CN115119831B - 一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液 - Google Patents
一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115119831B CN115119831B CN202210925533.5A CN202210925533A CN115119831B CN 115119831 B CN115119831 B CN 115119831B CN 202210925533 A CN202210925533 A CN 202210925533A CN 115119831 B CN115119831 B CN 115119831B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ginsenoside
- stem cells
- adult stem
- low
- temperature preservation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 title claims abstract description 33
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 title claims abstract description 33
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 26
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 title claims abstract description 21
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 14
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims abstract description 12
- PYXFVCFISTUSOO-UHFFFAOYSA-N betulafolienetriol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC(C(C)(O)CCC=C(C)C)C4C(O)CC3C21C PYXFVCFISTUSOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- RAQNTCRNSXYLAH-RFCGZQMISA-N (20S)-ginsenoside Rh1 Chemical compound O([C@@H]1[C@H]2C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]2C[C@@H](O)[C@H]3[C@@]([C@@]2(C1)C)(C)CC[C@@H]3[C@@](C)(O)CCC=C(C)C)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RAQNTCRNSXYLAH-RFCGZQMISA-N 0.000 claims description 11
- RAQNTCRNSXYLAH-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rh1 Natural products CC(C)=CCCC(C)(O)C1CCC(C2(C3)C)(C)C1C(O)CC2C1(C)CCC(O)C(C)(C)C1C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O RAQNTCRNSXYLAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N ginsenoside Rc Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@H]1O JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N 0.000 claims description 10
- CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N chikusetsusaponin LM5 Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC(C(C(O)C1O)O)OC1COC1OC(CO)C(O)C1O CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rb2 Natural products CC(=CCCC(OC1OC(COC2OCC(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Rc Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC2OC(CO)C(O)C2O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 20
- 238000007710 freezing Methods 0.000 abstract description 12
- 230000008014 freezing Effects 0.000 abstract description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 abstract 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本申请公开了一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液。本申请的含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液，由成体干细胞自身物种来源的血清、DMEM/F‑12培养液、二甲基亚砜和人参皂苷组成；其中，血清和DMEM/F‑12培养液的体积比为1:1，二甲基亚砜的浓度为5‑15％，人参皂苷的浓度为5‑15μg/mL。本申请的成体干细胞低温保存溶液，通过组分和配方优化，能够减少成体干细胞冻存时的损伤，提高细胞复苏的成活率，为成体干细胞冻存提供了一种新的方案。
Description
技术领域
本申请涉及成体干细胞保存技术领域，特别是涉及一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液。
