CN115087652A - 作为血浆激肽释放酶抑制剂的杂芳族甲酰胺衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明是关于式(I)的杂芳族甲酰胺，其中R、R1、A1、A2、L1及L2是如说明书及申请专利范围中所定义，及其药学上可接受的盐，其可用于治疗可受抑制血浆激肽释放酶所影响的疾病的方法中。

Description

作为血浆激肽释放酶抑制剂的杂芳族甲酰胺衍生物
【技术领域】
本发明是关于作为血浆激肽释放酶抑制剂的新颖杂芳族甲酰胺衍生物及其药学上可接受的盐。另外，本发明是关于包含所述化合物的药物组合物及组合及关于其在用于治疗可受抑制血浆激肽释放酶所影响的疾病的方法中的用途。特别地，本发明的药物组合物适用于糖尿病性并发症、眼部疾病及水肿相关疾病，特别是糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性、脉络膜新血管生成、遗传性血管水肿及中风后脑水肿的预防及/或疗法。
【先前技术】
血浆激肽释放酶(PKK)为由肝脏中肝细胞分泌的作为非活性血浆前激肽释放酶的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，其在血浆中以游离酶原或以结合至高分子量激肽原(其经活化以得到活性PKK，除加工其他底物外可自激肽原释放激肽)的异二聚体复合物循环。激肽是发炎的强效介体，其透过G蛋白偶联受体诸如缓激肽受体起作用。
据认为，PKK在许多发炎病症中起作用且可在诸如以下的病症中具有许多牵连：遗传性血管水肿(HAE)、视网膜病变或糖尿病性视网膜病变、增生性及非增生性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、有临床意义的黄斑水肿(CSME)、黄斑囊样水肿(CME)、白内障摘除后的CME、冷冻疗法诱导的CME、葡萄膜炎诱导的CME、眼内炎、血管阻塞(例如，视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞或半侧视网膜静脉阻塞)后的CME、视网膜水肿、与糖尿病性视网膜病变的白内障手术有关并发症、高血压性视网膜病变、视网膜创伤、干性及湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、脉络膜新血管生成(CNV；例如非渗出性脉络膜新血管生成)、后玻璃体剥离(PVD)、缺血性再灌注损伤，例如在与组织及/或器官移植相关的各种情况、手术诱导的脑损伤、局部脑缺血、全脑缺血、与神经胶质瘤相关的水肿、脊髓损伤、疼痛、缺血、局部脑缺血、神经及认知缺陷、深静脉血栓形成、中风(包括中风后中枢神经系统水肿)、心肌梗塞、获得性血管水肿、与药物有关的水肿(包括ACE抑制剂诱导的水肿以及组织纤溶酶原活化物(tPA)诱导的血管水肿)、高海拔脑水肿、细胞毒性脑水肿、渗透性脑水肿、阻塞性脑积水、辐射诱导的水肿、淋巴水肿、颅脑损伤、出血性中风(例如脑中风或蛛网膜下腔中风)、脑内出血、缺血性中风的出血性转化、与损伤或手术相关的脑创伤、脑动脉瘤、动静脉畸形、外科手术(例如心胸手术，诸如心肺绕道或冠状动脉绕道接枝)期间的血液损失减少、瘙痒、具有发炎成分的病症(例如多发性硬化症)、癫痫、脑炎、阿尔茨海默症(Alzheimer's disease)、白天过度嗜睡、原发性高血压、与糖尿病或高血脂症相关的血压升高、肾功能不全、慢性肾脏疾病、心脏衰竭、微量白蛋白尿、白蛋白尿、蛋白尿、与血管渗透性增加(例如视网膜血管渗透性增加、腿、脚、踝血管渗透性增加)相关的病症、脑出血、凝血病症(诸如血栓形成)、深静脉血栓形成、纤溶治疗后的凝血、心绞痛、血管水肿、败血症、关节炎(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、感染性关节炎(infection arthritis))、狼疮、痛风、牛皮癣、发炎性肠病(IBD，诸如溃疡性结肠炎(UC)及克罗恩氏病(Crohn′s disease；CD))、糖尿病、糖尿病性并发症、由代谢综合征、传染性疾病、与星形胶质细胞活化有关的疾病(例如阿尔茨海默症或多发性硬化症)、帕金森氏病(Parkinson's disease)、肌萎缩性侧索硬化症、库贾氏病(Creutzfeld-Jacob disease)、中风、癫痫及创伤(例如脑创伤)引起的并发症、过敏性水肿(例如慢性过敏性鼻窦炎或常年性鼻炎的气流阻塞)；急性哮喘的气流阻塞；与全身性红斑狼疮(SLE)相关的浆膜炎、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、冠状病毒疾病2019(COVID-19)有关肺炎、纤维化疾病、肝纤维化、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肾损伤及其他疾病。亦认为PKK在血液透析期间的过敏反应及血栓形成中起着重要作用。
像本发明化合物，PKK抑制剂被认为可用于治疗例如如前文所提及的多种病症；特别地，其应具有减少与糖尿病性视网膜病变及糖尿病性黄斑水肿或水肿相关疾病相关的视网膜血管渗透性的治疗效用。
PKK抑制剂应特别可用于治疗疾病中的水肿形成，例如与缺血性再灌注损伤、视网膜病变或水肿相关疾病(诸如遗传性血管水肿、黄斑水肿及脑水肿)有关的水肿形成。PKK抑制剂被认为尤其可用于治疗视网膜病变，例如糖尿病及/或高血压相关的视网膜病变，及可用于治疗黄斑水肿，例如与糖尿病及/或高血压相关的黄斑水肿。
糖尿病的其他并发症，诸如脑出血、肾病、心肌病及神经病变，其等均与PKK相关，亦可被视为是PKK抑制剂的标靶。
适用于治疗性及/或预防性用途的PKK抑制剂应强效结合至PKK且具有针对PKK的高选择性。其应自胃肠道被充分吸收，是足够代谢稳定且具有有利的药物动力学性质。其应是非毒性且证实很少副作用。
此项技术中已知低分子量PKK抑制剂，例如，公开于WO 2009/097141、WO 2013/111107、WO 2013/111108、WO 2014/188211、WO 2017/072020、WO 2017/072021及WO 2018/192866中的化合物。
【发明内容】
在第一方面中，本发明是关于一种式(I)化合物
Figure BDA0003792982170000031
其中
R是选自由
Figure BDA0003792982170000032
组成的组R-G1；
R1是选自由H及F组成的组R1-G1；
部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝N-CR＝N-、＝N-CR＝CH-及＝CH-CR＝N-组成的组A-G1；及
部分-L1＝L2-是选自由-N＝N-、-N＝CH-及-CH＝N-组成的组L-G1；
其同功异型物、互变异构体、立体异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、水合物、共晶体及盐，特别是其药学上可接受的共晶体及盐、或其组合。
在第二方面中，本发明是关于一种药物组合物，其包含一或多种如上文或下文所定义的式(I)化合物、及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
在第三方面中，本发明是关于一种药物组合物，其包含一或多种如上文或下文所定义的式(I)化合物、及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐、及一或多种另外治疗剂，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
在第四方面中，本发明是关于如上文或下文所定义的式(I)化合物、及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐，其用作药物。
在第五方面中，本发明是关于一种用于有需要的患者的可受抑制血浆激肽释放酶所影响的疾病或病状的治疗(亦即疗法)及/或预防的方法，所述方法包括对患者投与一或多种如上文或下文所定义的式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐。
另外，本发明是关于一种或多种如上文或下文所定义的式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐于制造用于可受抑制血浆激肽释放酶所影响的疾病或病状的治疗(亦即疗法)及/或预防的药物的用途。
此外，本发明是关于如上文或下文所定义的式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐，其用于有需要的患者中的可受抑制血浆激肽释放酶所影响的疾病或病状的治疗(亦即疗法)及/或预防的方法。
本领域技术人员将直接自前述及以下描述及实施例明了本发明的其他方面。
一般术语及定义
本文未具体定义的术语应由本领域技术人员根据本发明及上下文提供给其的含义。然而，如本说明书所用，除非另有相反指明，否则以下术语具有所指示的含义且遵守以下约定。
术语“根据本发明的化合物”、“式(I)化合物”、“本发明化合物”及类似者表示根据本发明的式(I)化合物，包括其互变异构体、立体异构体及其混合物及其盐，特别是其药学上可接受的盐，及此类化合物的溶剂合物、水合物及共晶体，特别是其药学上可接受的共晶体，包括此类互变异构体、立体异构体及其盐的溶剂合物、水合物及共晶体。
再者，除非具体指示，否则在本说明书及随附申请专利范围中，给定的化学式或名称应涵盖互变异构体及所有立体、光学及几何异构体(例如对映异构体、非对映异构体、E/Z异构体等)及其外消旋异构体以及不同比例的单独对映异构体的混合物、非对映异构体的混合物、或任何前述形式的混合物(其中存在此类异构体及对映异构体)、以及盐(包括其药学上可接受的盐)、及其溶剂合物(诸如例如水合物，包括游离化合物的溶剂合物或化合物的盐的溶剂合物)、及其共晶体(包括其药学上可接受的共晶体及游离化合物或其盐的共晶体)。
词组“药学上可接受”在本文中用于指在合理医学判断范围内适用于与人类及动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症且符合合理效益/风险比的其等化合物、物质、组合物及/或剂型。
如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中所述亲本化合物是通过制备其酸或碱盐经修饰。药学上可接受的盐的实施例包括但不限于碱性残基(诸如胺)的无机酸或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱性或有机盐；及类似者。
例如，此类盐包括来自苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、龙胆酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、4-甲基苯磺酸、磷酸、水杨酸、琥珀酸、硫酸及酒石酸的盐。
本发明的药学上可接受的盐可通过习知化学方法自包含碱性或酸性部分的亲本化合物合成。一般而言，此类盐可通过使这些化合物的游离酸或碱形式与足量适宜碱或酸在水中或在有机稀释剂(像醚、EtOAc、EtOH、异丙醇或MeCN、或其混合物)中反应来制备。
除那些以上所提及者以外的例如可用于纯化或分离本发明化合物的其他酸的盐(例如三氟乙酸盐)亦构成本发明的一部分。
如本文所用，“药学上可接受的共晶体”是指所公开的化合物的衍生物，其中所述亲本化合物是通过一或多种共形成剂制备其共晶体经修饰。再者，涵盖所公开的化合物的溶剂合物及/或盐的共晶体。
例如，共形成剂包括氢键供体(诸如羧酸)及氢键受体(诸如胺及酰胺)。
可自亲本化合物通过本领域技术人员已知的方法，包括基于固体的方法，诸如固态研磨、熔融挤出及熔融结晶、及基于液体的方法，诸如溶液结晶、溶剂蒸发、冷却结晶、超临界流体辅助结晶、超音波辅助结晶、喷雾干燥、液体辅助研磨及行星式滚轧(planetarymilling)来合成本发明的药学上可接受的共晶体。
假若本发明化合物以化学名称的形式及呈式子描绘，则在存在任何差异的情况下应以式子为准。
在以下所定义的基团(group)、基团(radical)或部分中，经常在基团之前指定碳原子数，例如C1-6-烷基意指具有1至6个碳原子的烷基基团(group/radical)。
可在子式中使用星号以指示连接至如所定义的核心分子的键。就子式中的超过一个连接点，亦即超过一个星号而言，星号可进一步由核心分子的所连接部分的带括号标识指定。
取代基的原子数以最接近核心或所述取代基所连接的基团的原子开始。
例如，术语“3-羧基丙基基团”表示以下取代基：
Figure BDA0003792982170000061
其中所述羧基基团是连接至丙基基团的第三碳原子。术语“1-甲基丙基-”、“2,2-二甲基丙基-”或“环丙基甲基-”基团表示以下基团：
Figure BDA0003792982170000071
单独或与另一基团组合的术语“C1-n-烷基”(其中n为1至n的整数)表示具有1至n个C原子的非环状、饱和、分支链或直链烃基团。例如，术语C1-5-烷基包括基团H3C-、H3C-CH2-、H3C-CH2-CH2-、H3C-CH(CH3)-、H3C-CH2-CH2-CH2-、H3C-CH2-CH(CH3)-、H3C-CH(CH3)-CH2-、H3C-C(CH3)2-、H3C-CH2-CH2-CH2-CH2-、H3C-CH2-CH2-CH(CH3)-、H3C-CH2-CH(CH3)-CH2-、H3C-CH(CH3)-CH2-CH2-、H3C-CH2-C(CH3)2-、H3C-C(CH3)2-CH2-、H3C-CH(CH3)-CH(CH3)-及H3C-CH2-CH(CH2CH3)-。
术语“治疗(treatment/treating)”如本文所用既包括治疗性，亦即治愈性及/或姑息性又包括预防性，亦即预防性治疗。
治疗性治疗是指已经发展出明显、急性或慢性形式的一或多种所述病状的患者的治疗。治疗性治疗可为对症治疗以便减轻特定适应症的症状或为因果治疗以便逆转或部分逆转适应症的病状症状或停止或减慢疾病的进展。
预防性治疗(“预防”)是指在疾病的临床发作之前治疗处在发展出一或多种所述病状风险中的患者以便降低所述风险。
术语“治疗(treatment/treating)”包括投与一或多种活性化合物以便预防或延迟症状或并发症的发作及预防或延迟发展出疾病、病状或病症及/或以便消除或控制疾病、病状或病症以及减轻与疾病、病状或病症相关的症状或并发症。
当本发明提及需要治疗的患者时，本发明主要是关于哺乳动物(特别是人类)的治疗。
术语“治疗有效量”意指(i)治疗或预防特定疾病或病状，(ii)减轻、改善或消除特定疾病或病状的一或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病或病状的一或多种症状的发作的本发明化合物的量。
【实施方式】
本发明公开新颖杂芳族甲酰胺衍生物，其为有效血浆激肽释放酶(PKK)抑制剂且具有适宜药理及药物动力学性质以将其用作用于治疗可受PKK抑制影响的疾病及/或病状的药物，所述疾病及/或病状包括但不限于糖尿病性并发症、眼部疾病及水肿相关疾病，特别是糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性、脉络膜新血管生成、遗传性血管水肿及中风后脑水肿。
