CN115066437A - 使用抗cd33抗体的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开一般涉及与CD33蛋白例如人CD33或哺乳动物CD33内的一个或多个表位特异性结合并且具有改善的和/或增强的功能特性的抗体例如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等。本公开还涉及通过施用此类抗体来治疗个体的疾病或损伤和/或延缓个体的疾病或损伤的进展的方法。

Description

使用抗CD33抗体的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年12月12日提交的美国临时申请号62/947,455 的权益，所述专利以引用方式整体并入本文。
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ASCII文本文件上的以下提交的内容以引用方式整体并入本文：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：735022003340SEQLIST.TX T，记录日期：2020年12月9日，大小：180KB)。
技术领域
本公开涉及抗CD33抗体，以及此类抗体的治疗性用途。
背景技术
骨髓细胞表面抗原CD33前体(CD33)也称为Siglec-3，是在免疫和造血细胞(包括未成熟和成熟的骨髓细胞、树突状细胞和小胶质细胞)上表达的1型免疫球蛋白样跨膜蛋白。(Crocker等人(2007)Nat Rev Immunol.7:255–266；McMillan和Crocker(2008)Carbohydr Res. 343:2050–2056；Von Gunten和Bochner(2008)Ann NY Acad Sci. 1143:61–82；Handgretinger等人(1993)Immunol Lett.37:223–228；和 Hernández-Caselles等人(2006)J Leukoc Biol.79:46–58)。CD33含有 Ig样C2型(免疫球蛋白样)细胞外结构域和Ig样V型(免疫球蛋白样) 细胞外结构域，以及它的细胞中结构域中的两个ITIM样基序。已经鉴定了CD33的三种替代性剪接形式(同种型)，包括称为CD33M的较高分子量变体和缺乏Ig样V型结构域(配体结合位点)和二硫键连接的V结构域和C结构域的较小同种型CD33m。
对扩展队列(例如，数千个个体)执行的全基因组关联研究(GWAS) 已经鉴定了CD33中的单核苷酸多态性(SNP)rs3865444CC(AKA rs3826656)和rs3865444AA作为迟发性阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)风险的遗传调节剂。另外，表现出全长CD33的表达减少超过25％的2459419TT等位基因的携带者以及rs12459419CT等位基因的携带者显示出阿尔茨海默病风险降低(Malik M.等人(2015) Human Molecular Genetics,1–14)。这表明CD33的表达或功能性降低可能对阿尔茨海默病和癌症有益。
因此，需要治疗性抗CD33抗体来治疗与不期望的CD33活性相关的疾病、病症和疾患。
靶向CD33的新型治疗性抗体是一种治疗与CD33活性相关的疾病(诸如阿尔茨海默病)的解决方案。全身施用的单克隆抗体通常表现出双相药代动力学特征，首先分布相对较快，然后消除较慢(Ovacik,M 和Lin,L,(2018)Clin Transl Sci 11,540-552)。全身施用的抗体的循环通常局限于脉管系统和间隙空间(Ovacik,M和Lin,L,(2018)Clin Transl Sci11,540-552)。这是因为它们的大小、极性、再循环和清除动力学，以及在人中经常为11天-30天的通常相对较长的半衰期 (Ovacik,M和Lin,L,(2018)Clin Transl Sci 11,540-552)。
单克隆抗体的施用对治疗性用途提出了挑战。单克隆抗体的口服生物利用度有限，因此它们通常静脉内、皮下或肌肉内施用(Ovacik,M 和Lin,L,(2018)Clin Transl Sci11,540-552)。对于患有神经退化性疾病(诸如阿尔茨海默病)的患者，静脉内施用尤其特别挑战性。这些疾病长时间段地影响患者，并且因此需要在多年的过程中定期治疗。由于无法在家中进行静脉内施用，因此必须定期将患者运送到输液中心，这对患者和护理人员都是一种负担。最后，这些疾病的记忆力减退、情绪波动、攻击性和其他行为症状使患者难以依从。
因此，还需要鉴定以适当剂量和频率施用抗CD33抗体来治疗疾病或损伤(诸如阿尔茨海默病)和/或延缓疾病或损伤(诸如阿尔茨海默病)的进展，同时促进患者依从性的方法。
本文所引用的所有参考文献(包括专利、专利申请和公布)均特此以引用方式整体并入。
发明内容
在一个方面，本文提供了一种治疗个体的疾病或损伤和/或延缓个体的疾病或损伤的进展的方法，其包括以至少约1.6mg/kg的剂量向个体静脉内施用抗CD33抗体，其中抗体约每十二周一次或更频繁地施用；并且其中抗体包括：重链可变区，所述重链可变区包有包括氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的HVR-H1、包括氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQID NO:119)的HVR-H2和包括氨基酸序列 SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的HVR-H3；以及轻链可变区，所述轻链可变区包括有包括氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的HVR-L1、包括氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135) 的HVR-L2和包括氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQID NO:146)的 HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约1.6mg/kg至约15 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约1.6mg/kg、约5mg/kg、约7.5mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，抗CD33抗体每两周施用一次、每四周施用一次、每五周施用一次、每六周施用一次、每七周施用一次、每八周施用一次、每九周施用一次、每十周施用一次、每十一周施用一次或每十二周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约1.6mg/kg的剂量每两周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约1.6mg/kg 的剂量每四周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约15 mg/kg的剂量每四周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每五周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33 抗体以约15mg/kg的剂量每六周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每七周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每八周施用一次。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，与施用抗 CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，CD33的细胞表面水平降低了至少约70％。在一些实施方案中，与施用抗CD33抗体之前的 CD33的细胞表面水平相比，CD33的细胞表面水平降低了至少约80％。在一些实施方案中，与施用抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，CD33的细胞表面水平降低了至少约85％。在一些实施方案中，与施用抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比， CD33的细胞表面水平降低了至少约90％。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约12天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约17天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约29天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约42天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33 的细胞表面水平的降低存在至少约56天。在一些实施方案中，CD33 的细胞表面水平的降低包括个体外周血单核细胞上CD33的细胞表面水平的降低。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括SEQ ID NO:59的氨基酸序列，轻链可变区包括SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，抗体包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括SEQ ID NO:180或SEQ ID NO:201的氨基酸序列，轻链可变区包括SEQ ID NO:185的氨基酸序列。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，抗CD33抗体在血浆中的终末半衰期为约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天或约12天。在一些实施方案中，抗CD33 抗体在血浆中的终末半衰期为约10天。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，疾病或损伤选自痴呆(dementia)、额颞叶痴呆(frontotemporal dementia)、阿尔茨海默病、血管性痴呆(vascular dementia)、混合性痴呆(mixed dementia)、tau 蛋白病(taupathy disease)、感染和癌症。在一些实施方案中，疾病或损伤是阿尔茨海默病。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，个体被诊断为患有阿尔茨海默病或具有可能的阿尔茨海默病性痴呆的临床诊断。在一些实施方案中，个体具有约16分至约28分的简易精神状态检查表 (Mini-Mental State Examination，MMSE)评分。在一些实施方案中，个体的临床痴呆评定量表整体评分(Clinical Dementia Rating-GlobalScore，CDR-GS)为约0.5、约1.0或约2.0。在一些实施方案中，个体具有阳性淀粉样蛋白-PET扫描。在一些实施方案中，个体正在服用稳定剂量的用于阿尔茨海默病的胆碱酯酶抑制剂和/或美金刚 (memantine)疗法。在一些实施方案中，个体不携带rs12459419T等位基因的两个拷贝。
在一些可与任何前述实施方案组合的实施方案中，疾病或损伤是阿尔茨海默病，并且使用选自以下的一种或多种临床评估来评估对阿尔茨海默病的治疗和/或对阿尔茨海默病的进展的延缓：简易精神状态检查表(MMSE)、可重复的成套心理状态测量表(Repeatable Battery for the Assessment of Neuropsychological Status，RBANS)、临床痴呆评定量表(Clinical Dementia Rating，CDR)评估、淀粉样脑正电子发射断层显像(positron emission tomography，PET)、转位蛋白(TSPO)-PET 成像和它们的任何组合。
附图说明
专利或申请文件含有至少一幅彩图。在提出请求并支付必要费用后，本事务所将提供具有一张或多张彩色附图的本专利或专利申请公布的副本。
图1示出了在以1.6mg/kg或15mg/kg的剂量单次静脉内施用抗 CD33抗体AB-64.1.2之后，抗CD33抗体AB-64.1.2随时间的推移对外周单核细胞上的CD33表达的影响。
具体实施方式
一般技术
本文描述或提及的技术和程序通常为本领域技术人员所清楚理解并且常常用常规方法使用，诸如，例如以下参考文献中描述的广泛利用的方法：Sambrook等人,MolecularCloning:A Laboratory Manual 第3版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel等人编辑, (2003))；Methods in Enzymology系列(Academic Press,Inc.):PCR 2:APractical Approach(M.J.MacPherson、B.D.Hames和G.R.Taylor编辑 (1995))，Harlow和Lane编辑(1988)Antibodies,A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture(R.I.Freshney编辑(1987))；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait编辑,1984)；Methodsin Molecular Biology,Humana Press；Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis编辑,1998) Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney)编辑,1987)； Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather和P.E.Roberts, 1998)Plenum Press；Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures(A. Doyle、J.B.Griffiths和D.G.Newell编辑,1993-8)J.Wiley and Sons； Handbook ofExperimental Immunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell编辑)；Gene Transfer Vectorsfor Mammalian Cells(J.M.Miller和M.P. Calos编辑,1987)；PCR:The Polymerase ChainReaction,(Mullis等人编辑,1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan等人编辑, 1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway和P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch, 1997)；Antibodies:A Practical Approach(D.Catty.编辑,IRL Press, 1988-1989)；MonoclonalAntibodies:A Practical Approach(P.Shepherd 和C.Dean编辑,Oxford UniversityPress,2000)；Using Antibodies:A Laboratory Manual(E.Harlow和D.Lane(Cold SpringHarbor Laboratory Press,1999)；The Antibodies(M.Zanetti和J.D.Capra编辑,Harwood Academic Publishers,1995)；以及Cancer:Principles and Practice ofOncology(V.T.DeVita等人编辑,J.B.Lippincott Company, 1993)。
定义
如本文所用，术语“预防”包括针对个体的特定疾病、病症或疾患的发生或复发提供预防。个体可易患、易感特定疾病、病症或疾患或具有发展这种疾病、病症或疾患的风险但是还未诊断为患有所述疾病、病症或疾患。
如本文所用，具有发展特定疾病、病症或疾患的“风险”的个体在本文所述的治疗方法之前可具有或可不具有可检测的疾病或疾病症状，并且可已显示出或可未显示出可检测的疾病或疾病症状。“风险”表示个体具有一个或多个风险因素，这些风险因素是与本领域已知的特定疾病、病症或疾患的发展相关的可测量参数。具有这些风险因素中的一个或多个的个体比没有这些风险因素中的一个或多个的个体发展特定疾病、病症或疾患的可能性更高。
