CN115135337A - 使用ilt7结合蛋白的治疗方法 - Google Patents

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Abstract

本披露涉及治疗受试者的自身免疫性障碍的方法，该方法包括向具有升高的I型干扰素基因标记(IFNGS)的受试者施用免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。本披露还涉及减少组织中的pDC的方法，该方法包括向有需要的受试者施用ILT7结合蛋白。

Description

使用ILT7结合蛋白的治疗方法
背景
技术领域
本披露涉及治疗受试者的自身免疫性障碍的方法，该方法包括向具有升高的I型干扰素基因标记(IFNGS)的受试者施用免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。本披露还涉及减少组织中的pDC的方法，该方法包括向有需要的受试者施用ILT7结合蛋白。
背景技术
I型干扰素(IFN)轴是人类疾病中最重要的途径之一，其失调是许多慢性自身免疫性疾病诸如系统性红斑狼疮(SLE)的发病机制的核心。尽管SLE和其他自身免疫性疾病的确切病因尚未完全解决，但人们认为，环境因素结合遗传因素以及细胞碎片的累积导致外周免疫耐受性破坏，其特征是出现高水平的循环性自身反应性抗体。目前可用的方法是针对治疗自身免疫性疾病而不是预防这样的疾病。此外，自身免疫性疾病的常规治疗选择包括免疫抑制药物，这些药物有广泛的副作用。因此，需要用于治疗和预防自身免疫性疾病的预防性和更好治疗性的替代物。本披露解决了这些需要。
发明内容
在某些实施例中，本披露的方法可用于减少有需要的受试者中的I型干扰素基因标记(IFNGS)。这些方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。当受试者的I型IFNGS相对于正常受试者的I型IFNGS升高时，将ILT7结合蛋白施用于受试者。在具体实施例中，可以将ILT7结合蛋白施用于相对于正常受试者中的I型IFNGS具有升高的基线I型IFNGS的受试者，监测这些受试者治疗后I型IFNGS的减少。ILT7结合蛋白与包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)的抗体结合相同的ILT7表位。在某些方面，监测受试者治疗后I型IFNGS的减少。
在某些方面，在取自受试者的测试生物样品中测量I型IFNGS。测试样品包括但不限于血液、痰、唾液、皮肤细胞、皮肤活检样品、肾细胞、肺细胞、肝细胞、心脏细胞、脑细胞、神经组织、甲状腺细胞、眼细胞、骨骼肌细胞、软骨、骨组织和培养细胞。
在一些方面，测试生物样品中的I型IFNGS相对于正常生物样品升高至少约4倍。在某些方面，I型IFNGS包括两种或更多种I型干扰素(IFN)诱导型基因的总体表达水平。在一些方面，该两种或更多种I型干扰素(IFN)诱导型基因选自由SPATS2L、EPSTI1、HERC5、IFI27、IFI44、IFI44L、IFI6、IFIT1、IFIT3、ISG15、LAMP3、LY6E、MX1、OAS1、OAS2、OAS3、PLSCR1、RSAD2、RTP4、SIGLEC1和USP18组成的组。在某些方面，I型IFNGS包括所有SPATS2L、EPSTI1、HERC5、IFI27、IFI44、IFI44L、IFI6、IFIT1、IFIT3、ISG15、LAMP3、LY6E、MX1、OAS1、OAS2、OAS3、PLSCR1、RSAD2、RTP4、SIGLEC1和USP18的总体表达水平。
在一些方面，I型IFNGS通过测定测试生物样品中两种或更多种I型干扰素(IFN)诱导型基因的mRNA水平来确定。在特定方面，I型IFNGS通过测定测试生物样品中21种I型干扰素(IFN)诱导型基因的mRNA水平来确定。
在一些方面，施用ILT7结合蛋白引起受试者中浆细胞样树突状细胞(pDC)减少。在某些方面，pDC是循环pDC。在特定方面，pDC的减少是可逆的。
在一些方面，减少I型IFNGS治疗受试者的自身免疫性疾病。在某些方面，自身免疫性疾病选自下组，该组由以下各项组成：系统性红斑狼疮(SLE)；狼疮性肾炎；皮肤红斑狼疮(CLE)；干燥综合征；炎性肌炎，诸如皮肌炎、包涵体肌炎、青少年肌炎和多肌炎；系统性硬化症；糖尿病；桥本氏病；自身免疫性肾上腺功能不全；纯红细胞再生障碍性贫血；多发性硬化症；风湿性心脏炎；银屑病；银屑病关节炎；类风湿性关节炎；慢性炎症；慢性风湿病；白癜风；斑秃；化脓性汗腺炎；乳糜泻；急性和慢性移植物抗宿主病(GVHD)；血管炎症；心肌梗塞；以及1型干扰素病。在一些方面，自身免疫性疾病是SLE或CLE。在其他方面，自身免疫性疾病是干燥综合征。在其他方面，自身免疫性疾病是皮肌炎。在其他方面，自身免疫性疾病是多肌炎。在其他方面，自身免疫性疾病是系统性硬化症。在其他方面，自身免疫性疾病是化脓性汗腺炎。在其他方面，自身免疫性疾病是白癜风。
在一些方面，ILT7结合蛋白是包含分别包含SEQ ID NO:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3的抗体。在特定方面，ILT7结合蛋白是包含与SEQ ID NO:1至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的可变重链(VH)和/或与SEQ ID NO:2至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的可变轻链(VL)的抗体。在某些方面，ILT7结合蛋白是包含SEQID NO:1的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)的抗体。在一些方面，抗体是无岩藻糖基化的。
在一些方面，ILT7结合蛋白的药学有效量在约0.1mg至约1000mg的范围内。在某些方面，ILT7结合蛋白的药学有效量为约1mg、约5mg、约15mg、约50mg、约100mg或约150mg。在一些方面，ILT7结合蛋白通过皮下注射施用。
在一些方面，与施用ILT7结合蛋白之前的I型IFNGS相比，施用ILT7结合蛋白导致受试者中I型IFNGS减少至少约50％。在某些方面，ILT7结合蛋白诱导针对pDC的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。在一些方面，ILT7结合蛋白抑制I型干扰素(IFN)从pDC释放。在某些方面，I型IFN是IFNα。在一些方面，ILT7结合蛋白特异性结合ILT7。在一些方面，ILT7位于pDC上。
在其他实施例中，本披露的方法可用于监测以活化的pDC为标志的病症的治疗有效性。这些方法包括以下步骤：(a)测量取自受试者的生物样品中的I型干扰素基因标记(IFNGS)，以获得I型IFNGS的基线值；以及(b)测量施用治疗后取自受试者的生物样品中的I型IFNGS，其中该治疗包括免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。在一些方面，步骤(b)中I型IFNGS与基线值相比降低表明该治疗是有效的。ILT7结合蛋白与包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)的抗体结合相同的ILT7表位。
在另外的实施例中，本披露的方法可用于减少有需要的受试者组织中的浆细胞样树突状细胞(pDC)。这些方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。在某些方面，ILT7结合蛋白是包含分别包含SEQ ID NO:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3的抗体。
在一些方面，组织选自由皮肤细胞、皮肤活检样品、肾细胞、肺细胞、肝细胞、心脏细胞、脑细胞、神经组织、甲状腺细胞、眼细胞、骨骼肌细胞、软骨、骨组织和气道细胞组成的组。在某些方面，组织是皮肤细胞。在一些方面，组织是皮肤活检样品。
在一些方面，该方法导致组织中的pDC与基线值相比降低。在某些方面，组织中的pDC与基线值相比降低的范围为约1％至约99％。在一些方面，组织中的pDC与基线值相比降低至少约50％。
在一些方面，ILT7结合蛋白是包含分别包含SEQ ID NO:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3的抗体。
在进一步的实施例中，本披露的方法可用于治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍。这些方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。在一些方面，ILT7结合蛋白的药学有效量为约1mg、约5mg、约15mg、约50mg、约100mg或约150mg。在一些方面，ILT7结合蛋白的药学有效量为约50mg。在某些方面，ILT7结合蛋白的药学有效量为约150mg。
在某些实施例中，本披露的方法可用于治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍，这些方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中ILT7结合蛋白的药学有效量为约50mg。
在其他实施例中，本披露的方法可用于治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍，这些方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中ILT7结合蛋白的药学有效量为约150mg。
在另外的实施例中，本披露的方法可用于减少有需要的受试者组织中的浆细胞样树突状细胞(pDC)，该方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。ILT7结合蛋白的药学有效量为约50mg。
在进一步的实施例中，本披露的方法可用于减少有需要的受试者组织中的浆细胞样树突状细胞(pDC)，该方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。ILT7结合蛋白的药学有效量为约150mg。
在一些方面，组织中的pDC与基线值相比降低的范围为约1％至约99％。在某些方面，组织中的pDC与基线值相比降低至少约50％。
在一些方面，受试者在施用ILT7结合蛋白之前具有高血液I型IFNGS水平。在特定方面，受试者在施用ILT7结合蛋白之前在组织活检中具有高pDC水平。
在一些方面，自身免疫性疾病是系统性红斑狼疮(SLE)；狼疮性肾炎；皮肤红斑狼疮(CLE)；干燥综合征；炎性肌炎，诸如皮肌炎、包涵体肌炎、青少年肌炎和多肌炎；系统性硬化症；糖尿病；桥本氏病；自身免疫性肾上腺功能不全；纯红细胞再生障碍性贫血；多发性硬化症；风湿性心脏炎；银屑病；银屑病关节炎；类风湿性关节炎；慢性炎症；慢性风湿病；白癜风；斑秃；化脓性汗腺炎；乳糜泻；急性和慢性移植物抗宿主病(GVHD)；血管炎症；心肌梗塞；以及1型干扰素病。在一些方面，自身免疫性疾病是SLE。在其他方面，自身免疫性疾病是CLE。在一些方面，自身免疫性疾病是狼疮。在某些方面，受试者未患有盘状红斑狼疮(DLE)。
在一些实施例中，本披露的方法可用于选择患者以用ILT7结合蛋白进行治疗，该方法包括：(i)确定患者的基线血液I型IFNGS水平，以及(ii)选择具有高基线血液I型IFNGS水平的那些患者用ILT7结合蛋白进行治疗。
在某些实施例中，本披露的方法涉及治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍，该方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中在施用ILT7结合蛋白之前确定受试者具有高血液I型IFNGS水平。在一些方面，ILT7结合蛋白是包含分别包含SEQ ID NO:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3的抗体。在一些方面，ILT7结合蛋白是包含与SEQ ID NO:1至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的可变重链(VH)和/或与SEQ ID NO:2至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的可变轻链(VL)的抗体。在某些方面，ILT7结合蛋白是包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)的抗体。在一些方面，抗体是无岩藻糖基化的。
附图说明
图1示出了Ia期、随机、设盲、安慰剂对照研究的总体研究设计，以评估单次递增皮下给药本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白在患有以下五种自身免疫性疾病中的至少一种的受试者中的安全性和耐受性：系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、皮肌炎、多肌炎或系统性硬化症。
图2示出了单次递增剂量研究设计的细节。
图3示出了在患有以下五种自身免疫性疾病中的至少一种的受试者中单次皮下给药后，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的平均血清浓度曲线：SLE、干燥综合征、皮肌炎、多肌炎或系统性硬化症。
图4示出了在单次皮下给药(1mg、5mg、15mg、50mg或150mg)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，患有以下五种自身免疫性疾病中的至少一种的受试者的随时间的pDC水平(％)：SLE、干燥综合征、皮肌炎、多肌炎或系统性硬化症，以基线水平(使用％外周血单核细胞的值)的百分比计。
图5示出了在单次皮下给药(1mg、5mg、15mg、50mg或150mg)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，患有以下五种自身免疫性疾病中的至少一种的受试者的随时间的pDC水平(％)：SLE、干燥综合征、皮肌炎、多肌炎或系统性硬化症，以基线水平(使用绝对浓度的值)的百分比计。
图6示出了在单次皮下给药(1mg、5mg、15mg、50mg或150mg)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，患有以下五种自身免疫性疾病中的至少一种的受试者的pDC水平(绝对浓度；细胞数/微升)：SLE、干燥综合征、皮肌炎、多肌炎或系统性硬化症。
图7示出了用1-150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的具有高IFN的患者的I型IFNGS倍数变化(以基线的％测量)。通过以下方法来确定I型IFNGS：测定取自受试者的生物样品中的21种I型IFN诱导型基因的总mRNA水平，确定21种I型IFN诱导型基因的mRNA水平的平均值(平均数或中位数)，将平均值相对于3种管家基因(18S rRNA、β肌动蛋白和甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH))的mRNA水平的平均值归一化，并获得复合结果。在大多数I型IFNGS升高的受试者中，pDC水平的降低(图7A)与I型IFNGS的降低(以基线倍数变化的％报告)相关(图7B)。
图8示出了用15mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的具有升高的基线I型IFNGS的受试者中的I型IFNGS降低，但具有低基线I型IFNGS的受试者中没有降低。通过以下方法来确定I型IFNGS：测定取自受试者的生物样品中的21种I型IFN诱导型基因的总mRNA水平，确定21种I型IFN诱导型基因的mRNA水平的平均值(平均数或中位数)，将平均值相对于3种管家基因(18S rRNA、β肌动蛋白和GAPDH)的mRNA水平的平均值归一化，并获得复合结果。
图9示出了Ib期、随机、设盲、安慰剂对照研究的总体研究设计，以评估本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)的多次递增皮下给药在患有以下自身免疫性疾病中的至少一种的受试者中的安全性和耐受性：系统性红斑狼疮(SLE)、皮肤红斑狼疮(CLE)、系统性硬化症、多肌炎和皮肌炎。
图10示出了多次递增剂量(MAD)研究的随机化和剂量递增方案。
图11示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)5mg(队列1)或50mg(队列2)本文所述方法中使用的ILT7-结合蛋白(VIB7734)后，VIB7734的血清浓度曲线。图11A示出了队列2受试者中VIB7734的血清浓度曲线。图11B示出了队列1(实心圆)和队列2(实心方块)受试者中VIB7734的平均血清浓度曲线。
图12示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)5mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，患有以下自身免疫性疾病中的至少一种的队列1受试者全血中的随时间的pDC水平(％)：SLE、CLE、系统性硬化症、多肌炎和皮肌炎，以基线水平(使用％外周血单核细胞的值)的百分比计。队列1中的受试者被施用安慰剂(图12A)或VIB7734(图12B)。
图13示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)5mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，患有以下自身免疫性疾病中的至少一种的队列1受试者全血中的随时间的pDC水平(％)：SLE、CLE、系统性硬化症、多肌炎和皮肌炎，以基线水平(使用绝对浓度的值)的百分比计。队列1中的受试者被施用安慰剂(图13A)或VIB7734(图13B)。
图14示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)5mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，患有以下自身免疫性疾病中的至少一种的队列1受试者全血中的随时间的pDC水平(绝对浓度；细胞数/微升)：SLE、CLE、系统性硬化症、多肌炎和皮肌炎。队列1中的受试者被施用安慰剂(图14A)或VIB7734(图14B)。
图15示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，患有SLE或CLE的队列2和队列3受试者全血中的随时间的pDC水平(％)，以基线水平(使用％外周血单核细胞的值)的百分比计。队列2中的受试者被施用安慰剂(图15A)或VIB7734(图15B)。队列3中的受试者被施用安慰剂(图15C)或VIB7734(图15D)。
图16示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2和队列3受试者全血中的随时间的pDC水平(％)，以基线水平(使用绝对浓度的值)的百分比计。队列2中的受试者被施用安慰剂(图16A)或VIB7734(图16B)。队列3中的受试者被施用安慰剂(图16C)或VIB7734(图16D)。
图17示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2和队列3受试者全血中的随时间的pDC水平(细胞数/微升)。队列2中的受试者被施用安慰剂(图17A)或VIB7734(图17B)。队列3中的受试者被施用安慰剂(图17C)或VIB7734(图17D)。
图18示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2和队列3受试者全血中的随时间的pDC水平，以外周血单核细胞的百分比计。队列2中的受试者被施用安慰剂(图18A)或VIB7734(图18B)。队列3中的受试者被施用安慰剂(图18C)或VIB7734(图18D)。
图19示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)或安慰剂后，队列2受试者全血中的随时间的pDC水平的中位数。图19A：血液中随时间的绝对pDC水平的中位数，以基线水平(使用绝对浓度的值)的百分比计。图19B：血液中随时间的pDC水平的中位数(％)，以基线水平(使用％外周血单核细胞(PBMC)的值)的百分比计。图19C：血液中随时间的pDC水平的中位数，以PBMC的百分比计。图19D：血液中随时间的绝对pDC水平的中位数(细胞数/μL)。
图20示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)或安慰剂后，队列3受试者全血中的随时间的pDC水平的中位数。图20A：血液中随时间的绝对pDC水平的中位数，以基线水平(使用绝对浓度的值)的百分比计。图20B：血液中随时间的pDC水平的中位数(％)，以基线水平(使用％PBMC的值)的百分比计。图20C：血液中随时间的pDC水平的中位数(％)，以PBMC的百分比计。图20D：血液中随时间的绝对pDC水平的中位数(细胞数/μL)。