本发明化合物可提供几个优点，诸如增强的效价、高代谢及/或化学稳定性、高选择性、安全性及耐受性、增强的溶解度、增强的渗透性、期望的血浆蛋白结合、增强的生物利用度、改良的药物动力学性质及形成稳定盐的可能性。
本发明化合物
在本发明的第一方面中，发现式(I)化合物
Figure BDA0003792982170000081
其中R、R1、A1、A2、L1及L2是如上文及下文所定义，是PKK的有效抑制剂且展现关于选择性、安全性及耐受性、代谢稳定性及/或化学稳定性、药物及物理化学特性、溶解度、渗透性、血浆蛋白结合、生物利用度及/或形成稳定盐的可能性的有利性质。特别地，其提供对人类PKK的高效价及显着选择性的有利组合，例如与各种丝氨酸蛋白酶(诸如人类组织激肽释放酶1(TK1))相比，以及在生理上相关pH值下的有利膜渗透性。此外，展现有利安全特征，诸如诱变潜力低及基于抑制细胞色素P450(CYP)3A4的机转的倾向低。
因此，预期如上文或下文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗可受PKK抑制影响的疾病及/或病状。
因此，根据本发明的一个方面，提供式(I)化合物
Figure BDA0003792982170000082
其中R、R1、A1、A2、L1及L2是如上文或下文所定义，
以及其同功异型物、互变异构体、立体异构体、代谢产物、前药、溶剂合物、水合物、共晶体及盐，特别是其药学上可接受的共晶体及盐。
除非另有说明，否则基团(group)、基团(residue)及取代基，特别是R、R1、A1、A2、L1及L2是如上文或下文所定义。将于下文给出式(I)的取代基R、R1、A1、A2、L1及L2的优选含义作为本发明的实施方案。这些定义及实施方案中的任何一者可彼此组合。
R：
根据一个实施方案，R是选自由
Figure BDA0003792982170000091
Figure BDA0003792982170000092
组成的组R-G1。
根据另一个实施方案，R是选自由
Figure BDA0003792982170000093
组成的组R-G2。
根据另一个实施方案，R是选自由
Figure BDA0003792982170000094
组成的组R-G3。
根据另一个实施方案，R是选自由
Figure BDA0003792982170000095
组成的组R-G4。
R1：
根据一个实施方案，R1是选自由H及F组成的组R1-G1。
根据另一个实施方案，R1是选自由H组成的组R1-G2。
根据另一个实施方案，R1是选自由F组成的组R1-G3。
A1、A2：
根据一个实施方案，部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝N-CR＝N-、＝N-CR＝CH-及＝CH-CR＝N-组成的组A-G1。
根据另一个实施方案，部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝N-CR＝N-组成的组A-G2。
根据另一个实施方案，部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝N-CR＝CH-组成的组A-G3。
根据另一个实施方案，部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝CH-CR＝N-组成的组A-G4。
对于部分＝A1-CR＝A2-的以上定义，3个次单元的顺序表示所述部分的定向，亦即例如在基团A-G3中，A1为N及A2为CH。
L1、L2：
根据一个实施方案，-L1＝L2-是选自由-N＝N-、-N＝CH-及-CH＝N-组成的组L-G1。
根据另一个实施方案，-L1＝L2-是选自由-N＝N-组成的组L-G2。
根据另一个实施方案，-L1＝L2-是选自由-N＝CH-组成的组L-G3。
根据另一个实施方案，-L1＝L2-是选自由-CH＝N-组成的组L-G4。
对于部分-L1＝L2-的以上定义，2个次单元的顺序表示部分的定向，亦即例如在基团L-G3中，L1为N及L2为CH。
式(I)化合物的更优选亚类实施方案经阐述为下表1中的实施方案(I-a)至(I-u)，其中使用所述以上提及的取代基定义。例如，列R及行(I-a)中的项–G1意指在实施方案(I-a)中，取代基R是选自指定为R-G1的定义。其类似地应用于并入通式中的其他变量。
表1：
Figure BDA0003792982170000101
Figure BDA0003792982170000111
特别优选化合物，包括其互变异构体、其盐或其任何溶剂合物或水合物为以下：
Figure BDA0003792982170000112
Figure BDA0003792982170000121
制法
根据本发明的化合物及其中间物可使用本领域技术人员已知且描述于有机合成文献中的合成方法，例如使用描述于“Comprehensive Organic Transformations”，第2版，Richard C.Larock，John Wiley&Sons，2010、及“March’s Advanced Organic Chemistry”，第7版，Michael B.Smith，John Wiley&Sons，2013中的方法来获得。优选，所述化合物是类似于下文更充分解释的制备方法(特别是如实验部分中所述)来获得。在一些情况下，可改变实施反应图所采用的顺序。亦可使用本领域技术人员已知但在此未详细描述的这些反应的变化。本领域技术人员在研究随后的反应图时将明了用于制备根据本发明的化合物的一般制程。起始化合物可商业购得或可通过描述于文献或本文中的方法来制备，或可以类似或相似方式来制备。在进行反应之前，可使用习知保护基保护起始化合物中的任何相应官能基。可使用本领域技术人员熟悉且描述于文献中，例如描述于“Protecting Groups”，第3版，Philip J.Kocienski，Thieme，2005、及“Protective Groups in Organic Synthesis”，第4版，Peter G.M.Wuts、Theodora W.Greene、John Wiley&Sons，2006中的方法在反应顺序内的适宜阶段再次裂解这些保护基。
反应图1：
Figure BDA0003792982170000131
PG＝H或保护基，诸如CH2OCH2CH2SiMe3
反应图1：式(I’)化合物可通过使式(II)的适宜酸(呈游离酸或与适宜金属阳离子(诸如Li+、Na+、K+等)的羧酸盐)及式(III)的适宜胺(呈游离胺或盐(诸如盐酸盐、氢溴酸盐等))在适宜溶剂(例如DCM、THF、1,4-二噁烷、DMF、N,N-二甲基乙酰胺及1-甲基-2-吡咯烷酮)中于存在适宜偶联剂(例如六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、四氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷鏻(PyBOP)、碳二亚胺试剂等)及碱(例如三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶等)下反应形成酰胺键来制备；反应图1中的R、R1、A1、A2、L1及L2具有如上文所定义的含义。或者，将羧酸转化为羧酸酰氯(carboxylic chloride)(使用例如在DCM中的草酰氯或亚硫酰氯)且如此与胺(III)在适宜碱(例如三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶等)的存在下偶联。假若采用在吡唑环上具有保护基(PG不为H)的胺(III)，则随后通过有机化学文献中报导的标准程序将此基团裂解除去。2-三甲基硅基乙基氧基甲基及叔丁酯优选在酸性条件下用例如TFA或盐酸在溶剂(诸如DCM、1,4-二噁烷、异丙醇或EtOAc)中来裂解。2-三甲基硅基乙基氧基甲基亦可通过在适合溶剂(诸如THF)中使用氟化物源(例如nBu4NF)来移除。苄基氧基甲基基团可通过使用氢气在过渡金属(诸如碳载钯)的存在下来移除。苯环上具有供电子基团(诸如甲氧基)的苄基氧基甲基基团亦可在氧化条件(利用例如硝酸铈铵(CAN)或2,3-二氯-5,6-二氰基醌(DDQ))或酸性条件(利用例如TFA或盐酸)下来裂解。
反应图2：
Figure BDA0003792982170000141
R5＝C1-4-烷基、苄基
反应图2：式(II)的酸(其中反应图2中的R、R1、A1、A2、L1及L2具有如上文所定义的含义)优选自相应酯(IV)透过水解或氢解(取决于R5的性质)来制备。低碳数烷基酯(诸如乙酯或甲酯)优选在环境温度或升高的温度下通过用氢氧化物盐(诸如NaOH、LiOH或KOH)在水及适宜可混溶溶剂(例如THF、MeOH、EtOH、1,4-二噁烷或这些的混合物)的混合物中水解来裂解。所述酸可呈与金属阳离子的盐或呈游离酸分离。叔丁酯优选通过在适宜溶剂(例如DCM、1,4-二噁烷、MeOH、EtOH、THF、水或这些的混合物)中用酸(例如盐酸或TFA)处理来裂解。苄酯优选通过在氢气气氛(优选1至5巴)下用适宜触媒(例如碳载钯)在适宜溶剂(例如EtOH、MeOH、THF、DCM或EtOAc)中氢解来裂解。
反应图3
Figure BDA0003792982170000142
R5＝C1-4-烷基或苄基
反应图3：一些化合物(IV)可通过使醇(V)与酯(VI)采用光延反应条件(例如三苯基膦或三正丁基膦与例如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)或偶氮二甲酸二叔丁酯(DBAD)的组合在溶剂(诸如THF、1,4-二噁烷、甲苯等)中)反应来制备；反应图3中的R、R1、A1、A2、L1及L2具有如上文所定义的含义。醇(V)可在杂芳族环或离去基上具有所需基团R而不是稍后引入R。或者，一些化合物(IV)可通过在升高的温度(20至120℃)下使醇(V)与酯(VI)在路易斯酸(Lewis acid)或布朗斯特酸(
Figure BDA0003792982170000153
acid)(例如4-甲苯磺酸)的存在下在适合溶剂(例如MeCN)中反应来获得。
反应图4
Figure BDA0003792982170000151
R5＝C1-4-烷基或苄基
Hal＝离去基，诸如Cl、Br、I、OSO2CH3
反应图4：一些化合物(IV)亦可通过使在杂芳基甲基位置具有离去基(诸如Cl、Br或甲磺酰氧基(mesyloxy)(甲磺酰基氧基))的化合物(VII)与酯(VI)在适宜碱(例如氢化钠、碳酸铯、碳酸钾或三乙胺)的存在下在适宜溶剂(例如THF、DMF)中反应来制备；反应图4中的R、R1、A1、A2、L1及L2具有如上文所定义的含义。化合物(VII)可在杂芳族环或可置换基团上具有所需基团R而不是稍后引入R。
反应图5
Figure BDA0003792982170000152
R5＝C1-4-烷基或苄基
Hal＝离去基，诸如OH、Cl、Br、I、OSO2CH3
反应图5：一些式(IV’)酯(其中反应图5中的R、R1、A1及A2具有上文定义的含义)可通过在DMF或另一适宜溶剂中用叠氮化钠处理相应式(VII)的烷基卤(溴化物或氯化物)或磺酸盐(例如甲磺酸盐)以得到式(VIII)的中间物然后使其与适宜丙酸酯在铜介导的条件(例如丙酸乙酯或丙酸叔丁酯与催化硫酸铜及抗坏血酸钠在水/叔丁醇中)下反应以得到化合物(IV’)来制备。或者，叠氮化物(VIII)可自式(V)(或(VII)，其中Hal为OH)的醇通过在适宜碱(诸如DBU)的存在下在适宜溶剂(例如THF或DMF)中用二苯基磷酰叠氮处理来获得。化合物(VII)可在杂芳族环或离去基上具有所需基团R而不是稍后引入R。
反应图6
Figure BDA0003792982170000161
R2＝CHF2、CF3或允许随后引入CHF2及/或CF3的基团，诸如Cl、Br、I、HCCH2、CHO、CN、COOR5；
R6＝COOR5、CHO、CH2OH、
Figure BDA0003792982170000162
R5＝C1-4-烷基或苄基；LG＝离去基，诸如F、Cl、Br、I、S(O)0,1,2
反应图6：式(XV)的中间物可自芳族化合物(XIII)及胺(XIV)经由杂芳环上的亲核取代反应或过渡金属催化偶联反应来制备；反应图6中的A1、A2及R具有上文定义的含义。(XIII)中杂芳族环上的离去基经化合物(XIV)中的N亲核取代可在环境温度或升高的温度下在适宜碱(例如氢化钠、碳酸铯、碳酸钾、N,N-二异丙基乙胺)的存在下在适宜溶剂(例如THF、1,4-二噁烷、DMF、DMSO)中进行。过渡金属催化偶联反应优选，用化合物(XIII)的氯化物、溴化物或碘化物以类似于有机化学文献中报导的称为乌尔曼或布赫瓦尔德/哈特维希偶联反应的程序，使用适宜铜或钯盐或其复合物任选与另外配位体组合在碱的存在下且在适合溶剂中来进行。
反应图7
Figure BDA0003792982170000171
R6＝COOR5，
Figure BDA0003792982170000172
R5＝C1-4-烷基或苄基；Hal＝Cl、Br、I
反应图7：式(XII)的中间物可自化合物(XIII’)经由与适合二氟甲基或三氟甲基亲核剂或其前驱物的过渡金属催化偶联反应来获得；反应图7中的R、R1、A1、A2、L1及L2具有上文定义的含义。将二氟甲基三甲基硅烷或三氟甲基三甲基硅烷作为各自的亲核剂前驱物在环境温度或升高的温度(20至150℃)下与铜盐(例如CuI)及碱(例如CsF或KF)在适合溶剂(例如NMP或DMF)中组合，可提供式(XII)化合物。可同样在所报导的条件(例如在DMF中，在80至100℃下；参见例如Org.Lett.2014，16，1744-1747)下使用已经并入诸如在F3CCu(phen)(phen＝菲咯啉)中的触媒的优选亲核剂而提供化合物(XII)。
化合物(XI)亦可自卤化物(XIII’)经由三步骤合成顺序来获得。因此，将卤化物(XIII’)采用适合的乙烯基亲核剂(例如，氯化乙烯基锌或乙烯基二羟基硼酸或酯)及针对于所谓的根岸(例如用Pd(PPh3)4，在THF中，在30至60℃下)或铃木偶联反应报导的条件(例如用PdCl2(dppf)，在Na2CO3及水的存在下，在1,4-二噁烷或DMF中，在60至110℃下)乙烯基化，形成化合物(IX)。然后将化合物(IX)置于C＝C裂解条件(例如在-70℃下在DCM中进行臭氧分解，接着用PPh3或Me2S进行还原淬灭，或在环境温度下用OsO4在丙酮、叔丁醇及水中进行双羟化，然后在环境温度下用NaIO4在水、叔丁醇及丙酮中对所得的中间物进行乙二醇裂解)。随后醛(X)在环境温度至升高的温度下使用适合的脱氧氟化剂(例如DAST(Et2NSF3)、Deoxofluor((MeOCH2CH2)2NSF3)或XtalFluor-E([Et2NSF2]BF4))在适合溶剂(例如DCM或甲苯)中，任选在催化量的甲醇或氟化物盐的存在下的脱氧氟化结束此序列。
反应图8
Figure BDA0003792982170000181
PG＝保护基，诸如CH2OCH2CH2SiMe3