如本文所用，术语“治疗”是指设计来在临床病理学过程期间改变所治疗的个体的自然过程的临床干预。期望的治疗效果包括降低进展速率、改善或减轻病理学状态、和缓解或改善特定疾病、病症或疾患的预后。例如，如果与特定疾病、病症或疾患相关的一种或多种症状得到减轻或消除，则个体得到成功“治疗”。
“有效量”是指在必需剂量下且持续必需的时间段，至少有效实现期望治疗或预防结果的量。有效量可在一次或多次施用中提供。本文中的有效量可根据因素(诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及治疗引起个体的期望反应的能力)而变化。有效量也是治疗性有益效果超过治疗的任何毒性或有害效果的有效量。对于预防性用途，有益或期望的结果包括以下结果：诸如消除或降低风险、减轻严重程度、或延缓疾病(包括疾病的生物化学的、组织学的和/或行为的症状、在疾病发展期间呈现的疾病的并发症和中间病理学表型)的发作。对于治疗性用途，有益或期望的结果包括以下临床结果：诸如减少由疾病引起的一种或多种症状、提高患有疾病的患者的生活质量、减少治疗疾病所需要的其他药品的剂量、诸如经由靶向来增强另一种药品的效果、延缓疾病进展和/或延长存活。药物、化合物、或药物组合物的有效量是足以直接或间接完成预防性或治疗性治疗的量。如在临床背景中所理解的，药物、化合物、或药物组合物的有效量可与或可不与另一药物、化合物或药物组合物结合实现。因此，可在施用一种或多种治疗剂的背景中考虑“有效量”，并且如果与一种或多种其他的剂结合可实现或实现了期望的结果，则可考虑以有效量给予单种剂。
如本文所用，与另一种化合物或组合物“结合”的施用包括同时施用和/或在不同时间的施用。结合的施用还涵盖作为共制剂的施用或作为单独的组合物的施用，包括在不同的给药频率或间隔下并且使用相同的施用途径或不同的施用途径的施用。
出于治疗、预防或降低风险的目的，“个体”是指被归类为哺乳动物的任何动物，包括人、家畜和农场动物，以及动物园动物、竞技动物或宠物动物，诸如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫等。优选地，个体是人。
术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。本文中的术语“抗体”以最广泛的意义使用并且具体地覆盖单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整的抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、和抗体片段，只要它们表现出期望的生物活性即可。
基本的4链抗体单元是由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H) 链构成的异源四聚糖蛋白。VH和VL的配对一起形成单一抗原结合位点。对于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basic and Clinical Immunology,8th Ed.,Daniel P.Stites,Abba I.Terr andTristram G. Parslow(编辑),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994，第71页和第6 章。
来自任何脊椎动物物种的L链可以基于其恒定结构域的氨基酸序列指定为两种明显不同类型(称为kappa(“κ”)和lambda(“λ”))中的一种。根据免疫球蛋白重链(CH)的恒定结构域的氨基酸序列，免疫球蛋白可以指定为不同的类别或同种型。有五种类别的免疫球蛋白：IgA、 IgD、IgE、IgG、以及IgM，具有分别命名为alpha(“α”)、delta(“δ”)、 epsilon(“ε”)、gamma(“γ”)以及mu(“μ”)的重链。γ和α类别基于CH序列和功能的相对较小差异而进一步分为亚类(同种型)，例如，人表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、以及IgA2。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的，并且大体上描述于例如Abbas等人，Cellular and Molecular Immunology,第4版(W.B. Saunders Co.,2000)中。
“天然抗体”通常是约150,000道尔顿的异源四聚糖蛋白，其由两条相同的轻(L)链和两条相同的重(H)链构成。每条轻链均通过一个共价二硫键连接到重链，而不同免疫球蛋白同种型的重链中二硫化物键联的数量不同。每条重链和轻链还具有规律间隔的链内二硫桥。每条重链在一个端部处具有可变结构域(VH)，接着是多个恒定结构域。每条轻链在一个端部处具有可变结构域(VL)，并且在其另一个端部处具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重连的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重连的可变结构域对齐。据信，特定氨基酸残基形成轻链可变结构域与重链可变结构域之间的界面。
“分离的”抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)是已鉴定的、与其产生环境的组分分离和/或从其回收的抗体(例如，天然地或重组地)。优选地，分离的多肽不与来自其产生环境的所有其他污染物组分缔合。来自分离的多肽的产生环境的污染物组分(诸如由重组转染细胞导致的那些组分)是通常干扰抗体的研究、诊断性或治疗性用途的物质，并且可包括酶、激素、和其他蛋白质或非蛋白质溶质。在优选的实施方案中，多肽将被纯化至：(1)如例如通过劳立法(Lowry method)所确定的大于95重量％的抗体，并且在一些实施方案中大于99重量％； (2)足以通过使用旋杯式测序仪获得N末端或内部氨基酸序列的至少 15个残基的程度，或者(3)通过使用考马斯蓝(Coomassie blue)或优选地银染色法，在非还原或还原条件下进行SDS-PAGE被纯化至均质。分离的抗体包括重组T细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。然而，分离的多肽或抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。
抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可分别称为“VH”和“VL”。这些结构域通常是抗体的最易变部分(相对于相同类别的其他抗体)，并且含有抗原结合位点。
术语“可变的”是指以下事实，即抗体(诸如本公开的抗CD33抗体) 中可变结构域的某些片段在序列上广泛地不同。V结构域介导抗原结合并且限定特定抗体对于其特定抗原的特异性。然而，可变性并不在可变结构域的整个跨度上均匀地分布。相反，在轻链可变结构域和重链可变结构域两者中，可变性集中在称为高变区(HVR)的三个片段中。可变结构域的更高度保守的部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含四个FR区，主要采用由三个HVR连接的β-折叠构型，所述HVR形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的一部分。每条链中的HVR由FR区紧密靠近地保持在一起，并且与来自其他链的HVR一起促进形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人，Sequences ofImmunological Interest,第五版, National Institute of Health,Bethesda,MD(1991))。恒定结构域并不直接参与抗体与抗原的结合，但是表现出各种效应子功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上均质的抗体的群体(即，构成所述群体的个体抗体是相同的，除了可能以微量存在的可能天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化))获得的抗体，诸如本公开的抗CD33抗体。单克隆抗体是高度特异性的，针对一个或多个抗原位点。在一些实施方案中，本公开的单克隆抗体可以是双特异性抗体。相比于通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂，每种单克隆抗体针对一个或多个抗原位点上的单一决定簇。修饰语“单克隆”表明抗体的特性获自抗体的基本同质群体，而并不应当被解释为需要通过任何特定方法来产生抗体。例如，待根据本公开使用的单克隆抗体可通过多种技术制备，包括例如噬菌体展示技术(参见例如，Clackson等人，Nature,352:624-628(1991)； Marks等人，J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu等人，J.Mol.Biol. 338(2):299-310(2004)；Lee等人，J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 101(34):12467-472(2004)；和Lee等人，J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)、杂交瘤方法(例如，Kohler和Milstein.,Nature,256:495-97(1975)；Hongo等人， Hybridoma,14(3):253-260(1995)，Harlow等人，Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2d ed.1988)；Hammerling等人，in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(参见例如，美国专利号4,816,567)、酵母呈现技术(参见例如， WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568和Xu等人， ProteinEng.Des.Sel.,26(10):663-70(2013)以及在具有部分或全部人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中产生人或人样抗体的技术(参见例如，WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等人，Nature 362:255-258(1993)； Bruggemann等人，Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016； Marks等人，Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等人，Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等人，Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol. 14:826(1996)；以及Lonberg和Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93 (1995)。
术语“全长抗体”、“完整抗体”或“全抗体”可互换使用来指代与抗体片段相对的、呈其基本上完整形式的抗体，诸如本公开的抗CD33 抗体。具体地，全抗体包括具有重链和轻链(包括Fc区)的那些抗体。恒定结构域可以是天然序列恒定结构域(例如，人天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。在一些情况下，完整抗体可具有一种或多种效应子功能。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选地所述完整抗体的抗原结合区和/或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2以及Fv 片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5,641,870，实施例2；Zapata 等人，Protein Eng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子、以及由抗体片段形成的多特异性抗体。
抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段和残余的“Fc”片段，所述名称反映了易于结晶的能力。Fab片段由整条L链连同H链的可变区结构域 (VH)和一条重链的第一恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段关于抗原结合是单价的，即，它具有单一抗原结合位点。抗体的木瓜蛋白酶处理产生单个大F(ab')2片段，所述片段大致对应于具有不同抗原结合活性的两个二硫化物连接的Fab片段并且仍然能够交联抗原。Fab'片段因在CH1结构域的羧基末端处具有少量另外的残基(包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸)而与Fab片段不同。Fab’-SH是其中恒定结构域的半胱氨酸残基带有自由硫醇基的Fab’在本文中的名称。 F(ab')2抗体片段最初以之间具有铰链半胱氨酸的Fab'片段对形式产生。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
Fc片段包含通过二硫化物保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应子功能由Fc区中的序列决定，所述区域也通过存在于某些类型的细胞上的Fc受体(FcR)来识别。
“Fv”是含有完全抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由处于紧密、非共价缔合的一个重链可变区结构域和一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠产生六个高变环(从H链和L链各自产生3个环)，所述高变环促进用于抗原结合的氨基酸残基并且将抗原结合特性赋予给抗体。然而，甚至单个可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的HVR的Fv中的一半)具有识别和结合抗原的能力，尽管与整个结合位点相比，处于较低的亲和力下。
“单链Fv”(还缩写为“sFv”或“scFv”)是包含连接到单一多肽链中的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽还包含VH和VL结构域之间的多肽接头，所述接头使得sFv能够形成抗原结合期望的结构。对于sFv的综述，参见Pluckthun in The Pharmacology ofMonoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg和Moore编辑， Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)。
抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)的“功能性片段”包含完整抗体的一部分，通常包括完整抗体的抗原结合区或可变区或者抗体的保留或具有修饰的FcR结合能力的F区。抗体片段的实例包括线性抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“双抗体”是指通过以下方式制备的小抗体片段：在VH和VL结构域之间构建具有短接头(约5-10个)残基)的sFv片段(参见前一段落)，使得实现V结构域的链间但非链内配对，从而产生二价片段，即，具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv 片段的异源二聚体，其中两个双抗体的VH和VL结构域存在于不同的多肽链上。双抗体更详细地描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；Hollinger等人，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA 90:6444-48(1993)中。
如本文所用，“嵌合抗体”是指一种抗体(免疫球蛋白)，诸如本公开的抗CD33抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而所述链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体以及此类抗体的片段中的对应序列相同或同源，只要它们表现出所需的生物活性即可(美国专利号4,816,567；Morrison等人，Proc.Nat’l Acad. Sci.USA,81:6851-55(1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括
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抗体，其中所述抗体的抗原结合区衍生自通过例如使用感兴趣的抗原使猕猴免疫而产生的抗体。如本文所用，“人源化抗体”用作“嵌合抗体”的子集。
