CN115109167A - 一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种新型冠状病毒(SARS‑CoV‑2)重组抗原及其应用,属于生物工程技术领域。该抗原是通过基因工程方法表达新型冠状病毒BA.2.12.1突变株核衣壳蛋白和刺突蛋白的融合蛋白,重组抗原具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。实验结果显示,使用核衣壳蛋白和刺突蛋白的融合蛋白作为标记抗原,在新型冠状病毒IgM抗体检测中,比单独使用核衣壳蛋白或单独使用刺突蛋白的检出率要高;使用核衣壳蛋白和刺突蛋白的融合蛋白作为标记抗原,在新型冠状病毒IgG抗体检测中,比单独使用核衣壳蛋白或单独使用刺突蛋白的检出率要高;使用新型冠状病毒BA.2.12.1突变株为模板的重组抗原在近期采集的样本检测中,比采用早期未突变毒株Wuhan‑Hu‑1为模板的检出率要高。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域,具体涉及一种新型冠状病毒重组抗原、基因、包含其的质粒、宿主细胞和应用。
背景技术
冠状病毒家族属于病毒目、冠状病毒科,该家族可进一步细分为α、β、γ和δ4个属。SARS-CoV-2属于β属,遗传物质为连续线型单链RNA,基因组全长29891个核苷酸,可引起新型冠状病毒肺炎(Corona virus disease 2019,COVID-19),主要症状包括发热、咳嗽、乏力、胸闷、头痛、肌肉酸痛、咽痛、腹泻等。2019年年底开始爆发的新型冠状病毒肺炎疫情,截至2022年6月11日已席卷前世界200多个国家和地区,造成超过5.3亿例确诊和超过631.6万例病死,严重威胁着人们的健康和生命安全。
目前,对新型冠状病毒肺炎尚无特效药,早确诊、早隔离、早治疗是防止该病扩散和增加治愈率的关键。但是,该病初期的症状以发热、干咳、乏力为主,与普通流感不易区分;且部分患者仅为中低热甚至无明显发热症状,缺乏明显的特异性临床表现,增加了临床的诊断难度和病毒传播速度;加之新型冠状病毒感染人体后存在潜伏期(中位时间3.0天,最长可超过3周),在潜伏期内也具有较强传染性。因此,快速、准确地诊断出新型冠状病毒感染者对于及时切断病毒的传播是至关重要的。
新型冠状病毒病毒的实验室检测分为核酸检测、血清抗体检测和抗原检测。核酸检测具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点,是实验室确诊新冠肺炎的“金标准”,目前使用最广泛的实时荧光定量RT-PCR技术。核酸检测样本一般为鼻拭子、咽拭子、鼻咽拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。但是核酸检测也存在以下一些问题:1、由于采样不当、样本保存不当、采用不同类型的标本以及使用不同厂家试剂都可能造成核酸检测结果“假阴性”而出现漏诊;2、对检测设备或平台要求较高,高灵敏度的核酸检测仪价格不菲,对实验室的洁净度和操作人员要求也高,不利于中小医院和基层的推广;3、核酸检测耗时较长,完成一个RT-PCR的检测通常需要2-3个小时,然而考虑到样本运输、大量样本积压的情况,通常需要更长时间才可以报告结果。
因此当核酸检测阴性时,将血清IgM和IgG抗体检测增加进去,可以弥补核酸检测容易造成漏诊的缺点。新型冠状病毒肺炎发病3-6天后,首先出现的是免疫球蛋白IgM抗体,然后10-18天出现IgG抗体。因此,IgM抗体增高提示近期急性感染,IgG抗体增高提示既往感染。而且血清IgM和IgG抗体水平的动态监测,对判断病患病情发展和治疗有积极作用。血清学检测最大的优势在于方便快捷,检测时间较短,能够有效突破现有检测技术对人员、场所的限制,缩短检测用时,已被写进了《新型冠状病毒肺炎诊断方案(试行第七版)》。
新型冠状病毒抗原检测可直接检测出人体样本中是否含有新型冠状病毒,诊断快速、准确,对设备和人员要求低。但上呼吸道样本中病毒数量较少,容易造成漏检。
新型冠状病毒核酸/抗体/抗原检测各有侧重,不能互相替代,多种检测方法联合应用,互为补充,将分子生物和免疫水平检测相结合,发挥各自优势,提高灵敏度与特异性,可有效缩短检测窗口期,提高阳性检出率,为各种可能的风险人群提供检测保障。
在新型冠状病毒的抗体检测中,主要使用N基因编码的核衣壳蛋白作为诊断抗原,但单独使用核衣壳蛋白无法获得高灵敏度和检出率,补充刺突蛋白之后,灵敏度和检出率都能得到提高。