背景技术
成体干细胞是指存在于各种分化组织中，具有自我更新、高度增值和多向分化潜能的尚未分化的干细胞。成体干细胞普遍采用低温保存，即分散于保存液中，在保存液的保护下进行低温冻存。
现有的成体干细胞低温保存液主要由二甲基亚砜和血清组成，虽然能够长期冻存；但是，一方面，二甲基亚砜本身对细胞具有损伤，长期冻存这种损伤作用会增强；另一方面，现有的保存液保存后，复苏过程中会导致干细胞损伤和分化潜能降低。
因此，如何避免或进一步减少低温冻存对成体干细胞的损伤，是本领域的研究重点。
发明内容
本申请的目的是提供一种新的含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液。
本申请采用了以下技术方案：
本申请公开了一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液，由成体干细胞自身物种来源的血清、DMEM/F-12培养液、二甲基亚砜和人参皂苷组成；血清和DMEM/F-12培养液的体积比为1:1，二甲基亚砜的浓度为5-8％，人参皂苷的浓度为5-15μg/mL。
需要说明的是，本申请的血清是取自成体干细胞物种来源的血清，优选同一个体来源的血清，能够更好的对成体干细胞进行保护；并且，本申请降低了二甲基亚砜的用量，通过血清、DMEM/F-12培养液、二甲基亚砜和人参皂苷的有机组合，能够最大程度的减少冻存和复苏过程中成体干细胞的损伤。
优选的，人参皂苷为人参皂苷Rh1、人参皂苷aPPD和人参皂苷Rc中的至少一种。
优选的，本申请的低温保存溶液中，人参皂苷由人参皂苷Rh1，以及人参皂苷aPPD和人参皂苷Rc中的一种或两种组成。
优选的，人参皂苷由人参皂苷Rh1、人参皂苷aPPD和人参皂苷Rc组成，且三者的比例为人参皂苷Rh1:人参皂苷aPPD:人参皂苷Rc＝2:1:1。
需要说明的是，本申请的低温保存溶液，原则上只要添加5-15μg/mL人参皂苷即可；但是，研究发现，人参皂苷Rh1、aPPD和Rc三者的使用效果较好；尤其是Rh1，与aPPD和Rc的一种或两种的组合效果较佳，其中又以人参皂苷Rh1:人参皂苷aPPD:人参皂苷Rc＝2:1:1的效果最佳。
本申请的有益效果在于：
本申请的含有人参皂苷的成体干细胞低温保存溶液，通过血清、DMEM/F-12培养液、二甲基亚砜和人参皂苷的有机组合，能够减少冻存和复苏过程中成体干细胞的损伤，提高细胞复苏的成活率，为成体干细胞冻存提供了一种新的方案。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本申请进行详细说明。以下实施例仅用于对本申请进行说明，不应理解为对本申请的限制。
实施例
一、主要材料和仪器
人间充质干细胞(弗元生物，FY200001)，人血清(恒远生物，HY-10069)，DMEM/F-12培养液(赛默飞)，二甲基亚砜(分析纯1083196)，人参皂苷Rh1(春秋生物，CAS号:63223-86-9)，人参皂苷aPPD(春秋生物，CAS号:30636-90-9)，人参皂苷Rc(乐美天医药，CAS号:11021-14-0)。
二、低温保存溶液配制
本例分别配制了不同配方的低温保存溶液，具体如表1所示。
表1低温保存溶液配方
按照表1的配方，本例配制了14个低温保存溶液，分别用于低温保存试验。
三、保存试验
细胞经1000rpm，10min离心倒掉上清液，用本例配制的低温保存溶液重悬，装入无菌细胞冻存管中。
冻存方式为，4℃条件下放置1h，-20℃放置2h，-80℃放置10h，然后直接放入液氮中长期保存。本例在液氮中保存1周后，取出进行复苏试验。本例每个低温保存溶液设计三个重复，复苏的活细胞率为三者的平均值。
细胞复苏方式为，冻存管从液氮取出后，在37℃水浴中摇晃至溶解，1500rp离心10min，弃上清，加入DMEM/F-12培养液，在37℃、5％CO2培养箱中培养，台盼兰染色计数细胞活性率。
四、结果及分析
细胞活性率的计算公式为：
活细胞率(％)＝活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100
采用不同低温保存溶液的活细胞率计算结果如表2所示。
表2复苏的活细胞率
| 编号 | 活细胞率 | 编号 | 活细胞率 | 编号 | 活细胞率 |
| 1 | 98.6％ | 6 | 95.5％ | 11 | 50.9％ |
| 2 | 99.1％ | 7 | 94.2％ | 12 | 55.7％ |
| 3 | 98.3％ | 8 | 92.3％ | 13 | 56.3％ |
| 4 | 98.1％ | 9 | 91.1％ | 14 | 89.5％ |
| 5 | 95.7％ | 10 | 66.8％ |
表2的结果显示，血清和DMEM/F-12培养液的体积比为1:1，二甲基亚砜的浓度为5-8％，人参皂苷的浓度为5-15μg/mL，该配方的低温保存溶液具有较好的活细胞率，如试验1至9；其中，Rh1，与aPPD和Rc的一种或两种的组合效果较佳；尤其是，人参皂苷Rh1:人参皂苷aPPD:人参皂苷Rc＝2:1:1的效果最佳，如试验1至4。血清、DMEM/F-12培养液、二甲基亚砜和人参皂苷的有机组合，能够减少冻存和复苏过程中成体干细胞的损伤，提高细胞复苏的成活率。二甲基亚砜的用量超过8％，如10％，反而会导致活细胞率下降。
以上内容是结合具体实施方式对本申请所作的详细说明，不能认定本申请的实现方式只局限于这些说明。对于本申请技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请基本发明构思的前提下，还可以进行若干简单推演或替换。
Claims (1)
1.一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液，其特征在于：由成体干细胞自身物种来源的血清、DMEM/F-12培养液、二甲基亚砜和人参皂苷组成；
所述血清和DMEM/F-12培养液的体积比为1:1，所述二甲基亚砜的浓度为5-8％，所述人参皂苷的浓度为5-15μg/mL；
所述人参皂苷由人参皂苷Rh1、人参皂苷aPPD和人参皂苷Rc组成，且三者的比例为人参皂苷Rh1:人参皂苷aPPD:人参皂苷Rc＝2:1:1。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210925533.5A CN115119831B (zh) | 2022-08-03 | 2022-08-03 | 一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210925533.5A CN115119831B (zh) | 2022-08-03 | 2022-08-03 | 一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115119831A CN115119831A (zh) | 2022-09-30 |