“人源化”形式的非人(例如，鼠)抗体(诸如本公开的抗CD33抗体) 是含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是人免疫球蛋白(受者抗体)，其中来自受者的HVR 的残基被来自诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的非人物种(供体抗体)的HVR的具有期望特异性、亲和力和/或能力的残基替换。在一些情况下，人免疫球蛋白的FR残基被对应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受者抗体中或在供体抗体中不存在的残基。可进行这些修饰来进一步细化抗体性能，诸如结合亲和力。一般来讲，人源化抗体将包含至少一个并且通常两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部的高变环对应于非人免疫球蛋白序列的那些高变环，并且全部或基本上全部的FR区是人免疫球蛋白序列的那些 FR区，尽管FR区可包括改善抗体性能(诸如结合亲和力、异构化、免疫原性等)的一个或多个个体FR残基取代。FR中这些氨基酸取代的数量通常在H链中不超过6个，并且在L链中不超过3个。人源化抗体任选地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。对于另外的细节，参见例如， Jones等人，Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332:323-329(1988)；以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596 (1992)。还可参见例如Vaswani和Hamilton，Ann.Allergy,Asthma& Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433 (1994)；以及美国专利号6,982,321和7,087,409。
“人抗体”是拥有对应于抗体(诸如本公开所述的抗CD33抗体)的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体，所述抗体由人产生和/或已经使用如本文所公开的用于制备人抗体的技术中的任一种来制备。人抗体的此定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可以使用本领域已知的各种技术产生，包括噬菌体展示文库。Hoogenboom 和Winter，J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人，J.Mol.Biol., 222:581(1991)。也可用于制备人单克隆抗体的是描述于Cole等人， Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,AlanR.Liss,p.77(1985)； Boerner等人，J.Immunol.,147(1):86-95(1991)中的方法。还可参见van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)。人抗体可通过将抗原施用到已经过修饰以响应于抗原攻击产生此类抗体但是其内源性基因座被禁用的转基因动物来制备，所述转基因动物例如免疫化的异种小鼠(参见例如，关于XENOMOUSETM技术的美国专利号6,075,181和6,150,584)。还可参见例如Li等人，Proc.Nat’l Acad.Sci. USA,103:3557-3562(2006)，其关于经由人B细胞杂交瘤技术生成人抗体。或者，人抗体也可以通过采用公开于例如WO2009/036379A2； WO2010105256；WO2012009568；以及Xu等人，ProteinEng.Des.Sel., 26(10):663-70(2013)中的酵母文库和方法来制备。
当在本文中使用时，术语“高变区”、“HVR”、或“HV”是指抗体可变结构域的在序列上是高变的和/或形成结构上限定的环的区域，诸如本公开的抗CD33抗体的区域。一般来讲，抗体包含六个HVR；三个在VH中(H1、H2、H3)，并且三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3显示出六个HVR的最多的多样性，并且据信H3 在将良好的特异性赋予抗体方面尤其发挥独特的作用。参见例如Xu 等人，Immunity 13:37-45(2000)；Johnson和Wu在Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo编辑，Human Press,Totowa,NJ,2003)中)。实际上，由重链组成的天然存在的骆驼抗体仅在不存在轻链的情况下是功能性且稳定的。参见例如Hamers-Casterman等人，Nature 363:446-448 (1993)和Sheriff等人，NatureStruct.Biol.3:733-736(1996)。
多个HVR描述在使用中并且涵盖在本文中。在一些实施方案中， HVR可以是基于序列可变性的Kabat互补决定区(CDR)，并且是最常使用的(Kabat等人，同上)。在一些实施方案中，HVR可以是Chothia CDR。而Chothia是指结构化环的位置(Chothia和LeskJ.Mol.Biol. 196:901-917(1987))。在一些实施方案中，HVR可以是AbM HVR。 AbM HVR表示Kabat CDR与Chothia结构化环之间的折衷，并且通过Oxford Molecular的AbM抗体建模软件来使用。在一些实施方案中，HVR可以是“contact”HVR。“contact”HVR基于可用复合物晶体结构的分析。来自这些HVR中的每一个的残基在下文指出。
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HVR可包括如下的“延长HVR”：在VL中，24-36或24-34(L1)、 46-56或50-56(L2)、以及89-97或89-96(L3)，并且在VH中，26-35 (H1)、50-65或49-65(优选的实施方案)(H2)、以及93-102、94-102、或95-102(H3)。对于这些延长HVR定义中的每一个，可变结构域残基根据EU或Kabat等人(同上)进行编号。
“框架”或“FR”残基是除了如本文所定义的HVR残基以外的那些可变结构域残基。
短语“如EU或Kabat中的可变结构域残基编号”或“如EU或 Kabat中的氨基酸位置编号”及其变型是指用于EU或Kabat等人(同上)中的抗体编译的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用此编号系统，实际线性氨基酸序列可含有较少或另外的氨基酸，所述氨基酸对应于可变结构域的FR或HVR的缩短或对其进行的插入。例如，重链可变结构域可包括H2的残基52之后的单个氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)和重链FR残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b、和82c等)。可通过在抗体序列的同源区处与“标准”Kabat编号序列比对来确定给定抗体的残基的EU或 Kabat编号。
当提及可变结构域中的残基(大约轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时，通常使用EU或Kabat编号系统(例如Kabat等人， Sequences of Immunological Interest.5thEd.Public Health Service, National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。当提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，通常使用“EU或Kabat编号系统”或“EU索引”(例如，Kabat等人(同上)中报告的EU索引)。“如Kabat中的EU 索引”是指人IgG1 EU抗体的残基编号。除非本文另有说明，否则抗体的可变结构域中的残基编号的提及意指通过Kabat编号系统进行的残基编号。除非本文另有说明，否则抗体的恒定结构域中的残基编号的提及意指通过EU或Kabat编号系统进行的残基编号(例如参见美国专利公开号2010-280227)。
如本文所用的“接受者人框架”是包含衍生自人免疫球蛋白框架或人共有框架的VL或VH框架的氨基酸序列的框架。“衍生自”人免疫球蛋白框架或人共有框架的接受者人框架可包含其相同的氨基酸序列，或者它可含有预先存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，预先存在的氨基酸变化的数量是10或更小、9或更小、8或更小、7 或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小、或2或更小。在预先存在的氨基酸变化存在于VH中的情况下，优选的这些变化在位置71H、73H和78H中的仅三个、两个、或一个处发生；例如，在那些位置处的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一个实施方案中，VL接受者人框架在序列上与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列相同。
“人共有框架”是表示在人免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常存在的氨基酸残基的框架。一般来讲，人免疫球蛋白VL或 VH序列的选择来自可变结构域序列的亚组。一般来讲，序列亚组是如Kabat等人，Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th Ed. Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991) 中的亚组。实例包括，对于VL，亚组可以是如Kabat等人(同上)中的亚组κI、κII、κIII或κIV。另外，对于VH，亚组可以是如Kabat 等人(同上)中的亚组I、亚组II、或亚组III。
例如本公开的抗CD33抗体的指定位置处的“氨基酸修饰”是指指定残基的取代或缺失，或相邻指定残基插入至少一个氨基酸残基。“相邻”指定残基插入意指在其一个至两个残基内插入。插入可在指定残基的N末端或C末端。本文中的优选氨基酸修饰是取代。
“亲和力成熟”抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)是其一个或多个 HVR中具有一个或多个变化的抗体，所述变化导致与不拥有那些变化的亲本抗体相比，所述抗体对抗原的亲和力提高。在一个实施方案中，亲和力成熟抗体对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔亲和力。亲和力成熟抗体通过本领域已知的程序产生。例如，Marks等人， Bio/Technology 10:779-783(1992)描述了通过VH结构域和VL结构域改组实现的亲和力成熟。HVR和/或框架残基的随机诱变通过以下进行描述，例如：Barbas等人Proc Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813 (1994)；Schier等人Gene 169:147-155(1995)；Yelton等人J.Immunol. 155:1994-2004(1995)；Jackson等人，J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；和Hawkins等人，J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。
如本文所用，术语“特异性地识别”或“特异性地结合”是指可测量的和可再现的相互作用，诸如靶标与抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)之间的吸引或结合，所述吸引或结合在包括生物分子的分子的异质群体的存在下确定靶标的存在。例如，特异性地或优先地结合靶标或表位的抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)是以比其结合其他靶标或靶标的其他表位更强的亲和力、亲合力、更易于和/或更长的持续时间结合此靶标或表位的抗体。通过阅读此定义还应理解，例如，特异性地或优先地结合第一靶标的抗体(或部分)可或可不特异性地或优先地结合第二靶标。由此，“特异性的结合”或“优先的结合”并不一定需要(虽然它可以包括)排外的结合。特异性地结合靶标的抗体可具有至少约103M-1或104M-1的解离常数，所述解离常数有时约105M-1或106M-1，在其他情况下约106M-1或107M-1、约108M-1至109 M-1、或约1010M-1至1011M-1或更高。各种免疫测定形式可以用于选择与特定蛋白质特异性免疫反应的抗体。例如，固相ELISA免疫测定常规地用于选择与蛋白质特异性免疫反应的单克隆抗体。对于可以用于确定特异性免疫反应的免疫测定形式和条件的描述，参见例如Harlow和Lane(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Publications,NewYork。
如本文所用，CD33蛋白与第二蛋白之间的“相互作用”涵盖但不限于蛋白质-蛋白质相互作用、物理相互作用、化学相互作用、结合、共价结合、以及离子结合。如本文所用，当抗体破坏、减少、或完全消除两个蛋白质之间的相互作用时，所述抗体“抑制”两个蛋白质之间的相互作用。当本公开的抗体或其片段结合两个蛋白质中的一者时，所述抗体或其片段“抑制”两个蛋白质之间的相互作用。
“激动剂”抗体或“激活”抗体是在抗体结合抗原之后诱导(例如，增加)抗原的一种或多种活性或功能的抗体，诸如本公开的激动剂抗 CD33抗体。
“阻断”抗体、“拮抗剂”抗体或“抑制性”抗体是在抗体结合抗原之后抑制或降低(例如，减少)抗原结合一种或多种配体和/或在抗体结合抗原之后抑制或降低(例如，减少)抗原的一种或多种活性或功能的抗体，诸如本公开的抗CD33抗体。在一些实施方案中，阻断抗体、拮抗剂抗体或抑制性抗体基本上或完全抑制抗原结合一种或多种配体和/或抗原的一种或多种活性或功能。
抗体“效应子功能”是指可归因于抗体的Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的那些生物活性，并且随着抗体同种型而变化。
本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，包括天然序列Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可变化，但是人IgG重链Fc区通常限定为从在位置Cys226处的氨基酸残基或从Pro230伸长至其羧基末端。Fc区的C末端赖氨酸(根据 EU或Kabat编号系统的残基447)可例如在抗体产生或纯化期间或通过对编码抗体的重链的核酸进行重组工程改造来去除。因此，完整抗体的组合物可包括去除所有K447残基的抗体群体、未去除K447残基的抗体群体、以及具有拥有或没有K447残基的抗体的混合物的抗体群体。用于本公开的抗体中的合适的天然序列Fc区包括人IgG1、 IgG2、IgG3和IgG4。
“天然序列Fc区”包含与天然存在的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区(非A同种异型和A同种异型)；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区以及其天然存在的变体。
“变体Fc区”包含由于至少一个氨基酸修饰、优选地一个或多个氨基酸取代而与天然序列Fc区的氨基酸序列不同的氨基酸序列。优选地，与天然序列Fc区或亲本多肽的Fc区相比，变体Fc区在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中具有至少一个氨基酸取代，例如约一个至约十个氨基酸取代，并且优选地约一个至约五个氨基酸取代。本文中的变体Fc区与天然序列Fc区和/或与亲本多肽的Fc区优选地拥有至少约80％同源性，并且最优选地与它们具有至少约90％同源性，更优选地与它们具有至少约95％同源性。
“Fc受体”或“FcR”描述了结合抗体的Fc区的受体。优选的FcR 是天然序列人FcR。此外，优选的FcR是结合IgG抗体的FcR(γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII、和FcγRIII亚类的受体，包括等位基因变体和这些受体的替代性剪接形式，FcγRII受体包括FcγRIIA(“激活受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，所述受体具有主要在其细胞质结构域上不同的相似氨基酸序列。激活受体FcγRIIA在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(“ITAM”)。抑制受体FcγRIIB在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(“ITIM”)。(参见例如M.