新型冠状病毒至今已经流行两年半时间,已检测出超过1000多种的变异株,随着变异的增加,原有的抗体检测方法已经开始出现不同程度的漏检。现在主要流行的变异株为BA.2.12.1突变株,我们以此为模板,重组表达出核衣壳蛋白和刺突蛋白的融合蛋白,能提高新型冠状病毒抗体的检出率。
发明内容
1、要解决的问题
针对背景技术提出的技术问题,本申请提供一种新型冠状病毒BA.2.12.1突变株核衣壳蛋白和刺突蛋白的融合蛋白、基因、包含其的质粒、宿主细胞及其应用,该蛋白作为靶抗原用于新型冠状病毒的抗体检测可提高灵敏度和检出率。
2、技术方案
为解决上述问题,本发明采用如下的技术方案。
一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
所述的重组抗原的片段为新型冠状病毒BA.2.12.1突变株核衣壳蛋白第1位至第213位氨基酸与刺突蛋白第319位至第537位氨基酸的融合蛋白。
上述所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
所述的重组抗原包括如下:
(a)由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质;或,
(b)在SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有所述重组抗原活性的由(a)衍生的蛋白质。
上述所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
所述的重组抗原包括如下:
(a)由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列编码得到的蛋白质;或,
(b)在SEQ ID No.2所示的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个碱基且能够编码得到具有所述重组抗原活性的由(a)衍生的蛋白质。
上述所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
还包括表达基因,所述的表达基因用于编码所述的新型冠状病毒重组抗原;
所述的表达基因包括如下:
(a)如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列;或,
(b)在SEQ ID No.2所示的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个碱基且能够编码得到具有所述重组抗原活性的核苷酸序列。
上述所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
所述的表达基因表达新型冠状病毒BA.2.12.1突变株核衣壳蛋白第1位至第213位氨基酸与刺突蛋白第319位至第537位氨基酸的融合蛋白。
上述所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
所述的表达基因还使用柔性连接子(GGGGS)3作为融合蛋白的连接子。
上述所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
所述的表达基因在蛋白C端连接有6个组氨酸。
上述所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
还包括重组质粒,所述的重组质粒含有所述的表达基因。
上述所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,
还包括宿主表达细胞,所述的宿主表达细胞用于表达所述的重组抗原。
一种如上述所述的新型冠状病毒重组抗原的应用,所述的新型冠状病毒重组抗原用于制备新型冠状病毒抗体检测试剂。
3、有益效果
相比于现有技术,本发明的有益效果为:
在本发明中,术语新型冠状病毒核衣壳蛋白是指新冠冠状病毒N基因编码的蛋白,术语新型冠状病毒刺突蛋白是指新型冠状病毒S基因编码的蛋白;为了提高检出率,选择现在主要流行的变异株BA.2.12.1突变株为模板;为了提高表达产量及诊断的特异性,截短表达新型冠状病毒核衣壳蛋白的第1位至第213位氨基酸,截短表达新型冠状病毒刺突蛋白的第319位至第537位氨基酸;使用柔性连接子(GGGGS)3作为融合蛋白的连接子;为了有更好的活性,选择真核表达系统表达目的蛋白;为了便于纯化,蛋白C端加了6个组氨酸。同时,实验结果显示,使用核衣壳蛋白和刺突蛋白的融合蛋白作为标记抗原,在新型冠状病毒IgM抗体检测中,比单独使用核衣壳蛋白或单独使用刺突蛋白的检出率要高;实验结果显示,使用核衣壳蛋白和刺突蛋白的融合蛋白作为标记抗原,在新型冠状病毒IgG抗体检测中,比单独使用核衣壳蛋白或单独使用刺突蛋白的检出率要高;实验结果显示,使用新型冠状病毒BA.2.12.1突变株为模板的重组抗原在近期采集的样本检测中,比采用早期未突变毒株Wuhan-Hu-1为模板的检出率要高。
附图说明
图1是目的基因PCR扩增的琼脂糖电泳图,其中“1”是PCR产物,“M”是DNA分子量标准Marker F。
图2是重组抗原纯化后的SDS-PAGE电泳图,其中“1”是上样样品,“2”是穿出,“3”是10mM咪唑洗脱峰,“4”是100mM咪唑洗脱峰,“5”是300mM咪唑洗脱峰,“6”是填料,“M”是低分子量蛋白质Marker(14.4-97.4kDa)。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
除非另有说明,本文中所使用术语具有本发明相关领域的普通技术人员通常理解的含义。
实施例1
新型冠状病毒BA.2.12.1突变株NP+SP融合蛋白的设计及表达质粒构建
(1)核衣壳蛋白表达区域氨基酸序列选定:选择核衣壳蛋白的第1位至第213位氨基酸;刺突蛋白表达区域氨基酸序列选定:选择刺突蛋白的第319位至第537位氨基酸;连接子的选择:选择(GGGGS)3作为两个蛋白的连接子;纯化标签的选择:在融合蛋白C端加上6个组氨酸作为纯化标签。氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
(2)密码子优化:根据人类细胞的密码子嗜好,对表达蛋白进行密码子优化,并在5’端加上Kpn I的酶切位点GGTACC,在3’端加上终止密码子TGA及Xba I的酶切位点TCTAGA,优化之后基因序列如SEQ ID NO:2。
(3)基因合成:委托金唯智公司合成优化后的基因序列,连接到pUC57质粒上。
(4)PCR扩增:设计引物序列P1和P2,以合成的质粒为模板,通过PCR方法获得抗原的DNA片段,预估PCR产物大小1379bp。引物序列如表1所示,由金唯智公司合成。
表1:扩增引物
PCR反应体系为50μl,其中如表2所示:
表2
合成质粒 | 1μl |
2.5mM dNTPs | 4μl |
10x Pfu Buffer | 5μl |
Pfu DNA聚合酶 | 0.5μl |
引物P1 | 0.5μl |
引物P2 | 0.5μl |
ddH<sub>2</sub>O | 38.5μl |
反应条件为:95℃3min预变性;94℃30s,54℃30s,72℃40s,30个循环;72℃延伸5min。在1%琼脂糖凝胶中电泳,160伏电压,结果在1000-1500bp之间出现特异性条带,如图1所示。
(5)双酶切:使用PCR产物回收试剂盒(购自上海生工)回收DNA片段,然后使用限制性内切酶Kpn I和Xba I(购自NEB公司)进行双酶切,用胶回收试剂盒(购自上海生工)回收酶切产物。
(6)连接、转化:将双酶切片段用T4 DNA连接酶(购自上海生工)连接到同样双酶切的我公司构建的pCB2真核表达质粒上,获得表达质粒pCB2/SARS-CoV-2。将表达质粒转化入DH5α感受态细胞中,涂于氨苄抗性的琼脂平皿上进行培养。
(7)鉴定、测序:对平皿上长出的单斑菌落进行PCR鉴定,阳性菌落送金唯智公司测序,测序序列与预期序列一致:
GGTACCATGAGCGACAATGGACCTCAGAACCAGAGGAACGCACTGAGAATCACATTCGGAGGACCATCTGACAGCACTGGCAGCAACCAGAATGGAGGTGCCAGAAGCAAGCAGAGGAGACCTCAGGGACTCCCTAACAATACCGCATCCTGGTTCACCGCACTCACTCAGCATGGTAAGGAGGATCTGAAGTTTCCTAGAGGACAGGGAGTGCCTATCAACACCAACAGCAGTCCTGACGATCAGATTGGCTATTACAGGAGAGCCACTAGACGCATCAGAGGTGGAGATGGCAAGATGAAGGATCTGTCACCTAGATGGTACTTCTACTATCTCGGAACTGGACCTGAAGCAGGACTGCCTTATGGAGCCAACAAGGATGGCATCATCTGGGTGGCTACTGAAGGAGCACTGAACACACCTAAGGATCACATCGGCACTAGGAATCCTGCTAACAACGCTGCTATCGTCCTCCAGCTCCCTCAGGGCACTACACTCCCTAAAGGCTTCTACGCTGAAGGCTCAAGAGGTGGATCTCAGGCTTCATCTCGCAGTTCAAGCAGAAGCAGGAACAGCAGTCGCAACAGCACTCCAGGCTCTAGCAAACGGACCAGTCCTGCCAGAATGGCTGGTAATGGAGGTGATGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGATCAGGAGGTGGAGGCAGCAGAGTCCAGCCTACTGAAAGCATCGTGAGGTTCCCTAACATCACCAATCTGTGTCCATTCGACGAAGTGTTCAACGCTACTCGCTTTGCTTCTGTCTATGCCTGGAATCGGAAACGCATCAGCAACTGTGTGGCAGACTACTCAGTGCTCTACAACTTTGCTCCATTCTTTGCCTTCAAGTGCTATGGAGTGAGTCCTACTAAGCTGAACGACCTGTGCTTCACTAACGTCTACGCTGATAGCTTCGTCATCAGAGGTAACGAGGTGTCACAGATCGCTCCAGGACAGACTGGCAACATCGCTGACTACAACTACAAGCTGCCTGACGACTTCACTGGATGTGTCATCGCATGGAACAGCAACAAACTCGACTCCAAAGTCGGAGGCAACTACAACTACCAGTATCGCCTGTTTCGCAAGTCTAACCTGAAGCCATTCGAGAGGGACATCAGCACTGAAATCTATCAGGCTGGTAACAAACCATGCAATGGAGTGGCTGGATTCAACTGCTACTTCCCACTGAGGAGCTATGGCTTCAGACCTACATACGGAGTCGGACATCAGCCTTACAGAGTCGTGGTGCTCTCATTCGAGCTGCTCCATGCTCCTGCTACAGTCTGTGGACCTAAGAAGTCTACTAATCTGGTCAAGAACAAGCATCACCACCATCACCATTGAGTCTAGA
实施例2
NP+SP融合蛋白的表达
(1)大提质粒:将测序正确的菌株放大培养,用大提试剂盒(购自上海生工)提取质粒备用。
(2)细胞培养:HEK293细胞(来自珠海恺瑞)置于5%的CO2恒温摇床中37℃、100rpm恒温震荡培养。
(3)瞬时转染:当HEK293细胞密度长到2.0×106/mL的时候,以1mg/L的比例加入表达质粒及转染试剂TA293(购自珠海恺瑞),转染24h后加入营养添加剂KT-Feed(购自珠海恺瑞)。
(4)收获:瞬时转染6d之后收获,300g离心10min,收上清。
实施例3
NP+SP融合蛋白的纯化
(1)基液配制:20mM Tris-HCl,200mM NaCl,pH8.0。
(2)装柱:将Ni-Smart填料(购自常州天地人和生物科技有限公司)加入色谱柱,用基液洗脱平衡,调基线。
(3)上样:收获的上清15000g离心10min,取上清用蠕动泵泵入色谱柱。
(4)洗脱:用基液及不同浓度咪唑(10mM、100mM、300mM)洗脱,收集洗脱峰。SDS-PAGE胶图见图2。
实施例4
NP+SP融合蛋白的透析及后期处理
(1)用80倍体积透析液(20mM Tris-HCl,pH8.0)4℃透析100mM咪唑洗脱峰2次。
(2)收集透析后样品,15000g离心10min,用超滤浓缩管(购自Millipore公司,截留蛋白分子量为10kD)浓缩,收集浓缩样,即为重组融合蛋白。
(3)测定蛋白浓度,置于-20℃备用。
实施例5
新型冠状病毒IgM抗体检测试剂条的制备(侧流免疫层析捕获法)
(1)用划膜仪(杭州格伦坤科技有限公司)将鼠抗人IgM单克隆抗体以1.0mg/ml浓度划在侧流免疫层析条NC膜的检测线(T线)上。
(2)以1.0mg/ml浓度,将羊抗兔IgG抗体用划膜仪划在NC膜的质控线(C线)上。
(3)NP+SP重组融合蛋白标记胶体金颗粒:
取4ml直径为45nm的金颗粒,以约25μl/ml的比例加入0.2M K2CO3溶液,使其pH调试至8.0。
以12μg/ml的浓度加入NP+SP融合蛋白,室温用磁力搅拌器中以500rpm的速度进行搅拌混匀,搅拌时间为15min。
以50μl/ml的比例加入10%BSA作为封闭剂,室温用磁力搅拌器中以500rpm的速度进行搅拌混匀,搅拌时间为20min。
于4℃,12000g离心30min,去上清,注意尽量去除干净。
(4)兔IgG抗体标记胶体金颗粒:
取4ml直径为45nm的金颗粒,以约25μl/ml的比例加入0.2M K2CO3溶液,使其pH调试至8.0。
