吡啶-4-基}氨基)-5-硝基吡啶-2-基]哌 嗪-1-甲酸酯/中间体23的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(289mg，0.895mmol)、N-(4-溴-2-吡啶基)吗啉-4-甲酰胺(中间体23-1)(320mg，0.895mmol)和Cs2CO3(583mg，1.79mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物通过用氮气喷射1分钟脱气。然后添加Pd2(dba)3(20mg，0.0224mmol)和xantphos(26mg，0.0447mmol)并将反应混合物用氮气脱气1分钟，然后在100℃搅拌18小时。将反应用Pd2(dba)3(20mg，0.0224mmol)和xantphos(26mg，0.0447mmol)再处理，并将反应混合物用氮气脱气1分钟。将混合物在100℃搅拌2小时。将反应冷却，用水(10mL)稀释并用EtOAc(2x)萃取。将有机萃取物合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-50％IPA/DCM洗脱)纯化。将所得产物通过制备型HPLC(方法A2)进一步纯化，得到标题化合物(58mg，12％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.77(s,1H),9.18(s,1H),8.48(s,1H),8.28(d,J＝9.6Hz,1H),8.13(d,J＝5.5Hz,1H),7.06(d,J＝5.0Hz,1H),6.59(d,J＝9.7Hz,1H),3.81(s,4H),3.64-3.57(m,4H),3.51-3.46(m,8H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.04min，MS(ESIpos)：m/z 529.4[M+H]+，纯度＝96％。
N-(4-溴吡啶-2-基)哌啶-1-甲酰胺/中间体24-1的合成向4-溴吡啶-2-胺(250mg，1.42mmol)和吡啶(0.13mL，1.56mmol)在THF(2mL)中的溶液中添加(4-硝基苯基)碳氯酸盐(314mg，1.56mmol)并将反应混合物在室温搅拌15分钟。添加在THF(1mL)中的哌啶(0.18mL，1.84mmol)和DIPEA(0.37mL，2.12mmol)并将反应混合物在室温搅拌1小时。将混合物真空浓缩并将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(263mg，52％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.34(s,1H),8.12-8.10(m,1H),8.04(d,J＝1.5Hz,1H),7.20(dd,J＝5.4,1.8Hz,1H),3.46-3.40(m,4H),1.63-1.52(m,2H),1.50-1.43(m,4H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.00min，MS(ESIpos)：m/z 283.8，285.7[M+H]+，纯度＝87％。
叔丁基4-[5-硝基-6-({2-[(哌啶-1-羰基)氨基]吡啶-4-基}氨基)吡啶-2-基]哌 嗪-1-甲酸酯/中间体24-2的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(237mg，0.732mmol)、N-(4-溴-2-吡啶基)哌啶-1-甲酰胺(中间体24-1)(260mg，0.732mmol)和Cs2CO3(477mg，1.46mmol)在1,4-二噁烷(2.4mL)中的混合物通过用氮气喷射1分钟脱气。然后添加Pd2(dba)3(17mg,0.0183mmol)和xantphos(21mg,0.0366mmol)并将反应混合物用氮气脱气1分钟，然后在100℃搅拌18小时。将反应用Pd2(dba)3(17mg,0.0183mmol)和xantphos(21mg,0.0366mmol)再处理，并将反应混合物用氮气脱气1分钟。将混合物在100℃搅拌2小时。将反应冷却，用水(10mL)稀释并用EtOAc(3x)萃取。将有机萃取物合并，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-50％IPA/DCM洗脱)纯化。将所得产物通过制备型HPLC(方法B2)进一步纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(52mg，12％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.78(s,1H),9.03(s,1H),8.48(s,1H),8.28(d,J＝9.6Hz,1H),8.11(d,J＝5.5Hz,1H),7.02(d,J＝4.5Hz,1H),6.58(d,J＝9.6Hz,1H),3.89-3.74(m,2H),3.52-3.48(m,4H),3.46-3.44(m,6H),1.62-1.54(m,2H),1.53-1.45(m,4H),1.43(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.13min，MS(ESIpos)：m/z 527.4[M+H]+，纯度＝86％。
叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-3-{2-[(哌啶-1-羰基)氨基]吡啶-4-基}-3H-咪唑[4,5- b]吡啶-5-基]哌嗪-1-甲酸酯/中间体24的合成将4-氟苯甲醛(36mg，0.291mmol)添加到叔丁基4-[5-硝基-6-[[2-(哌啶-1-羰基氨基)-4-吡啶基]氨基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体24-2)(59mg，0.0968mmol)在EtOH(0.15mL)和DMSO(1mL)中的溶液中。将反应搅拌5分钟，然后添加Na2S2O4(102mg，0.581mmol)并将反应在100℃加热18小时。添加另外的哌啶(0.20mL，2.02mmol)并将反应在120℃加热18小时。然后将反应在DCM(2x5mL)和NaHCO3(5mL)之间分离，并通过Telos分相器过滤。将滤液真空浓缩，然后通过制备型HPLC(方法B1)纯化，得到呈棕色油状物的标题化合物(29mg，47％产率)，其不经进一步纯化即可用于下一步骤。LCMS(分析方法F)Rt＝0.98min，MS(ESIpos)：m/z 601.5[M+H]+，纯度＝95％。
4-溴-2-(甲氧基甲基)吡啶/中间体25-1的合成将NaH(60％，48mg，1.20mmol)添加到(4-溴吡啶-2-基)甲醇(150mg，0.798mmol)在无水THF(3.7mL)中的冰冷溶液中，并且将混合物升温至室温并搅拌1小时。然后将溶液冷却至0℃，添加碘甲烷(74μL，1.20mmol)并将溶液在室温搅拌2小时。再次添加碘甲烷(10μL，0.16mmol)，并且将溶液再搅拌3小时。滤出混合物，用THF洗涤，并且真空蒸发滤液。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用0-55％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈淡黄色挥发性油状物的标题化合物(108mg，67％产率)。1HNMR(400MHz,氯仿-d)δ8.29(d,J＝5.3Hz,1H),7.76-7.52(m,1H),7.30(dd,J＝5.3,1.9Hz,1H),4.49(s,2H),3.42(s,3H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.65min，MS(ESIpos)：m/z 202.0[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-(6-{[2-(甲氧基甲基)吡啶-4-基]氨基}-5-硝基吡啶-2-基)哌嗪-1-甲 酸酯/中间体25的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(150mg，0.464mmol)、4-溴-2-(甲氧基甲基)吡啶(中间体25-1)(94mg，0.464mmol)、Pd2(dba)3(11mg，0.0116mmol)、xantphos(13mg，0.0232mmol)和Cs2CO3(0.300g，0.928mmol)在1,4-二噁烷(1.5mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却，并且将固体物质通过过滤除去，用1,4-二噁烷和DCM洗涤。将滤液真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(140mg，24％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.69(s,1H),8.40(d,J＝5.5Hz,1H),8.09(d,J＝9.5Hz,1H),8.06-8.01(m,1H),7.44-7.39(m,1H),6.33(d,J＝9.5Hz,1H),4.50(s,2H),3.80(s,4H),3.52-3.47(m,4H),2.90(s,3H),1.44(s,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.84min，MS(ESIpos)：m/z 445.2[M+H]+，纯度＝36％。
N-(6-氯-3-硝基吡啶-2-基)嘧啶-4-胺/中间体26-1的合成将NaH(60％，155mg，3.89mmol)添加到嘧啶-4-胺(370mg，3.89mmol)在无水DMF(5.2mL)中的冰冷溶液中。搅拌10分钟后，滴加2,6-二氯-3-硝基吡啶(500mg，2.59mmol)并将反应在0℃搅拌2小时。将反应通过添加饱和NH4Cl(20mL)淬灭。将水层用EtOAc(3×20mL)萃取，将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％TBME/庚烷洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(188mg，28％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.63(s,1H),8.81(d,J＝1.0Hz,1H),8.69(d,J＝5.9Hz,1H),8.62(d,J＝8.6Hz,1H),7.89(dd,J＝5.8,1.3Hz,1H),7.39(d,J＝8.6Hz,1H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.03min，MS(ESIpos)：m/z 251.8[M+H]+，纯度＝97％。
叔丁基4-{5-硝基-6-[(嘧啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸酯/中间体26的 合成向N-(6-氯-3-硝基吡啶-2-基)嘧啶-4-胺(中间体26-1)(94mg，0.374mmol)和叔丁基哌嗪-1-甲酸酯(213mg，1.12mmol)在IPA中(0.5mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.20mL，1.12mmol)，并将所得混合物在密封管中在100℃搅拌1.5小时。将溶剂真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-50％MeOH/TBME洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(91mg，58％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.04(s,1H),8.88(d,J＝0.9Hz,1H),8.74(d,J＝5.8Hz,1H),8.33(d,J＝9.6Hz,1H),8.22(dd,J＝5.8,1.3Hz,1H),6.69(d,J＝9.6Hz,1H),3.87-3.78(m,4H),3.55-3.50(m,4H),1.44(s,9H)。LCMS(分析方法E)Rt＝1.17min，MS(ESIpos)：m/z 402.05[M+H]+，纯度＝100％。
实例1.3-化合物的合成
2-(4-氟苯基)-6-(哌嗪-1-基)-1-(吡啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑/化合物1-1(来 自表1的#28)
Figure BDA0003743572290000501
将4M HCl(在1,4-二噁烷中)(507μL，2.03mmol)添加到叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)苯并咪唑-5-基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体1)(48mg，0.101mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的悬浮液职工。将反应搅拌1小时，然后将沉淀通过过滤收集，用1,4-二噁烷洗涤并真空干燥。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(18mg，48％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.78-8.73(m,2H),7.63(d,J＝8.9Hz,1H),7.53-7.43(m,4H),7.24(t,J＝8.9Hz,2H),7.07(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.70(d,J＝2.1Hz,1H),3.05-2.99(m,4H),2.86-2.79(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.39min，MS(ESIpos)：m/z 374.2[M+H]+，纯度＝100％。
2-(4-氟苯基)-1-(2-甲基吡啶-4-基)-6-(哌嗪-1-基)-1H-1,3-苯并二唑/化合物 1-2(来自表1的#29)
Figure BDA0003743572290000511
将叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-3-(2-甲基-4-吡啶基)苯并咪唑-5-基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体2)(65mg，0.113mmol)悬浮于4M HCl(在1,4-二噁烷中)(2mL)中并在室温搅拌10分钟。添加MeOH(1mL)并将反应搅拌1小时。将混合物真空浓缩并将残余物加载到SCX-2离子交换柱。将柱用DCM/MeOH洗涤，然后将产物用MeOH中的7N NH3洗脱，真空浓缩并冻干过夜，得到标题化合物(40mg，91％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(d,J＝5.3Hz,1H),7.64(d,J＝8.9Hz,1H),7.53-7.47(m,2H),7.35(d,J＝1.7Hz,1H),7.27-7.20(m,3H),7.07(dd,J＝8.9,2.1Hz,1H),6.70(d,J＝2.0Hz,1H),3.15-3.06(m,4H),2.98-2.89(m,4H),2.52(s,3H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.30min，MS(ESIpos)：m/z 388.2[M+H]+，纯度＝100％。
2-(4-氟苯基)-6-(哌嗪-1-基)-1-(嘧啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑/化合物1-3(表 1的#26)
Figure BDA0003743572290000512
将TFA(150μL，2.02mmol)添加到叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-3-嘧啶-4-基-苯并咪唑-5-基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体3)(48mg，0.101mmol)在DCM(1mL)中的溶液中并将反应搅拌1小时然后真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(26mg，67％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.27(d,J＝1.0Hz,1H),8.94(d,J＝5.5Hz,1H),7.63(d,J＝8.9Hz,1H),7.51(dd,J＝8.9,5.4Hz,2H),7.46(dd,J＝5.4,1.3Hz,1H),7.26(t,J＝8.9Hz,2H),7.17(d,J＝2.2Hz,1H),7.09(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),3.08-3.02(m,4H),2.87-2.82(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.36min，MS(ESIpos)：m/z 375.2[M+H]+，纯度＝98％。
N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-基} 吡啶-3-甲酰胺/化合物1-4(表1中的#2)
Figure BDA0003743572290000513
将叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-3-[2-(吡啶-3-羰基氨基)-4-吡啶基]咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体15)(94mg，0.142mmol)溶解在4M HCl(在1,4-二噁烷中)(3mL)中并搅拌1小时。将混合物真空浓缩，并且将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(41mg，56％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.30(s,1H),9.11(dd,J＝2.3,0.8Hz,1H),8.76(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),8.50-8.45(m,2H),8.32(m,1H),7.96(d,J＝8.9Hz,1H),7.62-7.53(m,3H),7.31-7.24(m,2H),7.08(dd,J＝5.3,2.0Hz,1H),6.89(d,J＝9.0Hz,1H),3.47-3.43(m,4H),2.80-2.74(m,4H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.59min，MS(ESIpos)：m/z 495.4[M+H]+，纯度＝97％。
N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-基} 哌啶-1-甲酰胺/化合物1-5(表1的#33)
Figure BDA0003743572290000514
向叔丁基4-[2-(4-氟苯基)-3-[2-(哌啶-1-羰基氨基)-4-吡啶基]咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体24)(29mg，0.0479mmol)在DCM(0.8mL)中的搅拌溶液中添加TFA(0.2mL，2.62mmol)并将混合物在室温搅拌1小时。将混合物真空浓缩，并且将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(2mg，10％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.30(s,1H),8.22(d,J＝5.4Hz,1H),7.91(d,J＝1.7Hz,1H),7.87(d,J＝8.9Hz,1H),7.54-7.43(m,2H),7.19(t,J＝8.9Hz,2H),6.80(d,J＝9.0Hz,1H),6.78(dd,J＝5.4,1.9Hz,1H),3.36-3.34(m,8H),2.73-2.65(m,4H),1.55-1.46(m,2H),1.44-1.34(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.80min，MS(ESIpos)：m/z 501.4[M+H]+，纯度＝99％。
1-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/化合物2- 1(表1的#17)
Figure BDA0003743572290000521
将叔丁基4-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体4)(100mg，0.250mmol)和Na2S2O4(132mg,0.749mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中的混合物温和加温30秒。添加4-氟苯甲醛(40μL，0.375mmol)并将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层用EtOAc洗涤，然后用NaHCO3(水性)碱化。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(13mg，14％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.72-8.68(m,2H),7.95(d,J＝8.9Hz,1H),7.50(dd,J＝8.9,5.4Hz,2H),7.45-7.41(m,2H),7.25(t,J＝8.9Hz,2H),6.89(d,J＝9.0Hz,1H),3.42-3.38(m,4H),2.79-2.74(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.34min，MS(ESIpos)：m/z375.3[M+H]+，纯度＝98％。