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Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR在 Ravetch和Kinet，Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)；Capel et al., Immunomethods 4:25-34(1994)；和de Haas等人，J.Lab.Clin.Med.126: 330-41(1995)中进行综述。本文中的术语“FcR”涵盖其他FcR，包括将来待鉴定的那些FcR。FcR还可增加抗体的血清半衰期。
人FcRn高亲和力结合多肽的体内FcRn结合和血清半衰期可以例如在表达人FcRn的转基因小鼠或转染的人细胞系中或在向其施用具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中进行测定。WO 2004/42072 (Presta)描述了具有改善或减弱的FcR结合的抗体变体。还可参见例如Shields等人，J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
如本文所用，相对于肽、多肽或抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”是指在比对序列并引入缺口(如果需要的话)以实现最大序列同一性百分比并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分之后，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。为了确定氨基酸序列同一性百分比而进行的比对可以通过本领域技术范围内的多种方式实现，例如，使用可公开获得的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或 MEGALIGNTM(DNASTAR)软件。本领域的技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较的序列的全长上实现最大比对所需要的本领域已知的任何算法。
编码抗体(诸如本公开的抗CD33抗体)的“分离的”核酸分子是鉴定的并且与至少一种污染物核酸分子分开的核酸分子，所述核酸分子在其产生的环境中通常与所述污染物核酸分子缔合。优选地，分离的核酸分子不与产生环境相关的所有组分缔合。编码本文中的多肽和抗体的分离的核酸分子处于其天然存在的形式或状态以外的形式。因此，分离的核酸分子区别于天然存在于细胞中的编码本文中的多肽和抗体的核酸。
如本文所用，术语“载体”意图指代能够转运其已经连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，所述质粒是指可将另外的 DNA区段连接到其中的环状双链DNA。另一种类型的载体是噬菌体载体。另一种类型的载体是病毒载体，其中另外的DNA区段可连接到病毒基因组中。某些载体能够在它们被引入到其中的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其他载体(例如，非游离型哺乳动物载体)可以在引入到宿主细胞中之后整合到宿主细胞的基因组中，并且因此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们所操作性地连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”，或简称为“表达载体”。一般来讲，在重组DNA技术中利用的表达载体经常呈质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。
如本文可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指具有任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物、或可以通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应并入到聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含经修饰的核苷酸，诸如甲基化核苷酸及其类似物。如果存在，则可在聚合物组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可被非核苷酸组分中断。多核苷酸可包含合成之后进行的修饰，诸如偶联至标记。其他类型的修饰包括例如“加帽(cap)”、用类似物取代天然存在的核苷酸中的一种或多种、核苷酸间修饰，诸如例如具有不带电荷的键联(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺酸酯 (phosphoamidate)、氨基甲酸酯(cabamate)等)和具有带电荷的键联(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些、含有侧链部分(诸如例如，蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、多聚-L-赖氨酸等))的那些、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些、含有烷化剂(alkylator) 的那些、具有经修饰的键联(例如，α端基异构核酸等)的那些，以及未修饰形式的多核苷酸。另外，通常存在于糖中的任何羟基均可被例如膦酸酯基、磷酸酯基替换，被标准保护基保护，或经过激活以制备对另外核苷酸的另外键联，或可缀合至固体或半固体支持物。5'和3' 末端OH可被磷酸化或使用胺或具有1至20个碳原子的有机封端基团部分取代。其他羟基也可衍生成标准保护基。多核苷酸还可以含有本领域众所周知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括例如2'-O-甲基-、 2'-O-烯丙基-、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-端基异构糖、差向异构糖(诸如阿拉伯糖、木糖或来苏糖(lyxoses))、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖(sedoheptuloses)、无环类似物以及无碱基核苷类似物(诸如甲基核糖苷)。一个或多个磷酸二酯键联可被替代性键联基团替换。这些替代性键联基团包括但不限于其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯(thioate)”)、P(S)S(“二硫代酸酯(dithioate)”)、(O)NR2(“酰胺化物(amidate)”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛(formacetal)”) 替换的实施方案，其中每个R或R'独立地为H或任选地含有醚(-O-) 键联的取代或未取代的烷基(1-20个C)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。多核苷酸中的所有键联不需要都相同。先前的描述适用于本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
“宿主细胞”包括可以是或已经是用于并入多核苷酸插入物的载体的受者的个体细胞或细胞培养物。宿主细胞包括单一宿主细胞的子代，并且子代可由于天然、偶然、或故意突变而不一定与原始亲本细胞完全相同(在形态方面或在基因组DNA补体方面)。宿主细胞包括用本公开的多核苷酸体内转染的细胞。
如本文所用的“载体”包括在所采用的剂量和浓度下对于暴露于其的细胞或哺乳动物无毒的药学上可接受的载体、赋形剂、或稳定剂。生理学上可接受的载体经常是水性pH缓冲溶液。生理学上可接受的载体的实例包括缓冲液，诸如磷酸盐、柠檬酸盐、和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶、或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖、和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐反离子，诸如钠；和/或非离子型表面活性剂，诸如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)、和PLURONICSTM。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文中对“约”一个值或参数的提及包括(以及描述)针对所述值或参数本身的实施方案。
如本文中和所附权利要求中所用，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述(the)”包括复数提及物，除非上下文另外清楚地指示。例如，对“抗体”的提及是对一种至许多种抗体(诸如摩尔量)的提及，并且包括本领域的技术人员已知的其等价物等。
应理解，本文所述的本公开的方面和实施方案包括“包含”方面和实施方案、由方面和实施方案“组成”和“基本上由方面和实施方案组成”。
概述
本公开涉及通过向个体施用抗CD33抗体来治疗个体的疾病或损伤(例如,阿尔茨海默病)和/或延缓个体的疾病或损伤(例如,阿尔茨海默病)的进展的方法。如下所述，本公开的方法满足了本领域中以正确剂量和频率施用抗CD33抗体并以易于患者依从性的方式施用该剂量来治疗患者的需要。
本公开的抗CD33抗体在血清中表现出相对较短的终末半衰期，介于约4天至约10天之间(参见例如实施例1)。与其他治疗性抗体相比，抗CD33抗体的终末半衰期较短(Ovacik,M和Lin,L,(2018)Clin Transl Sci 11,540-552)，这表明所述抗体可能预期在治疗上不可用。然而，出乎意料的是，抗CD33抗体的单次静脉内施用导致CD33细胞表面水平降低至少70％，所述降低持续至少约17天和约56天之间 (参见例如实施例2)。
因此，尽管本公开的抗CD33抗体的终末半衰期相对较短，但本文提供的方法允许相对不频繁地施用抗CD33抗体，这对患有神经退化性疾病(诸如阿尔茨海默病)的患者特别有益。
因此，在一些实施方案中，本公开还涉及通过以约1.6mg/kg和约15mg/kg之间的剂量每十二周一次或更频繁地向个体施用抗CD33 抗体来治疗个体的疾病或损伤(例如,阿尔茨海默病)和/或延缓个体的疾病或损伤(例如,阿尔茨海默病)的进展的方法(参见例如实施例3)。
本文所引用的所有参考文献(包括专利、专利申请和公布)均特此以引用方式整体并入。
治疗性用途
如本文所用，本公开的抗CD33抗体可用于预防、降低风险或治疗痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克 -雅二氏病(Creutzfeldt-Jakobdisease)、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病(Huntington’s disease)、tau蛋白病、Nasu-Hakola 病(Nasu-Hakola disease)、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿关节炎、伤口愈合、克罗恩病(Crohn's disease)、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、贝切特氏病(Behcet'sdisease)、帕金森氏病(Parkinson’s disease)、路易体痴呆(dementia with Lewy body)、多系统萎缩、希-德二氏综合征(Shy-Drager syndrome)、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、佩吉特氏骨病(Paget's disease of bone)、以及癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤 (non-Hodgkin’s lymphoma)、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓样白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性脊髓硬化症、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染(Trypanosome infection)、 Cruzi感染、铜绿假单胞菌感染(Pseudomonas aeruginosa infection)、杜氏利什曼原虫感染(Leishmania donovaniinfection)、B族链球菌感染 (group B Streptococcus infection)、空肠弯曲杆菌感染(Campylobacter jejuni infection)、脑膜炎奈瑟氏球菌感染(Neisseria meningiditisinfection)、I型HIV和/或流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza)。在一些实施方案中，CD33抗体是激动剂抗体。在一些实施方案中，抗体是惰性抗体。在一些实施方案中，抗体是拮抗剂抗体。
在一些实施方案中，本公开提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的抗体来预防、降低风险或治疗以下疾病的方法：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、佩吉特氏骨病、癌症、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓样白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性脊髓硬化症、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、Cruzi感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B 族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏球菌感染、I型HIV 和/或流感嗜血杆菌，所述抗体降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者兼有。
在一些实施方案中，本公开提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的抗体来预防、降低风险或治疗癌症的方法，所述抗体降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者兼有。在一些实施方案中，抗体抑制一种或多种选自以下的CD33活性：(a)促进免疫抑制剂树突状细胞、免疫抑制剂巨噬细胞、免疫抑制剂嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、非致瘤性CD14+骨髓细胞、和调节性T细胞中的一种或多种的增殖、成熟、迁移、分化和/或功能性；(b)增强免疫抑制剂树突状细胞、免疫抑制剂巨噬细胞、免疫抑制剂嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓源性抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、和调节性T细胞的一种或多种浸润到肿瘤中；(c)增加肿瘤中、外周血中、或其他淋巴器官中的促肿瘤骨髓/粒细胞免疫抑制细胞和/或非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量；(d)减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的激活；(e)减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润； (f)增加肿瘤体积；(g)增加肿瘤生长速率；(h)增加癌细胞转移；(i) 增加肿瘤复发率；(j)增加一种或多种PD-1配体的表达；(k)减少一种或多种调节抗肿瘤T细胞应答的免疫疗法的功效，任选地其中一种多种靶向一种或多种蛋白质的免疫疗法选自由以下组成的组：CD40、 OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、 PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、 TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、 DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、CD47、CSF-1受体和它们的任何组合，或选自由一种或多种癌症疫苗组成的组；以及(l)减少一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中化学治疗剂中的一种或多种是吉西他滨 (Gemcitabine)、卡培他滨(Capecitabine)、蒽环类药物(Anthracycline)、阿霉素(Doxorubicin)
Figure BDA0003787403120000281
泛艾霉素(epirubicin)
Figure BDA0003787403120000282
紫杉烷、紫杉醇
Figure BDA0003787403120000283
多西他赛(Docetaxel)
Figure BDA0003787403120000284
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003787403120000285
卡铂(carboplatin)
Figure BDA0003787403120000286
奥沙利铂(Oxaliplatin)
Figure BDA0003787403120000287
亚叶酸、替莫唑胺(Temozolomide)
Figure BDA0003787403120000288
和它们的任何组合。在一些实施方案中，抗体表现出一种或多种选自以下的活性：(a)增加肿瘤浸润性CD3+ T细胞的数量；(b) 降低非致瘤性CD14+骨髓细胞中的CD33的细胞水平，任选地其中非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞或任选地其中非致瘤性 CD14+骨髓细胞存在于血液中；(c)减少非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量，任选地其中非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞或任选地其中非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；(d)降低一种或多种细胞中的PD-L1水平，任选地其中一种或多种细胞是非致瘤性骨髓源性抑制细胞(MDSC)；(e)降低实体瘤的肿瘤生长速度；(f)减少肿瘤体积；(g)增加一种或多种PD-1抑制剂的功效；(h)增加一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法的功效，任选地其中一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法靶向CTL4、腺苷途径、 PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、LAG3或它们的任何组合中的一种或多种；(i)增加一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中化学治疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、阿霉素
Figure BDA0003787403120000291
泛艾霉素
Figure BDA0003787403120000292
紫杉烷、紫杉醇
Figure BDA0003787403120000293
多西他赛
Figure BDA0003787403120000294
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003787403120000295
卡铂
Figure BDA0003787403120000296
奥沙利铂
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亚叶酸、替莫唑胺
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和它们的任何组合；以及(j)当与化学或放射性毒素缀合时，杀死实体瘤和相关血管中的表达CD33的免疫抑制剂骨髓细胞和/或表达CD14 的细胞。
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体还可用于诱导和/或促进一种或多种免疫细胞(例如，先天免疫细胞或适应性免疫细胞)的存活成熟、功能性、迁移或增殖。在一些实施方案中，本公开提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的抗体来诱导或促进个体的一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迁移或增殖的方法，所述抗体降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用或两者兼有。在一些实施方案中，一种或多种免疫细胞选自树突状细胞、巨噬细胞、小胶质细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助性T细胞、细胞毒性T细胞和它们的任何组合。
在一些实施方案中，抗体是激动剂抗CD33抗体。在一些实施方案中，抗体是本公开的瞬时激动剂抗CD33抗体，其最初充当激动剂，然后充当长期拮抗剂抗体。在一些实施方案中，抗体是惰性抗CD33 抗体。在一些实施方案中，抗体是拮抗剂抗CD33抗体。在一些实施方案中，抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平、细胞内水平或总水平)。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33 的降解。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的切割。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的内化。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33表达的下调。在一些实施方案中，抗CD33抗体抑制CD33 与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33并且然后诱导CD33的降解。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33并且然后诱导CD33 的切割。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33并且然后诱导CD33的内化。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33 并且然后诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33表达并且然后诱导CD33表达的下调。在一些实施方案中，抗CD33抗体瞬时激活CD33并且然后诱导CD33的降低的表达。在某些实施方案中，个体具有CD33变体等位基因，所述等位基因具有单核苷酸多态性(SNP)rs3865444CC或AC。在某些实施方案中，个体具有CD33变体等位基因，所述等位基因具有单核苷酸多态性(SNP) 2459419CC或CT。
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体还可用于降低以下细胞的活性、功能性或存活：调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制剂树突状细胞、肿瘤包埋的免疫抑制剂巨噬细胞、骨髓源性抑制剂细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞和/或慢性骨髓性白血病(CML)细胞。在一些实施方案中，本公开提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的与CD33结合或相互作用的抗体来降低个体的以下细胞的活性、功能性或存活的方法：调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制剂树突状细胞、肿瘤包埋的免疫抑制剂巨噬细胞、骨髓源性抑制剂细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞、或慢性骨髓性白血病(CML)细胞。在一些实施方案中，抗体选自拮抗剂抗体、惰性抗体或激动剂抗体。在一些实施方案中，抗体是本公开的分离的抗CD33抗体或抗CD33抗体缀合物。在一些实施方案中，抗 CD33抗体缀合物包括与可检测标记物、毒素或治疗剂缀合的抗CD33 抗体。
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体可用于在体外或体内降低一种或多种细胞上的CD33的细胞水平、抑制一种或多种细胞上的 CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者兼有。在一些实施方案中，本公开提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的分离的抗CD33抗体来降低个体的一种或多种细胞上的 CD33的细胞水平、抑制一种或多种细胞上的CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的方法。在一些实施方案中，抗 CD33抗体降低体内CD33的细胞水平。
如本文所公开的，本公开的抗CD33抗体可用于降低一种或多种细胞和/或细胞系上的CD33的细胞水平，所述一种或多种细胞包括但不限于树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、外周血单核细胞、粒细胞、小胶质细胞、T细胞、巨噬细胞。在一些实施方案中，本公开提供了通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的抗 CD33抗体来降低个体中的一种或多种细胞上的CD33的细胞水平的方法。在一些实施方案中，一种或多种细胞选自树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、外周血单核细胞、粒细胞、小胶质细胞、 T细胞、巨噬细胞和它们的任何组合。在一些实施方案中，抗CD33 抗体降低体内CD33的细胞水平。CD33的细胞水平可指代但不限于 CD33的细胞表面水平、CD33的细胞内水平、和CD33的总水平。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平包括降低CD33的细胞表面水平。如本文所用，CD33的细胞表面水平可通过本文所述的或本领域已知的任何体外基于细胞的测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平包括降低CD33的细胞内水平。如本文所用，CD33的细胞内水平可通过本文所述的或本领域已知的任何体外基于细胞的测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平包括降低CD33的总水平。如本文所用， CD33的总水平可通过本文所述的或本领域已知的任何体外基于细胞的测定或合适的体内模型来测量。在一些实施方案中，抗CD33抗体诱导CD33降解、CD33切割、CD33内化、CD33脱落和/或CD33表达下调。在一些实施方案中，CD33的细胞水平利用体外细胞测定在原代细胞(例如，树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、外周血单核细胞、粒细胞、小胶质细胞、T细胞、以及巨噬细胞)上或在细胞系上测量。
本公开的其他方面涉及选择有需要的受试者以使用抗CD33抗体进行治疗的方法，所述方法包括：a.从受试者获得样品(例如，血液样品)；b.检测存在于受试者中的CD33等位基因；和c.选择用与 CD33结合或相互作用的抗体治疗的受试者。受试者是具有一种或多种CD33等位基因的受试者，其中所述一种或多种CD33等位基因选自由以下组成的组：rs3865444AC和rs3865444CC。本公开的其他方面涉及评估有需要的受试者对与CD33结合或相互作用的抗体的反应性的方法，所述方法包括：a.在向受试者施用抗CD33抗体之前，测量从受试者获得的血液样品中的非致瘤性骨髓细胞上的CD45+和 CD14+的表达水平；b.向受试者施用治疗有效量的抗体；和c.在施用抗CD33抗体后，测量从受试者获得的血液样品中的非致瘤性骨髓细胞上的CD45+和CD14+的表达水平，其中在施用抗CD33抗体后，非致瘤性骨髓细胞上的CD45+CD14+水平降低，表明受试者对所述剂有响应。可使用任何合适用于获得样品(诸如血液样品)的方法。此外，应当理解，可使用任何已知的检测CD33变体和/或等位基因的方法，诸如SNP分析。在一些实施方案中，评估反应性的方法还包括施用一种或多种另外的治疗有效量的抗体。在一些实施方案中，受试者是人。
在一些实施方案中，个体具有CD33的变体。在一些实施方案中，变体包括但不限于一种或多种选自以下的多态性：(a)SNP rs3865444AC；(b)SNP rs3865444CC；(c)SNPrs35112940GG、AA、AG；和 (d)SNP rs12459419CC、CT或TT；以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，个体不是次要等位基因rs12459419T的两个拷贝的携带者。
在一些实施方案中，基于国家老龄化研究所阿尔茨海默氏症协会 (NationalInstitute on Aging Alzheimer’s Association)的标准，个体具有可能的阿尔茨海默病性痴呆的临床诊断。在一些实施方案中，个体具有16分至28分的简易精神状态检查表(MMSE)评分，包括端值在内。在一些实施方案中，个体具有0.5、1.0、或2.0的临床痴呆评定量表整体评分(CDR-GS)。在一些实施方案中，个体具有通过定性读数的阳性淀粉样蛋白-PET扫描。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之前，个体以稳定剂量服用用于阿尔茨海默病的胆碱酯酶抑制剂和 /或美金刚疗法，持续至少4周。如本文所用，“稳定剂量”是指在指定时间段内不显著变化并且不预期或不意图改变的剂量。
在一些实施方案中，本公开的方法还可涉及共施用抗CD33抗体或双特异性抗CD33抗体和结合模式识别受体的抗体、结合Toll样受体的抗体、结合损伤相关分子模式受体(DAMP)的抗体和/或结合细胞因子的抗体或结合白介素的抗体。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种特异性结合抑制性检查点分子的抗体和/或一种或多种标准或研究性抗癌疗法。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性检查点分子的抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性检查点分子的抗体选自抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、和抗HVEM抗体、抗B淋巴细胞和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)抗体、抗杀伤细胞抑制性受体(KIR)抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体、抗TNFa抗体、抗Siglec-5抗体、抗Siglec-7抗体、抗Siglec-9 抗体、抗Siglec-11抗体、拮抗性抗TREM1抗体、拮抗性抗TREM2 抗体、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，一种或多种标准或研究性抗癌疗法选自放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼(imatinib)疗法、曲妥珠单抗(trastuzumab)疗法、依那西普 (etanercept)疗法、过继细胞转移(ACT)疗法、嵌合抗原受体T细胞转移(CAR-T)疗法、疫苗疗法和细胞因子疗法。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种特异性结合抑制性细胞因子的抗体。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性细胞因子的抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性细胞因子的抗体选自抗CCL2 抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体和它们的任何组合。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种特异性结合刺激性检查点蛋白的激动性抗体。在一些实施方案中，至少一种特异性结合刺激性检查点蛋白的激动性抗体与抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种特异性结合刺激性检查点蛋白的激动性抗体选自激动剂抗CD40抗体、激动剂抗OX40抗体、激动剂抗ICOS抗体、激动剂抗CD28抗体、激动性抗TREM1抗体、激动性抗TREM2抗体、激动剂抗CD137/4-1BB抗体、激动剂抗CD27 抗体、激动剂抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体、以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，本公开的方法还可包括向个体施用至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，至少一种刺激性细胞因子与抗 CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种刺激性细胞因子选自IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、 IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1、MIP-1-β、以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，受试者或个体是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯化动物(例如，牛、羊、猫、狗、以及马)、灵长类动物(例如，人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔、以及啮齿动物(例如，小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，受试者或个体是人。
痴呆
痴呆是呈现为先前未受损害的人的整体认知能力的严重丧失的、超过可从正常老化所预期的非特异性综合征(即，一组体征和症状)。痴呆可由于独特的整体脑损伤而是稳定的。或者，痴呆可以是进行性的，从而由于身体的损害或疾病而导致长期衰退。虽然痴呆在老年群体中远远更加常见，但是它也可以在65岁之前发生。受到痴呆影响的认知区域包括但不限于记忆、注意广度、语言、以及问题解决。一般来讲，到个体被诊断为患有痴呆之前，症状必须存在至少六个月。
痴呆的示例性形式包括但不限于额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、语义性痴呆、以及路易体痴呆。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防、降低风险和/或治疗痴呆。在一些实施方案中，抗CD33抗体可调节患有痴呆的个体中的一种或多种CD33活性。
额颞叶痴呆
额颞叶痴呆(FTD)是由脑额叶的进行性恶化导致的疾患。退化可随时间推移前进到颞叶。在患病率方面仅次于阿尔茨海默病(AD)， FTD占早老性痴呆病例的20％。FTD的临床特征包括记忆缺陷、行为异常、个性改变、以及语言障碍(Cruts,M.&Van Broeckhoven,C., Trends Genet.24:186-194(2008)；Neary,D.等人，Neurology 51:1546-1554(1998)；Ratnavalli,E.,Brayne,C.,Dawson,K.&Hodges, J.R.,Neurology 58:1615-1621(2002))。
FTD病例的绝大部分以常染色体显性方式遗传，但是甚至在一个家庭中，症状可跨越从具有行为紊乱的FTD到原发性进行性失语症到皮层基底神经节变性的范围。与大多数神经退化性疾病一样，FTD 可以表征为患病脑中的特定蛋白质聚集体的病理学存在。在历史上， FTD的第一描述识别到过度磷酸化的Tau蛋白在神经原纤维缠结或皮克氏体(Pickbody)中的神经元内积累的存在。微管相关蛋白Tau的因果作用由在若干家族中鉴定编码Tau蛋白的基因突变支持(Hutton, M.等人，Nature 393:702-705(1998)。然而，大部分FTD脑没有显示过度磷酸化的Tau的积累，但是确实表现出对泛素(Ub)和TAR DNA 结合蛋白(TDP43)的免疫反应性(Neumann,M.等人，Arch.Neurol. 64:1388-1394(2007))。具有Ub内含物的那些FTD病例(FTD-U)的大部分显示携带颗粒蛋白前体基因的突变。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防、降低风险和/或治疗FTD。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有FTD的个体中的一种或多种CD33活性。
阿尔茨海默病
阿尔茨海默病(AD)是痴呆的最常见形式。这种疾病无法治愈，随着进展而恶化，并且最终导致死亡。AD最经常在超过65岁的人中被诊断出。然而，较不普遍的早发性阿尔茨海默病可以远远更早地发生。
阿尔茨海默病的常见症状包括行为症状，诸如难以记住最近的事件；认知症状、精神错乱、易怒和攻击性行为、情绪波动、语言故障、以及长期记忆力丧失。随着疾病进展，身体功能丧失，最终导致死亡。阿尔茨海默病在未知且可变的时间量内发展，之后变得十分明显，并且它可以在未诊断的情况下进展数年。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防、降低风险和/或治疗阿尔茨海默病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有阿尔茨海默病的个体中的一种或多种CD33活性。
在一些实施方案中，根据本文提供的方法施用抗CD33抗体的个体的阿尔茨海默病治疗和/或阿尔茨海默病进展的延缓根据本领域已知的任何方法来评估。在一些实施方案中，根据本文提供的方法施用抗CD33抗体的个体的阿尔茨海默病治疗和/或阿尔茨海默病进展的延缓使用以下方式进行评估：临床痴呆评定(CDR)总和量表(CDR-SB) 评分、简易精神状态检查表(MMSE)评分、可重复的成套心理状态测量表(RBANS)评分、淀粉样脑正电子发射断层显像(PET)、或转位蛋白(TSPO)-PET成像、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，根据本文提供的方法施用抗CD33抗体导致临床痴呆评定(CDR)总和量表(CDR-SB)评分、简易精神状态检查表(MMSE)评分、可重复的成套心理状态测量表(RBANS)评分、淀粉样脑正电子发射断层显像(PET)、或转位蛋白(TSPO)-PET成像、以及它们的任何组合改善了至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约 60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约 99％、或约100％。
帕金森氏病
帕金森氏病可称为特发性或原发性帕金森神经机能障碍(primaryparkinsonism)、运动功能减退综合征(hypokinetic rigid syndrome， HRS)、或震颤性麻痹(paralysis agitans)，它是影响运动系统控制的神经退化性脑病症。脑中的多巴胺产生细胞的进行性死亡导致帕金森氏病的主要症状。帕金森氏病最经常在超过50岁的人中被诊断出。帕金森氏病在大部分人中是特发性的(没有已知的病因)。然而，遗传因素也在帕金森氏病中发挥作用。
帕金森氏病的症状包括但不限于手、臂、腿、下颌和脸部的震颤、四肢和躯干的肌肉僵硬、动作缓慢(运动迟缓)、姿势不稳定、行走困难、神经精神问题、言语或行为的变化、抑郁、焦虑、疼痛、精神病、痴呆、幻觉、以及睡眠问题。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防、降低风险和/或治疗帕金森氏病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有帕金森氏病的个体中的一种或多种CD33活性。
肌萎缩性侧索硬化症(ALS)
如本文所用，肌萎缩性侧索硬化症(ALS)或运动神经元疾病或卢伽雷氏症(LouGehrig's disease)可互换使用，并且是指具有各种病因学的衰竭性疾病，其表征为快速进行性衰弱、肌肉萎缩和肌束震颤、肌肉痉挛、说话困难(构音障碍)、吞咽困难(咽下困难)、以及呼吸困难(呼吸困难(dyspnea))。
已显示颗粒蛋白前体在ALS中发挥作用(Schymick,JC等人，(2007)J NeurolNeurosurg Psychiatry.；78:754-6)并且防止由引发ALS 的蛋白(诸如TDP-43)引发的损害(Laird,AS等人，(2010).PLoS ONE 5: e13368)。还证明了亲NGF在脊髓损伤之后诱导少突胶质细胞和皮层脊髓神经元的p75介导的死亡(Beatty等人，Neuron(2002),36,pp. 375-386；Giehl等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA(2004),101,pp 6226-30)。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防、降低风险和/或治疗ALS。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有肌萎缩性侧索硬化症的个体中的一种或多种CD33活性。
亨廷顿氏病
亨廷顿氏病(HD)是由亨廷顿基因(HTT)中的常染色体显性突变引发的遗传性神经退化性疾病。亨廷顿基因内的细胞因子-腺嘌呤-鸟嘌呤(CAG)三联体重复序列的扩增导致产生由所述基因编码的亨廷顿蛋白(Htt)的突变体形式。这种突变体亨廷顿蛋白(mHtt)是毒性的并且促进神经元死亡。亨廷顿氏病的症状最常出现在35岁与44岁之间，尽管它们可以在任何年龄出现。