以12μg/ml的浓度加入兔IgG抗体,室温用磁力搅拌器中以500rpm的速度进行搅拌混匀,搅拌时间为15min。
以50μl/ml的比例加入10%BSA作为封闭剂,室温用磁力搅拌器中以500rpm的速度进行搅拌混匀,搅拌时间为20min。
于4℃,12000g离心30min,去上清,注意尽量去除干净。
(5)金垫的制备:
用移液器吸取2ml悬浮液(50mM Tris-Cl,pH8.0)将第(3)步和第(4)步的离心沉淀吹散吹匀,并定容至4ml。
将溶液以650μl/条的比例喷涂于0.5cm*30cm(宽*长)的玻璃纤维金垫中,并放置于42℃的烤箱中,烘烤过夜。
(6)组装切条:分别将吸水纸、包被有鼠抗人IgM和羊抗兔IgG的NC膜、含有标金NP+SP融合蛋白和标金兔IgG抗体的金垫和样品垫4种组分按照由上至下的顺序进行组装,将组装好的胶体金大板进行分割切条装检测卡。
(7)检测:在检测卡加样孔中加入35μl待测样本和70μl样本稀释液,15min后观察检测结果。
实施例6
新型冠状病毒IgG抗体检测试剂条的制备(侧流免疫层析捕获法)
(1)用划膜仪(杭州格伦坤科技有限公司)将鼠抗人IgG单克隆抗体以1.0mg/ml浓度划在侧流免疫层析条NC膜的检测线(T线)上。
(2)以1.0mg/ml浓度,将羊抗兔IgG抗体用划膜仪划在NC膜的质控线(C线)上。
(3)NP+SP重组融合蛋白标记胶体金颗粒:
取4ml直径为45nm的金颗粒,以约25μl/ml的比例加入0.2M K2CO3溶液,使其pH调试至8.0。
以12μg/ml的浓度加入NP+SP融合蛋白,室温用磁力搅拌器中以500rpm的速度进行搅拌混匀,搅拌时间为15min。
以50μl/ml的比例加入10%BSA作为封闭剂,室温用磁力搅拌器中以500rpm的速度进行搅拌混匀,搅拌时间为20min。
于4℃,12000g离心30min,去上清,注意尽量去除干净。
(4)兔IgG抗体标记胶体金颗粒:
取4ml直径为45nm的金颗粒,以约25μl/ml的比例加入0.2M K2CO3溶液,使其pH调试至8.0。
以12μg/ml的浓度加入兔IgG抗体,室温用磁力搅拌器中以500rpm的速度进行搅拌混匀,搅拌时间为15min。
以50μl/ml的比例加入10%BSA作为封闭剂,室温用磁力搅拌器中以500rpm的速度进行搅拌混匀,搅拌时间为20min。
于4℃,12000g离心30min,去上清,注意尽量去除干净。
(5)金垫的制备:
用移液器吸取2ml悬浮液(50mM Tris-Cl,pH8.0)将第(3)步和第(4)步的离心沉淀吹散吹匀,并定容至4ml。
将溶液以650μl/条的比例喷涂于0.5cm*30cm(宽*长)的玻璃纤维金垫中,并放置于42℃的烤箱中,烘烤过夜。
(6)组装切条:分别将吸水纸、包被有鼠抗人IgG和羊抗兔IgG的NC膜、含有标金NP+SP融合蛋白和标金兔IgG抗体的金垫和样品垫4种组分按照由上至下的顺序进行组装,将组装好的胶体金大板进行分割切条装检测卡。
(7)检测:在检测卡加样孔中加入35μl待测样本和70μl样本稀释液,15min后观察检测结果。
实施例7
用制备的检测试剂条检测由合作伙伴收集的临床样本
(1)用实施例五中的方法制备新型冠状病毒IgM抗体检测试剂条,标记抗原分别为NP+SP融合蛋白及单独表达的核衣壳蛋白(NP)和刺突蛋白(SP),检测合作伙伴于2022年4月15日至5月20日收集的83份新型冠状病毒肺炎确诊病人的临床血清样本,结果如表3,NP+SP融合蛋白检出率更高。
表3新型冠状病毒IgM抗体检测结果
标记抗原 | 检出阳性数 | 检出阴性数 | 检出率 |
核衣壳蛋白(NP) | 43 | 40 | 51.8% |
刺突蛋白(SP) | 31 | 52 | 37.3% |
NP+SP融合蛋白 | 50 | 33 | 60.2% |
(2)用实施例六中的方法制备新型冠状病毒IgG抗体检测试剂条,标记抗原分别为NP+SP融合蛋白及单独表达的核衣壳蛋白(NP)和刺突蛋白(SP),检测合作伙伴于2022年4月15日至5月20日收集的83份新型冠状病毒肺炎确诊病人的临床血清样本,结果如表4,NP+SP融合蛋白检出率更高。
表4新型冠状病毒IgG抗体检测结果
标记抗原 | 检出阳性数 | 检出阴性数 | 检出率 |
核衣壳蛋白(NP) | 32 | 51 | 38.6% |
刺突蛋白(SP) | 24 | 59 | 28.9% |
NP+SP融合蛋白 | 36 | 47 | 43.4% |
(3)用实施例五中的方法制备新型冠状病毒IgM抗体检测试剂条,标记抗原分别为使用新型冠状病毒BA.2.12.1突变株为模板的NP+SP融合蛋白和采用早期未突变毒株Wuhan-Hu-1为模板的NP+SP融合蛋白,检测合作伙伴于2022年4月15日至5月20日收集的83份新型冠状病毒肺炎确诊病人的临床血清样本,结果如表5,以BA.2.12.1突变株为模板的检出率更高。
表5新型冠状病毒IgM抗体检测结果
模板毒株 | 检出阳性数 | 检出阴性数 | 检出率 |
Wuhan-Hu-1 | 46 | 37 | 55.4% |
BA.2.12.1 | 50 | 33 | 60.2% |
以上内容是结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明,不能认定本发明具体实施只局限于这些说明,对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的构思的前提下,还可以做出若干简单的推演或替换,都应当视为属于本发明所提交的权利要求书确定的保护范围。
Claims (10)
1.一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
所述的重组抗原的片段为新型冠状病毒BA.2.12.1突变株核衣壳蛋白第1位至第213位氨基酸与刺突蛋白第319位至第537位氨基酸的融合蛋白。
2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
所述的重组抗原包括如下:
(a)由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质;或,
(b)在SEQ ID No.1所示的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有所述重组抗原活性的由(a)衍生的蛋白质。
3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
所述的重组抗原包括如下:
(a)由SEQ ID No.2所示的核苷酸序列编码得到的蛋白质;或,
(b)在SEQ ID No.2所示的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个碱基且能够编码得到具有所述重组抗原活性的由(a)衍生的蛋白质。
4.根据权利要求2或3所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
还包括表达基因,所述的表达基因用于编码所述的新型冠状病毒重组抗原;
所述的表达基因包括如下:
(a)如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列;或,
(b)在SEQ ID No.2所示的核苷酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个碱基且能够编码得到具有所述重组抗原活性的核苷酸序列。
5.根据权利要求4所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
所述的表达基因表达新型冠状病毒BA.2.12.1突变株核衣壳蛋白第1位至第213位氨基酸与刺突蛋白第319位至第537位氨基酸的融合蛋白。
6.根据权利要求5所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
所述的表达基因还使用柔性连接子(GGGGS)3作为融合蛋白的连接子。
7.根据权利要求6所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
所述的表达基因在蛋白C端连接有6个组氨酸。
8.根据权利要求4所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
还包括重组质粒,所述的重组质粒含有所述的表达基因。
9.根据权利要求8所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原,其特征在于:
还包括宿主表达细胞,所述的宿主表达细胞用于表达所述的重组抗原。
10.一种如权利要求1所述的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组抗原的应用,其特征在于:
所述的新型冠状病毒重组抗原用于制备新型冠状病毒抗体检测试剂。
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