本發明揭示新穎的五元雜芳基甲醯胺衍生物,其為有效血漿激肽釋放酶抑制劑,且擁有合適藥理學及藥代動力學屬性以將其用作治療可藉由抑制血漿激肽釋放酶受影響之疾病及/或症狀的藥劑,該等疾病及/或症狀包括但不限於糖尿病併發症,例如糖尿病性視網膜病及糖尿病黃斑水腫、視網膜病或水腫相關聯疾病。 本發明化合物可提供若干優點,諸如增強的效力、高代謝及/或化學穩定性、高選擇性、安全性及耐受性、增強的可溶性、增強的滲透性、所期望的血漿蛋白結合、增強的生物可用性、改良的藥代動力學特徵及形成穩定鹽之可能性。
本發明化合物
在本發明之第一態樣中,發現以下式(I)之化合物為血漿激肽釋放酶之有效抑制劑,
其中A、T、R
1
、R
2
及R
3
如上文及下文所定義,且該化合物在以下方面展現有利的屬性:選擇性、安全性及耐受性、代謝及/或化學穩定性、藥代動力學及物理化學特性、可溶性、滲透性、血漿蛋白結合、生物可用性以及形成穩定鹽之可能性。因此,預期如上文或下文所定義之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽適用於治療可藉由抑制血漿激肽釋放酶受影響之疾病及/或症狀。 因此,根據本發明之一個態樣,提供以下式(I)之化合物或其鹽,
, 其中A、T、R
1
、R
2
及R
3
如上文或下文所定義,且亦提供同功異型物、互變異構體、立體異構體、代謝物、前藥、溶合物、水合物及其鹽,尤其是其醫藥學上可接受之鹽。 除非另外陳述,否則基團、殘基及取代基,尤其是A、T、R
1
、R
2
及R
3
如上文及下文所定義。取代基A、T、R
1
、R
2
及R
3
之一些較佳含義將在下文給定作為本發明之實施例。此等定義及實施例中之任一者及每一者可彼此組合。
A :
根據一個實施例,A係選自由N及CH組成之群A-G1。 根據另一實施例,A係選自由CH組成之群A-G2。 根據另一實施例,A係選自由N組成之群A-G3。
T:
根據一個實施例,T係選自由N、C-H、C-C
1 - 4
烷基、C-CHF
2
、C-CF
3
及C-OCH
3
組成之群T-G1。 根據另一實施例,T係選自由N、C-H、C-CH
3
、C-CH
2
CH
3
、C-CH
2
CH
2
CH
3
、C-CH(CH
3
)
2
、C-CHF
2
、C-CF
3
及C-OCH
3
組成之群T-G2。 根據另一實施例,T係選自由N、C-H、C-CH
3
、C-CH(CH
3
)
2
、C-CHF
2
、C-CF
3
及C-OCH
3
組成之群T-G3。根據另一實施例,T係選自由C-CH
3
、C-CH(CH
3
)
2
、C-CHF
2
、C-CF
3
及C-OCH
3
組成之群T-G4。根據另一實施例,T係選自由C-H組成之群T-G5。根據另一實施例,T係選自由N組成之群T-G6。
R1
:
根據一個實施例,R
1
係選自由C
1 - 3
烷基組成之群R
1
-G1。 根據另一實施例,R
1
係選自由CH
3
及CH
2
CH
3
組成之群R
1
-G2。 根據另一實施例,R
1
係選自由CH
3
組成之群R
1
-G3。
R2
:
根據一個實施例,R
2
係選自由稠合或螺環雙環環系統組成之群R2-G1,該稠合或螺環雙環環系統由作為環成員之1個N原子及5至6個C原子組成, 其中該環系統經由該N原子連接至式(I)中之單環雜芳環,且 其中該環系統視情況經一個選自由以下各者組成之群之取代基取代:F、C
1 - 3
烷基、CF
3
、CN、HO-C
1 - 3
烷基-及C
1 - 3
烷基氧基-,且 其中該環系統視情況另外經一個選自由F及CH
3
組成之群之取代基取代。 根據另一實施例,R
2
係選自由稠合或螺環雙環環系統組成之群R
2
-G2,該稠合或螺環雙環環系統由作為環成員之1個N原子及5至6個C原子組成, 其中該環系統經由該N原子連接至式(I)中之單環雜芳環,且 其中該環系統視情況經一個選自由以下各者組成之群之取代基取代:F、CH
3
、CF
3
、-CN、CH
2
-OH及CH
2
-OCH
3
且 其中該環系統視情況另外經一個選自由F及CH
3
組成之群之取代基取代。 根據另一實施例,R
2
係選自由稠合雙環環系統及螺環雙環環系統組成之群R
2
-G3,該稠合雙環環系統由作為環成員之1個N原子及5個C原子組成,螺環雙環環系統由作為環成員之1個N原子及5至6個C原子組成, 其中該環系統經由該N原子連接至式(I)中之單環雜芳環,且 其中該環系統視情況經一個選自由以下各者組成之群之取代基取代:F、CH
3
、-CN及CH
2
-OH,且 其中該環系統視情況另外經一個選自由F及CH
3
組成之群之取代基取代。 根據另一實施例,R
2
係選自由以下各者組成之群R
2
-G4:
, 其中如由星號指示,該環系統經由N原子連接至式(I)中之單環雜芳環。
R3
:
根據一個實施例,R
3
係選自由H、CH
3
、CHF
2
及CF
3
組成之群R
3
-G1。 根據另一實施例,R
3
係選自由H及CH
3
組成之群R
3
-G2。 式(I)化合物之更佳亞屬實施例在以下表1中闡述為實施例(I-a)至(I-g),其中使用上文所提及之取代基定義。舉例而言,行R
1
及列(I-a)中之項-G1意謂在實施例(I-a)中,取代基R
1
係選自指定為R
1
-G1之定義。同樣類似應用於併入通式中之其他變數。
表 1 :
尤其較佳化合物,包括其互變異構體、其鹽或其任何溶合物或水合物為
製備
使用熟習此項技術者已知且描述於有機合成文獻中之合成方法,例如使用描述於「Comprehensive Organic Transformations」,第二版,Richard C. Larock,John Wiley & Sons, 2010.及「March's Advanced Organic Chemistry」,第七版,Michael B. Smith,John Wiley & Sons,2013中之方法,可獲得根據本發明之化合物及其中間產物。較佳地,以與下文更充分闡述的製備方法(尤其如實驗部分中所描述)類似地來獲得化合物。在一些狀況下,實施反應方案所採用的順序可變化。亦可使用為熟習此項技術者熟知但此處未加以詳細地描述之此等反應之變化。基於研究隨後方案,用於製備根據本發明之化合物之一般程序對於熟習此項技術者將變得顯而易見。起始化合物可商購或可藉由描述於文獻或本文中之方法製備,或可以類似或相似方式製備。在實行反應之前,起始化合物中之任何對應官能基可使用習知保護基團加以保護。此外,使用熟習此項技術者熟悉且描述於文獻中之方法,例如「Protecting Groups」,第三版,Philip J. Kocienski,Theime,2005 及「Protective Groups in Organic Synthesis」,第四版,Peter G. M. Wuts,Theodora W. Greene,John Wiley and Sons,2006中之方法,此等保護基團可在反應順序中合適的階段加以分裂。
方案 1 : NL
2
= NH
2
或受保護或遮蔽NH
2
基團,例如,NHCOO
t
Bu、NHCH
2
Ph、N(CH
2
Ph)
2
,其中Ph (=苯基)可視情況被1或2個OCH
3
基團取代
方案 1 :
式(I)化合物可藉由式(II)之合適酸(作為游離酸或作為具有諸如Li
+
、Na
+
、K
+
等之合適金屬陽離子之鹽)與式(III)之合適胺(作為游離胺或作為諸如鹽酸鹽、氫溴酸鹽等之鹽)於合適溶劑(例如,二氯甲烷、四氫呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺、N,N-二甲基乙醯胺、1-甲基-2-吡咯啶酮等)中在存在合適偶合劑(例如O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲
-六氟磷酸鹽(HATU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲
四氟硼酸鹽(TBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯啶鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)、碳化二亞胺試劑等)及鹼(例如,三乙胺、N,N-二異丙基-乙胺、吡啶等)之情況下來製備以形成醯胺鍵;A、T、R
1
、R
2
及R
3
在方案1中具有如上文所定義之含義。替代地,羧酸轉化成羧酸氯(使用例如二氯甲烷中之草醯氯或亞硫醯氯),且因而在存在合適的鹼(例如三乙胺、N,N-二異丙基-乙胺、吡啶等)之情況下運用胺(III)偶合。若胺(III)與吡啶環上之受保護或遮蔽胺基(NL
2
並非NH
2
)一起使用,則此基團可藉由應用有機化學物質之文獻中所報告之標準程序分裂掉保護集團而隨後轉化成NH
2
基團。第三丁酯較佳地在酸性條件下分裂,其中例如三氟乙酸或氫氯酸在諸如二氯甲烷、1,4-二噁烷、異丙醇或乙酸乙酯之溶劑中。可藉由使用氫在存在諸如鈀/碳之過渡金屬之情況下移除苯甲基基團。攜帶諸如芳環上之甲氧基之電子供予基團的苯甲基基團亦可在氧化條件(例如運用硝酸鈰銨(CAN)或2,3-二氯-5,6-二氰基醌(DDQ))或酸性條件(例如運用三氟乙酸或氫氯酸)下移除。
方案 2 : 方案 2 :
式(II)之酸取決於R
5
之性質藉由水解或氫解由對應的酯(IV)製備,在式(II)中,A、T、R
1
及R
2
具有如上文所定義之含義。諸如乙基或甲酯之低碳烷基酯藉由與水與合適可互溶的溶劑(例如四氫呋喃、甲醇、醇、1,4-二噁烷等或其混合物)之混合物中之諸如NaOH、LiOH或KOH之氫氧化物鹼水解而較佳地分裂,其中視需要加熱。該酸可分離為具有金屬陽離子之鹽或分離為游離酸。第三丁酯藉由運用合適溶劑(例如二氯甲烷、1,4-二噁烷、甲醇、醇、四氫呋喃、水或其混合物)中之酸(例如氫氯酸或三氟乙酸)來處理而分裂。苯甲基酯藉由在氫氛圍下(較佳地1至5巴)與合適溶劑(例如醇、甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷、乙酸乙酯等)中之合適催化劑(例如鈀/碳等)氫解而較佳地分裂。
方案 3 X = R
2
、F、Cl、Br;R
5
= C
1 - 4
烷基或苯甲基
方案 3 :
化合物(II)中之一些可藉由乙醇(V)與酯(VI)之反應使用光延反應之條件(例如,諸如四氫呋喃、1,4-二噁烷、甲苯等之溶劑中之三苯膦或三-正丁基膦加偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)或二-第三丁基偶氮二羧酸鹽(DBAD)等)來製備;方案3中之A、T、R
1
及R
2
具有如上文所定義之含義。乙醇(V)可在雜芳環或離去基團上攜帶所要殘基R
2
而非以後引入R
2
。
方案 4 X = R
2
、F、Cl、Br;R
5
= C
1 - 4
烷基或苯甲基; Hal = Cl、Br、I、OSO
2
CH
3 方案 4 :
化合物(II)中之一些亦可藉由攜帶雜芳基甲基位置處之諸如Cl、Br或甲磺醯基之離去基團的化合物(VII)與吡唑-4-羧酸酯(VI)在存在合適溶劑(例如四氫呋喃、N,N-二甲基甲醯胺等)中之合適鹼(例如氫化鈉、碳酸銫、碳酸鉀等)之情況下進行反應來製備;方案4中之A、T、R
1
及R
2
具有如上文所定義之含義。化合物(VII)可在雜芳環或離去基團上攜帶所要殘基R
2
而非以後引入R
2
。
方案 5 X = R
2
、F、Cl、Br;R
5
= C
1 - 4
烷基或苯甲基; Hal = Cl、Br、I、OSO
2
CH
3 方案 5 :
其中A、R
1
及R
2
具有上文所定義之含義之式(II'')的一些酯可藉由運用N,N-二甲基甲醯胺或另一合適溶劑中之疊氮化鈉處理式(VII)之對應的烷基鹵化物(溴化物或氯化物)或甲磺酸鹽以生成式(VIII)之中間產物來製備,該中間產物接著在銅介導之催化條件下(例如丙炔酸乙酯或丙炔酸第三丁酯與催化硫酸銅及抗壞血酸鈉在水/第三丁醇中)與合適丙炔酸酯反應以生成化合物(II'')。
方案 6 X = R
2
、F、Cl、Br;R
5
= C
1 - 4
烷基或苯甲基
方案 6 :
其中A、R
1
及R
2
具有上文所定義之含義之式(II'')的一些酯亦可自式(V)之乙醇獲得,該乙醇藉由在存在合適溶劑(例如四氫呋喃或N,N-二甲基甲醯胺)中之諸如DBU的合適鹼之情況下用二苯基磷醯基疊氮化物處理而轉化成對應的疊氮化合物(VIII)。化合物(VIII)接著可如方案5中所描述而進一步反應以生成化合物(II'')。
方案 7 X = F、Cl、Br、I, Y = CO
2
R
5
、CHO、CH
2
OH,
R
5
= C
1 - 4
烷基或苯甲基
方案 7 :
式(X)之中間產物可經由雜芳環上之親核取代反應或過渡金屬催化偶合反應由雜芳香族化合物(IX)及胺(XI)來製備;方案7中之A、T、R
1
及R
2
具有上文所定義之含義。(IX)中之雜芳環與化合物(XI)中之N的親核取代可在存在合適溶劑(例如四氫呋喃、1,4-二噁烷、N,N-二甲基甲醯胺等)中之合適鹼(例如氫化鈉、碳酸銫、碳酸鉀、N,N-二異丙基-乙胺等)之情況下進行。過渡金屬催化偶合反應類似於有機化學物質之文獻中所報告之程序參考Ullmann或Buchwald/Hartwig偶合反應使用合適鈀或銅鹽或複合物、配體、鹼及溶劑而加以較佳地實行。
方案 8 方案 8 :
式(III')之對映純胺可如下製備(方案8中之R
3
具有上文所定義之含義):式(XII)之酮可在有機化學物質之文獻(例如在J. Am. Chem. Soc. 1995, 117 (28),第7562-7563頁中)中所報告之條件下對映選擇性地還原以生成式(XIII)之對映純或對映體增濃乙醇。乙醇接著可與光延反應中之鄰苯二甲醯亞胺反應,其中合適溶劑(例如四氫呋喃、1,4-二噁烷、甲苯等)中之合適試劑(例如三苯膦或三-正丁基膦加偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD)或二-第三丁基偶氮二羧酸鹽(DBAD)等)導致立體中心及式(XIV)之中間產物的組態之倒置。胺基可藉由用合適溶劑(例如醇、甲醇、四氫呋喃、水等或其混合物)中之例如肼或乙醇胺處理且視需要加熱而自鄰苯二甲醯亞胺基釋放以生成式(III')之中間產物。
方案 9 NL
2
= NH
2
或受保護或遮蔽NH
2
,諸如NH-Bn或NH-DMB (DMB = 2,4-二甲氧基苯甲基)
方案 9 :
NH
2
基團或其在化合物(III)之吡啶環上之受保護或遮蔽具體化可藉由與諸如氨、苯甲胺或2,4-二甲氧基苯甲基胺之胺在存在溴參吡咯啶鏻六氟磷酸鹽(PyBroP)及合適溶劑(例如二氯甲烷)中之鹼(例如N,N-二異丙基-乙胺)之情況下進行反應而自N-氧化物(XVI)引入;方案9中之R
3
具有上文所定義之含義。N-氧化物(XVI)又可在常規程序之後自具有惰性溶劑(例如二氯甲烷)中之合適氧化劑(例如3-氯過苯甲酸、過硫酸氫鉀、過氧化氫等)之化合物(XV)獲得。
方案 10 方案 10 :
化合物(XV')可以由4個反應步驟組成之序列自經報告化合物(XVI)獲得;方案10中之R
3
具有上文所定義之含義。化合物(XVI)可藉由將乙炔金屬添加至(XVI)中之醛基而轉化成化合物(XVII)。乙炔基鋰或鹵化鎂(氯化物、溴化物或碘)在低溫(-78℃至20℃)較佳地用作惰性溶劑(例如四氫呋喃、乙醚等)中之乙炔化物親核試劑。化合物(XVII)接著可在存在合適溶劑(例如在60至140℃高溫下之甲苯)中之過渡金屬催化劑(例如環戊二烯基鈷二羰基)之情況下與例如乙腈之腈反應以生成化合物(XVIII)。化合物(XVIII)可在環境溫度下或在酸性條件(例如在高溫下之1,4-二噁烷中之氫氯酸)下例如運用合適溶劑(例如四氫呋喃)中之氟源(例如四-正丁基氟化銨)經脫矽烷基化。化合物(XV')接著可藉由使用方案8中所描述之程序來製備。 式(I)化合物可解析為如下所提及之其對映異構體及/或非對映異構體。因此,舉例而言,順式/反式混合物可解析為其順式及反式異構體,且外消旋化合物可拆分為其對映異構物。 順式/反式混合物可例如藉由層析解析為其順式及反式異構體。可藉由自身已知之方法將以外消旋體出現之式(I)化合物分離成其光學對映體,且可藉由利用其不同的物理化學屬性使用自身已知之方法(例如層析及/或分步結晶法)將通式
I
之化合物之非對映異構性混合物解析為其非對映異構體;若其後獲得之化合物為外消旋體,則其可解析為如下文所提及之對映異構體。 較佳藉由對掌性相管柱層析法,或藉由自光活性溶劑結晶,或藉由與光活性物質(其與外消旋化合物形成鹽或諸如酯或醯胺之衍生物)反應,解析外消旋體。鹽可由用於鹼性化合物之對映異構性純酸及用於酸性化合物之對映異構性純鹼形成。由對映異構性純輔助化合物(例如,酸、其活化衍生物或醇)形成非對映異構性衍生物。可藉由利用其不同物理化學屬性(例如溶解度之差異)來實現由此獲得之鹽或衍生物之非對映異構性混合物的分離;可藉由合適試劑之作用自純非對映異構性鹽或衍生物釋放游離對映體。常用於此目的之光學活性酸以及適用作輔助殘基之光學活性醇對於熟習此項技術者係已知的。 如上文所提及,式(I)化合物可轉化成鹽,尤其對於醫藥用途轉化成醫藥學上可接受之鹽。如本文中所使用,「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示之化合物的衍生物,其中原構化合物藉由製備其酸鹽或鹼鹽而改質。 根據本發明之化合物亦宜使用描述於以下實例中之方法獲得,該等方法亦可出於此目的與熟習此項技術者自文獻中已知之方法組合。
藥理活性
可利用以下分析表明本發明化合物之活性:
生物方法
式(I)化合物抑制血漿激肽釋放酶(KLKB1)、因子XIIa (FXIIa)、因子XIa (FXIa)、因子Xa (FXa)、因子IIa (α-凝血酶;FIIa)、纖維蛋白溶酶、胰蛋白酶、組織激肽釋放酶1 (KLK1)、因子VIIa ( FVIIa )或與組織因子複合之FVIIa、磷脂及CaCl
2
(FVIIa/TF/PL/CaCl
2
)之能力使用分析緩衝液(100 mM Tris、150 mM NaCL,運用HCl經調整至pH7.8,且含有0.1% (w/v) BSA及0.05% (v/v) Tween20)中之以下生物化學分析在存在1% (v/v) DMSO之情況下加以測定: 使用終點分析評估KLKB1之抑制 人類KLKB1 (0.01 U/mL;酶研究實驗室)或老鼠KLKB1 (0.625 nM;自產)在室溫下培育達1h,其中分析緩衝液中有0.10 µM螢光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC (來自Bachem之I1295)及各種濃度之測試化合物。隨後,PPACK II (Calbiochem)經添加作為停止溶液以達成1 µM之最終濃度,且螢光使用波長激發設定為355 nm且波長發射設定為460 nm之Envision Reader (珀金埃爾默(PerkinElmer))來量測。 根據本發明之化合物之IC
50
值在下表中展示。化合物之編號對應於實驗部分中之實例之編號。
對人類KLKB1在經硫酸葡聚糖活化之人類PPP中之抑制的評估 自人類全血獲得之運用EDTA抗凝之貧血小板血漿(PPP)運用12.5 µg/mL硫酸葡聚糖在冰上經活化達7分鐘。經活化PPP與分析緩衝液中之各種濃度之測試化合物一起培育。隨後,混合物在24℃下與0.25 mM螢光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC (來自Bachem之I1295)一起培育,且使用波長激發設定為350 nm且波長發射設定為450 nm之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 根據本發明之化合物之IC
50
值在下表中展示。化合物之編號對應於實驗部分中之實例之編號。
對KLKB1在經高嶺土活化人類PPP中之抑制的評估 自人類全血獲得之運用Na-Citrat抗凝之貧血小板血漿(PPP)與各種濃度之測試化合物以及分析緩衝液中之25、75、250或750 µg/mL高嶺土一起在37℃下培育達20分鐘,使得對於每一所使用高嶺土劑量,獲得用於測試化合物之濃度效應。隨後,0.25 mM螢光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC (來自Bachem之I1295)經添加至混合物且使用以下波長激發設定為350 nm且波長發射設定為450 nm之Spectramax M5 (分子裝置)在12分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。pIC50及pIC90值係自與GraphPad prism 7.0擬合之4 x/y-標繪圖(x=log M,化合物;y=Δ rfu/min)獲得(Equation:log(促效劑)相對於效應--Find ECanything;針對測試化合物獲得之四個濃度效應曲線使用產生共用pIC50或pIC90值之全局擬合程序擬合,每一濃度效應曲線使用不同高嶺土劑量獲得)。 根據本發明之化合物之IC
50
及IC
90
值在下表中展示。化合物之編號對應於實驗部分中之實例之編號。
對KLKB1之抑制之評估(K
i
) 人類KLKB1 (1.78 nM或0.025 U/mL;酶研究實驗室)在24℃下與分析緩衝液中之0.25 mM螢光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC (來自Bachem之I1295)及各種濃度的測試化合物一起培育。使用以下波長激發設定為350 nm且波長發射設定為450 nm之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 根據本發明之化合物之K
i
值在下表中展示。化合物之編號對應於實驗部分中之實例之編號。
對FXIIa之抑制之評估(K
i
) 人類FXIIa (47.5 nM或1.1 U/mL;酶研究實驗室)在24℃下與分析緩衝液中之0.5 mM顯色底物S2302 (Chromogenix)及各種濃度的測試化合物一起培育。使用在405 nm下量測光學吸收率之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 對FXIa之抑制之評估(K
i
)人類FXIa (0.5 nM或0.016 U/mL;酶研究實驗室)在24℃下與分析緩衝液中之0.25 mM螢光底物Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC • HCl (來自Bachem之I1575)及各種濃度之測試化合物一起培育。使用以下波長激發設定為350 nm且波長發射設定為450 nm之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 對FXa之抑制之評估(K
i
) 人類FXa (0.86 nM或0.01 U/mL;酶研究實驗室)在24℃下與分析緩衝液中之0.5mM顯色底物S2765 (Chromogenix)及各種濃度之測試化合物一起培育。使用在405 nm下量測光學吸收率之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 對FIIa之抑制之評估(K
i
) 人類FIIa (44.6 nM或5U/mL;酶研究實驗室)在24℃下與分析緩衝液之0.5 mM顯色底物S2238 (Chromogenix)及各種濃度之測試化合物一起培育。使用在405 nm下量測光學吸收率之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 對纖維蛋白溶酶之抑制之評估(K
i
) 人類纖維蛋白溶酶(64.1nM或0.0275 U/mL;酶研究實驗室)在24℃下與分析緩衝液中之0.3 mM顯色底物S2251 (Chromogenix)及各種濃度之測試化合物一起培育。使用在405 nm下量測光學吸收率之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 對胰蛋白酶之抑制之評估(K
i
) 人類胰蛋白酶 (4.54 nM或250 U/mL;Calbiochem)在24℃下與分析緩衝液中之0.5mM顯色底物S2222 (Chromogenix)及各種濃度之測試化合物一起培育。使用在405 nm下量測光學吸收率之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 對KLK1之抑制之評估(K
i
) 在分析之前,人類KLK1 (研發系統)藉由與人類胰蛋白酶(Calbiochem)以1:10,000比率在37℃下一起培育15分鐘而經活化。對於分析KLK1抑制活性,經活化KLK1 (31.25 nM或1 U/mL)在24℃下與分析緩衝液中之0.1 mM螢光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC (來自Bachem之I1295)及各種濃度之測試化合物一起培育。使用以下波長激發設定為350 nm且波長發射設定為450 nm之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 對FVIIa之抑制之評估(K
i
) 人類FVIIa (0.86 nM或0.01 U/mL;酶研究實驗室)在24℃下與分析緩衝液中之1.5 mM顯色Pefachrome
®
FVIIa (Loxo)及各種濃度之測試化合物一起培育。使用在405 nm下量測光學吸收率之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 對FVIIa/TF/PL/CaCl
2
之抑制之評估(K
i
) 人類FVIIa (300 nM或585 U/mL;酶研究實驗室)連同10 mM CaCl
2
*2H
2
O及13.3% (v/v) Dade
®
Innovin
®
(西門子;OQUMI94E0002(5534),其含有重組的人類組織因子合成磷脂(凝血活酶))在24℃下與分析緩衝液中之1.5 mM顯色Pefachrome
®
FVIIa (Loxo)及各種濃度之測試化合物一起培育。使用在405 nm下量測光學吸收率之Spectramax M5 (分子裝置)在16分鐘內以動力學間隔每2分鐘執行量測。 pIC
50
及pK
i
值之計算 在開始分析之後的用於自2至12分鐘之時間間隔的平均值V
max
(分別表達為用於使用顯色底物之分析之δ OD/min或用於使用螢光生成底物之分析之δ RFU/min)相對於經評估抑制劑化合物之莫耳濃度的對數加以標繪。pIC
50
值接著使用四個參數擬合程序使用GraphPad Prism(版本6;格拉夫帕德軟件公司)加以擬合。各別K
i
值藉由使用下式針對所使用底物之各別K
M
值(參見用於所使用底物之經獲得K
M
值之表A)校正IC
50
值而獲得:
其中IC
50
以莫耳為單位且K
M
值以mM為單位。 表A:針對用於酶分析中之底物獲得之K
M
值
滲透性之評估
將Caco-2細胞(1-2×10
5
細胞/1 cm
2
面積)接種在內置性過濾器(Costar transwell聚碳酸酯或PET過濾器,0.4 μm孔徑)上,且經培養(DMEM)達10至25天。 化合物溶解於合適溶劑(如DMSO,1至20 mM儲備溶液)中。用HTP-4緩衝液(128.13 mM NaCl、5.36 mM KCl、1 mM MgSO
4
、1.8 mM CaCl
2
、4.17 mM NaHCO
3
、1.19 mM Na
2
HPO
4
×7H
2
O、0.41 mM NaH
2
PO
4
×H
2
O、15 mM HEPES、20 mM葡萄糖,pH值7.2)稀釋儲備溶液以製備轉運溶液(0.1至300 μM化合物,最終DMSO<=0.5%)。將轉運溶液(transport solution;TL)施用至頂部或底外側供體側面以用於分別量測A-B或B-A滲透率(重複3次過濾器)。接收器側面含有補充有2% BSA之HTP-4緩衝液。在實驗開始及最後及在各個時間間隔處(至多2小時)自供體亦自接收器側面收集樣品,以藉由HPLC-MS/MS或閃爍計數來進行濃度量測。用新鮮接收器溶液替換取樣後之接收器容積。
對人類或老鼠肝微粒體中之代謝穩定性之評估
在37℃下針對合併的人類或老鼠肝微粒體分析測試化合物之代謝降解。每個時間點之100 μL最終培育體積中於室溫下含有TRIS緩衝液pH 7.6 (0.1 M)、氯化鎂(5 mM)、微粒體蛋白(1 mg/ml)及最終濃度為1 μM之測試化合物。 在37℃下短暫預培育一定時間段之後,藉由添加還原形式之β-菸醯胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH,1 mM)來引發反應,且藉由在不同時間點之後將等分試樣轉移至溶劑中來終止反應。另外,在無NADPH存在之情況下培育時,監測不依賴於NADPH之降解,且直到最後時間點終止。藉由離心(10000 g,5分鐘)來使經淬滅之培育液聚集。藉由LC-MS/MS分析清液層之等分試樣中的原構化合物量。藉由濃度-時間特徵曲線之半對數標繪圖的斜率來測定半衰期(t1/2活體外)。
對人類或老鼠肝細胞中之代謝穩定性之評估
在肝細胞懸浮液中分析測試化合物之代謝降解。肝細胞(通常低溫保藏)在含有5%物種血清之適當緩衝液系統(例如DMEM(Dulbecco´s modified eagle medium)培養基加3.5 μg升糖素/500mL,2.5 mg胰島素/500 mL及3.75 mg/500 mL氫皮質酮)中培育。 在培育箱(37℃,10% CO
2
)中預培育(通常) 30分鐘之後,向395 µl肝細胞懸浮液中添加5 µl測試化合物溶液(80 µM;自DMSO中2 mM儲備溶液用介質以1:25稀釋) (細胞密度在0.25至5 Mio細胞/mL範圍內,通常1 Mio細胞/mL;測試化合物最終濃度1 µM,DMSO最終濃度0.05%)。 培育細胞六小時(培育箱,迴旋震盪器),且在0、0.5、1、2、4及6小時時取出樣品(25 µl)。將樣品轉移至乙腈中,且藉由離心(5分鐘)聚集。將清液層轉移至新的96處深孔板,在氮氣下蒸發且再懸浮。 原構化合物之衰退係以HPLC-MS/MS分析,CLint如下計算:CL_INTRINSIC =劑量/ AUC = (C0/CD) / (AUD + clast/k)×1000/60. C0:培育中之初始濃度[μM],CD:活細胞之細胞密度[10e6cells/mL],AUD:資料區域[μM×h],clast:最後一個資料點之濃度[μM],k:針對原構化合物衰退之回歸線之斜率[h-1]。
對血漿蛋白結合之評估
此平衡透析(ED)技術係用於測定測試化合物至血漿蛋白質之近似試管內部分結合。使用Dianorm Teflon透析細胞(0.2微米)。每一細胞由供體室及受體室組成,該供體室及受體室係由具有5 kDa分子量截止值之超薄半透膜隔開。用於每一測試化合物之儲備溶液在DMSO中以1 mM製備且經稀釋至1.0 μM之最終濃度。後續透析溶液係以來自雄性及雌性供體之經合併人類或老鼠血漿(具有NaEDTA)製備。200 μL透析緩衝液(100毫米磷酸鉀,pH 7.4)之等分試樣經施配至緩衝室中。200 μL測試化合物透析溶液之等分試樣經施配至血漿室中。在37℃下旋轉地實行培育達2小時。 在透析週期結束時,滲透液經轉移至反應管中。用於緩衝液部分之管含有0.2 mL乙腈/水(80/20)。25 μL之血漿滲透液之等分試樣經轉移至深孔板中且與25 μl乙腈/水(80/20)、25 μl緩衝液、25 μL校準溶液及25 μl內標溶液混合。藉由添加200 μl乙腈進行蛋白沈澱。 50 μl之緩衝液滲透液之等分試樣經轉移至深孔板中,且與25 μl空白血漿、25 μl內標溶液及200 μl乙腈混合。 樣品在HPLC-MS/MS-系統上量測,且以分析-軟體加以評估。 百分比結合運用以下公式來計算:%接合=(血漿濃度-緩衝液濃度/血漿濃度)×100
對可溶性之評估
藉由將溶解於緩衝液中之量與溶解於乙腈/水(1/1)溶液中之量作比較來測定測試化合物之水溶解度。自10 mM DMSO儲備溶液開始,等分試樣分別用乙腈/水(1/1)或緩衝液稀釋。在振盪24小時之後,將溶液過濾且藉由LC-UV分析。將溶解於緩衝液中之量與溶解於乙腈溶液中之量相比。 通常在DMSO濃度為2.5%時量測之溶解度為0.001 mg/mL至0.125 mg/mL。若超過90%之化合物溶解於緩衝劑中,則該值由「>」標記。
對藥物動力學特性在嚙齒動物中之評估
測試化合物經靜脈內投與經餵養老鼠或以口服方式經投與禁食的老鼠。在施用測試化合物後在若干時間點獲取血液樣本,抗凝且離心。 定量血漿樣本中的分析物(經投與化合物及/或代謝物)之濃度。 PK參數使用非隔室方法加以計算。AUC及Cmax經正規化成1 µmol/kg之劑量。
治療方法
在本發明之另一態樣中,發現式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可適用於治療由哺乳動物中之非所需血漿激肽釋放酶活性介導之疾病或症狀。 由非所需血漿激肽釋放酶活性介導之疾病及症狀包含糖尿病併發症、糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病、糖尿病黃斑水腫(DME)、臨床上重要黃斑水腫(CSME)、囊樣黃斑部水腫(CME)、白內障摘除後之CME、由超低溫療法誘發之CME、由葡萄膜炎誘發之CME、內眼炎、血管栓塞(例如視網膜中央靜脈栓塞、視網膜分支靜脈栓塞或半視網膜靜脈栓塞)後之CME、視網膜水腫、與糖尿病性視網膜病之白內障手術相關之併發症、高血壓視網膜病、視網膜創傷、乾性及濕性年齡相關黃斑變性(AMD)、息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)、遺傳血管性水腫及急性呼吸窘迫症候群(ARDS)。 因此,本發明化合物及醫藥組合物尤其適於治療包括以下各者之眼部疾病:糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病、糖尿病黃斑水腫(DME)、視網膜靜脈栓塞、年齡相關黃斑變性(AMD)、息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)以及遺傳血管性水腫。 詳言之,根據本發明之化合物及醫藥組合物適於治療糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病、糖尿病黃斑水腫(DME)、年齡相關黃斑變性(AMD)以及息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)。 根據本發明之化合物最尤其適於治療糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病及糖尿病黃斑水腫(DME)。 另外,根據本發明之化合物及醫藥組合物適合用於以下治療程序中之一或多者:水腫治療,尤其是遺傳血管性水腫之治療。 每天適用之式(I)化合物之劑量範圍通常係自0.01至10 mg/kg體重。實際治療有效量或治療劑量當然應視熟習此項技術者已知的因素,諸如患者之年齡及重量、投與途徑及疾病之嚴重度而定。在任何狀況下,化合物或組合物應根據患者之獨特症狀以能達成治療有效量之劑量及方式投與。 根據本發明之化合物、組合物(包括與一或多種額外治療劑之任何組合)可藉由經口、經玻璃體內、經皮、吸入、非經腸或舌下途徑投與。可能的投與方法中,經口或玻璃體內投與係較佳的。在玻璃體內注射之狀況下,較佳劑量每一眼睛不應超過5 mg。 因此,在另一態樣中,本發明提供新的式(I)化合物,包括其醫藥學上可接受之鹽,其可抑制血漿激肽釋放酶且擁有合適藥理學及藥物動力學屬性,以用於治療,亦即用作藥劑。 在另一態樣中,本發明提供新的式(I)化合物,包括其醫藥學上可接受之鹽,以用於一種用於治療可以有益的方式受到血漿激肽釋放酶之抑制影響之疾病或症狀的方法中。 在另一態樣中,本發明提供新的式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽,以用於治療諸如以下各者之眼科病症:糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病、糖尿病黃斑水腫(DME)、年齡相關黃斑變性(AMD)及息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)。 在另一方面中,本發明提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途,以製造用於治療血漿激肽釋放酶之抑制係有益的疾病或症狀之藥劑。 在另一態樣中,本發明提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途,以製造用於治療諸如以下眼科病症之藥劑:糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病、糖尿病黃斑水腫(DME)、年齡相關黃斑變性(AMD)及息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)。 因此,本發明係關於作為藥劑之式(I)化合物。 此外,本發明係關於式(I)化合物在一種用於治療患者較佳地為人類之由非所需血漿激肽釋放酶活性介導之疾病或症狀的方法中之用途。 此外,本發明係關於式(I)化合物在一種用於治療諸如以下各者之眼科病症之方法中的用途:糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病、糖尿病黃斑水腫(DME)、年齡相關黃斑變性(AMD)及息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)。 在又一態樣中,本發明係關於一種用於治療哺乳動物中藉由抑制血漿激肽釋放酶受影響之疾病或症狀的方法,該方法包含將本發明之治療有效量之化合物或醫藥組合物投與需要此類治療之患者(較佳地為人類)的步驟。 在另一態樣中,本發明提供一種用於治療可以有益方式受受試者中之血漿激肽釋放酶之抑制影響之疾病或症狀的方法,該方法包含將治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽投與有需要之患者。 在另一態樣中,本發明提供一種用於治療患者之諸如以下各者之眼科病症的方法:糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病、糖尿病黃斑水腫(DME)、年齡相關黃斑變性(AMD)及息肉狀脈絡膜血管病變(PCV),該方法包含將治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽投與有需要之患者。 根據本發明之另一態樣,提供一種用於治療有需要之患者之糖尿病併發症,尤其是與糖尿病性視網膜病及糖尿病性黃斑水腫相關聯之視網膜血管滲透性之方法,其特徵在於治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽經投與患者。
醫藥組合物
在本發明之另一態樣中,描述了本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽可用作醫藥組合物中之活性成分。 對於一般熟習此項技術者而言,用於投與本發明化合物之合適的製劑(視情況與一或多種其他治療劑組合)係為顯而易見的,且包括(例如)錠劑、丸劑、膠囊、栓劑、口含錠、糖衣錠、溶液、糖漿劑、酏劑、藥囊、可注射劑、吸入劑及粉劑等。具體而言,諸如錠劑或膠囊之固態形式的口服調配物為較佳的。對於玻璃體內注射,溶液為較佳的。醫藥活性化合物之含量係有利地介於整個組合物之0.1至90 wt.-%例如自1至70 wt.-%的範圍內。 可例如藉由將根據式(I)之一或多種化合物與已知賦形劑(例如惰性稀釋劑、載劑、崩解劑、佐劑、界面活性劑、黏合劑及/或潤滑劑)混合來獲得合適之錠劑。錠劑亦可由若干層組成。熟習此項技術者基於其專業知識將熟悉適用於所需製劑之具體賦形劑、載劑及/或稀釋劑。較佳者為適用於所期望的具體調配物及投與方法之彼等。根據本發明之製劑或調配物可使用熟習此項技術者熟悉之本身已知的方法來製備,諸如藉由混合或組合至少一種根據本發明之式(I)化合物或此化合物之醫藥學上可接受之鹽與一或多種賦形劑、載劑及/或稀釋劑。 因此,根據本發明之另一態樣,提供醫藥組合物,其包含一或多種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽,視情況連同一或多種惰性載劑及/或稀釋劑。 又,提供醫藥組合物,其包含上文所提及之化合物或其醫藥學上可接受之鹽,視情況連同一或多種惰性載劑及/或稀釋劑中之一或多者,以上各者用於一種用於治療可藉由抑制血漿激肽釋放酶受影響之疾病或症狀的方法中。 詳言之,本發明提供用於治療諸如以下各者之眼科病症之方法中的根據本發明之醫藥組合物:糖尿病性視網膜病、增生性及非增生性視網膜病、糖尿病黃斑水腫(DME)、年齡相關黃斑變性(AMD)及息肉狀脈絡膜血管病變(PCV)。 此外,本發明係關於用於治療患者較佳地為人類之由非所需血漿激肽釋放酶活性介導之疾病或症狀的根據本發明之醫藥組合物之用途。 又,本發明係關於用於治療患者(較佳地為人類)之可藉由抑制血漿激肽釋放酶受影響之疾病或症狀的根據本發明之醫藥組合物之用途。 根據另一實施例,提供一種醫藥組合物,其包含一或多種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種額外治療劑,視情況連同一或多種惰性載劑及/或稀釋劑。較佳地,此組合物包含一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種額外治療劑。
組合療法
本發明化合物可進一步與一或多種、較佳一種額外治療劑組合。根據一個實施例,額外治療劑係選自適用於治療上文所描述之尤其與代謝疾病或症狀相關聯之疾病或症狀之治療劑或適用於治療眼部疾病之治療劑的群,該等疾病或症狀例如糖尿病、肥胖症、糖尿病併發症、高血壓、高脂質血症。適於此等組合之額外治療劑尤其包括例如強化關於提及之病症中的一者之一或多種活性物質治療效果及/或使一或多種活性物質的劑量減少之彼等。 因此,本發明化合物可與選自由以下各者組成之群之一或多種額外治療劑組合:抗糖尿病劑、用於治療超重及/或肥胖症之藥劑、用於治療高血壓、心臟衰竭及/或動脈粥樣硬化之藥劑及用於治療眼部疾病之藥劑。 舉例而言,抗糖尿病劑為二甲雙胍、磺醯基脲、那格列奈、瑞格列奈、噻唑啶二酮、PPAR-(α、γ或α/γ)促效劑或調節劑、α-葡萄糖苷酶抑制劑、DPPIV抑制劑、SGLT2-抑制劑、胰島素及胰島素類似物、GLP-1及GLP-1類似物或澱粉素及澱粉素類似物、賽克洛瑟(cycloset)、11β-HSD抑制劑。其他合適的組合搭配物為蛋白酪氨酸磷酸酶1、在肝臟中影響失調葡萄糖產生之物質之抑制劑,諸如,葡萄糖-6-磷酸酶或果糖-1,6-二磷酸酶、肝糖磷酸化酶、升糖素受體拮抗劑之抑制劑,及磷酸烯醇丙酮酸根羧激酶、肝糖合成酶激酶或丙酮酸根脫氫酶、α2-拮抗劑、CCR-2拮抗劑或葡萄糖激酶活化劑之抑制劑。一或多種脂質降低劑亦適合作為組合搭配物,諸如HMG-CoA-還原酶抑制劑、纖維酸酯、菸鹼酸及其衍生物、PPAR-(α、γ或α/γ)促效劑或調節劑、PPAR-δ促效劑、ACAT抑制劑或膽固醇吸收抑制劑(諸如膽酸結合物質,諸如迴腸膽酸運輸抑制劑)、MTP抑制劑或HDL升高化合物(諸如CETP抑制劑或ABC1調節劑)。 舉例而言,用於治療超重及/或肥胖症之治療劑為大麻素受體1拮抗劑、MCH-1受體拮抗劑、MC4受體促效劑、NPY5或NPY2拮抗劑、β3-促效劑、瘦素或瘦素模擬物、5HT2c受體促效劑。 舉例而言,用於治療高血壓、慢性心臟衰竭及/或動脈粥樣硬化之治療劑為A-II拮抗劑或ACE抑制劑、ECE抑制劑、利尿劑、β-阻擋劑、Ca-拮抗劑、中樞性抗高血壓劑、α-2-腎上腺素激導性受體拮抗劑、中性內肽酶抑制劑、凝血細胞集合抑制劑及其他或其組合係合適的。血管緊張素II受體拮抗劑較佳地用於治療或預防高血壓及糖尿病併發症,常與諸如氫氯噻嗪之利尿劑組合。 舉例而言,用於治療眼部疾病之治療劑可包括經玻璃體內投與之皮質類固醇、經玻璃體內投與之抗VEGF治療、抗Ang2抑制劑、雙重抗VEGF/抗Ang2抑制劑、抗PDGF、雙抗VEGF/抗PDGF、VAP-1 (AOC3)抑制劑、補充抑制劑(例如補充因子3、5、B及D抑制劑)、緩激肽受體1拮抗劑、CCR-2拮抗劑。 用於眼部疾病之額外治療可包括雷射凝固治療。 上文所提及之組合搭配物之劑量通常為正常建議最低劑量的1/5至高達正常建議劑量的1/1。 較佳地,結合鍛煉及/或飲食來投與本發明化合物及/或包含視情況與一或多種額外治療劑組合之本發明化合物的醫藥組合物。 因此,在另一態樣中,本發明係關於與一或多種上下文所描述之額外治療劑組合之根據本發明之化合物之用途,其用於治療可受非所需血漿激肽釋放酶活性影響或介導的疾病或症狀、尤其如上下文所描述之疾病或症狀。 在另一態樣中,本發明係關於一種用於治療病患中可藉由抑制血漿激肽釋放酶受影響的疾病或症狀之方法,該方法包含將治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽結合治療有效量之一或多種額外治療劑投與需要此類治療之患者的步驟。 在另一態樣中,本發明係關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽結合一或多種額外治療劑之用途,其用於治療有需要之患者中可藉由抑制血漿激肽釋放酶受影響之疾病或症狀。 在又一態樣中,本發明係關於一種用於治療患者中由非所需血漿激肽釋放酶活性介導之疾病或症狀的方法,該方法包括將本發明之治療有效量之化合物結合上下文中所描述之治療有效量之一或多種額外治療劑投與需要此類治療之患者(較佳地為人類)之步驟。 與額外治療劑組合之根據本發明之化合物的使用可同時進行或以錯開的時間進行。 根據本發明之化合物及一或多種額外治療劑二者可在一種調配物(例如錠劑或膠囊)中一起出現,或分別在兩種相同或不同的調配物中出現(例如作為所謂的分裝部分之套組)。 因此,在另一態樣中,本發明係關於一種醫藥組合物,其包含根據本發明之化合物及一或多種於上下文所描述之額外治療劑,視情況連同一或多種惰性載劑及/或稀釋劑。 本發明之其他特徵及優點將自以下更詳細實例而變得顯而易見,該等實例以舉例方式說明本發明之原理。
實例及實驗資料
以下實例僅出於說明本發明之目的且並不意欲以任何方式限制本發明之範疇。 縮寫: Ac 乙醯基 ACN 乙腈 APCI 大氣壓化學電離 Boc 第三-丁氧基羰基 CDI 1,1'-羰基二咪唑 d 天 dba 二亞苄基丙酮 DCM 二氯甲烷 DIPEA N,N-二異丙基乙胺 DME 1,2-二甲氧基乙烷 DMF N,N-二甲基甲醯胺 DMSO 二甲亞碸 dppf 1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵 ESI 電噴霧電離(以MS為單位) EtOAc 乙酸乙酯 EtOH 醇 Ex. 實例 h 小時 HATU O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲
-六氟磷酸鹽 HPLC 高效液相層析法 HPLC-MS 耦合高效液相層析法-質譜分析 LC 液相層析法 LC-MS 耦合液相層析質譜法 M 莫耳(mol/L) MeOH 甲醇 min 分鐘 MS 質譜分析法 NMP 1-甲基-2-吡咯啶酮 PyBop (苯并三唑-1-基氧基)三吡咯啶鏻六氟磷酸鹽 PyBrop 溴三吡咯啶鏻六氟磷酸鹽 RP 逆相 rt 室溫 t
R
滯留時間(以HPLC / LC為單位) SFC 超臨界流體層析法 TBTU O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲
四氟硼酸鹽 TEA 三乙胺 TFA 三氟乙酸 THF 四氫呋喃 TLC 薄層層析法 UPLC-MS 超高效液相層析法-質譜分析法
一般技術說明
術語「環境溫度」及「室溫」可互換地使用且指代約20℃之溫度,例如15至25℃。 通常,已獲得用於所製備化合物之
1
H-NMR及/或質譜。 除非另外規定,否則含有對掌性中心之化合物具有所描繪之立體化學。立體化學之指派已藉由使用已知立體化學之對掌性起始材料、藉由已知立體化學之立體選擇性合成或藉由生物活動進行。
A) 分析方法 UPLC - MS 及 HPLC - MS 方法 : 方法 1
儀器: LC/MS Waters Acquity UPLC系統DAD,SQD單一四極 柱: BEH C18 1.7 µm 2.1×50 mm,溫度35℃ 移動相: A = H
2
O 90% + CH
3
CN 10% + NH
4
COOH 5 mM B = CH
3
CN 90% + H
2
O 10% 以min為單位之時間 %A %B 以mL/min為單位之流動速率 0.00 100 0 0.70 1.20 0 100 0.70 1.45 0 100 0.70 1.55 100 0 0.70 1.75 100 0 0.70 偵測: UV 254 nm 偵測: SQD,單一四極 離子源: ESI
+
/ ESI
-
掃描範圍: 90-900 amu
方法 2
儀器: LC/MS ThermoFinnigan HPLC量測儀DAD,MSQ單一四極 柱: Synergi Hydro RP100A,2.5 µm,3×50 mm 移動相: A = H
2
O 90% + 10% CH
3
CN + NH
4
COOH 10 mM B = CH
3
CN 90% + H
2
O 10% + NH
4
COOH 10 mM 以min為單位之時間:%A %B 以mL/min為單位之流動速率 0.00 100 0 1.2 0.50 100 0 1.2 6.50 0 100 1.2 7.50 0 100 1.2 8.00 100 0 1.2 9.00 100 0 1.2 偵測: UV 254 nm 偵測: Finnigan MSQ,單一四極 離子源: APCI
+
/APCI
-
掃描範圍: 100-900 amu
方法 3
儀器: LC/MS Waters Acquity UPLC系統DAD,SQD單一四極 柱: BEH C18 1.7 µm 2.1×50 mm,溫度35℃ 移動相: A = H
2
O 90% + CH
3
CN 10% + NH
4
HCO
3
5 mM B = CH
3
CN 90% + H
2
O 10% 以min為單位之時間 %A %B 以mL/min為單位之流動速率 0.00 100 0 0.70 1.20 0 100 0.70 1.45 0 100 0.70 1.55 100 0 0.70 1.75 100 0 0.70 偵測: UV 254 nm 偵測: SQD,單一四極 離子源: ESI
+
/ ESI
-
掃描範圍: 90-900 amu
方法 4
儀器: LC/MS Waters Alliance 2695 HPLC系統DAD,Quattro Micro三重四極 柱: Atlantis dC18 5 µm 4.6×50 mm,溫度35℃ 移動相: A = H
2
O 90% + 10% CH
3
CN + CF
3
COOH 0.05% B = CH
3
CN 90% + 10% H
2
O 以min為單位之時間 %A %B 以mL/min為單位之流動速率 0.00 100 0 1.3 0.70 100 0 1.3 4.5 0 100 1.3 5.80 0 100 1.3 6.00 100 0 1.3 偵測: UV 254 nm 偵測: Quattro Micro,三重四極 離子源: ESI
+
掃描範圍: 90-1000 amu
方法 5
儀器: LC/MS Waters Alliance 2695 HPLC系統DAD,Quattro Micro三重四極 柱: Zorbax Eclipse XDB-C18 3.5 µm 4.6×50 mm,溫度35℃ 移動相: A = H
2
O 90% + 10% CH
3
CN + NH
4
COOH 5mM B = CH
3
CN 90% + 10% H
2
O 以min為單位之時間 %A %B 以mL/min為單位之流動速率 0.00 100 0 1.3 4.50 0 100 1.3 5.80 0 100 1.3 6.00 100 0 1.3 偵測: UV 254 nm 偵測: Quattro Micro,三重四極 離子源: ESI
+
/ESI
-
掃描範圍: 90-1000 amu
方法 6
儀器: LC/MS Waters Alliance 2695 HPLC系統DAD,Quattro Micro三重四極 柱: XBridge BEH 300 C18 3.5 µm 4.6×100 mm,溫度40℃ 移動相: A = H
2
O 90% + 10% CH
3
CN + NH
4
COOH 5mM B = CH
3
CN 90% + 10% H
2
O 以min為單位之時間 %A %B 以mL/min為單位之流動速率 0.00 100 0 1.3 12.00 50 50 1.3 18.00 0 100 1.3 20.00 0 100 1.3 偵測: UV 254 nm 偵測: Quattro Micro,三重四極 離子源: ESI
+
/ESI
-
掃描範圍: 90-1000 amu
GC-MS 方法: 方法 G1
儀器:GC/MS Thermo Scientific TRACE GC ULTRA,DSQ II MS單一四極 柱:安捷倫DB-5MS,25 m×0.25 mm×0.25 μm 載氣:氦氣,1 mL/min恆定流量 烘烤計劃:50℃,以10℃/min至100℃,以20℃/min至200 ℃,以30℃/min至320℃ (保持10分鐘)。 偵測:DSQ II MS單一四極 離子源: EI 掃描範圍: 50-450 amu
微波加熱 :
Discover® CEM儀器,配備有10 mL及35 mL容器
NMR 設備 :
在使用氘化二甲基甲醯胺(DMSO-d
6
)作為具有四甲基矽烷(TMS)之溶劑或使用剩餘溶劑峰作為內標之情況下,1H NMR光譜經記錄在Bruker Avance III (500 MHz)或Varian 400 (400 MHz)儀器上。相對於TMS以δ值(ppm)報告化學位移。
B) 中間產物之合成 中間產物 1 [ 6 -( 3 - 氮雜 - 雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己 - 3 - 基 )- 2 - 甲基 - 吡啶 - 3 - 基 ]- 甲醇 2-氟-5-(羥基甲基)-6-甲吡啶(1.0 g)、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷鹽酸鹽(1.27 g)及碳酸鉀(3.43 g)在微波小瓶中懸浮於NMP (10 mL)中且在微波輻射下在135℃下加熱4小時(以大約20℃之步進將溫度自80℃升高至135℃以避免過熱)。冷卻混合物、用乙酸乙酯(200 mL)稀釋混合物且用飽和氯化鈉水溶液(5×40 mL)洗滌混合物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發有機相,且藉由急驟層析純化殘留物(含0-10%甲醇的二氯甲烷)以生成標題化合物。 LC (方法3): t
R
= 0.91分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 205 [M+H]
+
。
中間產物 2 [ 6 -( 5 - 氮雜 - 螺 [ 2 . 4 ] 庚 - 5 - 基 )- 2 - 甲基 - 吡啶 - 3 - 基 ]- 甲醇 2-氟-5-(羥基甲基)-6-甲吡啶(0.5 g)、5-氮雜-螺[2.4]庚烷鹽酸鹽(0.71 g)及碳酸鉀(1.72 g)在微波小瓶中懸浮於NMP (1 mL)中且在微波輻射下在160℃下加熱5小時(以大約20℃步進將溫度自80℃升高至160℃以避免過熱)。冷卻混合物、用二氯甲烷及水稀釋混合物且用鹽水洗滌混合物。使有機相乾燥且蒸發有機相且藉由急驟層析純化殘留物(含0-100%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法3): t
R
= 0.94分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 219 [M+H]
+
。
中間產物 3 [ 2 -( 3 - 氮雜 - 雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 )- 4 - 甲基嘧啶 - 5 - 基 ] 甲醇 步驟 1 : 乙基 2 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基嘧啶 - 5 - 羧酸鹽
乙基2-氯-4-甲基嘧啶-5-羧酸鹽(1.0 g)、3-氮雜雙環[3.1.0]己烷鹽酸鹽(657 mg)及碳酸鉀(2.07 g)懸浮於無水NMP (20 mL)中且在90℃下攪拌3小時。冷卻混合物、用二氯甲烷及水稀釋混合物且用鹽水洗滌混合物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發有機相且藉由急驟層析純化殘留物(含10%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法3): t
R
= 1.28分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 248 [M+H]
+
。
步驟 2 : ( 2 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基嘧啶 - 5 - 基 ) 甲醇
乙基2-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基嘧啶-5-羧酸鹽(1.1 g)懸浮於無水THF (15 mL)中且冷卻至0℃。添加含硼氫化鋰之THF溶液(2M,3.39 mL)且使混合物升溫至室溫。添加甲醇(270 µL),將混合物加熱至60℃且攪拌3小時。添加水(2 mL)且蒸發溶劑,用二氯甲烷及水稀釋殘留物且用鹽水洗滌殘留物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且藉由急驟層析純化殘留物(含50-100%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法3): t
R
= 0.74分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 206 [M+H]
+
。
中間產物 4 乙基 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸鹽 將(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基嘧啶-3-基)甲醇(5.2 g)、乙基1H-吡唑-4-羧酸鹽(5.35 g)、三苯基膦(8.01 g)及二異丙基偶氮二羧酸酯(DIAD,6.02 mL)組合在無水THF (60 mL)中且在室溫下攪拌30分鐘。溶劑蒸發且藉由急驟層析純化殘留物(含0-70%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法4): t
R
= 3.26分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 327 [M+H]
+
。
中間產物 5 乙基 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 -( 三氟甲基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸鹽 將(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基嘧啶-3-基)甲醇(200 mg)、乙基3-(三氟甲基)吡唑-4-羧酸鹽(224 mg)、三苯基膦(310 mg)組合在無水THF(8 mL)中且冷卻至0℃。逐滴添加二異丙基偶氮二羧酸酯(DIAD,0.23 mL)且使混合物升溫至室溫且攪拌一小時。蒸發溶劑且藉由急驟層析純化殘留物(含0-70%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法4): t
R
= 3.82分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 395 [M+H]
+
。 以下中間產物類似於
中間產物 5
由對應的開始中間產物製備:
中間產物 12 乙基 1 -[( 6 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]-1H- 吡唑 -4- 羧酸鹽 1-[(6-氟-2-甲基嘧啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(
中間產物 10
,300 mg)、6,6-二氟-3-氮雜-雙環[3.1.0]己烷鹽酸鹽(213 mg)及碳酸鉀(346 mg)在微波小瓶中懸浮於無水NMP (5 mL)中且在微波輻射下在150℃下加熱2小時。冷卻混合物,用乙酸乙酯稀釋混合物且用水及鹽水洗滌混合物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發有機相且藉由急驟層析純化殘留物(含10-60%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法1): t
R
= 1.19分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 363 [M+H]
+
。 以下中間產物類似於
中間產物 12
由對應的開始中間產物製備:
中間產物 16 乙基 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1
,
2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸鹽 步驟 1 : 3 -[ 5 -( 疊氮基甲基 )- 6 - 甲基嘧啶 - 2 - 基 ]- 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷
(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基嘧啶-3-基)甲醇(
中間產物 1
,1.30 g)懸浮於無水甲苯(10 mL)與乙腈(10 mL)之混合物中且在氮氣氛圍下冷卻至0℃。逐滴添加二苯基磷醯基疊氮化物(1.78 mL),之後為DBU (1.36 mL)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時。移除溶劑,使殘留物再懸浮於乙酸乙酯中且用飽和碳酸鈉水溶液及鹽水洗滌殘留物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發有機相且藉由急驟層析純化殘留物(含0-80%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。
步驟 2 : 乙基 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸鹽
3-[5-疊氮基甲基)-6-甲基嘧啶-2-基]-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷(0.60 g)及丙炔酸乙酯(0.28 g)懸浮於第三丁醇(10 mL)與水(10 mL)及之混合物中且添加抗壞血酸鈉(0.52 g)及五水硫酸銅(0.13 g)。將混合物在室溫下攪拌6小時接著在真空下濃縮。添加水(40 mL)且用二氯甲烷萃取混合物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發有機相且藉由急驟層析純化殘留物(含0-100%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法2): t
R
= 4.47分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 328 [M+H]
+
。
中間產物 17 乙基 1 -[( 6 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸鹽 步驟 1 : 3 -( 疊氮基甲基 )- 6 - 二氟 - 2 - 甲基嘧啶
(6-二氟-2-甲基嘧啶-3-基)甲醇(0.80 g)懸浮於無水甲苯(10 mL)與乙腈(10 mL)之混合物中且在氮氣氛圍下冷卻至0℃。逐滴添加二苯基磷醯基疊氮化物(1.58 mL),之後為DBU (1.21 mL)。將混合物升溫至室溫且攪拌2小時。移除溶劑且藉由急驟層析純化殘留物(含10-100%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 GC (方法G1): t
R
= 7.24分鐘;質譜(EI
+
): m/z = 166 [M]
+
。
步驟 2 : 乙基 1 -[( 6 - 二氟 - 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸鹽
3-(疊氮基甲基)-6-二氟-2-甲基嘧啶(0.66 g)及丙炔酸乙酯(0.43 g)懸浮於第三丁醇(10 mL)與水(10 mL)之混合物中且添加抗壞血酸鈉(0.79 g)及五水硫酸銅(0.20 g)。將混合物在室溫下攪拌6小時接著在真空下濃縮。添加水(40 mL)且用二氯甲烷萃取混合物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發有機相且藉由急驟層析純化殘留物(含0-100%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法4): t
R
= 3.28分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 287 [M+H]
+
。
步驟 3 : 乙基 1 -[( 6 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸鹽
乙基1-[(6-氟-2-甲基嘧啶-3-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸鹽(90 mg)、6,6-二氟-3-氮雜-雙環[3.1.0]己烷鹽酸鹽(64 mg)及碳酸鉀(104 mg)在微波小瓶中懸浮於無水NMP (1 mL)中且在微波輻射下在130℃下加熱5小時之後為在145℃下加熱5小時。冷卻混合物、用乙酸乙酯稀釋混合物且用水洗滌混合物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發有機相且藉由急驟層析純化殘留物(含0-100%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法1): t
R
= 1.24分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 364 [M+H]
+
.
中間產物 18 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸 乙基1-[(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基嘧啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸鹽(
中間產物 4
,7.60 g)及單水合氫氧化鋰(1.07 g)懸浮於1,4-二噁烷(40 mL)與水(20 ml)之混合物中且在70℃下攪拌1小時。在真空下濃縮混合物、用水(50 mL)稀釋混合物且用乙醚(2×100 mL)洗滌混合物兩次。藉由逐滴添加濃縮的鹽酸水溶液而將水相酸化至大約pH4且接著用二氯甲烷(4×100 mL)萃取水相。使經組合之有機萃取物乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發溶劑以生成標題化合物。 LC (方法5): t
R
= 2.44分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 299 [M+H]
+
。 以下中間產物類似於
中間產物 18
由對應的開始中間產物製備:
中間產物 23 1 -[( 6 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基嘧啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸 , 鋰鹽 乙基1-[(6-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基嘧啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸鹽(
中間產物 12
,227 mg)及單水合氫氧化鋰(16.5 mg)懸浮於THF(5 ml)、甲醇(5 ml)及水(2 mL)之混合物中且在50℃下攪拌2小時。蒸發混合物,且使混合物在真空下乾燥以生成粗標題化合物。 LC (方法3): t
R
= 0.65分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 335 [M-Li+2H]
+
。 以下中間產物類似於
中間產物 23
由對應的開始中間產物製備:
中間產物 30 ( 5R )- N1 -[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ]- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 1 , 5 - 二胺 步驟 1 : ( 5S )- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 醇
甲酸(49.6mL,1.31 mol)溶解於二氯甲烷(900 mL)中,將混合物冷卻至0℃且在攪拌下逐滴添加三乙胺(161.8 mL,1.16 mol)。添加5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-酮(可購自ABCR AB 401490,50 g)及氯[(1S,2S)-(-)-2-胺基-1,2-二苯基乙基] (4-甲基苯磺醯基)醯胺基)(均三甲苯)釕(II) (4.7 mg)且使混合物緩慢升溫至室溫(在5小時內)接著攪拌隔夜。用飽和Na
2
CO
3
水溶液(200 mL)洗滌混合物。用異丙醇/DCM之1:3混合物萃取水相三次。組合有機相、使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且在真空下濃縮。藉由急驟層析純化殘留物(柱裝載有DCM,用乙酸乙酯溶離)以生成標題化合物。 GC (方法G1): t
R
= 7.36分鐘;質譜(EI
+
): m/z = 135 [M]
+
。 對掌性HPLC (Daicel chiralpak AS-H,己烷/醇85:15,1 mL/min,25℃) t
R
=5.44分鐘,99.9% (e.e.99.8%)。 藉由Noyori等人, J. Am. Chem. Soc., 1995, 117 (28),第7562-7563頁類比地指定絕對立體化學。
步驟 2 : 2 -[( 5R )- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 2 , 3 - 二氫 - 1H - 異吲哚 - 1 , 3 - 二酮
(5S)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-醇(39.3 g)溶解於無水THF (700 mL)中且添加鄰苯二甲醯亞胺(47.06 g)及三苯膦(83.9 g)。將溶液冷卻至0℃,接著在冰冷卻之情況下在2小時內逐滴添加偶氮二羧酸二乙酯(DEAD,甲苯中之40%溶液,145 mL)。使混合物升溫至室溫且攪拌隔夜。在真空下移除溶劑且使殘留物再溶解於乙酸乙酯中、用水和鹽水洗滌殘留物、使殘留物乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發溶劑。在真空中自甲苯蒸發殘留物兩次,接著使其溶解於甲苯(1000 mL)中,且添加氯化鎂(無水,經精細碾磨,100 g)。在60℃下攪拌混合物1小時,接著添加庚烷(1000 mL)。在60℃下攪拌混合物1小時,接著使其冷卻至室溫且攪拌隔夜。經由矽藻土過濾混合物且用甲苯/庚烷之1:1混合物洗滌濾餅。在真空中蒸發經組合過濾物且用乙酸乙酯處理殘留物以生成標題化合物。 LC (方法4): t
R
= 2.74分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 265 [M]
+
。 對掌性HPLC (Daicel Chiralpak AD-H,己烷/異丙醇70:30,1 mL/min,25℃) t
R
=10.08分鐘,98.6% (e.e.97.2%)。 來自步驟之母液蒸發且殘留物藉由急驟層析純化(含10-40%乙酸乙酯的環己烷)以生成第二批標題化合物。 LC (方法4): t
R
= 2.77分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 265 [M]
+
。 對掌性HPLC (Daicel Chiralpak AD-H,己烷/異丙醇70:30,1 mL/min,25℃) t
R
=10.09分鐘,92.0% (e.e.84%)。
步驟 3 : ( 5R )- 5 -( 1 , 3 - 二氧代 - 2 , 3 - 二氫 - 1H - 異吲哚 - 2 - 基
)
- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 2 - 鎓 - 2 - 醇鹽
使2-[(5R)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氫-1H-異吲哚-1,3-二酮(52.7 g)溶解於二氯甲烷(400 mL)中,使溶液冷卻至0℃,且在冷卻之情況下逐滴添加含3-氯過氧苯甲酸(77%,44.7 g)之二氯甲烷懸浮液(300 mL)。使混合物升溫至室溫且攪拌隔夜。混合物用飽和Na
2
CO
3
水溶液洗滌,收集有機層,使其乾燥(Na
2
SO
4
)且在真空下濃縮。自甲苯再結晶殘留物以生成標題化合物。LC (方法2): t
R
= 2.77分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 281 [M+H]
+
。對掌性HPLC (Daicel Chiralpak OJ-H,己烷/醇70:30,1 mL/min,25℃) t
R
=18.27分鐘,100%(e.e.100%)。 蒸發來自結晶步驟之母液以生成第二批粗標題化合物。 LC (方法3): t
R
= 0.70分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 281 [M]
+
。
步驟 4 : 2 -[( 5R )- 1 -{[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 }- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 2 , 3 - 二氫 - 1H - 異吲哚 - 1 , 3 - 二酮
使(5R)-5-(1,3-二氧代-2,3-二氫-1H-異吲哚-2-基)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-2-鎓-2-醇鹽(21.2 g)溶解於二氯甲烷(250 mL)中且冷卻至0℃。在攪拌下添加溴三吡咯啶鏻六氟磷酸鹽(45.8 g),之後為N,N-二異丙基乙胺(45.8 mL)及2,4-二甲氧基苯甲基胺(14.8 mL)。使混合物緩慢升溫至室溫且攪拌隔夜。用水和鹽水洗滌混合物,收集有機層,使其乾燥(Na
2
SO
4
)且濃縮。藉由急驟層析純化殘留物(含15-70%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法2): t
R
= 4.80分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 430 [M+H]
+
。對掌性HPLC (Daicel Chiralpak OJ-H,己烷/醇75:35,1 mL/min,25℃) t
R
=26.8分鐘,100% (e.e.100%)。
步驟 5 : ( 5R )- N1 -[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ]- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 1 , 5 - 二胺
使2-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]胺基}-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氫-1H-異吲哚-1,3-二酮(22.4 g)及水合肼(7.68 mL)溶解於醇(450 mL)及THF (450 mL)中。在70℃下將混合物加熱6小時。冷卻、過濾溶液,在真空中蒸發溶劑且在真空下使殘留物乾燥以生成標題化合物。 LC (方法2): t
R
= 3.20分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 300 [M+H]
+
。對掌性HPLC (Daicel Chiralpak OJ-H,己烷/醇80:20,1 mL/min,25℃) t
R
=17.23分鐘,100% (e.e.100%)。
中間產物 31 ( 5R )- 5H , 6H
,
7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 1 , 5 - 二胺二鹽酸鹽 使(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(3.2 g)溶解於HCl 37%水溶液(10 mL)中。在70℃下攪拌混合物10分鐘。在真空下濃縮混合物且用乙醚研磨殘留物以生成標題化合物。 LC (方法5): t
R
= 0.50分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 150 [M+H]
+
。
中間產物 32 ( 5R )- N1 -[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ]- 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 1 , 5 - 二胺 步驟 1 : 5 -( 三甲基矽烷基 ) 戊 - 4 - 炔 - 1 - 醇
使戊-4-炔-1-醇(5.0 g)溶解於無水四氫呋喃(700 mL)中,冷卻至-78℃且用正丁基鋰(75 mL之1.6 M己烷溶液)逐滴處理。在完成添加之後,在-78℃下攪拌混合物30分鐘,接著使其升溫至0℃且攪拌2小時。使混合物再冷卻至-78℃且用氯三甲基矽烷(15.8 mL)處理混合物。使混合物逐漸升溫至室溫且接著在50℃下加熱混合物12小時。接著將混合物分配於1 M鹽酸水溶液與乙醚之間。用鹽水洗滌有機相,且使有機相乾燥(MgSO
4
)。蒸發溶劑且藉由急驟層析純化殘留物(含10-40%乙酸乙酯的石油醚)以生成標題化合物。 質譜(ESI
+
): m/z = 157 [M+H]
+
。
步驟 2 : 5 -( 三甲基矽烷基 ) 戊 - 4 - 炔醛
使5-(三甲基矽烷基)戊-4-炔-1-醇(6.9 g)溶解於二氯甲烷(375 mL)中,冷卻至0℃且用1,1-二氫-1,1,1-三乙醯氧基-1,2-苯并碘氧雜環戊-3(1H)-酮(22.5 g)加以處理。在完成添加之後,使混合物緩慢升溫至室溫且攪拌混合物12小時。接著將混合物分配於飽和NaHCO
3
水溶液與二氯甲烷之間。使有機相乾燥(MgSO
4
)且蒸餾出溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(DCM)以生成標題化合物。 質譜(ESI
-
): m/z = 169 [M-H]
-
。
步驟 3 : 7 -( 三甲基矽烷基 ) 庚 - 1 , 6 - 二炔 - 3 - 醇
使5-(三甲基矽烷基)戊-4-炔醛(6.1 g)溶解於無水四氫呋喃(125 mL)中,冷卻至-20℃且用乙炔基溴化鎂(235 mL之0.5 M四氫呋喃溶液)逐滴加以處理。在完成添加之後,將混合物緩慢升溫至0℃且攪拌混合物20分鐘。接著將混合物分配於飽和NH
4
Cl水溶液與乙酸乙酯之間。使有機相經乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(二氯甲烷)以生成直接用於下一步驟中之標題化合物。
步驟 4 : 3 - 甲基 - 1 -( 三甲基矽烷基 )- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 醇
使7-(三甲基矽烷基)庚-1,6-二炔-3-醇(2.1 g)及乙腈(1.8 mL)溶解於甲苯(7 mL)中且用氬氣淨化其達5分鐘。添加環戊二烯基鈷二羰基(150 µL)且在110℃下攪拌混合物12小時。接著將混合物分配於乙酸乙酯與鹽水之間。使有機相乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發溶劑。藉由Al
2
O
3
層析純化殘留物(含5%甲醇的二氯甲烷)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.65分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 222 [M+H]
+
。
步驟 5 : 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 醇
使3-甲基-1-(三甲基矽烷基)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-醇(1.5 g)溶解於1,4-二噁烷(20 mL)中、用氫氯酸(8.3 mL之4 M 1,4-二噁烷溶液)加以處理,且在90℃下攪拌其12小時且在80℃下另外攪拌其48小時。添加氨(5.2 mL之7 M甲醇溶液),在真空中蒸發溶劑且藉由急驟層析純化殘留物(含5-10%甲醇的二氯甲烷)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.08分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 150 [M+H]
+
。
步驟 6 : 2 -{ 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 }- 2 , 3 - 二氫 - 1H - 異吲哚 - 1 , 3 - 二酮
使3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-醇(500 mg)、鄰苯二甲醯亞胺(590 mg)及三丁基膦(1.16 mL)溶解於四氫呋喃(5 ml)中,冷卻至0℃且用含二-第三丁基偶氮二羧酸酯(DBAD,1.0 g)的四氫呋喃溶液(5 ml)逐滴加以處理。接著在升溫至室溫時攪拌混合物12小時。將混合物分配於飽和NaHCO
3
水溶液與乙酸乙酯之間。使有機相乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(含30-70%乙酸乙酯的石油醚)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.68分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 279 [M+H]
+
。
步驟 7 : 5 -( 1 , 3 - 二氧代 - 2 , 3 - 二氫 - 1H - 異吲哚 - 2 - 基 )- 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 2 - 鎓 - 2 - 醇鹽
使2-{3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基}-2,3-二氫-1H-異吲哚-1,3-二酮(905 mg)溶解於二氯甲烷(20 ml)中,冷卻至0℃且用3-氯過苯甲酸(960 mg)加以處理。攪拌混合物2小時,將混合物分配於飽和Na
2
SO
3
水溶液與二氯甲烷之間。使有機相乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(含5-10%甲醇的二氯甲烷)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.78分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 295 [M+H]
+
。
步驟 8 : 2-[( 5R )- 1 -{[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 }- 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 2 , 3 - 二氫 - 1H - 異吲哚 - 1 , 3 - 二酮
使5-(1,3-二氧代-2,3-二氫-1H-異吲哚-2-基)-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-2-鎓-2-醇鹽(740 mg)溶解於二氯甲烷(8 mL)中且冷卻至0℃。在攪拌下添加溴三吡咯啶鏻六氟磷酸鹽(1.52 g),之後為N,N-二異丙基乙胺(1.52 mL)及2,4-二甲氧基苯甲基胺(490 µL)。使混合物緩慢升溫至室溫且攪拌48小時。將混合物分配於飽和Na
2
CO
3
水溶液與二氯甲烷之間。使有機相乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(30-70%乙酸乙酯的石油醚)以生成呈外消旋形式之標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.87分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 444 [M+H]
+
。在對掌性相之SFC分離後,自外消旋混合物獲得純對映異構體(柱:Chiralpak
®
IC (Daicel Corp.),5 µm,250 mm×21.2 mm;溶離劑:scCO
2
/2-丙醇65:35,40℃,150巴,60 mL/min): 2-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]胺基}-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氫-1H-異吲哚-1,3-二酮:t
R
= 7.38分鐘 2-[((5S)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]胺基}-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氫-1H-異吲哚-1,3-二酮:t
R
= 4.56分鐘
步驟 9 : ( 5R )- N1 -[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ]- 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 1 , 5 - 二胺
使2-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]胺基}-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-2,3-二氫-1H-異吲哚-1,3-二酮(340 mg)溶解於甲醇(2 mL)中,用水合肼(76 µL)加以處理,且將混合物加熱12小時至50℃。接著用乙酸乙酯稀釋混合物且攪拌混合物10分鐘。藉由過濾移除沈澱物且在真空下濃縮母液。藉由逆相HPLC純化殘留物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.62分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 314 [M+H]
+
。
中間產物 33 ( 5R )- 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 1 , 5 - 二胺二鹽酸鹽 使(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(150 mg)溶解於濃縮的鹽酸水溶液(1 mL)中且在室溫下攪拌其1小時。過濾混合物且真空濃縮混合物。添加甲苯至殘留物3次且在真空中再次蒸發甲苯以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.08分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 164 [M+H]
+
。
中間產物 34 1 -({ 6 -[( 1R , 5S , 6R )- 6 - 氰基 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 ]- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 } 甲基 )- N -[( 5R )- 1 -{[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 }- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]-1H- 吡唑 -4- 羧醯胺 步驟 1 : ( 1R , 5S , 6R )- 3 -{ 5 -[( 4 -{[( 5R )- 1 -{[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 }- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ] 胺甲醯基 }- 1H - 吡唑 - 1 - 基 ) 甲基 ]- 6 - 甲基吡啶 - 2 - 基 }- 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 6 - 羧醯胺
使1-({6-[(1R,5S,6R)-6-胺甲醯基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}甲基)-1H-吡唑-4-羧酸,鋰鹽(中間產物24,100 mg)、(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(95 mg)、PyBOP (180 mg)及三乙胺(200 µL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中且在室溫下隔夜攪拌反應混合物。在真空中蒸發溶劑,使殘留物懸浮於乙酸乙酯中,用0.2 M NaOH水溶液及鹽水洗滌殘留物,使殘留物乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(0-10%甲醇的DCM)以生成標題化合物。LC (方法3): t
R
= 0.93分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 623 [M+H]
+
。
步驟 2 : 1 -({ 6 -[( 1R , 5S , 6R )- 6 - 氰基 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 ]- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 } 甲基 )- N -[( 5R )- 1 -{[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 }- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺
使(1R,5S,6R)-3-{5-[(4-{[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]胺基}-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基)胺甲醯基}-1H-吡唑-1-基)甲基]-6-甲基吡啶-2-基}-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-6-羧醯胺(70 mg)溶解於無水二氯甲烷(5 mL)與無水乙腈(2 mL)之混合物中且添加甲基N-(三乙基銨基磺醯基)胺基甲酸鹽,內鹽(Burgess試劑,29 mg)。在室溫下攪拌混合物3天接著在真空下濃縮混合物。藉由急驟層析純化殘留物(含0-10% MeOH的EtOAc)以生成標題化合物。 LC (方法3): t
R
= 1.04分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 605 [M+H]
+
。
中間產物 35 1 -[( 6 -{ 5 - 氮雜螺 [ 2 . 4 ] 庚 - 5 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- N -[( 5R )- 1 -{[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 }- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(6-{5-氮雜螺[2.4]庚-5-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸,鋰鹽(
中間產物 28
,100 mg)、(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(93 mg)、PyBOP (242 mg)及三乙胺(0.30 mL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中且將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在真空中蒸發溶劑,使殘留物懸浮於二氯甲烷中,用飽和NaHCO
3
水溶液及鹽水洗滌殘留物,使殘留物乾燥(Na
2
SO
4
)且蒸發溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(含30-100% EtOAc的環己烷)以生成標題化合物。LC (方法3): t
R
= 1.26分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 594 [M+H]
+
。
中間產物 36 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- N -[( 5R )- 1 -{[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 }- 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 3 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲基-1H-吡唑-4-羧酸(
中間產物 19
,145 mg)及N,N-二異丙基乙胺(0.13 mL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中,接著添加HATU (120 mg)。攪拌反應混合物15分鐘,接著添加(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(360 mg)。在室溫下攪拌反應混合物90分鐘。混合物用水稀釋。藉由過濾採集沈澱物且使其溶解於乙酸乙酯中。在用MgSO
4
乾燥之後,在真空中蒸發溶劑以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.77分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 608 [M+H]
+
。
中間產物 37 3 -[ 5 -( 疊氮基甲基 )- 4 - 甲基吡啶 - 2 - 基 ]- 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 使(2-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲醇(370 mg)溶解於甲苯(5 mL)及乙腈(5 mL)中,冷卻至-20℃且用二苯基磷醯基疊氮化物(420 µL)及2,3,4,6,7,8,9,10-八氫-嘧啶并[1,2-a]吖庚因(DBU,321 µL)加以處理。在室溫下攪拌混合物12小時且接著將其分配於飽和NaHCO
3
水溶液與乙酸乙酯之間。用鹽水洗滌有機相,且使其乾燥(MgSO
4
)。蒸發溶劑以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.78分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 231 [M+H]
+
。
中間產物 38 1 -[( 2 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸 , 鋰鹽 步驟 1 : 乙基 1 -[( 2 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸鹽
3-[5-(疊氮基甲基)-4-甲基吡啶-2-基]-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷(343 mg)及丙炔酸乙酯(170 µL)懸浮於第三丁醇(10 mL)、水(10 mL)與抗壞血酸鈉(295 mg)之混合物中且添加五水硫酸銅(48 mg)。在室溫下攪拌混合物48小時接著在真空下濃縮混合物。將混合物分配於飽和NaHCO
3
水溶液與二氯甲烷之間。用鹽水洗滌有機相,且使其乾燥(MgSO
4
)。藉由急驟層析純化殘留物(含0-50%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.83分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 329 [M+H]
+
。
步驟 2 : 1 -[( 2 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸 , 鋰鹽
在50℃下攪拌乙基1-[(2-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸鹽(50 mg)、含LiOH(6 mg)的四氫呋喃(100 µL)、水(300 µL)及甲醇(150 µL)之混合物12小時。在真空中蒸發溶劑以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.69分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 301 [M-Li+2H]
+
。
中間產物 39 ( 5R )- 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 1 , 5 - 二胺 使(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(2.3 g)溶解於37% HCl水溶液(10 mL)中。在室溫下攪拌混合物10分鐘。接著在真空下濃縮混合物且使殘留物再溶解在含10%甲醇的二氯甲烷中。藉由添加氨(7 M甲醇溶液)鹼化混合物且劇烈攪拌混合物30分鐘。藉由過濾移除沈澱物且濃縮母液。藉由Al
2
O
3
層析純化殘留物(含0-20%甲醇的二氯甲烷)以生成標題化合物。 質譜(ESI
+
): m/z = 150 [M+H]
+
。
中間產物 40 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 -( 二氟甲基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸 , 三氟乙酸鹽 步驟 1 : 乙基 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 -( 二氟甲基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸鹽
使(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(410 mg)、三丁基膦(600 µL)及乙基5-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸鹽(380 mg)溶解於四氫呋喃(10 mL)中,冷卻至-10℃且用二-第三丁基偶氮二羧酸酯(DBAD,510 mg)加以處理。接著在室溫下攪拌混合物30分鐘。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法8): t
R
= 1.14分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 377 [M+H]
+
。
步驟 2 : 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 -( 二氟甲基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸 , 三氟乙酸鹽
在50℃下攪拌乙基1-[(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸鹽(240 mg)、含NaOH (3 mL之1 M水溶液)之1,4-二噁烷(2 mL)及甲醇(5 mL)之混合物4小時。藉由添加氫氯酸(1 M水溶液)中和混合物且藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、三氟乙酸)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.72分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 349 [M+H]
+
。
中間產物 41 3 -[ 5 -( 疊氮基甲基 )- 4 - 甲基吡啶 - 2 - 基 ]- 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 步驟 1 : 乙基 2 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 羧酸鹽
將K
2
CO
3
(827 mg)添加至含乙基2-氯-4-甲基吡啶-5-羧酸鹽(400 mg)及6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷鹽酸鹽(341 mg)之N,N-二甲基甲醯胺溶液(4 mL),且將混合物加熱1小時至90℃。接著將混合物分配於水與乙酸乙酯之間。使有機相乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發溶劑以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 1.07分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 284 [M+H]
+
。
步驟 2 : 2 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲醇
使乙基2-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-羧酸鹽(200 mg)溶解於四氫呋喃(3 mL)中,冷卻至0℃,用LiBH
4
(77 mg)及甲醇(85 µL)加以處理。在50℃下攪拌混合物12小時。其後用水(10 mL)緩慢處理混合物,劇烈攪拌混合物10分鐘且接著將混合物分配於水與乙酸乙酯之間。用乙酸乙酯萃取水相。使經組合之有機相乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發溶劑以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.65分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 242 [M+H]
+
。
步驟 3 : 3 -[ 5 -( 疊氮基甲基 )- 4 - 甲基吡啶 - 2 - 基 ]- 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷
使2-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲醇(254 mg)溶解於甲苯(5 mL)及乙腈(5 mL)中,冷卻至0℃且用二苯基磷醯基疊氮化物(245 µL)及2,3,4,6,7,8,9,10-八氫-嘧啶并[1,2-a]吖庚因(188 µL)加以處理。在室溫下攪拌混合物12小時且接著將其分配於飽和NaHCO
3
水溶液與乙酸乙酯之間。用鹽水洗滌有機相,且使其乾燥(MgSO
4
)。蒸發溶劑以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.93分鐘;質譜 (ESI
+
): m/z = 267 [M+H]
+
。
中間產物 42 1 -[( 2 -{ 6
,
6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸 , 鋰鹽 步驟 1 : 乙基 1 -[( 2 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸鹽
3-[5-(疊氮基甲基)-4-甲基吡啶-2-基]-6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷(512 mg)及丙炔酸乙酯(110 µL)懸浮於第三丁醇(10 mL)、水(10 mL)及抗壞血酸鈉(190 mg)之混合物中,且添加五水硫酸銅(31 mg)。在室溫下攪拌混合物12小時。添加丙炔酸乙酯(110 µL)、五水硫酸銅(31 mg)及抗壞血酸鈉(190 mg)且攪拌混合物另外2小時。接著在真空下濃縮混合物且藉由急驟層析純化殘留物(含0-50%乙酸乙酯的環己烷)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.91分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 365 [M+H]
+
。
步驟 2 : 1 -[( 2 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧酸 , 鋰鹽
在50℃下攪拌乙基1-[(2-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基-吡啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸鹽(171 mg)、含LiOH (30 mg)的四氫呋喃(2 mL)、水(2 mL)及甲醇(500 µL)之混合物12小時。在真空中蒸發溶劑以生成直接用於下一步驟中之標題化合物。
中間產物 43 1 -[( 2 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- N -[( 5R )- 1 -{[( 2 , 4 - 二甲氧基苯基 ) 甲基 ] 胺基 }- 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(2-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸,鋰鹽(15 mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(500 µL)中,用HATU (17 mg)加以處理且在室溫下攪拌其10分鐘。添加(5R)-N1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(14 mg)及N,N-二異丙基乙胺(23 µL),且在室溫下攪拌混合物3小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC 方法7): t
R
= 0.85分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 632 [M+H]
+
。
中間產物 44 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 - 甲氧基 - 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸 , 三氟乙酸鹽 步驟 1 : 乙基 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 - 甲氧基 - 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸鹽
使(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(410 mg)、三丁基膦(595 µL)及乙基3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸鹽(340 mg)溶解於四氫呋喃(10 mL)中,冷卻至-10℃且用二-第三丁基偶氮二羧酸酯(DBAD,510 mg)加以處理。接著在室溫下攪拌混合物30分鐘。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法8): t
R
= 1.09分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 357 [M+H]
+
。
步驟 2 : 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 - 甲氧基 - 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸 , 三氟乙酸鹽
在50℃下攪拌乙基1-[(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸鹽(310 mg)、含NaOH (5 mL之1 M水溶液)之1,4-二噁烷(2 mL)及甲醇(5 mL)之混合物4小時。藉由添加氫氯酸(1 M水溶液)中和混合物且藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、三氟乙酸)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.67分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 329 [M+H]
+
。
中間產物 45 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 - 氟 - 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 步驟 1 : 1 -[( 6 - 氟 - 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧酸
在60℃下攪拌乙基1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸鹽(9.1 g)、含LiOH (1.7 g)之四氫呋喃(150 mL)及水(150 mL)之混合物48小時。添加乙酸(3.8 mL),在真空中蒸發溶劑且將殘留物分配於水與二氯甲烷/三氯甲烷9:1之間。用鹽水洗滌有機相,使其乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發以生成直接用於下一步驟中之標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.72分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 236 [Mi+H]
+
.。
步驟 2 : N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 - 氟 - 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺
使1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸(530 mg)、(5R)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺二鹽酸鹽(500 mg)及N,N-二異丙基乙胺(1.5 mL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中,用HATU (875 mg)加以處理且在室溫下攪拌其1小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法8): t
R
= 0.75分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 367 [M+H]
+
。
C) 根據本發明之化合物之合成 實例 1 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸(
中間產物 18
,480 mg)及N,N-二異丙基乙胺(0.70 mL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中,接著添加HATU (734 mg)。攪拌反應混合物5分鐘,接著添加(5R)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺二鹽酸鹽(
中間產物 31
,360 mg)。反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在真空中蒸發溶劑且藉由逆相HPLC純化殘留物(乙腈、水)以生成標題化合物。LC (方法5): t
R
= 3.04分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 430 [M+H]
+
。以下實例類似於
實例 1
來製備,自對應的中間產物開始:
實例 9 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(6-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸,鋰鹽(
中間產物 23
,212 mg)、(5R)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺二鹽酸鹽(
中間產物 31
,152 mg)、HATU (260 mg)及N,N-二異丙基乙胺(0.32 mL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中且使反應混合物在室溫下攪拌隔夜。在真空中蒸發溶劑,使殘留物懸浮於乙酸乙酯中,用0.2 M NaOH水溶液及鹽水洗滌殘留物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且在真空中蒸發溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(含0-10%甲醇的DCM)以生成標題化合物。LC (方法4): t
R
= 2.57分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 466 [M+H]
+
。
實例 10 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(6-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸,鋰鹽(
中間產物 23
,28 mg)、(5R)-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺二鹽酸鹽(
中間產物 33
,20 mg)、PyBOP (53 mg)及N,N-二異丙基乙胺(73 µL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中且使反應混合物在50℃下攪拌2小時。在真空中蒸發溶劑,使殘留物懸浮於乙酸乙酯中,用0.2 M NaOH水溶液及鹽水洗滌殘留物。使有機相乾燥(Na
2
SO
4
)且在真空中蒸發溶劑。藉由急驟層析純化殘留物(0-10%甲醇的DCM)以生成標題化合物。LC (方法6): t
R
= 8.19分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 480 [M+H]
+
。 以下實例類似於
實例 10
來製備,自對應的中間產物開始:
實例 13 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -({ 6 -[( 1R , 5S , 6R )- 6 - 氰基 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 ]- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 } 甲基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-({6-[(1R,5S,6R)-6-氰基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}-甲基)-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]胺基}-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-1H-吡唑-4-羧酸鹽(
中間產物 34
,10 mg)溶解於無水二氯甲烷(2 mL)中且冷卻至0℃。添加三氟乙酸(0.2 mL)且攪拌混合物1小時。蒸發溶劑,使殘留物再溶解在乙腈中且將其裝載至預洗滌SCX強離子交換筒上。用乙腈、水及甲醇洗滌該筒,且用含7M氨的甲醇溶離產物。蒸發溶劑,且在真空下使殘留物乾燥以生成標題化合物。 LC (方法2): t
R
= 3.08分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 455 [M+H]
+
。 以下實例類似於
實例 13
來製備,自對應的中間產物開始:
實例 15 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 - 甲基 - 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]胺基}-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-3-甲基-1H-吡唑-4-羧醯胺(
中間產物 36
,150 mg)溶解於無水二氯甲烷(2 mL)中。添加三氟乙酸(0.5 mL)且攪拌混合物2小時。溶劑在真空中蒸發。使殘留物溶解於二氯甲烷中且用飽和K
2
CO
3
水溶液萃取殘留物。用含5%甲醇的二氯甲烷萃取水溶液3次。使經組合之有機相乾燥(MgSO
4
)且在真空中蒸發溶劑。藉由Al
2
O
3
層析純化殘留物(1%甲醇的二氯甲烷)。藉由對掌性相之SFC分離進一步純化由此獲得之產物(柱:CHIRAL ART
®
Amylose-SA,5 µm,250 mm×20 mm;溶離劑:scCO
2
/20mM氨的甲醇70:30,40℃,150巴,60 mL/min)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.66分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 458 [M+H]
+
。
實例 16 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 2 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(2-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸,鋰鹽(10 mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(500 µL)中,用HATU (12.4 mg)加以處理且在室溫下攪拌其10分鐘。添加(5R)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(4.9 mg)及N,N-二異丙基乙胺(20 µL)且在室溫下攪拌混合物3小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法8): t
R
= 0.86分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 432 [M+H]
+
。
實例 17 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 2 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(2-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧酸,鋰鹽(10 mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(500 µL)中,用HATU (12.5 mg)加以處理且在室溫下攪拌其10分鐘。添加(5R)-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺二鹽酸鹽(7.7 mg)及N,N-二異丙基乙胺(20 µL)且在室溫下攪拌混合物12小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.68分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 445 [M+H]
+
。
實例 18 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 2 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(2-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸,鋰鹽(10 mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(500 µL)中,用HATU (12.4 mg)加以處理且在室溫下攪拌其10分鐘。添加(5R)-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺二氫氯化物(7.7 mg)及N,N-二異丙基乙胺(20 µL)且在室溫下攪拌混合物3小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法8): t
R
= 0.89分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 446 [M+H]
+
。
實例 19 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 -( 二氟甲基 )- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-羧酸,三氟乙酸鹽(46 mg)及N,N-二異丙基乙胺(100 µL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中,用HATU (40 mg)加以處理且在室溫下攪拌其5分鐘。添加(5R)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺二鹽酸鹽(23 mg)且在室溫下攪拌混合物12小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、三氟乙酸)以生成標題化合物。 LC (方法10): t
R
= 0.39分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 480 [M+H]
+
。
實例 20 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 2 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(2-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧酸,鋰鹽(10 mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(500 µL)中,用HATU (11 mg)加以處理且在室溫下攪拌其10分鐘。添加(5R)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺(4.4 mg)及N,N-二異丙基乙胺(20 µL)且在室溫下攪拌混合物3小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法8): t
R
= 0.85分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 468 [M+H]
+
。
實例 21 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 3 - 甲基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 2 -{ 6 , 6 - 二氟 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 4 - 甲基吡啶 - 5 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 1 , 2 , 3 - 三唑 - 4 - 羧醯胺 在室溫下攪拌1-[(2-{6,6-二氟-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-4-甲基吡啶-5-基)甲基]-N-[(5R)-1-{[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]胺基}-3-甲基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-1H-1,2,3-三唑-4-羧醯胺(19 mg)及濃縮的鹽酸水溶液(1 mL)之混合物30分鐘。在真空中蒸發溶劑,使殘留物溶解於甲醇中且藉由添加三乙胺鹼化殘留物。接著藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法7): t
R
= 0.75分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 482 [M+H]
+
。
實例 22 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 -{ 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 3 - 甲氧基 - 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 使1-[(6-{3-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-甲氧基-1H-吡唑-4-羧酸,三氟乙酸鹽(44 mg)及N,N-二異丙基乙胺(100 µL)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中,用HATU (40 mg)加以處理且在室溫下攪拌其5分鐘。添加(5R)-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-1,5-二胺二鹽酸鹽(23 mg)且在室溫下攪拌混合物12小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈,水,三氟乙酸)。藉由逆相HPLC純化由此獲得之產物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法10): t
R
= 0.36分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 460 [M+H]
+
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實例 23 N -[( 5R )- 1 - 胺基 - 5H , 6H , 7H - 環戊并 [ c ] 吡啶 - 5 - 基 ]- 1 -[( 6 -{ 6 , 6 - 二甲基 - 3 - 氮雜雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己烷 - 3 - 基 }- 2 - 甲基吡啶 - 3 - 基 ) 甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 羧醯胺 將N-[(5R)-1-胺基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧醯胺(50 mg)、6,6-二甲基-3-氮雜雙環[3.1.0]己烷(23 mg)及含N,N-二異丙基乙胺(70 µL)之二甲基甲醯胺(1 mL)的混合物加熱至100℃達12小時。藉由逆相HPLC純化混合物(乙腈、水、氨)以生成標題化合物。 LC (方法11): t
R
= 0.79分鐘;質譜(ESI
+
): m/z = 458 [M+H]
+
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實例 24 1 -[ 2 - 甲基 - 6 -(( 1S , 5R , 6R )- 6 - 甲基 - 3 - 氮雜 - 雙環 [ 3 . 1 . 0 ] 己 - 3 - 基 )- 吡啶 - 3 - 基甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 甲酸 (( R )- 1 - 胺基 - 6 , 7 - 二氫 - 5H -[ 2 ] 吡啶 - 5 - 基 )- 醯胺 標題化合物係自N-[(5R)-1-胺基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧醯胺及(1S,5R,6R)-6-甲基-3-氮雜-雙環[3.1.0]己烷製備,其後為類似於針對實例23所描述之程序。LC (方法12): t
R
= 0.74分鐘;質譜,ESI pos.+neg. (Loop-Inj.): m/z = 444 [M+H]
+
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實例 25 1 -[ 6 -( 2 - 氮雜 - 螺 [ 3 . 3 ] 庚 - 2 - 基 )- 2 - 甲基 - 吡啶 - 3 - 基甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 甲酸 (( R )- 1 - 胺基 - 6 , 7 - 二氫 - 5H -[ 2 ] 吡啶 - 5 - 基 )- 醯胺 標題化合物係自N-[(5R)-1-胺基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧醯胺及2-氮雜-螺[3.3]庚烷製備,其後為類似於針對實例23所描述之程序。LC (方法12): t
R
= 0.70分鐘;質譜,ESI pos.+neg. (Loop-Inj.): m/z = 444 [M+H]
+
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實例 26 1 -[ 6 -( 5 - 氮雜 - 螺 [ 2 . 3 ] 己 - 5 - 基 )- 2 - 甲基 - 吡啶 - 3 - 基甲基 ]- 1H - 吡唑 - 4 - 甲酸 (( R )- 1 - 胺基 - 6 , 7 - 二氫 - 5H -[ 2 ] 吡啶 - 5 - 基 )- 醯胺 標題化合物係自N-[(5R)-1-胺基-5H,6H,7H-環戊并[c]吡啶-5-基]-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-羧醯胺及(1S,5R,6R)-6-甲基-3-氮雜-雙環[3.1.0]己烷製備,其後為類似於針對實例23所描述之程序。LC (方法11): t
R
= 0.61分鐘;質譜,ESI pos.+neg. (Loop-Inj.): m/z = 430 [M+H]
+
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