图21示出了用50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的队列2受试者全血中随时间的I型IFNGS水平(以倍数变化(图21A和图21B)或绝对评分(图21C和图21D)测量)。通过以下方法来确定I型IFNGS评分：测定取自受试者的血液中的21种I型IFN诱导型基因的总mRNA水平，确定21种I型IFN诱导型基因的mRNA水平的平均值(平均数或中位数)，将平均值相对于3种管家基因(18S rRNA、β肌动蛋白和甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH))的mRNA水平的平均值归一化，并获得复合结果。队列2中的受试者被施用VIB7734(图21A和图21C)或安慰剂(图21B和图21D)。
图22示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)或安慰剂后，队列2受试者全血中的随时间的I型IFNGS水平的中位数。图22A：血液中随时间的I型IFNGS水平的中位数(以倍数变化测量)。图22B：血液中随时间的I型IFNGS水平的中位数(以中和比率测量)。图22C：血液中随时间的I型IFNGS水平的中位数(以绝对评分测量)。
图23示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2受试者的随时间的CLASI-活动度(CLASI-A)评分(以相对于基线的变化测量)。队列2中的受试者被施用安慰剂(图23A)或VIB7734(图23B)。
图24示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2和队列3受试者的随时间的CLASI-A评分(以个体图测量)。队列2中的受试者被施用VIB7734(图24A)或安慰剂(图24B)。队列3中的受试者被施用VIB7734(图24C)或安慰剂(图24D)。
图25示出了与施用安慰剂的受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少4分的受试者比例测量)。
图26示出了与施用安慰剂的受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列3受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少4分的受试者比例测量)。
图27示出了与施用安慰剂的队列2和队列3受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，组合的队列2和队列3受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少4分的受试者比例测量)。
图28示出了与施用安慰剂的队列2和队列3受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2和3中的CLASI-A评分反应者的比例。示出了所有受试者、患有盘状红斑狼疮(DLE)的受试者和未患有DLE的受试者的比较数据。
图29示出了与施用安慰剂的受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少50％的受试者比例测量)。
图30示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2受试者的CLASI-A评分(图30A)、绝对pDC血液水平(以基线水平的百分比测量)(图30B)和I型IFNGS水平(以绝对评分测量)(图30C)随时间的比较。
图31示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)安慰剂后，队列2受试者的CLASI-A评分(图31A)、绝对pDC血液水平(以基线水平的百分比测量)(图31B)和I型IFNGS水平(以绝对评分测量)(图31C)随时间的比较。
图32示出了受试者水平探索性数据综合的概要。
图33示出了与施用安慰剂的队列2和3中的受试者(实心三角形)相比，施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)的队列2和3中的受试者(实心圆)随时间的CLASI-A评分的中位数。图33A：队列2中的受试者被多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mgVIB7734或安慰剂。图33B：队列3中的受试者被多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mgVIB7734或安慰剂。队列3受试者(150mg VIB7734治疗组为-9.5，而安慰剂治疗组为-5)在第85天的相对于基线的CLASI-A评分的中位数变化出乎意料地高于队列2受试者(50mgVIB7734治疗组为-5，而安慰剂治疗组为-2.5)。对于队列2受试者，在第85天，VIB7734组与安慰剂组之间的最小二乘平均差为0.14；95％Cl(-9.86，10.14，p＝0.977)。对于队列3受试者，在第85天，VIB7734组与安慰剂组之间的最小二乘平均差为-5.12；95％Cl(-11.49，1.24，p＝0.108)。图33C：队列2和队列3中受试者按治疗组和访视的中位数CLASI-A评分相对于基线(BL)的百分比变化。
图34示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(图34B)或安慰剂(图34A)后，队列2受试者皮肤活检中的随时间的绝对活检pDC计数(以细胞数/平方毫米测量)。
图35示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(实心圆)或安慰剂(实心三角形)后，队列2受试者皮肤活检中的随时间的活检pDC计数的中位数。图35A：队列2受试者的皮肤活检pDC计数的中位数(以第1天基线的百分比测量)。图35B：队列2受试者的皮肤活检pDC计数的中位数(以细胞数/平方毫米测量)。VIB7734治疗的队列2受试者在第85天皮肤活检pDC计数变化的中位数减少(以第1天基线的百分比以及细胞数/平方毫米测量)为87％，而安慰剂治疗的队列2受试者为47％。
图36示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(图36B)或安慰剂(图36A)后，队列2受试者皮肤活检中的随时间的活检粘液病毒蛋白A(MxA)(ROI面积的Pos％)。
图37示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(实心圆)或安慰剂(实心三角形)后，队列2受试者皮肤活检中的随时间的活检MxA的中位数(以MxA阳性面积百分比测量；ROI面积的Pos％)。
图38示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2受试者的CLASI-A评分(图38A)、绝对pDC血液水平(以细胞数/μL测量)(图38B)、血液I型IFNGS水平(以绝对评分测量)(图38C)、皮肤活检pDC计数(以细胞数/每平方毫米测量)(图38D)和血液归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)(图38E)随时间的比较。
图39示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)安慰剂后，队列2受试者的CLASI-A评分(图39A)、绝对pDC血液水平(以细胞数/μL测量)(图39B)、血液I型IFNGS水平(以绝对评分测量)(图39C)、皮肤活检pDC计数(以细胞数/每平方毫米测量)(图39D)和血液归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)(图39E)随时间的比较。
图40提供了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)5mg(队列1)、50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)或安慰剂后，在队列1、2和3中的受试者中观察到的不良反应(AE)的总结。
图41提供了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)5mg(队列1)、50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)或安慰剂后，在队列1、2和3中的受试者中观察到的特别关注的不良反应(AESI)的总结。
图42提供了本文用于队列2和队列3中的受试者的皮肤活检免疫组织化学(IHC)分析方法的概述。从每个队列2受试者的皮肤收集两个4mm钻取活检，在第2次访视(第1天)时进行基线活检，在第11次访视(第85天)时进行重复活检。将活检纵向切片。每个小组对每个活检的三个切片(左、中和右)进行分析。进行三轮染色以评估pDC(BDCA+/ILT7+细胞)、IFN活性(MxA+像素)和炎性浸润(CD45+细胞)。
图43示出了使用用于队列2和队列3受试者的皮肤活检IHC分析方法定量pDC和CD45+细胞的分析策略。靠近真皮-表皮交界处(DEJ)的500微米真皮(红色轮廓，图43A)用作pDC和CD45+细胞的分析区域。任何表皮突起都被排除在分析区域之外(图43A)。测量pDC(BDCA+/ILT7+细胞)和CD45+细胞的数量/平方毫米作为读数。使用一致的RGB值来识别阳性细胞(除了在极少数情况下，其中背景染色影响这些设置的检测)。图43B示出了没有阳性细胞检测算法的分析区域。图43C示出了具有阳性细胞检测算法的分析区域。红色表示阳性细胞；蓝色表示阴性细胞。
图44示出了使用用于队列2和队列3受试者的皮肤活检IHC分析方法定量粘液病毒蛋白A(MxA)的干扰素(IFN)活性的分析策略。表皮的整个长度(红色轮廓，图44A)用作MxA的分析区域。测量MxA阳性面积百分比(％ROI MxA+)作为读数。使用一致的RGB值来识别阳性像素。图44B示出了没有阳性像素检测算法的分析区域。图44C示出了具有阳性像素检测算法的分析区域。红色表示阳性像素；蓝色表示阴性像素。
图45示出，对于队列2中的每个受试者，在基线pDC(BDCA+/ILT7+细胞)、MxA+像素和CD45+细胞的数量方面存在极小的活检内可变性。在基线时的每个皮肤活检中都观察到高度的一致性。图45A：来自皮肤活检中心切片的pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图45B：来自皮肤活检中心切片的MxA+像素。图45C：来自皮肤活检中心切片的CD45+细胞。图45D：来自皮肤活检右切片的pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图45E：来自皮肤活检右切片的MxA+像素。图45F：来自皮肤活检右切片的CD45+细胞。图45G：来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线pDC(以细胞数/平方毫米测量)。图45H：来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线MxA+像素(以％ROI MxA+测量)。图45I：来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线CD45+细胞(以细胞数/平方毫米测量)。图中的每个点(图45G-I)表示单个切片(每个活检分析2-3个切片)。
图46示出，在队列2中的受试者中，在基线pDC、MxA+像素和CD45+细胞的数量方面存在显著的活检间可变性。在基线时的皮肤活检之间观察到高度的可变性。图46A：来自皮肤活检的高pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图46B：来自皮肤活检的高MxA+像素。图46C：来自皮肤活检的高CD45+细胞。图46D：来自皮肤活检的中等pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图46E：来自皮肤活检的中等MxA+像素。图46F：来自皮肤活检的中等CD45+细胞。图46G：来自皮肤活检的低pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图46H：来自皮肤活检的低MxA+像素。图46I：来自皮肤活检的低CD45+细胞。图46J：来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线pDC(以细胞数/平方毫米测量)。受试者表现出高基线pDC(n＝5，>100个pDC/mm2)、中等基线pDC(n＝3，10-100个pDC/mm2)或低基线pDC(n＝4，<10个pDC/mm2)。图46K：来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线MxA+像素(以％ROI MxA+测量)。受试者表现出高基线MxA+像素(n＝5，>50％MxA+)、中等基线MxA+像素(n＝4，5％-50％MxA+)或低基线MxA+像素(n＝2，<5％MxA+)。图46L：来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线CD45+细胞(以细胞数/平方毫米测量)。受试者表现出高基线CD45+细胞(n＝3，>2000个CD45+细胞/mm2)、中等基线CD45+细胞(n＝4，500-2000个CD45+细胞/mm2)或低基线CD45+细胞(n＝5，<500个CD45+细胞/mm2)。
图47示出，虽然来自用安慰剂治疗的队列2受试者的皮肤活检中的pDC(图47A)、MxA+像素(图47B)和CD45+细胞(图47C)的减少(通过相对于基线的百分比变化测量)存在高反应可变性，但在来自用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的队列2受试者的皮肤活检中观察到pDC、MxA+像素和CD45+细胞的更一致的减少。
图48示出了皮肤活检IHC分析方法不包括活性阈值。图48A：来自用安慰剂或本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的队列2受试者的皮肤活检样品中MxA相对于基线的百分比变化。灰色轮廓表示MxA的数值倍数显著增加的皮肤活检样品。然而，总体而言，在来自队列2受试者的皮肤活检样品中观察到维持非常低水平的MxA。图48B：在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)安慰剂后，对来自队列2受试者的皮肤活检进行IHC。图48C：在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg VIB7734后，对来自队列2受试者的皮肤活检进行IHC。
图49示出了在队列2受试者的皮肤活检中高基线pDC数/IFN活性与对VIB7734的反应之间的关系。VIB7734治疗组：队列2受试者被多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mgVIB7734，在5名反应者中的4名的皮肤活检中观察到高基线pDC数和高IFN活性。无反应者在皮肤活检样品中具有低基线pDC或IFN活性。安慰剂组：多次皮下给药(每4周一次，共3剂)安慰剂的队列2受试者表现出在pDC或IFN活性与反应之间没有明显的关系。
图50示出了与施用安慰剂的受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列2受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少7分的受试者比例测量)。
图51示出了与施用安慰剂的受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列3受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少7分的受试者比例测量)。
图52示出了与施用安慰剂的队列2和队列3受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，组合的队列2和队列3受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少7分的受试者比例测量)。
图53示出了与施用安慰剂的受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列3受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少50％的受试者比例测量)。
图54示出了与施用安慰剂的队列2和队列3受试者相比，在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，组合的队列2和队列3受试者的随时间的CLASI-A评分(以相对于基线降低至少50％的受试者比例测量)。
图55示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)或安慰剂后，队列3受试者全血中的随时间的归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)。图55A：用VIB7734治疗的队列3受试者全血中的随时间的归一化I型IFNGS水平。图55B：用安慰剂治疗的队列3受试者全血中的随时间的归一化I型IFNGS水平。图55C：用VIB7734(实心圆)或安慰剂(实心三角形)治疗的队列3受试者全血中的随时间的归一化I型IFNGS水平的中位数。
图56示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(图56B)或安慰剂(图56A)后，队列3受试者皮肤活检中的随时间的绝对活检pDC计数(以细胞数/平方毫米测量)。
图57示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(实心圆)或安慰剂(实心三角形)后，队列3受试者皮肤活检中的随时间的活检pDC计数的中位数(以细胞数/平方毫米测量)。用VIB7734治疗的队列3受试者在第85天的皮肤活检pDC计数的中位数(以第1天基线的百分比测量)减少了99％。相比之下，用安慰剂治疗的队列3受试者在第85天的皮肤活检pDC计数的中位数(以第1天基线的百分比测量)增加了11％。
图58示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(图58B)或安慰剂(图58A)后，队列3受试者皮肤活检中的随时间的活检粘液病毒蛋白A(MxA)(ROI面积的Pos％)。
图59示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(实心圆)或安慰剂(实心三角形)后，队列3受试者皮肤活检中的随时间的活检MxA的中位数(以MxA阳性面积百分比、ROI面积的中位数Pos％测量)。用VIB7734治疗的队列3受试者的皮肤活检MxA的中位数从89.7％的基线值降低到第85天的1.1％。相比之下，对于安慰剂治疗的队列3受试者，皮肤活检MxA的中位数从1.9％的基线值增加到第85天的17.7％。
图60示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(图60B)或安慰剂(图60A)后，队列2受试者皮肤活检中的随时间的绝对活检CD45计数(以CD45+细胞数/平方毫米测量)。
图61示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(实心圆)或安慰剂(实心三角形)后，队列2受试者皮肤活检中的随时间的活检CD45计数的中位数(以CD45+细胞数/平方毫米测量)。用VIB7734治疗的队列2受试者的皮肤活检CD45计数的中位数从第1天1119的基线值降低到第85天的280。相比之下，用安慰剂治疗的队列2受试者的皮肤活检CD45计数的中位数从第1天537的基线值降低到第85天的492。
图62示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(图62B)或安慰剂(图62A)后，队列3受试者皮肤活检中的随时间的绝对活检CD45计数(以CD45+细胞数/平方毫米测量)。
图63示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)(实心圆)或安慰剂(实心三角形)后，队列3受试者皮肤活检中的随时间的活检CD45计数的中位数(以CD45+细胞数/平方毫米测量)。用VIB7734治疗的队列3受试者的皮肤活检CD45计数的中位数从707的基线值降低到第85天的513。相比之下，用安慰剂治疗的队列3受试者的皮肤活检CD45计数从897的基线值降低到第85天的666。