亨廷顿氏病的症状包括但不限于运动控制问题、颠簸、随机动作 (舞蹈病)、异常眼部动作、平衡受损、癫痫发作、咀嚼困难、吞咽困难、认知问题、发声改变、记忆缺陷、思考困难、失眠、疲劳、痴呆、个性改变、抑郁、焦虑、以及强迫性行为。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防、降低风险和/或治疗亨廷顿氏病(HD)。在一些实施方案中，施用抗CD33 抗体可调节患有亨廷顿氏病的个体中的一种或多种CD33活性。
Tau蛋白病
Tau蛋白病或Tau病变是由脑内的微管相关蛋白tau的聚集引发的一类神经退化性疾病。阿尔茨海默氏病(AD)是最众所周知的tau蛋白病，并且涉及呈不可溶神经原纤维缠结(NFT)形式的神经元内的tau 蛋白的积累。其他tau蛋白病和病症包括进行性核上性麻痹、拳击员痴呆(慢性创伤性脑病)、与染色体17连锁的额颞叶痴呆和帕金森神经机能障碍、Lytico-Bodig病(关岛帕金森-痴呆复合征)、缠结为主的痴呆、神经节神经胶质瘤和神经节细胞瘤、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、铅中毒脑病、结节性硬化症、哈-斯二氏病(Hallervorden-Spatz disease)、脂褐质沉积症、皮克氏病(Pick’s disease)、皮层基底退化、嗜银颗粒病(AGD)、亨廷顿氏病、以及额颞叶退化。
在一些实施方案中，施用本公开的抗CD33抗体可以预防、降低风险和/或治疗tau蛋白病。在一些实施方案中，施用抗CD33抗体可调节患有tau蛋白病的个体中的一种或多种CD33活性。
多发性硬化症
多发性硬化症(MS)也可以称为播散性硬化症或播散性脑脊髓炎。 MS是炎性疾病，其中脑和脊髓的轴突周围的脂肪髓鞘受损，从而导致脱髓鞘和瘢痕以及宽范围的体征和症状。MS影响脑和脊髓中的神经细胞彼此有效地沟通的能力。神经细胞通过沿着称为轴突的长纤维发送称为动作电位的电信号进行沟通，所述轴突包含在称为髓磷脂的绝缘物质内。在MS中，身体自身的免疫系统攻击并损害髓磷脂。当失去髓磷脂时，轴突不再有效地传导信号。MS发作通常发生在年轻成人中，并且在女性中更常见(参见例如，http://en(dot)wikipedia(dot) org/wiki/Multiple_sclerosis-cite_note-pmid18970977-1
MS的症状包括但不限于感官变化，诸如敏感性或麻刺感丧失；刺痛感或麻木，诸如感觉减退和感觉错乱；肌肉无力；阵挛；肌肉抽搐；移动困难；协调和平衡困难，诸如共济失调；言语问题，诸如构音障碍，或吞咽问题，诸如咽下困难；视觉问题，诸如眼球震颤、视神经炎，包括幻视和复视；疲劳；急性或慢性疼痛；以及膀胱和肠道困难；不同程度的认知障碍；抑郁或不稳定心情的情绪症状；Uhthoff 氏现象(Uhthoff's phenomenon)，它是现有症状由于暴露于高于通常的环境温度的恶化；以及莱尔米体征(Lhermitte's sign)，它是当弯曲颈部时行进到背部的触电感。
在一些实施方案施用本公开的抗CD33抗体可以预防、降低风险和/或治疗多发性硬化症。在一些实施方案中施用抗CD33抗体可调节患有多发性硬化症的个体中的一种或多种CD33活性。
癌症
本公开的另外的方面提供了用于通过向有需要的个体施用治疗有效量的本公开的分离的抗CD33抗体来预防、降低风险或治疗癌症的方法。在这些方法中可使用本公开的分离的抗体中的任一种。在一些实施方案中，分离的抗体是本公开的激动剂抗体。在其他实施方案中，分离的抗体是本公开的拮抗剂抗体。在其他实施方案中，分离的抗体是本公开的惰性抗体。在其他实施方案中，分离的抗体是本公开的抗体缀合物。
如本文所公开的，已知肿瘤微环境含有异质免疫浸润物，其包括 T淋巴细胞、巨噬细胞和骨髓/粒细胞谱系的细胞。肿瘤中调节性T 细胞、肿瘤包埋的免疫抑制剂骨髓细胞和/或M2巨噬细胞的存在和活性与不良预后相关。相反，细胞毒性T细胞的存在和活性对癌症疗法是有益的。直接或间接增强细胞毒性T细胞活性并降低各种免疫抑制剂细胞的数量和活性的疗法预期提供显著的治疗益处。开创性临床前研究已经显示了靶向免疫抑制剂细胞的药物(例如，CSF1/CSF1R阻断抗体)与激活细胞毒性T细胞的免疫检查点阻断抗体之间的协同效应，这表明操纵两种细胞类型在个体疗法有效性不佳的肿瘤模型中显示出功效(Zhu Y；Cancer Res.2014Sep 15；74(18):5057-69)。因此，在一些实施方案中，阻断在骨髓细胞、T细胞子集和肿瘤相关免疫细胞上表达的CD33可刺激有益的抗肿瘤免疫应答，从而导致治疗性抗肿瘤免疫应答。
在一些实施方案中，用于预防、降低风险或治疗患有癌症的个体的方法还包括向所述个体施用至少一种特异性结合抑制性检查点分子的抗体。特异性结合抑制性检查点分子的抗体的实例包括但不限于抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、和抗HVEM抗体、抗-BTLA抗体、抗 GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性检查点分子的抗体与本公开的拮抗剂抗CD33抗体组合施用。
在一些实施方案中，待通过本公开的方法预防或治疗的癌症包括但不限于鳞状细胞癌(例如，上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状癌)、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌或胃癌(包括胃肠癌和胃肠道基质癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿道癌、肝细胞癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾脏癌症或肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑素瘤、表面散布的黑素瘤、恶性痣性黑素瘤、肢端雀斑样痣性黑素瘤、结节性黑素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤；慢性淋巴细胞白血病(CLL)；急性成淋巴细胞白血病(ALL)；多毛细胞白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)、以及与瘢痣病相关的异常血管增生、水肿(诸如与脑肿瘤相关的水肿)、梅格斯氏综合征 (Meigs'syndrome)、脑癌以及头颈癌、以及相关的转移瘤。在一些实施方案中，癌症是结肠直肠癌。在一些实施方案中，癌症选自非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、肾细胞癌、膀胱癌、卵巢癌、黑素瘤、乳腺癌、胃癌、以及肝细胞癌。在一些实施方案中，癌症是三阴性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症可以是早期癌症或晚期癌症。在一些实施方案中，癌症可以是原发性肿瘤。在一些实施方案中，癌症可以是衍生自以上癌症类型中的任一种的在第二位点处的转移性肿瘤。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可用于预防、降低风险或治疗癌症，所述癌症包括但不限于膀胱癌、乳腺癌、结肠和直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、以及甲状腺癌。
在一些实施方案中，本公开提供了通过向患有癌症的个体施用治疗有效量的本公开的抗CD33抗体来预防、降低风险或治疗个体的方法。
在一些实施方案中，方法还包括向个体施用至少一种特异性结合抑制性免疫检查点分子的抗体和/或另一种标准或研究性抗癌疗法。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性检查点分子的抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性检查点分子的抗体选自抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、和抗HVEM抗体、抗B淋巴细胞和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)抗体、抗杀伤细胞抑制性受体(KIR)抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，标准或研究性抗癌疗法是选自以下的一种或多种疗法：放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼
Figure BDA0003787403120000421
曲妥珠单抗
Figure BDA0003787403120000422
过继细胞转移(ACT)、嵌合抗原受体T细胞转移(CAR-T)、疫苗疗法、以及细胞因子疗法。
在一些实施方案中，方法还包括向个体施用至少一种特异性结合抑制性细胞因子的抗体。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性细胞因子的抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种特异性结合抑制性细胞因子的抗体选自抗CCL2抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体和它们的任何组合。
在一些实施方案中，方法还包括向个体施用至少一种特异性结合刺激性免疫检查点蛋白的激动性抗体。在一些实施方案中，至少一种特异性结合刺激性检查点蛋白的激动性抗体与本公开的抗CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种特异性结合刺激性检查点蛋白的激动性抗体选自激动剂抗CD40抗体、激动剂抗OX40抗体、激动剂抗ICOS抗体、激动剂抗CD28抗体、激动剂抗CD137/4-1BB抗体、激动剂抗CD27抗体、激动剂抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体、以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，方法还包括向个体施用至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，至少一种刺激性细胞因子与本公开的抗 CD33抗体组合施用。在一些实施方案中，至少一种刺激性细胞因子选自TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、OSM、CNTF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-8、CRP、IFN-α、IFN-β、IL-2、IL-18、GM-CSF、 G-CSF、以及它们的任何组合。
诊断性用途
本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗CD33抗体)还具有诊断性用途。因此，本公开提供了使用本公开的抗体或其功能性片段以用于诊断性目的(诸如检测个体中或衍生自个体的组织样品中的 CD33蛋白)的方法。
在一些实施方案中，个体是人。在一些实施方案中，个体是罹患或有风险发展本公开的疾病、病症或损伤的人患者。在一些实施方案中，诊断性方法涉及检测生物样品(诸如活组织检查样本、组织、或细胞)中的CD33蛋白。将本文所述的抗CD33抗体与生物样品接触并检测抗原结合的抗体。例如，活组织检查样本可用本文所述的抗CD33 抗体染色，以便检测和/或量化疾病相关细胞。检测方法可涉及抗原结合的抗体的定量。生物样品中的抗体检测可使用本领域已知的任何方法来发生，所述方法包括免疫荧光显微镜法、免疫细胞化学、免疫组织化学、ELISA、FACS分析、免疫沉淀、或微正电子发射断层显像。在某些实施方案中，抗体例如使用18F进行放射标记并且随后利用微正电子发射断层显像分析进行检测。抗体结合也可通过非侵入式技术在患者中进行量化，所述非侵入式技术诸如正电子发射断层显像(PET)、X射线计算机断层显像、单光子发射计算机断层显像(SPECT)、计算机断层显像(CT)、以及计算机轴向断层显像(CAT)。
在其他实施方案中，本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗 CD33抗体)可用于检测和/或量化例如取自临床前疾病模型(例如，非人疾病模型)的脑样本中的小胶质细胞。由此，本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗CD33抗体)可用于评价针对神经系统疾病或损伤 (诸如额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、癫痫发作、视网膜营养不良、动脉粥样硬化血管疾病、Nasu-Hakola病、或多发性硬化症)的模型中在治疗之后与对照相比的治疗性应答。
CD33抗体
本公开的某些方面至少部分基于对表现出一种或多种改善和/或增强的功能特性(例如，相对于抗CD33抗体具有包含SEQ ID NO:103 的序列的重链可变区和包含SEQ IDNO:104的序列的轻链可变区)的抗CD33抗体的鉴定，所述功能特性包括改善的/增强的降低CD33在细胞上的细胞表面水平的能力，从而导致一种或多种CD33活性的降低、中和、预防、或抑制，所述活性包括但不限于：减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞和/或小胶质细胞的细胞生长；减少由树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞、M2小胶质细胞、巨噬细胞、M1 巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、 M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、 M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的存活；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、 M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的增殖；抑制嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、 M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、 M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的迁移；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、 M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、 M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的一种或多种功能；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的增殖；减少单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的总功能性；抑制对选自以下的不同类型的癌症的有益免疫应答：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、和甲状腺癌；抑制对选自以下的不同类型的神经系统病症的有益免疫应答：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、以及多发性硬化症；与肿瘤细胞上的CD33配体结合；与树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、小胶质细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33 配体结合；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T细胞中的一种或多种的肿瘤细胞杀伤；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞转移活性；调节在小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性 T细胞中的一种或多种上表达的一种或多种炎性受体的表达，诸如 CD86；增强免疫抑制剂树突状细胞、免疫抑制剂巨噬细胞、骨髓源性抑制剂细胞、肿瘤相关巨噬细胞、免疫抑制剂嗜中性粒细胞、以及调节性T细胞中的一种或多种浸润到肿瘤中；增加肿瘤中、外周血中、或其他淋巴器官中的促肿瘤骨髓/粒细胞免疫抑制细胞的数量；增强骨髓源性抑制细胞的促肿瘤活性；减少具有肿瘤杀伤潜能的肿瘤特异性T淋巴细胞的激活；减少具有肿瘤杀伤潜能的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；增加肿瘤生长速率；增加肿瘤复发率；减少一种或多种调节抗肿瘤T细胞应答的免疫疗法的功效，任选地其中一种或多种免疫疗法是靶向选自以下的一种或多种蛋白质的免疫疗法：CD40、 OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、 PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、VISTA、 KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR-5、CD39、CD70、TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、 SirpA、CD447、CSF-1受体、以及它们的任何组合，或减少一种或多种化学治疗剂和/或癌症疫苗的功效。
在一些实施方案中，使用如本文所述的抗CD33抗体的癌症治疗可：(i)增加肿瘤浸润性CD3+ T细胞的数量；(ii)降低非致瘤性CD14+骨髓细胞中的CD33的细胞水平，任选地其中非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞或任选地其中非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；(iii)减少非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量，任选地其中非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润性细胞或任选地其中非致瘤性 CD14+骨髓细胞存在于血液中；(iv)降低一种或多种细胞中的PD-L1、 PD-L2、B7-H7、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206水平，任选地其中一种或多种细胞是非致瘤性骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)；(v) 降低实体瘤的肿瘤生长速度；(vi)减少肿瘤体积；(vii)增加一种或多种PD-1抑制剂的功效；(viii)增加一种或多种检查点抑制剂疗法和/ 或免疫调节疗法的功效，任选地其中一种或多种检查点抑制剂疗法和 /或免疫调节疗法靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、 LAG3或它们的任何组合中的一种或多种；(ix)增加一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中化学治疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、阿霉素
Figure BDA0003787403120000471
泛艾霉素
Figure BDA0003787403120000472
紫杉烷、紫杉醇
Figure BDA0003787403120000473
多西他赛
Figure BDA0003787403120000474
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003787403120000475
卡铂
Figure BDA0003787403120000476
以及它们的任何组合；(x)增加非致瘤性骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的存在下的T细胞增殖；(xi) 抑制非致瘤性骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能；和(xii)当与化学或放射性毒素缀合时，杀死实体瘤和相关血管中的表达CD33的免疫抑制剂非致瘤性骨髓细胞和/或非致瘤性表达CD14的细胞。
在一些实施方案中，本公开的骨髓细胞包括但不限于CD45+CD 14+骨髓细胞、CD14+骨髓细胞、和骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)。在一些实施方案中，本公开的骨髓细胞是非致瘤性骨髓细胞。免疫抑制剂细胞有时也称为骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)。在人中，MDSC可以通过以下标记物的组合之一来限定：(1)CD14+HLA-DRlow/-、(2) CD14+IL4Rα+、(3)CD14+HLA-DR-IL4Rα+、(4)CD34+CD14+CD11b +CD33+、(5)CD11b+CD14+CD33+、(6)CD33+HLA-DR-、(7)Lin-HL A-DR-、(8)Lin-HLA-DR-CD33+、(9)Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+、 (10)Lin-CD33+CD11b+CD15+、(11)Lin-HLA-DR-CD33+CD11b+CD 14-CD15+、(12)CD11b+CD14-CD33+、(13)CD11b+CD14-HLA-DR- CD33+CD15+、(14)CD33+HLA-DR-CD15+、(15)CD15+IL4Rα+、(1 6)CD11b+CD15+CD66b+、(17)CD15+FSClow SSChigh、(18)CD15h igh CD33+、(19)CD11b+CD14-CD15+、(20)CD66b+SSChigh、和(21) CD11b+CD15+(还可参见Solito等人Annals of the NYAcademy o f Sciences,2014)。在小鼠中，MDSC可以通过表面标记物CD45+、 CD11b+、Gr1+和/或Il4Ra+的表达来限定。另外的示例性免疫抑制单核细胞谱系是CD45+、CD11b+、Gr1低；和CD45+、CD11c+。
本公开的某些方面涉及包括一种或多种改善的和/或增强的功能特性的抗CD33抗体。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体相对于对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)包括一种或多种改善的和/或增强的功能特性。在一些实施方案中，本公开的抗 CD33抗体对CD33(例如，人CD33)的亲和力高于对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:86 的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO: 103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与人细胞(诸如树突状细胞)结合，半最大效应浓度 (EC50)低于对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)，半最大效应浓度(EC50)低于对照抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)。
CD33的细胞水平可指代但不限于CD33的细胞表面水平、CD33 的细胞内水平、和CD33的总水平。在一些实施方案中，降低CD33 的细胞水平包括降低CD33的细胞表面水平。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平(例如，CD33的细胞表面水平)的本公开的抗 CD33抗体具有以下特性中的一种或多种：(1)抑制或降低一种或多种 CD33活性；(2)抑制或降低CD33结合其配体中的一种或多种的能力；(3)降低表达CD33的细胞中的CD33表达的能力；(4)与CD33 蛋白相互作用、结合、或识别CD33蛋白的能力；(5)与CD33蛋白特异性相互作用或结合的能力；以及(6)治疗、改善或预防本文所述或所考虑的疾病或病症的任何方面的能力。
本公开的抗CD33抗体对靶抗原(例如，人CD33)可具有纳摩尔或甚至皮摩尔亲和力。在某些实施方案中，抗体的解离常数(KD)为约 0.001nM至约100nM。在某些实施方案中，抗体的KD为约0.01nM 至约10nM。在某些实施方案中，抗体的KD为约0.202nM至约8.57 nM。在一些实施方案中，抗体的KD小于约或等于约100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、9.5 nM、9nM、8.5nM、8nM、7.5nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、 5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、 0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、或0.005nM。在一些实施方案中，抗体的KD小于约5.22nM。在一些实施方案中，抗体的KD大于约或等于约0.001nM、0.005nM、0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、 0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、0.8nM、0.9nM、1nM、1.5nM、 2nM、2.5nM、3nM3.5nM、4nM、4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、 6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、9nM、9.5nM、10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM、或90nM。即，抗体的KD可以是具有约100nM、90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、 40nM、30nM、20nM、10nM、9.5nM、9nM、8.5nM、8nM、7.5 nM、7nM、6.5nM、6nM、5.5nM、5nM、4.5nM、4nM、3.5nM、 3nM、2.5nM、2nM、1.5nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6 nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.05nM、0.01nM、或0.005nM的上限并且具有约0.001nM、0.005nM、0.01nM、0.05 nM、0.1nM、0.2nM、0.3nM、0.4nM、0.5nM、0.6nM、0.7nM、 0.8nM、0.9nM、1nM、1.5nM、2nM、2.5nM、3nM 3.5nM、4nM、 4.5nM、5nM、5.5nM、6nM、6.5nM、7nM、7.5nM、8nM、8.5nM、 9nM、9.5nM、10nM.20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、 80nM、或90nM的独立选择的下限的亲和力范围中的任一种，其中所述下限小于所述上限。在一些实施方案中，抗体的KD为约10nM、约9nM、约8nM、约7nM、约6nM、约5nM、约4nM、约3nM、约2nM、约1nM、约900pM、约800pM、约700pM、约600pM、约500pM、约400pM、约300pM、约200pM、或约100pM。测量抗体亲和力的各种方法是本领域已知的，包括例如使用表面等离子共振或生物膜层干涉技术(BioLayer Interferometry)(参见例如下文的实施例1)。在一些实施方案中，对于CD33的KD在大约25℃的温度下确定。在一些实施方案中，对于CD33的KD在大约4℃的温度下确定。在一些实施方案中，KD使用单价抗体(例如，Fab)或呈单价形式的全长抗体来确定。在一些实施方案中，KD使用二价抗体和单体重组CD33蛋白来确定。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对于CD33的解离常数(KD)低于对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗 CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对于靶标(例如，人CD33) 的KD比对照抗CD33抗体(例如，包含含有SEQ IDNO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗 CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体) 对于靶标的KD低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对于靶标 (例如，人CD33)的KD比对照抗CD33抗体对于靶标的KD(例如，包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO: 77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)低至少约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5 倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6 倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约 12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5 倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍、或至少约100倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对于人CD33的KD比具有包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体大至少9倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对于人CD33的 KD比具有包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和包含 SEQ IDNO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体大至少3 倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体对于人CD33的KD比具有包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体大至少3倍。在一些实施方案中，亲和力通过表面等离子共振测量。在一些实施方案中，亲和力在大约25℃的温度下测量。在一些实施方案中，亲和力在大约4℃的温度下测量。在一些实施方案中，亲和力使用如下文实施例1中所述的实验方法测量。
本公开的抗CD33抗体可以皮摩尔范围内的半最大效应浓度 (EC50)降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)(例如，当使用原代人树突状细胞体外测量时)。在某些实施方案中，抗体的EC50为约 0.1pM至约500pM。在某些实施方案中，抗体的EC50为约1pM至约250pM。在某些实施方案中，抗体的EC50为约4.1pM至约151.1 pM。在一些实施方案中，抗体的EC50小于约或等于约500pM、400 pM、300pM、250pM、225pM、200pM、175pM、150pM、125pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、1pM、或0.5pM。在一些实施方案中，抗体的EC50小于约74.3pM。在一些实施方案中，抗体的EC50大于约或等于约0.1pM、0.5pM、1pM、10pM、25pM、50pM、75pM、100pM、125pM、150pM、175pM、200pM、225pM、250 pM、300pM、或400pM。即，抗体的EC50可以是具有约500pM、 400pM、300pM、250pM、225pM、200pM、175pM、150pM、125 pM、100pM、75pM、50pM、25pM、10pM、1pM、或0.5pM的上限并且具有约0.1pM、0.5pM、1pM、10pM、25pM、50pM、75 pM、100pM、125pM、150pM、175pM、200pM、225pM、250pM、 300pM、或400pM的独立选择的下限的范围中的任一种，其中所述下限小于所述上限。在一些实施方案中，抗体的EC50为约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、15pM、 20pM、25pM、30pM、35pM、40pM、45pM、5-pM、55pM、60 pM、65pM、70pM、75pM、80pM、85pM、90pM、95pM、100pM、 105pM、110pM、115pM、120pM、125pM、130pM、135pM、140 pM、145pM、150pM、155pM、160pM、165pM、170pM、175pM、 180pM、185pM、190pM、195pM、或200pM。测量抗体EC50值的各种方法是本领域已知的，包括例如通过流式细胞术(参见例如下文的实施例2)。在一些实施方案中，EC50使用原代人树突状细胞体外测量。在一些实施方案中，EC50使用原代人单核细胞体外测量。在一些实施方案中，EC50使用原代人巨噬细胞体外测量。在一些实施方案中，EC50使用转染了人CD33的培养细胞体外测量。在一些实施方案中，EC50在大约4℃的温度下测量。在一些实施方案中，EC50在大约 25℃的温度下测量。在一些实施方案中，EC50在大约35℃的温度下测量。在一些实施方案中，EC50在大约37℃的温度下测量。在一些实施方案中，EC50使用单价抗体(例如，Fab)或呈单价形式的全长抗体来确定。在一些实施方案中，EC50使用含有展示增强的Fc受体结合的恒定区的抗体来确定。在一些实施方案中，EC50使用含有展示降低的Fc受体结合的恒定区的抗体来确定。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以低于对照抗CD33 抗体(例如包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有 SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)的EC50(例如，如使用原代人树突状细胞体外测量的)降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以比对照抗CD33 抗体(例如包含含有SEQ ID NO:34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ IDNO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有 SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体)的EC50低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％的EC50降低 CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以比对照抗CD33抗体(例如包含含有SEQ ID NO: 34的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗CD33抗体；包含含有SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗 CD33抗体；和/或包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的对照抗 CD33抗体)的EC50低至少约1倍、至少约1.1倍、至少约1.5倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约12.5倍、至少约15倍、至少约17.5倍、至少约20倍、至少约22.5倍、至少约25倍、至少约27.5倍、至少约30倍、至少约50倍、或至少约100 倍的EC50降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC50比具有包含SEQ ID NO:34 的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1.6倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC50比具有包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗 CD33抗体低至少1.05倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC50比具有包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1.07倍。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的EC50比具有包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体低至少1.2倍。在一些实施方案中，EC50使用原代人树突状细胞体外测量。在一些实施方案中，EC50使用原代人单核细胞体外测量。在一些实施方案中，EC50使用原代人巨噬细胞体外测量。在一些实施方案中，EC50使用转染了人CD33的培养细胞体外测量。在一些实施方案中，EC50通过流式细胞术测量。在一些实施方案中，EC50在大约25℃的温度下测量。在一些实施方案中，EC50在大约35℃的温度下测量。在一些实施方案中，EC50在大约37℃的温度下测量。在一些实施方案中，EC50使用含有展示增强的Fc受体结合的恒定区的抗体来确定。在一些实施方案中，EC50使用含有展示降低的Fc受体结合的恒定区的抗体来确定。在一些实施方案中，EC50使用如下文实施例2中所述的实验方法测量。可使用本文所述的或本领域已知的任何体外基于细胞的测定或合适的体内模型来测量CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)的抑制。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体在饱和抗体浓度下利用本文所述的或本领域已知的任何体外测定或基于细胞的培养测定将CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)抑制至少21％、至少22％、至少23％、至少24％、至少25％、至少26％、至少27％、至少28％、至少29％、至少30％、至少31％、至少32％、至少33％、至少34％、至少35％、至少36％、至少37％、至少38％、至少39％、至少40％、至少41％、至少42％、至少43％、至少44％、至少45％、至少46％、至少47％、至少48％、至少49％、至少50％、至少51％、至少52％、至少53％、至少54％、至少55％、至少56％、至少57％、至少58％、至少59％、至少60％、至少61％、至少62％、至少63％、至少64％、至少65％、至少66％、至少67％、至少68％、至少69％、至少70％、至少71％、至少72％、至少73％、至少74％、至少75％、至少76％、至少77％、至少78％、至少79％、至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或更多。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体抑制CD33的细胞表面聚集。