| CN115119831B true CN115119831B (zh) | 2023-11-24 |
Family
ID=83385231
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210925533.5A Active CN115119831B (zh) | 2022-08-03 | 2022-08-03 | 一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115119831B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002052936A1 (fr) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Japan Science And Technology Corporation | Agents de conservation destines a des cellules lyophilisees |
| CN103081892A (zh) * | 2011-10-27 | 2013-05-08 | 北京清美联创干细胞科技有限公司 | 一种用于长期保存成体干细胞的冻存液 |
| CN105454222A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-04-06 | 河南省银丰生物工程技术有限公司 | 一种细胞冻存液及其制备方法和应用 |
| CN107410289A (zh) * | 2017-09-26 | 2017-12-01 | 青海七彩花生物科技有限公司 | 一种骨髓间充质干细胞储存液 |
-
2022
- 2022-08-03 CN CN202210925533.5A patent/CN115119831B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002052936A1 (fr) * | 2000-12-28 | 2002-07-11 | Japan Science And Technology Corporation | Agents de conservation destines a des cellules lyophilisees |
| CN103081892A (zh) * | 2011-10-27 | 2013-05-08 | 北京清美联创干细胞科技有限公司 | 一种用于长期保存成体干细胞的冻存液 |
| CN105454222A (zh) * | 2016-02-02 | 2016-04-06 | 河南省银丰生物工程技术有限公司 | 一种细胞冻存液及其制备方法和应用 |
| CN107410289A (zh) * | 2017-09-26 | 2017-12-01 | 青海七彩花生物科技有限公司 | 一种骨髓间充质干细胞储存液 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115119831A (zh) | 2022-09-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dulbecco | Reactivation of ultra-violet-inactivated bacteriophage by visible light | |
| Ebert et al. | Assessment of the changes of 2, 4-dichlorophenoxyacetic acid concentrations in plant tissue culture media in the presence of activated charcoal | |
| EP3578639A1 (en) | Agent for accelerating growth of stem cells with differentiation potential | |
| Weaver | Effect of gibberellic acid on fruit set and berry enlargement in seedless grapes of Vitis vinifera | |
| CN115299433B (zh) | 一种利用皂苷和黄酮促生长的成体干细胞低温保存冻存液 | |
| CN115119831B (zh) | 一种含有人参皂苷的成体干细胞的低温保存溶液 | |
| CN112471137A (zh) | 一种细胞冻存液及其冻存造血干细胞的方法和干细胞制剂 | |
| KR101909592B1 (ko) | 팬다 고무나무 및 스킨답서스 추출물을 유효성분으로 함유하는 중금속 또는 미세먼지 제거용 화장료 조성물 | |
| CN115943949A (zh) | 一种细胞冻存液及其制备方法和应用 | |
| CN115590015A (zh) | 一种脐带间充质干细胞冻存保护剂及冻存方法 | |
| CN116746571B (zh) | 一种用于人骨髓间充质干细胞的储存液及冻存方法 | |
| CN110433134B (zh) | 一种释放一氧化氮软膏及其制备方法与应用 | |
| CN112425603B (zh) | 一种脂肪干细胞运输保存液 | |
| CN113215082A (zh) | 一种表皮干细胞复苏液及复苏方法 | |
| CN114657069A (zh) | 一种粪便保存液及粪菌悬液的制备方法 | |
| CN114209742A (zh) | 一种产气荚膜梭菌抑制剂及其应用 | |
| CN103238586A (zh) | 一种心肌脏器保存液制备方法 | |
| CN113444685A (zh) | 一种自体外周血培养免疫细胞的培养方法 | |
| CN110713933A (zh) | 一种保存微藻饵料的方法 | |
| KR102123805B1 (ko) | 클로렐라의 냉동 보관 방법 | |
| CN111675639A (zh) | 一种除水剂在提高烯草酮体系稳定性中的应用以及烯草酮体系 | |
| CN112655703B (zh) | 基于金龙胆草水提液的鲜切花保鲜剂及其制备方法和应用 | |
| CN109258623A (zh) | 一种猪精液稀释剂及应用 | |
| CN114191449B (zh) | 一种抑菌凝胶及其制备方法和应用 | |
| CN115305232B (zh) | 一种脂肪间充质干细胞复苏培养液及复苏方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |