CN115103633B - 使用多种成像剂的成像方法 - Google Patents

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Abstract

本发明描述了使用选择性结合至免疫细胞标记物的两种或多种抗原结合构建体对受试者进行非侵入性成像的方法。

Description

使用多种成像剂的成像方法
相关申请
本申请要求2019年12月5日提交的美国临时申请号62/944183的权益，该临时申请的全部内容通过引用并入本文。
序列表的引用
本申请书与电子格式的序列表一起提交。序列表作为名为IGNAB050WO_SeqList.TXT的文件提供，创建于2020年12月3日，大小为294,103字节。电子序列表中的信息的全部内容通过引用合并于此。
技术领域
该技术通常涉及用于疾病诊断、预测、预后和治疗的非侵入性成像方法。
背景技术
疾病的临床评估通常集中在病变组织的特征或疾病的病原体上。例如，在癌症中，TNM分类系统根据肿瘤的大小及其向周围组织的扩散；癌扩散到附近淋巴结，和转移对癌症进行分期。然而，这些方法没有考虑患者自身对疾病或治疗的免疫反应，这可能会影响疾病进展和治疗结果。
发明内容
本文提供了对受试者成像的方法，包括：向受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；使用正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)评估表达第一靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布和/或丰度，以测量受试者中第一放射性核素示踪剂的水平；向受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，并且其中第一和第二靶标不同；以及使用PET或SPECT评估表达第二靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布和/或丰度以测量受试者中第二放射性核素示踪剂的水平。任选地，所述方法包括向受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，并且其中所述第三靶标不同于所述第一和第二靶标；以及使用PET或SPECT评估表达第三靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布和/或丰度以测量受试者中第三放射性核素示踪剂的水平。通过本发明的方法获得的表达靶标的细胞(例如，表达第一、第二和/或第三靶标的细胞)的分布和/或丰度可提供受试者的一个或多个组织的免疫环境。任选地，所述方法包括测定一个或多个组织中的每一个中表达任一靶标的细胞与表达另一靶标的细胞相比的相对丰度。
在一些实施方式中，所述方法包括基于表达靶标的细胞(例如，表达第一、第二和/或第三靶标的细胞)的分布和/或丰度生成图像(例如，表示受试者的一个或多个组织的免疫环境的图像)。任选地，图像提供以下各项中的一个或多个：在受试者的一个或多个组织中，任何两个或多个CD3+、CD4+和CD8+细胞的丰度；与另一个CD3+、CD4+和CD8+细胞相比，任何一个CD3+、CD4+和CD8+细胞的相对丰度；以及CD3+、CD4+和CD8+细胞中的任何一个与CD3+、CD4+和CD8+细胞中的另一个的比例。
本文还提供了治疗受试者的方法，包括：向患有疾病的受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)对受试者进行成像，以获得在受试者的一个或多个组织中表达第一靶标的细胞的分布；向受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，并且其中第一和第二靶标不同；通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在一个或多个组织中表达第二靶标的细胞分布；基于在一个或多个位置中表达第一靶标的细胞的分布和表达第二靶标的细胞的分布，确定一个或多个组织的免疫环境；以及基于免疫环境对受试者施用治疗。任选地，所述方法包括向受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，其中所述第三靶标不同于所述第一和第二靶标；以及通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在一个或多个位置中表达第三靶标的细胞的分布。任选地，所述方法包括基于表达靶标的细胞的分布生成图像，其中该图像提供一个或多个组织的免疫环境。
根据本发明的方法，成像组织的免疫环境包括组织中一个或多个细胞毒T细胞(CD8+)、辅助性T细胞(CD4+)、CD4+/CD8+双阳性T细胞、CD8+NK细胞、记忆性T细胞和调节性T细胞(Tregs)的丰度或相对丰度。在一些实施方式中，成像组织的免疫环境包括以下各项中的一个或多个：CD4+细胞与CD8+细胞的比例；CD3+细胞与CD8+细胞的比例；CD3+细胞与CD4+细胞的比例；CD8+细胞的丰度和CD3+细胞的丰度；CD4+细胞的丰度和CD3+细胞的丰度；或CD8+细胞的丰度和CD4+细胞的丰度。
本文还提供了治疗受试者的方法，包括：向患有癌症的受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)对受试者进行成像，以获得在受试者的肿瘤中表达第一靶标的细胞的分布；向受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，其中第一和第二靶标不同；通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在肿瘤中表达第二靶标的细胞的分布；基于表达靶标的细胞的分布，评估肿瘤的核和/或侵入性边缘中的CD3+细胞、CD4+细胞和/或CD8+细胞的密度；以及基于确定肿瘤的核和/或侵入性边缘耗尽CD3+、CD4+或CD8+细胞中的一种或多种，和/或富集CD3+、CD4+或CD8+细胞中的一种或多种对所述受试者施用癌症治疗。任选地，所述方法包括向受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，其中所述第三靶标不同于所述第一和第二靶标；以及通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在肿瘤中表达第三靶标的细胞的分布。
任选地，癌症治疗的施用基于确定肿瘤的核和/或侵入性边缘为：耗尽CD3+细胞和CD8+细胞；耗尽CD3+细胞和CD4+细胞；耗尽CD4+细胞和富集CD8+细胞；或耗尽CD8+细胞和富集CD4+细胞；或耗尽CD8+细胞和CD4+细胞。在一些实施方式中，确定肿瘤的核和/或侵入性边缘耗尽：CD8+细胞，当评估密度为150个细胞/mm2或更少时；CD4+细胞，当评估密度为150个细胞/mm2或更少时；或CD3+细胞，当评估密度为300个细胞/mm2或更少时。在一些实施方式中，确定肿瘤的核和/或侵入性边缘富集：CD4+细胞，当评估密度为150个细胞/mm2或更多时；CD8+细胞，当评估密度为150个细胞/mm2或更多时；或CD3+细胞，当评估密度为300个细胞/mm2或更多时。任选地，评估CD3+细胞、CD4+细胞和/或CD8+细胞的密度包括：基于表达靶标的细胞的分布生成图像；以及基于图像评估肿瘤的核和/或侵入性边缘中的CD3+细胞、CD4+细胞和/或CD8+细胞的密度。
本文进一步提供了治疗受试者的方法，包括：向患有癌症的受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；通过正电子发射断层扫描
(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)对受试者进行成像，以获得表达受试者的肿瘤中第一靶标的细胞的分布；向受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，并且其中第一和第二靶标不同；通过PET或SPECT对受试者成像，以获得肿瘤中表达第二靶标的细胞的分布；基于获得的分布评估肿瘤中CD4+细胞与CD8+细胞的比例；和/或CD8+细胞与CD4+细胞的比例；和/或CD4+细胞与CD3+细胞的比例；和/或CD8+细胞与CD3+细胞的比例，在以及基于确定肿瘤中CD4+细胞与CD8+细胞的比例低于阈值；和/或CD8+细胞与CD4+细胞低于阈值；和/或CD4+细胞与CD3+细胞处于或低于阈值比例；和/或CD8+细胞与CD3+细胞低于阈值，向受试者施用癌症治疗。任选地，所述方法包括向受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，其中所述第三靶标不同于所述第一和第二靶标；以及通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在肿瘤中表达第三靶标的细胞的分布。任选地，评估比例包括：基于表达靶标的细胞的分布生成图像；以及基于成像评估肿瘤中CD4+细胞与CD8+细胞的比例；和/或CD3+细胞与CD8+细胞的比例。
还提供了用于提供癌症预后的方法，包括：向患有癌症的受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)对受试者成像，以获得表达受试者肿瘤中的第一靶标的细胞的分布；向受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，并且其中第一和第二靶标不同；通过PET或SPECT对受试者成像，以获得肿瘤中表达第二靶标的细胞的分布；基于表达靶标的细胞的分布确定肿瘤中CD3+、CD4+和/或CD8+细胞的丰度和/或相对丰度；以及基于肿瘤中CD3+、CD4+和/或CD8+细胞的丰度和/或相对丰度的评估为疾病提供预后。任选地，所述方法包括向受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，其中所述第三靶标不同于所述第一和第二靶标；以及通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在肿瘤中表达第三靶标的细胞的分布。任选地，确定肿瘤中CD3+、CD4+和/或CD8+细胞的丰度或相对丰度包括：基于表达靶标的细胞的分布生成图像；以及基于该成像确定肿瘤中CD3+、CD4+和/或CD8+细胞的丰度和/或相对丰度。
本文还提供了用于治疗受试者的方法，包括：对患有疾病的受试者施用疾病的第一治疗；在施用第一治疗之前，通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)监测：在受试者的一个或多个组织中表达选自CD3、CD4和CD8的第一靶标的细胞的分布；以及在受试者的一个或多个组织中表达选自CD3、CD4和CD8的第二靶标的细胞的分布；其中所述第一和第二靶标不同；在施用第一治疗后，通过PET或SPECT监测：在受试者的一个或多个组织中表达第一靶标的细胞的分布；以及在受试者的一个或多个组织中表达第二靶标的细胞的分布；以及基于表达第一靶标的细胞的分布；以及表达第二靶标的细胞的分布的比较，向受试者施用针对该疾病的第二治疗。任选地，该方法包括，在施用第一治疗之前，通过PET或SPECT监测在受试者的一个或多个位置中表达选自CD3、CD4和CD8的第三靶标的细胞的分布，其中所述第三靶标与所述第一和第二靶标不同；以及在施用第一治疗后，通过PET或SPECT监测在受试者的一个或多个位置中表达第三靶标的细胞的分布，其中第二治疗的施用进一步基于表达第三靶标的细胞的分布的比较。在一些实施方式中，在施用第一治疗之前，在监测表达第二靶标的细胞的分布的1小时至2周内，进行监测表达第一靶标的细胞的分布和/或在监测表达第三靶标的细胞的分布的1小时至2周内，进行监测表达第二靶标的细胞的分布。在某些实施方式中，在施用第一治疗之后，在监测表达第二靶标的细胞的分布的1小时至2周内，进行监测表达第一靶标的细胞的分布和/或在监测表达第三靶标的细胞的分布的1小时至2周内，进行监测表达第二靶标的细胞的分布。任选地，监测分布包括：向受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合第一靶标；通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在受试者的一个或多个组织中表达第一靶标的细胞的分布；向受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合第二靶标，并且其中第一和第二靶标不同；通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在一个或多个组织中表达第二靶标的细胞的分布；和/或向受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合第三靶标；通过PET或SPECT对受试者成像，以获得在一个或多个组织中表达第三靶标的细胞的分布。
根据本发明的某些方法，在1小时至2周内进行施用第一抗原结合构建体和成像以获得表达第二靶标的细胞的分布。在一些实施方式中，在施用第一抗原结合构建体的1小时至2周内进行测量第一放射性核素示踪剂的水平。在某些实施方式中，在施用第二抗原结合构建体的1小时至2周内进行测量第二放射性核素示踪剂的水平。在一些实施方式中，在施用第三抗原结合构建体的1小时至2周内进行测量第三放射性核素示踪剂的水平。
任选地，在不同天施用不同的抗原结合构建体。在一些实施方式中，在不同天进行施用第一抗原结合构建体和施用第二抗原结合构建体。在一些实施方式中，在施用第二抗原结合构建体的同一天进行测量第一放射性核素示踪剂的水平。在某些实施方式中，在施用第三抗原结合构建体的同一天进行测量第二放射性核素示踪剂的水平。在一些实施方式中，在同一天进行施用第一抗原结合构建体和测量第二放射性核素示踪剂的水平。在一些实施方式中，在同一天进行施用第二抗原结合构建体和测量第三放射性核素示踪剂的水平。
任选地，本发明的方法还包括确定一个或多个组织中的每一个中表达任一靶标的细胞与表达另一靶标的细胞相比的相对丰度。
任选地，在向受试者施用第一抗原结合构建体之前，受试者已接受该疾病的早期治疗。在一些实施方式中，治疗和早期治疗是不同的。
在一些实施方式中，受试者接受的治疗包括免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、疫苗疗法(包括瘤内疫苗疗法)、溶瘤病毒疗法、手术或细胞疗法中的一种或多种。在一些实施方式中，治疗包括免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、疫苗疗法、溶瘤病毒疗法、手术或细胞疗法中的一种或多种。
根据某些实施方式，放射性核素示踪剂各自选自18F、89Zr、123I、64Cu、68Ga和99mTc。任选地，第一、第二、和/或第三放射性核素示踪剂是18F、64Cu和68Ga中的一种。任选地，第二放射性核素示踪剂是18F或89Zr。任选地，第一、第二、和/或第三放射性核素示踪剂是123I或99mTc。在一些实施方式中，第二放射性核素示踪剂是123I或99mTc，其中第一和第二放射性核素示踪剂不同。
根据某些实施方式，在受试者中成像的一个或多个组织包括肺、肝、结肠、肠、胃、心、脑、肾、脾、胰腺、食管、淋巴结、骨、骨髓、前列腺、宫颈、卵巢、乳腺、尿道、膀胱、皮肤、颈部、关节或其部分中的一种或多种。任选地，受试者患有癌症。任选地，受试者患有肺癌、肝癌、结肠癌、肠癌、胃癌、脑癌、肾癌、脾癌、胰腺癌、食道癌、淋巴结癌、骨癌、骨髓癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、尿道癌、膀胱癌、皮肤癌或颈部癌。在一些实施方式中，受试者患有黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)或肾细胞癌(RCC)。在一些实施方式中，一种或多种成像或监测的组织包括肿瘤。任选地，本发明的方法包括识别一种或多种包含癌组织的组织。在一些实施方式中，一个或多个组织使用计算机断层扫描(CT)、X射线、FDG-PET或磁共振成像(MRI)识别为包含癌组织。
本文还提供了对受试者成像的方法，包括：向受试者施用包含第一可检测标记物的第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第一靶标；使用非侵入性成像评估表达第一靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布和/或丰度，以测量受试者中第一可检测标记物的水平；向受试者施用包含第二可检测标记物的第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第二靶标，并且其中第一和第二靶标不同；以及使用非侵入性成像评估表达第二靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布和/或丰度以测量受试者中第二可检测标记物的水平；以及基于表达所述靶标的细胞的分布和/或丰度生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境的指示。任选地，在同一天进行施用第一抗原结合构建体和施用第二抗原结合构建体。在一些实施方式中，在同一天进行使用非侵入性成像来测量第一可检测标记物的水平和使用非侵入性成像来测量第二可检测标记物的水平。在一些实施方式中，第一可检测标记物和第二可检测标记物不同，并且选自放射性核素、光学染料、荧光化合物、切伦科夫发光剂、顺磁离子、MRI造影剂、MRI增强剂和纳米粒子。在一些实施方式中，非侵入性成像选自PET、SPECT、MRI、CT、伽马射线成像、光学成像和切伦科夫发光成像(CLI)。
根据某些实施方式，抗原结合构建体是抗体或其片段。任选地，抗原结合构建体是Fab’、F(ab’)2、Fab、Fv、rIgG(还原IgG)、scFv片段、微抗体、双体抗体、cys双体抗体或纳米抗体。在一些实施方式中，结合CD8的抗原结合构建体包含与图7-36中所示的任一氨基酸序列至少约80％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，结合CD4的抗原结合构建体包含与图38-50中所示的任一氨基酸序列至少约80％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，结合CD3的抗原结合构建体包含与图52A-84I中所示的任一氨基酸序列至少约80％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，CD3是人CD3，CD4是人CD4，且CD8是人CD8。任选地，人CD3包含SEQ ID NO:186中所示的序列，人CD4包含SEQ ID NO:100中所示的序列，且人CD8包含SEQID NOs:80-82中所示的任一序列。
本文还提供了对受试者成像的方法，包括：向受试者施用选择性结合选自CD3、CD4、和CD8的第一靶标的第一PET示踪剂；使用正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)评估在受试者的一个或多个组织中表达第一靶标的细胞的分布和/或丰度，以测量来自受试者中的第一PET示踪剂的信号；向受试者施用选择性结合选自CD3、CD4、和CD8的第二靶标的第二PET示踪剂，并且其中第一和第二靶标不同；以及使用PET或SPECT评估表达第二靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布和/或丰度以测量来自受试者中第二PET示踪剂的信号；以及基于表达所述靶标的细胞的分布和/或丰度生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境的指示。
附图说明
图1A和图1B是示出根据本发明的一些实施方式的对受试者成像的方法的流程图。
图2是示出根据本发明的一些实施方式的受试者的治疗方法的流程图。
图3是示出根据本发明的一些实施方式的受试者的诊断和/或治疗方法的流程图。
图4是示出根据本发明的一些实施方式，使用标记有放射性核素示踪剂的多个抗原结合构建体对受试者进行非侵入性成像的时间表的示意图。
图5是示出根据本发明的一些实施方式，使用标记有放射性核素示踪剂的多个抗原结合构建体对受试者进行非侵入性成像的时间表的示意图。
图6是示出根据本发明的一些实施方式，使用标记有放射性核素示踪剂的多个抗原结合构建体对受试者进行非侵入性成像的时间表的示意图。
图7示出了OKT8可变重(VH)区与人抗体(4D5v8)和CD8结合构建体(IAB-huCD8构建体)的人源化VH区的对齐，CDR区(Chothia)由方框区表示)。
图8示出了OKT8可变轻链(VL)区与人源化VL区和IAB-huCD8构建体的对齐，CDR区(Chothia)由方框区表示)。
图9示出了嵌合IAB-huCD8微抗体VL-VH序列。
图10示出了嵌合IAB-huCD8微抗体VH-VL序列。
图11示出了人源化IAB-huCD8微抗体VL-VH序列。
图12示出了人源化IAB-huCD8微抗体VH-VL序列。
图13示出了人源化IAB-huCD8 cys-二体抗体VL-5-VH序列。
图14示出了人源化IAB-huCD8 cys-二体抗体VH-5-VL序列。
图15示出了人源化IAB-huCD8 cys-二体抗体VL-8-VH序列。
图16示出了人源化IAB-huCD8 cys-二体抗体VH-8-VL序列。
图17A描绘了CD8结合构建体的VL序列。
图17B描绘了CD8结合构建体的huVL序列。
图17C描绘了CD8结合构建体的VH序列。
图17D描绘了CD8结合构建体的huVH(版本1中的版本“a”)序列。
图17E描绘了CD8结合构建体的huVH(版本1中的版本“b”)序列。
图17F描绘了CD8结合构建体的huVH(版本2中的版本“c”)序列。
图17G描绘了CD8结合构建体的huVH(版本2中的版本“c”)序列。
图18示出了CD8结合构建体IAB22Mγ2 EH1的蛋白质序列信息。
图19示出了CD8结合构建体IAB22Mγ2 EH2变体的蛋白质序列信息。
图20示出了CD8结合构建体IAB22Mγ1 EH1的蛋白质序列信息。
图21示出了CD8结合构建体IAB22Mγ2 NH1的蛋白质序列信息。
图22示出了CD8结合构建体IAB22Mγ2 NH2的蛋白质序列信息。
图23示出了CD8结合构建体IAB22Mγ1 EH3的蛋白质序列信息。
图24示出了CD8结合构建体IAB22Mγ1 EH5的蛋白质序列信息。
图25示出了CD8结合构建体IAB22Mγ3/γ1 EH6的蛋白质序列信息。
图26示出了CD8结合构建体IAB22Mγ3/γ1 EH7的蛋白质序列信息。
图27示出了CD8结合构建体IAB22Mγ3/γ1 EH8的蛋白质序列信息。
图28示出了CD8结合构建体IAB22Mγ1 EH2的蛋白质序列信息。
图29示出了CD8结合构建体IAB22Mγ1 EH3(M1)的DNA和翻译蛋白序列。在方框中显示了信号、CDR、接头和铰合序列。
图30示出了CD8结合构建体IAB22Mγ1 EH5(M1)的DNA和翻译蛋白序列。
图31示出了CD8结合构建体IAB22Mγ1 EH7(M1)的DNA和翻译蛋白序列。
图32示出了CD8结合构建体IAB22Mγ1 EH8(M1)的DNA和翻译蛋白序列。
图33示出了CD8结合构建体IAB22Mγ2 EH2(M1)的DNA和翻译蛋白序列。
图34示出了具有VH-K67R多态性的CD8结合构建体IAB22Mγ2EH2(M1)的DNA和翻译蛋白序列。
图35示出了CD8结合构建体IAB22M VH结构域的蛋白质序列。
图36描绘了CD8抗原结合微抗体。
图37A提供了CD8α链的实例。
图37B示出了智人T细胞表面糖蛋白CD8α链的实施方式的蛋白质序列。
图37C示出了智人T细胞表面糖蛋白CD8β链的实施方式的蛋白质序列。
图38示出了抗CD4抗原结合构建体VH和VL序列。SEQ ID NO:84和86包括IAB41-1的VH和VL序列。
图39示出了CD4抗原结合微抗体的氨基酸序列。
图40示出了CD4抗原结合微抗体的氨基酸序列。
图41示出了CD4抗原结合微抗体的氨基酸序列。
图42示出了CD4抗原结合微抗体的氨基酸序列。
图43示出了CD4抗原结合cys-二体抗体的氨基酸序列。
图44示出了CD4抗原结合cys-二体抗体的氨基酸序列。
图45示出了CD4抗原结合cys-二体抗体的氨基酸序列。
图46示出了CD4抗原结合cys-二体抗体的氨基酸序列。
图47示出了CD4抗原结合cys-二体抗体的氨基酸序列。
图48示出了CD4抗原结合cys-二体抗体的氨基酸序列。
图49示出了CD4抗原结合cys-二体抗体的氨基酸序列。
图50示出了CD4抗原结合cys-二体抗体的氨基酸序列。
图51提供了人CD4的氨基酸序列。
图52A和图52B描绘了显示OKT3可变轻链(图52A)和重链(图52B)区的人源化的序列。HCDR3中带阴影和粗体的半胱氨酸表示对于一些本实施方式的被修饰为丝氨酸的半胱氨酸。在一些实施方式中，HCDR3(YYDDHYCLDY)(SEQ ID NO:222)可与YYDDHYSLDY(SEQ IDNO:223)(HCDR3为Y YDDH Y(C/S)LD Y(SEQ ID NO:224))交换。小鼠序列与图52A和52B中的人类可变轻和重胚系基因进行比较。显示了与人类受体可变序列(人类)比对的小鼠OKT3可变氨基酸序列(muOKT3)。人源化/CDR接枝序列(人类框架内的小鼠OKT3 CDR)如下所示(huOKT3，称为huVL_vB(小图A)和huVH_vB(小图B))。CDR使用Chothia定义装箱，星号表示小鼠和人类框架之间不同的残基。
图53描绘了CD3的微抗体(VLVH方向，小鼠)
图54描绘了CD3的微抗体(VLVH方向-ABC 1)。
图55描绘了CD3的微抗体(VLVH方向，人源化)。
图56描绘了CD3的cys-二体抗体(人源化)。
图57提供了CD3抗原结合微抗体。
图58提供了CD3抗原结合cys-二抗抗体。
图59提供了CD3抗原结合cys-二抗抗体。
图60提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图61提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图62提供了CD3抗原结合微抗体。
图63提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图64提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图65提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图66提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图67提供了CD3抗原结合微抗体。
图68提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图69提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图70提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图71提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图72提供了CD3抗原结合微抗体。
图73提供了CD3抗原结合微抗体。
图74提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图75提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图76提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图77提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图78提供了CD3抗原结合微抗体。
图79提供了CD3抗原结合微抗体。
图80提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图81提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图82提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图83提供了CD3抗原结合cys-二体抗体。
图84A、84B、84C、84D、84E、84F、84G、84H、84I描绘了抗CD3可变轻(VL；84A、84B、84C)和可变重(VH；84D、84E、84F、84F、84H、84I)序列。显示了带有翻译的氨基酸序列的DNA。位置105处的VH残基加下划线。CDR使用Chothia定义装箱。
图85描述了人类CD3ε的序列(氨基酸序列)。带阴影的残基被识别为OKT3的表位。
图86显示了各种铰合区的蛋白质序列信息。
具体实施方式
本文提供了对受试者进行非侵入性成像以确定受试者中组织的免疫环境的方法。如果受试者患有诸如癌症、自身免疫疾病或传染病的疾病，受该疾病影响的组织的免疫环境可提供有关该疾病的诊断或预后信息，和/或关于受试者对治疗反应的预后信息。本发明提供了用于使用非侵入性成像的成像剂(如PET示踪剂)确定组织的免疫环境的方法，如正电子发射断层扫描(PET)、计算机断层扫描(CT)和单光子发射计算机断层扫描(SPECT)。成像剂可以是对免疫细胞标记物具有特异性的放射性核素标记的抗原结合构建体，并且可以通过对受试者的非侵入性成像来获得组织中的抗原结合构建体(例如，两种或多种免疫细胞群)的结合靶标的分布和/或丰度。任何合适的成像剂，例如，如本文所公开的用于非侵入性成像的与可检测标记物关联或缀合的抗原结合构建体可用于本方法中。抗原结合构建体(例如，免疫细胞)的结合靶标的获得的分布和/或丰度可能代表组织的免疫环境的各个方面。因此，本文还公开了使用患有影响组织的疾病的受试者的非侵入性成像确定组织的免疫环境的方法。
免疫评分可从活检组织的免疫参数中的一个或多个获得，采用顺序免疫组织化学和染色技术确定相关免疫细胞标记物的存在/不存在。然而，免疫细胞标记物的检测可能涉及使用侵入性程序获得活检样本。
本文中的一些实施方式提供了一种使用非侵入性程序的免疫评分。在一些实施方式中，本方法提供了比传统方法(例如，分析活检样本)更快的结果和/或诊断，多个疾病部位的全身成像能力，以及与使用活检相关的降低风险，例如活检样本将错过与诊断相关的关键组织区域的风险中的一种或多种。在一些实施方式中，本发明的方法包括提供预后和/或对患有疾病的受试者的治疗建议，例如，癌症，不需要从受试者采集例如，肿瘤的活检样本。
鉴于本发明，如本文所用，“免疫环境”具有本领域普通技术人员所理解的惯常和普通含义。组织(如肿瘤)的免疫环境可包括但不限于在组织内或周围，免疫细胞(或其合适的替代措施)的类型、功能、活性、密度和/或位置。在不受理论约束的情况下，与疾病相关的组织(例如肿瘤、器官或解剖区域)的免疫环境可能是预测疾病对治疗的反应的预后标志。组织的免疫环境可包括组织中的免疫细胞的丰度和/或分布。免疫环境可包括一种或多种免疫细胞类型，例如但不限于细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞(Tregs)、B细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞(DC)、髓源性抑制细胞(MDSC)、巨噬细胞和肥大细胞。免疫细胞类型可与一种或多种免疫细胞标记物(例如，由一种或多种免疫细胞类型表达的细胞表面标记物)的表达相关，诸如但不限于CD8、CD3、CD4和CD45RO。一般而言，CD4表达可充当具有辅助功能的免疫细胞的标记物(例如，树突状细胞的抗原呈递、CD4+T细胞的T辅助功能以及巨噬细胞的“微环境”功能)。CD8表达可充当具有效应或细胞毒性功能的免疫细胞的标记物(例如，CD8+T细胞和NK细胞对细胞的杀伤，通过ML巨噬细胞的吞噬)。CD3表达可充当T细胞(包括CD4+和CD8+T细胞)的标记物。在一些实施方式中，组织的免疫环境可包括由组织中的免疫细胞产生的标记物(例如细胞因子)的丰富和/或分布。在一些实施方式中，组织中的干扰素(IFN)-γ可充当免疫细胞激活的标记物，如T细胞激活。在一些实施方式中，IFN-γ充当T辅助1细胞的标记物和/或B细胞存在和激活。本文公开的方法的实施方式可允许通过受试者中的CD8+、CD4+和CD3+细胞的非侵入性成像和/或IFN-γ分布来确定与疾病相关的组织的免疫环境。
在一些情况下，组织的免疫环境可由组织中的一种或多种免疫标记物的模式和/或表达水平表示。在一些情况下，组织的免疫环境可包括组织中免疫细胞的功能活性和/或组织的功能环境。组织的功能环境可包括肿瘤代谢、免疫检查点的存在或肿瘤免疫抑制状态。免疫细胞的功能活性可包括但不限于抗肿瘤T细胞活性。组织中免疫细胞的功能活性和/或组织的功能环境可能与一种或多种功能标记物，例如但不限于IFN-γ、颗粒酶B、PD-1、PD-L1和TGFp的表达相关。因此，在一些情况下，组织的免疫环境可由组织中的一种或多种功能标记物的模式和/或表达水平表示。在一些实施方式中，免疫环境可包括肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)状态。在一些实施方式中，免疫环境可以通过免疫评分表示，如在例如，JeromeGalon等人“Towards the introduction of the Tmmunoscore’in the classificationof malignant tumours”；J Pathol.2014Jan；232(2):199—209；或Frank Pages等人,“International validation of the consensus Immunoscore for the classificationof colon cancer:a prognostic and accuracy study.”；Lancet.2018391:2128-39中所述的。在一些实施方式中，通过本方法确定的免疫环境例如，免疫评分，不包括CD3、CD4、CD8和IFN-γ以外的生物标记物。在一些实施方式中，通过本方法确定的免疫环境例如，免疫评分，不包括以下生物标记物中的一种或多种，即三原初修复外切核酸酶1(TREX1)，程序性死亡配体1(PD-L1)。
本发明公开了可提供非侵入性成像以测量不适于活检的组织中的免疫细胞的方法。监测此类组织的实例包括评估关节炎患者的关节、免疫疗法引起的心脏毒性、中风恢复、脑损伤或心脏病事件或移植排斥反应，这些都不建议进行活检。本发明的方法可允许基于患者免疫系统的非侵入性可视化获得此类病况的免疫环境。在一些实施方式中，免疫环境可通过免疫评分表示，如本文所述。如本文所用，“免疫评分”可适用于其中组织免疫环境与诊断和/或疾病或病况的治疗相关的任何疾病或病况(如，癌症、自身免疫疾病、传染病等)。免疫评分可适用于任何合适的癌症，包括但不限于鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃或胃癌，包括胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、涎腺癌、肾脏或肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、骨癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤、脑以及头颈癌和相关转移瘤。在一些实施方式中，免疫评分适用于结直肠癌的上下文中。
定义和各种实施方式
除非定义，否则本领域普通技术人员理解的术语的简单和普通含义适用。
病况的“处理(Treating)”或“治疗(treatment)”可是指预防该病况、减缓发病和/或病况发展速度、降低病况发展风险、预防和/或延缓与该病况相关的症状的发展、减少或终止与该病况相关的症状，产生该病况的完全或部分回归，或其一些组合。术语“预防”并不要求病症或疾病的绝对禁止。治疗包括改变受试者中肿瘤或瘤形成的免疫表型(从突然丧失到排除到TIL阳性)，以及随后针对该特定表型对肿瘤进行治疗应用。以免疫突然丧失(或“非标记”肿瘤)为特征的肿瘤可能没有或几乎没有免疫细胞浸润到肿瘤环境中。免疫排斥的肿瘤可能显示免疫细胞聚集在肿瘤边界。肿瘤可能是TIL阳性(“标记的”或“发炎的”)，其中免疫细胞浸润到肿瘤核中。
“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指在受试者中产生期望的治疗效果的量，例如预防、治疗靶标病况、延迟病症和/或症状的发作，和/或缓解与病况相关的症状。该量将根据各种因素而变化，包括但不限于治疗性化合物的特性(包括活性、药代动力学、药效学和生物利用度)、受试者的生理状况(包括年龄、性别、疾病类型和阶段、一般身体状况、对给定剂量的反应性和药物类型)、制剂中药学上可接受的一种或多种载体的性质、和/或施用途径。鉴于本发明，临床和药理学领域的技术人员能够通过常规实验确定治疗有效量，例如通过监测受试者对施用的化合物的反应并相应调整剂量。有关其他指南，参见Remington：TheScience and Practice of Pharmacy 21.sup.st Edition,Univ.of Sciences inPhiladelphia(USIP),Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,Pa.,2005。
术语“抗原结合构建体”包括所有种类的抗体，包括其结合片段。进一步包括包含1、2、3、4、5、和/或6个CDR的构建体。在一些实施方式中，这些CDR可以分布在传统抗体的适当框架区之间。在一些实施方式中，CDR可以包含在重链和/或轻链可变区内。在一些实施方式中，CDR可以在重链和/或轻链内。在一些实施方式中，CDR可以在单肽链内。在一些实施方式中，CDR可以在两个或多个共价连接在一起的肽内。在一些实施方式中，它们可以通过二硫键共价连接在一起。在一些实施方式中，它们可以通过连接分子或部分连接。在一些实施方式中，抗原结合蛋白是非共价的，例如二体抗体和单价scFv。除非本文另有指示，否则本文所述的抗原结合构建体结合到指出的靶分子。该术语还包括微抗体和cys-二体抗体。
如本文所用，“肿瘤”是指无论恶性还是良性的所有赘生性细胞生长和增殖，以及所有癌前和癌性细胞和组织。术语“癌症”、“癌性”、“细胞增殖性病症”、“增殖性病症”和“肿瘤”并非如本文所述相互排斥。术语“瘤形成”包括术语“肿瘤”。
“肿瘤”是指实体瘤，除非另有说明；包括受试者体内瘤形成和人类细胞的任何异常细胞生长(但不包括外来生物体的感染)。
“肿瘤的表面”或“肿瘤表面”是指与受试者正常(如非肿瘤和非肿瘤诱导的)细胞接触的肿瘤肿块的外周长。有时可以互换称为“肿瘤边缘”，或“侵袭性肿瘤边缘”或“肿瘤边界”。在细胞水平上，它的厚度可能从几个细胞到几百个细胞，并且可能与周围的正常细胞不均匀融合。
术语“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的生理状况，其典型特征是不受调控的细胞生长。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃或胃癌，包括胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、泌尿道癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、涎腺癌、肾脏或肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、骨癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤、脑以及头颈癌和相关转移瘤。术语癌症包括成人和儿童实体癌。在一些实施方式中，癌症可能是实体瘤。
术语“抗体”包括但不限于基因工程或其他改性形式的免疫球蛋白，例如胞内抗体、嵌合抗体、全人类抗体、人源化抗体、抗体片段和异缀合抗体(例如，双特异性抗体、二体抗体、三体抗体、四体抗体等)。术语“抗体”包括cys-二体抗体和微抗体。因此，本文提供的关于“抗体”的每个实施方式也被设想为cys-二体抗体和/或微抗体实施方式，除非另有明确指示。术语“抗体”包括免疫球蛋白家族的多肽或包含免疫球蛋白片段的多肽，其能够非共价、可逆且以特定方式结合相应抗原。一种示例性抗体结构单元包括四聚体。在一些实施方式中，全长抗体可以由两对相同的多肽链组成，每对都有一条“轻”链和一条“重”链(，通过二硫键连接)。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及大量免疫球蛋白可变区基因。对于全长链，轻链分类为κ或λ。对于全长链，重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，这反过来又分别定义了免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。每条链的N末端定义了主要负责抗原识别的约100至110或更多氨基酸的可变区。术语可变轻链(VL)和可变重链(VH)分别指轻链和重链的这些区域。如在本申请中所使用的，“抗体”包括抗体及其片段的所有变体。因此，在这个概念的范围内是具有相同结合特异性的全长抗体、嵌合抗体、人源化抗体、单链抗体(scFv)、Fab、Fab′和这些片段的多聚体版本(例如F(ab’)2)。在一些实施方式中，抗体特异性结合到期望靶标。
“互补性-确定结构域“或”互补性确定区(“CDR”)可互换地是指VL和VH的高变区。CDR是抗体链的靶蛋白结合位点，其对此类靶蛋白具有特异性。在一些实施方式中，每个VL和/或VH中有三个CDR(CDRl-3，从N端开始依次编号)，约占可变结构域的15-20％。CDR在结构上与靶蛋白的表位互补，因此直接负责结合特异性。VL或VH的其余延伸段，即所谓的框架区(FR)，在氨基酸序列上的变化较小(Kuby,Immunology,第4版,第4章.W.H.Freeman&Co.,New York,2000)。
CDR和框架区的位置可以使用本领域的各种公知定义来确定，例如，Kabat(Wu,T.T.,E.A.Kabat.1970.An analysis of the sequences of the variable regions ofBence Jones proteins and myeloma light chains and their implications forantibody complementarity.J.Exp.Med.132:211-250；Kabat,E.A.,Wu,T.T.,Perry,H.,Gottesman,K.,和Foeller,C.(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版,NIH Publication No.91-3242,Bethesda,MD),Chothia(Chothia andLesk,J.Mol.Biol.,196:901-917(1987)；Chothia等人,Nature,342:877-883(1989)；Chothia等人,J.Mol.Biol.,227:799-817(1992)；Al-Lazikani等人,J.Mol.Biol.,273:927-748(1997)),ImMunoGeneTics database(IMGT)(on the worldwide web atimgt.org/)Giudicelli,V.,Duroux,P.,Ginestoux,C.,Folch,G.,Jabado-Michaloud,J.,Chaume,D.and Lefranc,M.-P.IMGT/LIGM-DB,thecomprehensive database ofimmunoglobulin and T cell receptor nucleotide sequences Nucl.Acids Res.,34,D781-D784(2006),PMID:16381979；Lefranc,M.-P.,Pommie,C.,Ruiz,M.,Giudicelli,V.,Foulquier,E.,Truong,L.,Thouvenin-Contet,V.and Lefranc,G.,IMGT uniquenumbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Igsuperfamily V-like domains Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003).PMID:12477501；Brochet,X.,Lefranc,M.-P.and Giudicelli,V.IMGT/V-QUEST:the highly customizedand integrated system for IG and TR standardized V-J and V-D-J sequenceanalysis Nucl.Acids Res,36,W503-508(2008)；AbM(Martin等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86:9268-9272(1989),North(North B.,Lehmann A.,DunbrackR.L.,A new clustering of antibody CDR loop conformations,J.Mol.Biol.(2011)406(2):228-256),AHo(Honegger A.,Pluckthun,Yet another numbering scheme forimmunoglobulin variable domains:an automatic modeling and analysis tool,J.Mol.Biol.(2001)309,657-670)；the contact definition(MacCallum等人,J.Mol.Biol.,262:732-745(1996))，和/或the automatic modeling and analysis toolHonegger A,Pluckthun A.(world wide web at bioc dot uzh dot ch/antibody/Numbering/index dot html)。
术语“结合特异性决定簇”或“BSD”可互换地指确定抗体的结合特异性所需的互补性决定区内的最小连续或非连续氨基酸序列。结合特异性决定簇可以在一个或多个CDR序列内。在一些实施方式中，最小结合特异性决定簇驻留在抗体的重链和轻链的CDR3序列的一部分或全长内(即，仅由其决定)。在一些实施方式中，重链可变区的CDR3足以实现抗原结合构建体特异性。
关于肿瘤表面的术语“以有偏方式结合”和“以无偏方式结合”，是指肿瘤的图像，其中观察到可检测标签基本上与肿瘤表面结合(肿瘤内部结合相对减少或不存在)(＝“有偏”)，或其中可检测标签与肿瘤表面没有显著关联(＝“无偏”)，例如可以均匀或不均匀地分散在整个肿瘤内部肿瘤或完全没有肿瘤。“有偏”包括选择性地结合到任何肿瘤边缘，而不实质性地灌注肿瘤体积。
术语“感兴趣区域”或“ROI”是指，在人类受试者中靶标分布的图像中或图像上，由人类操作员选择的图像子区域，任选地由自动或半自动图像处理方法辅助，其狭窄地限定识别肿瘤的图像区域，或基于其他诊断方法(如FDG-PET、CT扫描、MRI、活检、目视检查等)预计包含肿瘤。
在监测、检测、比较或观察与已施用给受试者的放射性核素示踪剂相关的抗原结合构建体的分布的上下文中，术语“分布”是指与受试者全身或部分身体扫描相关的抗原结合构建体关联的已检测标签的生物分布的视觉图像，该图像可以表示为平面图像(二维)或计算机辅助三维表示(包括全息图)，并且其格式可用于操作员或临床医生观察抗原结合构建体在单个组织水平和单个肿瘤水平下的分布。在高级成像形式中，“分布”可能不是全身或部分身体扫描的视觉图像，而是计算机评估受试者是否存在肿瘤及其TIL状态的报告。在一些情况下，“比较两个或多个表达不同标记物的细胞需要在每个分布中比对受试者的扫描，以便可以比较单个组织和肿瘤。
如本文所用，“抗体可变轻链”或“抗体可变重链”分别是指包含VL或VH的多肽。内源性VL由基因段V(可变)和J(交界)编码，且内源性VH由V、D(多样性)和J编码。VL或VH中的每一个包括CDR以及框架区。在本申请中，抗体可变轻链和/或抗体可变重链有时可统称为“抗体链”。这些术语包括包含不会破坏VL或VH基本结构的突变的抗体链，本领域技术人员将容易认识到这一点。在一些实施方式中，考虑全长重链和/或轻链。在一些实施方式中，仅预期存在重链和/或轻链的可变区。
抗体可以作为完整的免疫球蛋白或通过各种肽酶消化产生的大量片段存在。因此，例如，胃蛋白酶消化铰合区中二硫键下方的抗体以产生F(ab)’2，Fab'的二聚体，其本身是通过二硫键连接到VH-CH1的轻链(VL-CL)。F(ab)’2可在温和条件下还原，以破坏铰合区中的二硫键，从而将F(ab)’2二聚体转化为Fab'单体。Fab’单体是具有部分铰合区的Fab。(Paul,Fundamental Immunology 3d ed.(1993)。虽然根据完整抗体的消化定义了各种抗体片段，但技术人员应了解，这些片段可以通过化学或通过使用重组DNA方法从头合成。因此，如本文所用，术语“抗体”还包括通过修饰整个抗体产生的抗体片段，或使用重组DNA方法(例如单链Fv)从头合成的那些，或使用噬菌体展示库鉴定的那些(参见例如，McCafferty等人,Nature 348:552-554(1990))。
术语“铰合(hinge)”表示抗原结合构建体(例如抗体或微抗体)的铰合区的至少一部分。铰合区可包括上铰合的组合，核(或中间)铰合和下铰合区。在一些实施方式中，铰合根据任何抗体铰合定义进行定义。天然IgGl、IgG2和IgG4抗体具有12-15个氨基酸的铰合区。IgG3具有延伸的铰合区，具有62个氨基酸，包括21个脯氨酸和11个半胱氨酸。根据结晶学研究推断出的天然抗体的功能性铰合区从IgGl H链的氨基酸残基216-237(EU编号)延伸，并包括下铰合中CH2结构域的N端的一小段，下铰合是CH2结构域的N端。铰合可分为三个区域“上铰合”、“核”和“下铰合”。
术语“上铰合”表示铰合的第一部分，起始于抗原结合构建体可变区的末端，例如scFv的末端。上铰合区的实例可在图86中找到。上铰合包括从scFv末端到(但不包括)核铰合中的第一半胱氨酸残基的氨基酸，如图86所示。如上所述，术语“有效上铰合”表示存在足够的顺序，以允许该部分作为上铰合发挥作用；术语包括指定铰合部分的功能变体和片段。
术语“核铰合”表示铰合区的第二部分，即上铰合的C端。核铰合区的实例可在图86中找到。核铰合含有链间二硫键和高含量的脯氨酸。如上所述，术语“有效核铰合”表示存在足够的顺序，以允许该部分作为核铰合发挥作用；术语包括指定铰合部分的功能变体和片段。
术语“下铰合”表示铰合区的第三部分，即核铰合的C端。下铰合区的实例可在图86中找到。在微抗体或抗体片段的上下文中，下铰合连接到CH3结构域。如上所述，术语“有效下铰合”表示存在足够的顺序，以允许该部分作为下铰合发挥作用；术语包括指定铰合部分的功能变体和片段。如本文所用，术语“下铰合”可包括各种氨基酸序列，包括天然存在的IgG下铰合序列和人工延伸序列替代彼此或本文提供的其组合。在一些实施方式中，可将各种延伸部视为下铰合区的整体或替代物。
为了制备单克隆或多克隆抗体，可以使用本领域已知的任何技术(参见例如，Kohler&Milstein,Nature 256:495-497(1975)；Kozbor等人,Immunology Today 4:72(1983)；Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,pp.77-96.AlanR.Fiss,Inc.1985；Advances in the production of human monoclonal antibodiesShixia Wang,Antibody Technology Journal2011:1 1-4；J Cell Biochem.2005Oct 1；96(2):305-13；Recombinant polyclonal antibodies for cancer therapy；Sharon J,Liebman MA,Williams BR；and Drug Discov Today.2006Jul,ll(13-14):655-60,Recombinant polyclonal antibodies:the next generation of antibodytherapeutics？,Haurum JS).Techniques for the production of single chainantibodies(美国专利号4,946,778)可用于产生多肽抗体。此外，转基因小鼠或其他生物体(如其他哺乳动物)可用于表达完全人类单克隆抗体。或者，噬菌体展示技术可用于识别与选定抗原的高亲和力粘结剂(参见例如，McCafferty等人,supra；Marks et al.,Biotechnology,10:779-783,(1992))。B细胞克隆可用于直接从人类受试者中完全识别人类抗体(Wardemann H.,Busse E.,Expression Cloning of Antibodies from SingleHuman B Cells,Methods Mol.Biol.(2019)1956:105-125)。
非人类抗体的人源化或灵长类化方法在本领域是众所周知的。通常，人源化抗体具有一个或多个从非人类来源引入的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常被称为导入残基，其通常取自导入可变结构域。在一些实施方式中，可以使用术语“供体”和“受体”序列。人源化基本上可以按照Winter及其同事的方法进行(参见例如，Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science239:1534-1536(1988)和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992))，通过将啮齿动物CDR或CDR序列替换为人类抗体的相应序列。因此，此类人源化抗体(如在例如，美国专利号4,816,567中所描述的)显著少于由非人类物种的相应序列所取代的完整人类可变结构域。实际上，人源化抗体通常是其中一些互补性决定区(“CDR”)残基和可能的一些框架(“FR”)残基被啮齿动物抗体中类似位点的残基取代的人类抗体。
“嵌合抗体”是一种抗体分子，其中(A)恒定区或其一部分被改变、替换或交换，使得抗原结合位点(可变区)与不同或改变类别的效应器功能和/或物种或赋予嵌合抗体新特性的完全不同的分子的恒定区相连，例如，酶、毒素、激素、生长因子和药物或(b)可变区或其一部分被具有不同或改变的抗原特异性的可变区改变、替换或交换。
抗体还包括一个或多个与其他蛋白质化学结合或表达为融合蛋白的免疫球蛋白链。在一些实施方式中，抗原结合构建体可以是单价scFv构建体。在一些实施方式中，抗原结合构建体可以是双特异性构建体。双特异性或双功能抗体是一种人工杂交抗体，具有两个不同的重/轻链对和两个不同的结合位点。其他抗原结合片段或抗体部分包括二价scFv(二体抗体)、双特异性scFv抗体，其中抗体分子识别两个不同的表位、单结合结构域(sdAb或纳米抗体)和微抗体。
术语“抗体片段”包括但不限于单独或与其他分子组合的抗体的一个或多个抗原结合片段，包括但不限于Fab'、F(ab’)2、Fab、Fv、rIgG(还原IgG)、scFv片段(单价，三价等)、单结构域片段(纳米抗体)、肽抗体、微抗体、二体抗体和cys-二体抗体。术语“scFv”是指单链Fv(“片段可变”)抗体，其中传统两链抗体的重链和轻链可变结构域已连接形成一条链。
药学上可接受的载体可以是药学上可接受的材料、组合物或溶媒，其涉及将感兴趣化合物从身体的一个组织、器官或部分携带或运输到身体的另一个组织、器官或部分。例如，载体可以是液体或固体填料、稀释剂、赋形剂、溶剂或封装材料，或其一些组合。载体的每种组分都是“药学上可接受的”，因为它与制剂的其他成分相容。它还必须适合与其可能遇到的身体的任何组织、器官或部分接触，这意味着它不得具有毒性、刺激性、过敏反应、免疫原性或过度超过其治疗益处的任何其他并发症的风险。本文所述的药物组合物可通过任何合适的施用途径施用。施用途径可指本领域已知的任何施用途径，包括但不限于气雾剂、肠内、鼻、眼、口服、肠胃外、直肠、透皮(例如，外用乳膏或软膏、贴剂)或阴道。“透皮”施用可使用外用乳膏或软膏或透皮贴剂完成。“肠胃外”是指通常与注射相关的施用途径，包括眶下、输注、动脉内、囊内、心内、皮内、肌肉内、腹膜内、肺内、椎管内、胸骨内、鞘内、子宫内、静脉内、颅内、蛛网膜下、囊下、皮下、经粘膜或经气管。在一些实施方式中，抗原结合构建体可在干预或切除期间作为局部施用在术中递送。
微抗体是一种抗体形式，其分子量小于全长抗体，同时保持针对抗原的二价结合特性。由于其较小尺寸，当靶向肿瘤组织时，微抗体从系统的清除更快，且穿透更强。由于具有强大和选择性靶向能力结合快速清除能力，微抗体有利于细胞毒性/放射性有效载荷的诊断成像和递送，对此延长的循环时间可能导致不良的患者剂量或剂量学。
当用于描述抗原(例如，蛋白质)与抗体或抗体衍生粘合剂之间的相互作用时，短语“特异性结合”或“选择性结合”是指确定抗原在蛋白质和其他生物的异质群体中的存在的结合反应，例如在生物样本中，例如，在血液、血清、血浆或组织样本中。因此，在指定的免疫分析条件下，在一些实施方式中，具有特定结合特异性的抗体或结合剂与至少两倍于背景的特定抗原结合，并且基本上不与样本中存在的其他抗原大量结合。在这种条件下与抗体或结合剂的特异性结合可能需要选择抗体或结合剂，以确定其对特定蛋白质的特异性。多种免疫分析形式可用于选择与特定蛋白质特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫分析通常用于选择与蛋白质特异性免疫反应的抗体(参见例如，Harlow&Lane，UsingAntibodies,A Laboratory Manual(1998)，用于描述可用于确定特异性免疫反应性的免疫分析形式和条件)。通常，特定或选择性结合反应将在背景信号上产生信号，至少两次，更典型地，在背景信号上产生至少10至100次。
术语“平衡离解常数(KD，M)”是指离解速率常数(kd，时间-1)除以缔合速率常数(ka，时间-1，M-1)。可以使用本领域的任何已知方法测量平衡离解常数。本文提供的抗体可具有小于约10-7或10-8M的平衡离解常数，例如小于约10-9M或10-10M，在一些实施方式中，小于约10-11M、10-12M、10-13M、10-14M或10-15M。
术语“分离的”，当应用于核酸或蛋白质时，表示该核酸或蛋白质基本上不含在自然状态下与其相关的其他细胞组分。在一些实施方式中，它可以是干燥的或水溶液。纯度和均匀性可使用分析化学技术来确定，例如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法。作为制剂中存在的主要物种的蛋白质被基本上纯化。特别地，分离的基因是从基因两侧的开放阅读框中分离出来的，该开放阅读框编码与感兴趣的基因不同的蛋白质。术语“纯化的”表示核酸或蛋白质在电泳凝胶中产生基本上一条带。在一些实施方式中，这可以表示核酸或蛋白质在体内条件下存在的分子的纯度为至少85％，更优选为至少95％，最优选为至少99％。
术语“核酸”或“多核苷酸”是指脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)及其单链或双链形式的聚合物。除非特别限定，否则该术语包括含有天然核苷酸的已知类似物的核酸，其与参考核酸具有类似的结合特性，并以类似于天然存在的核苷酸的方式代谢。除非另有指示，否则特定核酸序列还隐含包含其保守修饰的变体(例如，简并密码子替换)、等位基因、直系同源物、SNP和互补序列以及明确指示的序列。具体地，简并密码子替换可以通过生成其中一个或多个选择(或全部)密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(Batzer等人，Nucleic Acid Res.19:5081(1991)；Ohtsuka等人,J.Biol.Chem.260:2605-2608(1985)；和Rossolini等人,Mol.Cell.Probes 8:91-98(1994))。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用，以指代氨基酸残基的聚合物。这些术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是对应的天然存在的氨基酸、以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物的人工化学模拟物。
术语“氨基酸”是指天然存在和合成的氨基酸，以及氨基酸类似物和氨基酸模拟物，其以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及后来修饰的那些氨基酸，例如，羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同基本化学结构的化合物，即与氢、羧基、氨基和R基团结合的α碳，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如正亮氨酸)或修饰的肽主链，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指结构不同于氨基酸一般化学结构，但以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的化合物。
“保守修饰的变体”适用于氨基酸和核酸序列。就特定核酸序列而言，保守修饰的变体是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸，或在核酸不编码氨基酸序列的情况下，是指基本上相同的序列。由于遗传密码的简并性，大量功能相同的核酸编码任何给定的蛋白质。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在丙氨酸由密码子指定的每个位置，密码子可以改变为所述的任何相应密码子，而不改变编码的多肽。这种核酸变异是“沉默变异”，其是一种保守修饰的变异的物种。本文中编码多肽的每个核酸序列也描述了核酸的每个可能的沉默变异。技术人员会认识到，核酸中的每个密码子(除了通常是蛋氨酸唯一密码子的AUG和通常是色氨酸的唯一密码子的TGG)都可以被修饰以产生功能相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每一沉默变异均隐含于每一所述的序列中。
对于氨基酸序列，技术人员将认识到，对改变的核酸、肽、多肽或蛋白质序列的个别替换、删除或添加，在编码序列中添加或删除一个氨基酸或一小部分氨基酸是“保守修饰的变体”，其中改变导致氨基酸被化学上相似的氨基酸替换。提供功能相似的氨基酸的保守替换表在本领域是众所周知的。这种保守修饰的变体是本文所提供的构建体的多态性变体、种间同源物和等位基因的补充，并且不除外。
以下八组各自含有相互保守替换的氨基酸：1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(L)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)、蛋氨酸(M)(参见例如，Creighton,Proteins(1984))。
“序列同一性百分比”可通过在比较窗口上比较两个最佳比对序列来确定，其中比较窗口中的多核苷酸序列部分可包括与参考序列(例如，本文提供的构建体的多肽)相比的添加或删除(即，缺口)，其不包括添加或删除，以实现两个序列的最佳比对。百分比通过确定两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数以产生匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗口中的位置总数，并将结果乘以100，得出序列同一性的百分比来计算。
在两个或多个核酸或多肽序列的上下文中，术语“同一性”或百分比“同一性”是指相同序列的两种或多个序列或子序列。如果两个序列具有指定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸，则两个序列“基本相同”(例如，在指定区域上，或在未指定时，在参考序列的整个序列上，70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性)，在比较窗口或指定区域上进行比较和比对以获得最大对应关系时，如使用以下序列比较算法之一或通过手动比对和目视检查测量的。本文提供的一些实施方式分别提供了与本文例示的(例如，任何一个图2A、2B或4-11、12C-12I中例示的可变区；任何一个图2A、2B或12C至121中例示的CDR；任何一个图2A、2B或12C-12I中例示的FR；以及任何一个图12A-12I或4-11中例示的核酸序列)多肽或多核苷酸基本相同的多肽或多核苷酸。任选地，同一性存在于长度为至少约15、25或50个核苷酸的区域上，或更优选在长度为100至500或1000或更多核苷酸的区域上、或全长的参考序列上。就氨基酸序列而言，在长度为至少5、10、15或20个氨基酸的区域上，任选地在长度为至少约25、30、35、40、50、75或100个氨基酸的区域上，任选地在长度为至少约150、200或250个氨基酸的区域上，或者在全长参考序列上，可以存在同一性或实质同一性。对于较短的氨基酸序列，例如，20个或更少氨基酸的氨基酸序列，在一些实施方式中，根据本文定义的保守替换，当一个或两个氨基酸残基被保守替换时，存在实质同一性。
对于序列比较，通常一个序列充当参考序列，测试序列与该参考序列进行比较。当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入计算机，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。可以使用默认程序参数，或者可以指定替代参数。然后，序列比较算法基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
如本文所用，“比较窗口”包括参考选自20至600，通常为约50至约200，更通常为约100至约150的大量相邻位置中的任一个的段，其中该序列可在两个序列最佳比对后与相同数量的相邻位置的参考序列进行比较。用于比较的序列比对方法是本领域众所周知的。可以进行用于比较的序列的最佳比对，例如，通过Smith和Waterman(1970)Adv.Appl.Math.2:482c的局部同源性算法，通过Needleman and Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48:443的同源性比对算法，通过Pearson和Lipman(1988)Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA 85:2444的相似性搜索方法，通过这些算法的计算机化实现(在威斯康星州遗传学软件包中的GAP、BESTFIT、FASTA，和TFASTA，Genetics Computer Group,575Science Dr.,Madison,Wis.)，或通过手动比对和目视检查(参见例如，Ausubel等人,Current Protocols in Molecular Biology(1995副刊))。
适用于确定序列一致性百分比和序列相似性的算法的两个实例分别是BEAST和BEAST 2.0算法，其在Altschul等人，(1977)Nuc.Acids Res.25:3389-3402，和Altschul等人，(1990)J.Mol.Biol.215:403-410中描述。用于执行BLAST分析的软件可通过美国国家生物技术信息中心公开获得。该算法包括首先通过识别查询序列中长度W的短词来识别高评分序列对(HSP)，当与数据库序列中相同长度的词比对时其或者匹配，或者满足某些正值阈值评分T。T被称为邻域词评分阈值(Altschul等人，上文)。这些最初的邻域词命中充当了启动搜索的种子，以找到包含它们的更长的HSP。词命中沿每个序列在两个方向上扩展，直到累积比对评分可以增加。累积评分对于核苷酸序列，使用参数M(匹配残基的奖励评分；始终>0)和N(错配残基的惩罚评分；始终<0)计算。对于氨基酸序列，评分矩阵用于计算累积评分。当：累积比对评分从其最大实现值减去数量X时，每个方向上的词命中扩展将停止；由于一个或多个负评分残基比对的累积，累积评分降到零或更低；到达任一序列的末端。BLAST算法参数W、T和X决定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)默认使用字长(W)为11，期望值(E)或10，M＝5，N＝-4，以及两条链的比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用字长为3、期望值(E)为10以及BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff和Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10915)比对(B)为50，期望值(E)为10，M＝5，N＝-4，以及两条链的比较。
BLAST算法还对两个序列之间的相似性进行统计分析(参见例如，Karlin和Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5787)。BLAST算法提供的一个相似性度量是最小和概率(P(N))，其指示两个核苷酸或氨基酸序列之间偶然发生匹配的概率。例如，如果测试核酸与参考核酸的比较中的最小和概率小于约0.2、更优选小于约0.01且最优选小于约0.001，则认为核酸类似于参考序列。
两个核酸序列或多肽基本相同的指示是，第一核酸编码的多肽与针对第二核酸编码的多肽产生的抗体发生免疫交叉反应，如下所述。因此，在一些实施方式中，例如，多肽通常与第二多肽基本相同，其中两种多肽仅因保守替换而不同。两个核酸序列基本相同的另一个指示是，两个分子或其互补物在严格的条件下相互杂交，如下所述。两个核酸序列基本相同的另一个指示是，相同的引物可用于扩增序列。
术语“受试者”、“患者”和“个人”可互换地是指正在接受检查和/或治疗的实体。这可以包括例如，哺乳动物，例如人类或非人类灵长类哺乳动物。哺乳动物也可以是实验室哺乳动物，例如，小鼠、大鼠，兔子、仓鼠。在一些实施方式中，哺乳动物可以是农业哺乳动物(例如，马、羊、牛、猪、骆驼)或家养哺乳动物(例如，犬科、猫科)。
术语“治疗上可接受的量”或“治疗上有效的剂量”可互换地是指足以产生预期结果的量。在一些实施方式中，治疗上可接受的量不会引起或导致不良副作用。治疗上可接受的量可以通过第一施用低剂量，然后逐渐增加该剂量，直到达到预期效果来确定。
术语“共同施用”是指在个人血液或待测样本中施用两种活性剂。共同施用的活性剂可同时或顺序递送。
“标签”、“可检测标签”或“可检测标记物”在本文中可互换使用，并且是指可检测的化合物或组合物，其直接或间接与抗体缀合以产生“标记的”抗体。标签本身可为可检测的(例如，放射性同位素标签或荧光标签)，或者在酶标签的情况下，可以催化可检测的底物化合物或组合物的化学改变。
术语“免疫PET”是用于放射性标记的抗体和抗体片段的正电子发射断层扫描(PET)的术语。
如本文所用，术语“细胞毒性剂”是指抑制或阻止细胞功能和/或导致细胞死亡或破坏的物质。该术语旨在包括放射性同位素(例如，At.sup.211、1.sup.131、1.sup.125、Y.sup.90、Re.sup.186、Re.sup.188、Sm.sup.153、Bi.sup.212、P.sup.32、Pb.sup.212和Lu的放射性同位素)、化学疗法剂(例如，甲氨蝶呤、阿霉素、长春花生物碱(长春新碱、长春花碱、依托泊苷)、阿霉素、美法仑、丝裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔红霉素或其他插层剂、酶及其片段，如溶核酶、抗生素、以及毒素，例如细菌、真菌、植物或动物源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或变体、毒素、生长抑制剂、药物部分以及下文公开的各种抗肿瘤剂或抗癌剂。其他细胞毒性剂如下文所述。杀肿瘤剂导致肿瘤细胞的破坏。
“毒素”是指能够对细胞生长或增殖产生有害影响的任何物质。
“化学治疗剂”是用于治疗癌症的化合物。化学治疗剂的实例包括烷基化剂，例如噻替派和CYTOXANTM环磷酰胺；烷基磺酸盐，如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶类，如苯佐替派、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替派；乙烯亚胺和羟甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺；乙酰精宁(尤其是泡番枝辛和泡番枝辛)；δ-9-四氢大麻酚(屈大麻酚，MARINOLTM)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙碱；桦木酸；喜树碱(包括合成类似物拓扑替康(HYCAMTINTM)、CPT-11(伊立替康、喜树碱)、乙酰喜树碱、东莨菪碱和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素；卡利司他汀；CC-1065(包括其阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物)；鬼臼毒素；鬼臼酸；替尼泊甙；隐藻素(尤其是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀；倍癌霉素(包括合成类似物KW-2189和CB1-TM1)；软珊瑚醇；水鬼蕉碱；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海綿抑制素；氮芥，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯代磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、盐酸氧化甲氯雷他敏、美法仑、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲，如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素，如烯二炔类抗生素(如卡奇霉素，尤其是卡奇霉素γll和卡奇霉素ωll(参见，例如Agnew，Chem Inti)。Ed.Engl.,33:183-186(1994))；达内霉素，包括达内霉素A；埃斯培拉霉素；以及新制癌菌素发色团和相关的色蛋白烯二炔类抗生素生色团)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、安曲霉素、重氮丝氨酸、博莱霉素、放线菌素C、卡拉比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、ADRIAMYCINTM-阿霉素(包括吗啉-阿霉素、氰基吗啉-阿霉素、2-吡咯-阿霉素和脱氧阿霉素)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素如丝裂霉素C、霉酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培普霉素、卟啉霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲霉素、块菌素、苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢产物，如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸、氨甲叶酸、蝶罗呤、三甲氧蝶呤；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤，硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄激素，如卡普睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺激素，如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基戊酮酸；依那普利；安吖啶；倍曲布西；比生群；依达曲沙；defofamine；地美可辛；地吖醌；依洛尼塞；依利醋铵；埃波霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美登素类化合物，如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖啶；喷司他丁；苯来美特；吡柔比星；洛索蒽醌；2-乙基肼；丙卡巴肼；PSK.RTM.多糖复合物(JHS天然产物，Eugene,Oreg.)；丙亚胺；根瘤菌素；西佐糖；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢菌毒素(尤其是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇形菌素)；尿烷；长春地辛(ELDISINETM、FILDESINTM)；达卡巴嗪；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞苷(“Ara-C”)；噻替哌；紫杉类，TAXOL.RTM.紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、ABRAXANETM无聚氧乙烯蓖麻油，紫杉醇的白蛋白工程化纳米粒子制剂(American PharmaceuticalPartners,Schaumberg,Ill.)和TAXOTERETM多西紫杉醇(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；瘤可宁；吉西他滨(GEMZARTM)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，如顺铂和卡铂；长春花碱(VELBANTM)；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱(ONCOVINTM)；奥沙利铂；leucovovin；长春瑞滨(NAVELBINETM)；米托蒽醌；依达曲沙；柔红霉素；氨基蝶呤；伊班膦酸盐；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维生素A如视黄酸；卡培他滨(XELODATM)；上述任何一种的药物上可接受的盐、酸或衍生物；以及上述两种或多种的组合，例如CHOP，是环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和泼尼松龙和FOLFOX联合治疗的缩写、奥沙利铂(EFOXATINTM)与5-FU和亚叶酸联合的治疗方案的缩写。
“癌症疫苗”是指治疗现有癌症或预防癌症发展的疫苗。癌症疫苗疗法包括瘤内疫苗疗法，如在AMarabelle,L Tselikas,T de Baere,R Houot；“Intratumoralimmunotherapy:using the tumor as the remedy”Annals of Oncology,第28卷,Issuesuppl 12,December 2017；和在Aurelien Marabelle,Holbrook Kohrt,Christophe Caux,和Ronald Levy；“Intratumoral Immunization:A New Paradigm for Cancer Therapy”；Clin Cancer Res.2014Apr 1；20(7):1747-1756中描述的。
“放射疗法”是指使用具有治疗目的的辐射或放射性同位素进行治疗。它包括YangLiu,Yinping Dong,Li Kong,Fang Shi,Hui Zhu&Jinming Yu；“Abscopal effect ofradiotherapy combined with immune checkpoint inhibitors”；Journal ofHematology&Oncology volume 11,Article number:104(2018)；and in Melek TugceYilmaz,Aysenur Elmali,and Gozde Yazici；“Abscopal Effect,From Myth to Reality:From Radiation Oncologists'Perspective”；Cureus.2019Jan；11(1)中所述的旨在具有远位效应的辐射疗法。
该定义中还包括抗激素药物，其作用为调节、减少、阻断或抑制可促进癌症生长的激素的作用，并且通常呈全身性形式，或全身治疗。它们本身可能就是激素。实例包括抗雌激素类和选择性雌激素受体调节剂(SERM)，包括例如，他莫昔芬(包括NOLVADEXTM他莫昔芬)、EVISTATM雷洛西芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔酚(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和FARESTONTM托瑞米芬；抗孕酮；雌激素受体下调剂(ERD)；具有抑制或关闭卵巢功能的药物，例如Leutinizing激素释放激素(LHRH)激动剂，例如LUPRONTM和ELIGARDTM醋酸亮丙瑞林、醋酸戈舍瑞林、醋酸布舍瑞林和tripterelin；其他抗雄激素类，例如氟他胺、尼鲁米特和比卡鲁胺；以及抑制酶芳香化酶的芳香化酶抑制剂，其可调节肾上腺的雌激素生成，诸如例如4(5)-咪唑类、氨鲁米特、MEGASETM醋酸甲地孕酮、AROMASINTM依西美坦、福美坦(formestanie)、法倔唑、RIVISORTM伏氯唑、FEMARATM来曲唑和ARIMIDEXTM阿那曲唑。另外，这种化学治疗剂的定义包括双膦酸盐，例如氯膦酸盐(例如BONEFOSTM或OSTACTM)、DIDROCALTM依替膦酸盐、NE-58095、ZOMETATM唑来膦酸/唑来膦酸盐、FOSAMAXTM阿屈膦酸盐、AREDIATM帕米膦酸盐、SKELIDTM替鲁膦酸盐或ACTONELTM利塞膦酸盐；以及曲沙他滨(1,3-二氧环戊烷核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是那些抑制与粘壁细胞增殖有关的信号传导途径中的基因表达的寡核苷酸，例如PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体(EGFR)；疫苗，例如THERATOPETM疫苗和基因治疗疫苗，例如ALLOVECTINTM疫苗、LEUVECTINTM疫苗和VAXIDTM疫苗；LURTOTECANTM拓扑异构酶1抑制剂；ABARELIXTMrmRH；二甲苯磺酸拉帕替尼(ErbB-2和EGFR双酪氨酸激酶小分子抑制剂、也称为GW572016)；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
在本文使用时，“生长抑制剂”是指在体外或体内抑制细胞生长的化合物或组合物。因此，生长抑制剂可以是显着降低S期细胞百分比的抑制剂。生长抑制剂的实例包括阻断细胞周期进程(在S期以外的地方)的药剂，例如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻滞剂包括长春花(长春新碱和长春花碱)、紫杉烷和拓扑异构酶II抑制剂，如阿霉素、表阿霉素、柔红霉素、依托泊苷和博莱霉素。那些阻滞G1的药物也会溢出进入S期阻滞，例如，DNA烷基化剂，如他莫昔芬、强的松、达卡巴嗪、氮芥、顺铂、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和阿糖胞苷。其他信息可在Mendelsohn和Israel编辑的The Molecular Basis of Cancer,，第1章中找到，Murakami等人的标题为““Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplasticdrugs”(WB Saunders:Philadelphia,1995),尤其第13页中找到。紫杉烷(紫杉醇和多西他赛)都是衍生自紫杉的抗癌药物。多西他赛(TAXOTERETM，Rhone-Poulenc Rorer)衍生自欧洲紫杉，是紫杉醇的半合成类似物(TAXOLTM，Bristol-Myers Squibb)。紫杉醇和多西他赛促进微管蛋白二聚体的微管组装，并通过防止解聚作用稳定微管，其导致细胞的有丝分裂的抑制。
“免疫疗法”(也称为“免疫刺激”和“IOT”)是指通过刺激宿主对疾病的免疫反应的疗法(如药剂或疗程)来预防或治疗疾病。许多疾病可以用免疫疗法治疗。近年来，学术文献经常使用免疫疗法来特别指代免疫肿瘤学，其表示旨在减少肿瘤或瘤形成的免疫回避特征的癌症治疗，从而允许天然或修饰的免疫细胞识别和消除癌组织。“免疫疗法”也可指免疫治疗剂，或使用此类剂的方法，取决于上下文。现在有各种免疫治疗剂可用，更多的免疫治疗剂正在临床和临床前开发中。众所周知的免疫治疗剂包括但不限于检查点抑制剂(“CPI”)治疗(例如抗PD-1(派姆单抗)或抗PD-L1(/>纳武单抗)结合剂)、IL2及其片段或前药(例如NKTR-214，PEG缀合的IL2(阿地白介素)的前药)、其他CD 122(IL2RB白细胞介素2受体亚单位β)结合配体，GAd-NOUS-20新抗原疫苗(D'Alise等人2017；其可增强NKTR-214活性)、T细胞双特异性药物治疗、逆转T细胞耗竭的治疗、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的抑制(如使用艾卡哚司他(INCB024360))和CAR-T治疗。
术语“免疫检查点抑制剂”(有时称为“ICI”)或“检查点抑制剂”(有时称为“CPI”)或“免疫检查点阻断抑制剂”及所有类似术语表示免疫疗法的一个子类。例如，阻断某些类型免疫系统细胞(如T细胞)和某些癌细胞产生的某些蛋白质的分子。这些蛋白质有助于保持免疫反应受控制，并可保持T细胞杀死癌细胞。当这些蛋白质被阻断时，免疫系统可以自由活动，且T细胞能够杀死癌细胞。一些实施方式包括抗PD1和抗PD Ll结合剂、抗CTLA4剂和多特异性剂，包括但不限于抗CTLA-4/B7-l/B7-2。其他免疫疗法包括检查点抑制剂，如伊匹单抗(Yervoy)、派姆单抗(Keytmda)、纳武单抗(Opdivo)、阿替利珠单抗(Tecentriq)、阿维单抗(Bavencio)和度伐利尤单抗(Imfinzi)。IOT还包括替西木单抗和匹地利珠单抗，小分子ICI也在开发中，包括BMS-1001、BMS-1116、CA-170、CA-327、咪喹莫特、雷西莫特、852A、VTX-2337、ADU-S100、MK-1454、伊布替尼、3AC、艾德拉尼、IPI-549、艾卡哚司他、AT-38、CPI-444、Vipadenant、Preladenant、PBF、AZD4635、Galunisib、OTX015/MK-8628、CPI-0610(参阅。Kerr和Chisolm(2019)The Journal of Immunology,2019,202:11-19。
IOT还包括其他非CPI的模式，但其也可以激活宿主免疫系统对抗癌症，或使肿瘤易受CPI治疗的影响。此类替代IOT包括但不限于：T细胞免疫调节剂如细胞因子IL-2、IL-7、IL-15、IL-21、IL-12、GM-CSF和IFNα(包括Synthorx Therapeutics的THOR-707和NektarTherapeutics的NKTR-214bempegaldesleukin)；各种其他干扰素和白细胞介素；TGFβ1制剂(如Scholar Rock开发的SRK-181)；溶瘤治疗(包括溶瘤病毒疗法)；过继性细胞疗法，如T细胞疗法(包括CAR-T细胞疗法)；癌症疫苗(预防性和治疗性两者)。免疫疗法还包括增加肿瘤细胞中新抗原负荷的策略，包括使肿瘤细胞表达或揭示肿瘤相关抗原的靶向治疗(参阅Galon和Bruni(2019)Nature Reviews Drug Discovery第18卷,第l97-218页)。其他IOT包括TLR9配体(Checkmate Pharmaceuticals)、A2A/A2B双拮抗剂(Arcus Biosciences)和针对诸如IDO-1和精氨酸酶的内源性酶的疫苗肽(10Biotech)。IOT包括HS-110、HS-130和PTX-35(Heat Biologies)。
本领域技术人员认识到免疫疗法可以相互结合使用。免疫疗法也可在疾病的其他治疗之前、之后或与其组合使用，包括在癌症、放射疗法、所有类型的化学疗法(包括上述细胞毒性剂、化学疗法剂、抗激素剂和生长抑制剂)和手术切除的情况下。
“肿瘤浸润淋巴细胞”或“TIL”是指在肿瘤(例如，实体瘤)边缘内发现的淋巴细胞。
“肿瘤浸润淋巴细胞状态”或“TIL”状态或其他类似术语表示淋巴细胞可穿透肿瘤或瘤形成或肿瘤基质的程度。TIL阳性肿瘤也可描述为“T细胞发炎的”。
“PET”是诊断技术，其可用于在分子水平上观察人体器官和组织的功能和代谢。对于PET，正电子放射性药物(例如18F-FDG)可以注射到人体内。如果使用FDG，因为氟脱氧葡萄糖(FDG)的代谢与葡萄糖相似，FDG将聚集在消化葡萄糖的细胞中。快速生长的肿瘤组织对放射性药物的摄取是不同的。18F衰变发射的正电子和组织中的电子将发生湮灭反应以在相反方向产生具有相同能量的两个伽马光子。围绕人体的检测器阵列可以使用符合测量技术检测两个光子，并确定正电子的位置信息。然后，通过使用图像重建软件处理位置信息，可以构建人体中的正电子断层扫描图像。在一些情况下，可以使用免疫PET，其中标签(例如，18F)附着或与抗原结合构建体相关。在此类实施方式中，可以监测抗原结合构建体的分布，这将取决于抗原结合构建体的结合特性和分布特性。例如，如果使用CD8定向微抗体，则PET可用于监测CD8分子在宿主系统中的分布。PET系统为本领域所知，包括例如美国专利公开号20170357015、20170153337、20150196266、20150087974、20120318988和20090159804，其中每一个的实体都通过引用合并到本文中以获取关于PET及其使用的描述。
本文提供的实施方式和相应的详细描述可以根据软件、算法和对计算机存储器中的数据位的操作的符号表示来呈现。这些描述和表示是本领域普通技术人员向本领域其他普通技术人员有效传达其作品内容的描述和表示。这里使用的算法和通常使用的算法被认为是自相一致的步骤顺序，得到期望的结果。步骤是需要对物理量进行物理操作的那些步骤。通常，尽管不一定，这些量采用能够被存储、传输、组合、比较和以其他方式操纵的光、电或磁信号的形式。有时，主要出于常用的原因，将这些信号称为位、值、元素、符号、字符、术语、数字等已被证明是方便的。
在以下描述中，可以参考操作的动作和符号表示来描述说明性实施方式，这些操作可以被实现为程序模块，或功能过程包括例程、程序、对象、组件、数据结构等，其执行特定任务或实现特定抽象数据类型，并且可以在现有的网络元素上使用现有的硬件实现。此类现有硬件可包括一个或多个中央处理器(CPU)、数字信号处理器(DSP)、专用集成电路、现场可编程门阵列(FPGA)计算机等。
还应注意，示例性实施方式的软件实现方面通常可以在某种形式的程序存储介质上编码或在某种类型的传输介质上实现。程序存储介质(例如，非暂时性存储介质)可以是磁性的(例如，软盘或硬盘驱动器)或光学的(例如，光盘只读存储器或“CD ROM”)，并且可以是只读的或随机存取的。类似地，传输介质可以是双绞线对、同轴电缆、光纤或本领域已知的一些其他合适的传输介质。示例性实施方式不受任何给定实现的这些方面的限制。
然而，应记住，所有这些和类似的术语都与适当的物理量相关，只是适用于这些量的方便标签。除非另有明确说明，或从讨论中可以明显看出，诸如“处理”或“计算(computing)”或“计算(calculating)”或“确定”的“显示”等术语是指计算机系统或类似电子计算设备/硬件的动作和过程，其操纵和转换表示为物理的数据，计算机系统寄存器和存储器中的电子量转换为其他数据，类似地表示为计算机系统存储器或寄存器或其他此类信息存储、传输或显示设备中的物理量。
方法
本文提供了使用可检测标记物成像受试者的方法，例如PET示踪剂(例如，放射性核素标记的抗原结合构建体)，其选择性结合免疫细胞标记物以进行非侵入性成像。参考1A和IB，描述了对受试者成像的方法100a、100b的实现。该方法可包括向受试者施用包含第一可检测标记物110b的第一抗原结合构建体，例如放射性核素示踪剂110a(例如PET示踪剂)。抗原结合构建体可选择性结合第一靶标，例如免疫细胞标记物。在一些实施方式中，第一靶标可为CD3、CD4和CD8中的一个。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性结合到靶标的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性地结合到靶标(例如，CD3、CD4或CD8)上的微抗体或cys-二体抗体。
然后，使用非侵入性成像120b(例如，PET或SPECT 120a)评估受试者的一个或多个组织中表达第一靶标的细胞的分布或丰度以测量受试者中来自可检测标记物的信号(例如，放射性核素信号)。在某些实施方式中，在受试者全身不同部位使用非侵入性成像(例如PET或SPECT)测量的可检测标记物(如放射性核素)的信号水平充当在每个测量部位表达靶标的细胞的丰度的代理。可以使用任何合适的非侵入性成像选项，如本文所公开的。在一些实施方式中，可以使用任何合适的手段进行PET或SPECT。如本文进一步描述的，任何合适的方法可用于转换可检测标记物的检测信号，例如，放射性核素信号，以评估表达靶标的细胞的丰度。
该方法可进一步包括向受试者施用包含第二可检测标记物130b(例如放射性核素示踪剂(例如PET示踪剂))130a的第二抗原结合构建体。第二抗原结合构建体可选择性结合第二靶标，例如免疫细胞标记物，其中第二靶标不同于第一靶标。在一些实施方式中，第二靶标可以是CD3、CD4和CD8中的一个，其中第二靶标不同于第一靶标。可以使用第一和第二靶标的任何合适组合。在一些实施方式中，其中一个靶标(例如，第一靶标)是CD3，另一个靶标(例如，第二靶标)可能是CD4或CD8。在某些实施方式中，其中一个靶标(例如，第一靶标)是CD4，另一个靶标(例如，第二靶标)是CD8。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性结合到靶标的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性地结合到靶标(例如，CD3、CD4或CD8)上的微抗体或cys-二体抗体。
在一些实施方式中，第一靶标是CD3、CD4、IFN-γ和CD8中的一个。在一些实施方式中，第二靶标是CD3、CD4、IFN-γ和CD8中的一个，其中第二靶标与第一靶标不同。可以使用第一和第二靶标的任何合适组合。在一些实施方式中，其中一个靶标(例如，第一靶标)是CD3，另一个靶标(例如，第二靶标)可能是CD4或CD8或IFN-γ。在一些实施方式中，其中一个靶标(例如，第一靶标)是CD4，另一个靶标(例如，第二靶标)可能是CD8和/或IFN-γ。在一些实施方式中，其中一个靶标(例如，第一靶标)是CD8，另一个靶标(例如，第二靶标)是IFN-γ。
在一些实施方式中，该方法包括向受试者施用包含第二放射性核素示踪剂(例如PET示踪剂)的第二抗原结合构建体，其中第二放射性核素示踪剂为89Zr，并且其中与约0.2-10mg的抗原结合构建体一起施用剂量为约0.5-1.5+/-20％mCi(例如，约1mCi)的放射性核素示踪剂。
基于通过非侵入性成像(例如，PET或SPECT)测量的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平，可以使用任何合适的方法来评估表达靶标的细胞的分布和/或丰度，。在一些实施方式中，基于通过非侵入性成像(例如，PET或SPECT)测量的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平，可以使用感兴趣区域(ROI)上的信号强度来评估表达靶标的细胞的分布和/或丰度。在一些实施方式中，基于通过非侵入性成像(例如，PET或SPECT)测量的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平，可以使用归一化为参考信号强度的ROI上的信号强度来评估表达靶标的细胞的分布和/或丰度。在一些实施方式中，基于通过非侵入性成像(例如，PET或SPECT)测量的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平，可以使用ROI上的平均信号强度来评估表达靶标的细胞的分布和/或丰度。在一些实施方式中，基于通过非侵入性成像(例如，PET或SPECT)测量的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平，可以使用ROI上的平均信号强度来评估表达靶标的细胞的分布和/或丰度。在一些实施方式中，基于通过非侵入性成像(例如，PET或SPECT)测量的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平，可以计算标准摄取值(SUV)来评估表达靶标的细胞的分布和/或丰度。合适的选项在例如，2019年9月27日提交的国际申请号PCT/US2019/053642中描述，该申请通过引用并入本文。
特定于靶标的抗原结合构建体的顺序例如，CD3、CD4、IFN-γ或CD8的施用顺序可以是任何合适的顺序。在一些实施方式中，第一施用对CD3特异的抗原结合构建体，并且第二施用特异于另一靶标(例如，CD4、CD8或IFN-γ)的抗原结合构建体。在一些实施方式中，第一施用对CD4特异的抗原结合构建体，并且第二施用对另一靶标(例如，CD3、CD8或IFN-γ)特异的抗原结合构建体。在一些实施方式中，第一施用对CD3特异的抗原结合构建体，第二施用对CD4特异的抗原结合构建体。在一些实施方式中，第一施用对CD8特异的抗原结合构建体，并且第二施用对另一靶标(例如，CD4、CD8或IFN-γ)特异的抗原结合构建体。在一些实施方式中，第一施用对CD4特异的抗原结合构建体，第二施用对CD8特异的抗原结合构建体。在一些实施方式中，第一施用对IFN-γ特异的抗原结合构建体，并且第二施用对另一靶标(例如，CD3、CD4或CD8)特异的抗原结合构建体。在一些实施方式中，同时施用不同的抗原结合构建体，例如，在同一时间或同一天。
然后，使用非侵入性成像140b(例如，PET或SPECT 140a)评估受试者的一个或多个组织中表达第二靶标的细胞的分布或丰度以测量受试者中的第二可检测标记物(例如，放射性核素信号)。组织中表达第一和第二靶标的细胞的评估分布或丰度可提供组织的免疫环境。
在一些实施方式中，该方法包括基于与分别选择性结合靶标(例如，CD3、CD4、CD8或IFN-γ)的抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的测量水平评估表达靶标(例如，CD3、CD4、CD8或IFN-γ)的细胞的分布或丰度。在一些实施方式中，表达选自CD3、CD4或CD8的一个靶标的细胞的分布或丰度，或IFN-γ的丰度或分布基于与选择性结合其他两个靶标的抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的测量水平进行评估。在不受理论约束的情况下，通过本发明的非侵入性成像方法(例如PET或SPECT)测量的表达CD3、CD4和CD8的细胞之间的关系通常可以表示为：(CD3+细胞的丰度)<(CD4+细胞的丰度)+(CD8+细胞的丰度)，在固定体积内。CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞的评估丰度和/或分布之间的关系可能取决于非侵入性成像方法的灵敏度和/或分辨率。在一些实施方式中，CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞的评估丰度取决于非侵入性成像过程的灵敏度，例如，PET相机的灵敏度。在一些实施方式中，CD3+细胞、CD4+细胞和CD8+细胞的评估分布取决于非侵入性成像过程的分辨率，例如，PET相机的分辨率。通常，使用较低分辨率和/或低灵敏度成像方法评估的CD8+细胞和CD4+细胞的分布和/或丰度的总和可以近似CD8+细胞的分布和/或丰度。此外，使用较低分辨率和/或低灵敏度成像方法评估的CD3+细胞和CD4+细胞的分布和/或丰度之间的差可以近似CD8+细胞的分布和/或丰度。类似地，使用较低分辨率和/或低灵敏度成像方法评估的CD3+细胞和CD8+细胞的分布和/或丰度之间的差可以近似CD4+细胞的分布和/或丰度。在一些实施方式中，使用较低分辨率成像方法(例如PET相机)评估的CD8+细胞和CD4+细胞的分布的和可以近似CD8+细胞的分布。在一些实施方式中，使用较低灵敏度成像方法(例如PET相机)评估的CD8+细胞和CD4+细胞的丰度的和可以近似CD8+细胞的丰度。在一些实施方式中，使用较低分辨率成像方法(例如PET相机)评估的CD3+细胞和CD4+细胞的分布之间的差可以近似CD8+细胞的分布。在一些实施方式中，使用较低灵敏度成像方法(例如PET相机)评估的CD3+细胞和CD4+细胞的丰度之间的差可以近似CD8+细胞的丰度。在一些实施方式中，使用较低分辨率成像方法(例如PET相机)评估的CD3+细胞和CD8+细胞的分布之间的差可以近似CD4+细胞的分布。在一些实施方式中，使用较低灵敏度成像方法(例如PET相机)评估的CD3+细胞和CD8+细胞的丰度之间的差可以近似CD4+细胞的丰度。
在一些实施方式中，表达CD3的细胞的分布或丰度可通过基于非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD4的细胞的评估分布或丰度的和，以及基于非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD8的细胞的评估分布或丰度来评估。在一些实施方式中，表达CD4的细胞的分布或丰度可通过基于非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD3的细胞的评估分布或丰度之间的差，以及基于非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD8的细胞的评估分布或丰度来评估。在一些实施方式中，表达CD8的细胞的分布或丰度可通过基于非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD3的细胞的评估分布或丰度之间的差，以及基于非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD4的细胞的评估分布或丰度来评估。上述也可以使用IFN-γ作为替代品或添加剂应用。
作为用于测量受试者体内的可检测标记物信号(例如，放射性核素信号)的成像方法的分辨率和/或灵敏度增加，即CD4+细胞和CD8+细胞的评估丰度的和可能偏离CD3+细胞的丰度。不受理论束缚，CD3可被认为是T细胞的特异性标记物。CD4可以在T细胞以及单核细胞/巨噬细胞和树突状细胞上表达。类似地，CD8可以在T细胞以及NK细胞和巨噬细胞上表达。此外，一些T细胞可表达CD4和CD8两者。因此，本发明的非侵入性成像方法(例如，PET或SPECT)的分辨率和/或灵敏度足够高，表达CD3、CD4和CD8的细胞之间的关系可以表示为：(CD3+细胞的丰度)<(CD4+细胞的丰度)+(CD8+细胞的丰度)，在固定体积内。在一些实施方式中，免疫环境通过考虑表达CD3、CD4和CD8的细胞的相对丰度来确定。上述也可以使用IFN-γ作为替代品或添加剂应用。
在一些实施方式中，该方法还包括向受试者施用包含第三可检测标记物(如放射性核素示踪剂(例如PET示踪剂))的第三抗原结合构建体。第三抗原结合构建体可选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第三靶标(例如免疫细胞标记物)，其可能不同于第一或第二靶标。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性结合到靶标的抗体或其抗原结合片段。然后，使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)评估受试者的一个或多个组织中表达第三靶标的细胞的分布或丰度以测量受试者中来自可检测标记物的信号(例如，放射性核素信号)。上述也可以使用IFN-γ作为替代品或添加剂应用。
在一些实施方式中，该方法包括向受试者施用包含第三放射性核素示踪剂(例如PET示踪剂)的第三抗原结合构建体，其中第三放射性核素示踪剂为89Zr，并且其中与0.2-10mg的抗原结合构建体一起施用剂量为约0.5-1.5+/-20％mCi(例如，约1mCi)的放射性核素示踪剂。
在一些实施方式中，该方法包括向受试者施用包含第四放射性核素示踪剂(例如PET示踪剂)的第四抗原结合构建体以结合IFN-γ，其中第四放射性核素示踪剂为89Zr，并且其中施用剂量为约0.5-1.5+/-20％mCi(例如，约1mCi)的放射性核素示踪剂。
抗原结合构建体可通过任何合适的途径施用，包括但不限于气雾剂、肠内、鼻、眼、口服、肠胃外、直肠、透皮(例如，外用乳膏或软膏、贴剂)或阴道。在一些实施方式中，该方法包括经皮施用抗原结合构建体，例如，通过使用外用乳膏或软膏或通过透皮贴剂。在一些实施方式中，该方法包括肠胃外施用抗原结合构建体，例如，通过注射，包括眶下、输注、动脉内、囊内、心内、皮内、肌肉内、腹膜内、肺内、椎管内、胸骨内、鞘内、子宫内、静脉内、颅内、蛛网膜下、囊下、皮下、经粘膜或经气管注射。在一些实施方式中，抗原结合构建体可在干预或切除期间作为局部施用在术中递送。
在某些实施方式中，该方法包括测定一个或多个组织中的每一个中表达任一靶标的细胞与表达另一靶标的细胞相比的相对丰度。在受试者的身体部位，例如，在感兴趣的特定组织中，两个或多个表达不同靶标的细胞的分布(如通过使用本文所述的任何合适方法，测量与对不同靶标具有结合特异性的抗原结合构建体相关联的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平测定的)可能重叠。然后，组织中免疫细胞类型的评估丰度可以相互比较，以确定该组织的免疫环境。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括与组织中另一个CD3+细胞、CD4+细胞、或CD8+细胞相比的CD3+细胞、CD4+细胞、或CD8+细胞的相对丰度。可使用任何合适的方法确定细胞相互比较的相对丰度。在一些实施方式中，细胞的相对丰度可能是表达第一靶标的细胞的分布和/或丰度的评估值和/或表达第二靶标的细胞的分布和/或丰度的评估值之间的差。在一些实施方式中，细胞的相对丰度可能是表达第一靶标的细胞的分布和/或丰度的评估值和/或表达第二靶标的细胞的分布和/或丰度的评估值的比。在一些实施方式中，通过本方法确定的免疫环境例如，免疫评分包括大于表达靶标(例如，抗原结合构建体的CD3、CD4、CD8或IFN-γ)或与其相关的免疫细胞浸润水平。因此，在一些实施方式中，由本方法确定的免疫环境例如，免疫评分，是基于通过本文所公开的非侵入性成像选项探测的两个或多个靶标的组合，其中基于免疫环境的预后与基于单独检测任何一个靶标的分布的预后相比更准确/或更有辨识力(例如，能够更好地基于预后区分患者)。在一些实施方式中，基于检测到的任何一个靶标(例如，CD3、CD4、CD8或IFN-γ)的分布或丰度的受试者的预后取决于其他靶标中的一个或多个的上下文。
在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括组织中CD4+细胞相对于CD3+细胞的丰度、或CD8+细胞相对于CD3+细胞的丰度、或CD4+细胞相对于CD8+细胞的丰度。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD4+、CD8+和CD3+细胞中的每一个相对于彼此的丰度。在一些实施方式中，该方法包括确定一种免疫环境，包括CD8+和CD3+细胞中每一个的丰度相对于CD4+细胞的丰度。在一些实施方式中，该方法包括确定一种免疫环境，包括CD8+和CD4+细胞中每一个的丰度相对于CD3+细胞的丰度。在一些实施方式中，该方法包括确定一种免疫环境，包括CD4+和CD3+细胞中每一个的丰度相对于CD8+细胞的丰度。在一些实施方式中，该方法包括确定一种免疫环境，包括CD8+和CD4+细胞两者的丰度相对于CD3+细胞的丰度。
在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括组织中CD4+细胞和CD3+细胞的丰度之间的差、或CD8+细胞和CD3+细胞的丰度之间的差、或CD4+细胞和CD8+细胞的丰度之间的差。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD4+、CD8+和CD3+细胞中的每一个和彼此之间的丰度的差。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD8+细胞和CD4+细胞之间的丰度的差，和CD3+细胞和CD4+细胞之间的丰度的差。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD8+细胞和CD3+细胞之间的丰度的差，和CD4+细胞和CD3+细胞之间的丰度的差。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD4+细胞和CD8+细胞之间的丰度的差，和CD3+细胞和CD8+细胞之间的丰度的差。在一些实施方式中，该方法包括确定一种免疫环境，包括CD8+和CD4+细胞的丰度的和与CD3+细胞的丰度之间的差。
在某些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括组织中的CD4+细胞与CD3+细胞的比，或CD3+细胞与CD4+细胞的比，或CD8+细胞与CD3+细胞的比，或CD3+细胞与CD8+细胞的比，或CD4+细胞与CD8+细胞的比，或CD8+细胞与CD4+细胞的比。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD4+、CD8+和CD3+细胞中的每一个相对于彼此的比。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD8+和CD3+细胞中的每一个与CD4+细胞的比。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD8+和CD4+细胞中的每一个与CD3+细胞的比。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD4+和CD3+细胞中的每一个与CD8+细胞的比。在一些实施方式中，该方法包括确定免疫环境，包括CD8+和CD4+细胞的和与CD3+细胞的比。
在一些实施方式中，受试者体内的IFN-γ信号的分布或强度可用于评估基于本文公开的CD4+、CD8+和/或CD3+状态识别的免疫细胞(例如，T-细胞)在受试者体内的部位是否处于活动或休眠状态。通常，IFN-γ信号提供了T细胞活性的评估。在一些实施方式中，免疫环境包括IFN-γ信号的分布或强度与CD4+、CD8+和CD3+细胞的丰度和/或分布的比较。在一些实施方式中，该方法包括通过对CD4+、CD8+和/或CD3+细胞的丰度和/或分布加权确定免疫环境，如通过使用受试者体内IFN-γ信号的分布或强度对每个特异的可检测标记物的信号水平评估的，使得更强的IFN-γ信号表明T细胞的活性更强。
在某些实施方式中，可以基于靶标(例如，表达靶标的细胞)的分布或丰度生成图像150a、150b，其中图像可提供组织免疫环境的指示。图像可以表示在一个或多个组织上或在整个身体上表达通过施用给受试者的抗原结合构建体探测的一个或多个靶标的细胞的分布和/或丰度。因此，图像可以表示在一个或多个组织上或在整个身体上表达通过施用给受试者的第一抗原结合构建体探测的第一靶标的细胞的分布和/或丰度。图像可以进一步表示在一个或多个组织上或在整个身体上表达通过施用给受试者的第二抗原结合构建体探测的第二靶标的细胞的分布和/或丰度。在某些实施方式中，图像可以表示在一个或多个组织上或在整个身体上表达通过施用给受试者的第三抗原结合构建体探测的第三靶标的细胞的分布和/或丰度。
在一些实施方式中，图像提供了免疫环境，包括组织中组织中CD3+细胞、CD4+细胞、或CD8+细胞的丰度或分布。在一些实施方式中，图像表示免疫环境，包括与组织中的另一个CD3+细胞、CD4+细胞、或CD8+细胞相比的CD3+细胞、CD4+细胞、或CD8+细胞的相对丰度。因此，在一些实施方式中，图像表示免疫环境，包括组织中CD4+细胞相对于CD3+细胞的丰度、或CD8+细胞相对于CD3+细胞的丰度、或CD4+细胞相对于CD8+细胞的丰度。在某些实施方式中，图像提供了免疫环境，包括组织中的CD4+细胞与CD3+细胞的比，或CD3+细胞与CD4+细胞的比，或CD8+细胞与CD3+细胞的比，或CD3+细胞与CD8+细胞的比，或CD4+细胞与CD8+细胞的比，或CD8+细胞与CD4+细胞的比。在某些实施方式中，图像提供了免疫环境，包括CD4+、CD8+和CD3+细胞中的每一个相对于彼此的比。在一些实施方式中，图像提供了免疫环境，包括与组织中IFN-γ表达相关的免疫细胞的丰度或分布。
在一些实施方式中，成像的一个或多个组织受疾病影响，例如，癌症、自身免疫疾病或传染病。在一些实施方式中，组织包括肿瘤。在某些实施方式中，本发明的方法包括识别一个或多个具有癌组织的组织(例如肿瘤)。可以使用任何合适的侵入性或非侵入性手段来确定成像组织是癌性的或包括肿瘤，包括但不限于计算机断层扫描(CT)扫描、X射线、FDG-PET或磁共振成像(MRI)或活检。在一些实施方式中，将PET扫描图像与MRI图像比对，以识别受试者的器官和组织。在一些实施方式中，PET或SPECT扫描和MRI或CT扫描可在同一扫描过程中使用组合扫描仪进行。
本方法中可使用任何适用于非侵入性体内成像的合适的可检测标记物。如本领域所知，在较低的丰度或分布下，标记物可能存在，但将低于可检测水平。通常，可检测标记物的使用量足以在特异性靶向时提供可检测信号。在一些实施方式中，PET示踪剂的摄取和保留与ROI中存在的许多细胞相关。在一些实施方式中，PET示踪剂的SUV可以是标记物的检测水平，与ROI中存在的许多细胞相关。细胞数量可以是相对水平(相对于另一种细胞类型)，或者其可以是与本文其他地方描述的与IHC相关的结果相关(或对其进行校准)的绝对数。在一些实施方式中，当使用89Zr-标记的CD8微抗体、89Zr-Df-IAB22M2C时，在4微米厚的截面中最低检测水平对应于约400个细胞/mm2。在一些实施方式中，检测截止下限为约100,000个细胞/mm3的细胞密度。在一些实施方式中，将400至12,000个细胞/mm2的CD8+T细胞密度成像，在该范围内的检测到的SUV大致呈线性增加。这对应于100,000个细胞/mm3至300万个细胞/mm3的范围，其可以针对CD8+T-细胞进行测量和检测。在一些实施方式中，在本发明的方法中检测到100,000个细胞/mm3或更少的细胞。本领域技术人员可以类似方式确定本发明的方法中使用的任一种试剂(以及使用的每个可检测标记物)的细胞密度计算。在一些实施方式中，这样的细胞密度测定为计算免疫评分和/或为制定和指导诊断、预后和/或治疗建议提供了有价值的工具。
根据某些实施方式，与抗原结合构建体相关联的放射性核素示踪剂(例如PET示踪剂)各自选自18F、89Zr、64Cu、68Ga、123I和99mTc。在一些实施方式中，第一、第二、和/或第三放射性核素示踪剂选自18F、64Cu和68Ga。在一些实施方式中，第一、第二、和/或第三放射性核素示踪剂各自是89Zr。在一些实施方式中，第一、第二、和/或第三放射性核素示踪剂是123I。在一些实施方式中，第一、第二、和/或第三放射性核素示踪剂是99mTc。在一些实施方式中，第一放射性核素示踪剂是18F、64Cu或68Ga且第二放射性核素示踪剂是18F或89Zr。在一些实施方式中，第一、第二、和/或第三放射性核素示踪剂中的每个是123I或99mTc。在一些实施方式中，第一放射性核素示踪剂为123I或99mTc，第二放射性核素示踪剂为123I或99mTc，其中第一和第二放射性核素示踪剂不同。
向受试者施用第一、第二和第三抗原结合构建体(例如PET示踪剂)的顺序可以是任何合适的顺序。在一些实施方式中，在施用第二抗原结合构建体之前进行施用第一抗原结合构建体。在一些实施方式中，在施用第二抗原结合构建体之后进行施用第一抗原结合构建体。在一些实施方式中，第一施用第一抗原结合构建体，第二施用第二抗原结合构建体，并且第三施用第三抗原结合构建体。在一些实施方式中，第二施用第一抗原结合构建体，第一施用第二抗原结合构建体，并且第三施用第三抗原结合构建体。在一些实施方式中，第三施用第一抗原结合构建体，第一施用第二抗原结合构建体，并且第二施用第三抗原结合构建体。在一些实施方式中，第三施用第一抗原结合构建体，第二施用第二抗原结合构建体，并且第一施用第三抗原结合构建体。在一些实施方式中，第一施用第一抗原结合构建体，第三施用第二抗原结合构建体，并且第二施用第三抗原结合构建体。
在一些实施方式中，向受试者施用第一、第二和第三抗原结合构建体(例如PET示踪剂)的顺序取决于可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)与每个抗原结合构建体相关。在一些实施方式中，向受试者施用第一、第二和第三抗原结合构建体(例如PET示踪剂)的顺序取决于与每个抗原结合构建体相关的放射性核素示踪剂的放射性半衰期。在一些实施方式中，第一施用的抗原结合构建体用18F、64Cu或68Ga标记。在一些实施方式中，第一施用的抗原结合构建体未用89Zr标记。在一些实施方式中，第一施用的抗原结合构建体用18F、64Cu或68Ga标记，且第二施用的抗原结合构建体用18F、64Cu或68Ga标记。在一些实施方式中，第一施用的抗原结合构建体用18F、64Cu或68Ga标记，且第二施用的抗原结合构建体用89Zr标记。
在本发明的任何方法中向受试者施用的抗原结合构建体的剂量可包括测量与使用PET或SPECT施用的抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)水平的任何适当量。在一些实施方式中，剂量包括用放射性核素示踪剂标记的抗原结合构建体，所述放射性核素示踪剂提供约0.5-3mCi+/-20％的辐射活性。在一些实施方式中，剂量包括用放射性核素示踪剂标记的抗原结合构建体，所述放射性核素示踪剂提供约0.5-3mCi+/-10％的辐射活性。在一些实施方式中，剂量包括用放射性核素示踪剂标记的抗原结合构建体，所述放射性核素示踪剂提供约0.5-3mCi+/-5％的辐射活性。在一些实施方式中，剂量中的辐射活性的量在0.5至3.6mCi之间，例如，0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8.1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5和3.6mCi，包括由上述任意两个值定义的任何量。在一些实施方式中，约3mCi的剂量允许在6、7、8、9、10、12、14、16、20、25、30、或36小时下、或在由上述任意两个时间定义的时间间隔内获得初始图像，加上在2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、或14天下、或在由上述任意两个天数定义的任何时间间隔内的第二图像，无需施用额外剂量。在一些实施方式中，使用0.2、0.5、0.75、1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10或更多mg的微抗体或抗原结合构建体将0.5、0.6、0.7、0.75、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3、或更多mCi的辐射施用给受试者。在一些实施方式中，约3mCi的剂量允许在6-36小时获得初始图像，加上3-10天(可能是14天)的第二图像，无需施用额外剂量。在一些实施方式中，特别是在使用高效PET扫描仪/检测器的情况下，约1.0mCi的施用剂量足以生成第一图像，并且任选地，在89Zr的情况下，第二图像可以在3-10天(可能是14天)生成，无需施用额外剂量。
在一些实施方式中，该方法包括施用约1mCi剂量的与抗原结合构建体相关的放射性核素示踪剂，例如89Zr。在一些实施方式中，该方法包括在施用约1mCi剂量的与抗原结合构建体相关的放射性核素示踪剂(例如89Zr)后对受试者成像；在施用后生成第一图像，并在初始成像后2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天，或由上述任意两个天数定义的任何间隔成像对象，以生成第二图像。在一些实施方式中，受试者可成像两次或多次，以在单次施用放射性核素标记的抗原结合构建体(多个)后，测量来自相同或不同放射性核素示踪剂的信号。在一些实施方式中，使用高效PET扫描仪/检测器对受试者成像，其中受试者在单次给药放射性核素标记的抗原结合构建体(例如89Zr标记的抗原结合构建体)后成像两次或多次。在一些实施方式中，特别是在使用高效PET扫描仪/检测器的情况下，约1.0mCi的施用剂量足以生成第一图像，并且任选地，在89Zr的情况下，第二图像可以在3-10天(可能是14天)生成，无需施用额外剂量。
在一些实施方式中，该剂量包括用可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)标记的抗原结合构建体，为0.2-10mg的抗原结合构建体。在一些实施方式中，该剂量包括用可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)标记的抗原结合构建体，为约0.1、0.2、0.5、1、2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5或20mg，或由上述任何两个值定义的范围内的抗原结合构建体。
向受试者施用任何抗原结合构建体与使用非侵入性成像(例如PET或SPECT)测量受试者中与施用的抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如放射性核素示踪剂)的水平之间的时间，可以是对受试者进行非侵入性成像(例如PET或SPECT)的任何合适时间间隔，以评估表达抗原结合构建体选择性结合靶标的细胞的分布和/或丰度。在一些情况下，选择的时间间隔考虑了用于标记抗原结合构建体的特定放射性核素示踪剂的放射性半衰期。在一些实施方式中，选择的时间间隔考虑了施用给受试者的抗原结合构建体的体内半衰期。
在一些实施方式中，测量受试者中的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在对受试者施用与可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)相关的抗原结合构建体的1小时内或多个小时，例如，2小时内或多个小时，3小时内或多个小时，4小时内或多个小时，5小时内或多个小时，6小时内或多个小时，8小时内或多个小时，10小时内或多个小时，12小时内或多个小时，18小时内或多个小时，24小时内或多个小时，2天内或多天，3天内或多天，4天内或多天，5天内或多天，6天内或多天，1周内或多周，包括2周内或多周完成。在一些实施方式中，测量受试者中的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在对受试者施用与可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)相关的抗原结合构建体的2周内或更少，例如，1周内或更少，6天内或更少，5天内或更少，4天内或更少，3天内或更少，2天内或更少，24小时内或更少，18小时内或更少，12小时内或更少，10小时内或更少，8小时内或更少，6小时内或更少，4小时内或更少，3小时内或更少，包括2小时内或更少完成。在一些实施方式中，测量受试者中的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在对受试者施用与可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)相关的抗原结合构建体的1小时至2周内，例如2小时至2周内、3小时至1周内、6小时至1周内、12小时至6天内、24小时至5天内，包括2天至5天内完成。在一些实施方式中，可检测标记物是快速衰减的放射性核素示踪剂(例如18F、64Cu、68Ga)，并且测量受试者中的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在对受试者施用与放射性核素示踪剂相关的抗原结合构建体的1小时内或更多，例如2小时内或更多，3小时内或更多，4小时内或更多，5小时内或更多，6小时内或更多，8小时内或更多，10小时内或更多，12小时内或更多，18小时内或更多，24小时内或更多，包括2天内或更多完成。
向受试者施用任何抗原结合构建体与向受试者施用任何其他一种抗原结合构建体之间的时间可以是用于对受试者进行非侵入性成像(例如PET或SPECT扫描)的任何合适的时间间隔，以评估表达抗原结合构建体选择性结合的靶标的细胞的分布和/或丰度。在某些情况下，选择的时间间隔考虑了用于标记不同抗原结合构建体的放射性核素示踪剂的放射性半衰期。在一些情况下，选择的时间间隔考虑了施用给受试者的不同抗原结合构建体的体内半衰期。在一些实施方式中，该方法包括进行第二扫描或成像以测量第一可检测标记物的水平，并施用第二抗原结合构建体以说明在测量与第二抗原结合构建体相关联的第二可检测标记物的水平时来自第一可检测标记物的残余信号。在一些实施方式中，在施用第二抗原结合构建体之前，在少于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12小时或在上述任意两个值定义的范围内的时间段内，对第一可检测标记物进行第二扫描或成像。
在一些实施方式中，对受试者施用抗原结合构建体在对受试者施用另一抗原结合构建体(例如，具有与第一抗原结合构建体不同的结合靶标的抗原结合构建体)的1小时内或多个小时，例如，2小时内或多个小时，3小时内或多个小时，4小时内或多个小时，5小时内或多个小时，6小时内或多个小时，8小时内或多个小时，10小时内或多个小时，12小时内或多个小时，18小时内或多个小时，24小时内或多个小时，2天内或多天，3天内或多天，4天内或多天，5天内或多天，6天内或多天，1周内或多周，包括2周内或多周完成。在一些实施方式中，向受试者施用抗原结合构建体在向受试者施用另一抗原结合构建体(例如，具有不同于第一抗原结合构建体的结合靶标的抗原结合构建体)的2周内或更少，例如，1周内或更少，6天内或更少，5天内或更少，4天内或更少，3天内或更少，2天内或更少，24小时内或更少，18小时内或更少，12小时内或更少，10小时内或更少，8小时内或更少，6小时内或更少，4小时内或更少，3小时内或更少，包括2小时内或更少完成。在一些实施方式中，向受试者施用抗原结合构建体在向受试者施用另一抗原结合构建体(例如，具有不同于第一抗原结合构建体的结合靶标的抗原结合构建体)的1小时至2周内，例如2小时至2周内、3小时至1周内、6小时至1周内、12小时至6天内、24小时至5天内，包括2天至5天内完成。
在某些实施方式中，在同一天施用不同的抗原结合构建体(例如，两种或多种具有不同结合靶标的抗原结合构建体)。在一些实施方式中，在同一天进行施用第一抗原结合构建体和施用不同于第一抗原结合构建体(例如，在靶标特异性方面不同于第一抗原结合构建体)的第二抗原结合构建体。在某些实施方式中，在不同天施用不同的抗原结合构建体(例如，两种或多种具有不同结合靶标的抗原结合构建体)。在一些实施方式中，在同一天进行施用第一抗原结合构建体和施用不同于第一抗原结合构建体(例如，具有不同于第一抗原结合构建体的结合靶标)的第二抗原结合构建体。
向受试者施用抗原结合构建体和测量与不同的抗原结合构建体(例如，具有不同于第一抗原结合构建体的结合靶标)相关的可检测标记物(例如放射性核素示踪剂)的水平之间的时间，可以是对受试者进行非侵入性成像(例如PET或SPECT)的任何合适时间间隔，以评估表达抗原结合构建体选择性结合的靶标的细胞的分布和/或丰度。在某些情况下，选择的时间间隔考虑了用于标记不同抗原结合构建体的放射性核素示踪剂的放射性半衰期。在一些情况下，选择的时间间隔考虑了施用给受试者的不同抗原结合构建体的体内半衰期。
在一些实施方式中，测量与抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在施用不同抗原结合构建体(例如，具有与其水平被测量的标签相关的第一抗原结合构建体不同的结合靶标)的1小时内或多个小时，例如，2小时内或多个小时，3小时内或多个小时，4小时内或多个小时，5小时内或多个小时，6小时内或多个小时，8小时内或多个小时，10小时内或多个小时，12小时内或多个小时，18小时内或多个小时，24小时内或多个小时，2天内或多天，3天内或多天，4天内或多天，5天内或多天，6天内或多天，1周内或多周，包括2周内或多周完成。在一些实施方式中，测量与抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在施用不同抗原结合构建体(例如，具有与其水平被测量的标签相关的第一抗原结合构建体不同的结合靶标)的2周内或更少，例如，1周内或更少，6天内或更少，5天内或更少，4天内或更少，3天内或更少，2天内或更少，24小时内或更少，18小时内或更少，12小时内或更少，10小时内或更少，8小时内或更少，6小时内或更少，4小时内或更少，3小时内或更少，包括2小时内或更少完成。在一些实施方式中，测量与抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在施用不同抗原结合构建体(例如，具有与其水平被测量的标签相关的第一抗原结合构建体不同的结合靶标)的1小时至2周内，例如2小时至2周内、3小时至1周内、6小时至1周内、12小时至6天内、24小时至5天内，包括2天至5天内完成。
在一些实施方式中，测量与抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在施用不同抗原结合构建体(例如，具有不同于其可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)正被测量的抗原结合构建体的结合靶标的结合靶标的抗原结合构建体)的同一天进行。在一些实施方式中，测量与抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平在施用不同抗原结合构建体(例如，具有不同于其可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)正被测量的抗原结合构建体的结合靶标的结合靶标的抗原结合构建体)的不同天进行。
关于图4，描述了根据本发明的一些实施方式，显示成像对象的方法的示意图。在第1天，可向受试者施用用放射性核素示踪剂(如18F)标记的抗原结合构建体(例如，微抗体(“Mb”)或cys-二体抗体(“CysDb”))。抗原结合构建体可选择性结合靶标(例如，CD3、CD4或CD8)。在施用抗原结合构建体的约6小时内，例如，在约5小时内、约4小时内、约3小时内、约2小时内，包括约1小时内，可使用PET扫描对受试者成像，以测量受试者身体不同部位的放射性水平。测量的放射性水平可与放射性核素示踪剂的浓度有关，因此与放射性核素示踪剂相关的抗原结合构建体的结合靶标的浓度有关。通过PET扫描，可以使用任何合适的方法来评估表达靶标的细胞的分布和/或丰度。在第2天，可向受试者施用第二抗原结合构建体(例如，微抗体(“Mb”)或cys-二体抗体(“CysDb”)，其用第二放射性核素示踪剂(例如18F)标记且选择性结合与第1天的靶标不同的另一靶标(例如CD3、CD4或CD8)。在施用第二抗原结合构建体的约6小时内，例如，在约5小时内、约4小时内、约3小时内、约2小时内，包括约1小时内，可使用PET扫描对受试者成像，以测量受试者身体内的放射性水平。测量的放射性水平可与第二放射性核素示踪剂的浓度有关，因此与第二放射性核素示踪剂相关的第二抗原结合构建体的结合靶标的浓度有关。通过PET扫描，可以使用任何合适的方法来评估表达第二靶标的细胞的分布和/或丰度。第一和第二扫描的比较可以提供受试者身体的组织和其他部位的免疫环境。在一些实施方式中，免疫环境可以在结合第一和第二扫描的图像中表示。第1天和第2天可能是相隔1天或多天，例如，2天或多天，3天或多天，4天或多天，包括5天或多天。
关于图5，描述了根据本发明的一些实施方式，显示成像对象的方法的示意图。在第1天，可向受试者施用用放射性核素示踪剂(如18F、64Cu或68Ga)标记的抗原结合构建体(例如，微抗体(“Mb”)或cys-二体抗体(“CysDb”))。抗原结合构建体可选择性结合靶标(例如，CD3、CD4或CD8)。在施用抗原结合构建体的约6小时内，例如，在约5小时内、约4小时内、约3小时内、约2小时内，包括约1小时内，可使用PET扫描对受试者成像，以测量受试者身体不同部位的放射性水平。放射性水平可与放射性核素示踪剂的浓度有关，因此与放射性核素示踪剂相关的抗原结合构建体的结合靶标的浓度有关。通过PET扫描，可以使用任何合适的方法来评估表达靶标的细胞的分布和/或丰度。仍在第1天，可向受试者施用第二抗原结合构建体(例如，微抗体(“Mb”)或cys-二体抗体(“CysDb”)，其用第二放射性核素示踪剂(例如89Zr)标记且选择性结合与第一靶标不同的另一靶标(例如CD3、CD4或CD8)。在第2天，其可为向受试者施用第二抗原结合构建体后的12至48小时，可使用PET扫描对受试者成像，以测量受试者体内的放射性水平。测量的放射性水平可与第二放射性核素示踪剂的浓度有关，因此与第二放射性核素示踪剂相关的第二抗原结合构建体的结合靶标的浓度有关。通过PET扫描，可以使用任何合适的方法来评估表达第二靶标的细胞的分布和/或丰度。第一和第二扫描的比较可以提供受试者身体的组织和其他部位的免疫环境。在一些实施方式中，免疫环境可以在结合第一和第二扫描的图像中表示。第1天和第2天可能是相隔1天或多天，例如，2天或多天，3天或多天，4天或多天，包括5天或多天。
关于图6，描述了根据本发明的一些实施方式，显示成像对象的方法的示意图。可向受试者施用用放射性核素示踪剂(如123I)标记的抗原结合构建体(例如，微抗体(“Mb”)或cys-二体抗体(“CysDb”))。抗原结合构建体可选择性结合靶标(例如，CD3、CD4或CD8)。在同一天，可向受试者施用第二抗原结合构建体(例如，微抗体(“Mb”)或cys-二体抗体(“CysDb”)，其用第二放射性核素示踪剂(例如99mTc)标记且选择性结合与第一靶标不同的另一靶标(例如CD3、CD4或CD8)。仍在第1天，可以使用SPECT扫描对受试者进行成像，以测量受试者身体不同部位的放射性水平。SPECT扫描仪能量窗口可被配置为优先检测来自第一放射性核素示踪剂(例如123I)的放射性。该放射性可与第一放射性核素示踪剂的浓度有关，因此与第一放射性核素示踪剂相关的第一抗原结合构建体的结合靶标的浓度有关。通过SPECT扫描，可以使用任何合适的方法来评估表达第一靶标的细胞的分布和/或丰度。在SPECT扫描仪能量窗口后，可扫描受试者以优先检测来自第一放射性核素示踪剂的放射性。测量的放射性水平可与第二放射性核素示踪剂的浓度有关，因此与第二放射性核素示踪剂相关的第二抗原结合构建体的结合靶标的浓度有关。通过SPECT扫描，可以使用任何合适的方法来评估表达第二靶标的细胞的分布和/或丰度。第一和第二扫描的比较可以提供受试者身体的组织和其他部位的免疫环境。在一些实施方式中，免疫环境可以在结合第一和第二扫描的图像中表示。
在一些实施方式中，共同施用、同时施用或以紧密顺序施用(例如在同一门诊就诊期间)第一和第二抗原结合构建体(每一个都具有PET可检测的不同放射性核素示踪剂，并且每一个选择性地结合到不同的靶标(例如CD3、CD4或CD8))。可选择放射性核素示踪剂以通过放射性半衰期进行区分。受试者可以成像两次，例如首先使用PET以生成识别两个靶标的第一图像，然后在第一放射性核素示踪剂已衰减且不再可检测或不显著后，仅识别第二试剂。第一成像可在共同施用抗原结合构建体后，在1小时至3天内进行，例如，在1小时至2天内、在1小时至1天内、在1至18小时内、在1至12小时内、在1至10小时内、在1至8小时内，包括在2至6小时内。第二成像可以在第一成像后进行，并且在第一放射性核素示踪剂已衰减到可忽略的水平后进行。第二成像可在20小时至2周内进行，例如，在共同施用抗原结合构建体后的20小时至1周内、20小时至5天内、20小时至4天内、20小时至3天内，包括1至2天内。在一些实施方式中，从第一图像中视觉或算法地减去第二图像，以提供两个不同靶标的不同图像。在某些实施方式中，第一放射性核素示踪剂具有比第二放射性核素示踪剂更高的放射发射强度，使得在PET扫描窗口期间，第一图像仅代表第一靶标。在第一放射性标签衰减之后的第二成像扫描可生成表示与第二靶标相关联的信号的第二图像。在一些实施方式中，与选择性结合不同于第一和第二靶的第三靶标的抗原结合构建体相关联的第三放射性核素示踪剂可与第一和第二抗原结合构建体共同施用/同时施用，并且可以使用第三成像扫描以与所述类似的方式区分来自第三放射性核素示踪剂的信号。
在一些实施方式中，本发明的方法包括组合两种或多种，或三种抗原结合构建体(其中每种抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4或CD8的靶标，其中抗原结合构建体彼此结合不同的靶标)到适合施用于将通过PET或SPECT成像的受试者的组合物中，如本文所述。如本文所述，可选择与组合物中的抗原结合构建体相关联的放射性核素示踪剂的组合，使得通过PET或SPECT测量的每个放射性核素示踪剂的信号是可区分的。在一些实施方式中，本发明的方法包括确定组织中免疫细胞的功能活性。组织中免疫细胞的功能活性可使用任何合适的手段确定。在一些实施方式中，使用对IFN-γ或颗粒酶B特异性的成像剂施用的受试者的非侵入性成像(如PET或SPECT)测量免疫细胞功能活性。可使用对IFN-γ或颗粒酶B特异性的任何合适的成像剂。适用于IFN-γ的成像剂如在例如，Gibson等人，CancerRes.2018 Oct 1；78(19):5706-5717中所述。描述了颗粒酶B的合适成像剂，例如，在Larimer等人，Cancer Res.2017年5月1日；77(9):2318-2327中。可包括组织中免疫细胞的功能活性作为组织免疫环境的一部分。对受试者进行组织中免疫细胞的功能活性成像可在对受试者进行组织中免疫细胞类型的分布和/或丰度成像之前、同时或之后进行。
在一些实施方式中，本发明的方法包括确定组织的功能环境。可以使用任何合适的手段来确定组织的功能环境。在一些实施方式中，使用使用PD-1、PD-L1或TGFp专用成像剂或FDG-PET成像剂施用的受试者的非侵入性成像(例如PET或SPECT)测量组织的功能环境。可使用PD-1、PD-L1或TGFP专用的任何合适的成像剂。描述了适用于PD-1和PD-L1的成像剂，例如，在Niemeijer等人，Nat Commun.2018Nov 7；9(1):4664；Lv等人,J NuclMed.2019Jun 28.pii:jnumed.119.226712.doi:10.2967/Jnumed.119.226712中描述的。描述了用于TGFP的合适成像剂，例如，在den Hollander等人,J Nucl Med.2015Sep；56(9):1310-4中描述的。对受试者进行组织的功能环境成像可在对受试者进行组织中免疫细胞类型的分布和/或丰度成像之前、同时或之后进行。