图64示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列3受试者的CLASI-A评分(图64A)、绝对pDC血液水平(以细胞数/μL测量)(图64B)、血液归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)(图64C)和皮肤活检pDC计数(以细胞数/每平方毫米测量)(图64D)随时间的比较。
图65示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)安慰剂后，队列3受试者的CLASI-A评分(图65A)、绝对pDC血液水平(以细胞数/μL测量)(图65B)、血液归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)(图65C)和皮肤活检pDC计数(以细胞数/每平方毫米测量)(图65D)随时间的比较。
图66示出，虽然分别用50mg和150mg VIB7734治疗的队列2和队列3受试者皮肤中的pDC(以相对于第1天基线的细胞数百分比变化测量)减少，但队列3受试者的pDC耗竭更一致。图66A：VIB7734治疗的队列2和VIB7734治疗的队列3受试者的皮肤活检中pDC减少的比较。在基线时具有>10个pDC/mm2的皮肤样品中，pDC相对于基线的平均百分比减少对于VIB7734治疗的队列3受试者为96.31％，而对于VIB7734治疗的队列2受试者为85.45％。图66B：VIB7734治疗的队列2和VIB7734治疗的队列3受试者的皮肤活检中MxA+像素(以相对于第1天基线的百分比变化测量)减少的比较。在基线时具有>5％MxA+的皮肤样品中，MxA+像素相对于第1天基线的平均百分比减少对于VIB7734治疗的队列3受试者为76.84％，而对于VIB7734治疗的队列2受试者为67.44％。
图67示出了在队列3受试者的皮肤活检中高基线pDC数与对VIB7734的反应之间的关系。图67A：VIB7734治疗组：队列3受试者多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mgVIB7734。图67B：安慰剂组：队列3受试者多次皮下给药(每4周一次，共3剂)安慰剂。VIB7734降低了队列3受试者皮肤中的pDC水平。
图68示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)后，队列3受试者的随时间的CLASI-活动度(CLASI-A)评分(以相对于第1天基线的变化测量)。队列3中的受试者被施用安慰剂(图68A)或VIB7734(图68B)。
图69示出，对于队列3中的每个受试者，在基线pDC(BDCA+/ILT7+细胞)、MxA+像素和CD45+细胞的数量方面存在极小的活检内可变性。在基线时的每个皮肤活检中都观察到高度的一致性。图69A：来自皮肤活检中心切片的pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图69B：来自皮肤活检中心切片的MxA+像素。图69C：来自皮肤活检中心切片的CD45+细胞。图69D：来自皮肤活检右切片的pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图69E：来自皮肤活检右切片的MxA+像素。图69F：来自皮肤活检右切片的CD45+细胞。图69G：来自队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线pDC(以细胞数/平方毫米测量)。图69H：来自队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线MxA+像素(以％ROI MxA+测量)。图69I：来自队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线CD45+细胞(以细胞数/平方毫米测量)。图中的每个点(图69G-I)表示单个切片(每个活检分析2-3个切片)。
图70示出，在队列3中的受试者中，在基线pDC、MxA+像素和CD45+细胞的数量方面存在显著的活检间可变性。图70A：来自皮肤活检的高pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图70B：来自皮肤活检的高MxA+像素。图70C：来自皮肤活检的高CD45+细胞。图70D：来自皮肤活检的中等pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图70E：来自皮肤活检的中等MxA+像素。图70F：来自皮肤活检的中等CD45+细胞。图70G：来自皮肤活检的低pDC(BDCA+/ILT7+细胞)。图70H：来自皮肤活检的低MxA+像素。图70I：来自皮肤活检的低CD45+细胞。与队列2中的受试者相比，在队列3中的受试者中观察到基线pDC和MxA信号略有增加。图70J：来自队列2和队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线pDC(以细胞数/平方毫米测量)。队列2中的受试者表现出高基线pDC(n＝5，>100个pDC/mm2)、中等基线pDC(n＝3，10-100个pDC/mm2)或低基线pDC(n＝4，<10个pDC/mm2)。队列3中的受试者表现出高基线pDC(n＝5，>100个pDC/mm2)、中等基线pDC(n＝3，10-100个pDC/mm2)或低基线pDC(n＝2，<10个pDC/mm2)。图70K：来自队列2和队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线MxA+像素(以％ROI MxA+测量)。队列2中的受试者表现出高基线MxA+像素(n＝5，>50％MxA+)、中等基线MxA+像素(n＝4，5％-50％MxA+)或低基线MxA+像素(n＝2，<5％MxA+)。队列3中的受试者表现出高基线MxA+像素(n＝6，>50％MxA+)或低基线MxA+像素(n＝4，<5％MxA+)。图70L：来自队列2和队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线CD45+细胞(以细胞数/平方毫米测量)。队列2中的受试者表现出高基线CD45+细胞(n＝3，>2000个CD45+细胞/mm2)、中等基线CD45+细胞(n＝5，500-2000个CD45+细胞/mm2)或低基线CD45+细胞(n＝4，<500个CD45+细胞/mm2)。队列3中的受试者表现出高基线CD45+细胞(n＝2，>2000个CD45+细胞/mm2)、中等基线CD45+细胞(n＝4，500-2000个CD45+细胞/mm2)或低基线CD45+细胞(n＝4，<500个CD45+细胞/mm2)。
图71示出，在第85天，对于群组3中的受试者，没有观察到安慰剂对活检标志物的明显影响。图71A：pDC细胞(以相对于基线的百分比变化测量)。图71B：MxA+像素(以相对于基线的百分比变化测量)。图71C：CD45+细胞(以相对于基线的百分比变化测量)。
图72示出，与安慰剂治疗的队列3受试者相比，对于用150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的队列3中的大多数受试者，在第85天观察到pDC细胞(以相对于基线的百分比变化测量；图72A)和IFN活性(MxA+像素；以相对于基线的百分比变化测量；图72B)的显著降低以及炎性浸润(CD45+细胞；以相对于基线的百分比变化测量；图72C)的略微减少。图72A：观察到与安慰剂治疗的队列3受试者的pDC平均增加12.24+/-37.69(平均值+/-SEM)相比，VIB7734治疗的队列3受试者的pDC平均减少80.98+/-12.12(平均值+/-SEM)。图72B：观察到与安慰剂治疗的队列3受试者的MxA+像素平均增加773.6+/-866.33(平均值+/-SEM)相比，VIB7734治疗的队列3受试者的MxA+像素平均减少58.29+/-17.88(平均值+/-SEM)。
图73示出，与安慰剂治疗的队列3受试者相比，对于用150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的队列3(在基线时具有中等或高信号)中的几乎所有受试者，在第85天观察到pDC细胞(以第1天基线的百分比测量；图73A)和IFN活性(MxA+像素；以第1天基线的百分比测量；图73B)的显著降低以及炎性浸润(CD45+细胞；以第1天基线的百分比测量；图73C)的减少。圆圈表示来自具有低基线活性的队列3受试者的样品。
图74示出了用150mg本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)或安慰剂治疗的队列3中每个受试者在第85天(d85)的pDC相对于基线(BL)的变化。图74A：使用皮肤活检IHC分析方法，用安慰剂治疗的队列3(n＝2；10030044和10010052)中的受试者的pDC(以BDCA2+/ILT7+细胞测量)的变化。图74B：使用皮肤活检IHC分析方法，用150mg VIB7734治疗的队列3(n＝8；30010047、10120061、20070048、200020040、10010056、10120055、20060038和10140059)中的受试者的pDC(以BDCA2+/ILT7+细胞测量)的变化。图74C：在第85天，与基线相比，VIB7734治疗的队列3受试者中的每一个和安慰剂治疗的队列3受试者中的每一个的皮肤活检中pDC的变化(以细胞数/平方毫米测量)。
图75示出了用50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的队列2和队列3中的受试者的组合数据。与用安慰剂治疗的队列2和3中的受试者相比，VIB7734显著减少了用VIB7734治疗的队列2和3中的受试者皮肤中的pDC。图75A：与VIB7734治疗的队列2和3(n＝16)受试者相比，安慰剂治疗的队列2和3(n＝6)受试者的pDC(以第1天基线的百分比测量)的变化。队列2和3中安慰剂治疗的受试者的pDC平均值和中位数降低分别为11.38％和12.73％，而队列2和3中VIB7734治疗的受试者的pDC平均值和中位数降低分别为71.82％和95.3％。图75B：与VIB7734治疗的队列2和3(n＝16)受试者相比，安慰剂治疗的队列2和3(n＝6)受试者的MxA+像素(以第1天基线的百分比测量)的变化。队列2和3中安慰剂治疗的受试者的MxA+像素平均值和中位数增加分别为269.3％和38.8％，而队列2和3中VIB7734治疗的受试者的pDC平均值和中位数降低分别为52.9％和84.48％。图75C-D：在基线时皮肤中具有≥2个pDC/mm2的所有VIB7734治疗的受试者中，进行皮肤活检中pDC和MxA(图75C)或CD45+细胞(图75D)从基线到第85天的百分比变化之间的相关性。示出了斯皮尔曼相关性(Spearman correlation)。
图76示出，虽然分别用50mg和150mg VIB7734治疗的队列2和队列3受试者皮肤中的pDC(以细胞数/平方毫米测量)减少，但队列3受试者的pDC耗竭更一致。图76A：与第1天基线相比，第85天所有VIB7734治疗的队列2受试者(n＝8)的皮肤活检中pDC的减少。图76B：与第1天基线相比，第85天所有VIB7734治疗的队列3受试者(n＝8)的皮肤活检中pDC的减少。图76C：与第1天基线相比，第85天VIB7734治疗的队列2受试者没有低基线pDC或IFN活性的皮肤活检样品(n＝6)的皮肤活检中pDC的减少。图76D：与第1天基线相比，第85天VIB7734治疗的队列3受试者没有低基线pDC或IFN活性的皮肤活检样品(n＝6)的皮肤活检中pDC的减少。
图77示出了用5mg(队列1)、50mg(队列2)或150mg(队列3)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的队列1、队列2和队列3受试者全血中循环pDC水平的中位数(以％PBMC细胞测量)。与安慰剂治疗的受试者中循环pDC水平的中位数相比，在队列1、队列2和队列3中的VIB7734治疗的受试者中，循环pDC水平的中位数在第1周时明显降低，并且持续到至少第85天。
图78示出了组织驻留pDC的耗竭驱动患有皮肤狼疮的受试者皮肤中I型IFN活性的降低。图78A-C：在基线和研究第85天，在皮肤钻取活检中定量MxA染色，其被定义为MxA阳性的感兴趣区域面积的百分比。每条线表示一个单独的受试者。图上的每个点表示活检内连续切片的平均百分比MxA+。
图79示出了高基线血液I型IFN活性与对本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)的较高反应率相关。图79A：示出了安慰剂和VIB7734治疗的具有升高的基线I型IFNGS评分(定义为健康供体平均值的4倍或更高)的受试者(队列1、2和3)在指定时间点全血I型IFNGS的百分比变化。图上方示出了每组具有升高的基线IFN活性的受试者的数量(队列1，n＝3；队列2，n＝6；队列3，n＝8)。示出了中位数和四分位数范围。图79B：示出了安慰剂和VIB7734治疗的具有升高的基线IFNα水平(定义为高于健康供体平均值的两个标准偏差)的受试者的血清IFNα水平的百分比变化。示出了中位数和四分位数范围。图79C：VIB7734治疗的受试者的基线全血I型IFNGS与血清IFNα蛋白水平之间的相关性。黑点表示分类为CLASI反应者(定义为CLASI降低4分或更多)的受试者，红点表示CLASI无反应者。虚线表示高于I型IFNGS的健康供体平均值的4倍变化(相对于健康供体平均值的倍数变化)和高于IFNα蛋白的健康供体平均值的2个标准偏差。
具体实施方式
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语均具有与主题所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过援引以其全文明确并入。在发生冲突的情况下，以本说明书(包括定义)为准。另外，本文所述的材料、方法和实例仅是说明性的并且不旨在是限制性的。
如本说明书和所附权利要求中所用，除非上下文另有明确说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代。
范围可以在本文中表示为从“约”一个特定值和/或到“约”另一个特定值。当表达这样一个范围时，另一个实施例包括从一个特定值和/或到另一特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表达为近似值时，应当理解，特定值形成另一个实施例。还将理解，每个范围的端点相对于另一端点，以及独立于另一端点都是显著的。如本文所用的术语“约”是指在特定用途的上下文中相对于所述数值为正负15％的范围。例如，约10将包括8.5至11.5的范围。术语“约”还解释了值测量中的典型误差或不精确性。
本披露提供了用ILT7结合蛋白治疗受试者的自身免疫性障碍的方法。在某些方面，这些方法治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍，其中确定该受试者具有高血液I型干扰素基因标记(IFNGS)水平。本披露还提供了用于减少有需要的受试者的IFNGS的方法。在一些方面，这些方法包括向受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。在一些方面，当受试者的I型IFNGS相对于正常受试者的I型IFNGS升高时，将ILT7结合蛋白施用于受试者。在具体的实施例中，例如，将ILT7结合蛋白施用于相对于正常受试者的I型IFNGS具有升高的基线I型IFNGS的受试者。在某些方面，这些方法选择患者以用ILT7结合蛋白进行治疗，该方法包括：(i)确定患者的基线血液I型IFNGS水平，以及(ii)选择具有高基线血液I型IFNGS水平的那些患者用ILT7结合蛋白进行治疗。在特定方面，ILT7结合蛋白是抗体。在某些方面，抗体是VIB7734。
在某些实施例中，I型IFNGS是21基因标记。在一些实施例中，受试者的I型IFNGS相对于治疗前的正常评分升高至少1.5倍。在一些实施例中，受试者的I型IFNGS相对于治疗前的正常评分升高至少2倍。在某些实施例中，在治疗前具有升高的I型IFNGS的受试者对治疗更敏感。在一些实施例中，相对于在用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白治疗之前的正常评分，I型IFNGS为至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约11倍、至少约12倍或更高。在特定实施例中，组织I型IFNGS由皮肤活检确定。在其他实施例中，使用IFN诱导型粘液病毒蛋白A(MxA)免疫组织化学(IHC)试验测定组织I型IFNGS。在进一步的实施例中，使用皮肤胶带剥离、RNA分离和基因表达谱(https://dermtech.com/wp-content/uploads/Lupus-Reference.pdf)测定表皮中的IFN诱导型基因表达。
如本文所用，当与IFGNS结合使用时，术语“高”或“升高的”意指与正常I型IFNGS相比，I型IFNGS的倍数变化为至少约1.1至约1000。“正常I型IFNGS”是指从正常受试者获得的I型IFNGS。当与I型IFNGS结合使用时，术语“高”或“升高的”可互换使用。在一些实施例中，当本文所述方法中使用的I型IFNGS相对于正常受试者的I型IFNGS为至少约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90或100倍时，I型IFNGS为“高”或“升高的”。在具体实施例中，当I型IFNGS相对于正常I型IFNGS升高至少约4倍时，应用本文所述的治疗方法。
在某些疾病(例如，自身免疫性疾病)中，活化的pDC会分泌大量的I型和III型干扰素(IFN)。I型IFN是一大类有助于调节免疫系统的IFN蛋白。哺乳动物IFN称为IFNα、IFNβ、IFNω、IFNε、IFNκ、IFNτ、IFNδ、IFNζ和IFNυ。在具体实施例中，产生I型IFNGS的I型IFN是IFNα。I型IFN蛋白水平不能以可靠的方式直接测量；然而，IFN诱导型基因的测量作为1型IFN蛋白水平的可靠替代物。这些I型IFN诱导型基因的表达水平可在生物样品(例如血液、皮肤、骨骼肌等)中测量，并作为称为“I型干扰素基因标记”或“I型IFNGS”或“IFNGS”的复合结果进行分析。
在某些实施例中，I型IFNGS包括生物样品中所有I型IFN诱导型基因的表达水平。在其他实施例中，I型IFNGS包括生物样品中I型IFN诱导型基因亚组的表达水平。
在某些实施例中，I型IFNGS通过测定生物样品中至少2种、至少5种、至少10种、至少15种、至少20种、至少25种、至少30种、至少40种、至少50种、至少60种、至少70种、至少80种、至少90种、至少100种、至少200种、至少300种、至少400种或至少500种I型IFN诱导型基因的表达水平来确定。在一些实施例中，I型IFNGS包括两种或更多种I型IFN诱导型基因的总体表达水平。在某些实施例中，两种或多种I型干扰素(IFN)诱导型基因包括但不限于选自SPATS2L、EPSTI1、HERC5、IFI27、IFI44、IFI44L、IFI6、IFIT1、IFIT3、ISG15、LAMP3、LY6E、MX1、OAS1、OAS2、OAS3、PLSCR1、RSAD2、RTP4、SIGLEC1或USP18的两种或更多种基因。在某些情况下，I型IFNGS通过测定SPATS2L、EPSTI1、HERC5、IFI27、IFI44、IFI44L、IFI6、IFIT1、IFIT3、ISG15、LAMP3、LY6E、MX1、OAS1、OAS2、OAS3、PLSCR1、RSAD2、RTP4、SIGLEC1和USP18的总体表达水平来确定。这些基因符号在本领域中是众所周知的，并且是指所列基因的人和非人直向同源物。
表1：基因符号及其相关名称。
Figure BDA0003784458720000241
Figure BDA0003784458720000251
在某些实施例中，I型干扰素(IFN)诱导型基因的表达水平通过测量生物样品中I型干扰素(IFN)诱导型基因的DNA水平(例如互补DNA或cDNA水平)来确定。在某些实施例中，I型干扰素(IFN)诱导型基因的表达水平通过测量生物样品中I型干扰素(IFN)诱导型基因的信使RNA(mRNA)水平来确定。在某些方面，I型IFNGS包括生物样品中所有I型IFN诱导型基因的mRNA水平。在其他方面，I型IFNGS包含取自受疾病(例如，自身免疫性疾病)影响、可能受影响或怀疑受影响的受试者的生物样品中I型IFN诱导型基因亚组的mRNA水平。在某些方面，I型IFNGS通过测定生物样品中两种或更多种I型干扰素(IFN)诱导型基因的mRNA水平来确定。在具体方面，I型IFNGS通过测定生物样品中21种I型干扰素(IFN)诱导型基因的mRNA水平来确定。在某些实施例中，生物样品是测试生物样品。在其他实施例中，生物样品是正常生物样品。
在某些方面，在取自受试者的测试生物样品中测量I型IFNGS。在其他方面，在取自受试者的测试生物样品中测量pDC。生物样品包括但不限于血液、痰、唾液、皮肤细胞、皮肤活检样品、肾细胞、肺细胞、肝细胞、心脏细胞、脑细胞、神经组织、甲状腺细胞、眼细胞、骨骼肌细胞、软骨、骨组织、气道细胞和培养细胞。在某些实施例中，生物样品是血液。在其他实施例中，生物样品是组织。在更具体的实施例中，样品是包含皮肤细胞的组织。在其他方面，样品是皮肤活检样品。
“测试生物样品”意指从受疾病或病症诸如自身免疫性障碍影响、可能受影响或怀疑受影响的个体和/或从表现出其一种或多种症状诸如但不限于升高的I型IFNGS的个体获得的任何生物样品。
“正常生物样品”是指从正常受试者获得的任何生物样品。
如本文所用，术语“受试者”是指需要对其进行诊断、预后或治疗的任何个体，例如人或非人哺乳动物。术语“受试者”可意指受疾病例如自身免疫性疾病或病症影响、可能受影响或怀疑受影响的人或非人哺乳动物。术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用。尽管本文提供的ILT7结合蛋白组合物主要涉及适合施用于人的组合物，但是本领域技术人员将理解这样的组合物通常适合施用于各种受试者。在某些方面，受试者是哺乳动物。哺乳动物包括灵长类动物，诸如人、猴子、黑猩猩和猿，以及非灵长类动物，诸如家养动物，包括实验室动物(诸如兔子和啮齿动物，例如豚鼠、大鼠或小鼠)以及家庭宠物和农场动物(例如，猫、狗、猪、牛、绵羊、山羊、马、兔子)，以及非家养动物，诸如野生动物、鸟类、爬行动物、鱼类，等等。
如本文所用，术语“有需要的受试者”包括可或将受益于本文所述方法的受试者。需要治疗的受试者包括但不限于已经患有病症或障碍的那些、易于患有病症或障碍的那些、怀疑患有病症或障碍的那些，以及要预防、改善或逆转病症或障碍的那些。
如本文所用，术语“正常受试者”是指未受任何疾病影响或怀疑受疾病或病症影响的任何健康个体，例如人或非人哺乳动物。术语“正常受试者”还指在表现出与自身免疫性障碍相关的任何症状(诸如升高的I型IFNGS)之前的个体，例如人或非人哺乳动物。正常受试者可以是与需要治疗的受试者相同的受试者，在受试者表现出自身免疫性障碍的任何症状之前，诸如但不限于升高的I型IFNGS。在其他实施例中，正常受试者和需要治疗的受试者是两个不同的个体。
本披露提供了治疗具有升高的I型IFNGS的受试者的方法，该方法包括施用本文所述的ILT7结合蛋白。当患有自身免疫性障碍时，患者可能表现出升高的I型IFNGS。因此，本披露提供了当受试者表现出升高的I型IFNGS时治疗自身免疫性障碍的方法。在一些实施例中，自身免疫性障碍在其他方面是无症状的。在某些方面，这些方法选择患者以用ILT7结合蛋白进行治疗，该方法包括：(i)确定患者的基线血液I型IFNGS水平，以及(ii)选择具有高基线血液I型IFNGS水平的那些患者用ILT7结合蛋白进行治疗。
如本文所用，“治疗”描述了为了对抗疾病、病症或障碍而对受试者进行的管理和护理，并且包括施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白以减轻疾病、病症或障碍的症状或并发症，或消除疾病、病症或障碍。因此，术语“治疗”或“治疗”是指治疗措施和预防措施，其中目的是预防、减缓(减轻)或改善疾病(例如，自身免疫性疾病)的进展。有益的或期望的临床结果包括但不限于症状的减轻、疾病程度的减轻、疾病状态的稳定(即，不恶化)、疾病进展的延迟或减缓、疾病状态的改善或缓和，以及疾病的逆转(部分或全部)。术语“治疗”还可以包括体外细胞或动物模型的治疗。
在一些实施例中，治疗包括向有需要的受试者或怀疑需要治疗的受试者应用或施用在本文所述的方法中使用的ILT7结合蛋白，或者向来自受试者的分离的组织或细胞系应用或施用在本文所述的方法中使用的ILT7结合蛋白，其中该受试者患有疾病、疾病症状或对疾病(例如，自身免疫性疾病)的易感性。当受试者因过多的pDC数量或活性而表现出病症或疾病的症状时，受试者可能被怀疑需要本文所述的治疗，即使尚未确定正式的诊断，例如受试者患有SLE或CLE。在某些方面，怀疑需要治疗的受试者具有高基线血液I型IFNGS水平。在其他实施例中，治疗还旨在包括向有需要的受试者或怀疑需要治疗的受试者应用或施用包含在本文所述的方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物，或者向来自受试者的分离的组织或细胞系应用或施用包含在本文所述的方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物，该受试者患有疾病、疾病症状或对疾病(例如，自身免疫性疾病)的易感性。
当受试者表现出升高的I型IFNGS时可以治疗的自身免疫性障碍的示例包括但不限于系统性红斑狼疮(SLE)；狼疮性肾炎；皮肤红斑狼疮(CLE)；干燥综合征；炎性肌炎，诸如皮肌炎、包涵体肌炎、青少年肌炎和多肌炎；系统性硬化症；糖尿病；桥本氏病；自身免疫性肾上腺功能不全；纯红细胞再生障碍性贫血；多发性硬化症；风湿性心脏炎；银屑病；银屑病关节炎；类风湿性关节炎；慢性炎症；慢性风湿病；白癜风；斑秃；化脓性汗腺炎；乳糜泻；急性和慢性移植物抗宿主病(GVHD)；血管炎症；心肌梗塞；以及1型干扰素病。在某些方面，自身免疫性疾病是SLE。在进一步的方面，自身免疫性疾病是CLE。在某些方面，自身免疫性疾病是狼疮，但不是盘状红斑狼疮(DLE)。在其他方面，自身免疫性疾病是干燥综合征。在另外的方面，自身免疫性疾病是皮肌炎。在其他方面，自身免疫性疾病是多肌炎。在其他方面，自身免疫性疾病是系统性硬化症。在进一步的其他方面，自身免疫性疾病是化脓性汗腺炎。在更进一步的其他方面，自身免疫性疾病是白癜风。
在更多的实施例中，本披露的方法可用于通过监测I型IFNGS和/或活化的pDC的水平来监测病症或障碍的治疗有效性。如上所述，自身免疫性病症通常以升高的I型IFNGS和/或升高的pDC为标志，因此监测治疗有效性可包括监测I型IFNGS和/或pDC水平。
因此，在某些实施例中，本披露提供了一种监测自身免疫性障碍或病症的治疗有效性的方法，该方法包括以下步骤：(a)测量取自受试者的生物样品中的I型干扰素基因标记(IFNGS)，以获得I型IFNGS的基线值；以及(b)测量施用治疗后取自受试者的生物样品中的I型IFNGS，其中该治疗包括施用ILT7结合蛋白，并且其中步骤(b)中I型IFNGS与基线值相比降低表明该治疗对受试者有效。
在某些实施例中，治疗导致I型IFNGS与基线值相比降低。在某些实施例中，I型IFNGS与基线值相比降低的范围为约1％至约99％。在某些方面，I型IFNGS与基线值相比降低至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％或至少约99％。在一些方面，I型IFNGS与基线值相比降低至少约30％。在具体方面，I型IFNGS与基线值相比降低至少约50％。
在某些实施例中，测试生物样品中的I型IFNGS相对于正常生物样品的升高或需要用ILT7结合蛋白治疗的受试者中的I型IFNGS相对于正常受试者的升高是至少约1.1至约1000倍的变化。因此，在一些实施例中，测试生物样品中I型IFNGS相对于正常生物样品或需要用ILT7结合蛋白治疗的受试者中I型IFNGS相对于正常受试者升高至少约1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90或100倍。在具体实施例中，测试生物样品中I型IFNGS相对于正常生物样品或需要用ILT7结合蛋白治疗的受试者中I型IFNGS相对于正常受试者升高至少约4倍。
通常，术语“ILT7结合蛋白”、“ILT7结合分子”和“本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白”可互换使用，是指特异性结合免疫球蛋白样转录物7(ILT7)的蛋白或分子。术语蛋白和肽在本文中可以互换使用。在一些实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白结合全长ILT7。在其他实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白结合ILT7片段。在某些方面，ILT7结合蛋白所结合的ILT7片段包含ILT7的细胞外结构域。
在某些实施例中，本文披露的方法中使用的ILT7结合蛋白与任何哺乳动物ILT7结合。在具体方面，本文披露的方法中使用的ILT7结合蛋白结合人ILT7或其片段，例如人ILT7的细胞外部分。在其他方面，本文披露的方法中使用的ILT7结合蛋白结合食蟹猴ILT7或其片段，例如食蟹猴ILT7的细胞外部分。
ILT7结合蛋白的示例在PCT公布号WO 2017/156298中进行了披露和描述，该公布通过援引以其全文并入本文。在某些方面，IL7T结合蛋白所结合的ILT7位于pDC上。在具体实施例中，ILT7结合蛋白是VIB7734抗体或其片段。VIB7734在PCT公布号WO 2017/156298中进行了描述，该公布通过援引以其全文并入本文。具体地，VIB7734在PCT公布号WO 2017/156298中被鉴定为克隆ILT70137。在另一个实施例中，VIB7734也是包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)的抗体。
在某些实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)。在其他实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白包含SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)。在某些方面，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)。在其他方面，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白包含与SEQ ID NO:1至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的VH和/或与SEQ ID NO:2至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的VL。
在更具体的实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白包含分别具有SEQ IDNO:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3。在其他方面，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白包含分别与SEQ ID NO:3、4、5、6、7和8至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3。
在某些实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白可以含有岩藻糖部分或者它们可以是无岩藻糖基化的。
不必受理论的束缚，本文所述的方法中使用的ILT7结合蛋白诱导针对浆细胞样树突状细胞(pDC)的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性，从而耗竭pDC。在某些方面，ILT7结合蛋白介导的ADCC引起循环pDC减少。在某些方面，ILT7结合蛋白介导的ADCC引起局部或组织pDC减少。在某些实施例中，pDCS减少的组织包括但不限于皮肤细胞、皮肤活检样品、肾细胞、肺细胞、肝细胞、心脏细胞、脑细胞、神经组织、甲状腺细胞、眼细胞、骨骼肌细胞、软骨、骨组织和气道细胞。在一些方面，组织是皮肤活检样品。在更具体的方面，施用ILT7结合蛋白将引起皮肤pDC减少。
通常，pDC不存在于皮肤组织中，而未成熟的pDC通常仅存在于血液、胸腺淋巴组织、扁桃体和肺组织中。因此，皮肤活检样品中pDC的存在表明pDC被募集到皮肤的异常状况。因此，本披露的方法包括向需要治疗以受试者皮肤中存在pDC为标志的病症的受试者施用ILT7结合蛋白。本披露的方法包括通过向需要治疗的受试者施用ILT7结合蛋白来降低受试者皮肤中的pDC水平。
在一些实施例中，受试者在治疗之前在皮肤组织中具有升高的或高水平的pDC。在某些实施例中，在治疗之前在皮肤组织中具有高pDC水平的受试者对治疗更敏感。在某些方面，皮肤组织中具有高pDC水平的受试者的pDC水平为至少约50个pDC/mm2皮肤组织、至少约60个pDC/mm2皮肤组织、至少约70个pDC/mm2皮肤组织、至少约80个pDC/mm2皮肤组织、至少约90个pDC/mm2皮肤组织、至少约100个pDC/mm2皮肤组织、至少约110个pDC/mm2皮肤组织、至少约120个pDC/mm2皮肤组织、至少约125个pDC/mm2皮肤组织、至少约150个pDC/mm2皮肤组织、至少约175个pDC/mm2皮肤组织、至少约200个pDC/mm2皮肤组织或更高。在某些实施例中，认为皮肤组织中的低pDC水平为小于约10个pDC/mm2皮肤组织。在具体实施例中，认为皮肤组织中的高pDC水平为至少约100个pDC/mm2皮肤组织。
在其他实施例中，本披露的方法包括施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白以抑制I型IFN从pDC释放，而不管pDC的位置。在其他实施例中，本披露的方法包括施用ILT7结合蛋白以抑制I型IFN从血液或循环中的pDC释放。在其他实施例中，本披露的方法包括施用ILT7结合蛋白以抑制I型IFN从局部pDC释放。在其他实施例中，本披露的方法包括施用ILT7结合蛋白以抑制I型IFN从受试者皮肤中的pDC释放。在某些实施例中，释放受到抑制的I型IFN是IFNα。在某些方面，ILT7结合蛋白介导的对I型IFN从pDC释放的抑制引起I型IFNGS减少。
术语“减少”意指与初始值相比在程度、水平、量、活性或程度上减少。从一个值到下一个值的减少不需要是统计上显著的。
当应用于例如受试者、细胞、组织、器官或生物样品时，术语“施用”是指化合物或试剂与受试者、细胞、组织、器官或生物样品的接触。在细胞的背景下，施用包括试剂与细胞的接触(例如，体外或离体)，以及试剂与流体的接触，其中流体与细胞接触。本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白可通过本领域已知的多种途径施用于受试者。本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的示例性施用途径包括但不限于肠胃外、口服、粘膜、局部、经皮、吸入、舌下、经颊、直肠、阴道和鼻内。如本文所用，术语肠胃外包括皮下注射、静脉内、肌内、胸骨内注射或输注技术。在某些方面，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白是静脉内施用的。在具体方面，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白通过皮下注射施用。术语“施用”可涉及本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的单次施用或多次施用。例如，多次施用涉及向受试者施用至少两次(即，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多次)本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白。
化合物(例如，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白)的“治疗有效量”或“药学有效量”或“有效量”是指足以在受试者中产生期望的预防、治疗或改善反应的量，或足以以统计学显著的方式预防或改善疾病或病症的一种或多种症状的量。当提及单独施用的单个活性成分时，治疗有效剂量是指单独的该成分。当提及组合时，治疗有效剂量是指产生治疗效果的活性成分的组合量，无论是连续施用还是同时施用。如本文所用，术语“治疗有效量”是指与安慰剂相比，当按照处方或指导使用时，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白能够发挥医学有益作用(例如，引起有需要的受试者中升高的I型IFNGS减少和/或pDC减少)。治疗有效量将根据待施用的受试者的物种和体重而变化，但是可以使用标准技术来确定。在某些实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的治疗有效量在约0.1mg至约1000mg的范围内。在其他实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的治疗有效量在约50mg至约150mg的范围内。在某些方面，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的治疗有效量包括但不限于约1mg、约5mg、约15mg、约50mg、约100mg、约150mg、约300mg、约500mg或约1000mg。在某些实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的治疗有效量为约5mg单剂量。在其他实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的治疗有效量为约50mg单剂量。在其他实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的治疗有效量为约150mg单剂量。本文所述方法中使用的治疗有效量的ILT7结合蛋白可以以单剂量或多剂量施用于有需要的受试者。
在某些实施例中，与施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白之前的I型IFNGS相比，向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白导致受试者中I型IFNGS减少约1％至约100％。在某些方面，与施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白之前的I型IFNGS相比，向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的治疗有效量的ILT7结合蛋白导致受试者中I型IFNGS减少至少约1％、至少约2％、至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％。在具体实施例中，施用治疗有效量的ILT7结合蛋白导致受试者中I型IFNGS减少至少约50％。
在某些实施例中，与施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白之前的I型IFNGS相比，向有需要的受试者施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白导致受试者中I型IFNGS减少至少约50％。在某些方面，向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白导致在施用ILT7结合蛋白后约8小时、约12小时、约24小时或约48小时受试者中I型IFNGS减少至少约50％。
在具体实施例中，与施用ILT7结合蛋白之前受试者中的I型IFNGS相比，施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的受试者在施用ILT7结合蛋白后约24小时显示I型IFNGS减少至少约50％。
在某些实施例中，在向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白后，I型IFNGS的减少持续至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约14天、至少约21天、至少约28天、至少约30天、至少约45天、至少约60天、至少约90天、或至少约180天或更长时间。在一些方面，在向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白后，I型IFNGS的减少持续长达约30天。在另外的方面，在向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白后，I型IFNGS的减少持续长达约60天。因此，在一些实施例中，本文所述方法中使用的治疗有效量的ILT7结合蛋白至少每月一次施用于有需要的受试者。在其他实施例中，本文所述方法中使用的治疗有效量的ILT7结合蛋白至少约每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51或52周一次施用于受试者。在一些实施例中，本文所述方法中使用的治疗有效量的ILT7结合蛋白至少每4周一次施用于受试者。在另外的实施例中，本文所述方法中使用的治疗有效量的ILT7结合蛋白至少每8周一次或至少每12周一次施用于受试者。在进一步的实施例中，本文所述方法中使用的治疗有效量的ILT7结合蛋白至少每两个或三个月一次施用于受试者。在更进一步的实施例中，本文所述方法中使用的治疗有效量的ILT7结合蛋白至少每年一次或至少每2年一次施用于受试者。
如本文所用，术语“pDC的减少”或“减少pDC”是指受试者或取自受试者的生物样品(例如，血液和/或其他组织诸如皮肤细胞、皮肤活检样品等)中活化的pDC的水平降低，受试者或取自受试者的生物样品中pDC总数的水平降低，或两者兼有。在一些实施例中，与施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白之前受试者中的pDC相比，受试者中的pDC减少约1％至约100％。在某些方面，与施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白之前受试者中的pDC相比，受试者中的pDC减少至少约1％、至少约2％、至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％。在具体实施例中，与施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白之前受试者中的pDC相比，受试者中的pDC减少至少约50％。因此，在某些实施例中，施用治疗有效量的ILT7结合蛋白导致受试者中pDC总数减少至少约10％。在另外的实施例中，施用治疗有效量的ILT7结合蛋白导致受试者中活化的pDC减少至少约10％。在某些方面，在取自受试者的测试生物样品中测量pDC。因此，在某些实施例中，向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白导致取自受试者的测试生物样品中的pDC减少。在具体实施例中，与施用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白之前的测试生物样品中的pDC相比，取自受试者的测试生物样品中的pDC减少至少约10％。在某些方面，测试生物样品是血液。在具体方面，测试生物样品是组织，包括但不限于皮肤细胞和皮肤活检标本。在某些方面，pDC是循环pDC。在其他方面，pDC是皮肤中的pDC。在另外的方面，pDC的减少是可逆的。
在某些实施例中，在施用ILT7结合蛋白后约5分钟、约10分钟、约15分钟、约30分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约6小时、约12小时、约24小时或约48小时，向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白引起受试者中pDC减少至少约10％。在其他实施例中，在施用ILT7结合蛋白后约5分钟、约10分钟、约15分钟、约30分钟、约1小时、约2小时、约3小时、约6小时、约12小时、约24小时或约48小时，向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白引起取自受试者的测试生物样品中pDC减少至少约10％。
在某些实施例中，在向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白后，pDC的减少持续至少约1天、至少约2天、至少约3天、至少约4天、至少约5天、至少约6天、至少约7天、至少约14天、至少约21天、至少约28天、至少约30天、至少约45天、至少约60天、至少约90天、或至少约180天或更长时间。在一些方面，在向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白后，pDC的减少持续至少约30天。在另外的方面，在向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白后，pDC的减少持续至少约60天。
在其他实施例中，本披露的方法可用于降低有需要的受试者组织中的皮肤红斑狼疮疾病活动度和严重性指数(CLASI)。这些方法包括向受试者施用药学有效量的ILT7结合蛋白。
如本文所用，术语“CLASI”是指皮肤红斑狼疮疾病活动度和严重性指数。CLASI是一种经过验证的用于测量CLE皮肤表现的工具。CLASI由两个评分组成：第一个评分总结了疾病的炎症活动；第二个评分是疾病造成的损伤的量度。活动度评分包括红斑(0-3)、鳞屑/肥大(0-2)、粘膜病变(0-1)、近期脱发(0-1)和非瘢痕性脱发(0-3)。损伤评分表示色素沉着异常(0-1)、瘢痕/萎缩/脂膜炎(0-2)和头皮瘢痕(0-6)。询问患者色素沉着异常是否持续12个月或更长时间，在这种情况下，色素沉着异常评分加倍。在13个不同的解剖位置测量上述参数中的每一个参数，具体包括这些位置是因为它们在CLE中最常涉及到。测量每个区域中最严重的病变。
如本文所用，术语“降低CLASI”是指受试者或取自受试者的生物样品(例如，组织诸如皮肤细胞、皮肤活检样品等)中CLASI活动度(CLASI-A)评分的水平降低，或受试者或取自受试者的生物样品中CLASI损伤(CLASI-D)评分的水平降低，或两者兼有。
因此，在某些方面，本披露的方法导致受试者的CLASI-A评分降低。在某些方面，受试者的CLASI-A评分的降低涉及CLASI-A评分相对于基线值降低至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10分。在一些实施例中，受试者的CLASI-A评分的降低涉及CLASI-A评分相对于基线值降低至少4分。在具体实施例中，受试者的CLASI-A评分的降低涉及CLASI-A评分相对于基线值降低至少7分。在其他实施例中，受试者的CLASI-A评分的降低涉及CLASI-A评分相对于基线值降低至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％。在具体实施例中，受试者的CLASI-A评分的降低涉及CLASI-A评分相对于基线值降低至少50％。在某些方面，基线值是在用本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白治疗之前受试者的CLASI-A评分的值。在其他方面，本披露的方法导致受试者的CLASI-D评分降低。在另外的方面，本披露的方法导致受试者的CLASI-A评分降低和CLASI-D评分降低。
药物组合物
本披露还涉及包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物。在某些实施例中，本披露提供了本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白在制备用于治疗受试者的药物中的用途。
在一些实施例中，本披露的药物组合物包含本文披露的ILT7结合蛋白和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在此方面，“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”包括但不限于任何辅助剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、风味增强剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、溶剂或乳化剂，它们可能经或可能未经美国食品药品管理局(United States Food and DrugAdministration)批准，是人类或家畜使用时可接受的。例如，合适的载体是本领域技术人员已知的，并且包括稳定剂、稀释剂和缓冲剂。合适的稳定剂包括碳水化合物，如山梨醇、乳糖、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡聚糖和葡萄糖，以及蛋白，如白蛋白或酪蛋白。合适的稀释剂包括盐水、汉克氏平衡盐(Hanks Balanced Salt)和林格氏溶液(Ringers solution)。合适的缓冲剂包括碱金属磷酸盐、碱金属碳酸盐、或碱土金属碳酸盐。
在某些方面，本披露的药物组合物可以进一步包含一种或多种辅助物质，如一种或多种脂质、磷脂、碳水化合物和脂多糖。在一些实施例中，本披露的药物组合物任选地包含一种或多种其他活性物质。
在某些情况下，本披露的药物组合物可以通过本领域技术人员已知的技术来制备。药物组合物的配制和/或制备中的一般考虑可以在例如Remington：The Science andPractice of Pharmacy[药学科学与实践]第21版,Lippincott Williams&Wilkins[利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司],2005(通过援引以其全文并入本文)中找到。通常，将本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白或其片段与载体混合以形成溶液、悬浮液或乳液。本文讨论的一种或多种添加剂可以添加到载体中或者可以随后添加。本披露的药物组合物可以是水溶液、乳液或悬浮液，或者可以是干燥制剂。在某些方面，为了储存或配制目的，本披露的药物组合物可以例如通过冷冻干燥或喷雾干燥来干燥或冻干。随后可通过添加适当的液体载体将它们重构为液体组合物，或者可使用本领域技术人员已知的方法以干燥配制品的形式进行施用。在某些实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白以冻干粉末形式储存，随后在施用于有需要的受试者之前重构为液体组合物。
药物组合物的施用选择将取决于所选配制品。将本披露的药物组合物以与剂量配制品相容的方式并且以同样在治疗上有效的这种量施用。在某些方面，将本披露的药物组合物配制为呈固体、半固体、液体或气态形式的制剂，包括但不限于片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、软膏、溶液、栓剂、注射剂、吸入剂、凝胶、微球及气雾剂。
在某些情况下，包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物可以是固体或液体形式。在一些方面，一种或多种载体是微粒，使得这些组合物呈例如片剂或粉剂形式。在其他方面，一种或多种载体是液体，其中组合物是例如口服糖浆、可注射液体或气雾剂，其可用于例如吸入施用。当预期用于口服施用时，包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物呈固体或液体形式，其中半固体、半液体、悬浮液和凝胶形式均包括在本文视为固体或液体的形式中。
在某些方面，作为用于口服施用的固体组合物，包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物可以被配制为呈粉末、颗粒、压缩片剂、丸剂、胶囊、咀嚼片、糯米纸囊剂等形式。在一些情况下，这种固体组合物通常将包含一种或多种惰性稀释剂或可食用载体。在某些实施例中，可以另外存在以下的一种或多种：粘合剂，如羧甲基纤维素、乙基纤维素、微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂，如淀粉、乳糖或糊精，崩解剂，如藻酸、藻酸钠、Primogel、玉米淀粉等；润滑剂，如硬脂酸镁或Sterotex；助流剂，如胶体二氧化硅；甜味剂，如蔗糖或糖精；或调味剂，如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调味品；以及着色剂。
在一些方面，当本披露的药物组合物呈胶囊例如明胶胶囊的形式时，除本文披露的材料外，其还可以包含液体载体如聚乙二醇或油。口服配制品还可以包括通常使用的赋形剂，例如像，药物级别的糖精、纤维素和碳酸镁。
在其他方面，本披露的药物组合物呈液体的形式，例如酏剂、糖浆、溶液、乳液或悬浮液。在某些实施例中，液体可用于口服施用或用于通过注射递送。在某些实施例中，当预期用于口服施用时，除了本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白之外，本披露的药物组合物还包含甜味剂、防腐剂、染料/着色剂和增味剂中的一种或多种。在某些方面，在预期通过注射施用的药物组合物中，还可以包括表面活性剂、防腐剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、缓冲剂、稳定剂和等渗剂中的一种或多种。在某些方面，将本披露的药物组合物静脉内施用于有需要的受试者。在具体方面，本披露的药物组合物通过皮下注射施用于有需要的受试者。
在某些情况下，包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的液体药物组合物，无论它们呈溶液、悬浮液还是其他类似的形式，都可以包含以下组分中的一种或多种：无菌稀释剂，如注射用水、盐溶液(例如生理盐水)、林格氏溶液、等渗氯化钠、固定油(如可用作溶剂或悬浮介质的合成甘油单酯或甘油二酯)、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他溶剂；抗细菌剂，如苄醇或对羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，如乙二胺四乙酸；缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的药剂，如氯化钠或右旋糖。在一些情况下，制剂可以封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。在一些实施例中，可注射药物组合物优选是无菌的。
在其他实施例中，包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物可预期用于局部施用，在这种情况下，载体可以适当地包含溶液、乳液、软膏或凝胶基质。在某些方面，基质可例如包含以下中的一种或多种：凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、蜂蜡、矿物油、水和醇等稀释剂、以及乳化剂和稳定剂。在其他方面，增稠剂可以存在于用于局部施用的药物组合物中。在某些实施例中，如果预期用于透皮施用，则本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物可以包括在透皮贴剂或离子电渗疗法装置内。
在其他实施例中，包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物预期以例如栓剂的形式用于直肠施用。对于栓剂，粘合剂和载体可包括例如聚亚烷基二醇或甘油三酯。在某些情况下，用于直肠施用的组合物包含油性基质作为合适的非刺激性赋形剂。此类基质包括但不限于羊毛脂、可可脂或聚乙二醇。
在其他方面，包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药物组合物包含可以以气溶胶形式施用的剂量单位。术语气溶胶用于表示各种系统，范围从胶体性质的那些系统到由加压包装组成的系统。在某些实施例中，通过液化或压缩气体或通过分配活性成分的合适的泵系统来完成递送。在一些实施例中，本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的气溶胶可以以单相、双相或三相体系递送以递送活性成分。在其他实施例中，气雾剂的递送包括必要的容器、活化剂、阀门、子容器等，它们一起可以形成试剂盒。本领域技术人员可以容易地确定特定的气雾剂配制品和递送方式。
本披露的药物组合物可以在合适的无毒药物载体中施用，可以包含在微胶囊、微珠中，和/或可以包含在持续释放植入物中。
在一些方面，本披露的药物组合物包括在活性成分周围形成包衣壳的材料。在一些情况下，形成包衣壳的材料通常是惰性的，并且可以选自例如糖、虫胶和其他肠溶包衣剂。
在其他方面，固体或液体形式的本披露的药物组合物包括与本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白结合并由此帮助递送本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的药剂。在某些情况下，以这种能力起作用的合适的药剂包括蛋白或脂质体。
在某些方面，将向受试者施用的药物组合物采取一个或多个剂量单位的形式，其中例如，片剂可以是单个剂量单位，而气溶胶形式的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的容器可以容纳多个剂量单位。制备此类剂型的实际方法对于本领域技术人员来说是已知的，或者是显而易见的；例如，参见Remington：The Science and Practice of Pharmacy[雷明顿：药学科学与实践],第20版(Philadelphia College of Pharmacy and Science[费城药学理学院],2000)。在任何情况下，根据本文的传授内容，待施用的组合物将包含治疗有效量的本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白或其药学上可接受的盐，以帮助治疗感兴趣的疾病或病症。
在某些实施例中，本披露的药物组合物包含一种或多种其他治疗活性物质。在其他实施例中，将治疗有效剂量的本披露的药物组合物与一种或多种其他治疗活性物质组合施用至有此需要的受试者。如本文所用，“组合”是指包含本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白和一种或多种另外的治疗活性物质的组合，它们中的每一种可以连续(顺序)、同步或同时施用。
为了维持治疗水平，理想地以几个间隔施用本披露的药物组合物。本披露的药物组合物可以与其他杀细菌或抑细菌方法结合使用。
虽然对本文提供的药物组合物的描述主要涉及适合用于向人施用的药物组合物，但技术人员将理解此类组合物通常是适合用于向所有分类的受试者施用。在某些方面，受试者是哺乳动物。在某些方面，哺乳动物包括灵长类动物，如人、猴和猿，以及非灵长类动物，如家畜，包括实验动物和家庭宠物及农场动物(例如猫、狗、猪、牛、羊、山羊、马、兔)，和非家畜动物，如野生动物、鸟类等。
实例
在自身免疫性疾病中，当被自身核酸的免疫复合物活化后，浆细胞样树突状细胞(pDC)会分泌大量的I型和III型干扰素(IFN)。pDC占循环白细胞的约0.4％，并且可以识别病毒核酸，这些病毒核酸通常与其他蛋白或免疫球蛋白结合。尽管这种反应被认为有助于抗病毒防御，但已有证据表明pDC和I型IFN也有助于多种自身免疫性疾病的发病机制。I型IFN水平不能以可靠的方式直接测量；然而，I型IFN与其受体的结合导致I型IFN诱导型基因的局部和全身上调。这些I型IFN诱导型基因的信使核糖核酸(mRNA)水平可以在血液中测量，并作为称为“I型干扰素基因标记”(IFNGS)的复合结果进行分析。开发了针对I型IFNGS的测试，并建立了截止值以将这些标记评分为“IFN测试-高”和“IFN测试-低”。使用这种特定基因标记的研究发现，在系统性红斑狼疮、皮肌炎、多肌炎、系统性硬化症和干燥综合征中，可以识别出I型IFN标记升高的患者亚组。
单次递增剂量(SAD)研究
在患有系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)、皮肌炎(DM)、多肌炎(PM)或系统性硬化症(SSc)的患者的5个连续队列中进行了本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白的单次递增皮下给药的1a期、随机、临床试验机构设盲/申办者不设盲、安慰剂对照试验。该试验评价了本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)的安全性、药物水平、pDC水平、抗药物抗体(ADA)和对21基因I型IFNGS的影响。
所有数据均以按队列、治疗和受试者编号分类的列表形式呈现。收集的数据的表格总结按治疗组呈现。通过频率计数和每个类别中受试者的百分比总结分类数据。在适用情况下，基于非缺失观测值计算百分比。通过描述性统计总结连续变量，这些描述性统计包括观察次数、平均值、标准差、中位数、最小值和最大值。通常，除非另有说明，否则“基线”定义为首次给药VIB7734之前的最后一个值。
实例1：SAD研究设计
本研究共入组36名受试者。入组的受试者具有以下诊断：SLE 19(53％)、SS 16(44％)、SSc 3(8％)、PM 2(6％)和DM 2(6％)。基线人口统计学特征在总VIB7734组与安慰剂组之间非常平衡并且通常是相似的。大多数受试者为白人和女性(32[88.9％])。将入组的受试者在5个队列中以3:1的比率随机接受单次皮下给药的VIB7734或匹配的安慰剂，如下所示：
队列1：1mg VIB7734(n＝3)或安慰剂(n＝1)；
队列2：5mg VIB7734(n＝6)或安慰剂(n＝2)；
队列3：15mg VIB7734(n＝6)或安慰剂(n＝2)；
队列4：50mg VIB7734(n＝6)或安慰剂(n＝2)；
队列5：150mg VIB7734(n＝6)或安慰剂(n＝2)。
图1和图2中提供了该研究的示意图。在给药前42天内进行筛选访视。受试者在第1天接受VIB7734，并过夜观察(在设施中)任何安全问题。在完成所有研究程序并确保没有安全问题后，受试者在第2天出院。随后是85天的治疗随访期。在此期间，受试者在第4、8、15、29、57和85天返回研究临床试验机构。评估受试者的pDC补充。如果pDC水平≥受试者基线值的50％或者pDC水平大于实验室手册中定义的标准范围的下限，则满足pDC补充标准。如果他们在第85天不符合pDC补充标准，则将对其进行另外252天的随访(至研究第337天)。如果在第337天访视时未满足pDC补充标准，则医学监查员与研究者协商确定是否需要进一步随访。
受试者在研究期间仅接受一次VIB7734剂量。如图2所示，队列以剂量递增的方式入组，以便在进行到下一个剂量水平(队列)之前为审查安全性和耐受性数据提供时间。剂量递增委员会(DEC)决定递增至下一个剂量队列。
在每个队列中，在第一名与第二名受试者的给药之间以及在第二名与第三名受试者的给药之间存在至少48小时的间隔。从每个队列中的第三名受试者开始，在后续受试者的给药之间存在至少24小时的间隔。一旦前一队列中的所有受试者被随机分组并施用VIB7734，就开始第2、3、4和5队列的给药，所有可评估的受试者至少完成第15天访视(第6次访视)，并且DEC审查所有暴露受试者的累积安全性数据，他们同意安全性概况是可以接受的。
实例2：SAD研究：不良反应的评估
在VIB7734 15mg组中的1名受试者(结肠炎)和安慰剂组中的1名受试者(由于脑出血死亡)发生严重不良事件。在69％的VIB7734治疗的受试者和80％的安慰剂治疗的受试者中报告了至少一种不良事件(AE)。在VIB7734治疗的受试者中最常报告的AE是腹泻(12％)和上呼吸道感染(12％)。未发生注射部位反应或过敏反应。
实例3：SAD研究：免疫原性评估
在第1、2、4、8、15、29、57和85天收集血样，以评估人血清中对VIB7734的抗药物抗体(ADA)反应。这些评估使用经过验证的电化学发光免疫测定方法进行，用于检测、确认和滴定人血清中针对VIB7734的抗药物抗体。在筛选层中发现为阴性的样品报告为滴度<30。
记录总ILT7结合蛋白组的所有26名受试者和安慰剂组的9名受试者的基线和基线后ADA结果。在两个治疗组中均未观察到阳性结果。在两个治疗组中均未观察到ADA持续阳性或短暂阳性的发生率。因此，总体而言，对于剂量范围为1至150mg的VIB7734皮下注射，未发现安全性、耐受性或免疫原性问题。
实例4：SAD研究：药代动力学评估
在第1、2、4、8、15、29、57和85天收集血样，以评估血清中VIB7734的PK。通过使用经过验证的酶联免疫吸附测定(ELISA)免疫测定方法测量人血清样品中VIB7734的浓度。该测定的经过验证的测量范围为0.025μg/mL至25.60μg/mL。低于定量下限(LLOQ)的结果以<0.10μg/mL报告。
对来自接受任何剂量的VIB7734的所有26名受试者的VIB7734浓度的时间数据进行PK分析。图3示出了在单次皮下1、5、15、50或150mg剂量后，VIB7734的平均血清浓度-时间曲线。1mg剂量后，所有浓度均低于定量限(BLQ)，因此所有汇总PK参数均基于5-150mg剂量水平。VIB7734的PK暴露大致按剂量比例增加。在第1天单次皮下注射后，在给药后5至8天观察到峰值浓度。随着剂量水平的增加，暴露以大致与剂量成比例的方式增加。各剂量水平的估计半衰期范围为13至20天。平均血管外清除率为468至1030mL/天。平均血管外分布容积范围为9.9至19.0L。
实例5：SAD研究：药效学评估(血液pDC水平)
在第1、2、4、8、15、29、57和85天收集全血样品以进行pDC水平测定。基线pDC水平定义为在第1次访视和第2次访视时测量的水平的平均值。如果筛选(第1次访视)样品由于技术原因未抽取或失败，则将重复进行，并且必须在受试者随机分组之前获得结果，因为需要结果来确定受试者符合所有入选/排除标准。如果第1天(第2次访视)样品由于技术原因未抽取或失败，则将第1次访视样品的值视为基线。研究临床试验机构对基线后pDC水平设盲。
在研究期间以两种方式定量pDC水平：1)作为CD45+外周血单核细胞的百分比(PBMC，主要方法)，而2)作为pDC数/μL的浓度(次要方法)。主要的pDC测量是作为CD45+PBMC的％的pDC，因为这是通过本研究中使用的流式细胞术测定直接测量的。
在基线时，在VIB7734治疗的受试者中，血液中的平均pDC水平为PBMC的0.13％(SD：0.056％)。在VIB7734治疗的受试者中，在基线时pDC的平均浓度为2.53个细胞/μL(SD：1.24％)。pDC(CD45+细胞的％)随时间的水平和于基线相比的变化示于图4。pDC的绝对浓度随时间的水平和相对于基线的变化示于图5。绝对pDC水平随时间的变化示于图6。
SC施用所有测试剂量的VIB7734后，pDC的血液水平降低。在所有VIB7734剂量组中，在给药后24小时(给药后进行的第一次抽血)，VIB7734治疗的受试者的pDC水平中位数降低至少50％是明显的，最大降低90％。增加的剂量与pDC减少的非线性增加相关。在第15天，VIB7734治疗队列的中位pDC水平变化如下：1mg：-57％，5mg：-66％，15mg：-70％，50mg：-82％，以及150mg：-90％，而安慰剂治疗组为+7.5％。
增加的剂量通常与较长持续时间的pDC减少相关。在所有情况下，效果都是可逆的。如图4至图6所示，对于每个队列，在以下时间点，中位数pDC水平恢复到基线的50％以上：1mg：第29天，5mg：第57天，15mg：第57天，50mg：第85天，150mg：第113天。因此，以1至150mg的剂量皮下注射VIB7734引起循环pDC水平的可逆的剂量依赖性降低。
中位数pDC水平相对于基线的最大降低程度为-90％。在15至150mg的剂量下，最大耗竭的增加似乎接近平稳，这表明高于150mg的剂量不太可能引起更大程度的最大耗竭。
实例6：SAD研究：药效学评估(I型IFNGS)
在筛选和第1、2、4、8、15、29、57和85天收集全血，以使用21基因测定法测量某些类型的I型IFN诱导型基因的mRNA表达。通过以下方法来确定I型IFNGS：测定取自受试者的生物样品中的21种I型IFN诱导型基因的mRNA水平，确定21种I型IFN诱导型基因的mRNA水平的平均值(平均数或中位数)，将平均值相对于3种管家基因(18S rRNA、β肌动蛋白和GAPDH)的mRNA水平的平均值归一化，并获得复合结果。通过两种方法报告I型IFNGS，“中位数倍数变化”和“中位数目标中和”。第一种方法，称为“中位数倍数变化”，是与归一化为1的健康对照相比基因产物水平的倍数差异。因此，对于受试者，4的中位数倍数变化表明I型IFN诱导型基因产物是健康对照的4倍。每次访视时每个队列的中位数倍数变化示于表2。
表2：生物标志物结果-接受治疗的群体(I型IFNGS倍数变化)。
Figure BDA0003784458720000441
Figure BDA0003784458720000451
Figure BDA0003784458720000461
IFN＝干扰素；Max＝最大值；Min＝最小值；N＝受试者的数量；n＝N的子集
第二种度量“中位数目标中和”是基因产物的水平与基线结果相比的百分比的量度，基线结果归一化为100％。这对于比较随时间的变化是有用的。例如，访视时的中位数目标中和比率为30％是指I型IFN诱导型基因产物是它们在基线时的水平的30％。
表3示出了基线I型IFN标记升高的受试者亚组的按队列和访视的中位数目标中和比率。在第4天(给药后测量的第一个时间点)，所有VIB7734治疗组的IFN-高亚组的中位数中和比率小于100％，而安慰剂组为100％。在第8天访视时，IFN-高亚组的中位数中和比率最低(所有VIB7734治疗组为37.9％，安慰剂组为118％。在所有时间点，所有VIB7734治疗组的IFN-高亚组的中位数目标中和保持<100％，最低剂量队列(1mg)除外，该最低剂量队列在第8、29和57天访视时>基线的100％。
表3：生物标志物结果-接受治疗的群体(I型IFN标记的中和比率)。
Figure BDA0003784458720000462
Figure BDA0003784458720000471
IFN＝干扰素；Max＝最大值；Min＝最小值；N＝受试者的数量；n＝N的子集
图7示出了基线1型IFNGS升高的队列中每个受试者的基线IFN标记倍数随时间变化的％。在大多数I型IFNGS升高的受试者中，pDC水平的降低(图7A)与I型IFNGS的降低(以基线倍数变化的％报告)相关(图7B)。
多次递增剂量(MAD)研究
进行1b期、随机、双盲(申办者和临床试验机构药剂师不设盲)、安慰剂对照研究，以评估将VIB7734的多次递增皮下(SC)剂量添加至患有至少一种以下自身免疫性疾病的受试者的护理标准时的安全性和耐受性：系统性红斑狼疮(SLE)、皮肤红斑狼疮(CLE)、系统性硬化症、多肌炎和皮肌炎(图9)。该研究还评价了VIB7734对皮肤狼疮活动度的功效。本研究的基本原理是：(1)评估多剂量VIB7734在相关受试者群体中的安全性、PK、PD和免疫原性，(2)评估VIB7734是否可以改善狼疮的皮肤表现，以及(3)评估VIB7734对皮肤中pDC和I型IFNGS水平的影响。本研究选择SC施用途径，以为将来使用SC制剂的研究提供最相关的信息。测试的剂量方案是VIB7734 5mg、50mg或150mg SC q4周或安慰剂SC q4周。单剂量研究的PK/PD模型表明，每4周一次50至100mg SC范围内的剂量是提供连续接近最大的pDC减少所需的最小剂量。预期5mg SC q4周的剂量(队列1)提供次最大的PD效果，这将有助于确定该药物实现最佳PD效果所需的最小剂量。选择50mg SC q4周的剂量(队列2)来评估预期目标剂量范围内的剂量。队列1与队列2之间剂量增加10倍的理由是：(a)两个剂量队列之间最大pDC减少的预测差异相对较小(-78％对-87％)，(b)使用VIB7734的单剂量研究没有显示所有测试剂量(150mg SC的最大剂量)的任何安全问题，以及(c)本研究中所有测试剂量的安全界限都很高。150mg SC q4周的剂量测试了可能需要的VIB7734的潜在剂量范围的上限，特别是如果需要比循环中更高的剂量来耗竭靶组织中的pDC。该研究能够改进PK/PD模型，并且能够选择一次或多次给药以在后期试验中进行测试。
实例7：MAD研究设计
总共31名成年受试者入组了3个连续队列，其中队列1中有8名受试者，队列2中有12名受试者，队列3中有11名受试者。受试者维持其标准护理治疗，并且除了该治疗之外，还进行了ILT7结合蛋白(VIB7734)或安慰剂施用。随机分组未分层。按顺序入组队列(图10)，以便在进展到下一个队列之前审查安全性和耐受性数据。在队列1中，受试者以3:1的比例随机分组，每4周通过SC注射接受VIB7734或匹配安慰剂，共3剂。VIB7734的施用剂量为5mgSC q4周，共3剂。在队列2和3中，受试者以2:1的比例随机接受VIB7734 50mg(队列2)或150mg(队列3)或匹配的安慰剂，通过SC注射q4周，共3剂。
队列1：VIB7734，5mg(n＝6)或安慰剂(n＝2)，每28天SC注射×3个剂量；
队列2：VIB7734，50mg(n＝8)或安慰剂(n＝4)，每28天SC注射×3个剂量；
队列3：VIB7734，150mg(n＝8)或安慰剂(n＝3)，每28天SC注射×3个剂量。
队列1招募了混合疾病群体，包括患有系统性红斑狼疮(SLE)或干燥综合征且没有最低疾病活动度要求的受试者，以评估多次给药VIB7734在各种pDC驱动的适应症受试者中的安全性。队列2和3招募了CLASI活动度评分(CLASI-A)≥8的活动性SLE或皮肤红斑狼疮(CLE)患者，使得可以在这些队列中测试的剂量下探索功效，并且可以检查对皮肤活检标本的影响。经培训的指定人员医师-研究者进行了CLASI-A评估。在可能的情况下，同一评估人在整个研究中对受试者进行评估。临床试验机构还为每名受试者指定了一个备用评估人。
队列2和3的筛查程序包括在第29、57和85天拍摄现有皮肤病变的数码照片。皮肤照相的目的是1)作为筛查程序的一部分，确认受试者具有与狼疮一致的皮肤病变，以及2)提供药物对皮肤病变的影响的视觉证据。在筛选时检查患者的研究者或助理研究者根据病变位置决定要拍摄的解剖区域。在筛选eCRF中详细记录了这些解剖区域，以便可以在其他时间点(第113天和第145天)对相同区域进行拍摄。在所有摄影访视时，照明尽可能保持一致。照片由中心审查员上传并审查，以确认存在与狼疮一致的皮肤病变。
多剂量研究有三个研究期：筛选、治疗期和延长的pDC补充随访(图9)。在给药前28天内进行筛选访视。随机分组的受试者在第1、29和57天接受VIB7734。对于所有施用，在诊所施用VIB7734并且在给药后观察受试者至少90分钟。对受试者进行随访，直至至少第141天。在第141天访视后，通知受试者他们是否已达到足够pDC水平的方案定义。足够pDC水平的方案定义为>受试者基线值的50％或>外周血单核细胞(PBMC)的0.036％。如果受试者的pDC水平达到足够水平的标准，则受试者退出研究。如果受试者在第141天访视时未达到足够pDC水平的标准，则告知受试者并要求受试者继续返回进行pDC随访访视，直至受试者达到足够pDC水平的方案定义或达到第337天访视。无论受试者接受VIB7734还是安慰剂，均进行pDC随访，并且受试者和临床试验机构均未揭盲，直至研究结束。
未设盲的剂量递增委员会(DEC)根据预先指定的标准审查每个剂量队列的安全性，以确定升级到下一个剂量队列是否安全。对于从队列1升级到队列2，DEC审查队列1中第8名受试者完成第15天访视后(或者如果第8名受试者在第15天之前退出，则当最后一名可评估的队列1受试者到达第15天时)的累积安全性数据。对于从队列2到队列3的升级，DEC在9名队列2受试者完成第15天访视时审查累积安全性数据。如果来自任何队列的数据不足以决定升级到下一个队列的安全性，则申办者可以选择暂停升级，等待稍后对队列进行重新评估。
实例8：不良反应的评估
VIB7734的安全性和耐受性通过治疗中出现的不良事件(TEAE)、特别关注的不良事件(AESI)和治疗中出现的严重不良事件(TESAE)的发生率来测量。实验室测量、生命体征测量和ECG参数也作为安全性的一部分进行了评估。不良事件(AE)和严重不良事件(SAE)收集在受试者签署知情同意书后开始，并持续到最后一次访视。TEAE定义为在首次施用VIB7734当天给药或之后至随访结束时发生的任何AE。所有AE均需要由监管活动医学词典(MedDRA)编码。要求报告所有SAE，无论是否被认为与VIB7734或研究程序有因果关系。需要对TEAE、TESAE和TEAESI进行整体总结，并根据MedDRA系统器官类别和首选术语、严重程度和与VIB7734的关系进行分类。AESI也需要在得知事件后24小时内在eCRF上记录，即使事件并不严重。在队列1、2和3的VIB7734治疗的受试者中未观察到AE(图40)或AESI(图41)。VIB7734组和安慰剂组中发生不良事件的受试者比例相似(分别为约73％对约67％；图41)。
实例9：免疫原性评估
在第1、29、57、85、113和141天以及如果适用的话在第197、253和309天收集血样，以评估人血清中对VIB7734的抗药物抗体(ADA)反应。按治疗组总结ADA状态和滴度。这些评估使用经过验证的免疫测定方法进行。在队列1、2或3中的受试者中没有观察到对人血清中VIB7734的ADA反应(数据未显示)。
实例10：药代动力学评估
在第1、8、15、29、36、43、57、64、71、85、113和141天以及如果适用的话在第169、197、225和253天收集血样，以评估人血清中VIB7734的PK。血清中VIB7734的PK使用经过验证的免疫测定方法测量。样品收集、处理、储存和运输的具体程序可以在提供给临床试验机构的单独实验室手册中找到。对VIB7734治疗的受试者进行了非房室分析。生成VIB7734浓度-时间曲线。
图11示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)5mg(队列1)或50mg(队列2)VIB7734后，VIB7734的血清浓度曲线。图11A示出了队列2受试者中VIB7734的血清浓度曲线。图11B示出了队列1(实心圆)和队列2(实心方块)受试者中VIB7734的平均血清浓度曲线。如图11B所示，在第112天，与队列1受试者相比，队列2受试者中VIB7734的平均血清浓度增加。
实例11：药效学评估：循环pDC水平
使用流式细胞术评估VIB7734对血液中循环pDC水平的影响。描述了相对于基线的变化，并总结了作为基线百分比的水平。在第1、8、15、29、36、43、57、64、71、85、113和141天收集全血样品以进行pDC水平(所有受试者)和CD19+B细胞(在筛选时，对于先前施用利妥昔单抗、奥曲利珠单抗、奥法木单抗或实验性B细胞耗竭mAb的受试者)测定。基线pDC水平定义为在筛选访视时测量的水平和第1天(给药前)水平的平均值。如果筛选(第1次访视)样品由于技术原因未抽取或失败，则必须重复进行，并且必须在受试者随机分组之前获得结果，因为需要结果来确定受试者符合所有入选/排除标准。如果只有一个值可用，则将该值用作基线。
图12示出了队列1中受试者全血中pDC(PBMC细胞的％)随时间的水平和相对于基线的变化。图13示出了队列1中受试者全血中pDC绝对浓度随时间的水平和相对于基线的变化。队列1中受试者全血中绝对pDC水平随时间的变化示于图14。与单次递增剂量研究的结果一致，与用安慰剂治疗的受试者(图12A、图13A和图14A)相比，用5mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)治疗的队列1中的受试者的血液pDC水平降低(图12B、图13B和图14B)。
pDC水平(％)随时间的变化，作为队列2和队列3中受试者全血中基线水平(使用％外周血单核细胞的值)的百分比示于图15。图16示出了队列2和队列3中受试者全血中pDC绝对浓度随时间的水平和相对于基线的变化。队列2和队列3中受试者全血中绝对pDC水平随时间的变化示于图17。图18示出了队列2和队列3中受试者全血中pDC(以PBMC细胞的％计)随时间的水平和相对于基线的变化。类似于队列1中的受试者，与用安慰剂治疗的受试者(图15A、图16A、图17A和图18A)相比，用50mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)治疗的队列2中的受试者的血液pDC水平降低(图15B、图16B、图17B和图18B)。类似地，与用安慰剂治疗的受试者(图15C、图16C、图17C和图18C)相比，用150mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)治疗的队列3中的受试者的血液pDC水平降低(图15D、图16D、图17D和图18D)。另外，如图19A-D所示，与用安慰剂治疗的队列2受试者全血中pDC水平随时间的中位数相比，在50mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)后，队列2受试者全血中pDC水平随时间的中位数显示出显著降低。类似地，如图20A-D所示，与用安慰剂治疗的队列3受试者全血中pDC水平随时间的中位数相比，用150mg VIB7734的多次SC给药治疗的队列3受试者全血中pDC水平随时间的中位数显示出显著降低。如图77中进一步所示，与安慰剂治疗的受试者中循环pDC水平的中位数相比，在队列1(用5mg VIB7734治疗)、队列2(用50mg VIB7734治疗)和队列3(用150mg VIB7734治疗)中的VIB7734治疗的受试者中，循环pDC水平的中位数(以％PBMC细胞测量)在第1周时明显降低，并且持续到至少第85天。
实例12：药效学评估：血液中的I型IFN标记
使用21基因试验测量皮肤和血液中的I型IFNGS。在队列1、2和3中评估VIB7734对血液中I型IFNGS的影响。在第1、8、15、29、43、57、71、85、113和141天在PAXgene管中收集全血，以测量某些类型的I型IFN诱导型基因的mRNA的过表达。将从样品中分离出的任何剩余RNA用于基因表达变化的额外分析研究。高I型IFNGS水平在基线时存在于队列2和3中的23名受试者中的18名(78％)的全血中。
图21示出了用50mg VIB7734治疗的队列2受试者全血中随时间的I型IFNGS水平(以倍数变化(图21A和图21B)或绝对评分(图21C和图21D)测量)。与用安慰剂治疗的受试者(图21B和图21D)相比，用50mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)治疗的队列2中的受试者的血液I型IFNGS水平降低(图21A和图21C)。此外，如图22A和图22C所示，与用安慰剂治疗的队列2受试者全血中I型IFNGS水平随时间的中位数相比，用50mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)治疗的队列2受试者全血中I型IFNGS水平随时间的中位数(分别以倍数变化和绝对评分测量)显示出显著降低。如图22C所示，对于VIB7734治疗的队列2受试者，在第85天的第一个时间点，总体I型IFNGS(以绝对评分测量)降低了50％以上。此外，如所预期的，与用安慰剂治疗的队列2受试者的全血中pDC水平随时间的中位数(图22B)相比，用50mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)治疗的队列2中受试者全血中I型IFNGS水平随时间的中位数(以中和比率测量)增加。
图55示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg VIB7734或安慰剂后，队列3中受试者全血中随时间的归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)。与用安慰剂治疗的队列3受试者(图55B)相比，用150mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)治疗的队列3受试者全血中归一化I型IFNGS水平的血液水平随时间(第1天至第113天)降低(图55A)。另外，如图55C所示，与用安慰剂治疗的队列3受试者的全血中pDC水平随时间的中位数(图55C)相比，用150mg VIB7734的多次SC给药(每4周一次，共3剂)治疗的队列3受试者全血中归一化I型IFNGS水平的中位数(以倍数变化测量)随时间(第1天至第85天)降低。第85天，全血中I型IFNGS水平的中位数变化在VIB7734 50mg组中为约-54％(队列2；图22C)，在VIB7734 150mg组中为约-83％(队列3；图55C)，而在安慰剂组中为+8％。