反应图8：式(III.1)及(III’.1)的对映纯胺可分别自酮(XVI)及(XVI’)如反应图8中所述进行制备。可在报导于有机化学文献(例如J.Am.Chem.Soc.1995，117，7562-3；Org.Lett.2010，12，1756-9；Org.Proc.Res.Dev.2006，10，949-958；Tetrahedron:Asymmetry 2003，14，2659-2681；Tetrahedron Lett.2014，55，3635-40；及其中引用的参考文献)中的各种条件下将式(XVI)的酮对映立体选择性还原以得到式(XVII)或(XVII’)(未显示)的对映纯或富对映醇(衍生自酮的化合物(XVI’))。然后可使所述醇与足够酸性的含N-H分子(诸如邻苯二甲酰亚胺或(第三-Bu-OCO)2NH)以光延或光延型反应(使用例如三苯基膦或三-正丁基膦与偶氮二甲酸二甲酯或二乙酯或二异丙酯、偶氮二甲酸二-(4-氯苄酯)、偶氮二甲酸二苄酯、DBAD、偶氮二甲酸双-(二甲基酰胺)、偶氮二甲酸二呱啶或偶氮二甲酸二吗啉组合在适宜溶剂(例如THF、1,4-二噁烷、EtOAc、苯、甲苯等))而导致引入N基团且立体中心的构型反转(->(XVIII))。或者，在用叠氮化物反转相邻碳原子的构型下，可采用磷酰叠氮(例如二苯基磷酰叠氮)来置换(XVII)中的OH。可自邻苯二甲酰亚胺基团通过用例如肼、羟胺、甲胺、正丁胺或乙醇胺在适宜溶剂(例如EtOH、MeOH、MeCN、THF、二噁烷、DMSO、N,N-二甲基乙酰胺、水或这些的混合物)中必要时在进行加热下处理来释放胺基基团以得到式(III.1)化合物。优选在酸性条件(使用例如TFA或盐酸)下移除第三-Bu-O-CO以得到胺(III.1)。可用例如氢在过渡金属(例如在碳上的Pd、雷氏镍(Raney-Ni)、PtO2等)或膦(例如三苯基膦)的存在下将叠氮化物还原为胺(III.1)。
或者，可自酮(XVI)经由3步骤合成顺序来获得化合物(III.1)，在环境温度或升高的温度下采用对映纯叔丁磺酰胺在钛醇盐(例如Ti(OEt)4或Ti(OiPr)4)的存在下在溶剂(例如THF、DCM、甲苯或无溶剂(neat))中产生相应对映纯叔丁基亚磺酰基化亚胺，所述对映纯叔丁基亚磺酰基化亚胺可使用氢化物(例如硼氢化锂或硼氢化钠、三异丁基硼氢化锂(L-selectride)、氢化二异丁基铝等)在适合溶剂(例如THF、甲苯、MeOH等，取决于所使用的氢化物源而定)中非对映立体选择性地还原为相应叔丁基亚磺酰基化胺。叔丁基亚磺酰基基团可在环境温度或升高的温度下在适宜溶剂(例如甲苯、DCM、二噁烷、醇、水等)中使用酸(例如TFA或盐酸)来裂解除去。
反应图9
Figure BDA0003792982170000191
PG＝保护基，诸如CH2OCH2CH2SiMe3
反应图9：可自所报导的酯(XIX)(或相应高碳数烷基酯，例如乙酯、丙酯、异丙酯或叔丁酯)以由5或6个反应步骤所组成的序列获得化合物(XVI)。化合物(XIX)可在其N原子中的一者上用报导于有机化学文献中的广泛范围的保护基衍化。例如，可将化合物(XIX)用碱(例如氢化物(诸如氢化钠)、氢氧化物(诸如氢氧化钠)、碳酸盐(诸如碳酸钠或碳酸钾)、醇盐(诸如甲醇锂或叔丁醇钾)、有机胺(诸如三乙胺、亨氏碱(Hünig’s base)、DABCO、DBN、或DBU)、磷腈(诸如P2Et磷腈)、酰胺(诸如二异丙胺锂或六甲基二硅基胺基锂(lithiumhexamethyldisilazide)))在适合溶剂(例如苯、甲苯、DCM、THF、二噁烷、EtOAc、ACN、DMF、N,N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等，取决于所使用碱的性质而定)中处理且同时或随后与适合保护基的亲电子剂(具有离去基，诸如氯离子、溴离子、碘离子、烷基-或芳基磺酰基氧基、烷基氧基、酰基氧基等的保护基)(例如用于引入2-三甲基硅基乙基氧基甲基作为保护基的2-三甲基硅基乙基氧基甲基氯)反应转化为化合物(XX)。化合物(XX)可采用相应卤素的适合亲电子源(例如Cl的N-氯琥珀酰亚胺、Br的N-溴琥珀酰亚胺或Br2、I的N-碘琥珀酰亚胺、I2或ICl，任选在添加剂(诸如银盐或酸)的存在下)在适合溶剂(例如DCM、二氯乙烷、二噁烷、MeCN、DMF等)中氯化、溴化或碘化。例如，可使用N-碘琥珀酰亚胺及TFA在MeCN中引入碘以提供化合物(XXI)。然后化合物(XXII)可由相应卤化物(例如碘化物(XXI))采用1-或2步骤合成途径制备，涵盖Heck偶联反应(广泛涵盖于有机化学文献中，例如涵盖于Catalysts 2017，7，267及其中引用的参考文献中)用丙烯醛二烷基缩醛(例如丙烯醛二甲基缩醛)或丙烯酸酯(例如丙烯酸甲酯)；使用后一偶联搭配物需要另一步骤来还原形成的烯键，此可用氢气在过渡金属触媒(例如Pd(诸如钯碳)、Ni(诸如雷氏镍)、Pt(诸如氧化铂)、Rh(诸如铑碳)等)存在下在适合溶剂(例如DCM、二噁烷、THF、EtOAc、醇(诸如MeOH)、水等)中进行。酮酯(XXIII)可在化合物(XXII)用碱(例如氢化物(诸如氢化钠)、醇盐(诸如甲醇锂或叔丁醇钾)、有机胺(诸如DBU)、磷腈(诸如P2Et磷腈)、酰胺(诸如二异丙胺锂，六甲基二硅基胺基锂、钠或钾等)在适合溶剂(例如苯、甲苯、二噁烷、THF、醇等，取决于所使用碱而定)中在低温至升高的温度(-78℃至100℃，取决于所采用碱及溶剂而定)处理时产生。化合物(XXIII)中酯基的水解接着脱羧化可通过所述化合物在溶剂(例如二噁烷、THF、MeCN、DMF、N,N-二甲基乙酰胺、DMSO、醇、水等，或这些的混合物)中，任选在碱(例如氢氧化钠)、卤盐(诸如碘化锂或氯化锂)或酸(例如盐酸)存在下在0至140℃搅拌得到酮(XVI)来达成。整个序列可类似地应用于异构性保护的化合物(XX‘)以得到酮(XVI’)，且不一定依赖于保护基的使用，且因此可在无保护基(PG＝H)下进行。
如上所提及，可将式(I)化合物转化为盐，特别是就医药用途而言，转化为药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中所述亲本化合物是通过制备其酸或碱盐经修饰。
使用描述于随后的实施例中的方法，所述方法亦可针对于此目的与本领域技术人员自文献已知的方法组合，亦可有利地获得根据本发明的化合物。
因此，根据本发明的另一个方面，提供用于合成式(I)化合物的方法。
根据本发明的另一个方面，提供合成式(I)化合物的中间物。
药理学活性
本发明化合物的活性可使用以下分析来证实：
生物学方法
使用以下生物化学分析，在分析缓冲液(100mM Tris、150mM NaCl，用HCl调整至7.8的pH，且包含0.1％(w/v)BSA及0.05％(v/v)吐温20(Tween 20))中在1％(v/v)DMSO的存在下，来测定式(I)化合物抑制血浆激肽释放酶(PKK)、因子XIIa(FXIIa)、因子XIa(FXIa)、因子Xa(FXa)、因子IIa(α-凝血酶；FIIa)、胞浆素、胰蛋白酶、组织激肽释放酶1(TK1)、因子VIIa(FVIIa)；或与组织因子、磷脂及CaCl2错合的FVIIa(FVIIa/TF/PL/CaCl2)的能力：
使用终点分析来评估PKK的抑制
在室温下，将人类PKK(0.01U/mL；Enzyme Research Laboratories)或大鼠PKK(0.625nM；内部生产的)与0.10μM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(I1295，来自Bachem)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养1小时。随后，添加PPACK II(Calbiochem)作为终止溶液以达成1μM的最终浓度且使用Envision读数器(PerkinElmer)在355nm的波长激发设置及460nm的波长激发设置下测定荧光。
根据本发明的化合物的IC50值显示于下表中。化合物的编号对应于实验部分中实施例的编号。
Figure BDA0003792982170000221
评估在高岭土活化的人类PPP中PKK的抑制
在37℃下，将自人类全血获得，经柠檬酸钠(Na-Citrate)抗凝的缺乏血小板的血浆(PPP)与各种浓度的测试化合物以及25、75、250或750μg/mL高岭土在分析缓冲液中培养20分钟使得对于所使用的每种高岭土剂量，获得测试化合物的浓度反应。随后，将0.25mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(I1295，来自Bachem)添加至所述混合物且历时12分钟以每2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)利用以下350nm的波长激发及450nm的波长发射的设置进行测量。pIC50及pIC90值是获自经GraphPad prism7.0拟合的4x/y-曲线(x＝log M,化合物；y＝δrfu/min)(公式：log(促效剂)相对于反应--FindECanything；针对于测试化合物获得的四个浓度反应曲线(各者使用不同高岭土剂量获得)是使用整体拟合程序拟合，产生共享pIC50或pIC90值)。
根据本发明的化合物的IC90值显示于下表中。化合物的编号对应于实验部分中实施例的编号。
Figure BDA0003792982170000222
Figure BDA0003792982170000231
评估PKK的抑制(Ki)
在24℃下，将人类PKK(1.78nM或0.025U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.25mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(I1295，来自Bachem)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(MolecularDevices)在以下350nm的波长激发及450nm的波长发射的设置下进行测量。
评估FXIIa的抑制(Ki)
在24℃下，将人类FXIIa(47.5nM或1.1U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.5mM发色底物S2302(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的光学吸亮度进行测量。
评估FXIa的抑制(Ki)
在24℃下，将人类FXIa(0.5nM或0.016U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.25mM荧光底物Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC·HCl(I1575，来自Bachem)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)在以下350nm的波长激发及450nm的波长发射的设置下进行测量。
评估FXa的抑制(Ki)
在24℃下，将人类FXa(0.86nM或0.01U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.5mM发色底物S2765(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的光学吸亮度进行测量。
评估FIIa的抑制(Ki)
在24℃下，将人类FIIa(44.6nM或5U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.5mM发色底物S2238(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的光学吸亮度进行测量。
评估胞浆素的抑制(Ki)
在24℃下，将人类胞浆素(64.1nM或0.0275U/mL；Enzyme ResearchLaboratories)与0.3mM发色底物S2251(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(MolecularDevices)测量在405nm处的光学吸亮度进行测量。
评估胰蛋白酶的抑制(Ki)
在24℃下，将人类胰蛋白酶(4.54nM或250U/mL；Calbiochem)与0.5mM发色底物S2222(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的光学吸亮度进行测量。
评估TK1的抑制(Ki)
在分析之前，人类TK1(R&D Systems)通过在37℃下与人类胰蛋白酶(Calbiochem)以1:10,000比培养15分钟而活化。为分析TK1抑制活性，在24℃下，将经活化的TK1(31.25nM或1U/mL)与0.1mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(I1295，来自Bachem)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)在以下350nm的波长激发及450nm的波长发射的设置下进行测量。
根据本发明的化合物的Ki值显示于下表中。化合物的编号对应于实验部分中实施例的编号。
实施例 K<sub>i</sub>(nM) 实施例 K<sub>i</sub>(nM)
9 >10000 13 >10000
评估FVIIa的抑制(Ki)
在24℃下，将人类FVIIa(0.86nM或0.01U/mL；Enzyme Research Laboratories)与1.5mM发色
Figure BDA0003792982170000241
FVIIa(Loxo)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的光学吸亮度进行测量。
评估FVIIa/TF/PL/CaCl2的抑制(Ki)
在24℃下，将人类FVIIa(300nM或585U/mL；Enzyme Research Laboratories)以及10mM CaCl2*2H2O及13.3％(v/v)
Figure BDA0003792982170000251
(Siemens；OQUMI94E0002(5534)，其包含重组人类组织因子合成磷脂(凝血酶原))与1.5mM发色
Figure BDA0003792982170000252
FVIIa(Loxo)及各种浓度的测试化合物在分析缓冲液中培养。历时16分钟以每第2分钟的动力学时间间隔使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的光学吸亮度进行测量。
计算pIC50及pKi值
将启动分析后2至12分钟的时间间隔的平均Vmax值(分别表示为针对使用发色底物的分析的δOD/min或针对使用荧光底物的分析的δRFU/min)与所评估的抑制剂化合物的摩尔浓度浓度对数制图。然后使用使用GraphPad Prism(版本6；GraphPad Software，Inc.)的四参数拟合程序拟合pIC50值。通过使用以下式子校正所使用底物的各自的KM值的IC50值来获得各自的Ki值(关于所使用底物的所获得的KM值，参见表A)：