1-[2-(4-氯苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/化合物2- 2(表1的#18)的合成
Figure BDA0003743572290000522
将Na2S2O4(132mg，0.749mmol)添加到叔丁基4-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体4)(100mg，0.250mmol)和4-氯苯甲醛(54mg，0.375mmol)在EtOH(0.2mL)和DMSO(1mL)中的溶液中。将反应加热至100℃持续18小时，然后冷却并用水稀释。将水层用1:1THF/EtOAc(3x20mL)洗涤，然后用饱和溶液水性NaHCO3中和然后萃取到EtOAc(3x)中。将有机萃取物合并，经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法B1)纯化残余物，得到标题化合物(10mg，10％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75-8.69(m,2H),8.24(s,1H),7.97(d,J＝8.9Hz,1H),7.47(s,4H),7.45-7.43(m,2H),6.91(d,J＝9.0Hz,1H),3.46-3.42(m,4H),2.85-2.78(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.51min，MS(ESIpos)：m/z391.3[M+H]+，纯度＝99％。
1-[2-(4-氟苯基)-3-(2-甲基吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/化 合物2-3(表1的#13)
Figure BDA0003743572290000523
将Na2S2O4(127mg，0.724mmol)和叔丁基4-[6-[(2-甲基-4-吡啶基)氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体5)(100mg，0.241mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中的混合物温和加热30秒。添加4-氟苯甲醛(39μL，0.362mmol)并将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层用EtOAc(2x)洗涤，然后用NaHCO3(水性)碱化。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(26mg，26％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.58(d,J＝5.4Hz,1H),7.92(d,J＝8.9Hz,1H),7.51(dd,J＝8.9,5.3Hz,2H),7.21(d,J＝1.8Hz,1H),7.14(dd,J＝5.4,1.9Hz,1H),7.05(t,J＝8.7Hz,2H),6.73(d,J＝8.9Hz,1H),3.55-3.48(m,4H),3.02-2.96(m,4H),2.58(s,3H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.61min，MS(ESIpos)：m/z 389.3[M+H]+，纯度＝95％。
1-[2-(4-氟苯基)-3-(2-甲氧基吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/ 化合物2-4(表1的#32)
Figure BDA0003743572290000531
将Na2S2O4(123mg,0.697mmol)和叔丁基4-[6-[(2-甲氧基-4-吡啶基)氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体6)(100mg，0.232mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.12mL)中的混合物温和加温30秒。添加4-氟苯甲醛(37μL,0.348mmol)并将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层用EtOAc(2x)洗涤，然后用NaHCO3(水性)碱化。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(10mg，11％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.26(d,J＝5.5Hz,1H),7.94(d,J＝8.9Hz,1H),7.53(dd,J＝8.9,5.5Hz,2H),7.26(t,J＝8.9Hz,2H),6.96(dd,J＝5.5,1.7Hz,1H),6.91(d,J＝1.4Hz,1H),6.88(d,J＝9.0Hz,1H),3.89(s,3H),3.42-3.37(m,4H),2.79-2.73(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.83min，MS(ESIpos)：m/z 405.4[M+H]+，纯度＝100％。
1-{3-[2-(二氟甲基)吡啶-4-基]-2-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基} 哌嗪/化合物2-5(表1的#16)
Figure BDA0003743572290000532
将叔丁基4-[6-[[2-(二氟甲基)-4-吡啶基]氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体7)(65mg，0.144mmol)和Na2S2O4(76mg，0.433mmol)在DMSO(0.6mL)和EtOH(0.12mL)中的混合物温和加热30秒。添加4-氟苯甲醛(23μL，0.216mmol)并将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层用EtOAc(2x)洗涤，然后用NaHCO3(水性)碱化。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(27mg，44％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.78(d,J＝5.3Hz,1H),7.97(d,J＝8.9Hz,1H),7.82(d,J＝1.8Hz,1H),7.56-7.50(m,3H),7.28(t,J＝8.9Hz,2H),7.01(t,J＝55Hz,1H)6.92(s,1H),3.44-3.39(m,4H),2.80-2.73(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.83min，MS(ESIpos)：m/z 425.3[M+H]+，纯度＝99％。
4-[2-(4-氟苯基)-5-{八氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基}-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶- 3-基]吡啶/化合物2-6(表1中的#23)
Figure BDA0003743572290000533
将叔丁基2-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸酯(中间体8)(100mg，0.234mmol)和Na2S2O4(124mg，0.703mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中的混合物温和加热30秒。添加4-氟苯甲醛(38μL，0.352mmol)并将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层萃取到EtOAc(3x)中，然后萃取到DCM中。将合并的有机萃取物用盐水洗涤、干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-8％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(28mg，29％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75-8.65(m,2H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.57-7.47(m,2H),7.47-7.40(m,2H),7.26(t,J＝8.9Hz,2H),6.58(d,J＝8.8Hz,1H),3.61(dd,J＝10.7,7.9Hz,2H),3.21(dd,J＝10.8,3.5Hz,2H),2.92(dd,J＝10.6,6.6Hz,2H),2.85-2.76(m,2H),2.66-2.59(m,2H)。LCMS(分析方法B)Rt＝1.38min，MS(ESIpos)：m/z 401.3[M+H]+，纯度＝97％。
2-(4-氟苯基)-1-(2-甲基吡啶-4-基)-6-{八氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2-基}-1H-1, 3-苯并二唑/化合物2-7(表1中的#24)
Figure BDA0003743572290000541
将叔丁基2-[6-[(2-甲基-4-吡啶基)氨基]-5-硝基-2-吡啶基]-1,3,3a,4,6,6a-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-5-甲酸酯(中间体9)(100mg，0.227mmol)和Na2S2O4(120mg，0.681mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中的混合物温和加热30秒。添加4-氟苯甲醛(37μL，0.341mmol)并将反应加热至100℃持续22小时。将反应冷却并将溶液用MeCN和水稀释并加热直至完全溶解。将溶液冷却，过滤除去固体物质，将滤液真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A2)纯化残余物，得到标题化合物(20mg，21％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.56(d,J＝5.4Hz,1H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.55-7.46(m,2H),7.38-7.31(m,1H),7.31-7.16(m,3H),6.57(d,J＝8.8Hz,1H),3.68-3.55(m,2H),3.20(dd,J＝10.7,3.5Hz,2H),2.96-2.88(m,2H),2.85-2.76(m,2H),2.65-2.60(m,2H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.37min，MS(ESIpos)：m/z 415.4[M+H]+，纯度＝100％。
1-[2-(2-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/化合物2- 8(表1中的#20)
Figure BDA0003743572290000542
将叔丁基4-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体4)(100mg，0.250mmol)和Na2S2O4(132mg,0.749mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中的混合物温和加热30秒。添加2-氟苯甲醛(40μL，0.375mmol)并将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-8％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(30mg，26％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74-8.60(m,2H),7.99(d,J＝9.0Hz,1H),7.73(td,J＝7.5,1.8Hz,1H),7.61-7.49(m,1H),7.42-7.32(m,3H),7.30-7.14(m,1H),6.94(d,J＝9.0Hz,1H),3.49-3.39(m,4H),2.87-2.72(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.20min，MS(ESIpos)：m/z 375.2[M+H]+，纯度＝96％。
4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]哒嗪/化合物2- 9(表1中的#22)
Figure BDA0003743572290000543
将Na2S2O4(335mg，2.99mmol)添加到叔丁基4-[5-硝基-6-(哒嗪-4-基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体10)(300mg，0.635mmol)和4-氟苯甲醛(85μL，0.792mmol)在DMSO(6mL)和EtOH(1mL)中的溶液中，并将反应加热至100℃持续16小时。将反应冷却并用至饱和NaHCO3淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用MeOH中的0-10％7N NH3/DCM洗脱)纯化，然后通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(17mg，7％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.38(dd,J＝5.6Hz,1.0 1H),9.34(dd,J＝2.6,1.0Hz,1H),7.98(d,J＝8.9Hz,1H),7.74(dd,J＝5.6,2.7Hz,1H),7.57-7.51(m,2H),7.33-7.25(m,2H),6.92(d,J＝9.0Hz,1H),3.45-3.40(m,4H),2.82-2.75(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.40min，MS(ESIpos)：m/z 376.3[M+H]+，纯度＝100％。
2-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-2,5-二氮杂双 环[2.2.2]辛烷/化合物2-10(表1中的#21)
Figure BDA0003743572290000551
将叔丁基5-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(中间体12)(100mg，0.234mmol)和Na2S2O4(124mg，0.703mmol)在DMSO(0.94mL)和EtOH(0.19mL)中的混合物温和加温30秒。添加4-氟苯甲醛(38μL，0.352mmol)并将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用5-30％MeOH/DCM的洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(41mg，43％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66-8.58(m,2H),7.85(d,J＝8.9Hz,1H),7.45-7.39(m,2H),7.38-7.30(m,2H),7.21-7.14(m,2H),6.52(d,J＝8.9Hz,1H),4.36(s,1H),3.48(d,J＝10.4Hz,1H),3.38(dd,J＝10.3,1.8Hz,1H),3.00(d,J＝10.9Hz,2H),2.93(dd,J＝10.6,1.8Hz,1H),1.77(d,J＝13.1Hz,4H),1.60(d,J＝10.5Hz,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.48min，MS(ESIpos)：m/z 401.3[M+H]+，纯度＝100％。
3-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-3,6-二氮杂双 环[3.1.1]庚烷/化合物2-11(表1中的#30)
Figure BDA0003743572290000552
将叔丁基3-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-6-甲酸酯(中间体11)(200mg，0.446mmol)和Na2S2O4(236mg，1.34mmol)在DMSO(2mL)和EtOH(0.4mL)中的混合物温和加温30秒。添加4-氟苯甲醛(72μL，0.669mmol)并将反应加热至100℃持续18小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用0-100％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈棕褐色固体的标题化合物(42mg，23％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.73-8.67(m,2H),7.99(d,J＝8.9Hz,1H),7.56-7.49(m,2H),7.47-7.41(m,2H),7.31-7.22(m,2H),6.70(d,J＝8.9Hz,1H),3.82-3.44(m,7H),1.68(s,1H),1.45(d,J＝8.4Hz,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.30min，MS(ESIpos)：m/z 387.2[M+H]+，纯度＝94％。
N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-基} 苯甲酰胺/化合物2-12(表1中的#5)
Figure BDA0003743572290000553
将4-氟苯甲醛(40mg，0.323mmol)添加到叔丁基4-[6-[(2-苯甲酰胺基-4-吡啶基)氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体13)(112mg，0.216mmol)在EtOH(0.15mL)和DMSO(1mL)中的溶液中。将反应搅拌5分钟，然后添加Na2S2O4(114mg，0.647mmol)并将反应加热至100℃持续18小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层用NaHCO3中和并萃取到(1:1)EtOAc/THF(3x)中。将合并的有机物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A2)纯化残余物，得到标题化合物(14mg，13％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.03(s,1H),8.52-8.43(m,2H),8.02-7.99(m,2H),7.97(d,J＝8.9Hz,1H),7.59(m,3H),7.52(t,J＝7.6Hz,2H),7.28(t,J＝8.9Hz,2H),7.07(dd,J＝5.5,1.7Hz,1H),6.90(d,J＝9.0Hz,1H),3.48-3.42(m,4H),2.80-2.73(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.99min，MS(ESIpos)：m/z494.3[M+H]+，纯度＝99％。
N-(4-{5-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-2-(4-氟苯基)-3H-咪唑并 [4,5-b]吡啶-3-基}吡啶-2-基)苯甲酰胺/化合物2-13(表1中的#8)
Figure BDA0003743572290000561