为了进一步评估VIB7734对循环I型IFN活性的影响，从全血RNA产生基因标记，并在不同时间点测量来自研究参与者和健康供体的血清中的IFNα蛋白水平。大多数受试者表现出较高的循环基线I型IFN活性，其中在组合的VIB7734治疗队列中(即，在组合的来自队列1(n＝3)、2(n＝6)和3(n＝8)的受试者中)73％的受试者和44％的安慰剂受试者在基线时的IFN诱导型基因表达高于健康受试者，其中在基线I型IFNGS评分与IFNα蛋白水平之间观察到很强的相关性(r＝0.573；p＝0.0203)。
如图79中所示，在血液中基线IFN活性升高的受试者中，用VIB7734治疗导致循环I型IFNGS评分降低(图79A)以及IFNα蛋白水平降低(图79B)，其中在最高剂量队列(即，队列3)中的受试者中观察到这些测量值的最显著且持续的降低(图79A-B)。在治疗后一个月(第29天)，队列3受试者(150mg VIB7734)的I型IFNGS评分降低了75.07％，而在该时间点安慰剂组增加了11.12％。VIB7734也显著降低了循环IFNα蛋白水平，最高剂量组(队列3)在第29天实现血液IFNα减少95.0％，而安慰剂组增加33％。
基线循环I型IFN活性与对VIB7734的临床反应性之间的关系也在组合的VIB7734-治疗队列中进行了评估。如图79所示，高基线血液I型IFN活性与对VIB7734的较高临床反应率相关。在VIB7734治疗后表现出临床反应的12名受试者中有十一名在基线时具有高循环I型IFN活性，这在I型IFNGS评分和I型IFN蛋白中都得到证实(图79C，黑点)。另一方面，那些具有较低基线I型IFN活性的受试者更有可能是CLASI无反应者，4名CLASI无反应者中有3名向较低水平的基线IFN活性聚集(图79C，红点)。这些数据表明，血液中的高基线I型IFN活性与对pDC耗竭治疗的较高反应率相关。
SLE的临床开发一直很困难，许多临床化合物表现出不一致的反应，这可能反映了疾病的巨大异质性。本研究表明，基线I型IFN活性在血液中可作为对pDC耗竭的临床反应性的预测因子，其中较高基线水平的IFNα或I型IFNGS评分确定患者临床获益的可能性较高。
实例13：药效学评估：功效
用于功效分析的群体是患有活动性皮肤病变并且基线CLASI评分为8的SLE或CLE的受试者。CLASI活动度(CLASI-A)评分范围为0至70，并且可用于将疾病活动度分为轻度(0-9)、中度(10-20)或重度(21-70)。该群体允许测试VIB7734减少SLE或CLE的皮肤表现的假设。临床功效终点是CLASI活动度评分的变化。在第1、15、29、43、57、85、113和141天计算CLASI-A评分和CLASI损伤评分。与方案相矛盾的新开始或增加口服或局部皮质类固醇或免疫抑制剂剂量的受试者在反应者分析中被视为无反应者。使用混合效应模型分析CLASI-A相对于基线的变化，以治疗、基线I型IFN标记状态(低与高)、访视和访视与治疗之间的相互作用作为协变量进行重复测量。使用逻辑回归分析第85天CLASI-A降低4分的受试者比例和第85天CLASI-A降低50％的受试者比例，其中以治疗和基线I型IFN标记状态作为协变量。出于探索性目的，按基线I型IFN标记状态(低与高)进行亚组分析。
总结了队列2受试者(图23、图24A、图24B和图33A)和队列3受试者(图68、图24C、图24D和图33B)观察到的CLASI-A评分及其相对于基线的变化。还总结了队列2和队列3的CLASI-A评分相对于基线降低至少4分的受试者比例(图25至图27)。此外，总结了队列2和队列3的CLASI-A评分相对于基线降低至少7分的受试者比例(图50至图52)。此外，还总结了队列2和队列3的CLASI-A相对于基线降低至少50％的队列2受试者的比例(图29、图53和图54)。
队列2中的大多数受试者(图24A)和队列3中的所有受试者(图24C)在多次SC给药VIB7734后显示出CLASI-A评分降低。如图33所示，对于队列2，在第85天，VIB7734治疗的受试者的CLASI-A评分相对于基线的中位数变化为-5.0，而安慰剂治疗的受试者为-2.5(图33A)。与队列2受试者相比，队列3受试者在第85天的CLASI-A评分相对于基线的中位数变化出乎意料地更高。如图33所示，对于队列3，在第85天，VIB7734治疗的受试者的CLASI-A评分相对于基线的中位数变化为-9.5，而安慰剂治疗的受试者为-5.0(图33B)。对于队列2受试者，在第85天，VIB7734组与安慰剂组之间的最小二乘平均差为0.14；95％Cl(-9.86，10.14，p＝0.977)。此外，对于队列3，在第85天，VIB7734组与安慰剂组之间的最小二乘平均差为-5.24(95％，Cl-11.8，1.3，p＝0.11)(图33B)。图33C示出了队列2和队列3中受试者按治疗组和访视的中位数CLASI-A评分相对于基线(BL)的百分比变化。
此外，在第15、29、85和113天，与安慰剂治疗的队列2受试者相比，队列2中更高比例的VIB7734治疗的受试者显示CLASI-A评分相对于基线降低至少4分(图25)。在第15、29、43、57、85和113天，与安慰剂治疗的队列3受试者相比，队列3中更高比例的VIB7734治疗的受试者显示CLASI-A评分相对于基线降低至少4分(图26)。当组合来自队列2和队列3受试者的数据时，观察到相同的趋势(图27)。另外，在第15、29、43、57、85、113和141天，与安慰剂治疗的队列2受试者(图50)和队列3受试者(图51)相比，队列2(图50)和队列3(图51)中更高比例的VIB7734治疗的受试者显示CLASI-A评分相对于基线分别降低了至少7分。当组合来自队列2和队列3受试者的数据时，观察到相同的趋势(图52)。此外，当组合来自队列2和队列3的数据时，与用安慰剂治疗的受试者(57.1％)相比，在VIB7734治疗的受试者中观察到更大比例的CLASI-A评分反应者(75％)(图28)。当考虑队列2和队列3中未患有盘状红斑狼疮(DLE)的受试者子集时，与安慰剂治疗的受试者(66.7％)相比，VIB7734治疗的受试者中CLASI-A评分反应者的比例进一步增加(91.7％)(图28)。另外，在第15、29、43、57、85、113和141天，与用安慰剂治疗的队列2受试者相比，在更高比例的VIB7734治疗的队列2受试者中观察到CLASI-A评分相对于基线降低至少50％(图29)。类似地，在第29、43、57、85、113和141天，与用安慰剂治疗的队列3受试者相比，在更高比例的VIB7734治疗的队列3受试者中观察到CLASI-A评分相对于基线降低至少50％(图53)。当组合来自队列2和队列3受试者的数据时，观察到相同的趋势(图54)。如图54所示，在第85天，在16名VIB7734治疗的受试者中的9名(～56％)和7名安慰剂治疗的受试者中的2名(～29％)中观察到≥50％的CLASI-A提高。图30和31总结了与用安慰剂治疗的队列2受试者的CLASI-A评分(图31A)、绝对血液pDC水平(图31B)和血液I型IFNGS水平(以绝对评分测量)(图31C)随时间的变化相比，用VIB7734治疗的队列2受试者的CLASI-A评分(图30A)、绝对pDC血液水平(图30B)和血液I型IFNGS水平(以绝对评分测量)(图30C)随时间观察到的变化。与安慰剂治疗组相比，VIB7734治疗组的CLASI-A评分和绝对pDC血液水平降低，并且血液I型IFNGS水平的中和比率增加。
实例14：药效学评估：皮肤pDC和IFN-1水平
对队列2和队列3中的受试者进行皮肤活检，并评估VIB7734对来自皮肤活检的pDC水平和1型干扰素(IFN-1)活性的影响(通过测量粘液病毒蛋白A(MxA)水平来测定)。结果示于图34至图37(队列2)和图56至图59(队列3)。
每次皮肤活检需要一个4mm的钻取活检。选择用于活检的解剖部位是由红斑或鳞屑指示的活动性炎症区域。用一根缝合线缝合钻取活检部位。在第1天给药之前或在筛选期间进行基线皮肤活检。然而，在其他筛选程序确认受试者符合研究条件之前，不进行基线皮肤活检。在第85天(±14天)或在早期终止访视时(如果受试者在第85天访视之前终止研究)进行重复活检。第85天的活检取自与基线活检部位相邻的同一解剖部位，避开了前一次钻取活检留下的瘢痕组织。通过评估施用药物前后皮肤活检样品中pDC的数量/mm2来测量VIB7734对皮肤病变中pDC的影响。使用抗ILT7克隆鉴定pDC。测量受影响皮肤中pDC密度变化的基本原理是确认VIB7734耗竭了除血液之外的靶组织中的pDC，并确定与皮肤相比，实现血液中pDC耗竭的目标水平所需的剂量之间是否存在差异。这将有助于后续临床试验的剂量选择。还测量了所有炎性细胞的密度。这证明了降低pDC水平是否会导致对皮肤中其他炎性细胞密度的下游影响。总结了观察到的pDC水平和作为基线百分比的水平。
图34示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg VIB7734(图34B)或安慰剂(图34A)后，队列2受试者皮肤活检中随时间的绝对活检pDC计数(以细胞数/平方毫米测量)。如图35所示，对于队列2中的受试者，VIB7734治疗的队列2受试者在第85天皮肤活检pDC计数变化的中位数减少(以第1天基线的百分比(图35A)以及细胞数/平方毫米(图35B)测量)为87％，而安慰剂治疗的队列2受试者为47％。
图56示出了在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)150mg VIB7734(图56B)或安慰剂(图56A)后，队列3受试者皮肤活检中随时间的绝对活检pDC计数(以细胞数/平方毫米测量)。如图57所示，用VIB7734治疗的队列3受试者在第85天的皮肤活检pDC计数的中位数(以第1天基线的百分比测量)相对于基线减少了99％，而用安慰剂治疗的队列3受试者增加了11％。组合来自队列2和3的安慰剂数据，50mg组(队列2)在第85天的皮肤活检pDC密度的中位数变化(以第1天基线的百分比测量)为-87％，150mg组(队列3)为-99％，而安慰剂组为-14％。
1型干扰素(IFN-1)活性在CLE患者的皮肤病变中上调。VIB7734对皮肤病变中IFN-1活性的影响还通过测定来自队列2(图37)和队列3(图58)受试者的皮肤活检中的粘液病毒蛋白A(MxA)(一种干扰素调节蛋白)的水平来确定。如图37所示，对于队列2中VIB7734治疗的受试者，活检MxA的中位数(以MxA阳性面积百分比、ROI面积的Pos％测量)从第1天的50.5％的基线值降低到第85天的1.7％。相比之下，对于安慰剂治疗的队列2受试者，活检MxA的中位数仅从第1天48.3的基线值降低到第85天的38.0。如图59进一步所示，对于队列3中VIB7734治疗的受试者，皮肤活检MxA的中位数(以MxA阳性面积百分比、ROI面积的Pos％测量)从89.7％的基线值降低到第85天的1.1％。相比之下，对于安慰剂治疗的队列3受试者，皮肤活检MxA的中位数实际上从1.9％的基线值增加到第85天的17.7％。组合来自队列2和队列3的安慰剂数据，用VIB7734治疗时MxA染色的中位数面积从第1天(基线)减小至第85天：50mg组(队列2)：50％至1.7％的受影响面积；150mg组(队列3)：90％至1.1％的受影响面积；安慰剂组：5.4％至18％的受影响面积。
图38和图39总结了与安慰剂治疗的队列2受试者的CLASI-A评分(图39A)、绝对血液pDC水平(图39B)、血液I型IFNGS水平(以绝对评分测量)(图39C)、皮肤活检pDC计数(图39D)和血液归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)(图39E)随时间的变化相比，VIB7734治疗的队列2受试者的CLASI-A评分(图38A)、绝对pDC血液水平(图38B)、血液I型IFNGS水平(以绝对评分测量)(图38C)、皮肤活检pDC计数(图38D)和血液归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)(图38E)随时间观察到的变化。与安慰剂治疗的队列2组相比，VIB7734治疗的队列2组的CLASI-A评分、绝对pDC血液水平、血液I型IFNGS水平和皮肤活检pDC计数均降低。
图64和图65总结了与安慰剂治疗的队列3受试者的CLASI-A评分(图65A)、绝对pDC血液水平(以细胞数/μL测量)(图65B)、血液归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)(图65C)和皮肤活检pDC计数(以细胞数/平方毫米测量)(图65D)随时间的变化相比，VIB7734治疗的队列3受试者的CLASI-A评分(图64A)、绝对pDC血液水平(以细胞数/μL测量)(图64B)、血液归一化I型IFNGS水平(以倍数变化测量)(图64C)和皮肤活检pDC计数(以细胞数/平方毫米测量)(图64D)随时间观察到的变化。与安慰剂治疗的队列3组相比，VIB7734治疗的队列3组的CLASI-A评分、绝对pDC血液水平、血液I型IFNGS水平和皮肤活检pDC计数均降低。
CLE患者皮肤病变中的炎性浸润(CD45+细胞)上调。VIB7734对皮肤病变中炎性浸润的影响还通过测定来自队列2(图60)和队列3(图62)受试者的皮肤活检中的CD45+细胞数/平方毫米的水平随时间的变化来确定。如图61所示，对于队列2中的VIB7734治疗的受试者，皮肤活检CD45计数的中位数从第1天1119的基线值降低到第85天的280。相比之下，对于安慰剂治疗的队列2受试者，皮肤活检CD45计数仅从第1天537的基线值降低到第85天的492。此外，如图63所示，对于队列3中的VIB7734治疗的受试者，皮肤活检CD45计数的中位数从707的基线值降低到第85天的513。相比之下，对于安慰剂治疗的队列3受试者，皮肤活检CD45计数从897的基线值降低到第85天的666。此外，图75D示出了在基线时皮肤中≥2个pDC/mm2的组合的队列2和队列3VIB7734治疗的受试者中pDC和CD45+细胞从基线到第85天的百分比变化之间的相关性。在一些受试者中，用VIB7734治疗后pDC的减少伴随着皮肤中总CD45+细胞的显著减少。总体而言，所有VIB7734治疗的受试者的CD45+细胞的中位数减少为59.69％，而安慰剂组为-23.97％。
VIB7734通过每月给药可逆地耗竭循环pDC。另外，VIB7734在给药期间减少I型IFNGS。VIB7734还降低了皮肤中的MxA水平和皮肤中的CD45水平。用VIB7734(特别是150mg剂量)治疗提高了CLASI评分。在接受VIB7734给药3个月的受试者中未发现安全问题。在用VIB7734治疗的受试者中未观察到异常或临床显著的ECG。此外，在VIB7734治疗的受试者中没有QT间期增加>30毫秒的病例。
来自队列2和队列3受试者的皮肤活检样品也经过福尔马林固定和石蜡包埋，以进行免疫组织化学(IHC)和其他分析。图42提供了本文使用的皮肤活检IHC分析方法的概述。进行三轮染色以评估pDC(BDCA+/ILT7+细胞)、IFN活性(MxA+像素)和炎性浸润(CD45+细胞)。使用皮肤活检IHC分析方法定量pDC和CD45+细胞的分析策略概述于图43A至图43C。使用皮肤活检IHC分析方法定量测定IFN活性的MxA的分析策略概述于图44A至图44C。
如图45A至图45I所示，对于队列2中的每个受试者，在基线pDC、MxA+像素和CD45+细胞的数量方面存在极小的活检内可变性。相比之下，在队列2中的受试者中，在基线pDC、MxA+像素和CD45+细胞的数量方面存在显著的活检间可变性(图46A至图46L)。图46J示出了来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线pDC。受试者表现出高基线pDC(n＝5，>100个pDC/mm2)、中等基线pDC(n＝3，10-100个pDC/mm2)或低基线pDC(n＝4，<10个pDC/mm2)。图46K示出了来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线MxA+像素。受试者表现出高基线MxA+像素(n＝5，>50％MxA+)、中等基线MxA+像素(n＝4，5％-50％MxA+)或低基线MxA+像素(n＝2，<5％MxA+)。图46L示出了来自队列2中每个受试者的皮肤活检中的基线CD45+细胞。受试者表现出高基线CD45+细胞(n＝3，>2000个CD45+细胞/mm2)、中等基线CD45+细胞(n＝4，500-2000个CD45+细胞/mm2)或低基线CD45+细胞(n＝5，<500个CD45+细胞/mm2)。图47示出了来自安慰剂治疗的队列2受试者的皮肤活检中pDC(图47A)、MxA+像素(图47B)和CD45+细胞(图47C)的减少(通过相对于基线的百分比变化测量)具有高反应可变性。在来自VIB7734治疗的队列2受试者的皮肤活检中观察到pDC、MxA+像素和CD45+细胞的更一致的减少。
因此，队列2中的安慰剂组在基线时和随时间在pDC计数和皮肤中IFN活性方面的反应均存在高可变性。相比之下，在队列2中的VIB7734治疗组中观察到皮肤中pDC计数和IFN活性的更一致的减少。
如图69A至图69I所示，对于队列3中的每个受试者，在基线pDC、MxA+像素和CD45+细胞的数量方面存在极小的活检内可变性。在VIB7734治疗的队列3组中观察到皮肤中pDC计数的一致减少。
如图70所示，在队列3中的受试者中，在基线pDC、MxA+像素和CD45+细胞的数量方面存在显著的活检间可变性(图70A至图70L)。与队列2中的受试者相比，在队列3中的受试者中观察到基线pDC和MxA信号略有增加。图70J示出了来自队列2和队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线pDC(以细胞数/平方毫米测量)。队列2中的受试者表现出高基线pDC(n＝5，>100个pDC/mm2)、中等基线pDC(n＝3，10-100个pDC/mm2)或低基线pDC(n＝4，<10个pDC/mm2)。队列3中的受试者表现出高基线pDC(n＝5，>100个pDC/mm2)、中等基线pDC(n＝3，10-100个pDC/mm2)或低基线pDC(n＝2，<10个pDC/mm2)。图70K示出了来自队列2和队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线MxA+像素(以％ROI MxA+测量)。队列2中的受试者表现出高基线MxA+像素(n＝5，>50％MxA+)、中等基线MxA+像素(n＝4，5％-50％MxA+)或低基线MxA+像素(n＝2，<5％MxA+)。队列3中的受试者表现出高基线MxA+像素(n＝6，>50％MxA+)或低基线MxA+像素(n＝4，<5％MxA+)。图70L示出了来自队列2和队列3中每个受试者的皮肤活检中的基线CD45+细胞(以细胞数/平方毫米测量)。队列2中的受试者表现出高基线CD45+细胞(n＝3，>2000个CD45+细胞/mm2)、中等基线CD45+细胞(n＝5，500-2000个CD45+细胞/mm2)或低基线CD45+细胞(n＝4，<500个CD45+细胞/mm2)。队列3中的受试者表现出高基线CD45+细胞(n＝2，>2000个CD45+细胞/mm2)、中等基线CD45+细胞(n＝4，500-2000个CD45+细胞/mm2)或低基线CD45+细胞(n＝4，<500个CD45+细胞/mm2)。因此，与队列2受试者相比，队列3受试者的皮肤活检中的基线pDC/IFN活性略高。
图74示出了用150mg VIB7734或安慰剂治疗的队列3中每个受试者在第85天(d85)的pDC相对于基线(BL)的变化。图74A示出了使用皮肤活检IHC分析方法，用安慰剂治疗的队列3(n＝2；10030044和10010052)中的受试者的pDC(以BDCA2+/ILT7+细胞测量)的变化。图74B示出了使用皮肤活检IHC分析方法，用150mg VIB7734治疗的队列3(n＝8；30010047、10120061、20070048、200020040、10010056、10120055、20060038和10140059)中的受试者的pDC(以BDCA2+/ILT7+细胞测量)的变化。图74C示出了在第85天，与基线相比，VIB7734治疗的队列3受试者中的每一个和安慰剂治疗的队列3受试者中的每一个的皮肤活检中pDC的变化(以细胞数/平方毫米测量)。
为了研究pDC对组织中局部I型IFN活性的贡献，还对来自用安慰剂或VIB7734治疗的受试者的皮肤样品进行了染色，以获取充分表征的I型IFN诱导型MxA蛋白(图78)。狼疮受试者皮肤中的I型IFN活性在基线时变化很大，大多数受试者在组织中表现出高MxA水平，而一些受试者几乎没有或没有MxA信号。在安慰剂治疗的受试者中，皮肤中MxA表达随时间的变化也很大，MxA染色的中位数面积从基线时的5.4％增加到第85天的18％(图78A)。用VIB7734治疗降低了皮肤中的MxA水平，VIB7734治疗的参与者在第85天相对于基线的中位数百分比变化为-84.5％(图78B-C)。