Figure BDA0003792982170000253
其中IC50单位为摩尔浓度及KM值单位为mM表示。
表A：针对于酶促分析中使用的底物获得的KM值。
Figure BDA0003792982170000254
Figure BDA0003792982170000261
评估渗透性
将Caco-2细胞(1至2x105个细胞/1cm2面积)接种于过滤器插板(Costar transwell聚碳酸酯或PET过滤器，0.4μm孔径)且培养(DMEM)10至25天。
将化合物溶解于适宜溶剂(像DMSO，1至20mM储备溶液)中。用包含0.25％BSA的HTP-4缓冲液(128.13mM NaCl、5.36mM KCl、1mM MgSO4、1.8mM CaCl2、4.17mM NaHCO3、1.19mM Na2HPO4 x 7H2O、0.41mM NaH2PO4 x H2O、15mM HEPES、20mM葡萄糖，pH 7.2)稀释储备溶液以制备输送溶液(0.1至300μM化合物，最终DMSO<＝0.5％)。将输送溶液(TL)应用于顶端或底侧供体侧以分别测量A-B或B-A渗透性(2个过滤器重复)。接受侧包含补充0.25％BSA的HTP-4缓冲液。在实验开始及结束时自供体且长达2小时以不同时间间隔收集样品，亦自接受侧收集样品，以通过HPLC-MS/MS或闪烁计数进行浓度测量。采样接受体积将替换为新制接受溶液。
评估人类或大鼠肝脏微粒体中的代谢稳定性
在37℃下，用组并的人类(HLM)或大鼠肝脏微粒体(RLM)分析测试化合物的代谢降解。60μl/时间点的最终培养体积包含RT下的TRIS缓冲液pH 7.6(0.1M)、氯化镁(5mM)、微粒体蛋白(HLM：1mg/mL、RLM：0.5mg/mL)及最终浓度为1μM的测试化合物。
在37℃下的短预培养期之后，通过添加β-烟碱酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸，还原形式(NADPH，1mM)启动反应且通过在不同时间点后将等分试样转移至溶剂中终止。另外，此外，在不使用NADPH的培养中监测与NADPH无关的降解，在最后时间点终止。通过离心(10000g，5分钟)使经淬灭的培养物成团。通过LC-MS/MS分析上清液的等分试样的亲本化合物的量。半衰期(t1/2INVITRO)通过浓度-时间曲线的半对数坐标图的斜率来定。
评估人类或大鼠肝细胞中的代谢稳定性
在肝细胞悬浮液中分析测试化合物的代谢降解。自冷冻保存恢复之后，将人类或大鼠肝细胞在补充有3.5μg升糖素/500ml、2.5mg胰岛素/500ml及3.75mg/500ml氢皮质酮(hydrocortisone)的包含5％或50％人类或大鼠血清或无血清的杜贝卡氏改良依格培养基(Dulbecco′s modified eagle medium)中培养。
在细胞培养箱(37℃，10％CO2)中进行30分钟预培养之后，将测试化合物溶液外加至肝细胞悬浮液中以获得1.0*106个细胞/ml的最终细胞密度、1μM的最终测试化合物浓度及0.05％的最终DMSO浓度。
将所述细胞培养六小时(培养箱，水平振荡器)且在0、0.5、1、2、4及6小时后自培养箱取样品。用乙腈淬灭样品且通过离心成团。将上清液转移至96深孔板，且准备用于通过HPLC-MS/MS分析亲本化合物的下降。
CLint计算如下：
CLint＝剂量/AUC＝(C0/CD)/(AUD+clast/k)x 1000/60
C0：培养物中的初始浓度[μM]，CD：活细胞的细胞密度[10e6个细胞/ml]，AUD：数据下面积[μM x h]，clast：最后一个数据点的浓度[μM]，k：亲本下降的回归线的斜率[h-1]。
活体外肝内在清除率计算值可放大至内在活体内肝清除率且用于通过使用肝脏模型(充分搅拌模型)预测肝活体内血液清除率(CL)。
评估血浆蛋白结合
平衡透析(ED)技术是应用Dianorm Teflon透析单元(micro 0.2)用于测定测试化合物与血浆蛋白质的近似活体外分级结合。各透析单元由供体及受体腔室间隔具有5kDa截止分子量的超薄半透膜所组成。各测试化合物的储备溶液均在DMSO中以1mM制得且连续稀释以获得1μM的最终测试浓度。在血浆(经补充NaEDTA作为抗凝血剂)中制备随后的透析溶液，且将200μl测试化合物透析溶液含在血浆中的等分试样分配至供体(血浆)腔室中。将200μl透析缓冲液(100mM磷酸钾，pH 7.4)的等分试样分配至缓冲液(受体)腔室中。在37℃下于旋转下进行培养2小时以建立平衡。
在透析期结束时，将自供体及受体腔室分别获得的等分试样转移至反应管中，外加内部标准溶液且经处理以用于HPLC-MS/MS分析。通过HPLC-MS/MS对外部校准曲线定量样品的等分试样的分析物浓度。
结合百分比使用下式计算：
结合％＝(血浆浓度-缓冲液浓度/血浆浓度)X 100
评估溶解度
测试化合物的水性溶解度通过比较溶解于缓冲液中的量与溶于ACN/水(1/1)溶液中的量来测定。自10mM DMSO储备溶液开始，用乙腈/水(1/1)或缓冲液分别稀释等分试样。24小时振荡之后，过滤溶液且通过LC-UV分析。将溶解于缓冲液中的量与含在ACN溶液中的量进行比较。
在2.5％的DMSO浓度下，通常测得0.001至0.125mg/mL的溶解度。若超过90％的化合物溶解于缓冲液中，则所述值标记为“>”。
评估啮齿动物中的药物动力学特性
将测试化合物经静脉内投与给进食大鼠或经口投与给空腹大鼠。在施用测试化合物后的几个时间点采集血液样品，进行抗凝然后离心。
定量血浆样品中的分析物(所投与的化合物及/或代谢产物)的浓度。
PK参数是使用非分区方法来计算。将AUC及Cmax标准化为1μmol/kg的剂量。
评估细胞色素P450同工酶催化的反应的抑制
细胞色素P450同工酶催化的反应由测试化合物的抑制是在37℃下用人类肝脏微粒体进行分析。所有分析均在384孔板上的自动化系统上进行。通过声学液体分配(使用Labyte
Figure BDA0003792982170000281
系统)将测试化合物直接自DMSO储液点样至培养板中。最终培养体积包含TRIS缓冲液(0.1M)、MgCl2(5mM)、人类肝脏微粒体、特定细胞色素P450同工酶底物及五种不同浓度的测试化合物或无化合物(高对照)，一式两份(例如最高浓度50μM，随后连续1:4稀释)。在短预培养期之后，用辅因子(NADPH，1mM)开始反应且通过将培养物冷却降至8℃且随后通过添加一体积的乙腈来终止。在淬灭培养之后添加内部标准溶液——通常是所形成的代谢产物的稳定同位素。通过LC-MS/MS确定峰面积分析物(＝所形成的代谢产物)及内部标准。这些培养中的所得的分析物与内部标准峰面积比与不含测试化合物的对照活性进行比较。在各分析运行中，测定阳性对照抑制剂的IC50。根据以下公式通过最小二乘回归计算得实验IC50值：
对照活性％＝(100％对照活性/(1+(I/IC50)S)))-b
其中
I＝抑制剂浓度
S＝斜率因子
B＝背景活性
若在最低浓度的测试化合物下反应的抑制已经为>50％，则IC50指定为“<所测试的最低浓度”(通常<0.2μM)。若在最高浓度的测试化合物下反应的抑制仍<50％，则IC50指定为“>所测试的最高浓度”(通常>50μM)。
评估细胞色素P450 3A4催化的咪达唑仑转换(MIDAZOLAM TURNOVER)的基于机转的抑制(MBI)
在人类肝脏微粒体(0.02mg/ml)中以咪达唑仑(15uM)作为底物分析对CYP3A4的基于机转的抑制。
在37℃下，在NADPH的存在下，用浓度为5uM及25uM的人类肝脏微粒体(0.2mg/ml)预培养测试化合物0分钟、10分钟或30分钟。预培养后，稀释1:10培养物且添加底物咪达唑仑以进行主要培养(15分钟)。用乙腈淬灭主要培养且经由LC/MS-MS定量羟基-咪达唑仑的形成。
计算转换率(单位为pmol/min/mg蛋白质)且将在10及30分钟预培养时间后的活性与相应化合物/浓度的0分钟预培养的活性进行比较(CTRL％＝相应化合物/浓度的0分钟对照％)。另外，将转换率相对于不添加化合物的底物反应的转换率表示(TR％＝无化合物的转换率的％)，以便识别竞争抑制效应。
治疗方法
在本发明的另一个方面中，发现式(I)化合物或其药学上可接受的盐具有用于疗法及/或预防中，亦即用作药物的适宜性质。特别地，式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及包含其的药物组合物可用于治疗(亦即疗法及/或预防(prevention/prophylaxis))患者的可受抑制血浆激肽释放酶影响(例如由非所需PKK活性所介导或PKK的抑制是有益)的疾病或病状。
可受抑制PKK影响(例如由非所需PKK活性所介导或PKK的抑制是有益)的疾病或病状为例如本发明的先前技术节中提及的那些，特别是糖尿病性并发症、糖尿病性视网膜病变、增生性及非增生性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、有临床意义的黄斑水肿(CSME)、黄斑囊样水肿(CME)、白内障摘除后的CME、冷冻疗法诱导的CME、葡萄膜炎诱导的CME、眼内炎、血管阻塞(例如视网膜中央静脉阻塞、视网膜分支静脉阻塞或半侧视网膜静脉阻塞)后的CME、视网膜水肿、与糖尿病性视网膜病变的白内障手术有关的并发症、高血压性视网膜病变、视网膜创伤、干性及湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、脉络膜新血管生成(CNV；例如非渗出性脉络膜新血管生成)、遗传性血管水肿(HAE)、急性呼吸道窘迫综合征(ARDS)、中风后出血及水肿，例如中风、血管性痴呆、阿尔茨海默症、纤维化疾病、结肠炎、关节炎及肾损伤后的脑水肿。
因此，本发明的化合物及药物组合物特别适于治疗眼部疾病，包括糖尿病性视网膜病变、增生性及非增生性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)及脉络膜新血管生成(CNV；例如非渗出性脉络膜新血管生成)。
此外，根据本发明的化合物及药物组合物特别适于治疗水肿，诸如遗传性血管水肿(HAE)及中风后脑水肿。
特别地，根据本发明的化合物及药物组合物是适于治疗糖尿病性视网膜病变、增生性及非增生性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、脉络膜新血管生成(CNV)、遗传性血管水肿(HAE)及中风后脑水肿。
根据本发明的化合物及药物组合物最特别适于治疗糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、非渗出性脉络膜新血管生成(CNV)、遗传性血管水肿(HAE)及中风后脑水肿。
例如，其特别适于预防糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、遗传性血管水肿(HAE)及中风后脑水肿以及适于预防自非渗出性脉络膜新血管生成(neCNV)转化为渗出性脉络膜新血管生成(eCNV)。
每天适用的式(I)化合物的剂量范围通常为0.01至10mg/kg体重。实际治疗有效量或治疗剂量当然将取决于本领域技术人员已知的因素，诸如患者的年龄及体重、投与途径及疾病的严重度。在任何情况下，所述化合物或组合物将以允许基于患者的独特病状递送治疗有效量的剂量及方式投与。
根据本发明的化合物及组合物(包括与一或多种另外治疗剂的任何组合)可通过经口、玻璃体内、经皮、吸入、非经肠或舌下途径投与。在可能的投与方法中，以经口或玻璃体内投与为优选。在玻璃体内注射的情况下，优选剂量应不超过5mg/眼睛。
待治疗的患者优选是哺乳动物，最优选是人类患者。
因此，根据另一个方面，本发明提供式(I)化合物及其互变异构体，包括其药学上可接受的盐，其用作药物。
在另一个方面中，本发明提供一种用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法。
同样地，本发明提供一种式(I)化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法。
同样地，本发明提供一种式(I)化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐的用途，其用于制造用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法的药物。
同样地，本发明提供一种式(I)化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐的用途，其用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法。
根据一个实施方案，所述治疗方法包括对患者投与一或多种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐，优选是对患者投与治疗有效量的一或多种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐。
根据另一个实施方案，所述治疗方法包括对患者投与根据本发明的药物组合物。
根据一个实施方案，所述由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状是选自眼科适应症，诸如糖尿病性视网膜病变、增生性及非增生性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)及脉络膜新血管生成(CNV)。
根据另一个实施方案，所述由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状是选自水肿相关疾病，诸如遗传性血管水肿(HAE)及中风后脑水肿。
根据另一个实施方案，所述由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状是选自糖尿病性并发症，诸如与糖尿病性视网膜病变及糖尿病性黄斑水肿相关的视网膜血管渗透性。
根据一个实施方案，患者为人类患者。
药物组合物
在本发明的另一个方面中，描述本发明化合物或其药学上可接受的盐可用作药物组合物中的活性成分。
用于投与本发明化合物任选与一或多种其他治疗剂组合的适宜制剂为本领域技术人员所明了且包括例如片剂、丸剂、胶囊、栓剂、含片、片剂、溶液、糖浆、酏剂、药囊(sachet)、注射液、吸入剂及粉末等。以口服调配物，特别是固体形式，诸如例如片剂或胶囊为优选。对于玻璃体内注射，以溶液为优选。医药活性化合物的含量有利地在整体组合物的0.1至90重量％，例如1至70重量％的范围内。
适宜片剂可例如通过将一或多种根据式(I)的化合物与已知赋形剂，例如惰性稀释剂、载剂、崩解剂、佐剂、表面活性剂、黏结剂及/或润滑剂混合而获得。片剂亦可由几层组成。本领域技术人员基于其专家知识基础上将熟悉适于所需制剂的特定赋形剂、载剂及/或稀释剂。优选者为适于特定调配物及所需的投与方法的那些。根据本发明的制剂或调配物可使用本领域技术人员熟悉的本身已知的方法，诸如例如通过将至少一种根据本发明的式(I)化合物或此种化合物的药学上可接受的盐及一或多种赋形剂、载剂及/或稀释剂混合或组合来制备。