将Na2S2O4(159mg，0.903mmol)添加到叔丁基(1S,4S)-5-[6-[(2-苯甲酰胺基-4-吡啶基)氨基]-5-硝基-2-吡啶基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(中间体19)(160mg，0.301mmol)在EtOH(0.25mL)和DMSO(1.2mL)中的悬浮液中。将反应温和加温，然后添加4-氟苯甲醛(48μL，0.452mmol)，并将反应加热至100℃持续18小时。将反应冷却并在至NaHCO3(水性)中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机层经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化。通过制备型HPLC(方法B1)进一步纯化残余物，得到标题化合物(23mg，15％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),8.48(d,J＝1.6Hz,1H),8.46(d,J＝5.3Hz,1H),8.04-7.98(m,2H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.64-7.48(m,5H),7.32-7.23(m,2H),7.07(dd,J＝5.3,1.9Hz,1H),6.56(d,J＝8.8Hz,1H),4.69(s,1H),3.62(s,1H),3.46(dd,J＝9.3,1.9Hz,1H),3.21(d,J＝9.2Hz,1H),2.90-2.85(m,1H),2.82(d,J＝9.6Hz,1H),1.74(d,J＝8.7Hz,1H),1.63(d,J＝8.9Hz,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝2.08min，MS(ESIpos)：m/z 506.3[M+H]+，纯度＝97％。
N-(4-{5-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-2-(4-氟苯基)-3H-咪唑并 [4,5-b]吡啶-3-基}吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺/化合物2-14(表1中的#11)
Figure BDA0003743572290000562
将Na2S2O4(174mg，0.989mmol)添加到叔丁基(1S,4S)-5-[6-[[2-(环丙烷羰基氨基)-4-吡啶基]氨基]-5-硝基-2-吡啶基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(中间体21)(165mg，0.330mmol)在EtOH(0.26mL)和DMSO(1.32mL)中的悬浮液中。将反应温和加温，然后添加4-氟苯甲醛(53μL，0.494mmol)，并将反应加热至100℃持续18小时。将反应冷却并在至NaHCO3(水性)中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机层经MgSO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A2)纯化残余物，得到标题化合物(85mg，55％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),8.37(d,J＝5.4Hz,1H),8.34(d,J＝1.5Hz,1H),7.89(d,J＝8.8Hz,1H),7.56-7.49(m,2H),7.29-7.21(m,2H),6.96(dd,J＝5.4,1.9Hz,1H),6.53(d,J＝8.8Hz,1H),4.64(s,1H),3.62(s,1H),3.43(dd,J＝9.3,1.8Hz,1H),3.18(d,J＝9.3Hz,1H),2.85(dd,J＝9.5,1.3Hz,1H),2.78(d,J＝9.6Hz,1H),2.06-1.97(m,1H),1.73(d,J＝8.9Hz,1H),1.62(d,J＝9.0Hz,1H),0.85-0.73(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.77min，MS(ESIpos)：m/z 470.4[M+H]+，纯度＝100％。
N-(4-{5-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-2-(4-氟苯基)-3H-咪唑并 [4,5-b]吡啶-3-基}吡啶-2-基)-4-氟苯甲酰胺/化合物2-15(表1中的#10)
Figure BDA0003743572290000563
将Na2S2O4(148mg，0.839mmol)添加到叔丁基(1S,4S)-5-[6-[[2-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-4-吡啶基]氨基]-5-硝基-2-吡啶基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(中间体20)(160mg，0.280mmol)在EtOH(0.2mL)和DMSO(1.1mL)中的悬浮液中。将反应温和加温，然后添加4-氟苯甲醛(45μL，0.419mmol)，并将反应加热至100℃持续18小时。将反应冷却并在至NaHCO3(水性)中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机层经MgSO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A2)纯化残余物，得到标题化合物(76mg，52％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.08(s,1H),8.49-8.43(m,2H),8.13-8.06(m,2H),7.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.60-7.52(m,2H),7.39-7.32(m,2H),7.31-7.23(m,2H),7.07(dd,J＝5.5,1.8Hz,1H),6.55(d,J＝8.8Hz,1H),4.69(s,1H),3.62(s,1H),3.46(dd,J＝9.3,1.8Hz,1H),3.21(d,J＝9.2Hz,1H),2.88(dd,J＝9.6,1.4Hz,1H),2.82(d,J＝9.6Hz,1H),1.74(d,J＝8.9Hz,1H),1.63(d,J＝8.9Hz,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝2.12min，MS(ESIpos)：m/z 524.4[M+H]+，纯度＝100％。
4-氟-N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶- 2-基}苯甲酰胺/化合物2-16(表1中的#6)
Figure BDA0003743572290000571
将叔丁基4-[6-[[2-[(4-氟苯甲酰基)氨基]-4-吡啶基]氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体14)(250mg，0.372mmol)和Na2S2O4(200mg，1.14mmol)悬浮在EtOH(1mL)和DMSO(4mL)中，然后添加4-氟苯甲醛(61μL，0.564mmol)。将混合物加热至100℃持续3小时。将反应用NaHCO3(水性)淬灭并用EtOAc萃取，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(方法A2)纯化。通过制备型HPLC(方法B1)进一步纯化残余物，得到标题化合物(22mg，11％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.1(s,1H),8.5-8.4(m,2H),8.1-8.1(m,2H),8.0(d,J＝8.9Hz,1H),7.6-7.5(m,2H),7.4-7.3(m,2H),7.3-7.2(m,2H),7.0(dd,J＝5.3,1.9Hz,1H),6.9(d,J＝9.0Hz,1H),3.6-3.5(m,4H),2.9-2.8(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝2.13min，MS(ESIpos)：m/z 512.3[M+H]+，纯度＝100％。
N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-基} 环氧乙烷-3-甲酰胺/化合物2-17(表1中的#1)
Figure BDA0003743572290000572
将4-氟苯甲醛(42mg，0.341mmol)添加到叔丁基4-[5-硝基-6-[[2-(四氢吡喃-3-羰基氨基)-4-吡啶基]氨基]-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体16)(120mg，0.227mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.15mL)中的溶液中。将反应搅拌5分钟，然后添加Na2S2O4(120mg,0.682mmol)并将反应加热至100℃持续18小时。将混合物用NaHCO3(水性)中和，然后用(1:1)EtOAc/THF萃取。将有机物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化。将残余物加载到用MeOH灌注的SCX-2离子交换柱上。将柱用MeOH洗涤，然后将产物用MeOH中的2M NH3洗脱并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法B1)进一步纯化残余物，得到标题化合物(9mg，8％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.75(s,1H),8.41(d,J＝1.6Hz,1H),8.35(d,J＝5.4Hz,1H),8.26(s,1H),7.96(d,J＝8.9Hz,1H),7.56(dd,J＝8.8,5.4Hz,2H),7.27(t,J＝8.9Hz,2H),6.96-6.82(m,2H),3.95-3.89(m,1H),3.79(d,J＝11.0Hz,1H),3.51-3.45(m,6H),2.89-2.81(m,4H),2.81-2.74(m,1H),1.92(d,J＝9.6Hz,1H),1.72-1.58(m,2H),1.58-1.45(m,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.81min，MS(ESIpos)：m/z502.4[M+H]+，纯度＝97％。
N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-基} 乙酰胺/化合物2-18(表1中的#4)
Figure BDA0003743572290000581
将叔丁基4-[6-[(2-乙酰胺基-4-吡啶基)氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体18)(200mg，0.437mmol)和4-氟苯甲醛(47μL，0.437mmol)溶解在DMSO(5mL)中，然后添加Na2S2O4(232mg，1.32mmol)。将混合物加热至100℃持续16小时。将反应冷却至室温并在NaHCO3(水性)中淬灭并萃取至DCM中。将有机物真空浓缩并通过制备型HPLC(方法A2)纯化，得到标题化合物(55mg，28％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.71(s,1H),8.38(d,J＝5.4Hz,1H),8.24(s,1H),7.94(d,J＝8.9Hz,1H),7.56-7.50(m,2H),7.29-7.22(m,2H),7.02(dd,J＝5.4,1.9Hz,1H),6.88(d,J＝9.0Hz,1H),3.43-3.39(m,4H),2.79-2.73(m,4H),2.08(s,3H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.31min，MS(ESIpos)：m/z 432.4[M+H]+，纯度＝96％。
N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-基} 吗啉-4-甲酰胺/化合物2-19(表1中的#9)
Figure BDA0003743572290000582
将4-氟苯甲醛(33mg,0.270mmol)添加到叔丁基4-[6-[[2-(吗啉-4-羰基氨基)-4-吡啶基]氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体23)(57mg,0.108mmol)在EtOH(0.15mL)和DMSO(1mL)中的溶液中。将反应搅拌5分钟，然后添加Na2S2O4(95mg,0.539mmol)并将反应加热至100℃持续18小时。然后添加吗啉(0.20mL，1.65mmol)并将混合物加热至120℃持续18小时。将反应冷却并在DCM和NaHCO3(水性)之间分配。将水层萃取到DCM中，并且将合并的有机物通过疏水玻璃料并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法B1)纯化残余物，得到标题化合物(5mg，9％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.50(s,1H),8.31(d,J＝5.4Hz,1H),8.03(d,J＝1.7Hz,1H),7.96(d,J＝8.9Hz,1H),7.58-7.52(m,2H),7.27(t,J＝8.9Hz,2H),6.90(d,J＝9.0Hz,1H),6.87(dd,J＝5.4,1.9Hz,1H),3.75-3.49(m,12H),2.89-2.82(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.54min，MS(ESIpos)：m/z 503.3[M+H]+，纯度＝91％。
1-[2-(4-氟苯基)-3-[2-(甲氧基甲基)吡啶-4-基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5- 基]哌嗪/化合物2-20(表1中的#12)
Figure BDA0003743572290000583
将叔丁基4-[6-[[2-(甲氧基甲基)-4-吡啶基]氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体25)(140mg，0.271mmol)和Na2S2O4(143mg，0.813mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中的混合物温和加温30秒。添加4-氟苯甲醛(44μL，0.406mmol)并将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用5-30％MeOH/DCM洗脱)纯化，然后通过制备型HPLC(高pH，定制方法)纯化，得到标题化合物(6mg，5％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.48(d,J＝5.4Hz,1H),7.81(d,J＝9.0Hz,1H),7.51-7.48(m,1H),7.48-7.42(m,2H),7.24(dd,J＝5.4,2.1Hz,1H),7.11-7.04(m,2H),6.82(d,J＝9.0Hz,1H),4.47(s,2H),3.50-3.42(m,4H),3.27(s,3H),2.85-2.77(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.58min，MS(ESIpos)：m/z 419.3[M+H]+，纯度＝99％。
4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]嘧啶/化合物2- 21(表1中的#27)
Figure BDA0003743572290000591
将4-氟苯甲醛(40mg，0.324mmol)添加到叔丁基4-[5-硝基-6-(嘧啶-4-基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体26)(91mg，0.216mmol)在EtOH(0.15mL)和DMSO(1mL)中的溶液中。将反应搅拌5分钟，然后添加Na2S2O4(114mg，0.648mmol)并将反应加热至100℃持续18小时。将反应在水中淬灭，然后将水相用NaHCO3(水性)中和。将水层用(1:1)EtOAc/THF(3x)萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A2)纯化残余物，得到标题化合物(3mg，4％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.13(d,J＝5.4Hz,1H),9.03(d,J＝0.9Hz,1H),8.15(dd,J＝5.4,1.2Hz,1H),7.98(d,J＝8.9Hz,1H),7.55-7.47(m,2H),7.26-7.19(m,2H),6.93(d,J＝9.0Hz,1H),3.46-3.43(m,4H),2.82-2.75(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.43min，MS(ESIpos)：m/z 376.2[M+H]+，纯度＝97％。
N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-基} 环丙烷甲酰胺/化合物3-1(表1中的#3)
Figure BDA0003743572290000592
将叔丁基4-[6-[[2-(环丙烷羰基氨基)-4-吡啶基]氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体17)(195mg，0.363mmol)和Na2S2O4(195mg，1.11mmol)悬浮在EtOH(1mL)和DMSO(3mL)中，然后添加4-氟苯甲醛(50μL，0.466mmol)。将混合物加热12小时至100℃然后冷却至室温。添加4M HCl(在1,4-二噁烷中)(1mL)并将反应搅拌2小时。将混合物用2MNaOH淬灭并萃取到DCM中。将有机物合并并真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化。通过制备型HPLC(方法A1)进一步纯化残余物，得到标题化合物(80mg，46％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.02(s,1H),8.38-8.34(m,2H),7.93(d,J＝8.9Hz,1H),7.57-7.50(m,2H),7.29-7.21(m,2H),6.94(dd,J＝5.4,1.9Hz,1H),6.87(d,J＝9.0Hz,1H),3.44-3.37(m,4H),2.78-2.71(m,4H),2.04-1.98(m,1H),0.84-0.72(m,4H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.67min，MS(ESIpos)：m/z 458.3[M+H]+，纯度＝95％。
4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-胺/化 合物3-2(表1中的#15)
Figure BDA0003743572290000593
将叔丁基4-[6-[(2-乙酰胺基-4-吡啶基)氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体18)(300mg，0.479mmol)和Na2S2O4(257mg，1.46mmol)悬浮在EtOH(1mL)和DMSO(5mL)中，然后添加4-氟苯甲醛(78μL，0.726mmol)。将混合物加热至100℃持续16小时。将反应冷却至室温并添加4M HCl(在1,4二噁烷中)(2mL)并将反应搅拌2小时。将反应真空浓缩。将残余物在2M NaOH和DCM之间分配。将有机物真空浓缩，并且将残余物通过制备型HPLC(方法A2)纯化，得到标题化合物(50mg，24％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.00-7.98(m,1H),7.91(d,J＝8.9Hz,1H),7.60-7.53(m,2H),7.30-7.23(m,2H),6.85(d,J＝9.0Hz,1H),6.46-6.43(m,1H),6.43-6.40(m,1H),6.22(s,2H),3.41-3.38(m,4H),2.80-2.74(m,4H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.27min，MS(ESIpos)：m/z 390.3[M+H]+，纯度＝90％。
({4-[2-(4-氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶-2-基} 甲基)(甲基)胺/化合物3-3(表1中的#25)
Figure BDA0003743572290000601
将叔丁基4-[6-[[2-[[叔丁氧基羰基(甲基)氨基]甲基]-4-吡啶基]氨基]-5-硝基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体22)(150mg,0.276mmol)和Na2S2O4(146mg,0.828mmol)在DMSO(1.1mL)和EtOH(0.2mL)中的混合物温和加温30秒。添加4-氟苯甲醛(45μL，0.414mmol)并将反应加热至100℃持续18小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物溶解在DCM(3mL)中，用4M HCl(1.4mL，5.50mmol)处理，并将所得混合物在室温搅拌过夜。将溶剂减压蒸发，并且将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到呈棕褐色固体的标题化合物(21mg，产率18％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(d,J＝5.3Hz,1H),7.95(d,J＝8.9Hz,1H),7.55-7.46(m,3H),7.30-7.21(m,3H),6.89(d,J＝9.0Hz,1H),3.78(s,2H),3.45-3.37(m,4H),2.81-2.72(m,4H),2.18(s,3H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.32min，MS(ESIpos)：m/z418.3[M+H]+，纯度＝97％。
