CN110546146A - 作为血浆激肽释放酶抑制剂的杂芳基羧酰胺衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)的杂芳基羧酰胺，其中A、T、R1、R2及R3如本说明书及权利要求书中所定义，及其药学上可接受的盐，其可用于治疗可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病的方法中。

Description

作为血浆激肽释放酶抑制剂的杂芳基羧酰胺衍生物
【技术领域】
本发明涉及新颖的五元杂芳基羧酰胺衍生物及其药学上可接受的盐，其为血浆激肽释放酶抑制剂。另外，本发明涉及药物组合物及包含该等化合物的组合，且涉及其针对治疗可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病的方法的用途。特定言之，本发明的药物组合物适于预防及/或治疗糖尿病并发症，尤其适于治疗与糖尿病性视网膜病及糖尿病性黄斑水肿相关联的视网膜血管渗透性。
【现有技术】
血浆激肽释放酶为由肝中的肝细胞分泌的作为非活性血浆前激肽释放酶的胰蛋白酶状丝胺酸蛋白酶，其在血浆中作为游离酶原或作为键结至高分子量激肽原的杂二聚体复合物循环，该高分子量激肽原经活化以生成活性血浆激肽释放酶，该活性血浆激肽释放酶除处理其他底物外亦可自激肽原释放激肽。激肽为经由诸如缓激肽受体的G蛋白偶合受体起作用的炎症的强力介体。
血浆激肽释放酶被认为在多种炎性病症中起作用，且可在病症中具有许多影响，诸如遗传血管性水肿(HAE)、视网膜病或糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、临床上重要的黄斑水肿(CSME)、囊样黄斑部水肿(CME)、白内障摘除后的CME、由超低温疗法诱发的CME、由葡萄膜炎诱发的CME、内眼炎、血管栓塞(例如视网膜中央静脉栓塞、视网膜分支静脉栓塞或半视网膜静脉栓塞)后的CME、视网膜水肿、与糖尿病性视网膜病的白内障手术相关的并发症、高血压视网膜病、视网膜损伤、干性及湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、脉络膜新生血管后玻璃体脱落(PVD)、例如在与组织及/或器官移植相关联的所有种类的情境中的缺血再灌注损伤、手术诱发的大脑损伤、局部脑缺血、全脑缺血、神经胶瘤相关联的水肿、脊髓损伤、疼痛、缺血、大脑局部缺血、神经及认识缺陷、深层静脉栓塞、中风、心肌梗塞、后天血管性水肿、药物相关(ACE-抑制剂)水肿、高海拔脑水肿、细胞毒性大脑水肿、渗透性脑水肿、阻塞性脑积水、辐射诱发的水肿、淋巴水肿、创伤性脑损伤、出血性中风(例如大脑中风或蛛网膜下腔中风)、脑内出血、缺血性中风的出血性转化、与损伤或手术相关联的大脑创伤、大脑动脉瘤、动静脉畸形、在手术操作(例如心胸手术，诸如心肺绕通或冠状动脉绕通移植)期间的血液损耗的减少、诸如血栓的血液凝固障碍、发痒、炎症成分紊乱(诸如多发性硬化)、癫痫、脑炎、阿耳滋海默症、过度日间嗜睡、原发性高血压、与糖尿病或高脂质血症相关联的增加的血压、肾机能不全、慢性肾病、心脏衰竭、微白蛋白尿、白蛋白尿、蛋白尿、与增加的血管渗透性(例如增加的视网膜血管渗透性、增加的腿、足、脚踝血管渗透性)相关联的病症、大脑出血、深层静脉栓塞、纤维蛋白溶解治疗后的凝血、绞痛、血管性水肿、败血症、关节炎(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、感染性关节炎)、狼疮、痛风、牛皮癣、炎性肠道、糖尿病、糖尿病并发症、由代谢综合征引起的并发症、传染病、星形胶质细胞激活相关疾病(例如阿耳滋海默症或多发性硬化)、帕金森氏病、肌肉萎缩性侧索硬化库贾氏病、中风、癫痫症及创伤(例如大脑创伤)、过敏性水肿，例如长期过敏性窦炎或常年性鼻炎的气流堵塞；急性哮喘的气流堵塞；与全身性红斑性狼疮症(SLE)相关联的浆膜炎、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)及其他疾病。
血浆激肽释放酶抑制剂被视为适用于治疗广泛范围的病症，尤其治疗疾病中的水肿形成，例如与缺血再灌注损伤相关的水肿形成、视网膜病或水肿相关联疾病，诸如遗传血管性水肿、黄斑水肿及大脑水肿。血浆激肽释放酶抑制剂被视为尤其适用于治疗视网膜病，例如与糖尿病及/或高血压相关联的视网膜病，适用于治疗黄斑水肿，例如与糖尿病及/或高血压相关联的黄斑水肿。
适于医疗用途的血浆激肽释放酶抑制剂应有效结合血浆激肽释放酶且对其具有高选择性。其应自胃肠道很好地吸收、足够代谢稳定且拥有有利的药代动力学属性。其应无毒且几乎不展现副作用。
本发明化合物为血浆激肽释放酶抑制剂且因此潜在地适用于治疗上文所提及的病症，尤其应适用作减少与糖尿病性视网膜病及糖尿病性黄斑水肿视网膜病有关的视网膜血管渗透性或水肿相关联疾病的疗法。
全部与血浆激肽释放酶相关联的糖尿病的其他并发症(诸如脑溢血、肾病、心肌病及神经病变)亦可视为血浆激肽释放酶抑制剂的靶标。
低分子量血浆激肽释放酶抑制剂为本领域中已知的，例如WO 2013/111108、WO2013/11107及WO 2014/188211中所公开的化合物。
【发明内容】
在第一方面中，本发明涉及一种式(I)化合物
其中
A选自由N及CH组成的组A-G1；
T选自由N、C-H、C-C1-4烷基、C-CHF2、C-CF3及C-OCH3组成的组T-G1；
R1选自由C1-3烷基组成的组R1-G1；
R2选自由稠合或螺环双环环系统组成的组R2-G1，该稠合或螺环双环环系统由作为环成员的1个N原子及5至6个C原子组成，
其中该环系统经由该N原子连接至式(I)中的单环杂芳环，且
其中该环系统任选经一个选自由以下组成的组的取代基取代：F、C1-3烷基、CF3、CN、HO-C1-3烷基-及C1-3烷基氧基-，且
其中该环系统任选另外经一个选自由F及CH3组成的组的取代基取代；且
R3选自由H、CH3、CHF2或CF3组成的组R3-G1，
其中在上文所提及的任何定义中且若未另外指出，则任何烷基或子基可为直链或支链、同种型、互变异构体、立体异构体、代谢物、前药、溶剂合物、水合物及其盐，尤其是其药学上可接受的盐，或其组合。
在第二方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含一或多种如上文或下文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
在第三方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含一或多种如上文或下文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，及一或多种另外的治疗剂，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
在第四方面中，本发明涉及一种如上文或下文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用作药剂。
在第五方面中，本发明涉及一种用于治疗有需要的患者的可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病或症状的方法，该方法的特征在于将一或多种如上文或下文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐给予该患者。
又，本发明涉及使用一或多种如上文或下文所定义的式(I)化合物，以制造用于治疗可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病或症状的药剂。
又，本发明涉及一种如上文或下文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以供一种用于治疗有此需要的患者的可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病或症状的方法使用。
对于本领域技术人员，本发明的另外的方面将直接自前述及以下描述及实施例而变得明显。
一般术语及定义
未在本文中特定地定义的术语应被赋予本领域技术人员依据本发明及上下文将对其赋予的含义。然而，除非相反地规定，否则如本说明书中所使用，以下术语具有指定的含义且将遵守以下约定。
术语“一或多种根据本发明的化合物”、“一或多种式(I)化合物”、“一或多种本发明化合物”及其类似者表示根据本发明的式(I)化合物，包括其互变异构体、立体异构体及其混合物及其盐(尤其其药学上可接受的盐)及此类化合物的溶剂合物及水合物，包括此类互变异构体、立体异构体及其盐的溶剂合物及水合物。
又，除非特定说明，否则贯穿本说明书及随附权利要求书中，所给出化学式或名称应涵盖互变异构体及所有立体、光学及几何异构体(例如对映异构体、非对映异构体、E/Z异构体等)及其外消旋体，以及不同比例的个别对映异构体的混合物、非对映异构体的混合物、或存在此类异构体及对映异构体的任何上述形式的混合物、以及其盐(包括其药学上可接受的盐)及其溶剂合物(诸如水合物，包括游离化合物的溶剂合物或化合物的盐的溶剂合物)。
词组“药学上可接受”在本文中用于指那些化合物、物质、组合物及/或剂型，其在合理医学判断的范畴内，适用于与人类及动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，且与合理益处/风险比率相匹配。
如本文中所使用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中原构化合物通过制备其酸盐或碱盐而改质。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基(诸如胺)的无机酸盐或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱金属盐或有机盐；等等。
除上文所提及外，例如适用于纯化或分离本发明化合物的其他酸的盐(例如三氟乙酸盐)亦组成本发明的部分。
在本发明化合物以化学名称及化学式形式描绘的情况下，若有任何不一致的情况，则应以化学式为准。
在下文定义的基团(group/radical)或部分中，通常在基团之前规定碳原子数目，例如C1-6烷基意指具有1至6个碳原子的烷基。一般而言，对于包含两个或多于两个子基团的基团而言，最后提及的子基团为基团连接点，例如取代基“芳基-C1-3烷基-”意指芳基键结至C1-3烷基，而后者键结至核心或键结至取代基所连接的基团。
可在子式中使用星号来指示连接至如所定义的核心分子的键。
取代基原子的记数始于最接近核心或连接有取代基的基团的原子。
举例而言，术语“3-羧丙基-基团”表示以下取代基：
其中羧基连接至丙基的第三个碳原子。术语“1-甲基丙基-”、“2,2-二甲基丙基-”或“环丙基甲基-”基团表示以下基团：
如本文中所使用的术语“取代”意谓在指定原子、基团或部分上的任何一或多个氢系用来自所指定群组的选择替换，其限制条件为不超过原子的正常价且取代产生可接受的稳定化合物。
在基团的定义中，术语“其中每一X、Y及Z基团任选经取代”及其类似者表示：每一基团X、每一基团Y及每一基团Z各自作为独立基团或各自作为组成基团的部分可如定义经取代。举例而言，定义“Rex表示H、C1-3烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基-C1-3烷基或C1-3烷基-O-，其中每一烷基任选用一或多个Lex取代。”或其类似者意谓在包含术语烷基的前述基团中的每一者中(亦即，在基团C1-3烷基、C3-6环烷基-C1-3烷基及C1-3烷基-O-中的每一者中)，烷基部分可如定义经Lex取代。
其中n为1至n的整数的术语“C1-n烷基”单独或与另一基团组合，表示具有1至n个C原子的非环状饱和分支链或直链烃基。举例而言，术语C1-5烷基包涵基团H3C-、H3C-CH2-、H3C-CH2-CH2-、H3C-CH(CH3)-、H3C-CH2-CH2-CH2-、H3C-CH2-CH(CH3)-、H3C-CH(CH3)-CH2-、H3C-C(CH3)2-、H3C-CH2-CH2-CH2-CH2-、H3C-CH2-CH2-CH(CH3)-、H3C-CH2-CH(CH3)-CH2-、H3C-CH(CH3)-CH2-CH2-、H3C-CH2-C(CH3)2-、H3C-C(CH3)2-CH2-、H3C-CH(CH3)-CH(CH3)-及H3C-CH2-CH(CH2CH3)-。
其中n为整数3至n的术语“C3-n环烷基”，单独或与另一基团组合，表示具有3至n个C原子的环状饱和非分支链烃基。环基可为单-、双-、三-或螺环，最佳为单环。此类环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环十二烷基、双环[3.2.1.]辛基、螺[4.5]癸基、降蒎基、降冰片基、降蒈基、金刚烷基等。
术语卤素一般表示氟、氯、溴及碘。
上文所给出术语中的多者可反复用于定义化学式或基团，且在各情况下彼此独立地具有上文所给出含义中之一者。
如本文中所使用，术语“治疗(treatment/treating)”涵盖治疗性(亦即治愈性及/或缓解性)及预防性(亦即预防性)治疗两者。
治疗性治疗是指已罹患呈明显急性或慢性形式的该等症状中的一或多者的患者的治疗。治疗性治疗可为对症治疗，其为了减轻特定病症的症状，或可为病因治疗，其为了逆转或部分逆转病症的症状或阻止或减缓疾病的发展。
预防性治疗(“预防”)是指对处于罹患该等症状中的一或多者的风险下的患者的治疗，该治疗系在疾病的临床发作之前以便减少该风险。
术语“治疗(treatment/treating)”包括给予一或多种活性化合物以便预防或延迟症状或并发症的发作，且预防或延迟罹患疾病、症状或病症，及/或以便消除或控制疾病、症状或病症，以及缓解与疾病、症状或病症相关联的症状或并发症。
当本发明提及需要治疗的患者时，其主要地涉及哺乳动物(尤其人类)的治疗。
术语“治疗有效量”意谓(i)治疗或预防具体疾病或症状，(ii)减轻、改善或消除具体疾病或症状的一或多个病状，或(iii)预防或延迟本文中所描述的具体疾病或症状的一或多个病状的发作的本发明化合物的量。
【发明详述】
本发明公开新颖的五元杂芳基羧酰胺衍生物，其为有效血浆激肽释放酶抑制剂，且拥有合适药理学及药代动力学属性以将其用作治疗可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病及/或症状的药剂，该等疾病及/或症状包括但不限于糖尿病并发症，例如糖尿病性视网膜病及糖尿病黄斑水肿、视网膜病或水肿相关联疾病。
本发明化合物可提供若干优点，诸如增强的效力、高代谢及/或化学稳定性、高选择性、安全性及耐受性、增强的可溶性、增强的渗透性、所期望的血浆蛋白结合、增强的生物利用度、改良的药代动力学特征及形成稳定盐的可能性。
本发明化合物
在本发明的第一方面中，发现以下式(I)的化合物为血浆激肽释放酶的有效抑制剂，
其中A、T、R1、R2及R3如上文及下文所定义，且该化合物在以下方面展现有利的属性：选择性、安全性及耐受性、代谢及/或化学稳定性、药代动力学及物理化学特性、可溶性、渗透性、血浆蛋白结合、生物利用度以及形成稳定盐的可能性。
因此，预期如上文或下文所定义的式(I)化合物或其药学上可接受的盐适用于治疗可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病及/或症状。
因此，根据本发明的一个方面，提供以下式(I)的化合物或其盐，
其中A、T、R1、R2及R3如上文或下文所定义，且亦提供同种型、互变异构体、立体异构体、代谢物、前药、溶剂合物、水合物及其盐，尤其是其药学上可接受的盐。
除非另外陈述，否则基团、残基及取代基，尤其是A、T、R1、R2及R3如上文及下文所定义。取代基A、T、R1、R2及R3的一些优选含义将在下文给定作为本发明的实施方案。这些定义及实施方案中的任一者及每一者可彼此组合。
A:
根据一个实施方案，A选自由N及CH组成的组A-G1。
根据另一实施方案，A选自由CH组成的组A-G2。
根据另一实施方案，A选自由N组成的组A-G3。
T:
根据一个实施方案，T选自由N、C-H、C-C1-4烷基、C-CHF2、C-CF3及C-OCH3组成的组T-G1。
根据另一实施方案，T选自由N、C-H、C-CH3、C-CH2CH3、C-CH2CH2CH3、C-CH(CH3)2、C-CHF2、C-CF3及C-OCH3组成的组T-G2。
根据另一实施方案，T选自由N、C-H、C-CH3、C-CH(CH3)2、C-CHF2、C-CF3及C-OCH3组成的组T-G3。
根据另一实施方案，T选自由C-CH3、C-CH(CH3)2、C-CHF2、C-CF3及C-OCH3组成的组T-G4。
根据另一实施方案，T选自由C-H组成的组T-G5。
根据另一实施方案，T选自由N组成的组T-G6。
R1:
根据一个实施方案，R1选自由C1-3烷基组成的组R1-G1。
根据另一实施方案，R1选自由CH3及CH2CH3组成的组R1-G2。
根据另一实施方案，R1选自由CH3组成的组R1-G3。
R2:
根据一个实施方案，R2选自由稠合或螺环双环环系统组成的组R2-G1，该稠合或螺环双环环系统由作为环成员的1个N原子及5至6个C原子组成，
其中该环系统经由该N原子连接至式(I)中的单环杂芳环，且
其中该环系统任选经一个选自由以下组成的组的取代基取代：F、C1-3烷基、CF3、CN、HO-C1-3烷基-及C1-3烷基氧基-，且
其中该环系统任选另外经一个选自由F及CH3组成的组的取代基取代。
根据另一实施方案，R2选自由稠合或螺环双环环系统组成的组R2-G2，该稠合或螺环双环环系统由作为环成员的1个N原子及5至6个C原子组成，
其中该环系统经由该N原子连接至式(I)中的单环杂芳环，且
其中该环系统任选经一个选自由以下组成的组的取代基取代：F、CH3、CF3、-CN、CH2-OH及CH2-OCH3，且
其中该环系统任选另外经一个选自由F及CH3组成的组的取代基取代。
根据另一实施方案，R2选自由稠合双环环系统及螺环双环环系统组成的组R2-G3，该稠合双环环系统由作为环成员的1个N原子及5个C原子组成，螺环双环环系统由作为环成员的1个N原子及5至6个C原子组成，
其中该环系统经由该N原子连接至式(I)中的单环杂芳环，且
其中该环系统任选经一个选自由以下组成的组的取代基取代：F、CH3、-CN及CH2-OH，且
其中该环系统任选另外经一个选自由F及CH3组成的组的取代基取代。
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G4：
其中该环系统经由如由星号指示的N原子连接至式(I)中的单环杂芳环。
R3:
根据一个实施方案，R3选自由H、CH3、CHF2及CF3组成的组R3-G1。
根据另一实施方案，R3选自由H及CH3组成的组R3-G2。
式(I)化合物的更佳亚属实施方案在以下表1中阐述为实施方案(I-a)至(I-g)，其中使用上文所提及的取代基定义。举例而言，行R1及列(I-a)中的项-G1意谓在实施方案(I-a)中，取代基R1选自指定为R1-G1的定义。同样类似应用于并入通式中的其他变量。
表1：
尤其优选的化合物为(包括其互变异构体、其盐或其任何溶剂合物或水合物)：
制备
使用本领域技术人员已知且描述于有机合成文献中的合成方法，例如使用描述于“Comprehensive Organic Transformations”，第二版，Richard C.Larock，John Wiley&Sons,2010.及“March's Advanced Organic Chemistry”，第七版，Michael B.Smith，JohnWiley&Sons，2013中的方法，可获得根据本发明的化合物及其中间体。优选地，以与下文更充分阐述的制备方法(尤其如实验部分中所描述)类似地来获得化合物。在一些状况下，实施反应方案所采用的顺序可变化。亦可使用为本领域技术人员熟知但此处未加以详细地描述的这些反应的变化。基于研究随后方案，用于制备根据本发明的化合物之一般操作对于本领域技术人员将变得明显。起始化合物可商购或可通过描述于文献或本文中的方法制备，或可以类似或相似方式制备。在实行反应之前，起始化合物中的任何对应官能基可使用常规保护基团加以保护。此外，使用本领域技术人员熟悉且描述于文献中的方法，例如“Protecting Groups”，第三版，Philip J.Kocienski，Theime，2005及“Protective Groupsin Organic Synthesis”，第四版，Peter G.M.Wuts，Theodora W.Greene，John Wiley andSons，2006中的方法，这些保护基团可在反应顺序中合适的阶段加以分裂。
方案1：
NL2＝NH2或受保护或掩蔽的NH2基团，例如，NHCOOtBu、NHCH2Ph、N(CH2Ph)2，其中Ph(＝苯基)可任选被1或2个OCH3基团取代
方案1：式(I)化合物可通过式(II)的合适酸(作为游离酸或作为具有诸如Li+、Na+、K+等的合适金属阳离子的盐)与式(III)的合适胺(作为游离胺或作为诸如盐酸盐、氢溴酸盐等的盐)于合适溶剂(例如，二氯甲烷、四氢呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、1-甲基-2-吡咯烷酮等)中在存在合适偶合剂(例如O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓-六氟磷酸盐(HATU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBOP)、碳化二亚胺试剂等)及碱(例如，三乙胺、N,N-二异丙基-乙胺、吡啶等)的情况下来制备以形成酰胺键；A、T、R1、R2及R3在方案1中具有如上文所定义的含义。替代地，羧酸转化成酰基氯(使用例如二氯甲烷中的草酰氯或亚硫酰氯)，且因而在存在合适的碱(例如三乙胺、N,N-二异丙基-乙胺、吡啶等)的情况下运用胺(III)偶合。若胺(III)与吡啶环上的受保护或掩蔽氨基(NL2并非NH2)一起使用，则此基团可通过应用有机化学物质的文献中所报告的标准操作分裂掉保护集团而随后转化成NH2基团。叔丁酯优选地在酸性条件下分裂，其中例如三氟乙酸或盐酸在诸如二氯甲烷、1,4-二噁烷、异丙醇或乙酸乙酯的溶剂中。可通过使用氢在存在诸如钯/碳的过渡金属的情况下移除苯甲基基团。携带诸如芳环上的甲氧基的电子供予基团的苯甲基基团亦可在氧化条件(例如运用硝酸铈铵(CAN)或2,3-二氯-5,6-二氰基醌(DDQ))或酸性条件(例如运用三氟乙酸或盐酸)下移除。
方案2：
方案2：式(II)的酸取决于R5的性质通过水解或氢解由对应的酯(IV)制备，在式(II)中，A、T、R1及R2具有如上文所定义的含义。诸如乙基或甲酯的低碳烷基酯通过与水与合适可互溶的溶剂(例如四氢呋喃、甲醇、醇、1,4-二噁烷等或其混合物)的混合物中的诸如NaOH、LiOH或KOH的氢氧化物碱水解而优选地分裂，其中视需要加热。该酸可分离为具有金属阳离子的盐或分离为游离酸。叔丁酯通过运用合适溶剂(例如二氯甲烷、1,4-二噁烷、甲醇、醇、四氢呋喃、水或其混合物)中的酸(例如盐酸或三氟乙酸)来处理而分裂。苯甲基酯通过在氢氛围下(优选地1至5巴)与合适溶剂(例如醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯等)中的合适催化剂(例如钯/碳等)氢解而优选地分裂。
方案3
X＝R2、F、Cl、Br；R5＝C1-4烷基或苯甲基
方案3：化合物(II)中的一些可通过乙醇(V)与酯(VI)的反应使用光延反应的条件(例如，诸如四氢呋喃、1,4-二噁烷、甲苯等的溶剂中的三苯膦或三-正丁基膦加偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)或偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)等)来制备；方案3中的A、T、R1及R2具有如上文所定义的含义。乙醇(V)可在杂芳环或离去基团上携带所要残基R2而非以后引入R2。
方案4
X＝R2、F、Cl、Br；R5＝C1-4烷基或苯甲基；
Hal＝Cl、Br、I、OSO2CH3
方案4：化合物(II)中的一些亦可通过携带杂芳基甲基位置处的诸如Cl、Br或甲磺酰基的离去基团的化合物(VII)与吡唑-4-羧酸酯(VI)在存在合适溶剂(例如四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺等)中的合适碱(例如氢化钠、碳酸铯、碳酸钾等)的情况下进行反应来制备；方案4中的A、T、R1及R2具有如上文所定义的含义。化合物(VII)可在杂芳环或离去基团上携带所要残基R2而非以后引入R2。
方案5
X＝R2、F、Cl、Br；R5＝C1-4烷基或苯甲基；
Hal＝Cl、Br、I、OSO2CH3
方案5：其中A、R1及R2具有上文所定义的含义的式(II”)的一些酯可通过运用N,N-二甲基甲酰胺或另一合适溶剂中的叠氮化钠处理式(VII)的对应的烷基卤化物(溴化物或氯化物)或甲磺酸盐以生成式(VIII)的中间体来制备，该中间体接着在铜介导的催化条件下(例如丙炔酸乙酯或丙炔酸叔丁酯与催化硫酸铜及抗坏血酸钠在水/叔丁醇中)与合适丙炔酸酯反应以生成化合物(II”)。
方案6
X＝R2、F、Cl、Br；R5＝C1-4烷基或苯甲基
方案6：其中A、R1及R2具有上文所定义的含义的式(II”)的一些酯亦可自式(V)的乙醇获得，该乙醇通过在存在合适溶剂(例如四氢呋喃或N,N-二甲基甲酰胺)中的诸如DBU的合适碱的情况下用二苯基磷酰基叠氮化物处理而转化成对应的叠氮化合物(VIII)。化合物(VIII)接着可如方案5中所描述而进一步反应以生成化合物(II”)。
方案7
X＝F、Cl、Br、I，
Y＝CO2R5、CHO、CH2OH，
R5＝C1-4烷基或苯甲基
方案7：式(X)的中间体可经由杂芳环上的亲核取代反应或过渡金属催化偶合反应由杂芳香族化合物(IX)及胺(XI)来制备；方案7中的A、T、R1及R2具有上文所定义的含义。(IX)中的杂芳环与化合物(XI)中的N的亲核取代可在存在合适溶剂(例如四氢呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲酰胺等)中的合适碱(例如氢化钠、碳酸铯、碳酸钾、N,N-二异丙基-乙胺等)的情况下进行。过渡金属催化偶合反应类似于有机化学物质的文献中所报告的操作参考Ullmann或Buchwald/Hartwig偶合反应使用合适钯或铜盐或复合物、配体、碱及溶剂而加以优选地实行。
方案8
方案8：式(III')的对映纯胺可如下制备(方案8中的R3具有上文所定义的含义)：式(XII)的酮可在有机化学物质的文献(例如在J.Am.Chem.Soc.1995,117(28)，第7562-7563页中)中所报告的条件下对映选择性地还原以生成式(XIII)的对映纯或对映体富集乙醇。乙醇接着可与光延反应中的邻苯二甲酰亚胺反应，其中合适溶剂(例如四氢呋喃、1,4-二噁烷、甲苯等)中的合适试剂(例如三苯膦或三-正丁基膦加偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)或偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD)等)导致立体中心及式(XIV)的中间体的组态的倒置。氨基可通过用合适溶剂(例如醇、甲醇、四氢呋喃、水等或其混合物)中的例如肼或乙醇胺处理且视需要加热而自邻苯二甲酰亚氨基释放以生成式(III')的中间体。
方案9
NL2＝NH2或受保护或掩蔽的NH2，诸如NH-Bn或NH-DMB(DMB＝2,4-二甲氧基苯甲基)
方案9：NH2基团或其在化合物(III)的吡啶环上的受保护或掩蔽具体化可通过与诸如氨、苯甲胺或2,4-二甲氧基苯甲基胺的胺在存在溴参吡咯烷鏻六氟磷酸盐(PyBroP)及合适溶剂(例如二氯甲烷)中的碱(例如N,N-二异丙基-乙胺)的情况下进行反应而自N-氧化物(XVI)引入；方案9中的R3具有上文所定义的含义。N-氧化物(XVI)又可在常规操作之后自具有惰性溶剂(例如二氯甲烷)中的合适氧化剂(例如3-氯过苯甲酸、过硫酸氢钾、过氧化氢等)的化合物(XV)获得。
方案10
方案10：化合物(XV')可以由4个反应步骤组成的序列自经报告化合物(XVI)获得；方案10中的R3具有上文所定义的含义。化合物(XVI)可通过将乙炔金属添加至(XVI)中的醛基而转化成化合物(XVII)。乙炔基锂或卤化镁(氯化物、溴化物或碘)在低温(-78℃至20℃)优选地用作惰性溶剂(例如四氢呋喃、乙醚等)中的乙炔化物亲核试剂。化合物(XVII)接着可在存在合适溶剂(例如在60至140℃高温下的甲苯)中的过渡金属催化剂(例如环戊二烯基钴二羰基)的情况下与例如乙腈的腈反应以生成化合物(XVIII)。化合物(XVIII)可在环境温度下或在酸性条件(例如在高温下的1,4-二噁烷中的盐酸)下例如运用合适溶剂(例如四氢呋喃)中的氟源(例如四-正丁基氟化铵)经脱硅烷基化。化合物(XV')接着可通过使用方案8中所描述的操作来制备。
式(I)化合物可解析为如下所提及的其对映异构体及/或非对映异构体。因此，举例而言，顺式/反式混合物可解析为其顺式及反式异构体，且外消旋化合物可拆分为其对映异构物。
顺式/反式混合物可例如通过色谱解析为其顺式及反式异构体。可通过自身已知的方法将以外消旋体出现的式(I)化合物分离成其光学对映体，且可通过利用其不同的物理化学属性使用自身已知的方法(例如色谱及/或分步结晶法)将通式I的化合物的非对映异构性混合物解析为其非对映异构体；若其后获得的化合物为外消旋体，则其可解析为如下文所提及的对映异构体。
优选通过手性相管柱色谱法，或通过自光活性溶剂结晶，或通过与光活性物质(其与外消旋化合物形成盐或诸如酯或酰胺的衍生物)反应，解析外消旋体。盐可由用于碱性化合物的对映异构性纯酸及用于酸性化合物的对映异构性纯碱形成。由对映异构性纯辅助化合物(例如，酸、其活化衍生物或醇)形成非对映异构性衍生物。可通过利用其不同物理化学属性(例如溶解度的差异)来实现由此获得的盐或衍生物的非对映异构性混合物的分离；可通过合适试剂的作用自纯非对映异构性盐或衍生物释放游离对映体。常用于此目的的光学活性酸以及适用作辅助残基的光学活性醇对于本领域技术人员系已知的。
如上文所提及，式(I)化合物可转化成盐，尤其对于医药用途转化成药学上可接受的盐。如本文中所使用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中原构化合物通过制备其酸盐或碱盐而改质。
根据本发明的化合物亦宜使用描述于以下实施例中的方法获得，该等方法亦可出于此目的与本领域技术人员自文献中已知的方法组合。
药理活性
可利用以下分析表明本发明化合物的活性：
生物方法
式(I)化合物抑制血浆激肽释放酶(KLKB1)、因子XIIa(FXIIa)、因子XIa(FXIa)、因子Xa(FXa)、因子IIa(α-凝血酶；FIIa)、胞浆素、胰蛋白酶、组织激肽释放酶1(KLK1)、因子VIIa(FVIIa)或与组织因子复合的FVIIa、磷脂及CaCl2(FVIIa/TF/PL/CaCl2)的能力使用分析缓冲液(100mM Tris、150mM NaCL，运用HCl经调整至pH7.8，且含有0.1％(w/v)BSA及0.05％(v/v)Tween20)中的以下生物化学分析在存在1％(v/v)DMSO的情况下加以测定：
使用终点分析评估KLKB1的抑制
人类KLKB1(0.01U/mL；酶研究实验室)或大鼠KLKB1(0.625nM；自产)在室温下培育达1h，其中分析缓冲液中有0.10μM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)及各种浓度的测试化合物。随后，PPACK II(Calbiochem)经添加作为停止溶液以达成1μM的最终浓度，且荧光使用波长激发设定为355nm且波长发射设定为460nm的Envision Reader(珀金埃尔默(PerkinElmer))来测量。
根据本发明的化合物的IC50值在下表中展示。化合物的编号对应于实验部分中的实施例的编号。
对人类KLKB1在经硫酸葡聚糖活化的人类PPP中的抑制的评估
自人类全血获得的运用EDTA抗凝的贫血小板血浆(PPP)运用12.5μg/mL硫酸葡聚糖在冰上经活化达7分钟。经活化PPP与分析缓冲液中的各种浓度的测试化合物一起培育。随后，混合物在24℃下与0.25mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)一起培育，且使用波长激发设定为350nm且波长发射设定为450nm的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
根据本发明的化合物的IC50值在下表中展示。化合物的编号对应于实验部分中的实施例的编号。
对KLKB1在经高岭土活化人类PPP中的抑制的评估
自人类全血获得的运用Na-Citrat抗凝的贫血小板血浆(PPP)与各种浓度的测试化合物以及分析缓冲液中的25、75、250或750μg/mL高岭土一起在37℃下培育达20分钟，使得对于每一所使用高岭土剂量，获得用于测试化合物的浓度效应。随后，0.25mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)经添加至混合物且使用以下波长激发设定为350nm且波长发射设定为450nm的Spectramax M5(分子装置)在12分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。pIC50及pIC90值自与GraphPad prism 7.0拟合的4x/y-标绘图(x＝log M,化合物；y＝Δrfu/min)获得(Equation：log(激动剂)相对于效应--Find ECanything；针对测试化合物获得的四个浓度效应曲线使用产生共享pIC50或pIC90值的全局拟合操作拟合，每一浓度效应曲线使用不同高岭土剂量获得)。
根据本发明的化合物的IC50及IC90值在下表中展示。化合物的编号对应于实验部分中的实施例的编号。
实施例 IC<sub>50</sub>(nM) IC<sub>90</sub>(nM)
1 19 199
2 16.6 133.8
3 20.1 237.7
4 18 445.7
7 17.9 199.1
9 14 89.5
10 16.2 96.2
11 23.9 232.5
17 52.2 511.1
对KLKB1的抑制(Ki)的评估
人类KLKB1(1.78nM或0.025U/mL；酶研究实验室)在24℃下与分析缓冲液中的0.25mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用以下波长激发设定为350nm且波长发射设定为450nm的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
根据本发明的化合物的Ki值在下表中展示。化合物的编号对应于实验部分中的实施例的编号。
对FXIIa的抑制(Ki)的评估
人类FXIIa(47.5nM或1.1U/mL；酶研究实验室)在24℃下与分析缓冲液中的0.5mM显色底物S2302(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用在405nm下测量光学吸收率的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
对FXIa的抑制(Ki)的评估
人类FXIa(0.5nM或0.016U/mL；酶研究实验室)在24℃下与分析缓冲液中的0.25mM荧光底物Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC·HCl(来自Bachem的I1575)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用以下波长激发设定为350nm且波长发射设定为450nm的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
对FXa的抑制(Ki)的评估
人类FXa(0.86nM或0.01U/mL；酶研究实验室)在24℃下与分析缓冲液中的0.5mM显色底物S2765(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用在405nm下测量光学吸收率的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
对FIIa的抑制(Ki)的评估
人类FIIa(44.6nM或5U/mL；酶研究实验室)在24℃下与分析缓冲液的0.5mM显色底物S2238(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用在405nm下测量光学吸收率的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
对胞浆素的抑制(Ki)的评估
人类胞浆素(64.1nM或0.0275U/mL；酶研究实验室)在24℃下与分析缓冲液中的0.3mM显色底物S2251(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用在405nm下测量光学吸收率的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
对胰蛋白酶的抑制(Ki)的评估
人类胰蛋白酶(4.54nM或250U/mL；Calbiochem)在24℃下与分析缓冲液中的0.5mM显色底物S2222(Chromogenix)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用在405nm下测量光学吸收率的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
对KLK1的抑制(Ki)的评估
在分析之前，人类KLK1(研发系统)通过与人类胰蛋白酶(Calbiochem)以1:10,000比率在37℃下一起培育15分钟而经活化。对于分析KLK1抑制活性，经活化KLK1(31.25nM或1U/mL)在24℃下与分析缓冲液中的0.1mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用以下波长激发设定为350nm且波长发射设定为450nm的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
对FVIIa的抑制(Ki)的评估
人类FVIIa(0.86nM或0.01U/mL；酶研究实验室)在24℃下与分析缓冲液中的1.5mM显色FVIIa(Loxo)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用在405nm下测量光学吸收率的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
对FVIIa/TF/PL/CaCl2的抑制(Ki)的评估
人类FVIIa(300nM或585U/mL；酶研究实验室)连同10mM CaCl2*2H2O及13.3％(v/v)(西门子；OQUMI94E0002(5534)，其含有重组的人类组织因子合成磷脂(凝血活酶))在24℃下与分析缓冲液中的1.5mM显色FVIIa(Loxo)及各种浓度的测试化合物一起培育。使用在405nm下测量光学吸收率的Spectramax M5(分子装置)在16分钟内以动力学间隔每2分钟执行测量。
pIC50及pKi值的计算
在开始分析之后的用于自2至12分钟的时间间隔的平均值Vmax(分别表达为用于使用显色底物的分析的δOD/min或用于使用荧光生成底物的分析的δRFU/min)相对于经评估抑制剂化合物的摩尔浓度的对数加以标绘。pIC50值接着使用四个参数拟合操作使用GraphPad Prism(版本6；格拉夫帕德软件公司)加以拟合。各别Ki值通过使用下式针对所使用底物的各别KM值(参见用于所使用底物的经获得KM值的表A)校正IC50值而获得：
其中IC50以摩尔浓度为单位且KM值以mM为单位。
表A：针对用于酶分析中的底物获得的KM值
渗透性的评估
将Caco-2细胞(1-2×105细胞/1cm2面积)接种在内置性过滤器(Costar transwell聚碳酸酯或PET过滤器，0.4μm孔径)上，且经培养(DMEM)达10至25天。
化合物溶解于合适溶剂(如DMSO，1至20mM储备溶液)中。用HTP-4缓冲液(128.13mMNaCl、5.36mM KCl、1mM MgSO4、1.8mM CaCl2、4.17mM NaHCO3、1.19mM Na2HPO4×7H2O、0.41mMNaH2PO4×H2O、15mM HEPES、20mM葡萄糖，pH值7.2)稀释储备溶液以制备转运溶液(0.1至300μM化合物，最终DMSO<＝0.5％)。将转运溶液(transport solution；TL)施用至顶部或底外侧供体侧面以用于分别测量A-B或B-A渗透率(重复3次过滤器)。接收器侧面含有补充有2％BSA的HTP-4缓冲液。在实验开始及最后及在各个时间间隔处(至多2小时)自供体亦自接收器侧面收集样品，以通过HPLC-MS/MS或闪烁计数来进行浓度测量。用新鲜接收器溶液替换取样后的接收器容积。
对人类或大鼠肝微粒体中的代谢稳定性的评估
在37℃下针对合并的人类或大鼠肝微粒体分析测试化合物的代谢降解。每个时间点的100μL最终培育体积中于室温下含有TRIS缓冲液pH 7.6(0.1M)、氯化镁(5mM)、微粒体蛋白(1mg/ml)及最终浓度为1μM的测试化合物。
在37℃下短暂预培育一定时间段之后，通过添加还原形式的β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，1mM)来引发反应，且通过在不同时间点之后将等分试样转移至溶剂中来终止反应。另外，在无NADPH存在的情况下培育时，监测不依赖于NADPH的降解，且直到最后时间点终止。通过离心(10000g，5分钟)来使经淬灭的培育液聚集。通过LC-MS/MS分析清液层的等分试样中的原构化合物量。通过浓度-时间特征曲线的半对数标绘图的斜率来测定半衰期(t1/2活体外)。
对人类或大鼠肝细胞中的代谢稳定性的评估
在肝细胞悬浮液中分析测试化合物的代谢降解。肝细胞(通常低温保藏)在含有5％物种血清的适当缓冲液系统(例如DMEM(Dulbecco′s modified eagle medium)培养基加3.5μg升糖素/500mL，2.5mg胰岛素/500mL及3.75mg/500mL氢皮质酮)中培育。
在培育箱(37℃，10％CO2)中预培育(通常)30分钟之后，向395μl肝细胞悬浮液中添加5μl测试化合物溶液(80μM；自DMSO中2mM储备溶液用介质以1:25稀释)(细胞密度在0.25至5Mio细胞/mL范围内，通常1Mio细胞/mL；测试化合物最终浓度1μM，DMSO最终浓度0.05％)。
培育细胞六小时(培育箱，回旋震荡器)，且在0、0.5、1、2、4及6小时时取出样品(25μl)。将样品转移至乙腈中，且通过离心(5分钟)聚集。将清液层转移至新的96处深孔板，在氮气下蒸发且再悬浮。
原构化合物的衰退系以HPLC-MS/MS分析，CLint如下计算：CL_INTRINSIC＝剂量/AUC＝(C0/CD)/(AUD+clast/k)×1000/60.C0：培育中的初始浓度[μM]，CD：活细胞的细胞密度[10e6cells/mL]，AUD：数据区域[μM×h]，clast：最后一个数据点的浓度[μM]，k：针对原构化合物衰退的回归线的斜率[h-1]。
对血浆蛋白结合的评估
此平衡透析(ED)技术系用于测定测试化合物至血浆蛋白质的近似试管内部分结合。使用Dianorm Teflon透析细胞(0.2微米)。每一细胞由供体室及受体室组成，该供体室及受体室系由具有5kDa分子量截止值的超薄半透膜隔开。用于每一测试化合物的储备溶液在DMSO中以1mM制备且经稀释至1.0μM的最终浓度。后续透析溶液系以来自雄性及雌性供体的经合并人类或大鼠血浆(具有NaEDTA)制备。200μL透析缓冲液(100毫米磷酸钾，pH 7.4)的等分试样经施配至缓冲室中。200μL测试化合物透析溶液的等分试样经施配至血浆室中。在37℃下旋转地实行培育达2小时。
在透析周期结束时，渗透液经转移至反应管中。用于缓冲液部分的管含有0.2mL乙腈/水(80/20)。25μL的血浆渗透液的等分试样经转移至深孔板中且与25μl乙腈/水(80/20)、25μl缓冲液、25μL校准溶液及25μl内标溶液混合。通过添加200μl乙腈进行蛋白沉淀。
50μl的缓冲液渗透液的等分试样经转移至深孔板中，且与25μl空白血浆、25μl内标溶液及200μl乙腈混合。
样品在HPLC-MS/MS-系统上测量，且以分析-软件加以评估。
百分比结合运用以下公式来计算：％结合＝(血浆浓度-缓冲液浓度/血浆浓度)×100
对可溶性的评估
通过将溶解于缓冲液中的量与溶解于乙腈/水(1/1)溶液中的量作比较来测定测试化合物的水溶解度。自10mM DMSO储备溶液开始，等分试样分别用乙腈/水(1/1)或缓冲液稀释。在振荡24小时之后，将溶液过滤且通过LC-UV分析。将溶解于缓冲液中的量与溶解于乙腈溶液中的量相比。
通常在DMSO浓度为2.5％时测量的溶解度为0.001mg/mL至0.125mg/mL。若超过90％的化合物溶解于缓冲剂中，则该值由“>”标记。
对药物动力学特性在啮齿动物中的评估
测试化合物经静脉内给予经喂养大鼠或以口服方式给予经禁食的大鼠。在施用测试化合物后在若干时间点获取血液样本，抗凝且离心。
定量血浆样本中的分析物(经给予化合物及/或代谢物)的浓度。
PK参数使用非隔室方法加以计算。AUC及Cmax经正规化成1μmol/kg的剂量。
治疗方法
在本发明的另一方面中，发现式(I)化合物或其药学上可接受的盐可适用于治疗由哺乳动物中的非所需血浆激肽释放酶活性介导的疾病或症状。
由非所需血浆激肽释放酶活性介导的疾病及症状包含糖尿病并发症、糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、临床上重要黄斑水肿(CSME)、囊样黄斑部水肿(CME)、白内障摘除后的CME、由超低温疗法诱发的CME、由葡萄膜炎诱发的CME、内眼炎、血管栓塞(例如视网膜中央静脉栓塞、视网膜分支静脉栓塞或半视网膜静脉栓塞)后的CME、视网膜水肿、与糖尿病性视网膜病的白内障手术相关的并发症、高血压视网膜病、视网膜创伤、干性及湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、遗传血管性水肿及急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。
因此，本发明化合物及药物组合物尤其适于治疗包括以下各者的眼部疾病：糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、视网膜静脉栓塞、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)以及遗传血管性水肿。
详言之，根据本发明的化合物及药物组合物适于治疗糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)以及息肉状脉络膜血管病变(PCV)。
根据本发明的化合物最尤其适于治疗糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病及糖尿病黄斑水肿(DME)。
另外，根据本发明的化合物及药物组合物适合用于以下治疗操作中的一或多者：水肿治疗，尤其是遗传血管性水肿的治疗。
每天适用的式(I)化合物的剂量范围通常自0.01至10mg/kg体重。实际治疗有效量或治疗剂量当然应视本领域技术人员已知的因素，诸如患者的年龄及重量、给予途径及疾病的严重度而定。在任何状况下，化合物或组合物应根据患者的独特症状以能达成治疗有效量的剂量及方式给予。
根据本发明的化合物、组合物(包括与一或多种另外的治疗剂的任何组合)可通过经口、经玻璃体内、经皮、吸入、非经肠或舌下途径给予。可能的给予方法中，经口或玻璃体内给予系优选的。在玻璃体内注射的状况下，优选剂量每一眼睛不应超过5mg。
因此，在另一方面中，本发明提供新的式(I)化合物，包括其药学上可接受的盐，其可抑制血浆激肽释放酶且拥有合适药理学及药物动力学属性，以用于治疗，亦即用作药剂。
在另一方面中，本发明提供新的式(I)化合物，包括其药学上可接受的盐，以用于一种用于治疗可以有益的方式受到血浆激肽释放酶的抑制影响的疾病或症状的方法中。
在另一方面中，本发明提供新的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，以用于治疗诸如以下各者的眼科病症：糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)及息肉状脉络膜血管病变(PCV)。
在另一方面中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐的用途，以制造用于治疗血浆激肽释放酶的抑制系有益的疾病或症状的药剂。
在另一方面中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐的用途，以制造用于治疗诸如以下眼科病症的药剂：糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)及息肉状脉络膜血管病变(PCV)。
因此，本发明涉及作为药剂的式(I)化合物。
此外，本发明涉及式(I)化合物在一种用于治疗患者优选地为人类的由非所需血浆激肽释放酶活性介导的疾病或症状的方法中的用途。
此外，本发明涉及式(I)化合物在一种用于治疗诸如以下各者的眼科病症的方法中的用途：糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)及息肉状脉络膜血管病变(PCV)。
在又一方面中，本发明涉及一种用于治疗哺乳动物中通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病或症状的方法，该方法包含将本发明的治疗有效量的化合物或药物组合物给予需要此类治疗的患者(优选地为人类)的步骤。
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗可以有益方式受受试者中的血浆激肽释放酶的抑制影响的疾病或症状的方法，该方法包含将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐给予有需要的患者。
在另一方面中，本发明提供一种用于治疗患者的诸如以下各者的眼科病症的方法：糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)及息肉状脉络膜血管病变(PCV)，该方法包含将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐给予有需要的患者。
根据本发明的另一方面，提供一种用于治疗有需要的患者的糖尿病并发症，尤其是与糖尿病性视网膜病及糖尿病性黄斑水肿相关联的视网膜血管渗透性的方法，其特征在于将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐给予患者。
药物组合物
在本发明的另一方面中，描述了本发明化合物或其药学上可接受的盐可用作药物组合物中的活性成分。
对于一般本领域技术人员而言，用于给予本发明化合物的合适的制剂(任选与一或多种其他治疗剂组合)是明显的，且包括(例如)片剂、丸剂、胶囊、栓剂、口含锭、糖衣锭、溶液、糖浆剂、酏剂、药囊、可注射剂、吸入剂及粉剂等。具体而言，诸如片剂或胶囊的固态形式的口服调配物为优选的。对于玻璃体内注射，溶液为优选的。药物活性化合物的含量系有利地介于整个组合物的0.1至90重量％例如自1至70重量％的范围内。
可例如通过将根据式(I)的一或多种化合物与已知赋形剂(例如惰性稀释剂、载剂、崩解剂、佐剂、表面活性剂、粘合剂及/或润滑剂)混合来获得合适的片剂。片剂亦可由若干层组成。本领域技术人员基于其专业知识将熟悉适用于所需制剂的具体赋形剂、载剂及/或稀释剂。优选者为适用于所期望的具体调配物及给予方法的那些。根据本发明的制剂或调配物可使用本领域技术人员熟悉的本身已知的方法来制备，诸如通过混合或组合至少一种根据本发明的式(I)化合物或此化合物的药学上可接受的盐与一或多种赋形剂、载剂及/或稀释剂。
因此，根据本发明的另一方面，提供药物组合物，其包含一或多种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
又，提供药物组合物，其包含上文所提及的化合物或其药学上可接受的盐，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂中的一或多者，以上各者用于一种用于治疗可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病或症状的方法中。
详言之，本发明提供用于治疗诸如以下各者的眼科病症的方法中的根据本发明的药物组合物：糖尿病性视网膜病、增生性及非增生性视网膜病、糖尿病黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)及息肉状脉络膜血管病变(PCV)。
此外，本发明涉及用于治疗患者优选地为人类的由非所需血浆激肽释放酶活性介导的疾病或症状的根据本发明的药物组合物的用途。
又，本发明涉及用于治疗患者(优选地为人类)的可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病或症状的根据本发明的药物组合物的用途。
根据另一实施方案，提供一种药物组合物，其包含一或多种式(I)化合物或其药学上可接受的盐及一或多种另外的治疗剂，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。优选地，此组合物包含一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐及一或多种另外的治疗剂。
组合疗法
本发明化合物可进一步与一或多种、优选一种另外的治疗剂组合。根据一个实施方案，另外的治疗剂选自适用于治疗上文所描述的尤其与代谢疾病或症状相关联的疾病或症状的治疗剂或适用于治疗眼部疾病的治疗剂的群，该等疾病或症状例如糖尿病、肥胖症、糖尿病并发症、高血压、高脂质血症。适于这些组合的另外的治疗剂尤其包括例如强化关于提及的病症中之一者的一或多种活性物质治疗效果及/或使一或多种活性物质的剂量减少的那些。
因此，本发明化合物可与选自由以下组成的组的一或多种另外的治疗剂组合：抗糖尿病剂、用于治疗超重及/或肥胖症的药剂、用于治疗高血压、心脏衰竭及/或动脉粥样硬化的药剂及用于治疗眼部疾病的药剂。
举例而言，抗糖尿病剂为二甲双胍、磺酰基脲、那格列奈、瑞格列奈、噻唑啶二酮、PPAR-(α、γ或α/γ)激动剂或调节剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、DPPIV抑制剂、SGLT2-抑制剂、胰岛素及胰岛素类似物、GLP-1及GLP-1类似物或淀粉素及淀粉素类似物、赛克洛瑟(cycloset)、11β-HSD抑制剂。其他合适的组合搭配物为蛋白酪氨酸磷酸酶1、在肝脏中影响失调葡萄糖产生的物质的抑制剂，诸如，葡萄糖-6-磷酸酶或果糖-1,6-二磷酸酶、肝糖磷酸化酶、升糖素受体拮抗剂的抑制剂，及磷酸烯醇丙酮酸根羧激酶、肝糖合成酶激酶或丙酮酸根脱氢酶、α2-拮抗剂、CCR-2拮抗剂或葡萄糖激酶活化剂的抑制剂。一或多种脂质降低剂亦适合作为组合搭配物，诸如HMG-CoA-还原酶抑制剂、纤维酸酯、烟碱酸及其衍生物、PPAR-(α、γ或α/γ)激动剂或调节剂、PPAR-δ激动剂、ACAT抑制剂或胆固醇吸收抑制剂(诸如胆酸结合物质，诸如回肠胆酸运输抑制剂)、MTP抑制剂或HDL升高化合物(诸如CETP抑制剂或ABC1调节剂)。
举例而言，用于治疗超重及/或肥胖症的治疗剂为大麻素受体1拮抗剂、MCH-1受体拮抗剂、MC4受体激动剂、NPY5或NPY2拮抗剂、β3-激动剂、瘦素或瘦素模拟物、5HT2c受体激动剂。
举例而言，用于治疗高血压、慢性心脏衰竭及/或动脉粥样硬化的治疗剂为A-II拮抗剂或ACE抑制剂、ECE抑制剂、利尿剂、β-阻断剂、Ca-拮抗剂、中枢性抗高血压剂、α-2-肾上腺素激导性受体拮抗剂、中性内肽酶抑制剂、凝血细胞集合抑制剂及其他或其组合系合适的。血管紧张素II受体拮抗剂优选地用于治疗或预防高血压及糖尿病并发症，常与诸如氢氯噻嗪的利尿剂组合。
举例而言，用于治疗眼部疾病的治疗剂可包括经玻璃体内给予的皮质类固醇、经玻璃体内给予的抗VEGF治疗、抗Ang2抑制剂、双重抗VEGF/抗Ang2抑制剂、抗PDGF、双抗VEGF/抗PDGF、VAP-1(AOC3)抑制剂、补充抑制剂(例如补充因子3、5、B及D抑制剂)、缓激肽受体1拮抗剂、CCR-2拮抗剂。
用于眼部疾病的另外的治疗可包括激光凝固治疗。
上文所提及的组合搭配物的剂量通常为正常建议最低剂量的1/5至达到正常建议剂量的1/1。
优选地，结合锻炼及/或饮食来给予本发明化合物及/或包含任选与一或多种另外的治疗剂组合的本发明化合物的药物组合物。
因此，在另一方面中，本发明涉及与一或多种上下文所描述的另外的治疗剂组合的根据本发明的化合物的用途，其用于治疗可受非所需血浆激肽释放酶活性影响或介导的疾病或症状、尤其如上下文所描述的疾病或症状。
在另一方面中，本发明涉及一种用于治疗病患中可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病或症状的方法，该方法包含将治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐结合治疗有效量的一或多种另外的治疗剂给予需要此类治疗的患者的步骤。
在另一方面中，本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐结合一或多种另外的治疗剂的用途，其用于治疗有需要的患者中可通过抑制血浆激肽释放酶受影响的疾病或症状。
在又一方面中，本发明涉及一种用于治疗患者中由非所需血浆激肽释放酶活性介导的疾病或症状的方法，该方法包括将本发明的治疗有效量的化合物结合上下文中所描述的治疗有效量的一或多种另外的治疗剂给予需要此类治疗的患者(优选地为人类)的步骤。
与另外的治疗剂组合的根据本发明的化合物的使用可同时进行或以错开的时间进行。
根据本发明的化合物及一或多种另外的治疗剂二者可在一种调配物(例如片剂或胶囊)中一起出现，或分别在两种相同或不同的调配物中出现(例如作为所谓的分装部分的试剂盒)。
因此，在另一方面中，本发明涉及一种药物组合物，其包含根据本发明的化合物及一或多种于上下文所描述的另外的治疗剂，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
本发明的其他特征及优点将自以下更详细实施例而变得明显，该等实施例以举例方式说明本发明的原理。
实施例及实验数据
以下实施例仅出于说明本发明的目的且并不意欲以任何方式限制本发明的范畴。
缩写：
Ac 乙酰基
ACN 乙腈
APCI 大气压化学电离
Boc 叔丁氧基羰基
CDI 1,1'-羰基二咪唑
d 天
dba 二亚苄基丙酮
DCM 二氯甲烷
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
dppf 1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
ESI 电喷雾电离(以MS为单位)
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 醇
Ex. 实施例
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓-六氟磷酸盐
HPLC 高效液相色谱法
HPLC-MS 耦合高效液相色谱法-质谱分析
LC 液相色谱法
LC-MS 耦合液相色谱质谱法
M 摩尔(mol/L)
MeOH 甲醇
min 分钟
MS 质谱分析法
NMP 1-甲基-2-吡咯烷酮
PyBop (苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷鏻六氟磷酸盐
PyBrop 溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐
RP 反相
rt 室温
tR 保留时间(以HPLC/LC为单位)
SFC 超临界流体色谱法
TBTU O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
UPLC-MS 超高效液相色谱法-质谱分析法
一般技术说明
术语“环境温度”及“室温”可互换地使用且指代约20℃的温度，例如15至25℃。
通常，已获得用于所制备化合物的1H-NMR及/或质谱。
除非另外规定，否则含有手性中心的化合物具有所描绘的立体化学。立体化学的指派已通过使用已知立体化学的手性起始材料、通过已知立体化学的立体选择性合成或通过生物活动进行。
A)分析方法
UPLC-MS及HPLC-MS方法：
方法1
仪器：LC/MS Waters Acquity UPLC系统DAD，SQD单一四极
柱：BEH C18 1.7μm 2.1×50mm，温度35℃
流动相：A＝H2O 90％+CH3CN 10％+NH4COOH 5mM
B＝CH3CN 90％+H2O 10％
检测：UV 254nm
检测：SQD，单一四极
离子源：ESI+/ESI-
扫描范围：90-900amu
方法2
仪器：LC/MS ThermoFinnigan HPLC测量仪DAD，MSQ单一四极
柱：Synergi Hydro RP100A，2.5μm，3×50mm
流动相：A＝H2O 90％+10％CH3CN+NH4COOH 10mM
B＝CH3CN 90％+H2O 10％+NH4COOH 10mM
检测：UV 254nm
检测：Finnigan MSQ，单一四极
离子源：APCI+/APCI-
扫描范围：100-900amu
方法3
仪器：LC/MS Waters Acquity UPLC系统DAD，SQD单一四极
柱：BEH C18 1.7μm 2.1×50mm，温度35℃
流动相：A＝H2O 90％+CH3CN 10％+NH4HCO3 5mM
B＝CH3CN 90％+H2O 10％
检测：UV 254nm
检测：SQD，单一四极
离子源：ESI+/ESI-
扫描范围：90-900amu
方法4
仪器：LC/MS Waters Alliance 2695 HPLC系统DAD，Quattro Micro三重四极
柱：Atlantis dC18 5μm 4.6×50mm，温度35℃
流动相：A＝H2O 90％+10％CH3CN+CF3COOH 0.05％
B＝CH3CN 90％+10％H2O
检测：UV 254nm
检测：Quattro Micro，三重四极
离子源：ESI+
扫描范围：90-1000amu
方法5
仪器：LC/MS Waters Alliance 2695 HPLC系统DAD，Quattro Micro三重四极
柱：Zorbax Eclipse XDB-C18 3.5μm 4.6×50mm，温度35℃
流动相：A＝H2O 90％+10％CH3CN+NH4COOH 5mM
B＝CH3CN 90％+10％H2O
检测：UV 254nm
检测：Quattro Micro，三重四极
离子源：ESI+/ESI-
扫描范围：90-1000amu
方法6
仪器：LC/MS Waters Alliance 2695 HPLC系统DAD，Quattro Micro三重四极
柱：XBridge BEH 300 C18 3.5μm 4.6×100mm，温度40℃
流动相：A＝H2O 90％+10％CH3CN+NH4COOH 5mM
B＝CH3CN 90％+10％H2O
检测：UV 254nm
检测：Quattro Micro，三重四极
离子源：ESI+/ESI-
扫描范围：90-1000amu
GC-MS方法：
方法G1
仪器：GC/MS Thermo Scientific TRACE GC ULTRA，DSQ II MS单一四极
柱：安捷伦DB-5MS，25m×0.25mm×0.25μm
载气：氦气，1mL/min恒定流量
烘烤计划：50℃，以10℃/min至100℃，以20℃/min至200℃，以30℃/min至320℃(保持10分钟)。
检测：DSQ II MS单一四极
离子源：EI
扫描范围：50-450amu
微波加热：
CEM仪器，配备有10mL及35mL容器
NMR设备：
在使用氘化二甲基甲酰胺(DMSO-d6)作为具有四甲基硅烷(TMS)的溶剂或使用剩余溶剂峰作为内标的情况下，1H NMR光谱经记录在Bruker Avance III(500MHz)或Varian400(400MHz)仪器上。相对于TMS以δ值(ppm)报告化学位移。
B)中间体的合成
中间体1
[6-(3-氮杂-双环[3.1.0]己-3-基)-2-甲基-吡啶-3-基]-甲醇
2-氟-5-(羟基甲基)-6-甲基吡啶(1.0g)、3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(1.27g)及碳酸钾(3.43g)在微波小瓶中悬浮于NMP(10mL)中且在微波辐射下在135℃下加热4小时(以大约20℃的步进将温度自80℃升高至135℃以避免过热)。冷却混合物、用乙酸乙酯(200mL)稀释混合物且用饱和氯化钠水溶液(5×40mL)洗涤混合物。使有机相干燥(Na2SO4)且蒸发有机相，且通过快速色谱纯化残留物(含0-10％甲醇的二氯甲烷)以生成标题化合物。
LC(方法3)：tR＝0.91分钟；质谱(ESI+)：m/z＝205[M+H]+。
中间体2
[6-(5-氮杂-螺[2.4]庚-5-基)-2-甲基-吡啶-3-基]-甲醇
2-氟-5-(羟基甲基)-6-甲基吡啶(0.5g)、5-氮杂-螺[2.4]庚烷盐酸盐(0.71g)及碳酸钾(1.72g)在微波小瓶中悬浮于NMP(1mL)中且在微波辐射下在160℃下加热5小时(以大约20℃步进将温度自80℃升高至160℃以避免过热)。冷却混合物、用二氯甲烷及水稀释混合物且用盐水洗涤混合物。使有机相干燥且蒸发有机相且通过快速色谱纯化残留物(含0-100％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法3)：tR＝0.94分钟；质谱(ESI+)：m/z＝219[M+H]+。
中间体3
[2-(3-氮杂-双环[3.1.0]己-3-基)-4-甲基嘧啶-5-基]甲醇
步骤1：2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-羧酸乙基酯
2-氯-4-甲基嘧啶-5-羧酸乙基酯(1.0g)、3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(657mg)及碳酸钾(2.07g)悬浮于无水NMP(20mL)中且在90℃下搅拌3小时。冷却混合物、用二氯甲烷及水稀释混合物且用盐水洗涤混合物。使有机相干燥(Na2SO4)且蒸发有机相且通过快速色谱纯化残留物(含10％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法3)：tR＝1.28分钟；质谱(ESI+)：m/z＝248[M+H]+。
步骤2：(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-羧酸乙基酯(1.1g)悬浮于无水THF(15mL)中且冷却至0℃。添加含硼氢化锂的THF溶液(2M，3.39mL)且使混合物升温至室温。添加甲醇(270μL)，将混合物加热至60℃且搅拌3小时。添加水(2mL)且蒸发溶剂，用二氯甲烷及水稀释残留物且用盐水洗涤残留物。使有机相干燥(Na2SO4)且通过快速色谱纯化残留物(含50-100％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法3)：tR＝0.74分钟；质谱(ESI+)：m/z＝206[M+H]+。
中间体4
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯
将(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(5.2g)、1H-吡唑-4-羧酸乙基酯(5.35g)、三苯基膦(8.01g)及二异丙基偶氮二羧酸酯(DIAD，6.02mL)组合在无水THF(60mL)中且在室温下搅拌30分钟。溶剂蒸发且通过快速色谱纯化残留物(含0-70％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法4)：tR＝3.26分钟；质谱(ESI+)：m/z＝327[M+H]+。
中间体5
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯
将(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(200mg)、3-(三氟甲基)吡唑-4-羧酸乙基酯(224mg)、三苯基膦(310mg)组合在无水THF(8mL)中且冷却至0℃。逐滴添加二异丙基偶氮二羧酸酯(DIAD，0.23mL)且使混合物升温至室温且搅拌一小时。蒸发溶剂且通过快速色谱纯化残留物(含0-70％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法4)：tR＝3.82分钟；质谱(ESI+)：m/z＝395[M+H]+。
以下中间体类似于中间体5由对应的起始中间体制备：
中间体12
1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯
1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(中间体10，300mg)、6,6-二氟-3-氮杂-双环[3.1.0]己烷盐酸盐(213mg)及碳酸钾(346mg)在微波小瓶中悬浮于无水NMP(5mL)中且在微波辐射下在150℃下加热2小时。冷却混合物，用乙酸乙酯稀释混合物且用水及盐水洗涤混合物。使有机相干燥(Na2SO4)且蒸发有机相且通过快速色谱纯化残留物(含10-60％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.19分钟；质谱(ESI+)：m/z＝363[M+H]+。
以下中间体类似于中间体12由对应的起始中间体制备：
中间体16
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯
步骤1：3-[5-(叠氮基甲基)-6-甲基吡啶-2-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷
(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(中间体1，1.30g)悬浮于无水甲苯(10mL)与乙腈(10mL)的混合物中且在氮气氛围下冷却至0℃。逐滴添加二苯基磷酰基叠氮化物(1.78mL)，之后为DBU(1.36mL)。将混合物升温至室温且搅拌2小时。移除溶剂，使残留物再悬浮于乙酸乙酯中且用饱和碳酸钠水溶液及盐水洗涤残留物。使有机相干燥(Na2SO4)且蒸发有机相且通过快速色谱纯化残留物(含0-80％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
步骤2：1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯
3-[5-叠氮基甲基)-6-甲基吡啶-2-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷(0.60g)及丙炔酸乙酯(0.28g)悬浮于叔丁醇(10mL)与水(10mL)及的混合物中且添加抗坏血酸钠(0.52g)及五水硫酸铜(0.13g)。将混合物在室温下搅拌6小时接着在真空下浓缩。添加水(40mL)且用二氯甲烷萃取混合物。使有机相干燥(Na2SO4)且蒸发有机相且通过快速色谱纯化残留物(含0-100％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法2)：tR＝4.47分钟；质谱(ESI+)：m/z＝328[M+H]+。
中间体17
1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯
步骤1：3-(叠氮基甲基)-6-氟-2-甲基吡啶
(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(0.80g)悬浮于无水甲苯(10mL)与乙腈(10mL)的混合物中且在氮气氛围下冷却至0℃。逐滴添加二苯基磷酰基叠氮化物(1.58mL)，之后为DBU(1.21mL)。将混合物升温至室温且搅拌2小时。移除溶剂且通过快速色谱纯化残留物(含10-100％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
GC(方法G1)：tR＝7.24分钟；质谱(EI+)：m/z＝166[M]+。
步骤2：1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯
3-(叠氮基甲基)-6-氟-2-甲基吡啶(0.66g)及丙炔酸乙酯(0.43g)悬浮于叔丁醇(10mL)与水(10mL)的混合物中且添加抗坏血酸钠(0.79g)及五水硫酸铜(0.20g)。将混合物在室温下搅拌6小时接着在真空下浓缩。添加水(40mL)且用二氯甲烷萃取混合物。使有机相干燥(Na2SO4)且蒸发有机相且通过快速色谱纯化残留物(含0-100％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法4)：tR＝3.28分钟；质谱(ESI+)：m/z＝287[M+H]+。
步骤3：1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯
1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯(90mg)、6,6-二氟-3-氮杂-双环[3.1.0]己烷盐酸盐(64mg)及碳酸钾(104mg)在微波小瓶中悬浮于无水NMP(1mL)中且在微波辐射下在130℃下加热5小时之后为在145℃下加热5小时。冷却混合物、用乙酸乙酯稀释混合物且用水洗涤混合物。使有机相干燥(Na2SO4)且蒸发有机相且通过快速色谱纯化残留物(含0-100％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.24分钟；质谱(ESI+)：m/z＝364[M+H]+。
中间体18
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯(中间体4，7.60g)及单水合氢氧化锂(1.07g)悬浮于1,4-二噁烷(40mL)与水(20ml)的混合物中且在70℃下搅拌1小时。在真空下浓缩混合物、用水(50mL)稀释混合物且用乙醚(2×100mL)洗涤混合物两次。通过逐滴添加浓缩的盐酸水溶液而将水相酸化至大约pH4且接着用二氯甲烷(4×100mL)萃取水相。使经组合的有机萃取物干燥(Na2SO4)且蒸发溶剂以生成标题化合物。
LC(方法5)：tR＝2.44分钟；质谱(ESI+)：m/z＝299[M+H]+。
以下中间体类似于中间体18由对应的起始中间体制备：
中间体23
1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸，锂盐
1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯(中间体12，227mg)及单水合氢氧化锂(16.5mg)悬浮于THF(5ml)、甲醇(5ml)及水(2mL)的混合物中且在50℃下搅拌2小时。蒸发混合物，且使混合物在真空下干燥以生成粗标题化合物。
LC(方法3)：tR＝0.65分钟；质谱(ESI+)：m/z＝335[M-Li+2H]+。
以下中间体类似于中间体23由对应的起始中间体制备：
中间体30
(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺
步骤1：(5S)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-醇
甲酸(49.6mL，1.31mol)溶解于二氯甲烷(900mL)中，将混合物冷却至0℃且在搅拌下逐滴添加三乙胺(161.8mL，1.16mol)。添加5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-酮(可购自ABCRAB 401490，50g)及氯[(1S,2S)-(-)-2-氨基-1,2-二苯基乙基](4-甲基苯磺酰基)酰氨基)(均三甲苯)钌(II)(4.7mg)且使混合物缓慢升温至室温(在5小时内)接着搅拌过夜。用饱和Na2CO3水溶液(200mL)洗涤混合物。用异丙醇/DCM的1:3混合物萃取水相三次。合并有机相、使有机相干燥(Na2SO4)且在真空下浓缩。通过快速色谱纯化残留物(柱装载有DCM，用乙酸乙酯洗脱)以生成标题化合物。
GC(方法G1)：tR＝7.36分钟；质谱(EI+)：m/z＝135[M]+。
手性HPLC(Daicel chiralpak AS-H，己烷/醇85:15，1mL/min，25℃)tR＝5.44分钟，99.9％(对映体过量99.8％)。
通过Noyori等人,J.Am.Chem.Soc.,1995,117(28)，第7562-7563页模拟地指定绝对立体化学。
步骤2：2-[(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮
(5S)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-醇(39.3g)溶解于无水THF(700mL)中且添加邻苯二甲酰亚胺(47.06g)及三苯膦(83.9g)。将溶液冷却至0℃，接着在冰冷却的情况下在2小时内逐滴添加偶氮二羧酸二乙酯(DEAD，甲苯中的40％溶液，145mL)。使混合物升温至室温且搅拌过夜。在真空下移除溶剂且使残留物再溶解于乙酸乙酯中、用水和盐水洗涤残留物、使残留物干燥(Na2SO4)且蒸发溶剂。在真空中自甲苯蒸发残留物两次，接着使其溶解于甲苯(1000mL)中，且添加氯化镁(无水，经精细研磨，100g)。在60℃下搅拌混合物1小时，接着添加庚烷(1000mL)。在60℃下搅拌混合物1小时，接着使其冷却至室温且搅拌过夜。经由硅藻土过滤混合物且用甲苯/庚烷的1:1混合物洗涤滤饼。在真空中蒸发经组合过滤物且用乙酸乙酯处理残留物以生成标题化合物。
LC(方法4)：tR＝2.74分钟；质谱(ESI+)：m/z＝265[M]+。
手性HPLC(Daicel Chiralpak AD-H，己烷/异丙醇70:30，1mL/min，25℃)tR＝10.08分钟，98.6％(对映体过量97.2％)。
蒸发来自研磨步骤的母液且残留物通过快速色谱纯化(含10-40％乙酸乙酯的环己烷)以生成第二批标题化合物。
LC(方法4)：tR＝2.77分钟；质谱(ESI+)：m/z＝265[M]+。
手性HPLC(Daicel Chiralpak AD-H，己烷/异丙醇70:30，1mL/min，25℃)tR＝10.09分钟，92.0％(对映体过量84％)。
步骤3：(5R)-5-(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-2-鎓-2-醇盐
使2-[(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(52.7g)溶解于二氯甲烷(400mL)中，使溶液冷却至0℃，且在冷却的情况下逐滴添加含3-氯过氧苯甲酸(77％，44.7g)的二氯甲烷悬浮液(300mL)。使混合物升温至室温且搅拌过夜。混合物用饱和Na2CO3水溶液洗涤，收集有机层，使其干燥(Na2SO4)且在真空下浓缩。自甲苯再结晶残留物以生成标题化合物。
LC(方法2)：tR＝2.77分钟；质谱(ESI+)：m/z＝281[M+H]+。
手性HPLC(Daicel Chiralpak OJ-H，己烷/醇70:30，1mL/min，25℃)tR＝18.27分钟，100％(对映体过量100％)。
蒸发来自结晶步骤的母液以生成第二批粗标题化合物。
LC(方法3)：tR＝0.70分钟；质谱(ESI+)：m/z＝281[M]+。
步骤4：2-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮
使(5R)-5-(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-2-鎓-2-醇盐(21.2g)溶解于二氯甲烷(250mL)中且冷却至0℃。在搅拌下添加溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(45.8g)，之后为N,N-二异丙基乙胺(45.8mL)及2,4-二甲氧基苯甲基胺(14.8mL)。使混合物缓慢升温至室温且搅拌过夜。用水和盐水洗涤混合物，收集有机层，使其干燥(Na2SO4)且浓缩。通过快速色谱纯化残留物(含15-70％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法2)：tR＝4.80分钟；质谱(ESI+)：m/z＝430[M+H]+。
手性HPLC(Daicel Chiralpak OJ-H，己烷/醇75:35，1mL/min，25℃)tR＝26.8分钟，100％(对映体过量100％)。
步骤5：(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺
使2-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(22.4g)及水合肼(7.68mL)溶解于醇(450mL)及THF(450mL)中。在70℃下将混合物加热6小时。冷却、过滤溶液，在真空中蒸发溶剂且在真空下使残留物干燥以生成标题化合物。
LC(方法2)：tR＝3.20分钟；质谱(ESI+)：m/z＝300[M+H]+。
手性HPLC(Daicel Chiralpak OJ-H，己烷/醇80:20，1mL/min，25℃)tR＝17.23分钟，100％(对映体过量100％)。
中间体31
(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐
使(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(3.2g)溶解于HCl 37％水溶液(10mL)中。在70℃下搅拌混合物10分钟。在真空下浓缩混合物且用乙醚研磨残留物以生成标题化合物。
LC(方法5)：tR＝0.50分钟；质谱(ESI+)：m/z＝150[M+H]+。
中间体32
(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺
步骤1：5-(三甲基硅烷基)戊-4-炔-1-醇
使戊-4-炔-1-醇(5.0g)溶解于无水四氢呋喃(700mL)中，冷却至-78℃且用正丁基锂(75mL的1.6M己烷溶液)逐滴处理。在完成添加之后，在-78℃下搅拌混合物30分钟，接着使其升温至0℃且搅拌2小时。使混合物再冷却至-78℃且用氯三甲基硅烷(15.8mL)处理混合物。使混合物逐渐升温至室温且接着在50℃下加热混合物12小时。接着将混合物分配于1M盐酸水溶液与乙醚之间。用盐水洗涤有机相，且使有机相干燥(MgSO4)。蒸发溶剂且通过快速色谱纯化残留物(含10-40％乙酸乙酯的石油醚)以生成标题化合物。
质谱(ESI+)：m/z＝157[M+H]+。
步骤2：5-(三甲基硅烷基)戊-4-炔醛
使5-(三甲基硅烷基)戊-4-炔-1-醇(6.9g)溶解于二氯甲烷(375mL)中，冷却至0℃且用1,1-二氢-1,1,1-三乙酰氧基-1,2-苯并碘氧杂环戊-3(1H)-酮(22.5g)加以处理。在完成添加之后，使混合物缓慢升温至室温且搅拌混合物12小时。接着将混合物分配于饱和NaHCO3水溶液与二氯甲烷之间。使有机相干燥(MgSO4)且蒸馏出溶剂。通过快速色谱纯化残留物(DCM)以生成标题化合物。
质谱(ESI-)：m/z＝169[M-H]-。
步骤3：7-(三甲基硅烷基)庚-1,6-二炔-3-醇
使5-(三甲基硅烷基)戊-4-炔醛(6.1g)溶解于无水四氢呋喃(125mL)中，冷却至-20℃且用乙炔基溴化镁(235mL的0.5M四氢呋喃溶液)逐滴加以处理。在完成添加之后，将混合物缓慢升温至0℃且搅拌混合物20分钟。接着将混合物分配于饱和NH4Cl水溶液与乙酸乙酯之间。使有机相经干燥(MgSO4)且在真空中蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物(二氯甲烷)以生成直接用于下一步骤中的标题化合物。
步骤4：3-甲基-1-(三甲基硅烷基)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-醇
使7-(三甲基硅烷基)庚-1,6-二炔-3-醇(2.1g)及乙腈(1.8mL)溶解于甲苯(7mL)中且用氩气净化其达5分钟。添加环戊二烯基钴二羰基(150μL)且在110℃下搅拌混合物12小时。接着将混合物分配于乙酸乙酯与盐水之间。使有机相干燥(MgSO4)且在真空中蒸发溶剂。通过Al2O3色谱纯化残留物(含5％甲醇的二氯甲烷)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.65分钟；质谱(ESI+)：m/z＝222[M+H]+。
步骤5：3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-醇
使3-甲基-1-(三甲基硅烷基)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-醇(1.5g)溶解于1,4-二噁烷(20mL)中、用盐酸(8.3mL的4M 1,4-二噁烷溶液)加以处理，且在90℃下搅拌其12小时且在80℃下另外搅拌其48小时。添加氨(5.2mL的7M甲醇溶液)，在真空中蒸发溶剂且通过快速色谱纯化残留物(含5-10％甲醇的二氯甲烷)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.08分钟；质谱(ESI+)：m/z＝150[M+H]+。
步骤6：2-{3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基}-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮
使3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-醇(500mg)、邻苯二甲酰亚胺(590mg)及三丁基膦(1.16mL)溶解于四氢呋喃(5ml)中，冷却至0℃且用含偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD，1.0g)的四氢呋喃溶液(5ml)逐滴加以处理。接着在升温至室温时搅拌混合物12小时。将混合物分配于饱和NaHCO3水溶液与乙酸乙酯之间。使有机相干燥(MgSO4)且在真空中蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物(含30-70％乙酸乙酯的石油醚)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.68分钟；质谱(ESI+)：m/z＝279[M+H]+。
步骤7：5-(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-2-鎓-2-醇盐
使2-{3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基}-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(905mg)溶解于二氯甲烷(20ml)中，冷却至0℃且用3-氯过苯甲酸(960mg)加以处理。搅拌混合物2小时，将混合物分配于饱和Na2SO3水溶液与二氯甲烷之间。使有机相干燥(MgSO4)且在真空中蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物(含5-10％甲醇的二氯甲烷)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.78分钟；质谱(ESI+)：m/z＝295[M+H]+。
步骤8：2-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮
使5-(1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-2-鎓-2-醇盐(740mg)溶解于二氯甲烷(8mL)中且冷却至0℃。在搅拌下添加溴三吡咯烷鏻六氟磷酸盐(1.52g)，之后为N,N-二异丙基乙胺(1.52mL)及2,4-二甲氧基苯甲基胺(490μL)。使混合物缓慢升温至室温且搅拌48小时。将混合物分配于饱和Na2CO3水溶液与二氯甲烷之间。使有机相干燥(MgSO4)且在真空中蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物(30-70％乙酸乙酯的石油醚)以生成呈外消旋形式的标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.87分钟；质谱(ESI+)：m/z＝444[M+H]+。
在手性相的SFC分离后，自外消旋混合物获得纯对映异构体(柱：IC(Daicel Corp.)，5μm，250mm×21.2mm；洗脱剂：scCO2/2-丙醇65:35，40℃，150巴，60mL/min)：
2-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮：tR＝7.38分钟
2-[((5S)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮：tR＝4.56分钟
步骤9：(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺
使2-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮(340mg)溶解于甲醇(2mL)中，用水合肼(76μL)加以处理，且将混合物加热12小时至50℃。接着用乙酸乙酯稀释混合物且搅拌混合物10分钟。通过过滤移除沉淀物且在真空下浓缩母液。通过反相HPLC纯化残留物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.62分钟；质谱(ESI+)：m/z＝314[M+H]+。
中间体33
(5R)-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐
使(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(150mg)溶解于浓缩的盐酸水溶液(1mL)中且在室温下搅拌其1小时。过滤混合物且真空浓缩混合物。添加甲苯至残留物3次且在真空中再次蒸发甲苯以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.08分钟；质谱(ESI+)：m/z＝164[M+H]+。
中间体34
1-({6-[(1R,5S,6R)-6-氰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}甲基)-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
步骤1：(1R,5S,6R)-3-{5-[(4-{[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]氨基甲酰基}-1H-吡唑-1-基)甲基]-6-甲基吡啶-2-基}-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-羧酰胺
使1-({6-[(1R,5S,6R)-6-氨基甲酰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}甲基)-1H-吡唑-4-羧酸锂盐(中间体24，100mg)、(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(95mg)、PyBOP(180mg)及三乙胺(200μL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中且在室温下过夜搅拌反应混合物。在真空中蒸发溶剂，使残留物悬浮于乙酸乙酯中，用0.2M NaOH水溶液及盐水洗涤残留物，使残留物干燥(Na2SO4)且蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物(0-10％甲醇的DCM)以生成标题化合物。
LC(方法3)：tR＝0.93分钟；质谱(ESI+)：m/z＝623[M+H]+。
步骤2：1-({6-[(1R,5S,6R)-6-氰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}甲基)-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
使(1R,5S,6R)-3-{5-[(4-{[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基)氨基甲酰基}-1H-吡唑-1-基)甲基]-6-甲基吡啶-2-基}-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-羧酰胺(70mg)溶解于无水二氯甲烷(5mL)与无水乙腈(2mL)的混合物中且添加甲基N-(三乙基铵基磺酰基)氨基甲酸盐,内盐(Burgess试剂，29mg)。在室温下搅拌混合物3天接着在真空下浓缩混合物。通过快速色谱纯化残留物(含0-10％MeOH的EtOAc)以生成标题化合物。
LC(方法3)：tR＝1.04分钟；质谱(ESI+)：m/z＝605[M+H]+。
中间体35
1-[(6-{5-氮杂螺[2.4]庚-5-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-{5-氮杂螺[2.4]庚-5-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸锂盐(中间体28，100mg)、(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(93mg)、PyBOP(242mg)及三乙胺(0.30mL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中且将反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，使残留物悬浮于二氯甲烷中，用饱和NaHCO3水溶液及盐水洗涤残留物，使残留物干燥(Na2SO4)且蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物(含30-100％EtOAc的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法3)：tR＝1.26分钟；质谱(ESI+)：m/z＝594[M+H]+。
中间体36
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-3-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-1H-吡唑-4-羧酸(中间体19，145mg)及N,N-二异丙基乙胺(0.13mL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中，接着添加HATU(120mg)。搅拌反应混合物15分钟，接着添加(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(360mg)。在室温下搅拌反应混合物90分钟。混合物用水稀释。通过过滤采集沉淀物且使其溶解于乙酸乙酯中。在用MgSO4干燥之后，在真空中蒸发溶剂以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.77分钟；质谱(ESI+)：m/z＝608[M+H]+。
中间体37
3-[5-(叠氮基甲基)-4-甲基嘧啶-2-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷
使(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇(370mg)溶解于甲苯(5mL)及乙腈(5mL)中，冷却至-20℃且用二苯基磷酰基叠氮化物(420μL)及2,3,4,6,7,8,9,10-八氢-嘧啶并[1,2-a]吖庚因(DBU，321μL)加以处理。在室温下搅拌混合物12小时且接着将其分配于饱和NaHCO3水溶液与乙酸乙酯之间。用盐水洗涤有机相，且使其干燥(MgSO4)。蒸发溶剂以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.78分钟；质谱(ESI+)：m/z＝231[M+H]+。
中间体38
1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸，锂盐
步骤1：1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯
3-[5-(叠氮基甲基)-4-甲基嘧啶-2-基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷(343mg)及丙炔酸乙酯(170μL)悬浮于叔丁醇(10mL)、水(10mL)与抗坏血酸钠(295mg)的混合物中且添加五水硫酸铜(48mg)。在室温下搅拌混合物48小时接着在真空下浓缩混合物。将混合物分配于饱和NaHCO3水溶液与二氯甲烷之间。用盐水洗涤有机相，且使其干燥(MgSO4)。通过快速色谱纯化残留物(含0-50％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.83分钟；质谱(ESI+)：m/z＝329[M+H]+。
步骤2：1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸，锂盐
在50℃下搅拌1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯(50mg)、含LiOH(6mg)的四氢呋喃(100μL)、水(300μL)及甲醇(150μL)的混合物12小时。在真空中蒸发溶剂以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.69分钟；质谱(ESI+)：m/z＝301[M-Li+2H]+。
中间体39
(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺
使(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(2.3g)溶解于37％HCl水溶液(10mL)中。在室温下搅拌混合物10分钟。接着在真空下浓缩混合物且使残留物再溶解在含10％甲醇的二氯甲烷中。通过添加氨(7M甲醇溶液)碱化混合物且剧烈搅拌混合物30分钟。通过过滤移除沉淀物且浓缩母液。通过Al2O3色谱纯化残留物(含0-20％甲醇的二氯甲烷)以生成标题化合物。
质谱(ESI+)：m/z＝150[M+H]+。
中间体40
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸，三氟乙酸盐
步骤1：1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯
使(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(410mg)、三丁基膦(600μL)及5-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯(380mg)溶解于四氢呋喃(10mL)中，冷却至-10℃且用偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD，510mg)加以处理。接着在室温下搅拌混合物30分钟。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法8)：tR＝1.14分钟；质谱(ESI+)：m/z＝377[M+H]+。
步骤2：1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸，三氟乙酸盐
在50℃下搅拌1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯(240mg)、含NaOH(3mL的1M水溶液)的1,4-二噁烷(2mL)及甲醇(5mL)的混合物4小时。通过添加盐酸(1M水溶液)中和混合物且通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、三氟乙酸)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.72分钟；质谱(ESI+)：m/z＝349[M+H]+。
中间体41
3-[5-(叠氮基甲基)-4-甲基嘧啶-2-基]-6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己烷
步骤1：2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-羧酸乙基酯
将K2CO3(827mg)添加至含2-氯-4-甲基嘧啶-5-羧酸乙基酯(400mg)及6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(341mg)的N,N-二甲基甲酰胺溶液(4mL)，且将混合物加热1小时至90℃。接着将混合物分配于水与乙酸乙酯之间。使有机相干燥(MgSO4)且在真空中蒸发溶剂以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝1.07分钟；质谱(ESI+)：m/z＝284[M+H]+。
步骤2：2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
使2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-羧酸乙基酯(200mg)溶解于四氢呋喃(3mL)中，冷却至0℃，用LiBH4(77mg)及甲醇(85μL)加以处理。在50℃下搅拌混合物12小时。其后用水(10mL)缓慢处理混合物，剧烈搅拌混合物10分钟且接着将混合物分配于水与乙酸乙酯之间。用乙酸乙酯萃取水相。使经合并的有机相干燥(MgSO4)且在真空中蒸发溶剂以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.65分钟；质谱(ESI+)：m/z＝242[M+H]+。
步骤3：3-[5-(叠氮基甲基)-4-甲基嘧啶-2-基]-6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己烷
使2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇(254mg)溶解于甲苯(5mL)及乙腈(5mL)中，冷却至0℃且用二苯基磷酰基叠氮化物(245μL)及2,3,4,6,7,8,9,10-八氢-嘧啶并[1,2-a]吖庚因(188μL)加以处理。在室温下搅拌混合物12小时且接着将其分配于饱和NaHCO3水溶液与乙酸乙酯之间。用盐水洗涤有机相，且使其干燥(MgSO4)。蒸发溶剂以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.93分钟；质谱(ESI+)：m/z＝267[M+H]+。
中间体42
1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸，锂盐
步骤1：1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯
3-[5-(叠氮基甲基)-4-甲基嘧啶-2-基]-6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己烷(512mg)及丙炔酸乙酯(110μL)悬浮于叔丁醇(10mL)、水(10mL)及抗坏血酸钠(190mg)的混合物中，且添加五水硫酸铜(31mg)。在室温下搅拌混合物12小时。添加丙炔酸乙酯(110μL)、五水硫酸铜(31mg)及抗坏血酸钠(190mg)且搅拌混合物另外2小时。接着在真空下浓缩混合物且通过快速色谱纯化残留物(含0-50％乙酸乙酯的环己烷)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.91分钟；质谱(ESI+)：m/z＝365[M+H]+。
步骤2：1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸，锂盐
在50℃下搅拌1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基-嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸乙基酯(171mg)、含LiOH(30mg)的四氢呋喃(2mL)、水(2mL)及甲醇(500μL)的混合物12小时。在真空中蒸发溶剂以生成直接用于下一步骤中的标题化合物。
中间体43
1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酰胺
使1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸锂盐(15mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(500μL)中，用HATU(17mg)加以处理且在室温下搅拌其10分钟。添加(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(14mg)及N,N-二异丙基乙胺(23μL)，且在室温下搅拌混合物3小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC方法7)：tR＝0.85分钟；质谱(ESI+)：m/z＝632[M+H]+。
中间体44
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸，三氟乙酸盐
步骤1：1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯
使(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(410mg)、三丁基膦(595μL)及3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯(340mg)溶解于四氢呋喃(10mL)中，冷却至-10℃且用偶氮二羧酸二叔丁酯(DBAD，510mg)加以处理。接着在室温下搅拌混合物30分钟。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法8)：tR＝1.09分钟；质谱(ESI+)：m/z＝357[M+H]+。
步骤2：1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸，三氟乙酸盐
在50℃下搅拌1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯(310mg)、含NaOH(5mL的1M水溶液)的1,4-二噁烷(2mL)及甲醇(5mL)的混合物4小时。通过添加盐酸(1M水溶液)中和混合物且通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、三氟乙酸)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.67分钟；质谱(ESI+)：m/z＝329[M+H]+。
中间体45
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
步骤1：1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸
在60℃下搅拌1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸乙基酯(9.1g)、含LiOH(1.7g)的四氢呋喃(150mL)及水(150mL)的混合物48小时。添加乙酸(3.8mL)，在真空中蒸发溶剂且将残留物分配于水与二氯甲烷/三氯甲烷9:1之间。用盐水洗涤有机相，使其干燥(MgSO4)且在真空中蒸发以生成直接用于下一步骤中的标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.72分钟；质谱(ESI+)：m/z＝236[Mi+H]+。
步骤2：N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸(530mg)、(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐(500mg)及N,N-二异丙基乙胺(1.5mL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，用HATU(875mg)加以处理且在室温下搅拌其1小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法8)：tR＝0.75分钟；质谱(ESI+)：m/z＝367[M+H]+。
C)根据本发明的化合物的合成
实施例1
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸(中间体18，480mg)及N,N-二异丙基乙胺(0.70mL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，接着添加HATU(734mg)。搅拌反应混合物5分钟，接着添加(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐(中间体31，360mg)。反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂且通过反相HPLC纯化残留物(乙腈、水)以生成标题化合物。
LC(方法5)：tR＝3.04分钟；质谱(ESI+)：m/z＝430[M+H]+。
以下实施例类似于实施例1来制备，自对应的中间体开始：
实施例9
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸锂盐(中间体23，212mg)、(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐(中间体31，152mg)、HATU(260mg)及N,N-二异丙基乙胺(0.32mL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(1mL)中且使反应混合物在室温下搅拌过夜。在真空中蒸发溶剂，使残留物悬浮于乙酸乙酯中，用0.2M NaOH水溶液及盐水洗涤残留物。使有机相干燥(Na2SO4)且在真空中蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物(含0-10％甲醇的DCM)以生成标题化合物。
LC(方法4)：tR＝2.57分钟；质谱(ESI+)：m/z＝466[M+H]+。
实施例10
N-[(5R)-1-氨基-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸锂盐(中间体23，28mg)、(5R)-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐(中间体33，20mg)、PyBOP(53mg)及N,N-二异丙基乙胺(73μL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中且使反应混合物在50℃下搅拌2小时。在真空中蒸发溶剂，使残留物悬浮于乙酸乙酯中，用0.2M NaOH水溶液及盐水洗涤残留物。使有机相干燥(Na2SO4)且在真空中蒸发溶剂。通过快速色谱纯化残留物(0-10％甲醇的DCM)以生成标题化合物。
LC(方法6)：tR＝8.19分钟；质谱(ESI+)：m/z＝480[M+H]+。
以下实施例类似于实施例10来制备，自对应的中间体开始：
实施例13
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-({6-[(1R,5S,6R)-6-氰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}甲基)-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-({6-[(1R,5S,6R)-6-氰基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}-甲基)-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1H-吡唑-4-羧酰胺(中间体34，10mg)溶解于无水二氯甲烷(2mL)中且冷却至0℃。添加三氟乙酸(0.2mL)且搅拌混合物1小时。蒸发溶剂，使残留物再溶解在乙腈中且将其装载至预洗涤SCX强离子交换筒上。用乙腈、水及甲醇洗涤该筒，且用含7M氨甲醇溶液洗脱产物。蒸发溶剂，且在真空下使残留物干燥以生成标题化合物。
LC(方法2)：tR＝3.08分钟；质谱(ESI+)：m/z＝455[M+H]+。
以下实施例类似于实施例13来制备，自对应的中间体开始：
实施例15
N-[(5R)-1-氨基-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-3-甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺(中间体36，150mg)溶解于无水二氯甲烷(2mL)中。添加三氟乙酸(0.5mL)且搅拌混合物2小时。溶剂在真空中蒸发。使残留物溶解于二氯甲烷中且用饱和K2CO3水溶液萃取残留物。用含5％甲醇的二氯甲烷萃取水溶液3次。使经合并的有机相干燥(MgSO4)且在真空中蒸发溶剂。通过Al2O3色谱纯化残留物(1％甲醇的二氯甲烷)。通过手性相的SFC分离进一步纯化由此获得的产物(柱：CHIRALAmylose-SA，5μm，250mm×20mm；洗脱剂：scCO2/20mM氨甲醇溶液70:30，40℃，150巴，60mL/min)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.66分钟；质谱(ESI+)：m/z＝458[M+H]+。
实施例16
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酰胺
使1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸锂盐(10mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(500μL)中，用HATU(12.4mg)加以处理且在室温下搅拌其10分钟。添加(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(4.9mg)及N,N-二异丙基乙胺(20μL)且在室温下搅拌混合物3小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法8)：tR＝0.86分钟；质谱(ESI+)：m/z＝432[M+H]+。
实施例17
N-[(5R)-1-氨基-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸锂盐(10mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(500μL)中，用HATU(12.5mg)加以处理且在室温下搅拌其10分钟。添加(5R)-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐(7.7mg)及N,N-二异丙基乙胺(20μL)且在室温下搅拌混合物12小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.68分钟；质谱(ESI+)：m/z＝445[M+H]+。
实施例18
N-[(5R)-1-氨基-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酰胺
使1-[(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸锂盐(10mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(500μL)中，用HATU(12.4mg)加以处理且在室温下搅拌其10分钟。添加(5R)-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐(7.7mg)及N,N-二异丙基乙胺(20μL)且在室温下搅拌混合物3小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法8)：tR＝0.89分钟；质谱(ESI+)：m/z＝446[M+H]+。
实施例19
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸三氟乙酸盐(46mg)及N,N-二异丙基乙胺(100μL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，用HATU(40mg)加以处理且在室温下搅拌其5分钟。添加(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐(23mg)且在室温下搅拌混合物12小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、三氟乙酸)以生成标题化合物。
LC(方法10)：tR＝0.39分钟；质谱(ESI+)：m/z＝480[M+H]+。
实施例20
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酰胺
使1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸锂盐(10mg)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(500μL)中，用HATU(11mg)加以处理且在室温下搅拌其10分钟。添加(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺(4.4mg)及N,N-二异丙基乙胺(20μL)且在室温下搅拌混合物3小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法8)：tR＝0.85分钟；质谱(ESI+)：m/z＝468[M+H]+。
实施例21
N-[(5R)-1-氨基-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酰胺
在室温下搅拌1-[(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]氨基}-3-甲基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酰胺(19mg)及浓缩的盐酸水溶液(1mL)的混合物30分钟。在真空中蒸发溶剂，使残留物溶解于甲醇中且通过添加三乙胺碱化残留物。接着通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法7)：tR＝0.75分钟；质谱(ESI+)：m/z＝482[M+H]+。
实施例22
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酰胺
使1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸三氟乙酸盐(44mg)及N,N-二异丙基乙胺(100μL)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，用HATU(40mg)加以处理且在室温下搅拌其5分钟。添加(5R)-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-1,5-二胺二盐酸盐(23mg)且在室温下搅拌混合物12小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈，水，三氟乙酸)。通过反相HPLC纯化由此获得的产物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法10)：tR＝0.36分钟；质谱(ESI+)：m/z＝460[M+H]+。
实施例23
N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-{6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺
将N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺(50mg)、6,6-二甲基-3-氮杂双环[3.1.0]己烷(23mg)及含N,N-二异丙基乙胺(70μL)的二甲基甲酰胺(1mL)的混合物加热至100℃达12小时。通过反相HPLC纯化混合物(乙腈、水、氨)以生成标题化合物。
LC(方法11)：tR＝0.79分钟；质谱(ESI+)：m/z＝458[M+H]+。
实施例24
1-[2-甲基-6-((1S,5R,6R)-6-甲基-3-氮杂-双环[3.1.0]己-3-基)-吡啶-3-基甲基]-1H-吡唑-4-甲酸((R)-1-氨基-6,7-二氢-5H-[2]吡啶-5-基)-酰胺
标题化合物自N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺及(1S,5R,6R)-6-甲基-3-氮杂-双环[3.1.0]己烷制备，其后类似于针对实施例23所述进行操作。LC(方法12)：tR＝0.74分钟；质谱，ESI pos.+neg.(Loop-Inj.)：m/z＝444[M+H]+。
实施例25
1-[6-(2-氮杂-螺[3.3]庚-2-基)-2-甲基-吡啶-3-基甲基]-1H-吡唑-4-甲酸((R)-1-氨基-6,7-二氢-5H-[2]吡啶-5-基)-酰胺
标题化合物自N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺及2-氮杂-螺[3.3]庚烷制备，其后类似于针对实施例23所述进行操作。LC(方法12)：tR＝0.70分钟；质谱，ESI pos.+neg.(Loop-Inj.)：m/z＝444[M+H]+。
实施例26
1-[6-(5-氮杂-螺[2.3]己-5-基)-2-甲基-吡啶-3-基甲基]-1H-吡唑-4-甲酸((R)-1-氨基-6,7-二氢-5H-[2]吡啶-5-基)-酰胺
标题化合物自N-[(5R)-1-氨基-5H,6H,7H-环戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酰胺及(1S,5R,6R)-6-甲基-3-氮杂-双环[3.1.0]己烷制备，其后类似于针对实施例23所述进行操作。LC(方法11)：tR＝0.61分钟；质谱，ESI pos.+neg.(Loop-Inj.)：m/z＝430[M+H]+。

Claims (15)

1.一种式(I)化合物
或其盐，
其中
A选自由N及CH组成的组A-G1；
T选自由N、C-H、C-C1-4烷基、C-CHF2、C-CF3及C-OCH3组成的组T-G1；
R1选自由C1-3烷基组成的组R1-G1；
R2选自由稠合或螺环双环环系统组成的组R2-G1，该稠合或螺环双环环系统由作为环成员的1个N原子及5至6个C原子组成，其中该环系统经由该N原子连接至式(I)中的单环杂芳环，且其中该环系统任选经一个选自由F、C1-3烷基、CF3、CN、HO-C1-3烷基-及C1-3烷基氧基-组成的组的取代基取代，且其中该环系统任选另外经一个选自由F及CH3组成的组的取代基取代；且
R3选自由H、CH3、CHF2或CF3组成的组R3-G1。
2.如权利要求1的化合物，其中
A选自由CH组成的组A-G2，
或其盐。
3.如权利要求1的化合物，其中
A选自由N组成的组A-G3，
或其盐。
4.如权利要求1至3中一项或多项的化合物，其中
T选自由N、C-H、C-CH3、C-CH(CH3)2、C-CHF2、C-CF3及C-OCH3组成的组T-G3，
或其盐。
5.如权利要求1至4中一项或多项的化合物，其中
R1选自由CH3组成的组R1-G3，
或其盐。
6.如权利要求1至5中一项或多项的化合物，其中
R2选自由以下组成的组R2-G4：
其中该环系统经由如星号所指示的N原子连接至式(I)中的单环杂芳环，或其盐。
7.如权利要求1至6中一项或多项的化合物，其中
R3选自由H及CH3组成的组R3-G2，
或其盐。
8.如权利要求1至7中一项或多项的化合物，其中
该式(I)化合物选自由以下组成的组：
或其盐。
9.如权利要求1至8中一项或多项的化合物的药学上可接受的盐。
10.一种药物组合物，其包含一或多种如权利要求1至9中一项或多项的化合物或其药学上可接受的盐，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
11.一种药物组合物，其包含一或多种如权利要求1至9中一项或多项的化合物或其药学上可接受的盐，及一或多种另外的治疗剂，任选连同一或多种惰性载剂及/或稀释剂。
12.如权利要求11的药物组合物，其中该一或多种另外的治疗剂选自由以下组成的组：抗糖尿病剂、用于治疗超重及/或肥胖症的药剂、用于治疗高血压、心脏衰竭及/或动脉粥样硬化的药剂及用于治疗眼部疾病的药剂。
13.如权利要求1至9中一项或多项的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药剂。
14.一种在有此需要的患者中用于治疗糖尿病并发症、优选地用于治疗与糖尿病性视网膜病及糖尿病性黄斑水肿相关联的视网膜血管渗透性的方法，其特征在于将一或多种如权利要求1至9中一项或多项的化合物或其药学上可接受的盐给予患者。
15.如权利要求1至9中一项或多项的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗糖尿病并发症、优选地治疗与糖尿病性视网膜病及糖尿病性黄斑水肿相关联的视网膜血管渗透性的方法中，该方法的特征在于将一或多种如权利要求1至9中一项或多项的化合物或其药学上可接受的盐给予患者。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013111108A1 (en) * 2012-01-27 2013-08-01 Novartis Ag 5-membered heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors
CN105452240A (zh) * 2013-05-23 2016-03-30 卡尔维斯塔制药有限公司 杂环衍生物

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013011107A1 (de) 2011-07-21 2013-01-24 Thyssenkrupp System Engineering Gmbh Vorrichtung und verfahren zum stoppen und/oder ausrichten von transportgütern auf einer fördereinrichtung und fördereinrichtung
WO2017072021A1 (en) 2015-10-27 2017-05-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013111108A1 (en) * 2012-01-27 2013-08-01 Novartis Ag 5-membered heteroarylcarboxamide derivatives as plasma kallikrein inhibitors
CN105452240A (zh) * 2013-05-23 2016-03-30 卡尔维斯塔制药有限公司 杂环衍生物

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115087652A (zh) * 2020-02-13 2022-09-20 勃林格殷格翰国际有限公司 作为血浆激肽释放酶抑制剂的杂芳族甲酰胺衍生物
CN115087652B (zh) * 2020-02-13 2024-05-07 勃林格殷格翰国际有限公司 作为血浆激肽释放酶抑制剂的杂芳族甲酰胺衍生物

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