因此，根据本发明的另一个方面，提供一种药物组合物，其包含任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂一起的一或多种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐。
再者，提供一种用于组合物，其包含任选与一或多种惰性载剂及/或稀释剂一起的一或多种上述化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法。
特别地，本发明提供一种根据本发明的药物组合物，其用于治疗眼科适应症，诸如糖尿病性视网膜病变、增生性及非增生性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)及脉络膜新血管生成(CNV)及治疗水肿相关疾病，诸如遗传性血管水肿(HAE)及中风后脑水肿的方法。
此外，本发明是关于一种根据本发明的药物组合物的用途，其用于治疗患者(特别是人类)的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导的疾病或病状。
再者，本发明是关于一种根据本发明的药物组合物的用途，其用于治疗患者(特别是人类)的血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状。
根据另一个实施方案，提供一种药物组合物，其包含药物组合物，其包含任选与一或多种惰性载剂及/或稀释剂一起的一或多种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐及一或多种另外治疗剂。
优选，此组合物包含一种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐及一或多种另外治疗剂。
组合疗法
本发明的化合物可进一步与一或多种(优选一种)另外治疗剂组合。
根据一个实施方案，所述另外治疗剂是选自以下的群：可用于治疗上文所述的疾病或病状，特别是与代谢疾病或病状相关者，诸如例如糖尿病、肥胖、糖尿病性并发症、高血压、高血脂症的治疗剂或可用于治疗眼部疾病的治疗剂。
适于此种组合的另外治疗剂尤其包括那些例如相对于所提及适应症中的一者增强一或多种活性物质的治疗效应及/或允许一或多种活性物质的剂量减低的治疗剂。
因此，可将本发明的化合物与一或多种选自由抗糖尿病药剂、用于治疗超重及/或肥胖的药剂、用于治疗高血压、心脏衰竭及/或动脉粥样硬化的药剂及用于治疗眼部疾病的药剂组成的群的另外治疗剂组合。
抗糖尿病药剂为例如二甲双胍、磺酰脲、那替格列(nateglinide)、瑞格列奈(repaglinide)、噻唑烷二酮、PPAR-(α、γ或α/γ)促效剂或调节剂、α-葡糖苷酶抑制剂、DPPIV抑制剂、SGLT2-抑制剂、胰岛素及胰岛素类似物、GLP-1及GLP-1类似物或淀粉素及淀粉素类似物、塞克洛瑟(cycloset)、11β-HSD抑制剂。其他适宜组合搭配物为蛋白酪氨酸磷酸酶1的抑制剂、影响肝脏中去调控葡萄糖产生的物质，诸如例如葡萄糖-6-磷酸酶(或果糖-1,6-双磷酸酶)的抑制剂、糖原磷酸化酶、糖原受体拮抗剂及磷酸烯醇丙酮酸羧激酶、糖原合成酶激酶或丙酮酸脱氢激酶的抑制剂、α2-拮抗剂、CCR-2拮抗剂或葡萄糖激酶活化剂。一或多种降脂质剂亦适用作组合搭配物，诸如例如HMG-CoA-还原酶抑制剂、贝特类(fibrates)、烟酸及其衍生物、PPAR-(α、γ或α/γ)促效剂或调节剂、PPAR-δ促效剂、ACAT抑制剂或胆固醇吸收抑制剂(诸如胆汁酸结合物质，诸如回肠胆汁酸输送的抑制剂)、MTP抑制剂或升HDL化合物(诸如CETP抑制剂或ABC1调节剂)。
用于治疗超重及/或肥胖的治疗剂为例如大麻素1受体的拮抗剂、MCH-1受体拮抗剂、MC4受体促效剂、NPY5或NPY2拮抗剂、β3-促效剂、瘦素或瘦素模拟物、5HT2c受体的促效剂。
用于治疗高血压、慢性心脏衰竭及/或动脉粥样硬化的治疗剂为例如A-II拮抗剂或ACE抑制剂，ECE抑制剂、利尿剂、β-阻断剂、Ca-拮抗剂、中枢作用的抗高血压药、α-2-肾上腺素能受体的拮抗剂、中性内肽酶的抑制剂、血栓细胞聚集抑制剂等或其组合是适宜的。通常与利尿剂(诸如氢氯噻嗪)组合的血管收缩素II受体拮抗剂优选用于治疗或预防高血压及糖尿病的并发症。
用于治疗眼部疾病的治疗剂可包括例如经玻璃体内投与的皮质类固醇、经玻璃体内投与的抗VEGF疗法、抗Ang2抑制剂、双重抗VEGF/抗Ang2抑制剂、抗PDGF、双重抗VEGF/抗PDGF、VAP-1(AOC3)抑制剂、补体抑制剂(例如补体因子3、5、B及D抑制剂)、缓激肽受体1拮抗剂、CCR-2拮抗剂。
用于眼部疾病的其他治疗可包括雷射凝固疗法。
优选，任选与一或多种另外治疗剂组合的本发明化合物及/或包含本发明化合物的药物组合物是结合运动及/或饮食投与。
以上提及的组合搭配物的剂量通常为通常推荐的最低剂量的1/5高至通常推荐的剂量的1/1。
根据本发明的化合物与另外治疗剂组合的使用可同时地或在错开时间进行。
根据本发明的化合物及一或多种另外治疗剂均可一起存在于一种调配物(例如片剂或胶囊)中，或分开存在于两种相同或不同调配物中，例如呈所谓的组份试剂盒(kit-of-parts)。
因此，根据另一个方面，本发明是关于一种药物组合物，其包含一或多种根据本发明的化合物及一或多种另外治疗剂任选与一或多种惰性载剂及/或稀释剂一起。
根据另一个方面，本发明提供一种用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法，所述方法包括对患者投与一或多种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐与一或多种上文及下文中所述的另外治疗剂组合，
优选对患者投与治疗有效量的一或多种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐与治疗有效量的一或多种上文及下文中所述的另外治疗剂组合。
同样地，本发明提供式(I)化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐与上文或下文所述的一或多种另外治疗剂组合，用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法。
同样地，本发明提供一种式(I)化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐与上文或下文所述的一或多种另外治疗剂组合的用途，其用于制造用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法中的药物。
同样地，本发明提供一种式(I)化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐与上文或下文所述的一或多种另外治疗剂组合的用途，其用于治疗有需要的患者的由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状的方法中。
根据一个实施方案，所述治疗方法包括对患者投与一或多种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐与一或多种上文及下文所述的另外治疗剂组合，
优选对患者投与治疗有效量的一或多种式(I)化合物及/或其互变异构体或其药学上可接受的盐与治疗有效量的一或多种上文及下文中所述的另外治疗剂组合。
根据另一个实施方案，所述治疗方法包括对患者投与包含一或多种根据本发明的化合物及一或多种上文及下文所述的另外治疗剂任选与一或多种惰性载剂及/或稀释剂一起的药物组合物。
根据一个实施方案，所述一或多种另外治疗剂是选自抗糖尿病药剂、用于治疗超重及/或肥胖的药剂，用于治疗高血压、心脏衰竭及/或动脉粥样硬化的药剂，及用于治疗眼部疾病的药剂，特别是选自以上特别提及的药剂。
根据一个实施方案，所述由非所需血浆激肽释放酶活性所介导或血浆激肽释放酶的抑制是有益的疾病或病状是选自眼科适应症，诸如糖尿病性视网膜病变、增生性及非增生性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)及脉络膜新血管生成(CNV)；选自水肿相关疾病，诸如遗传性血管水肿(HAE)及中风后脑水肿；或选自糖尿病性并发症，诸如与糖尿病性视网膜病变及糖尿病性黄斑水肿相关的视网膜血管渗透性。
根据一个实施方案，患者为人类患者。
自以下更详细实施例将明了本发明的其他特征及优点，所述实施例举例说明本发明的原理。
实施例及实验数据
以下实施例仅出于说明本发明的目的而非意图以任何方式限制本发明的范畴。
缩写：
Ac 乙酰基
ACN 乙腈
AMC 7-胺基-4-甲基香豆素
Boc 叔丁基氧基羰基
BSA 牛血清白蛋白
Bzl 苄基
d 天
DABCO 1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷
DAD 二极管数组检测器
DBAD 偶氮二甲酸二叔丁酯
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DBN 1,5-二氮杂双环[4.3.0]壬-5-烯
DCM 二氯甲烷
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMEM 杜贝卡氏改良依格培养基
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EDTA 乙二胺四乙酸酯
ESI 电喷雾电离(在MS中)
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h 小时
HATU六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓
HPLC 高效液相层析
HPLC-MS 耦合的高效液相层析-质谱法
LC 液相层析
LC-MS 耦合的液相层析–质谱法
LG 离去基
M 摩尔浓度浓度(mol/L)
MeOH 甲醇
min 分钟
MS 质谱法
NADPH 烟碱酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
NMP N-甲基-2-吡咯烷酮
NMR 核磁共振
PET 聚对苯二甲酸乙二酯
PyBop 六氟磷酸(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻
Rf 延迟因子
RFU 相对荧光单位
RP 反相
rt 室温
tR 滞留时间(在HPLC/LC中)
TBTU 四氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
UV 紫外线
术语“环境温度”及“室温”可互换使用且表示约20℃，例如15至25℃的温度。
通常，已获得所制备的化合物的1H-NMR及/或质谱。
除非另有说明，否则包含手性中心的化合物具有所描绘的立体化学。已通过使用具有已知立体化学的手性起始物质，通过立体选择性合成已知立体化学或通过生物活性进行立体化学的指定。
分析方法
Figure BDA0003792982170000391
Figure BDA0003792982170000401
Figure BDA0003792982170000402
中间物的合成：
用于产生根据本发明的化合物的制程中的起始物质及中间物可自市面购得或其可通过描述于以下或已由本领域技术人员自文献，例如自WO 2017/072020、WO 2017/072021及WO 2018/192866(其等的全文是以引用的方式并入本文中)已知的方法(或通过与那些类似或相似的方法)来制备。
中间物1
(6R)-3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-胺；半-(2S,3S)-2,3-双(4-甲基苯甲酰基氧基)丁二酸盐
Figure BDA0003792982170000411
步骤1：4-(3-乙氧基-3-氧代基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯
在氩气气氛下，将4-碘-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(220g)、3,3-二乙氧基丙-1-烯(112g)、乙酸钯-II(Pd(OAc)2，35.3g)、氯化四丁基铵(240g)及DIPEA(203g)在DMF(900mL)中的混合物在110℃下搅拌2小时且在120℃下搅拌1小时。冷却至约67℃后，添加EtOAc(1.5L)。将所述混合物冷却至rt，经硅藻土过滤且用EtOAc(2x)洗涤滤饼。用半饱和NaCl水溶液(3x)及水(4x)洗涤经合并的滤液。干燥(MgSO4)后，在真空中浓缩所述混合物以得到粗产物，其是直接按原样用于下一步骤中。质谱(ESI+)：m/z＝255[M+H]+。
步骤2：3-甲基-6-氧代基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-5-甲酸乙酯
在氩气气氛下，将4-(3-乙氧基-3-氧代基丙基)-5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯(191g)在THF(500mL)中的溶液在41℃至64℃的间添加至NaN(Si(CH3)3)2的溶液(2M含在THF中，1.3L)。将所述混合物在60℃下搅拌15分钟且在rt下搅拌1小时。然后将所述混合物倒入至HCl水溶液(6N，851mL)、冰(1kg)及2-甲基-四氢呋喃(2.5L)的混合物中。搅拌10分钟后，分离相。在真空中浓缩有机相以得到粗产物，其是直接按原样用于下一步骤中。
质谱(ESI+)：m/z＝209[M+H]+。
步骤3：3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-酮
将3-甲基-6-氧代基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-5-甲酸乙酯(363g)在1,4-二噁烷(1.5L)及水(110mL)中的混合物加热至90℃持续22小时。在真空中浓缩所述混合物以得到粗产物，其是直接按原样用于下一步骤中。质谱(ESI+)：m/z＝137[M+H]+。
步骤4：N-[3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]亚吡唑-6-基]羟胺；盐酸盐
将3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-酮(294g)在EtOH(800mL)中的溶液加热至65℃且用盐酸羟胺(52.5g)处理。将混合物在60℃下搅拌2小时且在rt下搅拌12小时。收集沉淀且用EtOH及叔丁基甲基醚洗涤。在真空中干燥粗产物且按原样用于下一步骤中。质谱(ESI+)：m/z＝152[M+H]+。