4-氟-N-{4-[2-(4-氟苯基)-5-(4-甲基哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3- 基]吡啶-2-基}苯甲酰胺/化合物4-1(表1中的#7)
Figure BDA0003743572290000602
将4-氟-N-[4-[2-(4-氟苯基)-5-哌嗪-1-基-咪唑[4,5-b]吡啶-3-基]-2-吡啶基]苯甲酰胺(30mg，0.0584mmol)和13M甲醛(5.4μL，0.0701mmol)溶解在DCM(0.6231mL)中并搅拌10分钟，然后添加NaBH(OAc)3(22mg，0.105mmol)。将反应搅拌1小时。将反应用NaHCO3(水性)淬灭并用DCM萃取。将有机物通过疏水玻璃料并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用0-7％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(6mg，19％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.81(s,1H),8.66(d,J＝1.6Hz,1H),8.31(d,J＝5.4Hz,1H),7.97-7.91(m,3H),7.60-7.53(m,2H),7.22-7.16(m,2H),7.11-7.04(m,2H),6.99(dd,J＝5.5,1.9Hz,1H),6.74(d,J＝8.9Hz,1H),3.69-3.61(m,4H),2.60-2.54(m,4H),2.36(s,3H)。LCMS(分析方法B)Rt＝3.47min，MS(ESIpos)：m/z 526.3[M+H]+，纯度＝98％。
1-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-4-甲基哌嗪/ 化合物4-2(表1中的#14)
Figure BDA0003743572290000603
将甲醛(37％，64mg，0.785mmol)添加到2-(4-氟苯基)-5-哌嗪-1-基-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(表1的化合物17(30mg，0.0785mmol)在DCM(1mL)、MeOH(0.2mL)和乙酸(0.05mL)中的溶液中并将混合物搅拌3小时。然后添加NaBH(OAc)3(166mg，0.785mmol)，并将反应搅拌20小时。将反应在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc(3x)中，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到呈白色固体的标题化合物(12mg，37％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.72-8.69(m,2H),7.92(d,J＝8.9Hz,1H),7.50(dd,J＝8.9,5.3Hz,2H),7.36-7.33(m,2H),7.06(t,J＝8.7Hz,2H),6.74(d,J＝8.9Hz,1H),3.62-3.54(m,4H),2.56-2.50(m,4H),2.35(s,3H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.78min，MS(ESIpos)：m/z 389.3[M+H]+，纯度＝96％。
实例1.4-其他中间体的合成
4-溴-2-(溴甲基)吡啶/中间体22-1的合成在0℃向(4-溴吡啶-2-基)甲醇(1.00g，5.32mmol)和四溴化碳(2.82g，8.51mmol)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中分批添加三苯基膦(1.67g，6.38mmol)，并且将混合物在0℃搅拌1小时，然后在室温搅拌过夜。将溶剂减压蒸发并将残余物通过快速色谱法(100g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈暗紫色液体的标题化合物(829mg，50％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.40(d,J＝5.3Hz,1H),7.63(d,J＝1.7Hz,1H),7.40(dd,J＝5.3,1.8Hz,1H),4.50(s,2H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.81min，MS(ESIpos)：m/z 249.9[M+H]+，纯度＝58％。
叔丁基N-[(4-溴吡啶-2-基)甲基]-N-甲基氨基甲酸酯/中间体22-2的合成将NaH(69mg，2.88mmol)分批添加到甲基氨基甲酸叔丁酯(377mg，2.88mmol)在THF(13mL)中的冰冷溶液中，并将混合物在室温搅拌1小时。然后，将混合物冷却至0℃并滴加4-溴-2-(溴甲基)吡啶(中间体22-1)(820mg，2.61mmol)在THF(13mL)中的溶液，并将反应在室温搅拌过夜。将混合物小心地用水淬灭，用EtOAc(2x)萃取，经MgSO4干燥，过滤并减压蒸发。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-40％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈黄色油状物的标题化合物(439mg，52％产率)。1H NMR(500MHz,Chloroform-d)δ8.35(d,J＝5.3Hz,1H),7.43-7.32(m,2H),4.59-4.45(m,2H),3.03-2.84(m,3H),1.55-1.36(m,9H)。LCMS(分析方法F)Rt＝0.94min，MS(ESIpos)：m/z 301[M+H]+，纯度＝94％。
叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯/中间体27-1 的合成将叔丁基1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯(98％纯度，618mg，3.02mmol)、6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(500mg，2.88mmol)和DIPEA(1.5mL，8.64mmol)在MeCN(5mL)中的悬浮液加热至100℃持续2小时。将反应冷却并真空浓缩。将残余物吸收在DCM(5mL)中并用水(2x5mL)洗涤。将合并的有机物通过分相器并真空浓缩，得到呈黄色固体的标题化合物(1.05g，99％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.11(d,J＝9.4Hz,1H),5.95(d,J＝9.4Hz,1H),3.90-3.49(m,4H),3.52-3.45(m,2H),3.30(t,J＝5.8Hz,1H),3.22(t,J＝6.1Hz,1H),1.91-1.82(m,2H),1.40-1.29(m,9H)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.86min，MS(ESIpos)：m/z 338.2[M+H]+，纯度＝100％。
表1.4.1中列出的中间体28-1至70-1中的每种是使用“合成”栏中列出的中间体根据中间体27-1的方法制备的。根据需要，通过快速色谱法、SCX或制备型HPLC方法A1、A2、B1、B2纯化中间体。
表1.4.1
Figure BDA0003743572290000611
Figure BDA0003743572290000621
Figure BDA0003743572290000631
Figure BDA0003743572290000641
Figure BDA0003743572290000651
Figure BDA0003743572290000661
Figure BDA0003743572290000671
叔丁基4-{5-硝基-6-[(吡啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸 酯/中间体27的合成向碳酸铯(2.03g，6.22mmol)、(5-二苯基磷烷基-9,9-二甲基-氧杂蒽-4-基)-二苯基-磷烷(90mg，0.156mmol)、4-碘吡啶(638mg，3.11mmol)、叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸酯(中间体27-1)(1.05g，3.11mmol)在1,4-二噁烷(5.4mL)添加的脱气溶液中添加(1{E},4{E})-1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮；钯(71mg，0.0778mmol)并且用氮气喷射的溶液。将混合物加热至100℃持续19小时。将反应冷却，将上清液倾析并真空浓缩。将产物通过快速色谱法(50g，二氧化硅)(用0-20％MeOH/DCM的洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(1.03g，76％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ10.77-10.61(m,1H),8.47(d,J＝5.4Hz,2H),8.24(d,J＝9.2Hz,1H),7.73(d,J＝5.9Hz,2H),6.57-6.43(m,1H),4.04-3.65(m,4H),3.65-3.46(m,3H),3.32-3.23(m,1H),1.91-1.65(m,2H),1.32-1.08(m,9H)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.67min，MS(ESIpos)：m/z415.3[M+H]+，纯度＝98％。
表1.4.2中列出的中间体28-2至82-1中的每种是使用“合成”栏中列出的中间体根据中间体27的方法制备的。根据需要，通过快速色谱法、SCX或制备型HPLC方法A1、A2、B1、B2纯化中间体。
表1.4.2
Figure BDA0003743572290000681
Figure BDA0003743572290000691
Figure BDA0003743572290000701
Figure BDA0003743572290000711
Figure BDA0003743572290000721
Figure BDA0003743572290000731
Figure BDA0003743572290000741
Figure BDA0003743572290000751
Figure BDA0003743572290000761
Figure BDA0003743572290000771
叔丁基7-{5-氨基-6-[(吡啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷- 4-甲酸酯/中间体83的合成向叔丁基7-{5-硝基-6-[(吡啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-甲酸酯(中间体30)(1.1g，2.55mmol)在EtOH(20mL)中的溶液中添加Pd/C(10％，135mg，0.127mmol)。将混合物在氢气气氛下搅拌20小时。将溶液通过硅藻土垫过滤并真空浓缩，得到呈金黄色固体的标题化合物(993mg，90％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.34-8.24(m,2H),7.32-7.25(m,2H),7.04(s,1H),7.01(d,J＝8.4Hz,1H),6.04(d,J＝8.4Hz,1H),3.66-3.59(m,2H),3.45-3.30(m,2H),1.65(s,2H),1.41(s,9H),1.01-0.91(m,2H),0.82-0.72(m,2H)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.68min，MS(ESIpos)：m/z 397.3[M+H]+，纯度＝91％。
表1.4.3中列出的中间体28至86中的每种是使用“合成”栏中列出的中间体根据中间体94的方法制备的。根据需要，通过快速色谱法、SCX或制备型HPLC方法A1、A2、B1、B2纯化中间体。
表1.4.3
Figure BDA0003743572290000772
Figure BDA0003743572290000781
叔丁基(3S)-3-甲基-4-{5-硝基-6-[(嘧啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸 酯/中间体87的合成将N-(6-氯-3-硝基-2-吡啶基)嘧啶-4-胺(中间体26-1)(250mg，0.994mmol)、叔丁基(3S)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(200mg，0.999mmol)和二异丙基乙胺(0.50mL，2.86mmol)在乙腈(5mL)中的混合物加热至80℃持续1.5小时。将反应冷却并在水中淬灭。将水层萃取至乙酸乙酯(5mL)中三次，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将产物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用20％-100％乙酸乙酯/庚烷洗脱)纯化，得到橙色的标题化合物(151mg，0.353mmol，35％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ11.13(s,1H),8.91(d,J＝1.0Hz,1H),8.60(d,J＝5.8Hz,1H),8.38(d,J＝9.5Hz,1H),8.15(dd,J＝5.8,1.2Hz,1H),6.29(d,J＝9.6Hz,1H),4.65-4.49(m,1H),4.27-4.06(m,2H),4.06-3.94(m,1H),3.49-3.39(m,1H),3.31-3.23(m,1H),3.23-3.01(m,1H),1.51(s,9H),1.33(d,J＝6.7Hz,3H).LCMS(分析方法I)Rt＝0.93min,MS(ESIpos):m/z 416.3[M+H]+，纯度＝97％。
叔丁基(3R)-3-甲基-4-{5-硝基-6-[(嘧啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸 酯/中间体88的合成将叔丁基(3R)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(0.32g，1.59mmol)、N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(0.83mL，4.77mmol)和N-(6-氯-3-硝基-2-吡啶基)嘧啶-4-胺(中间体26-1)(0.40g，1.59mmol)在乙腈(6.3mL)中的溶液加热至80℃持续两小时。将反应混合物真空浓缩。将产物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用在DCM中的0-10％MeOH的洗脱)纯化，得到呈棕色固体的标题化合物(496mg，1.09mmol，68％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.04(s,1H),8.88(d,J＝0.9Hz,1H),8.75(d,J＝5.8Hz,1H),8.34(d,J＝9.6Hz,1H),8.21(dd,J＝5.8,1.2Hz,1H),6.67(d,J＝9.7Hz,1H),4.76-4.57(m,1H),4.26-4.14(m,1H),4.06-3.80(m,3H),1.45(s,9H),1.23(d,J＝6.7Hz,3H)。一个信号被掩盖。LCMS(分析方法I)Rt＝0.94min，MS(ESIpos)：m/z 416.3[M+H]+，纯度＝91％。
叔丁基(1R,4R)-5-{5-硝基-6-[(嘧啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}-2,5-二氮杂双环 [2.2.1]庚烷-2-甲酸酯/中间体89的合成将叔丁基(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(200mg，1.01mmol)和N-(6-氯-3-硝基-2-吡啶基)嘧啶-4-胺(中间体26-1)(333mg，1.06mmol)溶解在IPA(1.3mL)和DIPEA(0.53mL，3.03mmol)中，然后在100℃搅拌1.5小时。将混合物用饱和水性NaHCO3(3ml)稀释并通过真空过滤收集所得沉淀，得到呈棕色固体的标题化合物(868mg，100％产率)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.85min，MS(ESIpos)：m/z414.3[M+H]+，纯度＝78％。
叔丁基(1R,4R)-5-{5-硝基-6-[(嘧啶-4-基)氨基]吡啶-2-基}-2,5-二氮杂双环 [2.2.2]辛烷-2-甲酸酯/中间体90的合成将叔丁基(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(200mg，0.942mmol)和N-(6-氯-3-硝基-2-吡啶基)嘧啶-4-胺(中间体26-1)(326mg,1.04mmol)溶解在IPA(1.3mL)和DIPEA(0.49mL，2.83mmol)中，然后在100℃搅拌1.5小时。将混合物用饱和水性NaHCO3(3ml)稀释并通过真空过滤收集所得沉淀，得到呈棕色固体的标题化合物(739mg，100％产率)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.91min，MS(ESIpos)：m/z428.3[M+H]+，纯度＝63％。
叔丁基(1R,4R)-5-[4-硝基-3-(嘧啶-4-基氨基)苯基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1] 庚烷-2-甲酸酯/中间体91的合成将N-(5-氟-2-硝基-苯基)嘧啶-4-胺(中间体3-1)(175mg，0.747mmol)、叔丁基(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-甲酸酯(148mg，0.747mmol)和DIPEA(0.39mL，2.24mmol)在THF(2.99mL)中的混合物搅拌并在密封管中在70℃加热过夜。将饱和水性NaHCO3(10ml)添加到反应混合物中，并将水相用EtOAc(3x25ml)萃取。将合并的有机层用水(25ml)和盐水(25ml)洗涤，经MgSO4干燥，并且真空除去溶剂。将粗产物通过快速色谱法(用在DCM中的0-10％MeOH洗脱)纯化，得到标题化合物(120mg，37％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO)δ10.38-10.17(m,1H),8.72-8.67(m,1H),8.42(d,J＝5.9Hz,1H),8.05(d,J＝9.5Hz,1H),7.65-7.39(m,1H),7.12(dd,J＝5.9,1.2Hz,1H),6.67-6.45(m,1H),4.83-4.69(m,1H),4.59-4.44(m,1H),3.68-3.59(m,1H),3.47-3.35(m,1H),3.27-3.17(m,2H),2.07-1.93(m,2H),1.44-1.33(m,9H)。
叔丁基(3R)-3-甲基-4-{4-硝基-3-[(嘧啶-4-基)氨基]苯基}哌嗪-1-甲酸酯/中 间体92的合成将N-(5-氟-2-硝基-苯基)嘧啶-4-胺(中间体3-1)(163mg，0.694mmol)、叔丁基(3R)-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯(139mg，0.694mmol)和DIPEA(0.29mL，1.67mmol)在DMSO(2.78mL)中的混合物搅拌并在密封管中在100℃加热过夜。添加饱和水性NaHCO3(10ml)，并且将水相用EtOAc(3x25ml)萃取。将合并的有机层用水(25ml)和盐水(25ml)洗涤，经MgSO4干燥，并且真空除去溶剂。将残余物通过快速色谱法(用DCM/MeOH 0-10％洗脱)纯化，得到标题化合物(113mg，28％产率)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.85min，MS(ESIpos)：m/z 415.4[M+H]+，纯度＝42％。
叔丁基(1R,4R)-5-{4-硝基-3-[(嘧啶-4-基)氨基]苯基}-2,5-二氮杂双环 [2.2.2]辛烷-2-甲酸酯/中间体93的合成将N-(5-氟-2-硝基-苯基)嘧啶-4-胺(中间体3-1)(204mg，0.871mmol)和叔丁基(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷-2-甲酸酯(185mg，0.871mmol)溶解在密封小瓶中的DMSO(3.48mL)中，然后添加DIPEA(0.37mL，2.09mmol)。将混合物加热至100℃持续3小时。将混合物冷却并添加NaHCO3(25ml)并将水层用EtOAc(3x25ml)萃取。将合并的有机层用盐水(25ml)洗涤，然后真空浓缩。将粗产物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到标题化合物(245mg，66％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ10.31(d,J＝7.0Hz,1H),8.71(s,1H),8.41(d,J＝5.9Hz,1H),8.05(d,J＝9.6Hz,1H),7.76-7.54(m,1H),7.29-7.06(m,1H),6.63(s,1H),4.41(d,J＝12.4Hz,1H),4.27(m,1H),3.76-3.56(m,1H),3.57-3.41(m,3H),1.97-1.72(m,4H),1.41(s,9H).LCMS(分析方法I)Rt＝0.83min,MS(ESIpos):m/z 427.4[M+H]+，纯度＝87％。
叔丁基4-{6-[(6-甲基嘧啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸酯/中间 体94的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(400mg，1.24mmol)、Cs2CO3(806mg，2.47mmol)、Xantphos(36mg，0.0619mmol)、4-氯-6-甲基嘧啶(167mg，1.30mmol)和Pd2(dba)3(28mg，0.0309mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的溶液在120℃加热17小时。将反应用Pd2(dba)3(28mg，0.0309mmol)和Xantphos(36mg，0.0619mmol)再处理并在120℃再搅拌21小时。将反应混合物冷却至室温，倒入水中并用EtOAc(3x)萃取。将合并有机相合并，经Na2SO4干燥，通过分相器并真空浓缩。将化合物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(241mg，37％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.82(s,1H),8.73(s,1H),8.31(d,J＝9.5Hz,1H),8.09(s,1H),6.64(d,J＝9.6Hz,2H),3.89-3.79(m,4H),3.60-3.51(m,4H),2.49(s,3H),1.46(s,9H).LCMS(分析方法I)Rt＝0.88min,MS(ESIpos):m/z 416[M+H]+，纯度＝79％。
叔丁基4-{6-[(2-甲基嘧啶-4-基)氨基]-5-硝基吡啶-2-基}哌嗪-1-甲酸酯/中间 体95的合成将叔丁基4-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)哌嗪-1-甲酸酯(中间体4-1)(400mg，1.24mmol)、Cs2CO3(806mg，2.47mmol)、Xantphos(36mg，0.0619mmol)、4-氯-2-甲基-嘧啶(167mg，1.30mmol)和Pd2(dba)3(28mg，0.0309mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的溶液在120℃加热17小时。将反应用Pd2(dba)3(28mg，0.0309mmol)和Xantphos(36mg，0.0619mmol)再处理并在120℃再搅拌21小时。将反应混合物冷却至室温，倒入水中并用EtOAc(3x)萃取。将合并有机相合并，经Na2SO4干燥，通过分相器并真空浓缩。将化合物通过快速色谱法(50g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化。将产物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-100％EtOAc/庚烷洗脱)再次纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(253mg，49％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.85(s,1H),8.61(d,J＝5.7Hz,1H),8.32(d,J＝9.6Hz,1H),8.00(d,J＝5.8Hz,1H),6.64(d,J＝9.6Hz,1H),3.89-3.75(m,4H),3.59-3.48(m,4H),2.55(s,3H),1.46(s,9H).LCMS(分析方法I)Rt＝0.85min,MS(ESIpos):m/z416[M+H]+，纯度＝100％。
1-(6-氨基-5-硝基吡啶-2-基)氮杂环丁烷-3-醇/中间体96-1的合成将N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺(1.8mL，10.2mmol)、6-氯-3-硝基-吡啶-2-胺(600mg，3.39mmol)在乙腈(4mL)中的悬浮液加热至100℃持续6小时。将反应冷却，通过过滤收集沉淀，用MeCN(约2x5mL)洗涤并真空干燥，得到呈黄色固体的标题化合物(665mg，3.16mmol，93％产率)。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.04(d,J＝9.3Hz,1H),7.88-7.66(m,1H),5.89-5.79(m,1H),4.64-4.50(m,1H),4.37-4.22(m,2H),3.91-3.77(m,2H).LCMS(分析方法I)Rt＝0.44min,MS(ESIpos):m/z 211.1[M+H]+，纯度＝100％。
6-{3-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]氮杂环丁烷-1-基}-3-硝基吡啶-2-胺/中 间体96-2的合成向1-(6-氨基-5-硝基-2-吡啶基)氮杂环丁烷-3-醇(中间体96-1)(843mg，4.01mmol)和咪唑(682mg，10.0mmol)在DCM(10mL)中的溶液中添加叔丁基氯二甲基硅烷(906mg，6.01mmol)并且将混合物在室温搅拌16小时。将混合物过滤，将收集的固体用DCM和水洗涤，然后真空干燥，得到呈橙色固体的标题化合物(1.48g，97％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.06(d,J＝9.2Hz,1H),5.59(d,J＝9.2Hz,1H),4.69-4.64(m,1H),4.35-4.16(m,2H),3.86(dd,J＝10.9,4.4Hz,2H),0.82(s,9H),-0.00(s,6H).LCMS(分析方法I)Rt＝1.14min,MS(ESIpos):m/z 325.2[M+H]+，纯度＝100％。
6-{3-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]氮杂环丁烷-1-基}-3-硝基-N-(吡啶-4- 基)吡啶-2-胺/中间体96的合成向碳酸铯(2.78g，8.22mmol)、(5-二苯基磷烷基-9,9-二甲基-氧杂蒽-4-基)-二苯基-磷烷(119mg，0.205mmol)、4-碘吡啶(884mg，4.31mmol)和6-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基氮杂环丁烷-1-基]-3-硝基-吡啶-2-胺；盐酸盐(中间体96-2)(1.48g，4.11mmol)在1,4-二噁烷(7.2mL)中的氮气喷射溶液中添加(1{E},4{E})-1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮；钯(94mg，0.103mmol)并且用氮气喷射溶液。将混合物加热至100℃。将混合物冷却并将上清液倾析，用甲醇洗涤固体。将溶液真空浓缩，并且将产物通过快速色谱法(50g，二氧化硅)(用0-20％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(835mg，1.77mmol，43％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ10.88(s,1H),8.40-8.34(m,2H),8.17(d,J＝9.3Hz,1H),7.61-7.55(m,2H),5.73(d,J＝9.3Hz,1H),4.73-4.66(m,1H),4.43-4.17(m,2H),4.06-3.87(m,2H),0.81(s,9H),-0.00(s,6H).LCMS(分析方法I)Rt＝0.88min,MS(ESIpos):m/z 402.3[M+H]+，纯度＝86％。
N2,N2-二苄基-5-硝基吡啶-2,6-二胺/中间体97-1的合成将6-氯-3-硝基吡啶-2-胺(5.00g，28.8mmol)、二苄胺(14mL，72.0mmol)和DIPEA(15mL，86.4mmol)在MeCN(100mL)中的悬浮液在80℃搅拌8小时。将混合物真空浓缩，然后添加Et2O。过滤混合物并将滤液真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(340g，二氧化硅)(用DCM洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(9.02g，91％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.18(d,J＝9.4Hz,1H),7.40-7.27(m,6H),7.24-7.15(m,4H),6.03(d,J＝9.4Hz,1H),4.99-4.60(m,4H).LCMS(分析方法I)Rt＝1.06min,MS(ESIpos):m/z335.2[M+H]+，纯度＝97％。
N2,N2-二苄基-5-硝基-N6-(吡啶-4-基)吡啶-2,6-二胺/中间体97-2的合成将N6,N6-二苄基-3-硝基-吡啶-2,6-二胺(中间体97-1)(250mg，0.748mmol)、4-碘吡啶(169mg，0.822mmol)、Pd2dba3(17mg，0.0187mmol)、碳酸铯(0.49g，1.50mmol)和Xantphos(22mg，0.0374mmol)在1,4-二噁烷(7mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应加热至100℃过夜。将混合物冷却并通过硅藻土垫过滤，用EtOAc(60mL)洗涤并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-5％MeOH/DCM的洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(298mg，0.724mmol，97％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.58(s,1H),8.28(d,J＝9.5Hz,1H),8.21-8.16(m,2H),7.48-7.43(m,2H),7.40-7.32(m,4H),7.31-7.23(m,6H),6.50(d,J＝9.5Hz,1H),5.14-4.74(m,4H)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.82min，MS(ESIpos)：m/z412.3[M+H]+，纯度＝98％。
N,N-二苄基-2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-胺/中间 体97-3的合成将Na2S2O4(5.66g，32.2mmol)添加到N6,N6-二苄基-3-硝基-N2-(4-吡啶基)吡啶-2,6-二胺(中间体97-2)(98％，4.50g，10.7mmol)在EtOH(7.8mL)和DMSO(39.2mL)中的悬浮液中。将反应温和加温，然后添加4-氟苯甲醛(1.4mL，12.8mmol)并将反应在100℃搅拌22小时。将混合物用1M NaOH稀释，用EtOAc(3x)萃取，通过分相器并真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(200g，二氧化硅)(用0-100％DCM/庚烷然后用0-5％MeOH/DCM洗脱)纯化。将级分合并并真空浓缩。将产物与Et2O一起研磨，得到呈棕色固体的标题化合物(3.3g，57％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.57-8.48(m,2H),7.89(d,J＝8.9Hz,1H),7.52-7.43(m,2H),7.38-7.32(m,4H),7.28(m,4H),7.25-7.21(m,4H),7.13-7.02(m,2H),6.67(d,J＝9.0Hz,1H),4.85(s,4H)。LCMS(分析方法J)Rt＝0.99min，MS(ESIpos)：m/z 486.3[M+H]+，纯度＝96％。
2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-胺/中间体97-4的合成向N,N-二苄基-2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶-5-胺(中间体97-3)(90％，3.30g，6.12mmol)在TFA(21mL，0.283mol)中的溶液中添加三氟甲磺酸(2.0mL，22.6mmol)。将混合物在80℃搅拌8小时，然后倒入冰冷的水中并用DCM(2x)萃取。弃去有机层，将水层用1M NaOH碱化并用DCM(3x)萃取，得到呈黄色固体的标题化合物(1.4g，4.59mmol，75％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.71-8.63(m,2H),7.80(d,J＝8.7Hz,1H),7.54-7.43(m,4H),7.19-7.10(m,2H),6.63(d,J＝8.7Hz,1H).LCMS(分析方法I)Rt＝0.55min,MS(ESIpos):m/z 306.2[M+H]+，纯度＝100％。
4-[2-(4-氟苯基)-5-碘-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]吡啶/中间体97的合成在60℃向2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶-5-胺(中间体97-4)(150mg，0.491mmol)在二碘甲烷(5.0mL，62.1mmol)中的溶液中添加亚硝酸叔丁酯(90％，0.15mL，1.14mmol)，然后将混合物在该室温搅拌1小时。将混合物真空浓缩。将残余物吸收在DCM中，用NaHCO3(水性)洗涤，通过分相器并真空浓缩。将粗产物通过快速色谱法(10g，二氧化硅)(用0-5％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到呈黄色固体的标题化合物(96mg，37％产率)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.87-8.78(m,2H),7.93-7.78(m,3H),7.65-7.51(m,3H),7.22-7.13(m,2H).LCMS(分析方法H)Rt＝0.60min,MS(ESIpos):m/z417.1[M+H]+，纯度＝62％。
叔丁基(3R)-4-{3-[2-(二氟甲基)吡啶-4-基]-2-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4,5-b] 吡啶-5-基}-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯/中间体85的合成将叔丁基(3R)-4-[5-氨基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸酯(中间体85-1)(675mg，1.76mmol)和4-氟苯甲醛(207uL，1.93mmol)溶解在乙醇(13mL)中并搅拌15分钟。添加硝酸铈铵(96mg，0.176mmol)和过氧化氢(35％，307uL，3.51mmol)并将反应搅拌过夜。将反应在水中淬灭并将水层萃取至乙酸乙酯(5mL)中三次，将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到呈白色固体的标题化合物(705mg，1.22mmol，69％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.78(d,J＝5.3Hz,1H),8.01(d,J＝8.9Hz,1H),7.85(d,J＝1.7Hz,1H),7.55(m,3H),7.42-7.24(m,2H),7.03(t,J＝54.7Hz,1H),6.91(d,J＝9.0Hz,1H),4.54-4.39(m,1H),4.34(d,J＝4.2Hz,2H),4.03-3.87(m,1H),3.84-3.69(m,2H),3.09-3.01(m,1H),1.06-1.05(m,3H),1.05-1.02(m,9H).LCMS(分析方法I)Rt＝1.10min,MS(ESIpos):m/z 539.4[M+H]+，纯度＝93％。
1-叔丁基2-甲基(2R)-4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b] 吡啶-5-基]哌嗪-1,2-二甲酸酯/中间体69-3的合成将O1-叔丁基O2-甲基-(2R)-4-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1,2-二甲酸酯(中间体69-2)(353mg，0.770mmol)、连二亚硫酸钠(456mg，2.62mmol)和2,4-二氟苯甲醛(101uL，0.924mmol)在DMSO(1.9mL)和乙醇(1.9mL)中的悬浮液在空气中于100℃加热40小时。将反应冷却并直接加载到用甲醇灌注的SCX-2离子交换柱(10g)上。将柱用甲醇洗涤，然后用MeOH中的2M NH3洗涤。将碱性级分真空浓缩。将残余物溶解在DCM(3.2mL)中，然后添加DIPEA(0.26mL，1.47mmol)和boc酸酐(213mg，0.977mmol)。将混合物在室温搅拌2天，然后用水分配。将水相用DCM(2x)萃取，并且将有机物合并并真空浓缩，得到标题化合物(237mg，59％产率)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.95min，MS(ESIpos)：m/z 551.4[M+H]+，纯度＝67％。
(2R)-1-[(叔丁氧基)羰基]-4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并 [4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-2-甲酸/中间体69-4的合成将1-叔丁基2-甲基(2R)-4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-1,2-二甲酸酯(中间体69-3)(237mg，0.430mmol)溶解在THF(2.1mL)和水(2.1mL)的混合物中，然后添加氢氧化锂(52mg，2.15mmol)。将混合物在室温搅拌2小时，然后用2M HCl酸化并用DCM(2x)萃取。将合并的有机层干燥并真空浓缩，得到标题化合物(118mg，34％产率)。LCMS(分析方法I)Rt＝0.82min，MS(ESIpos)：m/z 537.3[M+H]+，纯度＝66％。
叔丁基(2R)-2-氨基甲酰基-4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并 [4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-1-甲酸酯/中间体69的合成将(2R)-1-[(叔丁氧基)羰基]-4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-2-甲酸(中间体69-4)溶解在DMF(3mL)中，然后添加DIPEA(85mg，0.660mmol)、氯化铵(71mg，1.32mmol)和HATU(125mg，0.330mmol)。将混合物在室温搅拌1小时，然后用水稀释并用DCM(2x)萃取。将有机物合并，干燥并真空浓缩。LCMS(分析方法I)Rt＝0.74min，MS(ESIpos)：m/z 536.3[M+H]+，纯度＝46％。
叔丁基4-[6-溴-2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌 嗪-1-甲酸酯/中间体98-1的合成向1-[6-溴-2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪(表1的化合物97)(421mg，0.874mmol)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中添加DIPEA(0.46mL，2.62mmol)，然后添加boc酸酐(381mg，1.75mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后用饱和NaHCO3(10mL)淬灭。将水相用DCM(10mL)萃取，将合并的有机物通过分相器过滤并真空浓缩。将产物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-5％MeOH/DCM的洗脱)纯化，得到呈黄色固体呈淡黄色固体的标题化合物(335mg，69％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.72-8.66(m,2H),8.33(s,1H),7.62-7.55(m,2H),7.54-7.49(m,2H),7.23-7.16(m,2H),3.66-3.53(m,4H),3.28-3.23(m,4H),1.48(s,9H)。LCMS(分析方法I)Rt＝1.09min，MS(ESIpos)：m/z 553.2，555.1[M+H]+，纯度＝100％。