在其中寻找组织的免疫环境的任何合适组织中，可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平，可使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)进行测量。组织可以是但不限于肺、肝、结肠、肠、胃、心脏、脑、肾、脾、胰腺、食管、淋巴结、骨、骨髓、前列腺、宫颈、卵巢、乳腺、尿道、膀胱、皮肤、颈部、关节或其部分。在一些实施方式中，非侵入性成像(例如，PET或SPECT)扫描在基本上受试者的全身进行。在一些实施方式中，可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的水平，使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)在基本上受试者的全身进行测量。
使用本发明的非侵入性成像方法确定的受试者中的靶标(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞和IFN-γ)的分布可包括细胞的空间分布和/或时间分布。在一些实施方式中，如本文所述，空间分布可通过扫描已施用抗原结合构建体的受试者来确定。在一些实施方式中，细胞的时间分布可通过比较如本文所述在第一时间点使用非侵入性成像方法的受试者中靶标(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞和IFN-γ)的空间分布或丰度与如本文所述在第二时间点使用非侵入性成像方法的受试者中相应靶标CD8+、CD4+和CD3+细胞和IFN-γ的空间分布或丰度来确定。在一些实施方式中，细胞的时间分布可通过在一次施用可检测标记的(例如，放射性核素标记的)抗原结合构建体后在两个或多个时间点对受试者成像来确定。随着时间的推移，细胞的空间分布或丰度的变化(或缺乏变化)可能有助于免疫环境(例如，免疫评分)。在一些实施方式中，使用本发明方法确定的免疫环境包括受试者中靶标(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞和IFN-γ)分布的持续性或随时间的变化。
可以任何适当的时间间隔监测受试者中的靶标(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞和IFN-γ)的时间分布。在一些实施方式中，监测受试者中靶标(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞)的时间分布的时间间隔为1天或更多，例如，2天或更多、3天或更多、5天或更多、1周或更多、2周或更多、3周或更多、4周或更多、2个月或更多、3个月或更多、6个月或更多、包括1年或更多。在一些实施方式中，监测受试者中靶标(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞)的时间分布的时间间隔为1天至1年，例如，1天至6个月、1天至3个月、1天至2个月、2天至4周、2天至3周、3天至2周，包括3天至1周。上述也可以使用IFN-γ作为替代物或添加物(使用与其他标记物相同的变化)进行应用。在一些实施方式中，监测受试者中靶标(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞和IFN-γ)的时间分布的时间间隔与患者的临床表现有关或根据患者的临床表现确定。在一些实施方式中，监测受试者中靶标(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞和IFN-γ)的时间分布的时间间隔与治疗周期有关，例如，在1个或多个治疗周期之后的成像时间段。在一些实施方式中，靶标是IFN-γ，且可检测标记物是快速衰减的放射性核素示踪剂(例如18F、64Cu、68Ga)，其中测量受试者中可检测标记物的水平是在给受试者施用与放射性核素示踪剂相关的抗原结合构建体的0.5-1小时、1-2小时、2-3小时、3-4小时、4-5小时、5-6小时、6-8小时、8-12小时或12-16小时内完成，然后在施用用于相同或不同靶标的第一抗原结合构建体后，对受试者进行24小时、48小时、3天、1周或更多、或在由上述任意两个值定义的范围内的任何时间段的成像，如本文所公开的。在一些实施方式中，第二成像是使用用可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)标记的第二抗原结合构建体对CD3、CD4、CD8或IFN-γ来完成的。
本文还提供了使用本文所述的非侵入性成像方法治疗和/或诊断受试者的方法，以获得需要治疗的受试者中的组织的免疫环境。在某些实施方式中，使用本发明的成像方法确定的免疫环境可提供给受试者或医生，以作出关于诊断、预后、预后和/或治疗受试者可能患有的疾病的决定。参考图2，描述了治疗受试者的方法200的实现。该方法可包括向患有疾病的受试者施用包含第一可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的第一抗原结合构建体210。抗原结合构建体可选择性结合第一靶标，例如免疫细胞标记物。在一些实施方式中，第一靶标可能是CD3、CD4、CD8、和/或IFN-γ中的一个。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性结合到靶的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性地结合到靶标的微抗体或cys-二体抗体。
然后，使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)对受试者成像以获取表达受试者的一个或多个组织中的第一靶标的细胞的分布220。表达由标记有放射性核素示踪剂(例如PET示踪剂)的抗原结合构建体选择性结合的靶标的细胞的分布可使用任何合适的方法从PET或SPECT成像获得。如上所述，表达受试者的一个或多个组织中的第一靶标的细胞的分布或丰度可以使用PET或SPECT来评估，以测量受试者中的放射性核素示踪剂的水平(例如，来自放射性核素示踪剂的放射性信号的水平)。
该方法还可包括向受试者施用包含第二可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的第二抗原结合构建体230。第二抗原结合构建体可选择性结合第二靶标，例如免疫细胞标记物，其中第二靶标不同于第一靶标。在一些实施方式中，第二靶标可以是CD3、CD4和CD8中的一个，其中第二靶标不同于第一靶标。在一些实施方式中，当第一靶标是CD3时，第二靶标可以是CD4或CD8。在某些实施方式中，当第一靶标是CD4时，第二靶标可能是CD8。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性结合到靶标的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性地结合到靶标的微抗体或cys-二体抗体。然后，使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)对受试者成像以获取表达受试者的一个或多个组织中的第二靶标的细胞的分布240。上述也可以使用IFN-γ作为替代物或添加物(使用与其他标记物相同的变化)进行应用。
在一些实施方式中，该方法包括向受试者施用包含第三可检测标记物(如放射性核素示踪剂(例如PET示踪剂))的第三抗原结合构建体。第三抗原结合构建体可选择性结合选自CD3、CD4、和CD8的第三靶标(例如免疫细胞标记物)，其可能不同于第一或第二靶标。在一些实施方式中，抗原结合构建体是选择性结合到靶标的抗体或其抗原结合片段。然后，使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)评估受试者的一个或多个组织中表达第三靶标的细胞的分布或丰度以测量受试者中的第三放射性核素信号。上述也可以使用IFN-γ作为替代物或添加物(使用与其他标记物相同的变化)进行应用。
在一些实施方式中，该方法包括基于表达靶标的细胞的分布生成图像，其中该图像可提供一个或多个组织的免疫环境，如本文所述。
表达第一和第二靶标的细胞在组织中的分布可用于确定组织的免疫环境250。在一些实施方式中，表达第一、第二和第三靶标的细胞在组织中的分布可用于确定组织的免疫环境250。
基于免疫环境，可对受试者施用治疗260。该治疗可以是基于所确定的免疫环境来治疗疾病的任何合适的治疗。治疗可以是免疫疗法，或者其可以是化学疗法、激素疗法、放射疗法、疫苗(包括瘤内疫苗疗法)、溶瘤病毒疗法、手术或细胞疗法。
或者，或除了施用治疗外，还可以生成报告，其中报告提供基于本文所述的成像方法确定的免疫环境。在一些实施方式中，报告可包括关于受试者的任何其他临床相关信息，包括其他非侵入性测试、活检、生物标记物测试等的结果和/或分析。在一些实施方式中，报告可包括基于确定的免疫环境和/或其他临床相关信息的免疫评分。在一些实施方式中，报告可能包括基于免疫环境对受试者的诊断和/或预后，以及任选地，任何其他相关临床信息。在一些实施方式中，报告可能包括根据免疫环境对受试者的建议治疗，以及任选地，任何其他相关临床信息。
本发明的方法可用于治疗或诊断任何合适的疾病或病况，其中相关组织中的免疫环境提供诊断/预后价值，或与治疗结果相关。受试者可能患有疾病，例如但不限于癌症、自身免疫疾病或传染病。受试者可能患有病况，例如对影响免疫系统的治疗(如免疫疗法)的响应或反应。合适的免疫疗法包括但不限于细胞修饰疗法和过继性细胞疗法，如CAR-T，或其他疗法，如化学疗法、癌症疫苗(包括瘤内疫苗)或放射疗法(包括旨在诱导远位作用的放射疗法)。在一些实施方式中，本文公开的方法可用于识别与免疫疗法相关的不良事件，如关节炎(Smith和Bass(2019)arthritis Care Res(Hoboken).Mar；71(3):362-366)或心脏毒性(Asnani(2018)Curr Oncol Rep.Apr 11；20(6):44)。本发明的方法可用于临床试验，以确定患者是否对治疗有反应(积极或消极)，或者疾病或病况是否正在进展。在一些实施方式中，受试者被诊断患有癌症、自身免疫疾病或传染病。癌症可能是实体瘤，也可能是非实体瘤。自身免疫疾病可包括但不限于，关节炎、移植排斥、移植物抗宿主病、狼疮、多发性硬化、1型糖尿病等。传染病可能包括但不限于，病毒、细菌或真菌感染。
在一些实施方式中，受试者患有癌症，或已被诊断患有癌症。在一些实施方式中，受试者患有肺癌、肝癌、结肠癌、肠癌、胃癌、脑癌、肾癌、脾癌、胰腺癌、食道癌、淋巴结癌、骨癌、骨髓癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌、尿道癌、膀胱癌、皮肤癌或颈部癌。在一些实施方式中，受试者患有黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)或肾细胞癌(RCC)。在一些实施方式中，受试者患有实体瘤。
在一些实施方式中，一种治疗或诊断受试者的方法包括基于通过PET或SPECT获得的表达靶标的细胞的分布，通过评估肿瘤核和/或侵入性边缘中的CD3+细胞、CD4+细胞和/或CD8+细胞的密度来确定肿瘤的免疫环境。在一些实施方式中，确定免疫环境，包括肿瘤核和/或侵入性边缘中的CD4+细胞和CD8+细胞的评估的密度。在一些实施方式中，确定免疫环境，包括肿瘤核和/或侵入性边缘中的CD3+细胞和CD8+细胞的评估的密度。在一些实施方式中，确定免疫环境，包括肿瘤核和/或侵入性边缘中的CD4+细胞和CD3+细胞的评估的密度。上述也可以使用IFN-γ作为替代物或添加物(使用与其他标记物相同的变化)进行应用。
在一些实施方式中，在受试者身体内的感兴趣的区域(ROI)中表达CD3、CD4或CD8的细胞的丰度或密度基于可检测标记物的测量的信号水平(例如，来自与在ROI中分别对CD3、CD4、IFN-γ或CD8特异的抗原结合构建体相关的放射性核素示踪剂的放射性)进行评估，如本文所述。在一些实施方式中，该方法包括基于与组织中分别对CD3、CD4、IFN-γ或CD8特异的抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的测量的放射性水平确定受试者的组织(如肿瘤、组织、器官或其他解剖区域)是否富集或耗尽表达CD3、CD4、IFN-γ或CD8的细胞。在一些实施方式中，该方法包括使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)基于与选择性结合组织中的其他两个靶标的抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的测量水平确定受试者的组织是否富集或耗尽表达选自CD3、CD4、IFN-γ或CD8的靶标的细胞。在一些实施方式中，组织中表达CD3的细胞的富集或耗尽是基于使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD4的细胞的评估密度或丰度之和，以及使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD8的细胞的评估密度或丰度确定的。在一些实施方式中，组织中表达CD4的细胞的富集或耗尽是基于使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD3的细胞的评估密度或丰度之间的差，以及使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD8的细胞的评估密度或丰度确定的。在一些实施方式中，组织中表达CD8的细胞的富集或耗尽是基于使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD3的细胞的评估密度或丰度之间的差，以及使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)的表达CD4的细胞的评估密度或丰度确定的。
根据本发明确定的肿瘤、组织、器官或解剖区域的免疫环境可指示受试者将或不会受益于针对疾病或病况(例如肿瘤)的特定治疗的可能性。在一些实施方式中，当肿瘤核和/或侵入性边缘富集CD3+细胞和CD8+细胞；富集CD3+细胞和CD4+细胞；或富集CD4+细胞和CD8+细胞；耗尽CD8+细胞和富集CD4+细胞或耗尽CD4+细胞和富集CD8+细胞时，免疫环境提供良好的预后(例如，更长的无疾病生存期、更长的总生存期或低的复发几率)。在一些实施方式中，当免疫环境表明良好预后(例如，更长的无疾病生存期、更长的总生存期或低的复发几率)时，受试者可能不接受治疗。在一些实施方式中，当肿瘤核和/或侵入性边缘富集IFN-γ时，免疫环境提供良好预后(例如，更长的无疾病生存期、更长的无进展生存期、更长的总生存期、改进的生活质量或低的复发几率)。在一些实施方式中，当免疫环境表明良好预后(例如，更长的无疾病生存期、更长的总生存期或低的复发几率)时，在受试者接受癌症初始治疗(例如，肿瘤手术切除)后，可能不会对受试者施用辅助疗法。
在一些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为富集CD8+细胞，当评估密度为50个细胞/mm2或更多，例如，100个细胞/mm2或更多、150个细胞/mm2或更多、200个细胞/mm2或更多、250个细胞/mm2或更多、300个细胞/mm2或更多、350个细胞/mm2或更多、400个细胞/mm2或更多、500个细胞/mm2或更多、750个细胞/mm2或更多、包括1000个细胞/mm2或更多时。在一些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为耗尽CD8+细胞，当评估密度为500个细胞/mm2或更少，例如，450个细胞/mm2或更少、400个细胞/mm2或更少、350个细胞/mm2或更少、300个细胞/mm2或更少、250个细胞/mm2或更少、200个细胞/mm2或更少、150个细胞/mm2或更少、100个细胞/mm2或更少、包括50个细胞/mm2或更少时。在某些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为耗尽CD4+细胞，当评估密度为500个细胞/mm2或更少，例如，450个细胞/mm2或更少、400个细胞/mm2或更少、350个细胞/mm2或更少、300个细胞/mm2或更少、250个细胞/mm2或更少、200个细胞/mm2或更少、150个细胞/mm2或更少、100个细胞/mm2或更少、包括50个细胞/mm2或更少时。在一些实施方式中，确定肿瘤的核和/或侵入性边缘富集：CD4+细胞，当评估密度为50个细胞/mm2或更多，例如，100个细胞/mm2或更多、150个细胞/mm2或更多、200个细胞/mm2或更多、250个细胞/mm2或更多、300个细胞/mm2或更多、350个细胞/mm2或更多、400个细胞/mm2或更多、500个细胞/mm2或更多、750个细胞/mm2或更多、包括1000个细胞/mm2或更多时。在一些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为富集CD3+细胞，当评估密度为50个细胞/mm2或更多，例如，100个细胞/mm2或更多、150个细胞/mm2或更多、200个细胞/mm2或更多、250个细胞/mm2或更多、300个细胞/mm2或更多、350个细胞/mm2或更多、400个细胞/mm2或更多、500个细胞/mm2或更多、750个细胞/mm2或更多、1000个细胞/mm2或更多，包括2000个细胞/mm2或更多时。
应理解，本文根据二维(2D)面积(例如，细胞/mm2)列出的密度测量对应于通过免疫组织化学(IHC)分析肿瘤活检切片的历史方法。本发明中设想的成像技术(例如PET和SPECT)可以通过测量三维(3D)体积中的密度来提供改进的密度评估。本文中使用的细胞密度可基于体积(例如，细胞/mm3)表示，并可建立与IHC结果的相关性，使得在改进的3D分析中应用历史数据。作为参考，标准IHC技术的2D活检评估中使用的活检组织样本通常为4-50微米厚，常常为20-30微米厚。可以从气候提供IHC组织样本厚度的2D密度生成3D密度的评估。其中密度在本文以2D术语(例如，细胞/mm2)报告以允许与2D IHC数据进行比较，应理解密度测量可包括3D中的细胞密度的相应测量。
在一些实施方式中，免疫环境提供良好预后(例如，更长的无疾病生存期、更长的总生存期或低的复发几率)，当肿瘤中的CD4+细胞与CD8+细胞的评估比例高于阈值；CD8+细胞与CD4+细胞的评估比例高于阈值；CD4+细胞与CD3+细胞的评估比例高于阈值和/或CD8+细胞与CD3+细胞的评估比例高于阈值时。在一些实施方式中，CD4+细胞与CD8+细胞的阈值比例为约0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100或约1,000。在一些实施方式中，CD8+细胞与CD4+细胞的阈值比例为约0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100、或约1,000。在一些实施方式中，CD4+细胞与CD3+细胞的阈值比例为约0.0001、0.001、0.01、0.1、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、或约100。在一些实施方式中，CD8+细胞与CD3+细胞的阈值比例为约0.0001、0.001、0.01、0.1、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、或约100。
在一些实施方式中，当免疫环境表明不良预后(例如，更短的无疾病生存期、更短的总生存期或高的复发几率)时，受试者可接受治疗。在一些实施方式中，当免疫环境表明不良预后(例如，更短的无疾病生存期、更短的总生存期、高的复发几率)时，受试者可在癌症初始治疗(例如，肿瘤的手术切除)后接受辅助治疗。
在一些实施方式中，当肿瘤核和/或侵入性边缘耗尽CD3+细胞和CD8+细胞；耗尽CD3+细胞和CD4+细胞；富集CD4+细胞和耗尽CD8+细胞；耗尽CD4+细胞和富集CD8+细胞；或耗尽CD8+细胞和CD4+细胞时，免疫环境提供不良预后(例如，更短的无疾病生存期、更短的总生存期或高的复发几率)。在一些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为耗尽CD8+细胞，当评估密度为500个细胞/mm2或更少，例如，450个细胞/mm2或更少、400个细胞/mm2或更少、350个细胞/mm2或更少、300个细胞/mm2或更少、250个细胞/mm2或更少、200个细胞/mm2或更少、150个细胞/mm2或更少、100个细胞/mm2或更少、包括50个细胞/mm2或更少时。在一些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为富集CD8+细胞，当评估密度为50个细胞/mm2或更多，例如，100个细胞/mm2或更多、150个细胞/mm2或更多、200个细胞/mm2或更多、250个细胞/mm2或更多、300个细胞/mm2或更多、350个细胞/mm2或更多、400个细胞/mm2或更多、500个细胞/mm2或更多、750个细胞/mm2或更多、包括1000个细胞/mm2或更多时。在某些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为富集CD4+细胞，当评估密度为50个细胞/mm2或更多，例如，100个细胞/mm2或更多、150个细胞/mm2或更多、200个细胞/mm2或更多、250个细胞/mm2或更多、300个细胞/mm2或更多、350个细胞/mm2或更多、400个细胞/mm2或更多、500个细胞/mm2或更多、750个细胞/mm2或更多、包括1000个细胞/mm2或更多时。在某些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为耗尽CD4+细胞，当评估密度为500个细胞/mm2或更少，例如，450个细胞/mm2或更少、400个细胞/mm2或更少、350个细胞/mm2或更少、300个细胞/mm2或更少、250个细胞/mm2或更少、200个细胞/mm2或更少、150个细胞/mm2或更少、100个细胞/mm2或更少、包括50个细胞/mm2或更少时。在一些实施方式中，肿瘤核和/或侵入性边缘被确定为耗尽CD3+细胞，当评估密度为1000个细胞/mm2或更少，例如，500个细胞/mm2或更少、450个细胞/mm2或更少、400个细胞/mm2或更少、350个细胞/mm2或更少、300个细胞/mm2或更少、250个细胞/mm2或更少、200个细胞/mm2或更少、150个细胞/mm2或更少、100个细胞/mm2或更少、包括50个细胞/mm2或更少时。
在一些实施方式中，免疫环境提供不良预后(例如，更短的无疾病生存期、更短的总生存期或更高的复发几率)，当肿瘤中CD4+细胞与CD8+细胞的评估比例处于或低于阈值比例；和/或CD8+细胞与CD4+细胞的评估比例处于或低于；和/或CD4+细胞与CD3+细胞的评估比例处于或低于阈值比例；和/或CD8+细胞与CD3+细胞的评估比例处于或低于阈值比例时。在一些实施方式中，CD4+细胞与CD8+细胞的阈值比例为约0.01、0.1、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100、或约1,000。在一些实施方式中，CD8+细胞与CD4+细胞的阈值比例为约0.01、0.1、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100、或约1,000。在一些实施方式中，CD4+细胞与CD3+细胞的阈值比例为约0.0001、0.001、0.01、0.1、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、或约100。在一些实施方式中，CD8+细胞与CD3+细胞的阈值比例为约0.0001、0.001、0.01、0.1、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、或约100。
在一些实施方式中，本发明的成像方法可用于确定治疗对受疾病影响的组织的免疫环境的影响，并基于免疫环境对治疗的反应，确定是否继续治疗。在某些实施方式中，治疗受试者的方法包括使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)监测受试者的一个或多个组织中的表达选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的靶标的细胞的分布和受试者的一个或多个组织中的表达选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的不同靶标的细胞的另一分布。在一些实施方式中，表达不同于其他两个靶标的第三靶标的细胞的分布可使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)进行监测。监测可以使用本文所述的合适的非侵入性成像方法来进行。在一些实施方式中，监测包括给受试者施用包含可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合靶标；以及通过非侵入性成像(例如，PET或SPECT)对受试者成像，以获取表达靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布。不同细胞的分布可以提供组织的治疗前免疫环境。
然后，可基于组织(如肿瘤)的免疫环境和组织(如肿瘤)的免疫环境的变化中的一个或多个对受试者施用疾病的治疗。在治疗后，可通过使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)监测来确定组织的治疗后免疫环境，组织中表达不同靶标的细胞的分布。在一些实施方式中，治疗后监测包括给受试者施用包含可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)的抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合靶标；以及通过非侵入性成像(例如，PET或SPECT)对受试者成像，以获取表达靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布，如本文所述。不同细胞的分布可以提供组织(例如肿瘤)的治疗后免疫环境。
在一些实施方式中，可在治疗前后监测表达相同靶标的细胞的分布，以基于表达相同靶标集的细胞的分布的变化来确定免疫环境的变化。在一些实施方式中，治疗前监测的细胞可以是表达与治疗后监测的细胞表达的靶标不同的靶标集。
在某些实施方式中，基于根据本发明的方法确定的免疫环境向受试者施用的治疗可包括但不限于，免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、疫苗疗法(包括瘤内疫苗疗法)、溶瘤病毒疗法或细胞疗法中的一种或多种。基于通过本发明的方法确定的免疫环境受试者接受的治疗可包括但不限于，免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、疫苗疗法(包括瘤内疫苗疗法)、溶瘤病毒疗法或细胞疗法中的一种或多种。在一些实施方式中，基于根据本发明方法确定的免疫环境对受试者施用的辅助疗法可包括但不限于，免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、疫苗疗法(包括瘤内疫苗疗法)、溶瘤病毒疗法或细胞疗法中的一种或多种。
在一些实施方式中，基于免疫环境，本发明的方法不建议一种或多种疗法，不建议疗法的延续性，建议一种或多种额外疗法，或建议改变疗法。在一些实施方式中，本方法中提供的建议是根据基于传统侵入性技术(如活检和IHC)制定的建议推断出来的。
在某些实施方式中，本发明的方法包括测试受试者的体液中的一种或多种生物标记物，如血液、尿液、唾液、汗液、阴道液、精液等。在一些实施方式中，生物标记物是血液生物标记物。合适的生物标记物包括但不限于IL-6、C反应蛋白(CRP)、VEGF、纤连蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、可溶性CD25、NY-ESO-1抗体、IFN-γ、PD-Ll、肿瘤相关成纤维细胞(TAF)标记物、FAP/CD8(中性粒细胞/淋巴细胞比)、癌症相关纤维化标记物、肿瘤相关巨噬细胞标记物(例如，pan CD68；Ml CD86、CD169；M2 CD206、CD163)和趋化因子。合适的生物标记物还可通过例如，肿瘤和外周血的T细胞受体测序；通过肿瘤的靶向基因表达；或从患者血液中血沉棕黄层级分提取的RNA确定。合适的生物标记物包括但不限于TCR克隆性、TCR收敛、克隆扩展的其他评估和可变基因多态性(如TRBV多态性)的测量。某些生物标记物还可包括外周血中CD8+和CD4+细胞的频率或比率的变化。有关免疫疗法的合适的感兴趣的生物标记物，在例如，Spencer等人，(2016)e493 asco.org/edbook(2016ASCO(American Society ofClinical Oncology)EDUCATIONAL BOOK)中阐述。
在一些实施方式中，本发明的方法包括分析组织活检(例如，肿瘤活检)。活检可包括任何合适的检验，以确定例如，突变负荷、新抗原负荷、肿瘤样本的T细胞受体测序、肿瘤中的靶向基因表达、存在或不存在检查点或检查点配体、存在或不存在免疫抑制剂、炎性标记物、巨噬细胞分泌的化合物、髓源性抑制细胞分泌的化合物等。合适的检验包括但不限于高通量测序(例如，肿瘤基因组测序)或免疫组织化学。
在一些实施方式中，本发明的方法还包括基于如本文所述确定的组织免疫环境确定组织(例如肿瘤)的免疫评分。本发明的非侵入性成像方法可以替代使用组织活检和血清生物标记物生成免疫评分的方法，或者可以作为其补充。使用组织活检和血清生物标记物生成免疫评分已在例如Galon等人(2104)J Pathol 2014；232:199-209；和Blank等人，(2016)Science.Vol 352 Iss.6286at 358中描述。根据本发明的一些实施方式，免疫评分可通过测量感兴趣的组织中的一个或多个免疫细胞的密度非倾入性地确定。在一个实施方式中，预测不良预后的免疫环境被给予更低的免疫评分，且预测良好预后的免疫环境被给予更高的免疫评分。在另一实施方式中，低免疫评分被给予良好预后；高免疫评分被给予不利预后。(就本发明的目的而言，高免疫评分将被视为有利预后。)在一些实施方式中，免疫评分进一步考虑组织中免疫细胞的功能活性，如上所述。在一些实施方式中，免疫评分进一步考虑组织的功能环境，如上所述。在一些实施方式中，免疫评分进一步考虑受试者体液中存在或不存在生物标记物，如上所述。
本发明提供了非侵入性成像方法，其可以确定受试者中感兴趣区域(ROI)的免疫环境(例如，确定受试者的免疫评分)，从而诊断，提供预后，建议治疗选项和/或对受试者提供治疗。诊断、预后、建议和/或治疗可基于与受疾病或病况影响的组织、器官或解剖区域的免疫环境的任何合适的已知关系。在一些实施方式中，可将使用本发明方法确定的免疫环境与基于使用侵入性程序(例如，活检和免疫组织化学(IHC))的CD8+、CD4+和/或CD3+细胞和/或IFN-γ的测量的免疫环境进行比较。使用侵入性程序(例如，活检和IHC)测定的CD8+、CD4+和CD3+细胞和/或IFN-γ的任何组合之间的任何合适的丰度测量和/或比例，可用于分析使用本发明的非侵入性成像方法确定的免疫环境。
通常并且不受理论束缚，CD4表达可以代表辅助功能(树突状细胞的抗原呈递、CD4T细胞的T辅助功能和巨噬细胞的“微环境”功能)，而CD8表达可以代表效应器或细胞毒性功能(例如，CD8+T细胞和NK细胞的细胞杀伤和MI巨噬细胞的吞噬)。因此，测量CD3表达可以确定ROI中的T细胞计数，且CD4+/CD8+比可以提供免疫状态。在一些情况下，更多的CD8+/更少的CD4+可以提供更强的癌症治疗反应的可能性，取决于癌症和治疗。在一些情况下，CD8+的低丰度可提示良好预后和/或对自身免疫疾病治疗的反应。在一些情况下，CD4+的低丰度可提示良好预后和对自身免疫疾病治疗的反应。在一些情况下，CD4+的高丰度可提示良好预后和/或对自身免疫疾病治疗的反应。通常，肿瘤的免疫评分中的高CD3+细胞和高CD8+细胞/低或较低CD4+细胞与有利的诊断和对治疗的反应的可能性有关。CD3+/CD4+和CD3+/CD8+比可以特别提供有用信息，因为它们可以提供关于“免疫状态”的指导，例如，ROI处是否存在“高”或“低”效应器功能。在一些实施方式中，CD4+和CD8+细胞的比用于预测PD-1抑制剂或其他IOT的功效。在某些实施方式中，CD4+信号(高且持续)是有利于PDL-1和CTLA-4IOT疗法的指标。在一些情况下，CD8+信号可用于选择疗法并显示疗法诱导的肿瘤细胞杀伤。在一些实施方式中，持续和/或延长的CD4+信号的增加可以预测细胞杀伤效果，但如果CD4+信号下降，可以建议患者改变疗法。在一些实施方式中，IFN-γ+为癌症提供了有利预后。在一些实施方式中，IFN-γ+提供了对癌症治疗有更强反应的可能性，取决于癌症和疗法。本发明提供了可帮助开发改进的预测性免疫环境的方法(例如，CD8+、CD4+和CD3+细胞和/或IFN-γ的分布，丰度和/或比例)用于多种疾病、病况和治疗。
应认识到，本发明的某些特征，如“生成图像”或“确定免疫环境”等，可能涉及计算机化方法的应用，如放射组学。如本文所用，“放射组学”可指用于从放射医学图像中提取大量特征的计算机实现的过程。放射组学可允许识别一个或多个与疾病相关的特征(如放射组学特征)，这些特征在其他方面通过保健医生(如医生或成像技术人员)的目视检查无法识别。在某些实施方式中，本发明的方法可与放射组学结合使用，以增强疾病评估并识别意外的疾病状况和相关性。在某些实施方式中，本发明的方法可与放射组学结合使用以进行方法的一个或多个方面，监测/诊断/提供实体瘤以外的疾病和病况的预后(例如，以监测/诊断/提供非实体瘤、传染病、自身免疫病等的预后)
免疫细胞标记物的顺序和同步成像
对于本领域的技术人员来说，显而易见的是，本发明的方法，其非限制性实例如图1-3所示，可以通过按时间顺序(例如，在不同天)获取图像来实践，例如，如图4和5所示，或通过同时获取图像(例如，在同一天)来实践，例如，如图6所示。任何一个选项(顺序或同时)可由进行本发明的方法的用户选择，以获得免疫评分的诊断值。在一些实施方式中，免疫细胞标记物的顺序成像允许第一可检测标记物衰变并在将第二可检测标记物施用给患者之前从体内清除。在一些实施方式中，顺序成像允许对两个靶标使用相同的可检测标记物(例如，选自CD3、CD4、CD8、IFN-γ的任何两个靶标)，例如，但不限于89Zr的使用，并且可以使用相同的PET扫描仪生成两个图像。在一些实施方式中，在扫描事件之间提供足够的时间段，以允许第一标记物衰减，从而其不会干扰对第二标记物的成像。在一些实施方式中，在施用第二示踪剂之前，对第一示踪剂进行第二扫描，以允许从第一和第二示踪剂的组合示踪剂图像中从第二扫描中减去第一示踪剂图像。在一些实施方式中，对第一标记物成像是在与对第二标记物成像不同的患者就诊期间进行的。在一些实施方式中，组织疾病部位的免疫环境，和/或标记物信号形状和/或密度在就诊之间波动不大。在一些实施方式中，组织疾病部位的免疫环境，和/或标记物信号形状和/或密度在就诊之间显著波动。在一些实施方式中，对第一和第二就诊的图像的分析考虑了组织疾病部位的免疫环境的波动，和/或标记物信号形状和/或密度随时间的变化。
在一些实施方式中，同时成像减少患者就诊次数，并可在同一时间点(例如，同一天)对免疫细胞标记物提供评估。在一些实施方式中，为了实现同时成像，协调多个参数，包括但不限于试剂的施用时间、可检测标记物的选择以及现在进一步描述的其他参数。
同时成像的施用时间：在一些实施方式中，一个参数是成像剂或示踪剂在施用后在患者体内循环、分布和结合到其靶标的时间间隔。在通过正常的消除过程最终清除之前，每个试剂可能需要不同的时间来实现最佳的靶标结合。在一些实施方式中，CD8标记物结合成像剂为IAB22M2C，且成像发生在约12-48小时窗口、约15-40小时窗口、约20-36小时窗口、约20-30小时窗口或约24小时。在一些实施方式中，具有可检测标记物的CD8标记物结合成像剂可被检测为在优选窗口外特异性结合CD8细胞，例如在施用后的窗口2-20小时期间，或在另一侧，从30小时到7天或更长时间(例如，如果用89Zr标记并取决于施用的剂量和检测器灵敏度)。用于检测CD4、CD3、IFN-γ或其他标记物的成像剂可以具有24小时的相同时间间隔以实现最佳检测，或它们可能需要更短或更长的时间周期。在一些实施方式中，在使用同时成像的情况下，第一和第二成像剂在扫描之前的时间点施用，所选择的时间点允许在扫描事件的预计时间充分或最佳的靶标结合。在一些实施方式中，可以在不同的时间施用不同的成像剂，以在预定的时间进行扫描或成像。在一些实施方式中，用户可以找到令人满意的时间窗口以共同施用两种成像剂，从而减少患者就诊和住院时间。在一些实施方式中，共同施用的窗口为成像之前24小时。在一些实施方式中，共同施用的窗口为扫描或成像前的0.5-1小时、1-2小时、2-6小时、6-12小时、12-20小时、20-30小时或更长时间。
同时成像的可检测标记物的选择：在一些实施方式中，同时成像的一个参数是选择可通过所用扫描仪(多个)进行区分的可检测标记物。图6提供了使用两个可检测标记物123碘和99m Technicium的非限制性实例，其可通过γ辐射的能量来区分。123碘在159keV下发射最大辐射。99m Technicium发射140keV的伽马辐射。通过调整γ检测器上的滤波器/准直，单个扫描仪可以有效区分123I与99mTc结合，从而同时区分这些标签附着的免疫系统的各个组分。如下表1所示，在一些实施方式中，诸如123I-CD8-微抗体和99mTc-CD4-微抗体的成像剂可以通过这种方式单独成像。本领域技术人员将理解，在此上下文中“同时”是指在相同的患者扫描过程中，这可能包括在不同的检测器滤波器在适当位置的相同的伽马检测器设备中连续进行两次扫描。
可使用多种可检测标记物对或组，其可在常见的扫描仪上同时检测。常见的扫描仪可选自PET、CT、MRI、SPECT、光学/发光成像(包括荧光成像或切伦科夫成像)、热成像(包括近红外)、声共振和光声共振。许多卫生诊所采用临床PET系统，该系统是PET和计算机断层扫描(CT)系统的组合，集成了两种模式的优点。另一个系统使用PET和MRI(磁共振成像)的结合。MRI模式提供了比CT甚至更高的分辨率和软组织对比度，允许功能成像，而不会对患者造成任何额外的辐射负担。在一些实施方式中，这两种模式分别用于识别同一组织疾病部位的不同方面，即是否存在两种或多个免疫细胞标记物。读者将理解，当使用两个不同的设备来检测可检测标记物时，例如PET扫描和光学染料扫描仪，“同时”可以包括受试者在设备之间转换的时间段，并且为第二扫描过程做好准备。
在一些实施方式中，MRI用于检测MRI造影剂或增强剂，它们是与特定抗原结合构建体结合的可检测标记物。在一些实施方式中，MRI造影剂是基于钆(Gd)或锰(Mn)的造影剂(例如Gd螯合物或Mn螯合物)。在一些实施方式中，CT扫描仪用于检测吸收X射线传输的标记物。在一些实施方式中，PET用于识别不同抗原结合靶标上的PET可检测标记物。在一些实施方式中，适用于本方法的成像选项包括但不限于SPECT、光学/发光成像(包括荧光成像或切伦科夫成像)、热成像(包括近红外)、声共振和光声共振。
在一些实施方式中，本方法中使用的标记物的组合基于仪器和/或化学兼容性。本领域技术人员将能够识别和评估合适的标记物组合。本方法中使用的靶标、可检测标记物和成像选项的合适、非限制性组合如表1所示。
表1：同时成像表
在一些实施方式中，如果可检测标记物是放射性核素或其他可检测标记物，其在扫描之前的施用期间基本上衰减，则可调整(例如，增加或减少)可检测标记物的施用量，以提供可检测标记物的信号水平，该信号水平足以在扫描的随后时间点成像。在一些实施方式中，向人类受试者提供在0.5至3.6毫居范围内的成像剂，例如，放射性核素标记的抗原结合构建体，例如89Zr-CD8-微抗体，其适合在施用后的20-30小时的时间窗口内检测。在一些实施方式中，可检测标记物(例如，放射性核素，如18F)以8毫居施用。在一些实施方式中，调整(例如，增加或减少)可检测标记物(如18F)的剂量，取决于所需的分布和循环时间。在一些实施方式中，18F的剂量增加，因为它的半衰期只有109.7分钟。
可施用任何适当量的每种靶向剂。本领域技术人员熟悉可在一些实施方式中用于确定要施用的最佳药剂量的多个递增剂量试验。在一些实施方式中，89Zr-CD8-微抗体在约0.5mg至约10mg的蛋白质单位内的剂量，和或在约1.5mg的剂量下施用。在一些实施方式中，剂量为2.5mg或更低，通常归类为“微剂量”。
如本文所用，“生成图像”或“确定免疫背景”或“生成免疫评分”可指通过顺序扫描或同时扫描进行的成像和分析，如本文所述。在一些实施方式中，免疫评分将基于成像数据分析进行使用，以作出或指导诊断、预后和/或受试者的治疗建议。免疫评分分析可包括任何合适的分析，例如，如在W020/069433和在Bruni等人(The immune contexture andImmunoscore in cancer prognosis and therapeutic efficacy.Nat Rev Cancer 20,662-680(2020))中所述，其各自通过引用并入本文。
附加实施方式
参考图3，显示了根据本发明的一些实施方式的方法300。该方法可包括使用全身PET扫描305对受试者进行非侵入性成像，其中已向受试者施用选择性结合CD8的放射性核素标记的抗原结合构建体(例如PET示踪剂)。受试者可能患有诸如癌症、自身免疫疾病或传染病的疾病。在一些情况下，受试者患有实体瘤或非实体瘤。该方法还可包括使用全身PET扫描310对受试者进行非侵入性成像，其中已向受试者施用选择性结合CD4的放射性核素标记的抗原结合构建体。全身PET扫描可测量受试者体内与表达CD4或CD8的细胞(如免疫细胞，如T细胞)密度相关的放射性分布。基于全身PET扫描，可计算CD4和CD8 T细胞的全身或肿瘤/组织特异性差异分布315。PET扫描可能能够以约50至100个细胞/mm2的最小密度分辨细胞。
如果受试者患有实体瘤，该方法可能包括确定细胞毒性免疫细胞浸润到肿瘤环境的程度。在一些实施方式中，计算CD8+和/或CD4+细胞在一个或多个肿瘤部位的丰度320。在一些实施方式中，确定肿瘤中的CD8+和/或CD4+细胞的空间分布。在一些实施方式中，确定肿瘤中的CD8+和/或CD4+细胞的时间分布。在一些实施方式中，确定肿瘤中的CD8+细胞和CD4+细胞之间的重叠。在一些实施方式中，比较肿瘤中不同部位的CD8信号与CD4信号的比例。在一些实施方式中，比较CD8+或CD4+细胞相对于肿瘤微环境的其他细胞组分的空间分布。
基于肿瘤中的CD4+和CD8+细胞的计算的差异分布、和CD4+和CD8+细胞的丰度，可确定肿瘤、组织和/或受试者整个身体的免疫环境(如通过例如，免疫评分表示的)350。免疫环境(例如，免疫评分)可以为受试者的疾病进展提供预测或预后。在一些实施方式中，高免疫评分表明有利预后(例如，治疗后肿瘤复发的较低几率)且低免疫评分表明不良预后(例如，治疗后肿瘤复发的更高几率)。在另一实施方式中，这可通过不良预后的低免疫评分逆转；高免疫评分是有利的。(就本发明的目的而言，高免疫评分将被视为有利预后。)无论如何，基于免疫评分,受试者可能被例如，由保健医生如医生诊断355。在一些实施方式中，基于免疫评分，可推荐受试者一个疗程(例如，选择特定的疗法或治疗)。在一些实施方式中，基于免疫评分(例如，表明良好预后的免疫评分)的初始治疗(如手术切除)后，可能建议受试者不进行治疗(如辅助治疗)。在一些实施方式中，建议受试者基于免疫评分(例如，表明不良预后的免疫评分)，更频繁地监测肿瘤复发。
在一些实施方式中，基于免疫评分以及随后的诊断受试者可被给予治疗360。免疫评分和诊断可确定在癌症的情况下受试者是否应该接受几种治疗中的一种或多种，包括免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、疫苗疗法、溶瘤病毒疗法或细胞疗法。在一些实施方式中，受试者可接受手术切除肿瘤。在一些实施方式中，当发现受试者的肿瘤的免疫评分低时，可在手术后对受试者施用辅助疗法。在一些实施方式中，当发现受试者的肿瘤的免疫评分低时，可在手术后更频繁地(如每月或每年)检查受试者的肿瘤复发情况。在一些实施方式中，当发现受试者的肿瘤的免疫评分高时，可在手术后不对受试者施用任何辅助疗法在一些实施方式中，当发现受试者的肿瘤的免疫评分高时，可在手术后不太频繁地(例如，每五年或更长时间检查一次)检查受试者的肿瘤复发情况。
在一些实施方式中，免疫评分考虑其他因素。有关能促进免疫评分的个人免疫状态和/或肿瘤的其他信息包括但不限于，抑制性肿瘤代谢、一般免疫状态、全身淋巴细胞计数、抗肿瘤T细胞活性、检查点的存在、抑制性细胞因子的存在、激活性细胞因子的存在、抑制性趋化因子的存在、激活性趋化因子的存在、肿瘤纤维化的程度或肿瘤免疫抑制状态。在一些实施方式中，来自一个或多个非侵入性成像分析的数据可有助于免疫评分325。可以使用用于探测个体免疫状态和/或肿瘤的任何合适的成像分析。合适的非侵入性分析包括但不限于FDG-PET、CD3-PET、IFN-γ-PET、颗粒酶B-PET、PD-l-PET、PD-L1-PET、TGFP-PET。
在某些实施方式中，免疫评分可以考虑一个或多个生物标记物分析结果330。生物标记物可以是血液生物标记物。
在一些实施方式中，免疫评分可以考虑来自肿瘤活检的结果335。肿瘤活检可用于获取有关肿瘤突变负荷和新抗原负荷、检查点和检查点配体(PD-l/PDL-1)存在，和/或可溶性抑制剂和炎症标记物(例如但不限于VEGFA、白细胞介素、C反应蛋白等)的存在的信息，以及巨噬细胞和髓源性抑制细胞(MDSC)分泌的其他试剂。肿瘤活组织检查可以使用任何合适的分析测试以确定与诊断和/或预后相关的这些肿瘤特征。活检可使用高通量测序以进行肿瘤基因组学或免疫组织化学进行测试。
如果受试者患有非实体肿瘤、自身免疫疾病或传染病，则免疫环境(如例如，免疫评分表示的)可能基于全身或解剖ROI，或CD4+和CD8+细胞的组织特异性差异分布。对于上述肿瘤，该方法可包括计算CD8+和/或CD4+细胞在一个或多个部位(如组织、解剖ROI)的丰度340。在一些实施方式中，确定解剖ROI中的CD8+和/或CD4+细胞的空间和/或时间分布。免疫环境(例如，免疫评分)可以进一步考虑受试者的一般免疫状态，或任选地，通过CD3-PET的全身淋巴细胞计数341，以及任何任选的血液生物标记物测试的结果345。
方框325和341表明，其他非侵入性分析，如针对其他生物标记物的PET扫描、磁共振成像(MRI)，和/或计算机断层扫描(CT)适合与本发明的方法组合使用，以确定解剖ROI的免疫环境350。在一些情况下，MRI可用于确认免疫环境，并且MRI本身可与基于本发明的方法建立的验证的诊断、预后和治疗建议相关。