图71示出了在第85天，对于队列3中的受试者，没有观察到安慰剂对皮肤活检标志物pDC(以相对于第1天基线的百分比变化测量；图71A)、MxA+像素(以相对于第1天基线的百分比变化测量；图71B)或CD45+细胞(以相对于第1天基线的百分比变化测量；图71C)的明显影响。相比之下，如图72和图73所示，对于用150mg VIB7734治疗的大多数队列3受试者，与安慰剂治疗的队列3受试者相比，在第85天观察到pDC(以相对于第1天基线的百分比变化测量；图72A和图73A)和MxA+像素(以相对于第1天基线的百分比变化测量；图72B和图73B)的显著减少以及CD45+细胞(以相对于第1天基线的百分比变化测量；图72C和图73C)的减少。如图72A所示，观察到与安慰剂治疗的队列3受试者的pDC平均增加12.24+/-37.69(平均值+/-SEM)相比，VIB7734治疗的队列3受试者的pDC平均减少80.98+/-12.12(平均值+/-SEM)。如图72B所示，观察到与安慰剂治疗的队列3受试者的MxA+像素平均增加773.6+/-866.33(平均值+/-SEM)相比，VIB7734治疗的队列3受试者的MxA+像素平均减少58.29+/-17.88(平均值+/-SEM)。
图75示出了队列2和队列3中受试者的组合数据。与用安慰剂治疗的队列2和3中的受试者相比，VIB7734显著减少了用VIB7734治疗的队列2和3中的受试者皮肤中的pDC。如图75A所示，在第85天，队列2和3(n＝6)中安慰剂治疗的受试者的pDC平均值和中位数降低分别为11.38％和12.73％，而队列2和3(n＝16)中VIB7734治疗的受试者的pDC平均值和中位数降低分别为71.82％和95.3％。如图75B所示，在第85天，队列2和3(n＝6)中安慰剂治疗的受试者的MxA+像素平均值和中位数增加分别为269.3％和38.8％，而队列2和3(n＝16)中VIB7734治疗的受试者的pDC平均值和中位数降低分别为52.9％和84.48％。进行相关性分析以更好地理解皮肤中pDC变化与I型IFN活性之间的关系。在皮肤活检样品中pDC和MxA活性的降低之间存在高度显著的相关性(r＝0.7793，图75C)。虽然在具有最大程度的组织pDC耗竭的那些受试者中观察到MxA活性的显著降低，但不完全/部分pDC耗竭通常导致MxA的极小变化。因此，组合所有安慰剂和治疗的受试者(队列2和3)证明VIB7734对组织生物标志物的显着影响。这些数据表明，pDC是狼疮皮肤中I型IFN的关键来源，并且组织中这些细胞几乎完全耗竭会抑制局部IFN活性。
图76示出，虽然队列2和队列3受试者皮肤中的pDC(以细胞数/平方毫米测量)减少，但队列3受试者的pDC耗竭更一致。对于所有VIB7734治疗的队列2(图76A)和队列3(图76B)受试者，以及对于VIB7734治疗的队列2(图76C)和队列3(图76D)受试者，皮肤活检样品中没有低基线pDC或IFN活性，情况都是如此。
图66示出，虽然用VIB7734治疗的队列2和队列3受试者皮肤中的pDC(以相对于第1天基线的细胞数百分比变化测量)减少，但队列3受试者的pDC耗竭更一致。如图66A所示，在基线时具有>10个pDC/mm2的皮肤样品中，pDC相对于第1天基线的平均百分比减少对于VIB7734治疗的队列3受试者为96.31％，而对于VIB7734治疗的队列2受试者为85.45％。另外，如图66B所示，在基线时具有>5％MxA+的皮肤样品中，MxA+像素相对于第1天基线的平均百分比减少对于VIB7734治疗的队列3受试者为76.84％，而对于VIB7734治疗的队列2受试者为67.44％。
图48示出了皮肤活检IHC分析方法不包括活性阈值。图48A：来自用安慰剂或本文所述方法中使用的ILT7结合蛋白(VIB7734)治疗的队列2受试者的皮肤活检样品中MxA相对于基线的百分比变化。灰色轮廓表示MxA的数值倍数显著增加的皮肤活检样品。然而，总体而言，在来自队列2受试者的皮肤活检样品中观察到维持非常低水平的MxA。图48B：在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)安慰剂后，对来自队列2受试者的皮肤活检进行IHC。图48C：在多次皮下给药(每4周一次，共3剂)50mg VIB7734后，对来自队列2受试者的皮肤活检进行IHC。
图49示出了在队列2受试者的皮肤活检中高基线pDC数/IFN活性与对VIB7734的反应之间的关系。在VIB7734治疗组中，在5名反应者中的4名的皮肤活检中观察到高基线pDC数和高IFN活性。无反应者在皮肤活检样品中具有低基线pDC或IFN活性。安慰剂组中的队列2受试者显示pDC或IFN活性与反应之间没有明显的关系。因此，VIB7734治疗组中的CLASI反应者在很大程度上与基线时皮肤和血液IFN中的高pDC/IFN活性相关。另一方面，VIB7734治疗组中的CLASI无反应者与基线时皮肤中的低/中等pDC/IFN活性相关。
图67示出了在队列3受试者的皮肤活检中高基线pDC数与对VIB7734的反应之间的关系。VIB7734降低了队列3受试者皮肤中的pDC水平(图67A)。
进一步观察到，VIB7734治疗的队列3受试者中的CLASI反应者在很大程度上与皮肤中的中等/高pDC/MxA水平和基线时的高IFN相关(注：队列3中所有VIB7734治疗的受试者均具有高基线血液IFNGS)。用VIB7734耗竭pDC导致了CLE皮肤中的I型IFN活性显著降低，这表明这些细胞在自身免疫组织中的IFNα产生中的基本作用。
<110> 维拉生物公司（VIELA BIO, INC.）
<120> 使用ILT7结合蛋白的治疗方法
<130> 054493-512P01US
<140>
<141>
<160> 8
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Gly Leu Trp Gly Trp Asp Ser Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 2
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 3
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 3
Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 4
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 5
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 5
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1 5 10
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 6
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<211> 7
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 7
Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 8
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 8
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Val Val
1 5 10

Claims (65)

1.一种用于减少有需要的受试者中的I型干扰素基因标记(IFNGS)的方法，该方法包括向该受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中当该受试者中的I型IFNGS相对于正常受试者中的I型IFNGS升高时，向该受试者施用该ILT7结合蛋白。
2.如权利要求1所述的方法，其中测量取自该受试者的测试生物样品中的I型IFNGS，其中该测试样品选自由血液、痰、唾液、皮肤细胞、皮肤活检样品、肾细胞、肺细胞、肝细胞、心脏细胞、脑细胞、神经组织、甲状腺细胞、眼细胞、骨骼肌细胞、软骨、骨组织和培养细胞组成的组。
3.如权利要求2所述的方法，其中该测试生物样品是血液、皮肤细胞或皮肤活检样品。
4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该测试生物样品中的I型IFNGS相对于正常生物样品升高至少约4倍。
5.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该I型IFNGS包括两种或更多种I型干扰素(IFN)诱导型基因的总体表达水平。
6.如权利要求5所述的方法，其中该两种或更多种I型干扰素(IFN)诱导型基因选自由SPATS2L、EPSTI1、HERC5、IFI27、IFI44、IFI44L、IFI6、IFIT1、IFIT3、ISG15、LAMP3、LY6E、MX1、OAS1、OAS2、OAS3、PLSCR1、RSAD2、RTP4、SIGLEC1和USP18组成的组。
7.如权利要求5所述的方法，其中该I型IFNGS包括所有SPATS2L、EPSTI1、HERC5、IFI27、IFI44、IFI44L、IFI6、IFIT1、IFIT3、ISG15、LAMP3、LY6E、MX1、OAS1、OAS2、OAS3、PLSCR1、RSAD2、RTP4、SIGLEC1和USP18的总体表达水平。
8.如权利要求5所述的方法，其中该I型IFNGS通过测定该测试生物样品中两种或更多种I型干扰素(IFN)诱导型基因的mRNA水平来确定。
9.如权利要求7所述的方法，其中该I型IFNGS通过测定该测试生物样品中21种I型干扰素(IFN)诱导型基因的mRNA水平来确定。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中施用该ILT7结合蛋白引起该受试者中浆细胞样树突状细胞(pDC)减少。
11.如权利要求10所述的方法，其中这些pDC是循环pDC。
12.如权利要求10或11中任一项所述的方法，其中这些pDC的减少是可逆的。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中减少该I型IFNGS治疗该受试者的自身免疫性疾病。
14.如权利要求13所述的方法，其中该自身免疫性疾病选自下组，该组由以下各项组成：系统性红斑狼疮(SLE)；狼疮性肾炎；皮肤红斑狼疮(CLE)；干燥综合征；炎性肌炎，诸如皮肌炎、包涵体肌炎、青少年肌炎和多肌炎；系统性硬化症；糖尿病；桥本氏病；自身免疫性肾上腺功能不全；纯红细胞再生障碍性贫血；多发性硬化症；风湿性心脏炎；银屑病；银屑病关节炎；类风湿性关节炎；慢性炎症；慢性风湿病；白癜风；斑秃；化脓性汗腺炎；乳糜泻；急性和慢性移植物抗宿主病(GVHD)；血管炎症；心肌梗塞；以及1型干扰素病。
15.如权利要求14所述的方法，其中该自身免疫性疾病是SLE或CLE。
16.如权利要求14所述的方法，其中该自身免疫性疾病是干燥综合征。
17.如权利要求14所述的方法，其中该自身免疫性疾病是皮肌炎。
18.如权利要求14所述的方法，其中该自身免疫性疾病是多肌炎。
19.如权利要求14所述的方法，其中该自身免疫性疾病是系统性硬化症。
20.如权利要求14所述的方法，其中该自身免疫性疾病是化脓性汗腺炎。
21.如权利要求14所述的方法，其中该自身免疫性疾病是白癜风。
22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白是包含分别包含SEQID NO:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3的抗体。
23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白是包含与SEQ ID NO:1至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的可变重链(VH)和/或与SEQ ID NO:2至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的可变轻链(VL)的抗体。
24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白是包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)的抗体。
25.如权利要求22-24中任一项所述的方法，其中该抗体是无岩藻糖基化的。
26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量在约0.1mg至约1000mg的范围内。
27.如权利要求26所述的方法，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量为约1mg、约5mg、约15mg、约50mg、约100mg或约150mg。
28.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白通过皮下注射施用。
29.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中与施用该ILT7结合蛋白之前的I型IFNGS相比，施用该ILT7结合蛋白导致该受试者中I型IFNGS减少至少约50％。
30.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白诱导针对pDC的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性。
31.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白抑制I型干扰素(IFN)从pDC释放。
32.如权利要求31所述的方法，其中该I型IFN是IFNα。
33.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白特异性结合ILT7。
34.如权利要求33所述的方法，其中该ILT7位于pDC上。
35.一种监测对受试者中以活化的浆细胞样树突状细胞(pDC)为标志的病症的治疗有效性的方法，该方法包括以下步骤：
(a)测量取自该受试者的生物样品中的I型干扰素基因标记(IFNGS)，以获得该I型IFNGS的基线值；以及
(b)测量施用治疗后取自该受试者的生物样品中的I型IFNGS，其中该治疗包括向该受试者施用免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。
36.一种减少有需要的受试者的组织中的浆细胞样树突状细胞(pDC)的方法，该方法包括向该受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白。
37.如权利要求36所述的方法，其中该组织选自由皮肤细胞、皮肤活检样品、肾细胞、肺细胞、肝细胞、心脏细胞、脑细胞、神经组织、甲状腺细胞、眼细胞、骨骼肌细胞、软骨、骨组织和气道细胞组成的组。
38.如权利要求37所述的方法，其中该组织是皮肤细胞。
39.如权利要求37所述的方法，其中该组织是皮肤活检样品。
40.如权利要求36-39中任一项所述的方法，其中该方法导致该组织中的pDC与基线值相比降低。
41.如权利要求40所述的方法，其中该组织中的pDC与该基线值相比降低的范围为约1％至约99％。
42.如权利要求40或41所述的方法，其中该组织中的pDC与该基线值相比降低至少约50％。
43.如权利要求36-42中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白是包含分别包含SEQID NO:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3的抗体。
44.一种治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍的方法，该方法包括向该受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量为约1mg、约5mg、约15mg、约50mg、约100mg或约150mg。
45.如权利要求1-34或44中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量为约50mg。
46.如权利要求1-34或44中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量为约150mg。
47.一种治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍的方法，该方法包括向该受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量为约50mg。
48.一种治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍的方法，该方法包括向该受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量为约150mg。
49.一种减少有需要的受试者的组织中的浆细胞样树突状细胞(pDC)的方法，该方法包括向该受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量为约50mg。
50.一种减少有需要的受试者的组织中的浆细胞样树突状细胞(pDC)的方法，该方法包括向该受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中该ILT7结合蛋白的药学有效量为约150mg。
51.如权利要求49或权利要求50所述的方法，其中该组织中的pDC与该基线值相比降低的范围为约1％至约99％。
52.如权利要求49或权利要求50所述的方法，其中该组织中的pDC与该基线值相比降低至少约50％。
53.如权利要求1-52中任一项所述的方法，其中该受试者在施用该ILT7结合蛋白之前具有高血液I型IFNGS水平。
54.如权利要求1-53中任一项所述的方法，其中该受试者在施用该ILT7结合蛋白之前在组织活检中具有高pDC水平。
55.如权利要求44-54中任一项所述的方法，其中该自身免疫性疾病是系统性红斑狼疮(SLE)；狼疮性肾炎；皮肤红斑狼疮(CLE)；干燥综合征；炎性肌炎，诸如皮肌炎、包涵体肌炎、青少年肌炎和多肌炎；系统性硬化症；糖尿病；桥本氏病；自身免疫性肾上腺功能不全；纯红细胞再生障碍性贫血；多发性硬化症；风湿性心脏炎；银屑病；银屑病关节炎；类风湿性关节炎；慢性炎症；慢性风湿病；白癜风；斑秃；化脓性汗腺炎；乳糜泻；急性和慢性移植物抗宿主病(GVHD)；血管炎症；心肌梗塞；以及1型干扰素病。
56.如权利要求55所述的方法，其中该自身免疫性疾病是SLE。
57.如权利要求55所述的方法，其中该自身免疫性疾病是CLE。
58.如权利要求44-54中任一项所述的方法，其中该自身免疫性疾病是狼疮。
59.如权利要求56-58中任一项所述的方法，其中该受试者未患有盘状红斑狼疮(DLE)。
60.一种选择患者以用ILT7结合蛋白进行治疗的方法，该方法包括：
(i)确定该患者的基线血液I型IFNGS水平，以及
(ii)选择具有高基线血液I型IFNGS水平的那些患者以用该ILT7-结合蛋白进行治疗。
61.一种治疗有需要的受试者的自身免疫性障碍的方法，该方法包括向该受试者施用药学有效量的免疫球蛋白样转录物7(ILT7)结合蛋白，其中在施用该ILT7结合蛋白之前确定该受试者具有高血液I型IFNGS水平。
62.如权利要求44-61中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白是包含分别包含SEQID NO:3、4、5、6、7和8的氨基酸序列的重链互补决定区(HCDR)HCDR1、HDR2、HCDR3和轻链互补决定区(LCDR)LCDR1、LCDR2和LCDR3的抗体。
63.根据权利要求44-62中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白是包含与SEQ IDNO:1至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的可变重链(VH)和/或与SEQ IDNO:2至少85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的可变轻链(VL)的抗体。
64.根据权利要求44-63中任一项所述的方法，其中该ILT7结合蛋白是包含SEQ ID NO:1的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:2的轻链可变区(VL)的抗体。
65.如权利要求60-64中任一项所述的方法，其中该抗体是无岩藻糖基化的。
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