叔丁基4-[6-氟-2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌 嗪-1-甲酸酯/中间体98的合成在0℃向叔丁基4-[6-溴-2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体98-1)(100mg，0.181mmol)在THF(0.2mL)中的搅拌溶液中添加1.3M异丙基氯化镁；LiCl盐(181uL，0.235mmol)并将混合物在0℃搅拌1小时。通过将氮气流到反应上除去溶剂并添加DCM(0.2mL)。将混合物冷却至-40℃并添加N-氟-N-(苯基磺酰基)苯磺酰胺(115mg，0.365mmol)在DCM(0.6mL)和全氟萘烷(0.31mL，1.29mmol)中的溶液。将反应在室温搅拌18小时。添加水并用DCM(3x)萃取混合物。将合并的有机物通过分相器过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A2)纯化残余物，得到呈灰白色固体的标题化合物(42mg，47％产率)。1H NMR(500MHz,甲醇-d4)δ8.71-8.65(m,2H),7.83(d,J＝12.5Hz,1H),7.59-7.54(m,2H),7.52-7.49(m,2H),7.22-7.15(m,2H),3.62-3.51(m,4H),3.44-3.39(m,4H),1.48(s,9H).LCMS(分析方法I)Rt＝1.00min,MS(ESIpos):m/z493.3[M+H]+，纯度＝100％。
实例1.5-其他化合物的合成
1-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/表1 的化合物34的合成
Figure BDA0003743572290000821
叔丁基4-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体4)(1g，2.50mmol)、2,4-二氟苯甲醛(328uL，3.00mmol)和Na2S2O4(1.5g，8.49mmol)在DMSO(6.2mL)中的悬浮液在空气下于100℃在压力瓶中加热过夜。添加DCM(约5mL)，导致固体沉淀。添加水(10mL)并分离有机层。用DCM(2x10 mL)萃取水相。将合并的有机物通过相分离玻璃料并真空除去溶剂，得到粗固体。将固体溶解在MeOH中，用制备型HPLC(方法A1)进行纯化，得到标题化合物(200mg，20％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.71-8.60(m,2H),8.00(d,J＝9.0Hz,1H),7.85-7.72(m,1H),7.47-7.37(m,2H),7.36-7.22(m,2H),6.94(d,J＝9.0Hz,1H),3.49-3.39(m,4H),2.86-2.72(m,4H),2.34(s,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.32min，MS(ESIpos)：m/z 393.3[M+H]+，纯度＝100％。
表1.5.4中列出的每种化合物是根据表1的化合物34的方法，使用“合成”栏中列出的中间体与针对此类化合物的适当醛衍生物来制备的。最终化合物通过制备型HPLC方法A1、A2或B1纯化。如果需要，使用KP-NH柱(梯度0-50％MeOH/DCM)或SCX柱(MeOH中的3N NH3)进行进一步纯化。
表1.5.4
Figure BDA0003743572290000831
Figure BDA0003743572290000841
Figure BDA0003743572290000851
Figure BDA0003743572290000861
Figure BDA0003743572290000871
Figure BDA0003743572290000881
Figure BDA0003743572290000891
Figure BDA0003743572290000901
Figure BDA0003743572290000911
Figure BDA0003743572290000921
Figure BDA0003743572290000931
Figure BDA0003743572290000941
Figure BDA0003743572290000951
Figure BDA0003743572290000961
Figure BDA0003743572290000971
Figure BDA0003743572290000981
Figure BDA0003743572290000991
Figure BDA0003743572290001001
Figure BDA0003743572290001011
Figure BDA0003743572290001021
Figure BDA0003743572290001031
Figure BDA0003743572290001041
Figure BDA0003743572290001051
Figure BDA0003743572290001061
Figure BDA0003743572290001071
Figure BDA0003743572290001081
Figure BDA0003743572290001091
1-[2-(2,5-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/表1 的化合物85的合成
Figure BDA0003743572290001101
将叔丁基4-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体4)(100mg，0.250mmol)和2,5-二氟苯甲醛(41uL，0.375mmol)溶解在DMSO(1.6mL)和EtOH(0.2mL)的溶液中，然后添加Na2S2O4(132mg，0.749mmol)。将混合物密封并在100℃搅拌16小时。向混合物中鼓入空气10分钟，然后在100℃搅拌4小时。将混合物冷却至室温并添加4M水性HCl(在二噁烷中)(0.5mL)。将反应静置2天。将反应碱化，然后用EtOAc萃取。将有机物合并，过滤，并且将滤液真空浓缩。将粗产物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，然后冻干，得到呈黄色固体的标题化合物(9mg，9％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.68-8.65(m,2H),8.00(d,J＝9.0Hz,1H),7.61-7.56(m,1H),7.45-7.39(m,3H),7.30-7.24(m,1H),6.95(d,J＝9.0Hz,1H),3.46-3.42(m,4H),2.81-2.75(m,4H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.51min，MS(ESIpos)：m/z393.3[M+H]+，纯度＝99％。
表1.5.5中列出的每种化合物是根据表1的化合物85的方法，使用“合成”栏中列出的中间体与针对此类化合物的适当醛衍生物来制备的。乙醇是助溶剂，并且并非在所有实例中都使用。最终化合物通过制备型HPLC方法A1、A2或B1纯化。如果需要，使用KP-NH柱(梯度0-50％MeOH/DCM)或SCX柱(MeOH中的3N NH3)进行进一步纯化。
表1.5.5
Figure BDA0003743572290001102
Figure BDA0003743572290001111
7-[2-(3-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-4,7-二氮杂螺 [2.5]辛烷/表1的化合物146的合成
Figure BDA0003743572290001112
将3-氟苯甲醛(45uL，0.416mmol)添加到叔丁基7-[5-氨基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]-4,7-二氮杂螺[2.5]辛烷-4-甲酸酯(中间体83)(150mg，0.378mmol)在EtOH(7.5mL)中的溶液中。将反应搅拌15分钟，然后添加硝酸铈铵(21mg，0.0378mmol)，接着添加过氧化氢(35％，66uL，0.757mmol)。将反应在环境下搅拌2天，然后冷却并在水中淬灭。将水层萃取至EtOAc中三次，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化。将残余物溶解在DCM(7.5mL)中并添加TFA(0.075mL)。将溶液搅拌4小时，然后用水性氢氧化铵淬灭直至不再呈酸性。将溶剂真空除去并使用制备型HPLC(方法A1)纯化粗产物，得到标题化合物(13mg，8.3％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.77-8.67(m,2H),7.95(d,J＝9.0Hz,1H),7.49-7.39(m,3H),7.34-7.25(m,2H),7.25-7.20(m,1H),6.89(d,J＝9.0Hz,1H),3.53-3.45(m,2H),3.35(s,2H),2.88-2.77(m,2H),2.38-2.28(m,1H),0.52-0.38(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.48min，MS(ESIpos)：m/z 401.2[M+H]+，纯度＝100％。
表1.5.6中列出的每种化合物是根据表1的化合物146的方法，使用“合成”栏中列出的中间体与针对此类化合物的适当醛衍生物来制备的。最终化合物通过制备型HPLC方法A1或A2纯化。
表1.5.6
Figure BDA0003743572290001113
Figure BDA0003743572290001121
Figure BDA0003743572290001131
Figure BDA0003743572290001141
2-(2,4-二氟苯基)-6-(哌嗪-1-基)-1-(嘧啶-4-基)-1H-1,3-苯并二唑/表1的化 合物179的合成
Figure BDA0003743572290001142
将2,4-二氟苯甲醛(0.024mL，0.180mmol)、Na2S2O4(89mg，0.509mmol)和叔丁基4-[4-硝基-3-(嘧啶-4-基氨基)苯基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体3-2)(60mg，0.150mmol)在DMSO(0.6mL)和EtOH(0.2mL)中的悬浮液在空气中于100℃加热过夜。将混合物过滤并将滤液使用制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(10mg，18％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.18(d,J＝1.0Hz,1H),8.93(d,J＝5.5Hz,1H),7.84(td,J＝8.8,6.6Hz,1H),7.66(d,J＝8.9Hz,1H),7.53(dd,J＝5.5,1.2Hz,1H),7.34-7.24(m,3H),7.13(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),3.13-3.04(m,4H),2.90-2.80(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.51min，MS(ESIpos)：m/z393.2[M+H]+，纯度＝100％。
表1.5.7中列出的每种化合物是根据表1的化合物179的方法，使用“合成”栏中列出的中间体与针对此类化合物的适当醛衍生物来制备的。乙醇是助溶剂，并且并非在所有实例中都使用。最终化合物通过制备型HPLC方法A1或A2纯化。
表1.5.7
Figure BDA0003743572290001143
Figure BDA0003743572290001151
4-[2-(2,4-二氟苯基)-5-(哌嗪-1-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基]嘧啶/表1 中化合物109的合成
Figure BDA0003743572290001152
将叔丁基4-[5-硝基-6-(嘧啶-4-基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体26)(67％，66mg，0.110mmol)和Na2S2O4(58mg，0.329mmol)在DMSO(0.5mL)和EtOH(0.1mL)中的混合物温和加温3分钟。添加2,4-二氟苯甲醛(22uL，0.176mmol)并将反应加热至100℃持续18小时。添加另外的Na2S2O4(58mg，0.329mmol)和2,4-二氟苯甲醛(22uL，0.176mmol)并继续加热18小时。将反应用MeCN/水(1:1，0.5mL)稀释，并且通过过滤除去难处理的物质。将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化。将残余物通过色谱法(5g，KP-胺)(用0-7％MeOH/DCM洗脱)进一步纯化。将相关级分合并并真空浓缩，得到标题化合物(6.0mg，14％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.08(d,J＝5.6Hz,1H),8.92(d,J＝0.9Hz,1H),8.28(dd,J＝5.5,1.2Hz,1H),8.01(d,J＝9.0Hz,1H),7.85-7.79(m,1H),7.31-7.22(m,2H),6.97(d,J＝9.0Hz,1H),3.51-3.47(m,4H),2.85-2.77(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.62min，MS(ESIpos)：m/z 394.3[M+H]+，纯度＝100％。
表1.5.8中列出的每种化合物是根据表1的化合物109的方法，使用“合成”栏中列出的中间体与针对此类化合物的适当醛衍生物来制备的。乙醇是助溶剂，并且并非在所有实例中都使用。最终化合物通过制备型HPLC方法A1或A2纯化。如果需要，可以用KP-NH柱进一步纯化。
表1.5.8
Figure BDA0003743572290001161
Figure BDA0003743572290001171
Figure BDA0003743572290001181
Figure BDA0003743572290001191
1-[2-(2,4-二氟苯基)-7-甲基-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌 嗪/表1的化合物51的合成
Figure BDA0003743572290001192
将Na2S2O4(363mg，2.06mmol)添加到叔丁基4-[4-甲基-5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体65)(95％，300mg，0.688mmol)在EtOH(0.5mL)和DMSO(3mL)中的悬浮液中。将反应温和加温，然后添加2,4-二氟苯甲醛(90μL，0.823mmol)并将反应加热至100℃持续18小时。将反应冷却并用EtOAc(2mL)稀释。将混合物用NaOH(2mL，1M)洗涤，并且将水层用EtOAc(3x3mL)萃取。将合并的有机物通过相分离玻璃料并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(107mg，38％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.64-8.57(m,2H),7.80(td,J＝8.4,6.3Hz,1H),7.50-7.44(m,2H),7.24-7.14(m,1H),7.01(ddd,J＝10.4,9.0,2.4Hz,1H),6.80-6.74(m,1H),3.59-3.52(m,4H),2.95-2.87(m,4H),2.65-2.59(m,3H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.41min，MS(ESIpos)：m/z 407.2[M+H]+，纯度＝100％。
表1.5.9中列出的每种化合物是根据表1的化合物51的方法，使用“合成”栏中列出的中间体与针对此类化合物的适当醛衍生物来制备的。乙醇是助溶剂，并且并非在所有实例中都使用。最终化合物通过制备型HPLC方法A1或A2纯化。
表1.5.9
Figure BDA0003743572290001193
Figure BDA0003743572290001201
Figure BDA0003743572290001211
Figure BDA0003743572290001221
(3R)-N-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-1-甲基 吡咯烷-3-胺/表1的化合物70-R的合成
Figure BDA0003743572290001222
将(3R)-N-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑[4,5-b]吡啶-5-基]吡咯烷-3-胺(表1的化合物60-R)(30mg，0.0785mmol)溶解在DCM(1mL)、MeOH(0.2mL)和乙酸(0.05mL)中。添加甲醛(在水中37％)(37％，64mg，0.785mmol)并将反应搅拌3小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(166mg，0.785mmol)并将反应搅拌20小时。添加另外的甲醛(在水中37％)(37％，64mg，0.785mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(166mg，0.785mmol)并且将溶液在环境下搅拌1小时。将反应在水中淬灭。将水层用DCM萃取3次，将合并的有机物用盐水洗涤，通过相分离过滤器并真空浓缩，得到粗固体，将其通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(5.4mg，25％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.66-8.55(m,2H),7.76(d,J＝8.7Hz,1H),7.43-7.35(m,2H),7.29-7.23(m,2H),7.00-6.92(m,2H),6.35(d,J＝8.7Hz,1H),4.75(d,J＝7.2Hz,1H),4.33-4.22(m,1H),2.77-2.68(m,1H),2.59(dd,J＝9.7,6.4Hz,1H),2.52(dd,J＝9.7,3.4Hz,1H),2.29(m,5H),1.67-1.56(m,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.38min，MS(ESIpos)：m/z 389.3[M+H]+，纯度＝100％。
表1.5.10中列出的每种化合物是根据表1的化合物70-R的方法，使用“合成”栏中列出的中间体与针对此类化合物的适当烷基化剂来制备的。最终化合物通过制备型HPLC方法A1或A2纯化。
表1.5.10
Figure BDA0003743572290001223
Figure BDA0003743572290001231
Figure BDA0003743572290001241
4-[2-(2,4-二氟苯基)-5-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3- 基]哒嗪/表1的化合物176-R的合成
Figure BDA0003743572290001242
将2,4-二氟苯甲醛(87uL，0.713mmol)添加到叔丁基(3R)-4-[5-氨基-6-(哒嗪-4-基氨基)-2-吡啶基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸酯(中间体34)(77％纯度，325mg，0.649mmol)在乙醇(4.8mL)中的溶液中。将反应搅拌15分钟，然后添加过氧化氢(35％，114uL，1.30mmol)，然后添加硝酸铈铵(35mg，0.0649mmol)。将反应搅拌过夜，然后在水中淬灭。将水层萃取到乙酸乙酯中三次(约5mL)，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将中间体通过制备型HPLC(方法A1)纯化得到叔丁基(3R)-4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(哒嗪-4-基)-3H-咪唑[4,5-b]吡啶-5-基]-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯。将残余物溶解在DCM(3mL)中。添加TFA(0.1mL)并将反应搅拌过夜。将混合物真空浓缩，并且将产物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物(22mg，0.0528mmol，8％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.40(dd,J＝2.7,1.1Hz,1H),9.35(dd,J＝5.7,1.0Hz,1H),8.01(d,J＝9.0Hz,1H),7.89-7.76(m,1H),7.70(dd,J＝5.7,2.7Hz,1H),7.40-7.26(m,2H),6.92(d,J＝9.1Hz,1H),4.44-4.27(m,1H),4.00-3.87(m,1H),3.04-2.87(m,2H),2.87-2.76(m,2H),2.62(dd,J＝11.3,4.1Hz,1H),1.14(d,J＝6.6Hz,3H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.58min，MS(ESIpos)：m/z408.3[M+H]+，纯度＝100％。
2-(5-氯-2-氟-苯基)-5-[(2R)-2-甲基哌嗪-1-基]-3-哒嗪-4-基-咪唑[4,5-b]吡 啶/表1的化合物177-R的合成
Figure BDA0003743572290001243
将5-氯-2-氟苯甲醛(75uL，0.549mmol)添加到叔丁基(3R)-4-[5-氨基-6-(哒嗪-4-基氨基)-2-吡啶基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸酯(中间体34)(77％纯度，325mg，0.649mmol)在乙醇(4.8mL)中的溶液中。将反应搅拌15分钟，然后添加硝酸铈铵(35mg，0.0649mmol)，接着添加过氧化氢(35％，114uL，1.30mmol)。将反应搅拌过夜，然后在水中淬灭。将水层萃取到乙酸乙酯中三次(约5mL)，并且将合并的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。将中间体通过制备型HPLC(方法A1)纯化得到叔丁基(3R)-4-[2-(5-氯-2-氟苯基)-3-(哒嗪-4-基)-3H-咪唑[4,5-b]吡啶-5-基]-3-甲基哌嗪-1-甲酸酯。将残余物溶解在DCM(3mL)中。添加TFA(0.1mL)并将反应搅拌过夜。将混合物真空浓缩，并且将产物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到呈淡黄色固体的标题化合物(28mg，0.0649mmol，7％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.44(dd,J＝2.7,1.0Hz,1H),9.36(dd,J＝5.7,1.0Hz,1H),8.02(d,J＝9.0Hz,1H),7.83(dd,J＝6.1,2.7Hz,1H),7.75(dd,J＝5.7,2.7Hz,1H),7.66(ddd,J＝8.9,4.4,2.8Hz,1H),7.38-7.26(m,1H),6.93(d,J＝9.2Hz,1H),4.43-4.31(m,1H),4.01-3.89(m,1H),3.03-2.89(m,2H),2.86-2.77(m,2H),2.65-2.57(m,1H),1.15(d,J＝6.6Hz,3H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.75min，MS(ESIpos)：m/z 424.2，426.2[M+H]+，纯度＝99％。
rac-5-{[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]氨基}哌 啶-3-醇/表1的化合物43的合成
Figure BDA0003743572290001251
在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中将叔丁基(1R,5S)-6-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]-3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷-3-甲酸酯(中间体29)(70％纯度,88mg，0.15mmol)和Na2S2O4(78mg，0.45mmol)加热五分钟至100℃。添加4-氟苯甲醛(24μL，0.22mmol)并将混合物在100℃搅拌30小时。将反应混合物冷却并在水(2mL)中淬灭，然后将水层萃取到EtOAc(3x5mL)中。将合并的有机萃取物用饱和碳酸钾溶液(2x5mL)、盐水(5mL)洗涤，通过相分离滤纸并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(7mg，11％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.73-8.65(m,2H),7.80(d,J＝8.7Hz,1H),7.51-7.45(m,2H),7.44-7.40(m,2H),7.28-7.20(m,2H),6.64(d,J＝7.5Hz,1H),6.59(d,J＝8.8Hz,1H),4.53-4.47(m,1H),3.97-3.87(m,1H),3.72-3.61(m,1H),2.87-2.78(m,1H),2.76-2.68(m,1H),2.46-2.39(m,1H),1.79(s,1H),1.64(s,1H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.14min，MS(ESIpos)：m/z 405.3[M+H]+，纯度＝99％。
1-[2-(4-氟苯基)-6-甲基-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/ 表1的化合物74的合成
Figure BDA0003743572290001252
将叔丁基4-[3-甲基-5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体51)(75mg，0.18mmol)和Na2S2O4(96mg，0.543mmol)在DMSO(1mL)和EtOH(0.2mL)中于100℃加热五分钟。添加4-氟苯甲醛(34mg，0.27mmol)并将混合物在100℃搅拌21小时。将反应冷却并在水(2mL)中淬灭。将水层萃取到EtOAc(3x5mL)中并萃取到DCM(5mL)中萃取一次，将合并的有机萃取物用饱和碳酸钾溶液(2x5mL)、盐水(5mL)洗涤，通过相分离过滤器并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(26mg，35％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.71-8.56(m,2H),7.78(s,1H),7.51-7.40(m,2H),7.40-7.24(m,2H),7.11-6.92(m,2H),3.08-3.00(m,4H),3.00-2.93(m,4H),2.36(s,3H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.86min，MS(ESIpos)：m/z 389.3[M+H]+，纯度＝97％。
1-[6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/表1 化合物88的合成
Figure BDA0003743572290001253
向2-(4-氟苯基)-5-哌嗪-1-基-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(表1的化合物17)(30mg，77μmol)在MeCN(2mL)中的搅拌溶液中添加NCS(12mg，92μmol)并将混合物在60℃搅拌3小时。将反应用1M NaOH(10mL)淬灭，并且将产物用DCM(2x10mL)萃取。将合并的有机层通过Telos分相器过滤干燥，然后真空浓缩。将残余物通过与Et2O研磨然后用制备型HPLC(方法B1)进行纯化。将产物溶解在DCM(20mL)中并用1M NaOH(5mL)洗涤。将有机层真空浓缩并冻干，得到标题化合物(9mg，28％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.76-8.68(m,2H),8.06(s,1H),7.56-7.48(m,2H),7.37-7.31(m,2H),7.13-7.03(m,2H),3.33-3.23(m,4H),3.09-2.98(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.71min，MS(ESIpos)：m/z 409.2，411.2[M+H]+，纯度＝97％。
1-[6-溴-2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/表1 化合物97的合成
Figure BDA0003743572290001261
向2-(4-氟苯基)-5-哌嗪-1-基-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(表1的化合物17)(300mg，0.77mmol)在MeCN(7mL)中的搅拌溶液中添加NBS(164mg，0.92mmol)并将混合物在60℃搅拌2小时。将反应用1M NaOH(10mL)淬灭，并且将产物用DCM(2x10mL)萃取。将合并的有机层通过Telos分相器过滤干燥，然后真空浓缩。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用在DCM中的0-30％MeOH洗脱)纯化，得到标题化合物(159mg，44％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.76-8.69(m,2H),8.25(s,1H),7.56-7.49(m,2H),7.37-7.30(m,2H),7.09(t,J＝8.6Hz,2H),3.32-3.21(m,4H),3.10-3.00(m,4H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.72min，MS(ESIpos)：m/z453.1，455.1[M+H]+，纯度＝100％。
1-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]氮杂环丁烷-3- 醇/表1的化合物98的合成
Figure BDA0003743572290001262
将6-[3-[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基氮杂环丁烷-1-基]-3-硝基-N-(4-吡啶基)吡啶-2-胺(中间体96)(200mg，0.5mmol)和Na2S2O4(263mg，1.5mmol)在DMSO(3mL)和EtOH(0.3mL)中加热至100℃持续五分钟。添加4-氟苯甲醛(80μL，0.747mmol)。将溶液加热至100℃持续21小时。将反应冷却并在水(2mL)中淬灭。将溶剂真空除去并添加DCM(5mL)。将有机萃取物用饱和碳酸钾溶液(2x5mL)盐水(5mL)洗涤，通过相分离过滤器并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化残余物，得到标题化合物(23mg，12％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.67-8.55(m,2H),7.83(d,J＝8.6Hz,1H),7.46-7.38(m,2H),7.30-7.24(m,2H),7.03-6.94(m,2H),6.30(d,J＝8.6Hz,1H),4.78-4.67(m,1H),4.24(dd,J＝9.7,6.4Hz,2H),3.81(dd,J＝9.8,4.5Hz,2H),2.13(d,J＝6.4Hz,1H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.36min，MS(ESIpos)：m/z 362.3[M+H]+，纯度＝98％。
(1R,4R)-2-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-5- (氧杂环丁烷-3-基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷/表1的化合物99-RR的合成
Figure BDA0003743572290001263
向5-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(表1的化合物35-RR)(30mg，77.6μmol)和氧杂环丁烷-3-酮(6.0μL，93.2μmol)在DCE(1mL)中的溶液中添加乙酸(1.8μL，31.1μmol)。然后将反应在环境下搅拌2小时，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(33mg，0.155mmol)。然后将混合物再搅拌16小时。将反应用NaHCO3(水性)溶液和DCM稀释并分离各相。将分离的有机物真空浓缩并通过制备型HPLC(方法A1)纯化。得到标题化合物(15mg，43％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.66-8.75(m,2H),7.91(d,J＝8.7Hz,1H),7.47-7.56(m,2H),7.34-7.40(m,2H),7.03-7.14(m,2H),6.43(d,J＝8.8Hz,1H),4.70-4.76(m,2H),4.67(t,J＝6.4Hz,1H),4.55(t,J＝6.1Hz,1H),4.47(t,J＝5.9Hz,1H),3.98(p,J＝6.1Hz,1H),3.58(s,1H),3.43(dd,J＝9.6,2.0Hz,1H),3.35(d,J＝9.6Hz,1H),2.98(dd,J＝9.5,2.0Hz,1H),2.90(d,J＝9.6Hz,1H),1.98(d,J＝9.6Hz,1H),1.90(d,J＝9.6Hz,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.39min，MS(ESIpos)：m/z443.3[M+H]+，纯度＝99％。
(1R,4R)-2-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-5- (2-甲氧基乙基)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷/表1的化合物105-RR的合成
Figure BDA0003743572290001271
在室温下向5-[(1R,4R)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(表1的化合物35-RR)(30mg，77.6μmol)在MeCN(0.5mL)和DCM(1mL)中的搅拌溶液中添加1-溴-2-甲氧基乙烷(7.3μL，77.6μmol)，然后是三乙胺(22μL，0.155mmol)。然后将反应在室温搅拌总共36小时，用氯仿(1mL)稀释，升温至50℃并再搅拌16小时。将反应物真空浓缩，并且将残余物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(7.7mg，22％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.68(d,J＝6.1Hz,2H),7.86(d,J＝8.7Hz,1H),7.44-7.53(m,2H),7.31-7.39(m,2H),6.98-7.10(m,2H),6.41(d,J＝8.8Hz,1H),4.63(s,1H),3.70(s,1H),3.61(d,J＝9.7Hz,1H),3.41-3.49(m,2H),3.38(dd,J＝9.8,2.0Hz,1H),3.34(s,3H),3.10(d,J＝9.0Hz,1H),2.68-2.82(m,2H),2.64(d,J＝9.4Hz,1H),2.02(d,J＝9.5Hz,1H),1.85(d,J＝9.5Hz,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.5min，MS(ESIpos)：m/z445.3[M+H]+，纯度＝99％。
4-[2-(4-氟苯基)-5-[3-(吡咯烷-1-基)氮杂环丁烷-1-基]-3H-咪唑并[4,5-b]吡 啶-3-基]吡啶/表1的化合物106的合成
Figure BDA0003743572290001272
将1-[2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]氮杂环丁烷-3-醇(表1的化合物98)(23mg，63.6μmol)在DCM(1mL)中的溶液冷却至0℃并分批添加戴斯-马丁高碘烷(54mg，0.127mmol)。将溶液升温至环境温度，并且搅拌2小时。添加另外的戴斯-马丁高碘烷(54mg，0.127mmol)并将溶液搅拌2小时。将反应在水(1mL)中淬灭。将有机层分离并且将水层用DCM(2x1mL)萃取。将乙酸(0.05mL)随后三乙酰氧基硼氢化钠(27mg，0.127mmol)连同吡咯烷(5.8μL，70.0μmol)一起添加到合并的有机物中，并将反应搅拌2小时。将混合物真空干燥，并且将粗固体通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(3.1mg，12％产率)。1H NMR(500MHz,氯仿-d)δ8.66-8.54(m,2H),7.80(d,J＝8.6Hz,1H),7.46-7.37(m,2H),7.33-7.24(m,2H),7.03-6.91(m,2H),6.27(d,J＝8.7Hz,1H),4.10-3.95(m,2H),3.86(dd,J＝8.3,5.1Hz,2H),3.43-3.30(m,1H),2.54-2.41(m,4H),1.80-1.72(m,4H)。LCMS(分析方法B)Rt＝3.10min，MS(ESIpos)：m/z 415.3[M+H]+，纯度＝100％。
1-[6-氟-2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪/表1 的化合物110的合成
Figure BDA0003743572290001273
向叔丁基4-[6-氟-2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-1-甲酸酯(中间体98)(100％，40mg，81.2μmol)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加TFA(0.12mL，1.62mmol)，并将混合物搅拌3小时。然后将混合物用NaOH(2mL，1M)淬灭。分离有机层，并用DCM(2mL)萃取水层。将合并的有机层通过疏水玻璃料过滤并真空浓缩。将粗固体通过快速色谱法(用0-50％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(10mg，30％产率)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.71-8.63(m,2H),7.80(d,J＝12.6Hz,1H),7.60-7.53(m,2H),7.53-7.48(m,2H),7.19(t,J＝8.8Hz,2H),3.45-3.39(m,4H),3.01-2.91(m,4H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.80min，MS(ESIpos)：m/z 393.3[M+H]+，纯度＝97％。
(1S,6R)-3-[2-(4-氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-3,8- 二氮杂双环[4.2.0]辛烷/表1的化合物154-SR的合成
Figure BDA0003743572290001281
将叔丁基(1S,6R)-3-[5-硝基-6-(4-吡啶基氨基)-2-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[4.2.0]辛烷-8-甲酸酯(中间体70)(235mg，0.551mmol)、4-氟苯甲醛(65uL，0.606mmol)和Na2S2O4(300mg，1.72mmol)溶解在DMSO(4mL)和乙醇(0.4mL)中。将反应加热至100℃持续20小时。将反应冷却并用1M NaOH稀释。将水层用DCM萃取，并且将有机物合并并真空浓缩。将中间产物通过制备型HPLC(方法A2)纯化，得到叔丁基(1S,6R)-3-[2-(4-氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-3,8-二氮杂双环[4.2.0]辛烷-8-甲酸酯。将残余物溶解在DCM(1mL)中并添加TFA(0.3mL)。将反应搅拌6小时。添加另外的TFA(0.3mL)并继续搅拌2小时。将混合物真空浓缩，并且将产物通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(8mg，3％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73-8.66(m,2H),7.95-7.90(m,1H),7.53-7.47(m,2H),7.46-7.41(m,2H),7.29-7.22(m,2H),6.70(d,J＝9.0Hz,1H),4.13-4.05(m,1H),3.86-3.78(m,1H),3.77-3.70(m,1H),3.69-3.53(m,3H),3.10-3.04(m,1H),2.78-2.68(m,1H),1.99-1.90(m,1H),1.85-1.77(m,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.47min，MS(ESIpos)：m/z401.2[M+H]+，纯度＝98％。
1-{4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪- 1-基}乙-1-酮/表1的化合物159的合成
Figure BDA0003743572290001282
向2-(2,4-二氟苯基)-5-哌嗪-1-基-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(表1的化合物34)(15mg，38.2μmol)在DCM(1mL)中的溶液中添加乙酰氯(3.3μL，45.9μmol)，然后添加DIPEA(8.0μL，45.9μmol)，并且将溶液搅拌1小时。将粗产物使用快速色谱法(用在DCM中的0-0.5％MeOH洗脱)纯化，得到标题化合物(11mg，67％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.74-8.62(m,2H),8.05(d,J＝8.9Hz,1H),7.86-7.75(m,1H),7.45-7.38(m,2H),7.36-7.23(m,2H),7.01(d,J＝9.0Hz,1H),3.63-3.53(m,6H),3.54-3.46(m,2H),2.05(s,3H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.59min，MS(ESIpos)：m/z 435.3[M+H]+，纯度＝100％。
1-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-4-甲磺酰 基哌嗪/表1的化合物161的合成
Figure BDA0003743572290001283
向2-(2,4-二氟苯基)-5-哌嗪-1-基-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(表1的化合物34)(15mg，38.2μmol)在DCM(1mL)中的溶液中添加DIPEA(8.0μL，45.9μmol)，然后添加甲磺酰氯(3.6μL，45.9μmol)并将溶液搅拌1小时。将粗产物使用快速色谱法(用在DCM中的0-0.5％MeOH洗脱)以及另外通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(8.3mg，44％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73-8.60(m,2H),8.06(d,J＝8.9Hz,1H),7.87-7.72(m,1H),7.47-7.37(m,2H),7.37-7.23(m,2H),7.04(d,J＝9.0Hz,1H),3.74-3.58(m,4H),3.28-3.15(m,4H),2.90(s,3H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.85min，MS(ESIpos)：m/z 471.3[M+H]+，纯度＝96％。
4-{5-[(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4,5-b] 吡啶-3-基}吡啶/表1的化合物170-R的合成
Figure BDA0003743572290001291
将2-(4-氟苯基)-5-碘-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(中间体97)(78％纯度，40mg，75.0μmol)、(8aR)-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪(12mg，98.9μmol)、Pd2dba3(1.7mg，1.87μmol)、NaOtBu(14mg，0.150mmol)和BINAP(2.3mg，3.75μmol)在甲苯(1.25mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应加热至100℃持续24小时。将混合物用Pd2dba3(1.7mg，1.87μmol)、BINAP(2.3mg，3.75μmol)和(8aR)-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪(12mg，98.9μmol)再处理并在100℃搅拌4小时。将混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc(30mL)洗涤。将滤液用HCl(2x30mL，2M)萃取。将水层用NaOH(30mL)碱化，用DCM(3x80mL)萃取，并且将合并的有机物通过疏水玻璃料过滤并真空蒸发。将残余物使用制备型HPLC(方法A1)、随后用快速色谱法(12g KP-NH)(用0-3％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到标题化合物(6.0mg，18％产率)。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.68-8.63(m,2H),7.91(d,J＝9.0Hz,1H),7.55-7.50(m,2H),7.50-7.46(m,2H),7.20-7.13(m,2H),6.94(d,J＝9.0Hz,1H),4.46-4.37(m,1H),4.34-4.26(m,1H),3.18-3.07(m,2H),3.01(ddd,J＝12.8,11.8,3.3Hz,1H),2.66(dd,J＝12.4,10.4Hz,1H),2.30(td,J＝11.5,3.4Hz,1H),2.21(app q,J＝9.0Hz,1H),2.17-2.09(m,1H),1.98-1.90(m,1H),1.90-1.77(m,2H),1.55-1.45(m,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.43min，MS(ESIpos)：m/z 415.3[M+H]+，纯度＝94％。
4-{5-[(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基]-2-(4-氟苯基)-3H-咪唑并[4,5-b] 吡啶-3-基}吡啶/表1的化合物170-S的合成
Figure BDA0003743572290001292
将2-(4-氟苯基)-5-碘-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶(中间体97)(30mg，0.0706mmol)、(8aS)-1,2,3,4,6,7,8,8a-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪(12mg，93.2μmol)、Pd2dba3(1.6mg，1.77μmol)、NaOtBu(14mg，0.141mmol)和BINAP(2.2mg，3.53μmol)在甲苯(1.2mL)中的混合物通过用氮气喷射脱气。将反应加热至100℃持续2小时。将混合物通过硅藻土过滤，用EtOAc(30mL)洗涤。将滤液通过快速色谱法(5g，KP-NH)(用在庚烷中的0-30％(EtOAc/EtOH，3:1)洗脱)纯化，得到粗固体，将其通过制备型HPLC(方法A3)纯化。将固体用NaOH(1M)碱化，用DCM(3x10mL)萃取，通过疏水玻璃料过滤并真空蒸发，得到标题化合物(12mg，39％产率)。1H NMR(500MHz,MeOD)δ8.69-8.64(m,2H),7.92(d,J＝9.0Hz,1H),7.57-7.51(m,2H),7.51-7.47(m,2H),7.17(t,J＝8.8Hz,2H),6.96(d,J＝9.0Hz,1H),4.47-4.39(m,1H),4.35-4.27(m,1H),3.19-3.08(m,2H),3.01(td,J＝12.8,3.3Hz,1H),2.67(dd,J＝12.4,10.5Hz,1H),2.31(td,J＝11.5,3.4Hz,1H),2.22(q,J＝9.0Hz,1H),2.20-2.10(m,1H),2.00-1.91(m,1H),1.91-1.78(m,2H),1.58-1.45(m,1H)。LCMS(分析方法A)Rt＝1.45min，MS(ESIpos)：m/z 415.3[M+H]+，纯度＝95％。
(2R)-1-{6-溴-3-[2-(二氟甲基)吡啶-4-基]-2-(4-氟苯基)-3H-咪唑[4,5-b]吡 啶-5-基}-2-甲基哌嗪/表1的化合物144的合成
Figure BDA0003743572290001293
向NBS(260mg，1.46mmol)在MeCN(10mL)中的搅拌溶液中添加叔丁基(3R)-4-[3-[2-(二氟甲基)-4-吡啶基]-2-(4-氟苯基)咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]-3-甲基-哌嗪-1-甲酸酯(中间体85)(705mg，1.22mmol)并将混合物在60℃搅拌5小时。将混合物在DCM(10mL)和NaOH(15mL，1M)之间分配。分离有机层并用DCM(2x15 mL)萃取水层。将合并的有机物通过疏水玻璃料过滤并真空蒸发。将残余物通过快速色谱法(25g，二氧化硅)(用0-10％MeOH/DCM洗脱)纯化，得到粗固体，将其通过制备型HPLC(方法A1)纯化，得到标题化合物(35mg，5.6％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO)δ8.81(d,J＝5.3Hz,1H),8.50(s,1H),7.89(d,J＝1.8Hz,1H),7.61-7.56(m,2H),7.56-7.54(m,1H),7.37-7.27(m,2H),7.04(t,J＝54.7Hz,1H),3.66-3.56(m,1H),3.25-3.15(m,1H),2.91(dd,J＝12.1,3.3Hz,1H),2.86-2.74(m,3H),2.57-2.53(m,1H),0.99(d,J＝6.3Hz,3H)。LCMS(分析方法A)Rt＝2.19min，MS(ESIpos)：m/z517.2,519.2[M+H]+，纯度＝100％。
(2R)-4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(吡啶-4-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌 嗪-2-甲酰胺./表1的化合物200-R的合成
Figure BDA0003743572290001301
将叔丁基(2R)-2-氨基甲酰基-4-[2-(2,4-二氟苯基)-3-(4-吡啶基)咪唑并[4,5-b]吡啶-5-基]哌嗪-1-甲酸酯将(中间体69)(82mg，0.15mmol)溶解在4M HCl(在二噁烷中)(8.0mL，0.15mmol)中并在室温搅拌1小时。缓慢添加饱和水性NaHCO3(25ml)，并将产物萃取到DCM(2x25ml)中。将合并的有机层经硫酸镁干燥并真空浓缩。通过制备型HPLC(方法A1)纯化剩余的残余物，得到标题化合物(24mg，36％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75-8.56(m,2H),8.00(d,J＝9.0Hz,1H),7.86-7.68(m,1H),7.51-7.36(m,2H),7.33(d,J＝2.1Hz,1H),7.30(s,1H),7.29-7.24(m,1H),7.13(s,1H),6.96(d,J＝9.0Hz,1H),4.09(dd,J＝12.4,3.0Hz,1H),3.88(d,J＝12.4Hz,1H),3.26(d,J＝7.8Hz,1H),3.09-2.88(m,3H),2.81-2.63(m,1H),2.54(s,1H)。LCMS(分析方法B)Rt＝2.21min，MS(ESIpos)：m/z 436.3[M+H]+，纯度＝100％。
实例2-通式(I)的化合物的活性
按照已知方案(WO2019/115711的实例2的方案)测定通式(I)的化合物的DUX4阻遏。几种化合物与原代FSHD细胞一起孵育72小时。结果显示在表2.2中，显示了DUX4计数％抑制。其他结果在表2.3中，其中化合物98、106和188-R不在分档范围内。
表2.2-通式(I)的选定化合物的生物学数据
Figure BDA0003743572290001302
表2.3-通式(I)的选定化合物的生物学数据
Figure BDA0003743572290001311

Claims (15)

1.一种通式(I-cyc)或(I)的化合物：
Figure FDA0003743572280000011
其中
cyc是苯基环、5元杂芳基环或6元杂芳基环；
R1是H、卤素、腈、-C1-4烷基、-C1-3烷基-腈、-C1-4卤代烷基、-C1-3卤代烷基-腈、-O-C1-4烷基、-O-C1-3烷基-腈、-O-C1-4卤代烷基、-O-C1-3卤代烷基-腈、-S-C1-4烷基、-S-C1-3烷基-腈、-S-C1-4卤代烷基、或-S-C1-3卤代烷基-腈；
m是0、1、2或3；
n1是N、CH或C(CH3)；
R2是H、卤素、腈、-C1-4烷基、-C1-3烷基-腈、-C1-4卤代烷基、-C1-3卤代烷基-腈、-O-C1-4烷基、-O-C1-3烷基-腈，-O-C1-4卤代烷基，-O-C1-3卤代烷基-腈、-S-C1-4烷基、-S-C1-3烷基-腈、-S-C1-4卤代烷基、-S-C1-3卤代烷基-腈，或R2与Q一起形成桥接部分；
n是0、1或2；
R3是卤素或C1-4烷基；
p是0、1或2；
X1是CH、C(R2)、N或C(Q)；
X2是CH、C(R2)或N；
Q是H、卤素、C1-6烷基、-OH、-O-C1-6烷基、-O-C1-6酰基、-NH2、-NH-(C1-6烷基)、-N(C1-6烷基)2、-NH(C1-8酰基)、-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-OH、-C1-4烷基-O-C1-6烷基、-C1-4烷基-O-C1-6酰基、-C1-4烷基-NH2、-C1-4烷基-NH-(C1-6烷基)、-C1-4烷基-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-NH(C1-8酰基)、-C1-4烷基-N(C1-8酰基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-NH-C1-6烷基、-C1-4烷基-N-C(O)-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-O-C(O)-NH-C1-6烷基、-C1-4烷基-O-C(O)-N(C1-6烷基)2、-C1-4烷基-N-C(O)-O-C1-6烷基，或Q与R2一起形成选自以下的桥接部分：-NH-CH＝CH-、-NH-(C2-4烷基)-和-(C1-3烷基)-NH-(C1-3烷基)-；
c1是H并且c2是C4-8环烷基、C4-8杂环烷基、C4-8环烷基-C1-3烷基、C4-8杂环烷基-C1-3烷基、C1-3烷基-C4-8环烷基、或C1-3烷基-C4-8杂环烷基，或c1和c2一起形成环状结构A；
A是C5-12环烷基，其可以是环状、双环和三环，并且任选地是不饱和的，并且任选地被卤素、C1-4烷基、C2-4酰基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、-O-C1-4烷基、-SO2-C1-4烷基、羟基、-C(＝O)-NH2、-C(＝O)-NH(CH3)、-C(＝O)-N(CH3)2、-NH2、-NH(C1-4烷基)、或-N(C1-4烷基)2取代；
其中酰基、烷基、环烷基或杂环烷基的每个情况单独地任选地是不饱和的，并且任选地被卤素、氧基、羟基、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基或三氟甲基取代，或任选地被一个或多个杂原子中断；
或其盐。
2.如权利要求1所述的化合物，其中
R1是H、氟、氯、-CH3、-CF3、-O-CH3或腈；
m是0或1；
n1是N或CH；
R2是H、氟、氯，或形成桥接部分；
n是0；
R3是-CH3；
p是0或1；
X1是C(Q)；
X2是CH；
Q是H、F、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3、-OCH3、-OCH2F、-OCHF2、-OCF3、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH-C(O)-哌啶基、-NH-C(O)-吡啶基、-NH-C(O)-吗啉基、-NH-C(O)-环氧乙烷基、-NH2、-NH(CH3)、-NH(环戊基)、-CH2-NH-C(O)-CH3、-CH2-N(CH3)2、-CH2-NH2、-CH2-NH-(CH3)、-CH2-NH-(环戊基)、或与R2一起形成-NH-CH＝CH-；和/或其中
c1是H并且c2是吡啶基、-CH2-吡啶基、哌啶基、N-甲基哌啶基、-CH2-哌啶基、-CH2-(N-甲基哌啶基)、环戊基、羟基环戊基、-CH2-环戊基、-CH2-羟基环戊基、吡咯烷基、N-甲基吡咯烷基、-CH2-吡咯烷基、-CH2-(N-甲基吡咯烷基)，或c1和c2一起形成环状结构A。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其中
R1是H、氟或氯；
R2是H或形成桥接部分；
p是0；和/或其中
Q是H、-CH3、-CHF2、-OCH3、-NH-C(O)-CH3、-NH-C(O)-环丙基、-NH-C(O)-苯基、-NH-C(O)-卤代苯基、-NH-C(O)-哌啶基、-NH-C(O)-吡啶基、-NH-C(O)-吗啉基、-NH-C(O)-环氧乙烷基、-NH2、-CH2-NH-(CH3)、或与R2一起形成-NH-CH＝CH-。
4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中A是任选地取代的并且任选地不饱和的氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、氮杂环庚基、二氮杂环庚基或氧杂氮杂环庚基；
其中每个任选的取代可以是用卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、-O-C1-4烷基、羟基、-NH2、-NH(C1-4烷基)或-N(C1-4烷基)2取代；优选每个任选的取代独立地选自甲基、二甲胺、甲氧基、丙基、羟基、桥接C1-3烷基部分、螺氮杂环丁烷基、螺N-甲基氮杂环丁烷基、螺氧杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、螺哌啶基、二氟哌啶基、螺N-甲基哌啶基、螺环丙基、稠合吡咯烷基或稠合N-甲基吡咯烷基。
5.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中该化合物具有通式(I-A)：
Figure FDA0003743572280000021
6.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中该化合物具有通式(II)或(II-A)：
Figure FDA0003743572280000031
7.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中该化合物具有通式(III)或(III-A)：
Figure FDA0003743572280000032
8.如权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中A是双环、螺环或桥接的，优选选自A3-A9、A12、A13、A15-A19、A22、A25-A35和A37-A42；更优选它是双环或桥接的，甚至更优选选自A3-A6、A9、A25-A31、A33和A41。
9.如权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中m是1并且其中R1在该化合物双环核心的邻位、间位或对位，优选其中R1是卤素，更优选氟或氯，更优选氟。
10.一种通式(1)的化合物，其中该化合物选自表1中列出的化合物1-203。
11.一种通式(1)的化合物，其中该化合物选自表1中列出的化合物5、22、25、26、28、45、47、1、3、4、12、13、16、17、18、19、27、29、32、42、44、2、6、7、8、9、10、11、15、20、21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46；更优选选自化合物1、3、4、12、13、16、17、18、19、27、29、32、42、44、2、6、7、8、9、10、11、15、20，21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46；最优选选自化合物2、6、7、8、9、10、11、15、20、21、23、24、30、33、37、38、39、40、41、43和46。
12.一种组合物，其包含：
-至少一种如权利要求1-11中任一项所定义的通式(I)的化合物，和
-药学上可接受的赋形剂。
13.如权利要求1-11中任一项所述的通式(I)的化合物，或如权利要求12所述的组合物，用作药物，
其中该药物优选用于治疗与DUX4表达相关的疾病或病症，并且其中该通式(I)的化合物降低DUX4表达，
其中更优选地，所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良或癌症，甚至更优选地，其中所述与DUX4表达相关的疾病或病症是肌营养不良，最优选面肩肱型肌营养不良(FSHD)。
14.一种用于降低DUX4表达的体内、体外或离体方法，该方法包括使细胞与如权利要求1-11中任一项所定义的通式(I)的化合物或与如权利要求12中所定义的组合物接触的步骤。
15.一种在有需要的受试者中降低DUX4表达的方法，该方法包括施用有效量的如权利要求1-11中任一项所定义的通式(I)的化合物或如权利要求12中所定义的组合物的步骤。
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