本文还提供了对受试者成像的方法，包括：向受试者施用包含第一可检测标记物的第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第一靶标；使用非侵入性成像评估表达第一靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布和/或丰度，以测量受试者中第一可检测标记物的水平；向受试者施用包含第二可检测标记物的第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第二靶标，并且其中第一和第二靶标不同；以及使用非侵入性成像评估表达第二靶标的细胞在受试者的一个或多个组织中的分布和/或丰度以测量受试者中第二可检测标记物的水平；以及基于表达所述靶标的细胞的分布和/或丰度生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境的指示。第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体可在彼此相关的任何适当时间施用。在一些实施方式中，在彼此相隔约1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、20、24、36、48、60、72、96、或120小时或更多或在前面任意两个值之间的范围内的时间间隔内进行施用第一抗原结合构建体和施用第二抗原结合构建体。在一些实施方式中，在同一天进行施用第一抗原结合构建体和施用第二抗原结合构建体。在一些实施方式中，在不同天进行施用第一抗原结合构建体和施用第二抗原结合构建体，例如，在单独的患者就诊期间，如彼此相隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天。可以在相对于彼此的任何适当时间对受试者成像以测量第一可检测标记物和第二可检测标记物的水平。在一些实施方式中，在彼此相隔约1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、20、24、36、48、60、72、96、或120小时或更多或在前面任意两个值之间的范围内的时间间隔内进行使用非侵入性成像以测量第一可检测标记物的水平和使用非侵入性成像以测量第二可检测标记物的水平。在一些实施方式中，在同一天进行使用非侵入性成像来测量第一可检测标记物的水平和使用非侵入性成像来测量第二可检测标记物的水平。在一些实施方式中，在不同天进行使用非侵入性成像以测量第一可检测标记物的水平和使用非侵入性成像以测量第二可检测标记物的水平，例如，在单独的患者就诊期间，如彼此相隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天。
在一些实施方式中，所述方法包括向受试者施用包含第三可检测标记物的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第三靶标，其中第三靶标不同于第一和第二靶标；以及使用非侵入性成像评估表达受试者的一个或多个组织中的第三靶标的细胞的分布和/或丰度以测量受试者中第三可检测标记物的水平。
在一些实施方式中，第一可检测标记物和第二可检测标记物不同，并且选自放射性核素、光学染料、荧光化合物、切伦科夫发光剂、顺磁离子、MRI造影剂、MRI增强剂和纳米粒子，如本文所公开。在一些实施方式中，非侵入性成像选自PET、SPECT、MRI、CT、伽马射线成像、光学成像和切伦科夫发光成像(CLI)，如本文所公开。
可检测标记物、PET示踪剂、抗原结合构建体和靶标
术语“PET示踪剂”表示可关联或选择性结合靶标(例如CD3、CD4或CD8)并将标记物或标签与靶标关联的任何分子。这包括诸如抗原结合构建体、抗体、微抗体、二体抗体、cys-二体抗体、纳米抗体等的方面。进一步包括在PET示踪剂范围内的是小肽和小分子，它们选择性结合靶标，并且可与PET标记物或PET可检测标签相关联(例如，链接或共价结合)。在一些实施方式中，PET示踪剂小于200kDA、170kDa、150kDa、120kDa、105kDa、100kDa、80kDa、50kDa、30kDa、10kDa、5kDa、或2kDa。在本发明中引用抗原结合构建体的情况下，还考虑合适的PET示踪剂。
CD8 PET示踪剂的实例包括CD8特异性捕获剂，如WO2017/176769中公开的那些，其关于此类CD8特异性捕获剂的全部内容通过引用并入本文。在一些实施方式中，本文提供的任何方法可使用WO2017/176769中提供的CD8捕获剂(或仅“配体”)，包括以下任一捕获剂：
(1)HGRGH(SEQ ID NO:225)-接头-wplrf(SEQ ID NO:226)，针对表位2C(AAEGLDTQR(SEQ ID NO:227))和表位IN(SQFRVSPLD(SEQ ID NO:228))。
(2)HGRGH(SEQ ID NO:225)-接头-AKYRG(SEQ ID NO:229)、靶向表位2C(AAEGLDTQR(SEQ ID NO:227))和表位IN(SQFRVSPLD(SEQ ID NO:228))。
(3)Ghtwp(SEQ ID NO:245)-接头-hGrGh(SEQ ID NO:246)，靶向表位2N(FLLYLSQNKP(SEQ ID NO:230))和表位2C(AAEGLDTQR(SEQ ID NO:227))。
(4)PWTHG(SEQ ID NO:231)-接头-AKYRG(SEQ ID NO:229)，靶向表位2N(FLLYLSQNKP(SEQ ID NO:230))和表位IN(SQFRVSPLD(SEQ ID NO:228))。
在一些实施方式中，结合CD8的分子组成于或包括以下一个或多个：
1)与下列中的至少一个为80-100％同一性的序列：HGSYG(SEQ ID NO:232)；b.KRLGA(SEQ ID N0233)；c.AKYRG(SEQ ID NO:229)；d.hallw(SEQ ID NO:234)；e.lrGyw(SEQ ID NO:235)；f.vashf(SEQ ID NO:236)；g.nGnvh(SEQ ID NO:237)；h.wplrf(SEQ IDNO:226)；i.rwfnv(SEQ ID NO:238)；j.havwh(SEQ ID NO:239)；k.wvplw(SEQ ID NO:240)；1.Ffrly(SEQ ID NO:241)；和m.wyyGf(SEQ ID NO:242)；或
2)与选自以下的氨基酸序列为80-100％同一性的序列：AGDSW(SEQ ID NO:243)；b.HVRHG(SEQ ID NO:244)；c.HGRGH(SEQ ID NO:225)；d.THPTT(SEQ ID NO:247)；e.FAGYH(SEQ ID NO:248)；f.WTEHG(SEQ ID NO:249)；g.PWTHG(SEQ ID NO:231)；h.TNDFD(SEQ IDNO:250)；i.LFPFD(SEQ ID NO:251)；j.slrfG(SEQ ID NO:252)；k.yfrGs(SEQ ID NO:253)；1.wnwvG(SEQ ID NO:254)；m.vawlG(SEQ ID NO:255)；n.fhvhG(SEQ ID NO:256)；o.wvsnv(SEQ ID NO:257)；p.wsvnv(SEQ ID NO:258)；q.InshG(SEQ ID NO:259)；r.yGGvr(SEQ IDNO:260)；s.nsvhG(SEQ ID NO:261)；t.ttvhG(SEQ ID NO:262)；u.fdvGh(SEQ ID NO:263)；v.rhGwk(SEQ ID NO:264)；w.Ghtwp(SEQ ID NO:245)；和x.hGrGh(SEQ ID NO:265)。
适合在本发明方法中使用的抗原结合构建体包括选择性结合靶标(例如，免疫细胞标记物)的任何合适抗体或其抗原结合片段。合适的抗原结合构建体包括但不限于抗体、Fab’、F(ab’)2、Fab、Fv、rIgG(还原IgG)、scFv片段、微抗体、双体抗体、cys双体抗体或纳米抗体。抗原结合构建体所结合的靶标可以是任何合适的免疫细胞标记物(例如，细胞表面标记物)，用于识别有助于组织免疫环境的免疫细胞类型。
描述了选择性结合CD8的合适抗原结合构建体，例如，在2019年9月27日提交的国际申请号PCT/US2019/053642和美国专利公开号20170029507中描述的，通过引用将其并入本文。在一些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD8抗原结合构建体包括图7-36中所述的任何氨基酸序列。在一些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD8抗原结合构建体包括与图7-36中所述的任何氨基酸序列至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD8抗原结合构建体包括任何抗原结合片段或其部分，例如图7-36所示的氨基酸序列的任何一个或所有CDR、重链可变(VH)区、轻链可变(VL)区、重链和轻链可变区、铰合区等。在一些实施方式中，CD8抗原结合构建体包含VH区，该VH区具有与SEQID NO:1-6、10、12、14、16、18、20、22、24、31、33、35、37、39、41、66、68、70、72、74、76、78、79中任一个的VH区具有至少约为80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，CD8抗原结合构建体包含VL区，该VL区具有与SEQ ID NO:7-9、10、12、14、16、18、20、22、24、27、29、66、68、70、72、74、76、79中任一个的VL区具有至少约为80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，适于在本发明中使用的CD8抗原结合构建体选择性地结合人CD8。在一些实施方式中，适于在本发明中使用的CD8抗原结合构建体选择性地结合到具有图37A-37C中所示的任一氨基酸序列的CD8。
描述了选择性结合CD4的合适抗原结合构建体，例如，在2019年6月5日提交的国际申请号PCT/US2019/035550中描述的，通过引用将其并入本文。在一些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD4抗原结合构建体包括图38-50中所述的任何氨基酸序列。在一些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD4抗原结合构建体包括与图38-50中所述的任何氨基酸序列至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD4抗原结合构建体包括任何抗原结合片段或其部分，例如图38-50所示的氨基酸序列的任何一个或所有CDR、重链可变区、轻链可变区、重链和轻链可变区、铰合区等。在一些实施方式中，CD4抗原结合构建体包含VH区，该VH区具有与SEQ ID NO:83、84、88-99中任一个的VH区具有至少约为80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，CD4抗原结合构建体包含VL区，该VL区具有与SEQ ID NO:85、86、88-99中任一个的VL区具有至少约为80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，适于在本发明中使用的CD4抗原结合构建体选择性地结合人CD4。在一些实施方式中，适于在本发明中使用的CD4抗原结合构建体选择性地结合到具有图51的氨基酸序列的CD4。
描述了选择性结合CD3的合适抗原结合构建体，例如，在PCT公开号WO 2013/188693中，通过引用将其并入本文。在一些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD3抗原结合构建体包括图52A-84I中所述的任何氨基酸序列。在一些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD3抗原结合构建体包括与图52A-84I中所述的任何氨基酸序列至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在某些实施方式中，适于在本发明方法中使用的CD3抗原结合构建体包括任何抗原结合片段或其部分，例如图52A-84I所示的氨基酸序列的任何一个或所有CDR、重链可变区、轻链可变区、重链和轻链可变区、铰合区等。在一些实施方式中，CD3抗原结合构建体包含VH区，该VH区具有与SEQ ID NO:104-106、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、176、178、180、182、184中任一个的VH区具有至少约为80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方式中，CD3抗原结合构建体包含VL区，该VL区具有与SEQ ID NO:101-103、107、109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、147、149、151、153、155、157、159、161、163、165、167、171、173中任一个的VL区具有至少约为80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93、94、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方式中，适于在本发明中使用的CD3抗原结合构建体选择性地结合人CD3。在一些实施方式中，适于在本发明中使用的CD3抗原结合构建体选择性地结合到具有图85中所述的氨基酸序列(SEQ ID NO:186)的CD3。需要注意的是，CD3包含链(CD3γ、CD3δ和CD3ε)，并且根据本发明的方法，可以使用指向其中任何一条链的抗原结合构建体进行成像。通常，本文所述方法中使用的CD3 PET示踪剂可避免T细胞的非特异性激活，以最小化诊断成像中的不良激活风险。
在一些实施方式中，抗原结合构建体(例如，抗体或其抗原结合片段、微抗体等)可包括铰合区。铰合区可具有一个或多个铰合序列(例如，上、核和下铰合序列的任一个中的一个或多个，上和核铰合序列的任何组合中的一个或多个，或上、核和下铰合序列的任何组合中的一个或多个)，如图86所示。在一些实施方式中，铰合序列位于可变区域和Ig结构域之间。
在一些实施方式中，抗原结合构建体与可检测标记物相关(例如，与可检测标记物缀合)。如本文所用，“可检测标记物”包括在诊断、检测或可视化位置中有用的原子、分子或化合物和/或通过非侵入性成像技术获得的靶分子、细胞、组织、器官等的数量。可根据本文实施方式使用的可检测标记物包括但不限于放射性物质(例如，放射性同位素、放射性核素、放射性标签或放射性示踪剂)、染料、造影剂、荧光化合物或分子、生物发光化合物或分子、酶和增强剂(例如，顺磁离子)。此外，一些纳米粒子，例如量子点和金属纳米粒子(如下所述)可以适合用作检测剂。在一些实施方式中，可检测标记物为吲哚菁绿(ICG)。
抗原结合构建体可通过任何合适的手段与放射性核素示踪剂关联或标记。在一些实施方式中，抗原结合构建体与放射性核素示踪剂缀合。可使用任何适用于非侵入性体内成像的放射性核素示踪剂。合适的放射性核素示踪剂包括但不限于正电子发射体、β发射体和γ发射体。可用作可检测标记物的示例性顺磁离子物质包括但不限于过渡金属和镧系金属离子(例如，原子序数为6至9、21-29、42、43、44或57-71的金属)。这些金属包括Cr、V、Mn、Fe、Co、Ni、Cu、La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb和Lu的离子。用顺磁性分子对蛋白质和寡核苷酸的位点特异性标记的方法在Su和Otting，J Biomol NMR2010 Jan；46(l):101-12.doi:10.1007/Sl0858-009-9331-l进行描述。在某些实施方式中，优选的顺磁标签包括氮氧自由基和金属螯合剂。可根据本文的实施方式使用的示例性放射性核素示踪剂包括但不限于18F、18F-FAC、32P、33P、45Ti、47Sc、52Fe、59Fe、62Cu、64Cu、67Cu、67Ga、68Ga、75Sc、77As、86Y、90Y、89Sr、89Zr、94Tc、94Tc、99mTc、99Mo、105Pd、105Rh、111Ag、111In、123I、124I、125I、131I、142Pr、143Pr、149Pm、153Sm、154-158Gd、161Tb、166Dy、166Ho、169Er、175Lu、177Lu、186Re、188Re、189Re、194Ir、198Au、199Au、211At、211Pb、212Bi、212Pb、213Bi、223Ra和225Ac。
在一些实施方式中，放射性核素示踪剂可与具有长尾的试剂反应，其中一个或多个螯合基团附着在用于结合这些离子的长尾上。长尾可以是聚合物，例如聚赖氨酸、多糖或具有侧基的其他衍生化或可衍生链，所述侧基可与用于结合离子的螯合基团结合。可根据本文实施方式使用的螯合基团的实例包括但不限于乙二胺四乙酸(EDTA)、二乙烯三胺五乙酸(DTPA)、DOTA、NOTA、NOGADA、NETA、去铁胺(DfO)、卟啉、多胺、冠醚、双缩氨硫脲、聚肟等基团。在一些实施方式中，金属螯合剂是去铁胺(“DF”)。在一些实施方式中，金属螯合剂是DOTA。在一些实施方式中，金属螯合剂是PCTA。在一些实施方式中，金属螯合剂是DTPA。在一些实施方式中，金属螯合剂是NODAGA。在一些实施方式中，这些(或其他)中的任一个都可用于携带如异硫氰酸酯、NHS-酯、CHX-A”-DTPA、HBED、NOTA、D02P、环拉胺、TETA、TE2P、SBAD、NOTAM、DOTAM、PCTA、N02A或马来酰亚胺的修饰，以允许与蛋白质缀合。
螯合剂可以通过一个基团连接到抗原结合构建体上，该基团允许在最小的免疫反应性损失和最小的聚集和/或内部交联下与分子形成键。当与本文所述的抗原结合构建体和载体一起使用时，当与非放射性金属(例如锰、铁和钆)络合时，相同的螯合物可用于MRI。诸如NOTA、NOGADA、DOTA和TETA的大环螯合物可分别与各种金属和放射性物质一起使用，包括但不限于镓、钇和铜的放射性核素。可使用其他环状螯合物，例如大环聚醚，其对稳定结合的核素感兴趣，例如用于RAIT的223Ra。在某些实施方式中，螯合部分可用于将PET成像剂(例如A1-18F络合物)附接到靶向分子以用于PET分析。
根据本发明实施方式，可用作可检测标记物的示例性X射线造影剂包括但不限于，钡、泛影酸盐、乙碘油、柠檬酸镓、碘卡酸、碘西他酸、碘达酸、胆影酸、碘沙酸、碘古拉酸、碘苯六醇、碘帕醇、碘番酸、碘普西酸、碘西法酸、碘砜葡胺、碘舒美酸、碘酞硫、碘替酸、碘他拉酸、碘曲西酸、碘沙克酸、羟泛影酸、碘泊酸、甲葡胺、甲泛葡胺、甲泛影酸、丙碘酮、氧化钽、氯化亚铊或其组合。
用于MRI对比度增强的合适MRI造影剂可以是基于钆的。钆(III)作为螯合化合物(如Gd-DTPA)施用时通常被认为是安全的。使用钆螯合抗体进行MRI对比度增强的实例包括Shahbazi-Gahrouei等人(2002)Australasian Physics&Engineering Sciences inMedicine volume 25:31。两种类型的氧化铁MRI造影剂包括超顺磁性氧化铁(SPIO)和超小型超顺磁性氧化铁(USPIO)。SPIO和USPIO造影剂已成功用于肝脏肿瘤增强。
可根据本发明的实施方式用作可检测标记物的生物发光和荧光化合物或分子和染料包括但不限于，荧光素、异硫氰酸荧光素(FITC)、OREGON GREENTM、罗丹明、德克萨斯红、四罗丹明异硫氰酸酯(TRITC)、Cy3、Cy5等)、荧光标记物(如绿色荧光蛋白(GFP)、藻红蛋白等)、被肿瘤相关蛋白酶、酶(如荧光素酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)激活的自猝灭荧光化合物、纳米粒子、生物素、地高辛或其组合。
根据本发明的实施方式可用作可检测标记物的酶包括但不限于辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、β-葡萄糖醛酸酶或β-内酰胺酶。此类酶可与显色剂、荧光化合物或发光化合物组合使用以产生可检测信号。
在一些实施方式中，将抗原结合构建体与纳米粒子缀合。术语“纳米粒子”是指尺寸以纳米为单位测量的微观粒子，例如，具有至少一个尺寸小于约100nm的粒子。纳米粒子可以用作可检测物质，因为它们小到足以散射可见光或x射线，而不是吸收可见光或x射线。例如，金纳米粒子具有显著的可见光消光性能，在溶液中呈现深红色到黑色。因此，包含与纳米粒子缀合的抗原结合构建体的组合物可用于受试者中的T细胞的体内成像。在尺寸范围较小的一端，纳米粒子通常被称为团簇。已经形成了金属、电介质和半导体纳米粒子，以及混合结构(例如，核-壳纳米粒子)。纳米球、纳米棒和纳米杯只是已经生长的几种形状。半导体量子点和纳米晶体是其他类型的纳米粒子的实例，这些纳米粒子可以通过电磁波束的荧光或散射来检测。当与抗原结合构建体缀合时，此类纳米粒子可用作成像剂，用于如本文所述的T细胞的体内检测。
在一些实施方式中，可检测标记物将适用于切伦科夫(或切伦科夫)成像。如本文所用，切伦科夫发光剂是一种放射性核素，其在生物组织中诱导切伦科夫辐射，该辐射可通过切伦科夫发光成像(CLI)检测。使用标准光学成像设备可以从一系列发射正电子、β和α的放射性核素中观察到切伦科夫辐射。在生物环境中，从一系列放射性核素中观察到切伦科夫(或切伦科夫)发光的可见光发射，包括正电子发射体18F、64Cu、89Zr和124I；β-发射体131I和α粒子发射体225Ac。已经描述了切伦科夫发光成像(CLI)在体内肿瘤中的应用，尤其是在Ruggiero,A；Holland,J.P.；Lewis,J.S.；Grimm,J(2010)."Cerenkov luminescenceimaging of medical isotopes".Journal of Nuclear Medicine.51(7):1123,1130。
单光子发射计算机断层扫描(SPECT)采用可检测的标记物，其发射伽马辐射。通常用作SPECT作为可检测标记物的放射性核素为碘-123、锝-99m、氙-133、铊-201和氟-18。其他也有可能。本领域技术人员熟悉将SPECT可检测标记物附着到选择性结合靶标的抗原结合构建体的技术。此类构建体可用于本文提供的方法中，以确定组织的免疫环境。
一些可检测标记物可能是“多模式成像剂”，其允许通过两种不同的手段(例如通过PET和单独地通过MRI)检测标记物。多种多模式成像剂正在开发中，参见例如Truihet等人(2015)Contrast Media Mol.Imaging2015,10309-319.这些试剂可用于本文提供的用于标记抗原结合构建体的方法中，只要所得图像能够将其与附接到用于建立组织的免疫环境的第二抗原结合构建体的第二可检测标记物区分开来。
试剂盒
本文还提供了包括第一和第二抗原结合构建体的试剂盒，各自用可检测的标记物标记，例如，放射性核素示踪剂，其中第一抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ或CD8的第一靶标，并且其中第二抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ或CD8的第二靶标，其中第一靶标和第二靶标不同。在一些实施方式中，试剂盒可包括用可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)标记的第三抗原结合构建体，其中第三抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ或CD8的第三靶标，其中第三靶标不同于第一和第二靶标。本发明的试剂盒可用于进行本文所公开的对患有疾病(例如癌症)的受试者进行成像、治疗、诊断、推荐治疗或提供预后的方法。与每个抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)可以是任何合适的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)，如本文所述用于对受试者成像。在一些实施方式中，如本文所述，试剂盒包括用于进行但不限于FDG-PET、CD3-PET、IFN-γ-PET、颗粒酶B-PET、PD-1-PET、PD-L1-PET、TGFP-PET的任何其他合适成像剂。试剂盒的组件可以设置在一个或多个容器中。在一些实施方式中，试剂盒包括用于向受试者施用标记的抗原结合构建体和使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT扫描)对受试者成像的说明，如本文所述。
组合物
本文还提供了用于本方法的组合物。
组合物可包括第一和第二抗原结合构建体的试剂盒，各自用可检测的标记物标记，例如，放射性核素示踪剂，其中第一抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ或CD8的第一靶标，并且其中第二抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ或CD8的第二靶标，其中第一靶标和第二靶标不同。在一些实施方式中，组合物可包括用可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)标记的第三抗原结合构建体，其中第三抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ或CD8的第三靶标，其中第三靶标不同于第一和第二靶标。如本文所述，抗原结合构建体可以是选择性结合期望靶标的任何合适的抗原结合构建体。与每个抗原结合构建体相关的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)可以是任何合适的可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)，用于使用非侵入性成像(例如，PET或SPECT)测量靶标或表达靶标的细胞的分布和/或丰度，如本文所述。在一些实施方式中，基于每个放射性核素示踪剂的放射性半衰期选择组合物中放射性核素示踪剂的组合，使得在向受试者施用组合物(其可能是药学上可接受的组合物)后，可在适当的时间点对受试者成像以测量所有放射性核素示踪剂在较早时间点的组合信号，然后，在稍后时间点测量具有更长放射性半衰期的放射性核素示踪剂的一个或多个单独信号，如本文所述。或者，基于每个放射性核素示踪剂的放射性发射强度选择组合物中放射性核素示踪剂的组合，使得在向受试者施用组合物(例如药学上可接受的组合物)后，可在不同窗口对受试者成像，以区分来自不同靶标的信号，如本文所述。该组合物可包括任何适当量的抗原结合构建体，以向相应靶标和组织递送和靶向可检测标记物(例如，放射性核素示踪剂)用于非侵入性成像(例如，的PET或SPECT成像)，如本文所述。
在一些实施方式中，组合物包括至少：0.5-3.0+20％mCi的放射性核素标记的抗原结合构建体，对于每个不同的抗原结合构建体，20mM的组氨酸、5％的蔗糖、51-62mM的氯化钠、141-194mM的精氨酸和2-20mM的谷氨酸。在一些实施方式中，对于每个不同的放射性核素示踪剂，辐射的量在0.5至3.6mCi之间，例如，0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8.1.9、2、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5和3.6mCi，包括由上述任意两个值定义的任何量。在一些实施方式中，组合物包括约1mCi的与至少一种抗原结合构建体物相关的放射性核素示踪剂，例如89Zr。在一些实施方式中，组合物包括用约0.1、0.2、0.5、1、2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5或20mg的放射性核素示踪剂，或由上述任何两个值定义的范围内的值的抗原结合构建体标记的抗原结合构建体，对于每个不同的抗原结合构建体。在一些实施方式中，可以存在10、15、20、25或30mM的组氨酸，包括可以使用前面任意两个值定义的任何量。在一些实施方式中，可以使用2、3、4、5、6、7、8、9或10％的蔗糖或蔗糖的替代品，包括前面任意两个值定义的任何量。在一些实施方式中，氯化钠的量可以是40、45、50、55、60、65或70mM，包括可以使用前面任意两个值定义的任何量。在一些实施方式中，精氨酸的量可以是120、125、130、135、140、145、150、155或160mM，包括可以使用由上述任意两个值定义的任何量。在一些实施方式中，谷氨酸的量可以是1、2、5、10、20、25或30mM，包括可以使用前面任意两个值定义的任何量。
本发明的一些实施方式由以下编号的选项提供。
项目1.一种治疗受试者的方法，包括：
向患有疾病的受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；
通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)对所述受试者进行成像，以获得在所述受试者的一个或多个组织中表达所述第一靶标的细胞的分布；
向所述受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，并且其中所述第一和第二靶标不同；通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得一个或多个组织中表达所述第二靶标的细胞的分布；
基于在一个或多个位置中表达所述第一靶标的细胞的分布和表达所述第二靶标的细胞的分布，确定所述一个或多个组织的免疫环境；和
基于所述免疫环境对所述受试者施用治疗。
项目2.根据项目1所述的方法，还包括：
向所述受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，其中所述第三靶标不同于所述第一和第二靶标；以及
通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得在所述一个或多个位置中表达所述第三靶标的细胞的分布。
项目3.根据项目1或2所述的方法，还包括基于表达所述靶标的细胞的分布生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境。
项目4.根据项目1至3中任一项所述的方法，还包括确定所述一个或多个组织中的每一个中表达任一所述靶标的细胞与表达另一所述靶标的细胞相比的相对丰度。
项目5.根据项目1至4中任一项所述的方法，其中所述免疫环境包括细胞毒T细胞(CD8+)、辅助性T细胞(CD4+)、CD4+/CD8+双阳性T细胞、记忆性T细胞和调节性T细胞(Tregs)中的一个或多个的丰度或相对丰度。
项目6.根据项目1至5中任一项所述的方法，其中所述免疫环境包括以下一个或多个：
CD4+细胞与CD8+细胞的比；
CD3+细胞与CD8+细胞的比；
CD3+细胞与CD4+细胞的比；
CD8+细胞的丰度和CD3+细胞的丰度；或
CD4+细胞的丰度和CD3+细胞的丰度；或
CD8+细胞的丰度和CD4+细胞的丰度。
项目7.根据项目1至6中任一项所述的方法，其中所述一个或多个组织包括肿瘤。
项目8.根据项目1至7中任一项所述的方法，其中所述一个或多个组织包括肺、肝、结肠、肠、胃、脑、肾、脾、胰腺、食管、淋巴结、骨、骨髓、前列腺、宫颈、卵巢、乳腺、尿道、膀胱、皮肤、颈部、关节或其部分中的一种或多种。
项目9.根据项目1至8中任一项所述的方法，其中所述疾病包括癌症。
项目10.根据项目1至9中任一项所述的方法，其中所述疾病包括肺、肝、结肠、肠、胃、脑、肾、脾、胰腺、食管、淋巴结、骨、骨髓、前列腺、宫颈、卵巢、乳腺、尿道、膀胱、皮肤或颈部的癌症。
项目11.根据项目10所述的方法，其中所述受试者患有黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)或肾细胞癌(RCC)。
项目12.根据项目1至11中任一项所述的方法，还包括识别所述包含癌组织的一个或多个组织。
项目13.根据项目12所述的方法，其中所述一个或多个组织使用计算机断层扫描(CT)、X射线、FDG-PET或磁共振成像(MRI)识别为包含癌组织。
项目14.根据项目1至13中任一项所述的方法，所述治疗包括免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、疫苗疗法、溶瘤病毒疗法、或细胞疗法中的一种或多种。
项目15.根据项目1至14中任一项所述的方法，其中在向所述受试者施用所述第一抗原结合构建体之前，所述受试者已接受所述疾病的早期治疗。
项目16.根据项目15所述的方法，其中所述早期治疗包括免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、或细胞疗法中的一种或多种。
项目17.根据项目15或16所述的方法，其中所述处理与所述早期治疗不同。
项目18.一种治疗受试者的方法，包括：
向患有癌症的受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；
通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)对所述受试者进行成像，以获得在所述受试者的肿瘤中表达所述第一靶标的细胞的分布；
向所述受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，其中所述第一和第二靶标不同；
通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得所述肿瘤中表达所述第二靶标的细胞的分布；
基于表达所述靶标的细胞的分布，评估所述肿瘤的核和/或侵入性边缘中的CD3+细胞、CD4+细胞和/或CD8+细胞的密度；以及基于确定所述肿瘤的核和/或侵入性边缘耗尽CD3+、CD4+和CD8+细胞中的一种或多种，和/或富集CD3+、CD4+或CD8+细胞中的一种或多种对所述受试者施用癌症治疗。
项目19.根据项目18所述的方法，还包括：
向所述受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，其中所述第三靶标不同于所述第一和第二靶标；以及
通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得所述肿瘤中表达所述第三靶标的细胞的分布。
项目20.根据项目18或19所述的方法，其中对所述癌症施用治疗基于确定所述肿瘤的核和/或侵入性边缘耗尽CD3+细胞和CD8+细胞；
耗尽CD3+细胞和CD4+细胞；
耗尽CD4+细胞和富集CD8+细胞；
耗尽CD8+细胞和富集CD4+细胞；或
耗尽CD8+细胞和CD4+细胞。
项目21.根据项目18至19中任一项所述的方法，其中所述肿瘤的核和/或侵入性边缘确定为耗尽：
CD8+细胞，当CD8+细胞的评估密度为118个细胞/mm2或更少时；
CD4+细胞，当CD4+的评估密为118个细胞/mm2或更少时；或
CD3+细胞，当CD3+的评估密为300个细胞/mm2或更少时。
项目22.根据项目18至21中任一项所述的方法，其中所述肿瘤的核和/或侵入性边缘确定为富集：
CD4+细胞，当CD4+细胞的评估密度为118个细胞/mm2或更多时；
CD8+细胞，当CD8+的评估密为118个细胞/mm2或更多时；或
CD3+细胞，当CD3+的评估密为300个细胞/mm2或更多时。
项目23.根据项目18至22中任一项所述的方法，其中评估所述CD3+细胞、CD4+细胞和/或CD8+细胞的密度包括：
基于表达所述靶标的细胞的分布生成图像；以及基于所述图像评估所述肿瘤的核和/或侵入性边缘中的CD3+细胞、CD4+细胞和/或CD8+细胞的密度。
项目24.一种治疗受试者的方法，包括：
向患有癌症的受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；
通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)对所述受试者进行成像，以获得在所述受试者的肿瘤中表达所述第一靶标的细胞的分布；
向所述受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，并且其中所述第一和第二靶标不同；通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得所述肿瘤中表达所述第二靶标的细胞的分布；
基于获得的分布评估肿瘤中：
CD4+细胞与CD8+细胞的比例；和/或
CD8+细胞与CD4+细胞的比例；和/或
CD3+细胞与CD4+细胞的比例；和/或
CD3+细胞与CD8+细胞的比例；
以及
基于确定所述肿瘤中：
CD4+细胞与CD8+细胞的比例低于阈值比例；和/或
CD8+细胞与CD4+细胞的比例低于阈值比例；和/或
CD4+细胞与CD3+细胞的比例低于阈值比例；和/或
CD8+细胞与CD3+细胞的比例低于阈值比例，
对所述受试者使用癌症治疗。
项目25.根据项目24所述的方法，还包括：
向所述受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，其中所述第三靶标不同于所述第一和第二靶标；以及
通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得所述肿瘤中表达所述第三靶标的细胞的分布。
项目26.根据项目24或25所述的方法，其中基于确定CD4+细胞与CD8+细胞的比例处于或低于阈值比例施用所述治疗。
项目27.根据项目24或25所述的方法，其中基于确定CD8+细胞与CD4+细胞的比例处于或低于阈值比例施用所述治疗。
项目28.根据项目24或25所述的方法，其中基于确定CD8+细胞与CD3+细胞的比例处于或低于阈值比例施用所述治疗。
项目29.根据项目24或25所述的方法，其中基于确定CD4+细胞与CD3+细胞的比例处于或低于阈值比例施用所述治疗。
项目30.根据项目24-29中任一项所述的方法，其中评估所述比例包括：
基于表达所述靶标的细胞的分布生成图像；以及基于所述成像评估所述肿瘤中
CD4+细胞与CD8+细胞的比例；和/或
CD3+细胞与CD4+细胞的比例；和/或
CD3+细胞与CD8+细胞的比例。
项目31.根据项目18至30中任一项所述的方法，其中所述治疗包括免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、疫苗疗法、溶瘤病毒疗法、或细胞疗法中的一种或多种。
项目32.一种治疗受试者的方法，包括：
对患有疾病的受试者施用疾病的第一治疗；在进行所述第一治疗之前，通过正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)监测：
表达所述受试者的一个或多个组织中选自CD3、CD4和CD8的第一靶标的细胞的分布；和
表达所述受试者的一个或多个组织中选自CD3、CD4和CD8的第二靶标的细胞的分布；其中所述第一和第二靶标不同；
在施用所述第一治疗后，通过PET或SPECT监测：
表达所述受试者的一个或多个组织中的第一靶标的细胞的分布；和
表达所述受试者的一个或多个组织中的第二靶标的细胞的分布；和
基于比较：
表达所述第一靶标的细胞的分布；和
表达所述第二靶标的细胞的分布，对所述受试者施用疾病的第二治疗。
项目33.根据项目32所述的方法，还包括：
在施用所述第一治疗之前，通过PET或SPECT监测在所述受试者的一个或多个位置中表达选自CD3、CD4和CD8的第三靶标的细胞的分布，其中所述第三靶标与所述第一和第二靶标不同；以及在施用所述第一治疗后，通过PET或SPECT监测在所述受试者的一个或多个位置中表达所述第三靶标的细胞的分布，
其中所述第二治疗的施用进一步基于表达所述第三靶标的细胞的分布的比较。
项目34.根据项目32或33所述的方法，在施用所述第一治疗之前，在监测表达所述第二靶标的细胞的分布的1小时至2周内，进行监测表达所述第一靶标的细胞的分布和/或在监测表达所述第三靶标的细胞的分布的1小时至2周内，进行监测表达所述第二靶标的细胞的分布。
项目35.根据项目32至34中任一项所述的方法，在施用所述第一治疗之后，在监测表达所述第二靶标的细胞的分布的1小时至2周内，进行监测表达所述第一靶标的细胞的分布和/或在监测表达所述第三靶标的细胞的分布的1小时至2周内，进行监测表达所述第二靶标的细胞的分布。
项目36.根据项目32至35中任一项所述的方法，其中所述疾病是癌症。
项目37.根据项目32至36中任一项所述的方法，其中所述受试者在实施所述第一治疗之前，在监测所述细胞分布之前，已经接受针对所述疾病的第三治疗。
项目38.根据项目37所述的方法，其中所述第一、第二和第三治疗各自包括免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、疫苗疗法、溶瘤病毒疗法、或细胞疗法中的一种或多种。
项目39.根据项目32至38中任一项所述的方法，还包括识别所述包含癌组织的一个或多个组织。
项目40.根据项目39所述的方法，其中所述一个或多个组织使用计算机断层扫描(CT)、X射线、FDG-PET或磁共振成像(MRI)识别为包含癌组织。
项目41.根据项目32至40中任一项所述的方法，其中所述受试者中的一个或多个组织包括肺、肝、结肠、肠、胃、脑、肾、脾、胰腺、食管、淋巴结、骨、骨髓、前列腺、宫颈、卵巢、乳腺、尿道、膀胱、皮肤、颈部、关节或其部分中的一种或多种。
项目42.根据项目32至41中任一项所述的方法，其中监测所述分布包括：
向所述受试者施用包含第一放射性核素示踪剂的第一抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合第一靶标；
通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得在所述受试者一个或多个组织中表达所述第一靶标的细胞的分布；
向所述受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的第二抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合所述第二靶标，并且其中所述第一和第二靶标不同；
通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得在所述一个或多个组织中表达所述第二靶标的细胞的分布；和/或
向所述受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中所述抗原结合构建体选择性结合所述第三靶标；
通过PET或SPECT对所述受试者成像，以获得在所述一个或多个组织中表达所述第三靶标的细胞的分布。
项目43.根据项目42所述的方法，其中在1小时至2周内进行施用所述第一抗原结合构建体和成像以获得表达所述第二靶标的细胞的分布。
项目44.根据项目42或43所述的方法，其中在施用所述第一抗原结合构建体的1小时至2周内进行测量所述第一放射性核素示踪剂的水平。
项目45.根据项目42至44中任一项所述的方法，其中在施用所述第二抗原结合构建体的1小时至2周内进行测量所述第二放射性核素示踪剂的水平。
项目46.根据项目42至45中任一项所述的方法，其中在施用所述第三抗原结合构建体的1小时至2周内进行测量所述第三放射性核素示踪剂的水平。
项目47.根据项目42至46中任一项所述的方法，其中在不同天施用不同的抗原结合构建体。
项目48.根据项目42至46中任一项所述的方法，其中在不同天进行施用所述第一抗原结合构建体和施用所述第二抗原结合构建体。
项目49.根据项目42至47中任一项所述的方法，其中在与施用所述第二抗原结合构建体的同一天进行测量所述第一放射性核素示踪剂的水平。
项目50.根据项目42至48中任一项所述的方法，其中在与施用所述第三抗原结合构建体的同一天进行测量所述第二放射性核素示踪剂的水平。
项目51.根据项目42至46中任一项所述的方法，其中在同一天进行施用所述第一抗原结合构建体和测量所述第二放射性核素示踪剂的水平。
项目52.根据项目42至46中任一项所述的方法，其中在同一天进行施用所述第二抗原结合构建体和测量所述第三放射性核素示踪剂的水平。
项目53.根据项目42至52中任一项所述的方法，其中所述放射性核素示踪剂各自选自18F、64Cu、68Ga、89Zr、123I和99mTc。
项目54.根据项目42至53中任一项所述的方法，其中所述第一放射性核素示踪剂为18F、64Cu或68Ga。
项目55.根据项目42至54中任一项所述的方法，其中所述第二放射性核素示踪剂为18F或89Zr。
项目56.根据项目42至53中任一项所述的方法，其中所述第一放射性核素示踪剂为
123I或99mTc。
项目57.根据项目56所述的方法，其中所述第二放射性核素示踪剂是123I或99mTc，其中所述第一和第二放射性核素示踪剂不同。
项目58.根据项目42至57中任一项所述的方法，其中所述抗原结合构建体是抗体或其抗原结合片段。
项目59.根据项目58所述的方法，其中所述抗原结合构建体是Fab’、F(ab’)2、Fab、Fv、rIgG(还原IgG)、scFv片段、微抗体、双体抗体、cys双体抗体或纳米抗体。
项目60.根据项目18至59中任一项所述的方法，其中所述癌症为黑色素瘤、颈部癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、食管癌、结直肠癌、肾细胞癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌或淋巴瘤、宫颈鳞状细胞癌或鼻咽癌或骨癌。
项目61.根据项目18至60中任一项所述的方法，其中所述受试者患有黑色素瘤、非小细胞肺癌(NSCLC)或肾细胞癌(RCC)。
项目62.一种对受试者成像的方法，包括：
向所述受试者施用选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标的第一PET示踪剂；
使用正电子发射断层扫描(PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)测量所述受试者中的第一PET示踪剂的信号来评估所述受试者的一个或多个组织中表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度；
向所述受试者施用选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标的第二PET示踪剂，并且其中所述第一和第二靶标不同；使用PET或SPECT测量所述受试者中的第二PET示踪剂的信号来评估所述受试者的一个或多个组织中表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度；
基于表达所述靶标的细胞的分布和/或丰度生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境的指示。
项目63.根据前述项目中任一项所述的方法，其中：
所述第一靶标是CD3，且所述第二靶标是CD4；
所述第一靶标是CD3，且所述第二靶标是CD8；或
所述第一靶标是CD4，且所述第二靶标是CD8.
项目64.根据前述项目中任一项所述的方法，其中所述CD3为人CD3，所述CD4为人CD4，且所述CD8为人CD8。
项目65.根据项目64所述的方法，其中所述人CD3包含SEQ ID NO:186中所示的序列，所述人CD4包含SEQ ID NO:100中所示的序列，且所述人CD8包含SEQ ID NOs:80-82中所示的任一序列。
单数术语
在本申请中，单数的使用可以包括复数，除非另有明确说明，或者除非本领域技术人员根据本发明理解，单数是唯一的功能实施方式。因此，例如，“一个(a)”可以表示多于一个，且“一个实施方式”可以表示描述适用于多个实施方式。
援引并入
本文引用的所有参考文献，包括专利、专利申请、论文、教科书等，以及其中引用的参考文献(如果尚未引用)，均通过引用其全部内容并入本文。如果一个或多个所并入的文献和类似材料与本申请不同或矛盾，包括但不限于所定义的术语、术语用法、所描述的技术等，则以本申请为准。
等效物
上述描述详述了某些实施方式。然而，应当理解，无论前述内容在文本中显示得多么详细，本发明可以以多种方式实施，并且本发明应当根据所附权利要求及其任何等效物来解释。
序列表
<110> 伊麦吉纳博公司
亚历山德罗·马肖尼
伊朗·安德鲁·威尔逊
伊凡·普莱韦克
威廉·赫·莱
<120> 使用多种成像剂的成像方法
<130> IGNAB.050WO
<150> 62/944183
<151> 2019-12-05
<160> 265
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 118
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 1
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Cys Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 120
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
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Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 4
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Cys Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
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Thr Leu Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 智人
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Val Asp Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Glu Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Thr Ala Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
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Leu Val Thr Val Ser Ser
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<210> 7
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 7
Asp Val Gln Ile Asn Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Thr Ser Arg Ser Ile Ser Gln Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 9
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser Ile Ser Gln Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 10
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 10
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Gln Ile Asn Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala
20 25 30
Ala Ser Pro Gly Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Gly Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly
145 150 155 160
Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala
210 215 220
Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 11
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 11
atggagacag acaccctgct cctgtgggtg ctgctcctct gggtccctgg atccaccggc 60
gatgtccaga tcaaccaaag ccccagcttt ctggctgcct cccctggaga gacaatcacc 120
atcaattgcc ggaccagccg gagcatttcc cagtacctcg cctggtacca ggaaaagcct 180
ggcaagacca acaagctgct gatctactcc ggctccacac tccagagcgg cattccctcc 240
aggtttagcg gatccggatc cggaaccgac ttcacactca ccatctccgg cctggagccc 300
gaggacttcg ccatgtatta ttgccagcag cacaatgaga accccctgac cttcggcgct 360
ggcaccaagc tggagctgaa aggctccacc agcggaggcg gatccggagg aggaagcggc 420
ggcggaggct cctccgaagt gcagctgcaa cagagcggcg ccgaactggt gaagcctgga 480
gcttccgtga aactcagctg taccgccagc ggcttcaaca tcaaggatac ctacatccac 540
ttcgtgcggc aaaggcctga gcagggcctg gaatggatcg gcaggatcga ccccgccaac 600
gacaacaccc tctacgcctc caagttccaa ggcaaggcca caatcaccgc tgatacaagc 660
tccaacaccg cctacatgca cctcagctcc ctgaccagcg gagacaccgc cgtgtactac 720
tgcggacggg gatacggcta ctatgtgttc gaccactggg gccaaggcac cacactcacc 780
gtgtcctccg agcccaagtc ctgcgacaag acacacacct gtcccccttg tggaggagga 840
tcctccggag gcggctccgg cggacagcct agggagcccc aggtgtacac actgccccct 900
tccagggacg aactcaccaa gaaccaggtg tccctgacct gcctggtgaa gggattctac 960
cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagtcc aacggccaac ccgagaacaa ttacaagacc 1020
accccccctg tgctcgattc cgacggctcc ttcttcctgt actccaagct caccgtggac 1080
aagtcccggt ggcaacaggg caatgtgttc tcctgcagcg tcatgcacga ggccctgcat 1140
aaccactaca cccagaaatc cctcagcctc tcccctggaa aatga 1185
<210> 12
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 12
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val
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Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr
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Ala Ser Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser
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Asn Thr Ala Tyr Met His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala
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Val Tyr Tyr Cys Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Val Gln Ile
145 150 155 160
Asn Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala Ala Ser Pro Gly Glu Thr Ile Thr
165 170 175
Ile Asn Cys Arg Thr Ser Arg Ser Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr
180 185 190
Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser
195 200 205
Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
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Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala
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Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Ala
245 250 255
Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<210> 13
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 13
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acctccggag gcggaagcgg cggaggatcc ggaggaggag gctcctccga cgtgcaaatc 480
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tccggatccg gaaccgactt taccctgacc atcagcggcc tggaacccga ggatttcgcc 720
atgtactact gccagcagca caacgagaat cccctgacct ttggagccgg cacaaagctc 780
gagctgaagg agcccaagag ctgcgacaaa acccacacct gtcccccttg cggaggagga 840
tcctccggcg gcggaagcgg aggacaaccc agggagcccc aggtctacac cctgcctcct 900
agccgggacg aactgacaaa gaaccaggtg tccctgacct gtctcgtcaa gggcttctac 960
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<210> 14
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 14
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
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Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
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Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
145 150 155 160
Ala Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala
210 215 220
Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 15
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 15
atggagacag acaccctcct gctgtgggtc ctgctgctgt gggtgcctgg cagcacagga 60
gacatccaaa tgacccagtc ccctagcagc ctcagcgctt ccgtcggaga cagggtcacc 120
atcacatgca ggacctccag gtccatcagc cagtatctgg cctggtatca gcagaaaccc 180
ggcaaggtgc ctaagctgct gatctacagc ggcagcacac tccagagcgg agtgcccagc 240
cggttttccg gaagcggatc cggaaccgac ttcaccctga ccatttccag cctgcaacct 300
gaagacgtgg ccacctacta ctgtcagcag cacaacgaga accccctcac cttcggcgga 360
ggcaccaaag tcgagatcaa gggcagcacc agcggaggag gaagcggcgg aggctccgga 420
ggaggaggct cctcccaagt gcagctcgtc caaagcggcg ctgaggtgaa aaagcccggc 480
gccacagtca aaatctcctg caaggtcagc ggcttcaaca tcaaggatac ctacatccac 540
tgggtgcaac aggcccccgg caaaggactc gaatggatgg gccggatcga ccctgctaac 600
gacaacacac tctacgcctc caagttccag ggcagggtga ccatcaccgc cgatacctcc 660
accgacacag cctacatgga gctgagcagc ctgaggtccg aggacaccgc cgtctattac 720
tgcgcccggg gatacggcta ctacgtgttt gaccattggg gacagggaac actcgtgacc 780
gtgagctccg agcccaagag ctgcgacaag acccacacat gtcctccttg cggaggaggc 840
agctccggag gcggatccgg cggacaacct agggagcccc aggtctatac cctgcccccc 900
agcagggacg agctgacaaa gaaccaggtc tccctgacct gcctggtgaa aggattctac 960
cccagcgaca tcgctgtcga atgggagtcc aacggccagc ccgagaacaa ctacaagaca 1020
accccccccg tgctggattc cgacggcagc ttcttcctct actccaagct gaccgtcgac 1080
aagtccaggt ggcagcaggg caacgtgttt tcctgctccg tgatgcatga ggccctgcac 1140
aaccactaca cccagaagtc cctgagcctc agccctggca agtga 1185
<210> 16
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 16
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
20 25 30
Lys Pro Gly Ala Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn
35 40 45
Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Ala Ser Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr
85 90 95
Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Met
145 150 155 160
Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr
165 170 175
Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr
180 185 190
Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser
195 200 205
Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
210 215 220
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala
225 230 235 240
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly
245 250 255
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 17
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 17
atggagaccg atacactgct gctctgggtg ctgctgctgt gggtgcctgg aagcaccgga 60
caggtgcaac tggtccagtc cggcgccgag gtgaaaaagc ctggcgccac cgtcaagatc 120
tcctgtaagg tgagcggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcagcaggct 180
cccggaaagg gactggagtg gatgggcagg atcgaccctg ccaatgacaa caccctctac 240
gccagcaagt tccaaggacg ggtgaccatc acagccgaca catccaccga cacagcctat 300
atggagctct ccagcctgag gtccgaggac accgccgtgt actactgtgc caggggatac 360
ggctattacg tgttcgacca ctggggacag ggcaccctgg tgaccgtgag cagcggaagc 420
accagcggcg gaggcagcgg aggcggaagc ggcggcggcg gatcctccga cattcagatg 480
acccaatccc cctccagcct gtccgctagc gtgggagaca gggtgacaat cacatgtcgg 540
acctccaggt ccatcagcca atatctcgcc tggtatcagc agaagcccgg caaggtgccc 600
aagctcctga tctacagcgg ctccaccctc caaagcggag tgccttcccg gtttagcgga 660
agcggcagcg gcacagactt taccctgaca atcagctccc tgcaacctga ggacgtcgcc 720
acatactact gccagcagca caacgagaac cctctcacct ttggcggcgg caccaaagtg 780
gagatcaagg agcccaaatc ctgcgacaag acacacacct gccccccttg tggaggaggc 840
agctccggcg gcggcagcgg cggacaaccc cgggaacctc aggtgtatac actcccccct 900
tccagggatg agctgaccaa gaaccaagtc tccctgacct gtctggtgaa aggcttctac 960
ccctccgaca tcgctgtcga gtgggagagc aacggccagc ccgaaaacaa ctataagacc 1020
accccccccg tgctcgattc cgatggcagc ttcttcctgt actccaagct cacagtcgac 1080
aagagccggt ggcaacaggg caacgtcttc tcctgtagcg tcatgcacga ggccctccac 1140
aaccactaca cccagaagtc cctctccctg agccccggaa aatga 1185
<210> 18
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 18
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn
145 150 155 160
Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr
180 185 190
Ala Ser Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250
<210> 19
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 19
atggagaccg atacactgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtccctgg cagcacagga 60
gacatccaga tgacacagag ccctagctcc ctgagcgctt ccgtgggaga tagggtgacc 120
atcacatgcc ggacctccag gtccatctcc cagtacctgg cctggtacca gcagaagccc 180
ggcaaggtgc ccaagctgct catctatagc ggcagcaccc tgcagagcgg agtgccttcc 240
cggttttccg gatccggctc cggcacagac tttaccctga ccatctccag cctgcagcct 300
gaggatgtcg ccacctacta ctgccaacag cacaacgaga accccctgac cttcggcggc 360
ggaaccaagg tcgagatcaa gtccggagga ggaggccaag tgcagctggt ccaatccggc 420
gccgaagtga aaaagcccgg cgccaccgtg aagatcagct gcaaggtgtc cggcttcaac 480
atcaaggaca cctatatcca ctgggtccag caagcccccg gaaaaggcct ggagtggatg 540
ggacggattg accccgccaa cgacaacaca ctctatgcct ccaagttcca gggcagggtg 600
acaatcaccg ccgacaccag caccgacaca gcttatatgg agctgtcctc cctccggtcc 660
gaggataccg ccgtctacta ctgcgccagg ggctacggct actacgtgtt tgaccactgg 720
ggccagggca ccctggtgac agtgtccagc ggaggctgc 759
<210> 20
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 20
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ser Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
145 150 155 160
Ala Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala
210 215 220
Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 21
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 21
atggagaccg acaccctgct gctctgggtc ctcctgctgt gggtgcctgg cagcacagga 60
caggtgcaac tggtgcagag cggcgccgag gtcaagaaac ctggcgccac cgtgaagatc 120
agctgcaagg tgtccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt ccaacaagcc 180
cccggaaagg gcctggaatg gatgggccgg attgaccccg ccaacgacaa caccctctat 240
gccagcaagt tccagggcag ggtcaccatc accgccgaca ccagcaccga caccgcctac 300
atggagctga gcagcctgcg gagcgaagac accgccgtgt actactgcgc caggggctac 360
ggctactacg tcttcgacca ttggggacag ggcaccctcg tgacagtgtc cagctccggc 420
ggaggaggag atatccagat gacccagagc ccttccagcc tgtccgcttc cgtgggagat 480
cgggtgacca tcacatgcag gacctccagg tccatctccc agtacctggc ctggtaccaa 540
cagaagcccg gcaaggtgcc caagctgctg atctacagcg gcagcacact gcaatccggc 600
gtcccttccc ggttttccgg atccggatcc ggcaccgact tcaccctgac catcagctcc 660
ctgcaacccg aggacgtggc cacctactac tgtcagcagc acaacgagaa ccccctcacc 720
tttggcggcg gaaccaaggt cgagatcaag ggcggctgc 759
<210> 22
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 22
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala
130 135 140
Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser
145 150 155 160
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro
165 170 175
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn
180 185 190
Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp
195 200 205
Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu
210 215 220
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe
225 230 235 240
Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250 255
<210> 23
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 23
atggagaccg atacactgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtccctgg cagcacagga 60
gacatccaga tgacacagag ccctagctcc ctgagcgctt ccgtgggaga tagggtgacc 120
atcacatgcc ggacctccag gtccatctcc cagtacctgg cctggtacca gcagaagccc 180
ggcaaggtgc ccaagctgct catctatagc ggcagcaccc tgcagagcgg agtgccttcc 240
cggttttccg gatccggctc cggcacagac tttaccctga ccatctccag cctgcagcct 300
gaggatgtcg ccacctacta ctgccaacag cacaacgaga accccctgac cttcggcggc 360
ggaaccaagg tcgagatcaa gggaggaggc tccggaggag gaggccaagt gcagctggtc 420
caatccggcg ccgaagtgaa aaagcccggc gccaccgtga agatcagctg caaggtgtcc 480
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gagtggatgg gacggattga ccccgccaac gacaacacac tctatgcctc caagttccag 600
ggcagggtga caatcaccgc cgacaccagc accgacacag cttatatgga gctgtcctcc 660
ctccggtccg aggataccgc cgtctactac tgcgccaggg gctacggcta ctacgtgttt 720
gaccactggg gccagggcac cctggtgaca gtgtccagcg gaggctgc 768
<210> 24
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 24
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
20 25 30
Lys Pro Gly Ala Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn
35 40 45
Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Ala Ser Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr
85 90 95
Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
145 150 155 160
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser Ile Ser
165 170 175
Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu
180 185 190
Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
210 215 220
Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Asn
225 230 235 240
Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Cys
245 250 255
<210> 25
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 25
atggagaccg acaccctgct gctctgggtc ctcctgctgt gggtgcctgg cagcacagga 60
caggtgcaac tggtgcagag cggcgccgag gtcaagaaac ctggcgccac cgtgaagatc 120
agctgcaagg tgtccggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt ccaacaagcc 180
cccggaaagg gcctggaatg gatgggccgg attgaccccg ccaacgacaa caccctctat 240
gccagcaagt tccagggcag ggtcaccatc accgccgaca ccagcaccga caccgcctac 300
atggagctga gcagcctgcg gagcgaagac accgccgtgt actactgcgc caggggctac 360
ggctactacg tcttcgacca ttggggacag ggcaccctcg tgacagtgtc cagcggagga 420
ggatccggcg gaggaggaga tatccagatg acccagagcc cttccagcct gtccgcttcc 480
gtgggagatc gggtgaccat cacatgcagg acctccaggt ccatctccca gtacctggcc 540
tggtaccaac agaagcccgg caaggtgccc aagctgctga tctacagcgg cagcacactg 600
caatccggcg tcccttcccg gttttccgga tccggatccg gcaccgactt caccctgacc 660
atcagctccc tgcaacccga ggacgtggcc acctactact gtcagcagca caacgagaac 720
cccctcacct ttggcggcgg aaccaaggtc gagatcaagg gcggctgc 768
<210> 26
<211> 321
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 26
gatgtccaga taaaccagtc tccatctttt cttgctgcgt ctcctggaga aaccattact 60
ataaattgca ggacaagtag gagtattagt caatatttag cctggtatca agagaaacct 120
gggaaaacta ataagcttct tatctactct ggatccactc tgcaatctgg aattccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tggtacagat ttcactctca ccatcagtgg cctggagcct 240
gaagattttg caatgtatta ctgtcaacag cataatgaaa acccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa g 321
<210> 27
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 27
Asp Val Gln Ile Asn Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ile Thr Ile Asn Cys Arg Thr Ser Arg Ser Ile Ser Gln Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Lys Thr Asn Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Met Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 28
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 28
gacgtccaga taacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca ggacaagtag gagtattagt caatatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagttc ctaagctcct gatctattct ggatccactc tgcaatctgg agtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaacag cataatgaaa acccgctcac gttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 29
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 29
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser Ile Ser Gln Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 30
<211> 354
<212> DNA
<213> 小鼠
<400> 30
gaggtccagc tgcagcagtc tggggcagag cttgtgaagc caggggcctc agtcaagttg 60
tcctgcacag cttctggctt caacattaaa gacacctata tacacttcgt gaggcagagg 120
cctgaacagg gcctggagtg gattggaagg attgatcctg cgaatgataa tactttatat 180
gcctcaaagt tccagggcaa ggccactata acagcagaca catcatccaa cacagcctac 240
atgcacctct gcagcctgac atctggggac actgccgtct attactgtgg tagaggttat 300
ggttactacg tatttgacca ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354
<210> 31
<211> 118
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 31
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met His Leu Cys Ser Leu Thr Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 32
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 32
gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcagc cgggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgcgg cgagcggctt taacattaaa gatacctata ttcattttgt gcgccaggcg 120
ccgggcaaag gcctggaatg gattggccgc attgatccgg cgaacgataa caccctgtat 180
gcgagcaaat ttcagggcaa agcgaccatt agcgcggata ccagcaaaaa caccgcgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgcgggagat accgcggtgt attattgcgg ccgcggctat 300
ggctattatg tgtttgatca ttggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag cagc 354
<210> 33
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 34
gaagtgcagc tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcagc cgggcggcag cctgcgcctg 60
agctgcgcgg cgagcggctt taacattaaa gatacctata ttcattttgt gcgccaggcg 120
ccgggcaaag gcctggaatg gattggccgc attgatccgg cgaacgataa caccctgtat 180
gcgagcaaat ttcagggcaa agcgaccatt agcgcggata ccagcaaaaa caccgcgtat 240
ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt attattgcgg ccgcggctat 300
ggctattatg tgtttgatca ttggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag cagc 354
<210> 35
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 36
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 36
caggtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgac cgtgaaaatt 60
agctgcaaag tgagcggctt taacattaaa gatacctata ttcattttgt gcagcaggcg 120
ccgggcaaag gcctggaatg gattggccgc attgatccgg cgaacgataa caccctgtat 180
gcgagcaaat ttcagggcaa agcgaccatt accgcggata ccagcaccga taccgcgtat 240
atggaactga gcagcctgcg cagcggagat accgcggtgt attattgcgg ccgcggctat 300
ggctattatg tgtttgatca ttggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag cagc 354
<210> 37
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 38
caggtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgac cgtgaaaatt 60
agctgcaaag tgagcggctt taacattaaa gatacctata ttcattttgt gcagcaggcg 120
ccgggcaaag gcctggaatg gattggccgc attgatccgg cgaacgataa caccctgtat 180
gcgagcaaat ttcagggcaa agcgaccatt accgcggata ccagcaccga taccgcgtat 240
atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgg ccgcggctat 300
ggctattatg tgtttgatca ttggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag cagc 354
<210> 39
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其片段
<400> 39
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 40
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 连接序列
<400> 40
Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Ser
<210> 41
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M 可变重链序列
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 42
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 EH1
<400> 42
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 43
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 43
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 44
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 44
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 45
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 CH3
<400> 45
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 46
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 EH2
<400> 46
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 47
Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 48
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH1
<400> 48
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 49
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 上铰合
<400> 49
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
1 5 10
<210> 50
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 CH3 (G1m1 同种异型)
<400> 50
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
1 5 10 15
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 51
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 CH3 (nG1m1 同种异型)
<400> 51
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
1 5 10 15
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
20 25 30
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
35 40 45
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
50 55 60
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
65 70 75 80
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
85 90 95
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
100 105
<210> 52
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 NH1
<400> 52
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 53
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
1 5
<210> 54
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 NH2
<400> 54
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro
<210> 55
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH3
<400> 55
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25
<210> 56
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 上铰合
<400> 56
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
1 5 10
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 57
Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys
1 5
<210> 58
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH5
<400> 58
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25 30
<210> 59
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 59
Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys
1 5 10
<210> 60
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG3/IgG1 EH6
<400> 60
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Val Glu Cys
1 5 10 15
Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25
<210> 61
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 上铰合
<400> 61
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr
1 5 10
<210> 62
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 62
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
1 5
<210> 63
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG3/IgG1 EH7
<400> 63
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25
<210> 64
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG3/IgG1 EH8
<400> 64
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25 30
<210> 65
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH2
<400> 65
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 66
<211> 396
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 1 EH3(微抗体 1)
<400> 66
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala
210 215 220
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
290 295 300
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
305 310 315 320
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
325 330 335
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
340 345 350
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
355 360 365
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
370 375 380
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
385 390 395
<210> 67
<211> 1191
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 1 EH3(M1)
<400> 67
atggagaccg ataccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgcccgg ctccacaggc 60
gatgtgcaga tcacacagag ccctagcagc ctgagcgcca gcgtgggaga tagagtcacc 120
atcacatgca ggaccagcag aagcattagc cagtacctgg cctggtacca gcaaaagccc 180
ggcaaggtgc ccaagctgct gatctacagc ggctccaccc tgcagagcgg cgtgcccagc 240
agattctccg gctccggaag cggcacagac tttaccctga ccatctcctc cctgcagccc 300
gaggatgtcg ccacctacta ctgccagcag cacaacgaaa accccctgac atttggcggc 360
ggcaccaagg tggagatcaa gggcagcacc agcggtggag gaagtggagg tggaagtgga 420
ggaggcggaa gcagcgaggt gcagctggtg gagagtggtg gaggactggt gcagcccgga 480
ggcagcctga gactgagctg tgctgcctcc ggattcaata tcaaggacac ctacatccac 540
ttcgtgagac aggcccccgg caagggactg gagtggattg gaaggatcga ccccgccaac 600
gacaacaccc tgtacgccag caaattccag ggcaaggcca caatcagcgc cgacaccagc 660
aagaacaccg cctatctgca gatgaactcc ctgagagccg aggacacagc cgtgtactac 720
tgcggcaggg gctacggcta ttacgtgttc gaccactggg gccagggcac cctggtgaca 780
gtgagcagcg aacccaagag ctccgacaag acccacacct gtcccccttg ccctccttgt 840
ggcggaggaa gctccggagg cggaagcgga ggacagccta gggagcccca ggtgtatacc 900
ctccccccct ccagggaaga gatgaccaag aaccaggtga gcctgacctg cctcgtgaag 960
ggcttttatc cctccgatat cgccgtggag tgggagagca acggccagcc tgagaacaat 1020
tacaagacca ccccccctgt gctggactcc gatggcagct tcttcctgta ttccaagctg 1080
accgtcgaca agtccaggtg gcaacagggc aacgtcttca gctgcagcgt gatgcacgag 1140
gccctgcaca atcactacac ccagaagtcc ctctccctga gccccggctg a 1191
<210> 68
<211> 1200
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 1 EH5(M1)
<400> 68
atggagacag acaccctcct cctgtgggtg ctgctgctgt gggtgcccgg atccaccgga 60
gacgtgcaga tcacacagag ccccagctcc ctgtccgcta gcgtgggcga cagagtgacc 120
atcacctgca ggaccagcag gagcatctcc cagtacctcg cttggtacca gcagaagcct 180
ggcaaggtgc ccaagctgct gatttacagc ggatccaccc tgcagagcgg cgtgcctagc 240
aggtttagcg gcagcggatc cggaacagac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcct 300
gaagatgtgg ccacctacta ctgtcagcag cacaacgaaa accccctcac cttcggcggc 360
ggcacaaagg tggaaatcaa gggcagcacc tccggaggag gcagcggcgg aggcagcgga 420
ggcggcggct ccagcgaagt gcagctggtc gagagcggag gcggactggt gcaacccgga 480
ggaagcctga ggctgagctg tgccgccagc ggcttcaaca tcaaggacac atacattcac 540
tttgtgaggc aggctcctgg aaagggcctg gagtggatcg gcagaatcga ccccgctaac 600
gacaacaccc tgtacgccag caagttccag ggcaaggcca ccatctccgc cgacacaagc 660
aagaataccg cctacctgca gatgaactcc ctgagggccg aggataccgc cgtgtactac 720
tgcggcaggg gctatggcta ctacgtgttt gaccactggg gccagggcac actggtgaca 780
gtgagctccg agcccaagag ctccgacaag acacacacct gccctccttg ccccccttgt 840
cctccctgtg gaggaggaag cagcggagga ggaagcggcg gacagcccag agagcctcaa 900
gtgtataccc tgcccccctc cagggaagag atgaccaaga accaggtgag cctgacatgc 960
ctggtcaaag gcttctaccc cagcgatatt gctgtggagt gggagagcaa cggccagccc 1020
gagaacaact acaagaccac accccccgtc ctggatagcg atggcagctt cttcctgtac 1080
agcaagctga ccgtggacaa gtccaggtgg cagcagggca acgtcttctc ctgcagcgtg 1140
atgcacgagg ctctgcataa ccactacaca cagaagtccc tcagcctgag ccctggatga 1200
<210> 69
<211> 399
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 1 EH5(M1)
<400> 69
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala
210 215 220
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser
275 280 285
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
290 295 300
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
305 310 315 320
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
325 330 335
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
340 345 350
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
355 360 365
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
370 375 380
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
385 390 395
<210> 70
<211> 398
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 1 EH7(微抗体 1)
<400> 70
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala
210 215 220
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr
260 265 270
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
290 295 300
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
305 310 315 320
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
325 330 335
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
340 345 350
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
355 360 365
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
370 375 380
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
385 390 395
<210> 71
<220>
<223> IAB22M gamma 1 EH7(微抗体 1)
<400> 71
000
<210> 72
<211> 401
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 1 EH8(微抗体 1)
<400> 72
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala
210 215 220
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr
260 265 270
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly
275 280 285
Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
290 295 300
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
305 310 315 320
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
325 330 335
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
340 345 350
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
355 360 365
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
370 375 380
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
385 390 395 400
Gly
<210> 73
<211> 1206
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 1 EH8(微抗体 1)
<400> 73
atggagacag acaccctcct cctgtgggtg ctgctgctgt gggtgcccgg atccaccgga 60
gacgtgcaga tcacacagag ccccagctcc ctgtccgcta gcgtgggcga cagagtgacc 120
atcacctgca ggaccagcag gagcatctcc cagtacctcg cttggtacca gcagaagcct 180
ggcaaggtgc ccaagctgct gatttacagc ggatccaccc tgcagagcgg cgtgcctagc 240
aggtttagcg gcagcggatc cggaacagac ttcaccctga ccatcagcag cctgcagcct 300
gaagatgtgg ccacctacta ctgtcagcag cacaacgaaa accccctcac cttcggcggc 360
ggcacaaagg tggaaatcaa gggcagcacc tccggaggag gcagcggcgg aggcagcgga 420
ggcggcggct ccagcgaagt gcagctggtc gagagcggag gcggactggt gcaacccgga 480
ggaagcctga ggctgagctg tgccgccagc ggcttcaaca tcaaggacac atacattcac 540
tttgtgaggc aggctcctgg aaagggcctg gagtggatcg gcagaatcga ccccgctaac 600
gacaacaccc tgtacgccag caagttccag ggcaaggcca ccatctccgc cgacacaagc 660
aagaataccg cctacctgca gatgaactcc ctgagggccg aggataccgc cgtgtactac 720
tgcggcaggg gctatggcta ctacgtgttt gaccactggg gccagggcac actggtgaca 780
gtgagctccg agctgaagac acctctgggc gacacaacac acacctgccc tccttgcccc 840
ccttgtcctc cctgtggagg aggaagcagc ggaggaggaa gcggcggaca gcccagagag 900
cctcaagtgt ataccctgcc cccctccagg gaagagatga ccaagaacca ggtgagcctg 960
acatgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gatattgctg tggagtggga gagcaacggc 1020
cagcccgaga acaactacaa gaccacaccc cccgtcctgg atagcgatgg cagcttcttc 1080
ctgtacagca agctgaccgt ggacaagtcc aggtggcagc agggcaacgt cttctcctgc 1140
agcgtgatgc acgaggctct gcataaccac tacacacaga agtccctcag cctgagccct 1200
ggatga 1206
<210> 74
<211> 391
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 2 EH2(微抗体 1)
<400> 74
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala
210 215 220
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro
260 265 270
Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro
275 280 285
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
290 295 300
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
305 310 315 320
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
325 330 335
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
340 345 350
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
355 360 365
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
370 375 380
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
385 390
<210> 75
<211> 1236
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 2 EH2(微抗体 1)
<400> 75
atggaaaccg acacactgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtccctgg ctccaccgga 60
gacgtccaga tcacacagag ccccagcagc ctgtccgcca gcgtgggaga cagggtgacc 120
gacgtccaga tcacacagag ccccagcagc ctgtccgcca gcgtgggaga cagggtgacc 180
gacgtccaga tcacacagag ccccagcagc ctgtccgcca gcgtgggaga cagggtgacc 240
ggcaaggtcc ccaaactgct gatctacagc ggctccaccc tgcagtccgg cgtgcctagc 300
aggttctccg gcagcggatc cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagcct 360
gaggacgtgg ctacctacta ctgccaacag cacaacgaga accccctgac ctttggaggc 420
ggcaccaagg tggaaatcaa gggcagcacc agcggcggag gaagcggagg aggatccgga 480
ggaggcggaa gctccgaggt gcagctggtg gaaagcggcg gcggactggt gcagcctgga 540
ggaagcctca gactgagctg tgccgccagc ggattcaaca tcaaagacac ctacattcat 600
ttcgtgagac aggcccccgg caagggcctc gaatggatcg gaaggatcga ccccgctaac 660
gacaataccc tgtacgcctc caagttccag ggaaaggcca ccatctccgc cgatacctcc 720
aagaacaccg cctacctcca gatgaactcc ctgagggccg aagataccgc cgtctactac 780
tgtggcaggg gctacggcta ctatgtgttc gatcactggg gccaaggaac cctggtgacc 840
gtgagcagcg aaaggaagag ctgcgtggag tgtcctcctt gtcccggcgg cggctccagc 900
ggcggaggct ccggcggcca gcctagagaa cctcaggtgt acaccctccc cccctccaga 960
gaggagatga ccaagaacca ggtgtccctg acctgcctgg tgaaaggctt ctatcccagc 1020
gacatcgccg tggaatggga gtccaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccacccct 1080
cccatgctgg attccgacgg cagctttttc ctgtacagca agctcaccgt ggacaagagc 1140
agatggcagc agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggctct gcataaccac 1200
tacacccaga agagcctgtc cctgtccccc ggatga 1236
<210> 76
<211> 391
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 2 EH2(微抗体 1)(VH-K67R)
<400> 76
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser
35 40 45
Ile Ser Gln Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn
100 105 110
Glu Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
165 170 175
Thr Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
180 185 190
Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys
195 200 205
Phe Gln Gly Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala
210 215 220
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225 230 235 240
Cys Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro
260 265 270
Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro
275 280 285
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
290 295 300
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
305 310 315 320
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
325 330 335
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
340 345 350
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
355 360 365
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
370 375 380
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
385 390
<210> 77
<211> 1176
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M gamma 2 EH2(微抗体 1)
<400> 77
atggagaccg acaccctcct cctgtgggtg ctgctgctgt gggtgcctgg aagcaccggc 60
gatgtgcaga tcacccagag ccctagcagc ctgtccgctt ccgtgggcga cagggtgacc 120
atcacctgta ggacctccag gagcatctcc cagtacctgg cctggtacca gcagaagccc 180
ggcaaggtgc ccaaactgct catctactcc ggcagcacac tccagagcgg cgtccctagc 240
agattcagcg gaagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagctc cctgcagccc 300
gaggacgtgg ccacctatta ctgtcagcag cacaacgaaa accccctgac cttcggcggc 360
ggcacaaaag tggagatcaa gggcagcacc agcggaggcg gatccggcgg cggcagcggc 420
ggcggaggat ccagcgaagt gcagctggtc gaaagcggag gcggactggt gcagcctgga 480
ggaagcctga gactcagctg cgccgcctcc ggattcaaca tcaaggacac ctacatccac 540
ttcgtgaggc aggctcccgg caaaggcctc gagtggattg gaaggattga ccccgccaac 600
gacaacaccc tgtacgccag caagttccaa ggaagggcca ccatctccgc cgacaccagc 660
aagaataccg cctacctgca gatgaactcc ctgagggctg aggacaccgc cgtgtactac 720
tgcggcagag gctacggcta ctacgtgttc gaccactggg gacagggcac actggtgaca 780
gtgagcagcg agaggaaaag ctgcgtggag tgccccccct gccctggcgg cggcagctcc 840
ggcggaggaa gcggaggaca acccagggag ccccaggtgt acacactccc ccctagcagg 900
gaagagatga ccaagaacca ggtgtccctg acctgcctcg tgaagggatt ctaccccagc 960
gacattgccg tcgagtggga gagcaacggc cagcctgaga acaactacaa gacaaccccc 1020
cctatgctcg atagcgatgg ctccttcttc ctgtactcca agctcaccgt cgacaagagc 1080
aggtggcagc agggcaacgt cttctcctgt agcgtgatgc acgaggctct gcacaaccac 1140
tacacccaga agagcctgag cctgagcccc ggctga 1176
<210> 78
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22M 可变重链 (VH-K67R) 序列
<400> 78
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 79
<211> 376
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB22 (CD8)
<400> 79
Asp Val Gln Ile Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Arg Ser Ile Ser Gln Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asn Glu Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Val Gln
115 120 125
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
130 135 140
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His
145 150 155 160
Phe Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Ile
165 170 175
Asp Pro Ala Asn Asp Asn Thr Leu Tyr Ala Ser Lys Phe Gln Gly Lys
180 185 190
Ala Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met
195 200 205
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly Arg Gly
210 215 220
Tyr Gly Tyr Tyr Val Phe Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
225 230 235 240
Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
245 250 255
Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln
260 265 270
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
275 280 285
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
290 295 300
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
305 310 315 320
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
325 330 335
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
340 345 350
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
355 360 365
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375
<210> 80
<211> 235
<212> PRT
<213> 智人
<400> 80
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr
20 25 30
Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser
35 40 45
Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala
50 55 60
Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala
65 70 75 80
Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp
85 90 95
Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe
115 120 125
Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His
195 200 205
Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser
210 215 220
Gly Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Val
225 230 235
<210> 81
<211> 235
<212> PRT
<213> 智人
<400> 81
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr
20 25 30
Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser
35 40 45
Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala
50 55 60
Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala
65 70 75 80
Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp
85 90 95
Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Tyr
100 105 110
Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe
115 120 125
Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His
195 200 205
Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser
210 215 220
Gly Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Val
225 230 235
<210> 82
<211> 210
<212> PRT
<213> 智人
<400> 82
Met Arg Pro Arg Leu Trp Leu Leu Leu Ala Ala Gln Leu Thr Val Leu
1 5 10 15
His Gly Asn Ser Val Leu Gln Gln Thr Pro Ala Tyr Ile Lys Val Gln
20 25 30
Thr Asn Lys Met Val Met Leu Ser Cys Glu Ala Lys Ile Ser Leu Ser
35 40 45
Asn Met Arg Ile Tyr Trp Leu Arg Gln Arg Gln Ala Pro Ser Ser Asp
50 55 60
Ser His His Glu Phe Leu Ala Leu Trp Asp Ser Ala Lys Gly Thr Ile
65 70 75 80
His Gly Glu Glu Val Glu Gln Glu Lys Ile Ala Val Phe Arg Asp Ala
85 90 95
Ser Arg Phe Ile Leu Asn Leu Thr Ser Val Lys Pro Glu Asp Ser Gly
100 105 110
Ile Tyr Phe Cys Met Ile Val Gly Ser Pro Glu Leu Thr Phe Gly Lys
115 120 125
Gly Thr Gln Leu Ser Val Val Asp Phe Leu Pro Thr Thr Ala Gln Pro
130 135 140
Thr Lys Lys Ser Thr Leu Lys Lys Arg Val Cys Arg Leu Pro Arg Pro
145 150 155 160
Glu Thr Gln Lys Gly Pro Leu Cys Ser Pro Val Thr Leu Gly Leu Leu
165 170 175
Val Ala Gly Val Leu Val Leu Leu Val Ser Leu Gly Val Ala Met His
180 185 190
Leu Cys Cys Arg Arg Arg Arg Ala Arg Leu Arg Phe Met Lys Gln Phe
195 200 205
Tyr Lys
210
<210> 83
<211> 56
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAX16H5
<400> 83
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Gln Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val
50 55
<210> 84
<211> 56
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB41
<400> 84
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val
50 55
<210> 85
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MAX16H5
<400> 85
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Ala Met Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55
<210> 86
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IAB41
<400> 86
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro
50 55
<210> 87
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 信号肽
<400> 87
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly
20
<210> 88
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 微抗体
<400> 88
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gln Val Gln Leu
115 120 125
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val
130 135 140
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr Trp Met His Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Ala Leu Tyr
165 170 175
Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val
180 185 190
Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser
195 200 205
Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Met Gly
210 215 220
Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
260 265 270
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
275 280 285
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
290 295 300
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
305 310 315 320
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
325 330 335
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
340 345 350
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
355 360 365
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375
<210> 89
<211> 380
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 微抗体
<400> 89
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gln Val Gln Leu
115 120 125
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val
130 135 140
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr Trp Met His Trp
145 150 155 160
Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly Ala Leu Tyr
165 170 175
Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val
180 185 190
Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser
195 200 205
Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Met Gly
210 215 220
Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
275 280 285
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
290 295 300
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
305 310 315 320
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
325 330 335
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
340 345 350
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
355 360 365
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375 380
<210> 90
<211> 377
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 微抗体
<400> 90
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser
145 150 155 160
Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Leu Ala
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
260 265 270
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
275 280 285
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
290 295 300
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
305 310 315 320
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
325 330 335
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
340 345 350
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
355 360 365
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375
<210> 91
<211> 380
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 微抗体
<400> 91
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln
130 135 140
Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser
145 150 155 160
Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Asn Leu Ala
180 185 190
Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
275 280 285
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
290 295 300
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
305 310 315 320
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
325 330 335
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
340 345 350
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
355 360 365
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
370 375 380
<210> 92
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Cys-二体抗体
<400> 92
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Gln
100 105 110
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser
115 120 125
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr Trp
130 135 140
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
165 170 175
Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met
180 185 190
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
195 200 205
Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
210 215 220
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
225 230
<210> 93
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Cys-二体抗体
<400> 93
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Gln
100 105 110
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser
115 120 125
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr Trp
130 135 140
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
165 170 175
Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met
180 185 190
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
195 200 205
Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
210 215 220
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Pro Pro Cys
225 230 235
<210> 94
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Cys-二体抗体
<400> 94
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Gln
100 105 110
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser
115 120 125
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr Trp
130 135 140
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
165 170 175
Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met
180 185 190
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
195 200 205
Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
210 215 220
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
<210> 95
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Cys-二体抗体
<400> 95
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Ser Gly Gly Gly Gly Gln
100 105 110
Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser
115 120 125
Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr Trp
130 135 140
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
145 150 155 160
Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Gln
165 170 175
Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met
180 185 190
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr
195 200 205
Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
210 215 220
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys
<210> 96
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Cys-二体抗体
<400> 96
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Glu Ile Val
115 120 125
Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala
130 135 140
Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu Tyr Trp Tyr
145 150 155 160
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser
165 170 175
Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly
210 215 220
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Cys
225 230
<210> 97
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Cys-二体抗体
<400> 97
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Glu Ile Val
115 120 125
Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala
130 135 140
Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu Tyr Trp Tyr
145 150 155 160
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser
165 170 175
Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly
210 215 220
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Cys Pro Pro Cys
225 230 235
<210> 98
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Cys-二体抗体
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Glu Ile Val
115 120 125
Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala
130 135 140
Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu Tyr Trp Tyr
145 150 155 160
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser
165 170 175
Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly
210 215 220
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
<210> 99
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Cys-二体抗体
<400> 99
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ala Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Leu Tyr Pro Gly Asn Val Asp Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Met Gly Thr Thr Leu Glu Ala Pro Leu Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Glu Ile Val
115 120 125
Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala
130 135 140
Thr Leu Ser Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Leu Tyr Trp Tyr
145 150 155 160
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser
165 170 175
Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
180 185 190
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Ala Ala
195 200 205
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gly
210 215 220
Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly Gly Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys
<210> 100
<211> 433
<212> PRT
<213> 智人
<400> 100
Lys Lys Val Val Leu Gly Lys Lys Gly Asp Thr Val Glu Leu Thr Cys
1 5 10 15
Thr Ala Ser Gln Lys Lys Ser Ile Gln Phe His Trp Lys Asn Ser Asn
20 25 30
Gln Ile Lys Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Pro
35 40 45
Ser Lys Leu Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg Ser Leu Trp Asp Gln
50 55 60
Gly Asn Phe Pro Leu Ile Ile Lys Asn Leu Lys Ile Glu Asp Ser Asp
65 70 75 80
Thr Tyr Ile Cys Glu Val Glu Asp Gln Lys Glu Glu Val Gln Leu Leu
85 90 95
Val Phe Gly Leu Thr Ala Asn Ser Asp Thr His Leu Leu Gln Gly Gln
100 105 110
Ser Leu Thr Leu Thr Leu Glu Ser Pro Pro Gly Ser Ser Pro Ser Val
115 120 125
Gln Cys Arg Ser Pro Arg Gly Lys Asn Ile Gln Gly Gly Lys Thr Leu
130 135 140
Ser Val Ser Gln Leu Glu Leu Gln Asp Ser Gly Thr Trp Thr Cys Thr
145 150 155 160
Val Leu Gln Asn Gln Lys Lys Val Glu Phe Lys Ile Asp Ile Val Val
165 170 175
Leu Ala Phe Gln Lys Ala Ser Ser Ile Val Tyr Lys Lys Glu Gly Glu
180 185 190
Gln Val Glu Phe Ser Phe Pro Leu Ala Phe Thr Val Glu Lys Leu Thr
195 200 205
Gly Ser Gly Glu Leu Trp Trp Gln Ala Glu Arg Ala Ser Ser Ser Lys
210 215 220
Ser Trp Ile Thr Phe Asp Leu Lys Asn Lys Glu Val Ser Val Lys Arg
225 230 235 240
Val Thr Gln Asp Pro Lys Leu Gln Met Gly Lys Lys Leu Pro Leu His
245 250 255
Leu Thr Leu Pro Gln Ala Leu Pro Gln Tyr Ala Gly Ser Gly Asn Leu
260 265 270
Thr Leu Ala Leu Glu Ala Lys Thr Gly Lys Leu His Gln Glu Val Asn
275 280 285
Leu Val Val Met Arg Ala Thr Gln Leu Gln Lys Asn Leu Thr Cys Glu
290 295 300
Val Trp Gly Pro Thr Ser Pro Lys Leu Met Leu Ser Leu Lys Leu Glu
305 310 315 320
Asn Lys Glu Ala Lys Val Ser Lys Arg Glu Lys Ala Val Trp Val Leu
325 330 335
Asn Pro Glu Ala Gly Met Trp Gln Cys Leu Leu Ser Asp Ser Gly Gln
340 345 350
Val Leu Leu Glu Ser Asn Ile Lys Val Leu Pro Thr Trp Ser Thr Pro
355 360 365
Val Gln Pro Met Ala Leu Ile Val Leu Gly Gly Val Ala Gly Leu Leu
370 375 380
Leu Phe Ile Gly Leu Gly Ile Phe Phe Cys Val Arg Cys Arg His Arg
385 390 395 400
Arg Arg Gln Ala Glu Arg Met Ser Gln Ile Lys Arg Leu Leu Ser Glu
405 410 415
Lys Lys Thr Cys Gln Cys Pro His Arg Phe Gln Lys Thr Cys Ser Pro
420 425 430
Ile
<210> 101
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 101
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn
100 105
<210> 102
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人
<400> 102
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 103
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 103
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 119
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 104
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 105
<211> 115
<212> PRT
<213> 智人
<400> 105
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Glu Tyr Phe Gln His Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 106
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 106
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 107
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 107
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser
20 25 30
Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys
50 55 60
Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His
65 70 75 80
Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly
85 90 95
Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Gly Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser
130 135 140
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
145 150 155 160
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
165 170 175
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
180 185 190
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
195 200 205
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
210 215 220
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
225 230 235 240
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 108
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 108
atggaaaccg acactctgct gctgtgggtc ctgctgctgt gggtgcccgg atcaactgga 60
cagatcgtgc tgactcagtc tcccgctatc atgtctgcct cacctggcga aaaagtgaca 120
atgacctgtt ccgcctcttc ttccgtgtct tacatgaatt ggtaccagca gaaatctggg 180
actagtccta aacggtggat ctacgatact agcaaactgg cttctggcgt gcctgctcat 240
ttccgtggtt ctggctctgg aacctcttac tctctgacca tctctggcat ggaggccgag 300
gatgccgcca cctactactg ccagcagtgg agttcaaacc ctttcacatt cggctccggc 360
acaaaactgg agatcaacgg ctctactagt ggtggaggat ctggtggtgg atctggaggg 420
ggcggatcat ctcaggtcca gctgcagcag tctggtgctg aactggcacg tcctggtgcc 480
tccgtgaaaa tgtcttgtaa ggcctctggt tacaccttta cccggtacac tatgcattgg 540
gtcaaacagc gccctgggca gggactggaa tggattggct acatcaaccc ttctcgtggc 600
tacacaaact acaatcagaa attcaaggac aaggccaccc tgacaaccga caaatcttct 660
tcaaccgcct acatgcagct gtcatccctg acctctgagg atagtgctgt gtactactgt 720
gctcggtact acgacgatca ctactgtctg gactactggg gacagggaac aacactgact 780
gtgtcctccg aacccaaatc ctgtgacaaa acccacacct gtccaccttg tggcggtgga 840
tcatctggcg gagggagtgg agggcagcct agggagcctc aggtctacac actgccacct 900
tctcgggacg aactgacaaa aaaccaggtg tccctgacat gtctggtgaa gggcttctac 960
ccttccgata tcgctgtgga gtgggagtca aatggccagc ccgaaaacaa ctacaaaacc 1020
accccacctg tgctggattc cgatggctct ttcttcctgt actctaaact gaccgtggat 1080
aagagtcgat ggcagcaggg aaacgtgttc tcttgctccg tgatgcacga ggccctgcat 1140
aatcattaca cccagaaatc actgtctctg tcacccggca aatga 1185
<210> 109
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 109
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys
50 55 60
Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Gly Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser
130 135 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
145 150 155 160
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
165 170 175
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
180 185 190
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val
195 200 205
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Phe
210 215 220
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
225 230 235 240
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 110
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 110
atggaaaccg acactctgct gctgtgggtc ctgctgctgt gggtgcccgg atcaactggt 60
gacatccaga tgacacagtc tccctcttct ctgtccgcct ctgtgggcga tcgagtgaca 120
atcacctgta gcgcttcatc ctccgtgtct tacatgaatt ggtaccagca gacccctggc 180
aaagctccta aacgatggat ctacgacacc tccaaactgg cttccggcgt gccttcacga 240
ttttctggtt ctggttctgg gaccgactac acctttacca tctcatcact gcagcctgag 300
gatatcgcca catactactg tcagcagtgg tctagcaacc ctttcacatt cgggcagggc 360
acaaaactgc agatcaccgg ctcaacctct ggcggtggct ctggcggcgg tagtggtggt 420
ggtggttcta gtcaggtcca gctggtccag tctggtggag gagtggtcca gcccgggaga 480
tcactgaggc tgtcctgtaa ggctagtggc tacactttta cacggtacac catgcattgg 540
gtgaggcagg cacctgggaa aggcctggaa tggatcggat acatcaaccc tagtagggga 600
tacacaaact acaatcagaa agtcaaggac cggttcacaa tctctaggga caactctaaa 660
aacaccgctt ttctgcagat ggactcactg aggcctgagg acactggagt gtacttttgt 720
gctcggtact acgatgatca ttactgcctg gattactggg gacaggggac acctgtcact 780
gtctcttccg aacccaaatc ttgtgacaaa acccacacat gccctccatg tggtggcgga 840
tcctctggtg gcggttctgg ggggcagcct agggaacctc aggtgtacac actgccacct 900
tctcgtgacg aactgaccaa aaaccaggtg tcactgacct gtctggtcaa gggcttttac 960
ccttccgaca ttgctgtgga gtgggagtca aatggccagc ctgaaaacaa ctacaaaacc 1020
acaccccccg tcctggattc cgatggctct ttcttcctgt actctaaact gaccgtcgac 1080
aaatctcgat ggcagcaggg aaacgtgttc tcttgttccg tcatgcacga ggctctgcac 1140
aatcactaca cacagaaatc actgagcctg agccctggaa aatga 1185
<210> 111
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 111
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys
50 55 60
Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Gly Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser
130 135 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
145 150 155 160
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
165 170 175
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
180 185 190
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val
195 200 205
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Phe
210 215 220
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
225 230 235 240
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 112
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 112
atggaaaccg acactctgct gctgtgggtc ctgctgctgt gggtgcccgg atcaactggt 60
gacatccaga tgacacagtc tccctcttct ctgtccgcct ctgtgggcga tcgagtgaca 120
atcacctgta gcgcttcatc ctccgtgtct tacatgaatt ggtaccagca gacccctggc 180
aaagctccta aacgatggat ctacgacacc tccaaactgg cttccggcgt gccttcacga 240
ttttctggtt ctggttctgg gaccgactac acctttacca tctcatcact gcagcctgag 300
gatatcgcca catactactg tcagcagtgg tctagcaacc ctttcacatt cgggcagggc 360
acaaaactgc agatcaccgg ctcaacctct ggcggtggct ctggcggcgg tagtggtggt 420
ggtggttcta gtcaggtcca gctggtccag tctggtggag gagtggtcca gcccgggaga 480
tcactgaggc tgtcctgtaa ggctagtggc tacactttta cacggtacac catgcattgg 540
gtgaggcagg cacctgggaa aggcctggaa tggatcggat acatcaaccc tagtagggga 600
tacacaaact acaatcagaa agtcaaggac cggttcacaa tctctaggga caactctaaa 660
aacaccgctt ttctgcagat ggactcactg aggcctgagg acactggagt gtacttttgt 720
gctcggtact acgatgatca ttactgcctg gattactggg gacaggggac acctgtcact 780
gtctcttccg aacccaaatc ttgtgacaaa acccacacat gccctccatg tggtggcgga 840
tcctctggtg gcggttctgg ggggcagcct agggaacctc aggtgtacac actgccacct 900
tctcgtgacg aactgaccaa aaaccaggtg tcactgacct gtctggtcaa gggcttttac 960
ccttccgaca ttgctgtgga gtgggagtca aatggccagc ctgaaaacaa ctacaaaacc 1020
acaccccccg tcctggattc cgatggctct ttcttcctgt actctaaact gaccgtcgac 1080
aaatctcgat ggcagcaggg aaacgtgttc tcttgttccg tcatgcacga ggctctgcac 1140
aatcactaca cacagaaatc actgagcctg agccctggaa aatga 1185
<210> 113
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 113
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
50 55 60
Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His
65 70 75 80
Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
130 135 140
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
145 150 155 160
Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn
180 185 190
Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser
195 200 205
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250
<210> 114
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 114
atggaaaccg acactctgct gctgtgggtc ctgctgctgt gggtgcccgg atcaactgga 60
gaaatcgtgc tgactcagtc ccctgctaca ctgtctctgt cacctggcga acgagcaaca 120
ctgtcctgtt ctgcctcttc ttctgtctca tacatgaact ggtaccagca gaaacctgga 180
caggctccta gactgctgat ctacgacacc tctaaactgg catctggcgt gcccgctcat 240
tttcgtggct ctggatctgg aaccgacttt accctgacca tctcttccct ggaacctgag 300
gattttgccg tgtactactg ccagcagtgg tctagtaacc ctttcacttt tggccagggc 360
actaaagtgg agatcaaatc cggtggtggc ggacaggtcc agctggtcca gagtggagct 420
gaggtgaaaa aacccggcgc ttccgtcaaa gtctcctgta aggctagcgg atacacattc 480
acacgctaca ccatgcattg ggtccggcag gctcccggac agggcctgga atggatggga 540
tacatcaacc cttctcgggg ctacacaaac tacaaccaga aattcaagga tcgagtgacc 600
atgacaaccg acactagcat ctctaccgcc tacatggaac tgagccggct gagatccgat 660
gataccgctg tctactactg tgctcggtac tacgatgatc attactgcct ggattactgg 720
gggcagggca cactggtgac tgtgagttcc ggaggatgt 759
<210> 115
<211> 435
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 115
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Met Asp Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Leu Ser
20 25 30
Val Thr Ala Gly Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala
35 40 45
Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser
50 55 60
Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro
65 70 75 80
Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr
85 90 95
Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp
100 105 110
Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu
115 120 125
Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys
130 135 140
Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser
165 170 175
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
180 185 190
Val Ile Ile Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile
195 200 205
Met Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser
210 215 220
Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser
225 230 235 240
Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro
245 250 255
Ala His Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile
260 265 270
Ser Gly Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp
275 280 285
Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn
290 295 300
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly
305 310 315 320
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
325 330 335
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
340 345 350
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
355 360 365
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
370 375 380
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
385 390 395 400
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
405 410 415
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
420 425 430
Pro Gly Lys
435
<210> 116
<211> 1308
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 116
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
atggattggg tgtggacctt gctattcctg ttgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag 120
gtccagctgc agcagtctgg ggctgaactg gcaagacctg gggcctcagt gaagatgtcc 180
tgcaaggctt ctggctacac ctttactagg tacacgatgc actgggtaaa acagaggcct 240
ggacagggtc tggaatggat tggatacatt aatcctagcc gtggttatac taattacaat 300
cagaagttca aggacaaggc cacattgact acagacaaat cctccagcac agcctacatg 360
caactgagca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag atattatgat 420
gatcattact gccttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctcaggctcc 480
acatccggcg gaggctctgg cggtggatct ggcggaggcg gctcatccat ggattttcaa 540
gtgcagattt tcagcttcct gctaatcagt gcctcagtca taatatccag aggacaaatt 600
gttctcaccc agtctccagc aatcatgtct gcatctccag gggagaaggt caccatgacc 660
tgcagtgcca gctcaagtgt aagttacatg aactggtacc agcagaagtc aggcacctcc 720
cccaaaagat ggatttatga cacatccaaa ctggcttctg gagtccctgc tcacttcagg 780
ggcagtgggt ctgggacctc ttactctctc acaatcagcg gcatggaggc tgaagatgct 840
gccacttatt actgccagca gtggagtagt aacccattca cgttcggctc ggggacaaag 900
ttggaaataa acgagcctaa gtcctgcgac aagacccaca cctgtccccc ttgcggcgga 960
ggaagcagcg gaggcggatc cggtggccag cctcgggagc ctcaggtgta caccctgcct 1020
ccctcccggg acgagctgac caagaaccag gtgtccctga cctgtctggt caagggcttc 1080
tacccttccg atatcgccgt ggagtgggag tccaacggcc agcctgagaa caactacaag 1140
accacccctc ctgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tgtactccaa gctcacagtg 1200
gataagtccc ggtggcagca gggcaacgtg ttctcctgct ccgtgatgca cgaggccctg 1260
cacaaccact atacccagaa gtccctgtcc ctgtctcctg gcaagtga 1308
<210> 117
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 117
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser
20 25 30
Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys
50 55 60
Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His
65 70 75 80
Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly
85 90 95
Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg
130 135 140
Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
145 150 155 160
Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn
180 185 190
Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser
195 200 205
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250
<210> 118
<211> 762
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 118
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtc ctgctcctct gggtgccagg ctctaccggc 60
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 120
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgaact ggtaccagca gaagtcaggc 180
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcac 240
ttcaggggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcggcat ggaggctgaa 300
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaacc cattcacgtt cggctcgggg 360
acaaagttgg aaataaactc tggtggaggc gggcaggtcc agctgcagca gtctggggct 420
gaactggcaa gacctggggc ctcagtgaag atgtcctgca aggcttctgg ctacaccttt 480
actaggtaca cgatgcactg ggtaaaacag aggcctggac agggtctgga atggattgga 540
tacattaatc ctagccgtgg ttatactaat tacaatcaga agttcaagga caaggccaca 600
ttgactacag acaaatcctc cagcacagcc tacatgcaac tgagcagcct gacatctgag 660
gactctgcag tctattactg tgcaagatat tatgatgatc attactgcct tgactactgg 720
ggccaaggca ccactctcac agtctcctca ggcggatgct ga 762
<210> 119
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 119
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala
20 25 30
Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35 40 45
Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
145 150 155 160
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
165 170 175
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
180 185 190
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu
210 215 220
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
225 230 235 240
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Gly Gly Cys
245 250
<210> 120
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 120
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg 120
tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcactgggt aaaacagagg 180
cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gccgtggtta tactaattac 240
aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actacagaca aatcctccag cacagcctac 300
atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagatattat 360
gatgatcatt actgccttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcaagt 420
ggtggaggag gccaaattgt tctcacccag tctccagcaa tcatgtctgc atctccaggg 480
gagaaggtca ccatgacctg cagtgccagc tcaagtgtaa gttacatgaa ctggtaccag 540
cagaagtcag gcacctcccc caaaagatgg atttatgaca catccaaact ggcttctgga 600
gtccctgctc acttcagggg cagtgggtct gggacctctt actctctcac aatcagcggc 660
atggaggctg aagatgctgc cacttattac tgccagcagt ggagtagtaa cccattcacg 720
ttcggctcgg ggacaaagtt ggaaataaac ggcggctgc 759
<210> 121
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 121
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser
20 25 30
Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys
50 55 60
Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His
65 70 75 80
Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly
85 90 95
Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu
130 135 140
Leu Ala Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly
145 150 155 160
Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly
165 170 175
Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr
180 185 190
Asn Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys
195 200 205
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
210 215 220
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu
225 230 235 240
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250 255
<210> 122
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 122
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 120
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgaact ggtaccagca gaagtcaggc 180
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcac 240
ttcaggggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcggcat ggaggctgaa 300
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaacc cattcacgtt cggctcgggg 360
acaaagttgg aaataaacgg cggagggagt ggcggaggcg gccaggtcca gctgcagcag 420
tctggggctg aactggcaag acctggggcc tcagtgaaga tgtcctgcaa ggcttctggc 480
tacaccttta ctaggtacac gatgcactgg gtaaaacaga ggcctggaca gggtctggaa 540
tggattggat acattaatcc tagccgtggt tatactaatt acaatcagaa gttcaaggac 600
aaggccacat tgactacaga caaatcctcc agcacagcct acatgcaact gagcagcctg 660
acatctgagg actctgcagt ctattactgt gcaagatatt atgatgatca ttactgcctt 720
gactactggg gccaaggcac cactctcaca gtctcctcag gcggctgc 768
<210> 123
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 123
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala
20 25 30
Arg Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35 40 45
Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala
145 150 155 160
Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val
165 170 175
Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg
180 185 190
Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe
195 200 205
Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met
210 215 220
Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn
225 230 235 240
Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Asn Gly Gly Cys
245 250 255
<210> 124
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 124
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg 120
tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcactgggt aaaacagagg 180
cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gccgtggtta tactaattac 240
aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actacagaca aatcctccag cacagcctac 300
atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagatattat 360
gatgatcatt actgccttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctcaggc 420
ggagggagtg gcggaggcgg ccaaattgtt ctcacccagt ctccagcaat catgtctgca 480
tctccagggg agaaggtcac catgacctgc agtgccagct caagtgtaag ttacatgaac 540
tggtaccagc agaagtcagg cacctccccc aaaagatgga tttatgacac atccaaactg 600
gcttctggag tccctgctca cttcaggggc agtgggtctg ggacctctta ctctctcaca 660
atcagcggca tggaggctga agatgctgcc acttattact gccagcagtg gagtagtaac 720
ccattcacgt tcggctcggg gacaaagttg gaaataaacg gcggctgc 768
<210> 125
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 125
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35 40 45
Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Gln Lys Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Asn Thr Ala Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly
100 105 110
Val Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln
145 150 155 160
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
165 170 175
Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr
180 185 190
Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser
195 200 205
Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
210 215 220
Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala
225 230 235 240
Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln
245 250 255
Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 126
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 126
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtccagc tggtccagtc tggtggagga gtggtccagc ccgggagatc actgaggctg 120
tcctgtaagg ctagtggcta cacttttaca cggtacacca tgcattgggt gaggcaggca 180
cctgggaaag gcctggaatg gatcggatac atcaacccta gtaggggata cacaaactac 240
aatcagaaag tcaaggaccg gttcacaatc tctagggaca actctaaaaa caccgctttt 300
ctgcagatgg actcactgag gcctgaggac actggagtgt acttttgtgc tcggtactac 360
gatgatcatt actgcctgga ttactgggga caggggacac ctgtcactgt ctcttccggc 420
tccacatccg gcggaggctc tggcggtgga tctggcggag gcggctcatc cgacatccag 480
atgacacagt ctccctcttc tctgtccgcc tctgtgggcg atcgagtgac aatcacctgt 540
agcgcttcat cctccgtgtc ttacatgaat tggtaccagc agacccctgg caaagctcct 600
aaacgatgga tctacgacac ctccaaactg gcttccggcg tgccttcacg attttctggt 660
tctggttctg ggaccgacta cacctttacc atctcatcac tgcagcctga ggatatcgcc 720
acatactact gtcagcagtg gtctagcaac cctttcacat tcgggcaggg cacaaaactg 780
cagatcaccg agcctaagtc ctgcgacaag acccacacct gtcccccttg cggcggagga 840
agcagcggag gcggatccgg tggccagcct cgggagcctc aggtgtacac cctgcctccc 900
tcccgggacg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgacct gtctggtcaa gggcttctac 960
ccttccgata tcgccgtgga gtgggagtcc aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc 1020
acccctcctg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctgt actccaagct cacagtggat 1080
aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac 1140
aaccactata cccagaagtc cctgtccctg tctcctggca agtga 1185
<210> 127
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 127
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys
50 55 60
Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
130 135 140
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
145 150 155 160
Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn
180 185 190
Gln Lys Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
195 200 205
Thr Ala Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val
210 215 220
Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250
<210> 128
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 128
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gacatccaga tgacacagtc tccctcttct ctgtccgcct ctgtgggcga tcgagtgaca 120
atcacctgta gcgcttcatc ctccgtgtct tacatgaatt ggtaccagca gacccctggc 180
aaagctccta aacgatggat ctacgacacc tccaaactgg cttccggcgt gccttcacga 240
ttttctggtt ctggttctgg gaccgactac acctttacca tctcatcact gcagcctgag 300
gatatcgcca catactactg tcagcagtgg tctagcaacc ctttcacatt cgggcagggc 360
acaaaactgc agatcaccag tggtggagga ggccaggtcc agctggtcca gtctggtgga 420
ggagtggtcc agcccgggag atcactgagg ctgtcctgta aggctagtgg ctacactttt 480
acacggtaca ccatgcattg ggtgaggcag gcacctggga aaggcctgga atggatcgga 540
tacatcaacc ctagtagggg atacacaaac tacaatcaga aagtcaagga ccggttcaca 600
atctctaggg acaactctaa aaacaccgct tttctgcaga tggactcact gaggcctgag 660
gacactggag tgtacttttg tgctcggtac tacgatgatc attactgcct ggattactgg 720
ggacagggga cacctgtcac tgtctcttcc ggcggctgc 759
<210> 129
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 129
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35 40 45
Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Gln Lys Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Asn Thr Ala Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly
100 105 110
Val Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
145 150 155 160
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
165 170 175
Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
180 185 190
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
210 215 220
Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
225 230 235 240
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Gly Gly Cys
245 250
<210> 130
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 130
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtccagc tggtccagtc tggtggagga gtggtccagc ccgggagatc actgaggctg 120
tcctgtaagg ctagtggcta cacttttaca cggtacacca tgcattgggt gaggcaggca 180
cctgggaaag gcctggaatg gatcggatac atcaacccta gtaggggata cacaaactac 240
aatcagaaag tcaaggaccg gttcacaatc tctagggaca actctaaaaa caccgctttt 300
ctgcagatgg actcactgag gcctgaggac actggagtgt acttttgtgc tcggtactac 360
gatgatcatt actgcctgga ttactgggga caggggacac ctgtcactgt ctcttccagt 420
ggtggaggag gcgacatcca gatgacacag tctccctctt ctctgtccgc ctctgtgggc 480
gatcgagtga caatcacctg tagcgcttca tcctccgtgt cttacatgaa ttggtaccag 540
cagacccctg gcaaagctcc taaacgatgg atctacgaca cctccaaact ggcttccggc 600
gtgccttcac gattttctgg ttctggttct gggaccgact acacctttac catctcatca 660
ctgcagcctg aggatatcgc cacatactac tgtcagcagt ggtctagcaa ccctttcaca 720
ttcgggcagg gcacaaaact gcagatcacc ggcggctgc 759
<210> 131
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 131
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys
50 55 60
Arg Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly
145 150 155 160
Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr
180 185 190
Asn Tyr Asn Gln Lys Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
195 200 205
Ser Lys Asn Thr Ala Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp
210 215 220
Thr Gly Val Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu
225 230 235 240
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250 255
<210> 132
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 132
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gacatccaga tgacacagtc tccctcttct ctgtccgcct ctgtgggcga tcgagtgaca 120
atcacctgta gcgcttcatc ctccgtgtct tacatgaatt ggtaccagca gacccctggc 180
aaagctccta aacgatggat ctacgacacc tccaaactgg cttccggcgt gccttcacga 240
ttttctggtt ctggttctgg gaccgactac acctttacca tctcatcact gcagcctgag 300
gatatcgcca catactactg tcagcagtgg tctagcaacc ctttcacatt cgggcagggc 360
acaaaactgc agatcaccgg cggagggagt ggcggaggcg gccaggtcca gctggtccag 420
tctggtggag gagtggtcca gcccgggaga tcactgaggc tgtcctgtaa ggctagtggc 480
tacactttta cacggtacac catgcattgg gtgaggcagg cacctgggaa aggcctggaa 540
tggatcggat acatcaaccc tagtagggga tacacaaact acaatcagaa agtcaaggac 600
cggttcacaa tctctaggga caactctaaa aacaccgctt ttctgcagat ggactcactg 660
aggcctgagg acactggagt gtacttttgt gctcggtact acgatgatca ttactgcctg 720
gattactggg gacaggggac acctgtcact gtctcttccg gcggctgc 768
<210> 133
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 133
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35 40 45
Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Gln Lys Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Asn Thr Ala Phe Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly
100 105 110
Val Tyr Phe Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Pro Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
145 150 155 160
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val
165 170 175
Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg
180 185 190
Trp Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu
210 215 220
Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn
225 230 235 240
Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr Gly Gly Cys
245 250 255
<210> 134
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 134
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtccagc tggtccagtc tggtggagga gtggtccagc ccgggagatc actgaggctg 120
tcctgtaagg ctagtggcta cacttttaca cggtacacca tgcattgggt gaggcaggca 180
cctgggaaag gcctggaatg gatcggatac atcaacccta gtaggggata cacaaactac 240
aatcagaaag tcaaggaccg gttcacaatc tctagggaca actctaaaaa caccgctttt 300
ctgcagatgg actcactgag gcctgaggac actggagtgt acttttgtgc tcggtactac 360
gatgatcatt actgcctgga ttactgggga caggggacac ctgtcactgt ctcttccggc 420
ggagggagtg gcggaggcgg cgacatccag atgacacagt ctccctcttc tctgtccgcc 480
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tggtaccagc agacccctgg caaagctcct aaacgatgga tctacgacac ctccaaactg 600
gcttccggcg tgccttcacg attttctggt tctggttctg ggaccgacta cacctttacc 660
atctcatcac tgcagcctga ggatatcgcc acatactact gtcagcagtg gtctagcaac 720
cctttcacat tcgggcaggg cacaaaactg cagatcaccg gcggctgc 768
<210> 135
<211> 394
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 135
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
20 25 30
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35 40 45
Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile
85 90 95
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Ile Val
145 150 155 160
Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala
165 170 175
Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr
180 185 190
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser
195 200 205
Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly
210 215 220
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln
245 250 255
Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
260 265 270
Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
290 295 300
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
305 310 315 320
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
325 330 335
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
340 345 350
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
355 360 365
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
370 375 380
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390
<210> 136
<211> 1185
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 136
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtccagc tggtccagag tggagctgag gtgaaaaaac ccggcgcttc cgtcaaagtc 120
tcctgtaagg ctagcggata cacctttact cgctacacca tgcattgggt ccggcaggct 180
cccggacagg gcctggaatg gatgggatac atcaaccctt ctcggggcta cacaaactac 240
aatcagaaat tcaaggatcg agtgaccatg acaaccgaca cttcaatctc taccgcttac 300
atggaactgt ctcggctgag gagtgacgat accgctgtct actactgtgc tcggtactac 360
gacgaccatt actgcctgga ttactggggg cagggcacac tggtgactgt gtctagcggc 420
tccacatccg gcggaggctc tggcggtgga tctggcggag gcggctcatc cgaaatcgtg 480
ctgactcagt cccctgctac actgtctctg tcacctggcg aacgagcaac actgtcctgt 540
tctgcctctt cttctgtctc atacatgaac tggtaccagc agaaacctgg acaggctcct 600
agactgctga tctacgacac ctctaaactg gcatctggcg tgcccgctca ttttcgtggc 660
tctggatctg gaaccgactt taccctgacc atctcttccc tggaacctga ggattttgcc 720
gtgtactact gccagcagtg gtctagtaac cctttcactt ttggccaggg cactaaagtg 780
gagatcaagg agcctaagtc ctgcgacaag acccacacct gtcccccttg cggcggagga 840
agcagcggag gcggatccgg tggccagcct cgggagcctc aggtgtacac cctgcctccc 900
tcccgggacg agctgaccaa gaaccaggtg tccctgacct gtctggtcaa gggcttctac 960
ccttccgata tcgccgtgga gtgggagtcc aacggccagc ctgagaacaa ctacaagacc 1020
acccctcctg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctgt actccaagct cacagtggat 1080
aagtcccggt ggcagcaggg caacgtgttc tcctgctccg tgatgcacga ggccctgcac 1140
aaccactata cccagaagtc cctgtccctg tctcctggca agtga 1185
<210> 137
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 137
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser
35 40 45
Val Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg
50 55 60
Leu Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His
65 70 75 80
Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser
100 105 110
Asn Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
130 135 140
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe
145 150 155 160
Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn
180 185 190
Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser
195 200 205
Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250
<210> 138
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 138
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gaaatcgtgc tgactcagtc ccctgctaca ctgtctctgt cacctggcga acgagcaaca 120
ctgtcctgtt ctgcctcttc ttctgtctca tacatgaact ggtaccagca gaaacctgga 180
caggctccta gactgctgat ctacgacacc tctaaactgg catctggcgt gcccgctcat 240
tttcgtggct ctggatctgg aaccgacttt accctgacca tctcttccct ggaacctgag 300
gattttgccg tgtactactg ccagcagtgg tctagtaacc ctttcacttt tggccagggc 360
actaaagtgg agatcaagag tggtggagga ggccaggtcc agctggtcca gagtggagct 420
gaggtgaaaa aacccggcgc ttccgtcaaa gtctcctgta aggctagcgg atacaccttt 480
actcgctaca ccatgcattg ggtccggcag gctcccggac agggcctgga atggatggga 540
tacatcaacc cttctcgggg ctacacaaac tacaatcaga aattcaagga tcgagtgacc 600
atgacaaccg acacttcaat ctctaccgct tacatggaac tgtctcggct gaggagtgac 660
gataccgctg tctactactg tgctcggtac tacgacgacc attactgcct ggattactgg 720
gggcagggca cactggtgac tgtgtctagc ggcggctgc 759
<210> 139
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 139
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
20 25 30
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35 40 45
Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile
85 90 95
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
145 150 155 160
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
165 170 175
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
180 185 190
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
210 215 220
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
225 230 235 240
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Cys
245 250
<210> 140
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 140
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtccagc tggtccagag tggagctgag gtgaaaaaac ccggcgcttc cgtcaaagtc 120
tcctgtaagg ctagcggata cacctttact cgctacacca tgcattgggt ccggcaggct 180
cccggacagg gcctggaatg gatgggatac atcaaccctt ctcggggcta cacaaactac 240
aatcagaaat tcaaggatcg agtgaccatg acaaccgaca cttcaatctc taccgcttac 300
atggaactgt ctcggctgag gagtgacgat accgctgtct actactgtgc tcggtactac 360
gacgaccatt actgcctgga ttactggggg cagggcacac tggtgactgt gtctagcagt 420
ggtggaggag gcgaaatcgt gctgactcag tcccctgcta cactgtctct gtcacctggc 480
gaacgagcaa cactgtcctg ttctgcctct tcttctgtct catacatgaa ctggtaccag 540
cagaaacctg gacaggctcc tagactgctg atctacgaca cctctaaact ggcatctggc 600
gtgcccgctc attttcgtgg ctctggatct ggaaccgact ttaccctgac catctcttcc 660
ctggaacctg aggattttgc cgtgtactac tgccagcagt ggtctagtaa ccctttcact 720
tttggccagg gcactaaagt ggagatcaag ggcggctgc 759
<210> 141
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 141
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro
115 120 125
Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
130 135 140
Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu
145 150 155 160
Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln
165 170 175
Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr
180 185 190
Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr
195 200 205
Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly
210 215 220
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
225 230 235
<210> 142
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 142
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gaaatcgtgc tgactcagtc ccctgctaca ctgtctctgt cacctggcga acgagcaaca 120
ctgtcctgtt ctgcctcttc ttctgtctca tacatgaact ggtaccagca gaaacctgga 180
caggctccta gactgctgat ctacgacacc tctaaactgg catctggcgt gcccgctcat 240
tttcgtggct ctggatctgg aaccgacttt accctgacca tctcttccct ggaacctgag 300
gattttgccg tgtactactg ccagcagtgg tctagtaacc ctttcacttt tggccagggc 360
actaaagtgg agatcaaggg cggagggagt ggcggaggcg gccaggtcca gctggtccag 420
agtggagctg aggtgaaaaa acccggcgct tccgtcaaag tctcctgtaa ggctagcgga 480
tacaccttta ctcgctacac catgcattgg gtccggcagg ctcccggaca gggcctggaa 540
tggatgggat acatcaaccc ttctcggggc tacacaaact acaatcagaa attcaaggat 600
cgagtgacca tgacaaccga cacttcaatc tctaccgctt acatggaact gtctcggctg 660
aggagtgacg ataccgctgt ctactactgt gctcggtact acgacgacca ttactgcctg 720
gattactggg ggcagggcac actggtgact gtgtctagcg gcggctgc 768
<210> 143
<211> 256
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 143
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
20 25 30
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
35 40 45
Phe Thr Arg Tyr Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Met Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr
65 70 75 80
Asn Gln Lys Phe Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile
85 90 95
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
115 120 125
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu
145 150 155 160
Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val
165 170 175
Ser Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
180 185 190
Leu Ile Tyr Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe
195 200 205
Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
210 215 220
Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn
225 230 235 240
Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Cys
245 250 255
<210> 144
<211> 768
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 144
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtccagc tggtccagag tggagctgag gtgaaaaaac ccggcgcttc cgtcaaagtc 120
tcctgtaagg ctagcggata cacctttact cgctacacca tgcattgggt ccggcaggct 180
cccggacagg gcctggaatg gatgggatac atcaaccctt ctcggggcta cacaaactac 240
aatcagaaat tcaaggatcg agtgaccatg acaaccgaca cttcaatctc taccgcttac 300
atggaactgt ctcggctgag gagtgacgat accgctgtct actactgtgc tcggtactac 360
gacgaccatt actgcctgga ttactggggg cagggcacac tggtgactgt gtctagcggc 420
ggagggagtg gcggaggcgg cgaaatcgtg ctgactcagt cccctgctac actgtctctg 480
tcacctggcg aacgagcaac actgtcctgt tctgcctctt cttctgtctc atacatgaac 540
tggtaccagc agaaacctgg acaggctcct agactgctga tctacgacac ctctaaactg 600
gcatctggcg tgcccgctca ttttcgtggc tctggatctg gaaccgactt taccctgacc 660
atctcttccc tggaacctga ggattttgcc gtgtactact gccagcagtg gtctagtaac 720
cctttcactt ttggccaggg cactaaagtg gagatcaagg gcggctgc 768
<210> 145
<211> 389
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 145
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr
20 25 30
Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser Ser Gly Asn
35 40 45
Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser
50 55 60
Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Phe Leu
85 90 95
Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys His
100 105 110
Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
115 120 125
Val Leu Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr
145 150 155 160
Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser Ser Gly Asn
165 170 175
Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser
180 185 190
Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro
195 200 205
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Phe Leu
210 215 220
Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys His
225 230 235 240
Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
245 250 255
Val Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
260 265 270
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro
275 280 285
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
290 295 300
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
305 310 315 320
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
325 330 335
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
340 345 350
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
355 360 365
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
370 375 380
Leu Ser Pro Gly Lys
385
<210> 146
<211> 1170
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 146
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gacatccagc tgactcagcc caactctgtg tctacgtctc taggaagcac agtcaagctg 120
tcttgcacac tcagctctgg taacatagaa aacaactatg tgcactggta ccagctatat 180
gagggaagat ctcccaccac tatgatttat gatgatgata agagaccgga tggtgtccct 240
gacaggttct ctggctccat tgacaggtct tccaactcag ccttcctgac aatccataat 300
gtggcaattg aagatgaagc tatctacttc tgtcattctt atgttagtag ttttaatgtt 360
ttcggcggtg gaacaaagct cactgtcctt ggctccacat ccggcggagg ctctggcggt 420
ggatctggcg gaggcggctc atccgacatc cagctgactc agcccaactc tgtgtctacg 480
tctctaggaa gcacagtcaa gctgtcttgc acactcagct ctggtaacat agaaaacaac 540
tatgtgcact ggtaccagct atatgaggga agatctccca ccactatgat ttatgatgat 600
gataagagac cggatggtgt ccctgacagg ttctctggct ccattgacag gtcttccaac 660
tcagccttcc tgacaatcca taatgtggca attgaagatg aagctatcta cttctgtcat 720
tcttatgtta gtagttttaa tgttttcggc ggtggaacaa agctcactgt ccttgagcct 780
aagtcctgcg acaagaccca cacctgtccc ccttgcggcg gaggaagcag cggaggcgga 840
tccggtggcc agcctcggga gcctcaggtg tacaccctgc ctccctcccg ggacgagctg 900
accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtcaagggct tctacccttc cgatatcgcc 960
gtggagtggg agtccaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc tcctgtgctg 1020
gactccgacg gctccttctt cctgtactcc aagctcacag tggataagtc ccggtggcag 1080
cagggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctatacccag 1140
aagtccctgt ccctgtctcc tggcaagtga 1170
<210> 147
<211> 389
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 147
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr
20 25 30
Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser Ser Gly Asn
35 40 45
Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser
50 55 60
Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Phe Leu
85 90 95
Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys His
100 105 110
Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
115 120 125
Val Leu Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Ser Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr
145 150 155 160
Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser Ser Gly Asn
165 170 175
Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser
180 185 190
Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro
195 200 205
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Phe Leu
210 215 220
Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys His
225 230 235 240
Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
245 250 255
Val Leu Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
260 265 270
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gln Pro Arg Glu Pro
275 280 285
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
290 295 300
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
305 310 315 320
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
325 330 335
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
340 345 350
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
355 360 365
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
370 375 380
Leu Ser Pro Gly Lys
385
<210> 148
<211> 1170
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 148
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gacatccagc tgactcagcc caactctgtg tctacgtctc taggaagcac agtcaagctg 120
tcttgcacac tcagctctgg taacatagaa aacaactatg tgcactggta ccagctatat 180
gagggaagat ctcccaccac tatgatttat gatgatgata agagaccgga tggtgtccct 240
gacaggttct ctggctccat tgacaggtct tccaactcag ccttcctgac aatccataat 300
gtggcaattg aagatgaagc tatctacttc tgtcattctt atgttagtag ttttaatgtt 360
ttcggcggtg gaacaaagct cactgtcctt ggctccacat ccggcggagg ctctggcggt 420
ggatctggcg gaggcggctc atccgacatc cagctgactc agcccaactc tgtgtctacg 480
tctctaggaa gcacagtcaa gctgtcttgc acactcagct ctggtaacat agaaaacaac 540
tatgtgcact ggtaccagct atatgaggga agatctccca ccactatgat ttatgatgat 600
gataagagac cggatggtgt ccctgacagg ttctctggct ccattgacag gtcttccaac 660
tcagccttcc tgacaatcca taatgtggca attgaagatg aagctatcta cttctgtcat 720
tcttatgtta gtagttttaa tgttttcggc ggtggaacaa agctcactgt ccttgagcct 780
aagtcctgcg acaagaccca cacctgtccc ccttgcggcg gaggaagcag cggaggcgga 840
tccggtggcc agcctcggga gcctcaggtg tacaccctgc ctccctcccg ggacgagctg 900
accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtcaagggct tctacccttc cgatatcgcc 960
gtggagtggg agtccaacgg ccagcctgag aacaactaca agaccacccc tcctgtgctg 1020
gactccgacg gctccttctt cctgtactcc aagctcacag tggataagtc ccggtggcag 1080
cagggcaacg tgttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctatacccag 1140
aagtccctgt ccctgtctcc tggcaagtga 1170
<210> 149
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 149
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr
20 25 30
Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser Ser Gly Asn
35 40 45
Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser
50 55 60
Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Phe Leu
85 90 95
Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys His
100 105 110
Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
115 120 125
Val Leu Ser Gly Gly Gly Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser
130 135 140
Val Ser Thr Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu
165 170 175
Gly Arg Ser Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp
180 185 190
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser
195 200 205
Ala Phe Leu Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr
210 215 220
Phe Cys His Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Cys
245
<210> 150
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 150
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gacatccagc tgactcagcc caactctgtg tctacgtctc taggaagcac agtcaagctg 120
tcttgcacac tcagctctgg taacatagaa aacaactatg tgcactggta ccagctatat 180
gagggaagat ctcccaccac tatgatttat gatgatgata agagaccgga tggtgtccct 240
gacaggttct ctggctccat tgacaggtct tccaactcag ccttcctgac aatccataat 300
gtggcaattg aagatgaagc tatctacttc tgtcattctt atgttagtag ttttaatgtt 360
ttcggcggtg gaacaaagct cactgtcctt agtggtggag gaggcgacat ccagctgact 420
cagcccaact ctgtgtctac gtctctagga agcacagtca agctgtcttg cacactcagc 480
tctggtaaca tagaaaacaa ctatgtgcac tggtaccagc tatatgaggg aagatctccc 540
accactatga tttatgatga tgataagaga ccggatggtg tccctgacag gttctctggc 600
tccattgaca ggtcttccaa ctcagccttc ctgacaatcc ataatgtggc aattgaagat 660
gaagctatct acttctgtca ttcttatgtt agtagtttta atgttttcgg cggtggaaca 720
aagctcactg tccttggcgg ctgc 744
<210> 151
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 151
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr
20 25 30
Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser Ser Gly Asn
35 40 45
Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser
50 55 60
Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Phe Leu
85 90 95
Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys His
100 105 110
Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
115 120 125
Val Leu Ser Gly Gly Gly Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser
130 135 140
Val Ser Thr Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu
165 170 175
Gly Arg Ser Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp
180 185 190
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser
195 200 205
Ala Phe Leu Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr
210 215 220
Phe Cys His Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Cys
245
<210> 152
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 152
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gacatccagc tgactcagcc caactctgtg tctacgtctc taggaagcac agtcaagctg 120
tcttgcacac tcagctctgg taacatagaa aacaactatg tgcactggta ccagctatat 180
gagggaagat ctcccaccac tatgatttat gatgatgata agagaccgga tggtgtccct 240
gacaggttct ctggctccat tgacaggtct tccaactcag ccttcctgac aatccataat 300
gtggcaattg aagatgaagc tatctacttc tgtcattctt atgttagtag ttttaatgtt 360
ttcggcggtg gaacaaagct cactgtcctt agtggtggag gaggcgacat ccagctgact 420
cagcccaact ctgtgtctac gtctctagga agcacagtca agctgtcttg cacactcagc 480
tctggtaaca tagaaaacaa ctatgtgcac tggtaccagc tatatgaggg aagatctccc 540
accactatga tttatgatga tgataagaga ccggatggtg tccctgacag gttctctggc 600
tccattgaca ggtcttccaa ctcagccttc ctgacaatcc ataatgtggc aattgaagat 660
gaagctatct acttctgtca ttcttatgtt agtagtttta atgttttcgg cggtggaaca 720
aagctcactg tccttggcgg ctgc 744
<210> 153
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 153
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr
20 25 30
Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser Ser Gly Asn
35 40 45
Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser
50 55 60
Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Phe Leu
85 90 95
Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys His
100 105 110
Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
115 120 125
Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Asn Ser Val Ser Thr Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys
145 150 155 160
Thr Leu Ser Ser Gly Asn Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln
165 170 175
Leu Tyr Glu Gly Arg Ser Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys
180 185 190
Arg Pro Asp Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser
195 200 205
Ser Asn Ser Ala Phe Leu Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Ile Tyr Phe Cys His Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Cys
245 250
<210> 154
<211> 753
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 154
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gacatccagc tgactcagcc caactctgtg tctacgtctc taggaagcac agtcaagctg 120
tcttgcacac tcagctctgg taacatagaa aacaactatg tgcactggta ccagctatat 180
gagggaagat ctcccaccac tatgatttat gatgatgata agagaccgga tggtgtccct 240
gacaggttct ctggctccat tgacaggtct tccaactcag ccttcctgac aatccataat 300
gtggcaattg aagatgaagc tatctacttc tgtcattctt atgttagtag ttttaatgtt 360
ttcggcggtg gaacaaagct cactgtcctt ggcggaggga gtggcggagg cggcgacatc 420
cagctgactc agcccaactc tgtgtctacg tctctaggaa gcacagtcaa gctgtcttgc 480
acactcagct ctggtaacat agaaaacaac tatgtgcact ggtaccagct atatgaggga 540
agatctccca ccactatgat ttatgatgat gataagagac cggatggtgt ccctgacagg 600
ttctctggct ccattgacag gtcttccaac tcagccttcc tgacaatcca taatgtggca 660
attgaagatg aagctatcta cttctgtcat tcttatgtta gtagttttaa tgttttcggc 720
ggtggaacaa agctcactgt ccttggcggc tgc 753
<210> 155
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 155
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln Pro Asn Ser Val Ser Thr
20 25 30
Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys Thr Leu Ser Ser Gly Asn
35 40 45
Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln Leu Tyr Glu Gly Arg Ser
50 55 60
Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys Arg Pro Asp Gly Val Pro
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser Ser Asn Ser Ala Phe Leu
85 90 95
Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Phe Cys His
100 105 110
Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
115 120 125
Val Leu Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Asp Ile Gln Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Asn Ser Val Ser Thr Ser Leu Gly Ser Thr Val Lys Leu Ser Cys
145 150 155 160
Thr Leu Ser Ser Gly Asn Ile Glu Asn Asn Tyr Val His Trp Tyr Gln
165 170 175
Leu Tyr Glu Gly Arg Ser Pro Thr Thr Met Ile Tyr Asp Asp Asp Lys
180 185 190
Arg Pro Asp Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Arg Ser
195 200 205
Ser Asn Ser Ala Phe Leu Thr Ile His Asn Val Ala Ile Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Ile Tyr Phe Cys His Ser Tyr Val Ser Ser Phe Asn Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Cys
245 250
<210> 156
<211> 753
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 156
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gacatccagc tgactcagcc caactctgtg tctacgtctc taggaagcac agtcaagctg 120
tcttgcacac tcagctctgg taacatagaa aacaactatg tgcactggta ccagctatat 180
gagggaagat ctcccaccac tatgatttat gatgatgata agagaccgga tggtgtccct 240
gacaggttct ctggctccat tgacaggtct tccaactcag ccttcctgac aatccataat 300
gtggcaattg aagatgaagc tatctacttc tgtcattctt atgttagtag ttttaatgtt 360
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cagctgactc agcccaactc tgtgtctacg tctctaggaa gcacagtcaa gctgtcttgc 480
acactcagct ctggtaacat agaaaacaac tatgtgcact ggtaccagct atatgaggga 540
agatctccca ccactatgat ttatgatgat gataagagac cggatggtgt ccctgacagg 600
ttctctggct ccattgacag gtcttccaac tcagccttcc tgacaatcca taatgtggca 660
attgaagatg aagctatcta cttctgtcat tcttatgtta gtagttttaa tgttttcggc 720
ggtggaacaa agctcactgt ccttggcggc tgc 753
<210> 157
<211> 395
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 157
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
100 105 110
Asn Trp Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
115 120 125
Gly Ser Thr Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro
145 150 155 160
Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys Phe Ser
165 170 175
Gly Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
180 185 190
Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr Val Asp
195 200 205
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
210 215 220
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
225 230 235 240
Tyr Cys Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu Trp Gly Arg
245 250 255
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
260 265 270
His Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
290 295 300
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
305 310 315 320
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
325 330 335
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
340 345 350
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
355 360 365
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
370 375 380
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390 395
<210> 158
<211> 1188
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 158
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc 120
ctgagctgcc gcgcgagcca gagcgtgagc agctatctgg cgtggtatca gcagaaaccg 180
ggccaggcgc cgcgcctgct gatttatgat gcgagcaacc gcgcgaccgg cattccggcg 240
cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg 300
gaagattttg cggtgtatta ttgccagcag cgcagcaact ggccgccgct gacctttggc 360
ggcggcacca aagtggaaat taaaggctcc acatccggcg gaggctctgg cggtggatct 420
ggcggaggcg gctcatccca ggtgcagctg gtggaaagcg gcggcggcgt ggtgcagccg 480
ggccgcagcc tgcgcctgag ctgcgcggcg agcggcttta aatttagcgg ctatggcatg 540
cattgggtgc gccaggcgcc gggcaaaggc ctggaatggg tggcggtgat ttggtatgat 600
ggcagcaaaa aatattatgt ggatagcgtg aaaggccgct ttaccattag ccgcgataac 660
agcaaaaaca ccctgtatct gcagatgaac agcctgcgcg cggaagatac cgcggtgtat 720
tattgcgcgc gccagatggg ctattggcat tttgatctgt ggggccgcgg caccctggtg 780
accgtgagca gcgagcctaa gtcctgcgac aagacccaca cctgtccccc ttgcggcgga 840
ggaagcagcg gaggcggatc cggtggccag cctcgggagc ctcaggtgta caccctgcct 900
ccctcccggg acgagctgac caagaaccag gtgtccctga cctgtctggt caagggcttc 960
tacccttccg atatcgccgt ggagtgggag tccaacggcc agcctgagaa caactacaag 1020
accacccctc ctgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tgtactccaa gctcacagtg 1080
gataagtccc ggtggcagca gggcaacgtg ttctcctgct ccgtgatgca cgaggccctg 1140
cacaaccact atacccagaa gtccctgtcc ctgtctcctg gcaagtga 1188
<210> 159
<211> 395
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 159
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys
35 40 45
Phe Ser Gly Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu Trp
115 120 125
Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Glu Ile Val Leu
145 150 155 160
Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr
165 170 175
Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr
180 185 190
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser
195 200 205
Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
210 215 220
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Leu Thr Phe Gly
245 250 255
Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
260 265 270
His Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
290 295 300
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
305 310 315 320
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
325 330 335
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
340 345 350
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
355 360 365
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
370 375 380
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
385 390 395
<210> 160
<211> 1188
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 160
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtgcagc tggtggaaag cggcggcggc gtggtgcagc cgggccgcag cctgcgcctg 120
agctgcgcgg cgagcggctt taaatttagc ggctatggca tgcattgggt gcgccaggcg 180
ccgggcaaag gcctggaatg ggtggcggtg atttggtatg atggcagcaa aaaatattat 240
gtggatagcg tgaaaggccg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 300
ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt attattgcgc gcgccagatg 360
ggctattggc attttgatct gtggggccgc ggcaccctgg tgaccgtgag cagcggctcc 420
acatccggcg gaggctctgg cggtggatct ggcggaggcg gctcatccga aattgtgctg 480
acccagagcc cggcgaccct gagcctgagc ccgggcgaac gcgcgaccct gagctgccgc 540
gcgagccaga gcgtgagcag ctatctggcg tggtatcagc agaaaccggg ccaggcgccg 600
cgcctgctga tttatgatgc gagcaaccgc gcgaccggca ttccggcgcg ctttagcggc 660
agcggcagcg gcaccgattt taccctgacc attagcagcc tggaaccgga agattttgcg 720
gtgtattatt gccagcagcg cagcaactgg ccgccgctga cctttggcgg cggcaccaaa 780
gtggaaatta aagagcctaa gtcctgcgac aagacccaca cctgtccccc ttgcggcgga 840
ggaagcagcg gaggcggatc cggtggccag cctcgggagc ctcaggtgta caccctgcct 900
ccctcccggg acgagctgac caagaaccag gtgtccctga cctgtctggt caagggcttc 960
tacccttccg atatcgccgt ggagtgggag tccaacggcc agcctgagaa caactacaag 1020
accacccctc ctgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc tgtactccaa gctcacagtg 1080
gataagtccc ggtggcagca gggcaacgtg ttctcctgct ccgtgatgca cgaggccctg 1140
cacaaccact atacccagaa gtccctgtcc ctgtctcctg gcaagtga 1188
<210> 161
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 161
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
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115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val
130 135 140
Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
145 150 155 160
Lys Phe Ser Gly Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
165 170 175
Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr
180 185 190
Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
195 200 205
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu
225 230 235 240
Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Cys
245 250
<210> 162
<211> 762
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 162
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc 120
ctgagctgcc gcgcgagcca gagcgtgagc agctatctgg cgtggtatca gcagaaaccg 180
ggccaggcgc cgcgcctgct gatttatgat gcgagcaacc gcgcgaccgg cattccggcg 240
cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg 300
gaagattttg cggtgtatta ttgccagcag cgcagcaact ggccgccgct gacctttggc 360
ggcggcacca aagtggaaat taaaagtggt ggaggaggcc aggtgcagct ggtggaaagc 420
ggcggcggcg tggtgcagcc gggccgcagc ctgcgcctga gctgcgcggc gagcggcttt 480
aaatttagcg gctatggcat gcattgggtg cgccaggcgc cgggcaaagg cctggaatgg 540
gtggcggtga tttggtatga tggcagcaaa aaatattatg tggatagcgt gaaaggccgc 600
tttaccatta gccgcgataa cagcaaaaac accctgtatc tgcagatgaa cagcctgcgc 660
gcggaagata ccgcggtgta ttattgcgcg cgccagatgg gctattggca ttttgatctg 720
tggggccgcg gcaccctggt gaccgtgagc agcggcggct gc 762
<210> 163
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 163
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys
35 40 45
Phe Ser Gly Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu Trp
115 120 125
Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser Gly Gly Gly Gly Glu
130 135 140
Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu
145 150 155 160
Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu
165 170 175
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
180 185 190
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
210 215 220
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Leu
225 230 235 240
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Cys
245 250
<210> 164
<211> 762
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 164
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtgcagc tggtggaaag cggcggcggc gtggtgcagc cgggccgcag cctgcgcctg 120
agctgcgcgg cgagcggctt taaatttagc ggctatggca tgcattgggt gcgccaggcg 180
ccgggcaaag gcctggaatg ggtggcggtg atttggtatg atggcagcaa aaaatattat 240
gtggatagcg tgaaaggccg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 300
ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt attattgcgc gcgccagatg 360
ggctattggc attttgatct gtggggccgc ggcaccctgg tgaccgtgag cagcagtggt 420
ggaggaggcg aaattgtgct gacccagagc ccggcgaccc tgagcctgag cccgggcgaa 480
cgcgcgaccc tgagctgccg cgcgagccag agcgtgagca gctatctggc gtggtatcag 540
cagaaaccgg gccaggcgcc gcgcctgctg atttatgatg cgagcaaccg cgcgaccggc 600
attccggcgc gctttagcgg cagcggcagc ggcaccgatt ttaccctgac cattagcagc 660
ctggaaccgg aagattttgc ggtgtattat tgccagcagc gcagcaactg gccgccgctg 720
acctttggcg gcggcaccaa agtggaaatt aaaggcggct gc 762
<210> 165
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 165
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser
20 25 30
Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser
35 40 45
Val Ser Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser
100 105 110
Asn Trp Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
145 150 155 160
Ser Gly Phe Lys Phe Ser Gly Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala
165 170 175
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser
180 185 190
Lys Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
195 200 205
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
210 215 220
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp His
225 230 235 240
Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
245 250 255
Cys
<210> 166
<211> 771
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 166
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc 120
ctgagctgcc gcgcgagcca gagcgtgagc agctatctgg cgtggtatca gcagaaaccg 180
ggccaggcgc cgcgcctgct gatttatgat gcgagcaacc gcgcgaccgg cattccggcg 240
cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg 300
gaagattttg cggtgtatta ttgccagcag cgcagcaact ggccgccgct gacctttggc 360
ggcggcacca aagtggaaat taaaggcgga gggagtggcg gaggcggcca ggtgcagctg 420
gtggaaagcg gcggcggcgt ggtgcagccg ggccgcagcc tgcgcctgag ctgcgcggcg 480
agcggcttta aatttagcgg ctatggcatg cattgggtgc gccaggcgcc gggcaaaggc 540
ctggaatggg tggcggtgat ttggtatgat ggcagcaaaa aatattatgt ggatagcgtg 600
aaaggccgct ttaccattag ccgcgataac agcaaaaaca ccctgtatct gcagatgaac 660
agcctgcgcg cggaagatac cgcggtgtat tattgcgcgc gccagatggg ctattggcat 720
tttgatctgt ggggccgcgg caccctggtg accgtgagca gcggcggctg c 771
<210> 167
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 167
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Lys
35 40 45
Phe Ser Gly Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Tyr Tyr
65 70 75 80
Val Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
85 90 95
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Met Gly Tyr Trp His Phe Asp Leu Trp
115 120 125
Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser
145 150 155 160
Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser
165 170 175
Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu
180 185 190
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe
195 200 205
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
210 215 220
Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp
225 230 235 240
Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly
245 250 255
Cys
<210> 168
<211> 771
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 168
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctct gggtcccagg ctccaccggt 60
caggtgcagc tggtggaaag cggcggcggc gtggtgcagc cgggccgcag cctgcgcctg 120
agctgcgcgg cgagcggctt taaatttagc ggctatggca tgcattgggt gcgccaggcg 180
ccgggcaaag gcctggaatg ggtggcggtg atttggtatg atggcagcaa aaaatattat 240
gtggatagcg tgaaaggccg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 300
ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt attattgcgc gcgccagatg 360
ggctattggc attttgatct gtggggccgc ggcaccctgg tgaccgtgag cagcggcgga 420
gggagtggcg gaggcggcga aattgtgctg acccagagcc cggcgaccct gagcctgagc 480
ccgggcgaac gcgcgaccct gagctgccgc gcgagccaga gcgtgagcag ctatctggcg 540
tggtatcagc agaaaccggg ccaggcgccg cgcctgctga tttatgatgc gagcaaccgc 600
gcgaccggca ttccggcgcg ctttagcggc agcggcagcg gcaccgattt taccctgacc 660
attagcagcc tggaaccgga agattttgcg gtgtattatt gccagcagcg cagcaactgg 720
ccgccgctga cctttggcgg cggcaccaaa gtggaaatta aaggcggctg c 771
<210> 169
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 169
caaattgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat ctccagggga gaaggtcacc 60
atgacctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgaact ggtaccagca gaagtcaggc 120
acctccccca aaagatggat ttatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcac 180
ttcaggggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcggcat ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagtaacc cattcacgtt cggctcgggg 300
acaaagttgg aaataaac 318
<210> 170
<211> 318
<212> DNA
<213> 智人
<400> 170
gacatccaga tgacccagtc tccttcttct ctgtctgctt ctgtcggaga cagagtcaca 60
atcacatgtt ctgcttctag ctctgtctct tacatgaact ggtaccagca gacacctgga 120
aaggctccta agcggtggat ctacgacaca tctaagctcg cttctggagt cccttctaga 180
ttctctggtt ctggctctgg aacagactac acattcacaa tctcttctct ccaacctgag 240
gacatcgcta catactactg ccaacagtgg tctagcaatc ctttcacatt cggacaggga 300
acaaagctgc agatcaca 318
<210> 171
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人
<400> 171
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Gln Ile Thr
100 105
<210> 172
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 172
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gtgccagctc aagtgtaagt tacatgaact ggtaccaaca gaaacctggc 120
caggctccca ggctcctcat ctatgacaca tccaaactgg cttctggagt ccctgctcac 180
ttcaggggca gtgggtctgg gacagacttc actctcacca tcagcagcct agagcctgaa 240
gattttgcag tttattactg tcagcagtgg agtagtaacc cattcacgtt cggccaaggg 300
accaaggtgg aaatcaaa 318
<210> 173
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 173
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 174
<211> 357
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 174
caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcactgggt aaaacagagg 120
cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gccgtggtta tactaattac 180
aatcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actacagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcaactga gcagcctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aagatattat 300
gatgatcatt actgccttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca 357
<210> 175
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 175
caggtccagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggcaagac ctggggcctc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta cacctttact aggtacacga tgcactgggt aaaacagagg 120
cctggacagg gtctggaatg gattggatac attaatccta gccgtggtta tactaattac 180
aaatgcaact gagcagcctg acatctgagg actctgcagt ctattactgt gcaagatatt 240
attcagaagt tcaaggacaa ggccacattg actacagaca aatcctccag cacagcctac 300
gatgatcatt actcacttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca 357
<210> 176
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 176
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 177
<211> 357
<212> DNA
<213> 智人
<400> 177
caggttcagc tggtgcagtc tggaggagga gtcgtccagc ctggaaggtc cctgagactg 60
tcttgtaagg cttctggata caccttcact agatacacaa tgcactgggt cagacaggct 120
cctggaaagg gactcgagtg gattggatac attaatccta gcagaggtta tactaactac 180
aatcagactg cagatggact cactcagacc tgaggatacc ggagtctatt tttgtgctag 240
atattacagg tgaaggacag attcacaatt tctagagaca attctaagaa tacagccttc 300
gatgaccact actgtctgga ctactggggc caaggtaccc cggtcaccgt gagctca 357
<210> 178
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人
<400> 178
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 179
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 179
caggttcagc tggtgcagtc tggaggagga gtcgtccagc ctggaaggtc cctgagactg 60
tcttgtaagg cttctggata caccttcact agatacacaa tgcactgggt cagacaggct 120
cctggaaagg gactcgagtg gattggatac attaatccta gcagaggtta tactaactac 180
aatcagaagg tgaaggacag attcacaatt tctagagaca attctaagaa tacagccttc 240
ctgcagatgg actcactcag acctgaggat accggagtct atttttgtgc tagatattac 300
gatgaccact actcactgga ctactggggc caaggtaccc cggtcaccgt gagctca 357
<210> 180
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 180
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Ala Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Pro Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 181
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 181
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc aggtacacga tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatac attaatccta gccgtggtta tactaattac 180
aatcagaagt tcaaggacag ggtcaccatg accacagaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagatattat 300
gatgatcatt actgccttga ctactggggc cagggcaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 182
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 182
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 183
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 183
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc aggtacacga tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatac attaatccta gccgtggtta tactaattac 180
aatcagaagt tcaaggacag ggtcaccatg accacagaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagatattat 300
gatgatcatt actcacttga ctactggggc cagggcaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 184
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 184
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Arg Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Ser Arg Gly Tyr Thr Asn Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 185
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗原结合构建体或其子部分
<400> 185
Met Gln Ser Gly Thr His Trp Arg Val Leu Gly Leu Cys Leu Leu Ser
1 5 10 15
Val Gly Val Trp Gly Gln
20
<210> 186
<211> 185
<212> PRT
<213> 智人
<400> 186
Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys Val
1 5 10 15
Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys Pro Gln Tyr Pro Gly
20 25 30
Ser Glu Ile Leu Trp Gln His Asn Asp Lys Asn Ile Gly Gly Asp Glu
35 40 45
Asp Asp Lys Asn Ile Gly Ser Asp Glu Asp His Leu Ser Leu Lys Glu
50 55 60
Phe Ser Glu Leu Glu Gln Ser Gly Tyr Tyr Val Cys Tyr Pro Arg Gly
65 70 75 80
Ser Lys Pro Glu Asp Ala Asn Phe Tyr Leu Tyr Leu Arg Ala Arg Val
85 90 95
Cys Glu Asn Cys Met Glu Met Asp Val Met Ser Val Ala Thr Ile Val
100 105 110
Ile Val Asp Ile Cys Ile Thr Gly Gly Leu Leu Leu Leu Val Tyr Tyr
115 120 125
Trp Ser Lys Asn Arg Lys Ala Lys Ala Lys Pro Val Thr Arg Gly Ala
130 135 140
Gly Ala Gly Gly Arg Gln Arg Gly Gln Asn Lys Glu Arg Pro Pro Pro
145 150 155 160
Val Pro Asn Pro Asp Tyr Glu Pro Ile Arg Lys Gly Gln Arg Asp Leu
165 170 175
Tyr Ser Gly Leu Asn Gln Arg Arg Ile
180 185
<210> 187
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 NH1
<400> 187
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
20
<210> 188
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH1
<400> 188
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 189
<211> 23
<212> PRT
<213> 智人
<400> 189
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
20
<210> 190
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH2
<400> 190
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 191
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 NH3
<400> 191
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
20 25
<210> 192
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH3
<400> 192
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25
<210> 193
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 NH4
<400> 193
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Val Glu
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
20 25
<210> 194
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH4
<400> 194
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Val Glu
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25 30
<210> 195
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 NH5
<400> 195
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
20 25
<210> 196
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG1 EH5
<400> 196
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Pro
1 5 10 15
Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25 30
<210> 197
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 NH1
<400> 197
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro
<210> 198
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 EH1
<400> 198
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 199
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 NH2
<400> 199
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro
<210> 200
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人 IgG2 EH2
<400> 200
Glu Arg Lys Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 201
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG3/IgG1 EH6
<400> 201
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Val Glu Cys
1 5 10 15
Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25
<210> 202
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG3/IgG1 EH7
<400> 202
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25
<210> 203
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG3/IgG1 EH8
<400> 203
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20 25 30
<210> 204
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG4 NH
<400> 204
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro
20
<210> 205
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG4 EH
<400> 205
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
Ser Gly Gly Gly Ser Gly
20
<210> 206
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 上铰合
<400> 206
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
1 5 10
<210> 207
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 上铰合
<400> 207
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr
1 5 10
<210> 208
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 上铰合
<400> 208
Glu Arg Lys
1
<210> 209
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 上铰合
<400> 209
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr
1 5 10
<210> 210
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 上铰合
<400> 210
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro
1 5
<210> 211
<211> 4
<212> PRT
<213> 智人
<400> 211
Cys Pro Pro Cys
1
<210> 212
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人
<400> 212
Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 213
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 213
Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys
1 5
<210> 214
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 214
Cys Pro Pro Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
1 5 10
<210> 215
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 215
Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Pro Cys
1 5 10
<210> 216
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 216
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 217
<211> 9
<212> PRT
<213> 智人
<400> 217
Ser Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 218
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 218
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys
1 5
<210> 219
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人
<400> 219
Gly Gly Gly Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10
<210> 220
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人
<400> 220
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
1 5
<210> 221
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人
<400> 221
Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
1 5
<210> 222
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 222
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Cys Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 223
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<400> 223
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Ser Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 224
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = C 或 S
<400> 224
Tyr Tyr Asp Asp His Tyr Xaa Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 225
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 225
His Gly Arg Gly His
1 5
<210> 226
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 226
Trp Pro Leu Arg Phe
1 5
<210> 227
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 227
Ala Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg
1 5
<210> 228
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 228
Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp
1 5
<210> 229
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 229
Ala Lys Tyr Arg Gly
1 5
<210> 230
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 230
Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro
1 5 10
<210> 231
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 231
Pro Trp Thr His Gly
1 5
<210> 232
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 232
His Gly Ser Tyr Gly
1 5
<210> 233
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 233
Lys Arg Leu Gly Ala
1 5
<210> 234
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 234
His Ala Leu Leu Trp
1 5
<210> 235
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(2)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 235
Leu Arg Gly Tyr Trp
1 5
<210> 236
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 236
Val Ala Ser His Phe
1 5
<210> 237
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (3)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 237
Asn Gly Asn Val His
1 5
<210> 238
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 238
Arg Trp Phe Asn Val
1 5
<210> 239
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 239
His Ala Val Trp His
1 5
<210> 240
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 240
Trp Val Pro Leu Trp
1 5
<210> 241
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 241
Phe Phe Arg Leu Tyr
1 5
<210> 242
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(3)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (5)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 242
Trp Tyr Tyr Gly Phe
1 5
<210> 243
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 243
Ala Gly Asp Ser Trp
1 5
<210> 244
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 244
His Val Arg His Gly
1 5
<210> 245
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (2)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 245
Gly His Thr Trp Pro
1 5
<210> 246
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (3)...(3)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (5)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 246
His Gly Arg Gly His
1 5
<210> 247
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 247
Thr His Pro Thr Thr
1 5
<210> 248
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 248
Phe Ala Gly Tyr His
1 5
<210> 249
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 249
Trp Thr Glu His Gly
1 5
<210> 250
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 250
Thr Asn Asp Phe Asp
1 5
<210> 251
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<400> 251
Leu Phe Pro Phe Asp
1 5
<210> 252
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(4)
<223> D-氨基酸
<400> 252
Ser Leu Arg Phe Gly
1 5
<210> 253
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(3)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (5)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 253
Tyr Phe Arg Gly Ser
1 5
<210> 254
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(4)
<223> D-氨基酸
<400> 254
Trp Asn Trp Val Gly
1 5
<210> 255
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(4)
<223> D-氨基酸
<400> 255
Val Ala Trp Leu Gly
1 5
<210> 256
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(4)
<223> D-氨基酸
<400> 256
Phe His Val His Gly
1 5
<210> 257
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 257
Trp Val Ser Asn Val
1 5
<210> 258
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 258
Trp Ser Val Asn Val
1 5
<210> 259
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(4)
<223> Leu Asn Ser His Gly
<400> 259
Leu Asn Ser His Gly
1 5
<210> 260
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 260
Leu Asn Ser His Gly
1 5
<210> 261
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(4)
<223> D-氨基酸
<400> 261
Asn Ser Val His Gly
1 5
<210> 262
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(4)
<223> D-氨基酸
<400> 262
Thr Thr Val His Gly
1 5
<210> 263
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(3)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (5)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 263
Phe Asp Val Gly His
1 5
<210> 264
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(2)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 264
Arg His Gly Trp Lys
1 5
<210> 265
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成肽
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (3)...(3)
<223> D-氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> (5)...(5)
<223> D-氨基酸
<400> 265
His Gly Arg Gly His
1 5

Claims (78)

1.第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体用于对受试者成像的用途，所述第一抗原结合构建体包含第一放射性核素示踪剂且所述第二抗原结合构建体包含第二放射性核素示踪剂，其中所述成像包括：
向受试者施用包含所述第一放射性核素示踪剂的所述第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；
使用正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描测量所述受试者中的所述第一放射性核素示踪剂的水平来评估所述受试者的一个或多个组织中表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度；
向所述受试者施用包含所述第二放射性核素示踪剂的所述第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，并且其中所述第一靶标和所述第二靶标不同；
使用正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描测量所述受试者中的所述第二放射性核素示踪剂的水平来评估所述受试者的一个或多个组织中表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度；
基于表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度以及表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境的指示；以及
基于生成的图像确定所述一个或多个组织中的表达所述第一靶标的细胞与表达所述第二靶标的细胞之间的相对丰度。
2.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述成像还包括：
向所述受试者施用包含第三放射性核素示踪剂的第三抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，并且其中所述第三靶标不同于所述第一靶标和所述第二靶标；
使用正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描测量所述受试者中的所述第三放射性核素示踪剂的水平来评估所述受试者的一个或多个组织中表达所述第三靶标的细胞的分布和/或丰度。
3.根据权利要求2所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述成像包括确定所述一个或多个组织中的每一个中表达任一靶标的细胞与表达另一靶标的细胞相比的相对丰度。
4.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述成像还包括识别以下各项之间的重叠的一个或多个区域：
表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度和表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度。
5.根据权利要求2所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述成像包括识别以下各项之间的重叠的一个或多个区域：
表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度和表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度
表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度和表达所述第三靶标的细胞的分布和/或丰度；或
表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度和表达所述第三靶标的细胞的分布和/或丰度。
6.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述图像提供所述受试者的一个或多个组织中的以下一项或多项：
CD3+、CD4+和CD8+细胞中的任何两个或多个的丰度；
CD3+、CD4+和CD8+细胞中任一个与CD3+、CD4+和CD8+细胞中另一个相比的相对丰度；和
CD3+、CD4+和CD8+细胞中任一个与CD3+、CD4+和CD8+细胞中另一个的比。
7.根据权利要求2所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述图像提供所述受试者的一个或多个组织中的以下一项或多项：
CD3+、CD4+和CD8+细胞中的每个的丰度；
CD3+、CD4+和CD8+细胞的相对丰度；和
CD3+、CD4+和CD8+细胞彼此之间的比。
8.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在施用包含放射性核素示踪剂的抗原结合构建体的1小时至2周内测量放射性核素示踪剂的水平。
9.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在施用所述第一抗原结合构建体的1小时至2周内测量所述第一放射性核素示踪剂的水平。
10.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在施用所述第二抗原结合构建体的1小时至2周内测量所述第二放射性核素示踪剂的水平。
11.根据权利要求2所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在施用所述第三抗原结合构建体的1小时至2周内测量所述第三放射性核素示踪剂的水平。
12.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在不同天施用不同的抗原结合构建体。
13.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在不同天进行施用所述第一抗原结合构建体和所述第二抗原结合构建体。
14.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在与施用所述第二抗原结合构建体的同一天测量所述第一放射性核素示踪剂的水平。
15.根据权利要求2所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在与施用所述第三抗原结合构建体的同一天测量所述第二放射性核素示踪剂的水平。
16.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在同一天进行测量所述第一放射性核素示踪剂的水平和测量所述第二放射性核素示踪剂的水平。
17.根据权利要求2所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在同一天进行测量第二放射性核素示踪剂的水平和测量所述第三放射性核素示踪剂的水平。
18.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在施用所述第二抗原结合构建体之前进行施用所述第一抗原结合构建体。
19.根据权利要求15所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在彼此间隔2小时内测量所述第一放射性核素示踪剂的水平、第二放射性核素示踪剂的水平和第三放射性核素示踪剂的水平。
20.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中同时地施用所述第一抗原结合构建体和施用所述第二抗原结合构建体。
21.根据权利要求20所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中共同施用所述第一抗原结合构建体和所述第二抗原结合构建体。
22.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中放射性核素示踪剂各自选自18F、64Cu、68Ga、89Zr、123I和99mTc。
23.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第一放射性核素示踪剂是18F、64Cu或68Ga。
24.根据权利要求23所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第二放射性核素示踪剂是18F或89Zr。
25.根据权利要求1所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第一放射性核素示踪剂是123I或99mTc。
26.根据权利要求25所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第二放射性核素示踪剂是123I或99mTc。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述受试者患有癌症。
28.根据权利要求27所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，还包括将所述一个或多个组织识别为包含癌组织。
29.根据权利要求28所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中使用计算机断层扫描、X射线、FDG-PET或磁共振成像将所述一个或多个组织识别为包含癌组织。
30.根据权利要求1至26中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述受试者中的所述一个或多个组织包括肺、肝、结肠、胃、心脏、脑、肾、脾、胰腺、食管、淋巴结、骨、骨髓、前列腺、宫颈、卵巢、乳腺、尿道、膀胱、皮肤、颈部、关节或它们的部分中的一种或多种。
31.根据权利要求1至26中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述受试者患有选自实体瘤、非实体瘤、自身免疫疾病、传染病的疾病或病况；或者所述受试者正在从中风或心脏病事件中恢复，或正在评估对所述疾病或病况的治疗、或作为用于治疗所述疾病或病况的治疗剂的临床试验的一部分的反应。
32.根据权利要求31所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述自身免疫疾病为关节炎、移植排斥、移植物抗宿主病、狼疮、多发性硬化或1型糖尿病，且其中所述传染病为病毒、细菌或真菌感染。
33.根据权利要求1至26中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述一个或多个组织的免疫环境被报道为免疫评分，或用于用其他诊断结果生成免疫评分。
34.根据权利要求33所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述免疫评分包括对选自IL-6、C反应蛋白、VEGF、纤连蛋白、乳酸脱氢酶、可溶性CD25、NY-ESO-1抗体、IFN-γ、PD-Ll、肿瘤相关成纤维细胞标记物、中性粒细胞/淋巴细胞比、癌症相关纤维化标记物、肿瘤相关巨噬细胞标记物和趋化因子中的一个或多个生物标记物的评估。
35.第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体在制备用于提供癌症预后的试剂盒中的用途，所述第一抗原结合构建体包含第一可检测标记物且所述第二抗原结合构建体包含第二可检测标记物
其中所述第一抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标；
其中所述第二抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，并且其中所述第一靶标和所述第二靶标不同；
其中通过对施用了所述第一抗原结合构建体的受试者成像，获取所述受试者的肿瘤中表达所述第一靶标的细胞的分布，并且其中通过对施用了所述第二抗原结合构建体的所述受试者成像，获取所述受试者的所述肿瘤中表达所述第二靶标的细胞的分布，其中所述成像包括正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描，其中在与成像所述受试者以获取在所述肿瘤中表达所述第二靶标的细胞的分布的同一天，成像所述受试者以获取在所述肿瘤中表达所述第一靶标的细胞的分布，
其中获取表达所述第一靶标的细胞的分布和获取表达所述第二靶标的细胞的分布允许确定所述肿瘤中CD3+、CD4+和/或CD8+细胞的丰度和/或相对丰度。
36.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述试剂盒包括：
包含第三可检测标记物的第三抗原结合构建体，其中所述第三抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，其中所述第三靶标不同于所述第一靶标和所述第二靶标，
其中通过对施用了所述第三抗原结合构建体的所述受试者成像，获取所述受试者的所述肿瘤中表达所述第三靶标的细胞的分布。
37.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中通过以下项确定所述肿瘤中的CD3+、CD4+和/或CD8+细胞的所述丰度或所述相对丰度：
基于表达所述第一靶标的细胞的分布和表达所述第二靶标的细胞的分布生成图像；以及
基于所述图像确定所述肿瘤中的CD3+、CD4+和/或CD8+细胞的丰度或相对丰度。
38.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在施用所述第一抗原结合构建体之前，所述受试者已接受针对所述癌症的治疗。
39.根据权利要求38所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述治疗包括免疫疗法、化学疗法、激素疗法、放射疗法、手术、疫苗疗法、溶瘤病毒疗法、或细胞疗法中的一种或多种。
40.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中使用计算机断层扫描、X射线、FDG-PET或磁共振成像扫描所述受试者，以识别所述受试者中的肿瘤。
41.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在成像以获得表达所述第二靶标的细胞的分布的1小时至2周内，施用所述第一抗原结合构建体。
42.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在向所述受试者施用所述第一抗原结合构建体的1小时至2周内，通过对所述受试者成像获取所述肿瘤中表达所述第一靶标的细胞的分布。
43.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在向所述受试者施用所述第二抗原结合构建体的1小时至2周内，通过对所述受试者成像获取所述肿瘤中表达所述第二靶标的细胞的分布。
44.根据权利要求36所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在向所述受试者施用所述第三抗原结合构建体的1小时至2周内，通过对所述受试者成像获取所述肿瘤中表达所述第三靶标的细胞的分布。
45.根据权利要求36所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在不同天施用不同的抗原结合构建体。
46.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在不同天施用所述第一抗原结合构建体和所述第二抗原结合构建体。
47.根据权利要求36所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在与成像所述受试者以获取在所述肿瘤中表达所述第三靶标的细胞的分布的同一天，成像所述受试者以获取在所述肿瘤中表达所述第二靶标的细胞的分布。
48.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在与成像所述受试者以获取在所述肿瘤中表达所述第二靶标的细胞的分布的同一天，施用所述第一抗原结合构建体。
49.根据权利要求36所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在与成像所述受试者以获取在所述肿瘤中表达所述第三靶标的细胞的分布的同一天，施用所述第二抗原结合构建体。
50.根据权利要求35至49中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第一可检测标记物和所述第二可检测标记物各自是选自18F、64Cu、68Ga、89Zr、123I和99mTc的放射性核素示踪剂。
51.根据权利要求50所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第一可检测标记物是18F、64Cu或68Ga。
52.根据权利要求51所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第二可检测标记物是18F或89Zr。
53.根据权利要求50所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第一可检测标记物是123I或99mTc。
54.根据权利要求53所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第二可检测标记物是123I或99mTc，其中所述第一可检测标记物和第二可检测标记物不同。
55.根据权利要求35至49中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述癌症为黑色素瘤、颈部癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、食管癌、结直肠癌、肾细胞癌、前列腺癌、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、肝癌或淋巴瘤、宫颈鳞状细胞癌或鼻咽癌或骨癌。
56.根据权利要求35至49中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述受试者患有黑色素瘤、非小细胞肺癌或肾细胞癌。
57.根据权利要求1至21中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述成像还包括：
向所述受试者施用与IFN-γ结合并包含放射性核素示踪剂的抗原结合构建体；以及
使用正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描测量所述受试者中的放射性核素示踪剂的水平来评估所述受试者的一个或多个组织中的IFN-γ的分布和/或丰度。
58.根据权利要求36至49中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述试剂盒包括第四抗原结合构建体，所述第四抗原结合构建体结合IFN-γ并且包括第四放射性核素示踪剂，其中通过对施用了所述第四抗原结合构建体的所述受试者成像，获取所述受试者的一个或多个组织中的IFN-γ的分布，其中所述成像包括正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描。
59.第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体用于对受试者成像的用途，所述第一抗原结合构建体包含第一可检测标记物且所述第二抗原结合构建体包含第二可检测标记物，其中所述成像包括：
向受试者施用包含所述第一可检测标记物的所述第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第一靶标；
使用非侵入性成像测量所述受试者中的所述第一可检测标记物的水平来评估所述受试者的一个或多个组织中表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度；
向所述受试者施用包含所述第二可检测标记物的所述第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第二靶标，并且其中所述第一靶标和所述第二靶标不同；
使用非侵入性成像测量所述受试者中的所述第二可检测标记物的水平来评估所述受试者的所述一个或多个组织中表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度；以及
基于表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度以及表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境的指示，并且
其中在同一天进行使用非侵入性成像测量所述第一可检测标记物的水平和使用非侵入性成像测量所述第二可检测标记物的水平。
60.根据权利要求59所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在同一天进行施用所述第一抗原结合构建体和施用所述第二抗原结合构建体。
61.根据权利要求59所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述第一可检测标记物和所述第二可检测标记物不同，并且所述第一可检测标记物和所述第二可检测标记物选自放射性核素、光学染料、荧光化合物、切伦科夫发光剂、顺磁离子、磁共振成像造影剂、磁共振成像增强剂和纳米粒子。
62.根据权利要求59至61中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述非侵入性成像选自正电子发射断层扫描、单光子发射计算机断层扫描、磁共振成像、计算机断层扫描、伽马射线成像、光学成像和切伦科夫发光成像。
63.根据权利要求1至21、35至49和59至61中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述抗原结合构建体是抗体或其抗原结合片段。
64.根据权利要求63所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述抗原结合构建体为Fab’、F(ab’)2、Fab、Fv、还原IgG、scFv片段、微抗体、双体抗体、cys双体抗体或纳米抗体。
65.根据权利要求1至21、35至49和59至61中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中结合CD8的所述抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:1-79中所示的任一序列至少80％同一性的氨基酸序列。
66.根据权利要求1至21、35至49和59至61中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中结合CD4的所述抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:83-99中所示的任一序列至少80％同一性的氨基酸序列。
67.根据权利要求1至21、35至49和59至61中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中结合CD3的所述抗原结合构建体包含与SEQ ID NO:101-184中所示的任一序列至少80％同一性的氨基酸序列。
68.根据权利要求1至21、35至49和59至61中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述CD3为人CD3，所述CD4为人CD4，且所述CD8为人CD8。
69.根据权利要求68所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中所述人CD3包含SEQ ID NO:186中所示的序列，所述人CD4包含SEQ ID NO:100中所示的序列，且所述人CD8包含SEQ ID NO:80-82中所示的任一序列。
70.根据权利要求35所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在对所述受试者成像以获取所述肿瘤中表达所述第二靶标的细胞的分布的2小时内，进行对所述受试者成像以获取所述肿瘤中表达所述第一靶标的细胞的分布。
71.根据权利要求47所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中在对所述受试者成像以获取所述肿瘤中表达所述第三靶标的细胞的分布的2小时内，进行对所述受试者成像以获取所述肿瘤中表达所述第一靶标的细胞的分布。
72.第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体用于对受试者成像的用途，所述第一抗原结合构建体包含第一放射性核素示踪剂且所述第二抗原结合构建体包含第二放射性核素示踪剂，其中所述成像包括：
向受试者施用包含所述第一放射性核素示踪剂的所述第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、CD8和INF-γ的第一靶标，其中所述第一放射性核素示踪剂包含18F或89Zr或99mTc；
使用非侵入性成像测量所述受试者中的所述第一放射性核素示踪剂的水平来评估所述受试者的一个或多个组织中表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度；
向所述受试者施用包含第二放射性核素示踪剂的所述第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4、CD8和IFN-γ的第二靶标，并且其中所述第一靶标和所述第二靶标不同；
使用非侵入性成像测量所述受试者中的所述第二放射性核素示踪剂的水平来评估所述受试者的所述一个或多个组织中表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度，其中在进行非侵入性成像以测量所述受试者中所述第二放射性核素示踪剂的水平的同一天，进行非侵入性成像以测量所述受试者中所述第一放射性核素示踪剂的水平；以及
基于表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度以及表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境的指示。
73.根据权利要求72所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途，其中非侵入性成像以测量所述受试者中所述第二放射性核素示踪剂的水平的2小时内，进行非侵入性成像以测量所述受试者中所述第一放射性核素示踪剂的水平。
74.第一抗原结合构建体、第二抗原结合构建体和第三抗原结合构建体用于对受试者成像的用途，所述第一抗原结合构建体包含第一放射性核素示踪剂，所述第二抗原结合构建体包含第二放射性核素示踪剂且所述第三抗原结合构建体包含第三放射性核素示踪剂，其中所述成像包括：
向受试者施用包含所述第一放射性核素示踪剂的所述第一抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第一靶标，其中所述第一放射性核素示踪剂包含18F；
在施用所述第一抗原结合构建体之后的6小时以内，使用正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描测量所述受试者中的所述第一放射性核素示踪剂的水平，来评估所述受试者的一个或多个组织中表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度；
在施用所述第一抗原结合构建体之后的12至48小时，向所述受试者施用包含所述第二放射性核素示踪剂的所述第二抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第二靶标，其中所述第一靶标和所述第二靶标不同，所述第二放射性核素示踪剂包含89Zr；
使用正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描测量所述受试者中的所述第二放射性核素示踪剂的水平，来评估所述受试者的所述一个或多个组织中表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度；
向所述受试者施用包含所述第三放射性核素示踪剂的所述第三抗原结合构建体，其中抗原结合构建体选择性结合选自CD3、CD4和CD8的第三靶标，并且其中所述第三靶标与所述第一靶标和所述第二靶标不同；
使用正电子发射断层扫描或单光子发射计算机断层扫描测量所述受试者中的所述第三放射性核素示踪剂的水平，来评估所述受试者的所述一个或多个组织中表达所述第三靶标的细胞的分布和/或丰度；以及
基于表达所述第一靶标的细胞的分布和/或丰度以及表达所述第二靶标的细胞的分布和/或丰度生成图像，其中所述图像提供所述一个或多个组织的免疫环境的指示。
75.一种受试者的一个或多个组织的图像，包括以下项的组合：
包括第一抗原结合构建体的受试者的一个或多个组织中的选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第一靶标、和/或表达所述第一靶标的细胞的第一非侵入性图案化分布和/或丰度，所述第一抗原结合构建体包含第一可检测标记物，其中所述第一抗原结合构建体选择性结合所述第一靶标；以及
包括第二抗原结合构建体的所述受试者的所述一个或多个组织中的选自CD3、CD4、IFN-γ和CD8的第二靶标、和/或表达所述第二靶标的细胞的第二非侵入性图案化分布和/或丰度，所述第二抗原结合构建体包含第二可检测标记物，其中所述第二抗原结合构建体选择性结合所述第二靶标，并且其中所述第一靶标和所述第二靶标不同，
其中所述组合表示所述受试者的一个或多个组织的免疫环境。
76.根据权利要求75所述的图像，其中所述图像是二维的。
77.根据权利要求75所述的图像，其中所述图像是三维的。
78.一种通过权利要求1至21、35至49、59至61、72和73中任一项所述的第一抗原结合构建体和第二抗原结合构建体的用途生成的图像。
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