步骤5：(6R)-3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-胺；半-(2S,3S)-2,3-双(4-甲基苯甲酰基氧基)-丁二酸盐
将N-[3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]亚吡唑-6-基]羟胺；盐酸盐(85g)悬浮在MeOH(2.2L)中，用(1R)-1-苯基乙-1-胺(165g)处理且在40℃下搅拌30分钟。添加碳载20％Pd(OH)2(18g)且将所述混合物在氢气气氛(21巴)于65℃下搅拌8小时且在100℃下搅拌12小时。将所述混合物冷却至rt，经硅藻土过滤且在真空中浓缩。将残余物溶解于异丙醇(1.4L)及水(70mL)中，加热至60℃且用K2CO3(94g)处理。将所述混合物在60℃下搅拌10分钟，在55℃下搅拌50分钟然后过滤。用异丙醇洗涤滤饼。在真空中浓缩合并的滤液。将残余物溶解于异丙醇(100mL)中，加热至60℃且用(2S,3S)-2,3-双(4-甲基苯甲酰基氧基)丁二酸(79g)在异丙醇(700mL)及水(40mL)中的溶液处理。将所述混合物加热至35℃然后过滤。将滤液搅拌30分钟，加热至60℃持续1小时且然后在rt下持续12小时。通过过滤收集沉淀且用异丙醇及叔丁基甲基醚洗涤。在真空中干燥粗产物且按原样用于下一步骤中。质谱(ESI+)：m/z＝138[M+H]+。
中间物2
6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-氯吡啶-3-甲醛
Figure BDA0003792982170000431
在氩气气氛下，将2,6-二氯吡啶-3-甲醛(10g)、5-氮杂螺[2.3]己烷三氟乙酸盐(16g)及DIPEA(40mL)在DMF(40mL)中的混合物加热至40℃持续12小时。将混合物冷却，浓缩，分配在水与DCM的间且分离相。用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，浓缩然后在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 90:10→70:30)残余物以得到标题化合物。LC(方法2)：tR＝1.03分钟；质谱(ESI+)：m/z＝223[M+H]+。
类似于中间物2来制备中间物2-1至2-4：
Figure BDA0003792982170000432
中间物 反应条件的注释
2-1 反应是在rt下进行12小时。
2-2 反应是在90℃下进行6小时。
2-4 反应是在50℃下进行12小时。
Figure BDA0003792982170000441
中间物3
(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-氯吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003792982170000442
将NaBH4(2.1g)逐份添加至冰冷的6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-氯吡啶-3-甲醛(12g)在THF(300mL)及水(3mL)中的混合物。将所述混合物在0℃下搅拌20分钟且在rt下搅拌30分钟。然后将所述混合物倒入500g冰及饱和NH4Cl水溶液(500mL)的混合物中。以DCM萃取水相两次。干燥(MgSO4)合并的有机相且在真空中浓缩以得到标题化合物。LC(方法2)：tR＝0.84分钟；质谱(ESI+)：m/z＝225[M+H]+。
类似于中间物3来制备中间物3-1至3-4：
Figure BDA0003792982170000451
Figure BDA0003792982170000452
Figure BDA0003792982170000453
Figure BDA0003792982170000461
中间物4
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-氯吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000462
将(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-氯吡啶-3-基)甲醇(5.6g)、1H-吡唑-4-甲酸乙酯(3.6g)及对甲苯磺酸(2.6g)在ACN(80mL)中的混合物加热2小时至60℃。冷却至rt后，将所述混合物分配在饱和NaHCO3水溶液与EtOAc的间。以EtOAc萃取水相且干燥(MgSO4)合并的有机相然后浓缩。将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 100:0→50:50)以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝1.05分钟；质谱(ESI+)：m/z＝347[M+H]+。
类似于中间物4来制备中间物4-1至4-9：
Figure BDA0003792982170000463
Figure BDA0003792982170000471
Figure BDA0003792982170000472
Figure BDA0003792982170000481
Figure BDA0003792982170000482
Figure BDA0003792982170000491
中间物5
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-乙烯基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000492
在微波小瓶中，用氩气冲洗1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-氯吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(1.2g)、乙烯基三氟硼酸钾(535mg)、K2CO3(920mg)及THF(25mL)的混合物10分钟。添加1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(Pd(dppf)Cl2，120mg)，密封所述小瓶且将所述混合物加热至80℃持续12小时。冷却至rt后，用EtOAc稀释所述混合物。依次用水及盐水洗涤所述混合物。干燥(MgSO4)后，在真空中浓缩所述混合物且将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 60:40→40:60)以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.78分钟；质谱(ESI+)：m/z＝339[M+H]+。
类似于中间物5来制备中间物5-1：
Figure BDA0003792982170000501
Figure BDA0003792982170000502
中间物6
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-甲酰基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000503
将OsO4(4％含在水中，285μL)添加至1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-乙烯基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(760mg)在1,4-二噁烷(20mL)及水(2mL)中的混合物。将所述混合物搅拌30分钟，用NaIO4(1.5g)处理且在rt下搅拌2小时。用EtOAc稀释所述混合物且依次用水、含在水中的10％Na2S2O3及盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中浓缩所述混合物且将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 80:20→50:50)以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.93分钟；质谱(ESI+)：m/z＝341[M+H]+。
类似于中间物6来制备中间物6-1至6-8：
Figure BDA0003792982170000511
Figure BDA0003792982170000521
Figure BDA0003792982170000522
Figure BDA0003792982170000531
中间物7
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-(二氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000532
在微波小瓶中，将1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-甲酰基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(584mg)溶解于DCM(7mL)中。添加三氟化二乙基胺基硫(DAST，700μL)，密封所述小瓶且将所述混合物加热至50℃持续12小时。冷却至rt后，用1N NaHCO3水溶液小心地处理所述混合物直至气体逸出停止。然后将所述混合物分配在饱和NaHCO3水溶液与DCM的间。分离相且以DCM萃取水相。用盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)然后浓缩。将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 99:1→50:50)以得到标题化合物。LC(方法2)：tR＝1.09分钟；质谱(ESI+)：m/z＝363[M+H]+。
类似于中间物7来制备中间物7-1至7-8：
Figure BDA0003792982170000533
Figure BDA0003792982170000541
Figure BDA0003792982170000542
Figure BDA0003792982170000551
中间物8
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-(二氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸
Figure BDA0003792982170000552
将1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-(二氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(148mg)、EtOH(3mL)及NaOH(4M水溶液，400μL)的混合物在rt下搅拌48小时。添加HCl水溶液(4M，400μL)且通过反相HPLC(ACN，水)纯化所述混合物以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.93分钟；质谱(ESI+)：m/z＝335[M+H]+。
类似于中间物8来制备中间物8-1至8-10：
Figure BDA0003792982170000561
Figure BDA0003792982170000571
Figure BDA0003792982170000572
Figure BDA0003792982170000581
Figure BDA0003792982170000591
中间物9
2-氯-4-[(1E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-5-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000592
在微波小瓶中，用氩气冲洗2,4-二氯嘧啶-5-甲酸乙酯(2.5g)、反式-β-苯乙烯基三氟硼酸钾(2.5g)、Na2CO3(2M水溶液，12.5mL)及1,4-二噁烷(50mL)的混合物10分钟。添加双(二-叔丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯钯(II)(Pd(amphos)2Cl2，300mg)，密封所述小瓶且将所述混合物加热至50℃持续2小时。冷却至rt后，将所述混合物分配在EtOAc与水的间。用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)然后浓缩。将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 80:20→60:40)以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝1.21分钟；质谱(ESI+)：m/z＝289[M+H]+。
中间物10
2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-[(1E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-5-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000601
在氩气气氛下，将2-氯-4-[(1E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-5-甲酸乙酯(2.56g)、3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(1.3g)及KHCO3(2.3g)在THF(30mL)中的混合物在rt下搅拌12小时。将所述混合物分配在饱和NH4Cl水溶液与EtOAc的间且分离相。用盐水洗涤有机相。干燥(MgSO4)有机相，浓缩且将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 80:20→60:40)以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝1.27分钟；质谱(ESI+)：m/z＝336[M+H]+。
类似于中间物10来制备中间物10-1：
Figure BDA0003792982170000602
中间物 反应条件的注释
10-1 使用DMSO代替DMF。反应是在45℃下进行4小时。
Figure BDA0003792982170000603
中间物11
(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-[(1E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-5-基)甲醇
Figure BDA0003792982170000611
在氩气气氛下，用氢化二异丁基铝(DIBAH，1M含在THF中，25mL)逐滴处理2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-[(1E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-5-甲酸乙酯(1.96g)在THF(40mL)中的混合物。将所述混合物在rt下搅拌2小时，冷却至0℃且用4MHCl水溶液(15mL)逐滴处理。然后将所述混合物搅拌5分钟且添加4M NaOH水溶液(15mL)。将所述混合物分配在盐水与DCM的间且分离相。干燥(MgSO4)有机相，浓缩且将残余物在硅胶上层析(DCM/MeOH 98:2→90:10)以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.84分钟；质谱(ESI+)：m/z＝294[M+H]+。
中间物12
1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-[(1E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-5-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000612
在氩气气氛下，将SOCl2(5mL)添加至(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-[(1E)-2-苯基乙烯基]嘧啶-5-基)甲醇(1.89g)在甲苯(20mL)中的混合物。将所述混合物加热至60℃持续3小时，冷却至rt且在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM(20mL)中且逐滴添加至1H-吡唑-4-甲酸乙酯(950mg)及DIPEA(2.2mL)在DCM(20mL)中的混合物。在rt下搅拌12小时后，将所述混合物分配在水与DCM的间。用盐水洗涤有机相，干燥(MgSO4)，浓缩且将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 50:50→0:100)以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝1.06分钟；质谱(ESI+)：m/z＝416[M+H]+。
中间物13
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-(二氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000621
用Ar喷冲装有搅拌棒、1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-溴吡啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸乙酯(300mg)及NMP(4mL)的微波小瓶5分钟。依次添加CsF(349mg)、CuF(146mg)及二氟甲基-三甲基硅烷(522μL)，密封所述小瓶，且将所述混合物在120℃下搅拌1.5小时。冷却至rt后，将所述混合物分配在水与EtOAc的间。经硅藻土过滤所述混合物，分离相且以EtOAc萃取水相。干燥(MgSO4)合并的有机相然后浓缩。通过反相HPLC(ACN，水)纯化残余物以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝1.08分钟；质谱(ESI+)：m/z＝364[M+H]+。
中间物14
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-乙烯基吡啶-3-基)甲基]-1H-咪唑-4-甲酸乙酯
Figure BDA0003792982170000622
用氩气冲洗装有搅拌棒、1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-氯吡啶-3-基)甲基]-1H-咪唑-4-甲酸乙酯(2.6g)、乙烯基二羟基硼酸频哪醇酯(1.4mL)、Na2CO3(1M水溶液，18.6mL)及1,4-二噁烷(40mL)的微波小瓶5分钟。添加1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁二氯化钯(II)(Pd(dppf)Cl2，304mg)，密封所述小瓶，且将所述混合物在100℃下搅拌6小时。冷却至rt后，将所述混合物分配在水与EtOAc的间。以EtOAc萃取水相两次。用盐水洗涤合并的有机相，干燥(MgSO4)，然后浓缩。将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 50:50→0:100)以得到标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.01分钟；质谱(ESI+)：m/z＝339[M+H]+。
类似于中间物14来制备中间物14-1至14-4：
Figure BDA0003792982170000631
中间物 反应条件的注释
14-2 反应是在100℃下进行12小时。
14-3 反应是在100℃下进行12小时。
Figure BDA0003792982170000632
Figure BDA0003792982170000641
中间物15
(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003792982170000642
将6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-(三氟甲基)吡啶-3-甲酸甲酯(1.1g)在THF(15mL)中的混合物冷却至-50℃且用LiAlH4(1M溶液含在THF中，3.5mL)逐滴处理。将所述混合物在-25℃下搅拌3小时且然后用10％NH4Cl水溶液小心处理。然后将所述混合物分配在水与EtOAc的间且经硅藻土过滤。分离相且以EtOAc萃取水相。干燥(MgSO4)合并的有机相且在真空中浓缩以得到粗产物，其是直接用于下一步骤中。LC(方法1)：tR＝0.93分钟；质谱(ESI+)：m/z＝259[M+H]+。
中间物16
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-N-[(6R)-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003792982170000651
将1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸锂盐(30mg)、DIPEA(90μL)及六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓(HATU，50mg)在DMF(2mL)中的混合物搅拌5分钟。添加(6R)-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-胺(30mg)且将所述混合物搅拌1小时。用EtOAc稀释所述混合物，用水及盐水洗涤，干燥(MgSO4)，在真空中浓缩且将残余物在硅胶上层析(DCM/MeOH 98:2→90:10)以得到标题化合物。
LC(方法2)：tR＝1.25分钟；质谱(ESI+)：m/z＝602[M+H]+。
中间物17
(6R)-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-胺
Figure BDA0003792982170000661
步骤1：5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
将亚硫酰氯(58mL)逐滴添加至5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸(45g)在MeOH(450mL)中的溶液。添加后，将所述混合物在rt下搅拌16小时。在真空中浓缩所述混合物。将残余物溶解于EtOAc中，依次用饱和NaHCO3水溶液及盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中浓缩所述混合物以得到标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.64分钟；质谱(ESI+)：m/z＝141[M+H]+。
步骤2：5-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
将氢化钠(60％含在矿物油中，16.8g)逐份添加至DMF(470mL)。将所述混合物搅拌10分钟，冷却至0℃且用5-甲基-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(46.9g)在DMF(470mL)中的溶液逐滴处理。搅拌20分钟后，逐滴添加[2-(氯甲氧基)乙基]三甲基硅烷(SEM-Cl，77.7mL)。将所述混合物搅拌2小时，用EtOAc稀释且依次用水及盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中浓缩所述混合物且将残余物于硅胶上用石油醚/EtOAc 2:1层析。在真空中蒸发溶剂以得到标题化合物，其是直接用于下一步骤中。
步骤3：4-碘-5-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
将TFA(2.7mL)及N-碘琥珀酰亚胺(94.2g)添加至5-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(94.4g)在ACN(1.4L)中的溶液。将所述混合物搅拌48小时，用EtOAc稀释且依次用水、饱和Na2S2O3水溶液及盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中浓缩所述混合物且将残余物于硅胶上用石油醚/EtOAc 2:1层析。在真空中蒸发溶剂以得到标题化合物，其包含约15％的区位异构4-碘-3-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-5-甲酸甲酯。
LC(方法1)：tR＝1.17分钟；质谱(ESI+)：m/z＝397[M+H]+。
步骤4：4-[(1E)-3-甲氧基-3-氧代基丙-1-烯-1-基]-5-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
将4-碘-5-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(44g)、丙烯酸甲酯(15mL)及N-甲基二环己胺(35mL)溶解于二甲基乙酰胺(430mL)及水(110mL)中。用氩气冲洗所述混合物10分钟。添加二氯双(三-邻-甲苯基膦)钯(II)(PdCl2[P(o-Tol)3]2，2.6g)且将所述混合物在85℃下搅拌2小时。然后用EtOAc稀释所述混合物且依次用1M H3PO4水溶液及盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中浓缩所述混合物且将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 95:5→50:50)以得到标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.13分钟；质谱(ESI+)：m/z＝355[M+H]+。
步骤5：4-(3-甲氧基-3-氧代基丙基)-5-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-3-甲酸甲酯
在氢气气氛(3巴)下，在rt下，振荡4-[(1E)-3-甲氧基-3-氧代基丙-1-烯-1-基]-5-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(38.6g)及10％碳载钯(5.8g)在EtOAc(580mL)中的混合物3小时。过滤所述混合物，且浓缩滤液以得到标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.10分钟；质谱(ESI+)：m/z＝357[M+H]+。
步骤6：3-甲基-6-氧代基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-5-甲酸甲酯
将4-(3-甲氧基-3-氧代基丙基)-5-甲基-1-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-1H-吡唑-3-甲酸甲酯(37.8g)在THF中的溶液冷却至0℃，用NaN(Si(CH3)3)2(40％含在THF中；105mL)处理且搅拌15分钟。在冰冷下将所述混合物倒入且剧烈搅拌至1M H3PO4水溶液中。分离有机相，用盐水洗涤然后干燥(MgSO4)。在真空中蒸发溶剂以得到标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.06分钟；质谱(ESI+)：m/z＝325[M+H]+。
步骤7：3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-酮
将3-甲基-6-氧代基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-5-甲酸甲酯(34.9g)在1,4-二噁烷(350mL)及水(9mL)中的溶液在回流下加热12小时。在真空中蒸发溶剂且将残余物在硅胶上层析(石油醚/EtOAc 80:20→40:60)以得到标题化合物。LC(方法1)：tR＝1.05分钟；质谱(ESI+)：m/z＝267[M+H]+。
步骤8：(6S)-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-醇
在0℃下，将甲酸(11mL)添加至三乙胺(27mL)在DCM(260mL)中的溶液。使所述混合物升温至rt且添加3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-酮(26g)。用氩气冲洗10分钟后，添加[N-[(1S,2S)-2-(胺基-κN)-1,2-二苯基乙基]-4-甲基苯磺酰胺基-κN]氯-[(1,2,3,4,5,6-η)-1,3,5-三甲基苯]-钌(RuCl[(S,S)-TsDPEN](均三甲苯)；0.5g)且在rt下，将所述混合物搅拌48小时。然后在剧烈搅拌下用1M NaHCO3水溶液处理所述混合物。分离相且以DCM萃取水相。用水及盐水洗涤合并的有机相。干燥(MgSO4)后，在真空中蒸发溶剂且将残余物在硅胶上层析(DCM/MeOH 98:2→90:10)以得到对映异构体过量(ee)为84％的标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.99分钟；质谱(ESI+)：m/z＝269[M+H]+。
步骤9：(6R)-6-叠氮基-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑
在氩气气氛下，将DBU(16mL)添加至(6S)-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-醇(25.5g)在甲苯(250mL)中的溶液。将所述混合物冷却至0℃且历经1小时逐滴添加二苯基磷酰叠氮(22mL)。将所述混合物搅拌12小时同时升温至rt。然后添加MeOH(25mL)且将所述混合物搅拌1小时。用水洗涤所述混合物两次，干燥(MgSO4)然后在真空中浓缩。将残余物在Al2O3(DCM)上层析以得到标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.15分钟；质谱(ESI+)：m/z＝294[M+H]+。
步骤10：(6R)-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-胺
在氢气气氛(3巴)下，在rt下，将(6R)-6-叠氮基-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑(19.7g)及10％碳载钯(3g)在EtOH(200mL)中的混合物振荡12小时。过滤所述混合物，然后浓缩滤液以得到标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.80分钟；质谱(ESI+)：m/z＝268[M+H]+。
实施例的合成：
实施例1
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-(二氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-N-[(6R)-3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003792982170000701
将1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-(二氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸(110mg)、DIPEA(280μL)及六氟磷酸O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓(HATU，130mg)在DMF(2mL)中的混合物搅拌20分钟。添加(6R)-3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-胺；半-(2S,3S)-2,3-双(4-甲基苯甲酰基氧基)丁二酸(130mg)且将所述混合物搅拌1小时。通过反相HPLC(ACN，水)纯化所述混合物以得到标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.97分钟；质谱(ESI+)：m/z＝454[M+H]+。
类似于实施例1来制备实施例2至12：
Figure BDA0003792982170000702
Figure BDA0003792982170000711
Figure BDA0003792982170000712
Figure BDA0003792982170000721
Figure BDA0003792982170000731
实施例13
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-N-[(6R)-3-甲基-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003792982170000732
将1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基]-N-[(6R)-3-甲基-2-{[2-(三甲基硅基)乙氧基]甲基}-2H,4H,5H,6H-环戊[c]吡唑-6-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(45mg)及三氟乙酸(1mL)在DCM(2mL)中的混合物在rt下搅拌12小时。在真空中浓缩所述混合物，溶解于MeOH(2mL)中且用NH3的MeOH溶液(7M，5mL)处理。将所述混合物转移至微波小瓶。密封所述小瓶且将所述混合物加热12小时至80℃。冷却至rt后，在真空中浓缩所述混合物且通过反相HPLC(ACN，水)纯化以得到标题化合物。
LC(方法3)：tR＝1.25分钟；质谱(ESI+)：m/z＝602[M+H]+。

Claims (15)

1.一种式(I)化合物，
Figure FDA0003792982160000011
其中
R是选自由
Figure FDA0003792982160000012
及
Figure FDA0003792982160000013
组成的组R-G1；
R1是选自由H及F组成的组R1-G1；
部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝N-CR＝N-、＝N-CR＝CH-及＝CH-CR＝N-组成的组A-G1；及
部分-L1＝L2-是选自由-N＝N-、-N＝CH-及-CH＝N-组成的组L-G1；
及/或其互变异构体
或其盐。
2.如权利要求1的化合物，
其中R是选自由
Figure FDA0003792982160000014
组成的组R-G2，
及/或其互变异构体
或其盐。
3.如权利要求1的化合物，
其中R是选自由
Figure FDA0003792982160000015
组成的组R-G3，
及/或其互变异构体
或其盐。
4.如权利要求1的化合物，
其中R是选自由
Figure FDA0003792982160000016
组成的组R-G4，
及/或其互变异构体
或其盐。
5.如权利要求1至4中任一项的化合物，
部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝N-CR＝N-组成的组A-G2，
及/或其互变异构体
或其盐。
6.如权利要求1至4中任一项的化合物，
部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝N-CR＝CH-组成的组A-G3，
及/或其互变异构体
或其盐。
7.如权利要求1至4中任一项的化合物，
部分＝A1-CR＝A2-是选自由＝CH-CR＝N-组成的组A-G4，
及/或其互变异构体
或其盐。
8.如权利要求1至7中任一项的化合物，其中
所述式(I)化合物是选自由以下组成的群
Figure FDA0003792982160000021
Figure FDA0003792982160000031
及/或其互变异构体
或其盐。
9.一种如权利要求1至8中任一项的化合物及/或其互变异构体的药学上可接受的盐。
10.一种药物组合物，其包含一或多种如权利要求1至9中任一项的化合物及/或其互变异构体、或药学上可接受的盐，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
11.一种药物组合物，其包含一或多种如权利要求1至9中任一项的化合物及/或其互变异构体、或药学上可接受的盐、及一或多种另外治疗剂，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
12.如权利要求11的药物组合物，其中所述一或多种另外治疗剂是选自由以下组成的群：抗糖尿病药剂；用于治疗超重及/或肥胖的药剂；用于治疗高血压、心脏衰竭及/或动脉粥样硬化的药剂，及用于治疗眼部疾病的药剂。
13.如权利要求1至9中任一项的化合物及/或其互变异构体，其用作药物。
14.一种用于治疗眼部疾病的方法，优选用于治疗有需要患者的糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性及/或脉络膜新血管生成，所述方法包括向所述患者投与一种或多种如权利要求1至9中任一项的化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐。
15.如权利要求1至9中任一项的化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐，其用于治疗眼部疾病、优选用于治疗糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性及/或脉络膜新血管生成的方法，所述方法包括对所述患者投与一或多种如权利要求1至9中任一项的化合物及/或其互变异构体或药学上可接受的盐。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106257976A (zh) * 2014-03-07 2016-12-28 拜奥克里斯特制药公司 人类血浆激肽释放酶抑制剂
WO2017072021A1 (en) * 2015-10-27 2017-05-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors
CN107108576A (zh) * 2014-11-27 2017-08-29 卡尔维斯塔制药有限公司 作为血浆激肽释放酶抑制剂的n‑((杂)芳基甲基)‑杂芳基‑甲酰胺化合物
CN108289893A (zh) * 2015-10-01 2018-07-17 拜奥克里斯特制药公司 人类血浆激肽释放酶抑制剂
WO2018192866A1 (en) * 2017-04-21 2018-10-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors
WO2020035540A1 (en) * 2018-08-16 2020-02-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heteroaromatic carboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI243164B (en) 2001-02-13 2005-11-11 Aventis Pharma Gmbh Acylated indanyl amines and their use as pharmaceuticals
US20050090529A1 (en) 2003-07-31 2005-04-28 Pfizer Inc 3,5 Disubstituted indazole compounds with nitrogen-bearing 5-membered heterocycles, pharmaceutical compositions, and methods for mediating or inhibiting cell proliferation
JP2005089362A (ja) 2003-09-17 2005-04-07 Sumitomo Chemical Co Ltd アリールピラゾリン化合物及びその用途
EP2259679A4 (en) 2008-01-31 2011-09-14 Joslin Diabetes Ct METHOD FOR THE TREATMENT OF CALLIQUE CLEANING DISORDERS
WO2013111108A1 (en) 2012-01-27 2013-08-01 Novartis Ag 5-membered heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors
EP2807156A1 (en) 2012-01-27 2014-12-03 Novartis AG Aminopyridine derivatives as plasma kallikrein inhibitors
HUE057851T2 (hu) 2013-05-23 2022-06-28 Kalvista Pharmaceuticals Ltd Plazma-kallikrein inhibitorai
US10399961B2 (en) 2015-10-27 2019-09-03 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors
KR102424709B1 (ko) 2016-05-31 2022-07-22 칼비스타 파마슈티컬즈 리미티드 혈장 칼리크레인 저해제로서 피라졸 유도체
EP3481391A4 (en) 2016-07-11 2020-03-11 Lifesci Pharmaceuticals, Inc. THERAPEUTIC INHIBITOR COMPOUNDS
TW202144330A (zh) 2020-02-13 2021-12-01 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 作為血漿激肽釋放酶抑制劑之雜芳族甲醯胺衍生物
TW202144331A (zh) 2020-02-13 2021-12-01 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司 作為血漿激肽釋放酶抑制劑之雜芳族甲醯胺衍生物

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106257976A (zh) * 2014-03-07 2016-12-28 拜奥克里斯特制药公司 人类血浆激肽释放酶抑制剂
CN107108576A (zh) * 2014-11-27 2017-08-29 卡尔维斯塔制药有限公司 作为血浆激肽释放酶抑制剂的n‑((杂)芳基甲基)‑杂芳基‑甲酰胺化合物
CN108289893A (zh) * 2015-10-01 2018-07-17 拜奥克里斯特制药公司 人类血浆激肽释放酶抑制剂
WO2017072021A1 (en) * 2015-10-27 2017-05-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors
WO2018192866A1 (en) * 2017-04-21 2018-10-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors
CN110546146A (zh) * 2017-04-21 2019-12-06 勃林格殷格翰国际有限公司 作为血浆激肽释放酶抑制剂的杂芳基羧酰胺衍生物
WO2020035540A1 (en) * 2018-08-16 2020-02-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heteroaromatic carboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors

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