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体抑制CD33蛋白的一种或多种活性，包括但不限于抵消以下中的中的一种或多种：Src 家族酪氨酸激酶(诸如LCK和FYN)对Tyr-340和Tyr-358的磷酸化；募集并结合酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2；募集并结合 PLC-γ1，其充当Dynamini-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子；募集并结合含有SH2结构域的蛋白质(例如，Crk1)；募集并结合脾脏酪氨酸激酶 Syk；募集并结合SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白2(Grb2)；募集并结合多种含含有SH2的蛋白质；蛋白激酶C磷酸化Ser-307和 Ser-342；调节一种或多种抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13、IL-35、 IL-16、TGF-β、IL-1Ra、G-CSF、以及TNF、IFN-β1a、IFN-β1b、或 IL-6的可溶性受体在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞中的表达；减少细胞内钙动员；调节一种或多种促炎细胞因子IFN-a4、IFN-b、IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、 IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1、以及MIP-1-β在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞中的表达；调节选自以下的一种或多种蛋白质的表达：C1qa、C1qB、C1qC、C1s、C1R、C4、C2、C3、ITGB2、 HMOX1、LAT2、CASP1、CSTA、VSIG4、MS4A4A、C3AR1、GPX1、 TyroBP、ALOX5AP、ITGAM、SLC7A7、CD4、ITGAX、PYCARD、CD14、CD16、HLA-DR、以及CCR2；抑制细胞外信号调节激酶(ERK) 磷酸化；减少对多种细胞蛋白的酪氨酸磷酸化；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达；抑制小胶质细胞对表达CCL19和CCL21的细胞的趋化性；激活磷酸肌醇3-激酶；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞和/或小胶质细胞的细胞生长；降低由树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的 M1小胶质细胞、M2小胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；抑制破骨细胞产生、降低破骨细胞生成速率、或两者；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的 M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的存活；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的 M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T 细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的增殖；抑制嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的迁移；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的一种或多种功能；抑制嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、 M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、 M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的成熟；增加单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/ 或小胶质细胞的细胞死亡和凋亡；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的吞噬活性；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的整体功能性、含有ITAM的受体的磷酸化；介导ITAM信号传导的信号传导分子的磷酸化；减少模式识别受体的激活；减少Toll样受体的激活；减少与清除细胞和蛋白质碎片相关的损伤的激活；CD33与其配体中的一种或多种的相互作用；CD33与共受体(诸如CD64)之间的相互作用；减少对选自以下的一种或多种类型的清除：凋亡神经元清除、神经组织碎片清除、功能障碍的突触清除、非神经组织碎片清除、细菌或其他异物清除、致病蛋白清除、以及肿瘤细胞清除；抑制对凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他异物、致病蛋白、致病多肽、致病核酸、致病脂质、或肿瘤细胞中的一种或多种的吞噬作用；抑制对致病核酸的清除，诸如致病核酸是反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA；激活对选自以下的致病蛋白的清除：淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前提蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS 蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降血钙素、过氧化物歧化酶、ataxin、ataxin 1、ataxin 2、 ataxin 3、ataxin 7、ataxin 8、ataxin 10、路易体、心房利钠因子(atrial natriuretic factor)、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、血清胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、泛素、以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽；抑制对选自以下的不同类型癌症的有益免疫应答：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、和甲状腺癌；抑制对选自以下的不同类型的神经系统病症的有益免疫应答：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、 Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、以及多发性硬化症；抑制对选自以下的不同类型的炎性和感染性病症的有益免疫应答：狼疮、急性和慢性结肠炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、以及佩吉特氏骨病；与肿瘤细胞上的CD33配体结合；与树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、小胶质细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33配体结合；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、 T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T细胞中的一种或多种的肿瘤细胞杀伤；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞转移活性；促进免疫抑制剂树突状细胞、免疫抑制剂巨噬细胞、骨髓源性抑制剂细胞、肿瘤相关巨噬细胞、或调节性T细胞；抑制一种或多种含有ITAM基序的受体，诸如TREM1、TREM2、FcgR、DAP10、以及DAP12；抑制一种或多种含有基序D/Ex0–2YxxL/IX6–8YxxL/I(SEQ ID NO:165) 的受体；抑制一种或多种模式识别受体(PRR)的信号传导，所述受体诸如鉴定病原体相关分子模式(PAMP)的受体和鉴定损伤相关分子模式的受体(DAMP)；抑制一种或多种Toll样受体的信号传导；抑制 JAK-STAT信号传导途径；抑制活化的B细胞的核因子κ轻链增强子 (NFκB)；抑制PLCγ/PKC/钙动员；抑制PI3K/Akt、Ras/MAPK信号传导；降低在小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种上表达的一种或多种炎性受体(诸如CD86)的表达；增加一种或多种CD33依赖性基因的表达；破坏的CD33依赖性基因表达的正常化；以及减少一种或多种ITAM依赖性基因(诸如NFAT转录因子)的表达。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体表现出CD33蛋白的一种或多种活性，包括但不限于：增加肿瘤浸润性CD3+ T细胞的数量；降低CD14+骨髓细胞(诸如肿瘤浸润性CD14+骨髓细胞和存在于血液中的CD14+骨髓细胞)中的CD33的细胞水平；减少CD14+骨髓细胞(诸如肿瘤浸润性CD14+骨髓细胞和存在于血液中的CD14+骨髓细胞)的数量；降低一种或多种细胞(诸如骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)) 中的PD-L1、PD-L2、B7-H7、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206 水平；降低实体瘤的肿瘤生长速度；减少肿瘤体积；增加一种或多种PD-1抑制剂的功效；增加一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3、 LAG3、或它们的任何组合的检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法) 的功效；增加一种或多种化学治疗剂的功效，任选地其中化学治疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、阿霉素
Figure BDA0003787403120000601
泛艾霉素
Figure BDA0003787403120000602
紫杉烷、紫杉醇
Figure BDA0003787403120000603
多西他赛
Figure BDA0003787403120000604
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003787403120000605
卡铂
Figure BDA0003787403120000611
奥沙利铂
Figure BDA0003787403120000612
亚叶酸、替莫唑胺
Figure BDA0003787403120000613
和它们的任何组合；增加骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的存在下的T细胞增殖；抑制骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能；当与化学或放射性毒素缀合时，杀死实体瘤和相关血管中的表达CD33的免疫抑制剂非致瘤性骨髓细胞和/或非致瘤性表达 CD14的细胞。
在一些实施方案中，抗CD33抗体抑制本公开的CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)，所述CD33配体包括但不限于：在红细胞上表达的CD33配体、在细菌细胞上表达的 CD33配体、在凋亡细胞上表达的CD33配体、在肿瘤细胞上表达的 CD33配体、在病毒上表达的CD33配体、在树突状细胞上表达的CD33 配体、在神经细胞上表达的CD33配体、在胶质细胞上表达的CD33 配体、在小胶质细胞上表达的CD33配体、在星形胶质细胞上表达的 CD33配体、在β淀粉样蛋白斑块上表达的CD33配体、在Tau缠结上表达的CD33配体、在致病蛋白上表达的CD33配体、在致病多肽上表达的CD33配体、在巨噬细胞上表达的CD33配体、在自然杀伤细胞上表达的CD33配体、在T细胞上表达的CD33配体、在辅助T 细胞上表达的CD33配体、在细胞毒性T细胞上表达的CD33配体、在B细胞上表达的CD33配体、在肿瘤包埋的免疫抑制剂树突状细胞上表达的CD33配体、在肿瘤包埋的免疫抑制剂巨噬细胞上表达的 CD33配体、在骨髓源性抑制剂细胞上表达的CD33配体、在调节性 T细胞上表达的CD33配体、分泌粘蛋白、唾液酸、含有唾液酸的糖脂、含有唾液酸的糖蛋白、含有α-2,6-连接唾液酸的糖脂、含有α-2,6- 连接唾液酸的糖蛋白、含有α-2,3-连接唾液酸的糖脂、含有α-2,3-连接唾液酸的糖蛋白、α-1-酸糖蛋白(AGP)、CD24蛋白、以及神经节苷脂。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与在细胞表面表达的本公开的CD33蛋白结合，并且裸抗体抑制CD33蛋白与一种或多种 CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，与本公开的CD33蛋白结合的本公开的抗CD33抗体通过降低可用的在细胞表面上或在细胞内部与这些蛋白质相互作用的CD33的有效水平来抑制CD33蛋白与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。在一些实施方案中，与本公开的CD33蛋白结合的本公开的抗 CD33抗体通过诱导CD33的降解来抑制CD33蛋白与一种或多种 CD33配体之间的相互作用(例如，结合)。
如本文所用，CD33的水平可指代编码CD33的基因的表达水平；指代一种或多种编码CD33的转录物的表达水平；指代CD33蛋白的表达水平；和/或指代存在于细胞内和/或细胞表面上的CD33蛋白的量。可使用本领域已知的用于测量基因表达、转录、翻译和/或蛋白质丰度或定位水平的任何方法来确定CD33的水平。
另外，本公开的抗CD33抗体可以用于预防、降低以下疾病的风险、或治疗以下疾病：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、佩吉特氏骨病、癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓样白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性脊髓硬化症、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、Cruzi感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏球菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可以用于诱导或促进有需要的个体的一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迁移或增值；或用于降低有需要的个体的以下细胞的活性、功能性或存活：调节性 T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制剂树突状细胞、肿瘤包埋的免疫抑制剂巨噬细胞、骨髓源性抑制剂细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病(AML)细胞、慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞和/或慢性骨髓性白血病(CML)细胞。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是单克隆抗体。
在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体降低CD33的细胞水平(例如，细胞表面水平、细胞内水平和/或总水平)。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的下调。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的切割。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的内化。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的脱落。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的降解。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体诱导CD33的脱敏。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当瞬时激活CD33 的配体模拟物。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并且在诱导CD33的细胞水平的降低和/或CD33与一种或多种CD33之间的相互作用(例如，结合)的抑制之前瞬时激活 CD33配体。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物并在诱导CD33降解之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并且在诱导 CD33切割瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗 CD33抗体充当配体模拟物，并且在诱导CD33内化之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并且在诱导CD33脱落之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并且在诱导 CD33表达下调之前瞬时激活CD33。在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体充当配体模拟物，并且在诱导CD33脱敏之前瞬时激活CD33。
在一些实施方案中，本公开的分离的抗CD33抗体是人抗体、人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体或嵌合抗体。此类抗体的示例性描述可见于整个本公开。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合人CD33或其同系物，包括但不限于哺乳动物CD33蛋白。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体特异性结合人CD33。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合人CD33，并且不与来自其他物种的CD33直系同源物或同系物发生交叉反应。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合在细胞表面上表达的本公开的CD33蛋白，并且在结合在细胞表面上表达的CD33蛋白质之后调节(例如，诱导或抑制)本公开的一种或多种CD33活性。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是惰性抗体。
抗CD33抗体结合区
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可结合构象表位。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可结合不连续的CD33表位。在一些实施方案中，不连续CD33表位包含两种或更多种肽、三种或更多种肽、四种或更多种肽、五种或更多种肽、六种或更多种肽、七种或更多种肽、八种或更多种肽、九种或更多种肽、或10种或更种肽。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可结合包含一种或多种肽的CD33表位。如本文所公开的，CD33表位可包含一种或多种肽，所述肽SEQ ID NO:1的氨基酸序列的5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、 11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多、15 个或更多个、16个或更多个、17个或更多个、18个或更多个、19个或更多个、或20个或更多个氨基酸残基，或包含对应于SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的哺乳动物CD33蛋白上的5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、 11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多、15 个或更多个、16个或更多个、17个或更多个、18个或更多个、19个或更多个、或20个或更多个氨基酸残基。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合的人CD33的表位与包含含有SEQ IDNO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有 SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体结合的 CD33表位相同或重叠。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合的CD33表位与包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33 抗体结合的CD33表位基本上相同。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性地抑制包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO: 104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体的结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与包含含有SEQ ID NO:103的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:104的氨基酸序列的轻链可变区的抗CD33抗体竞争结合CD33。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性地抑制选自表 1A-1C、2A-3C、3、4、5A-5D和6A-6D中列出的任何抗体的至少一种抗体的结合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体竞争性抑制选自以下的至少一种抗体的结合：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、 AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、 AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、 AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、 AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、 AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，当与在本公开的抗CD33抗体不存在的情况下结合CD33相比，本公开的抗CD33抗体使选自以下的一种或多种抗体与CD33的结合降低约50％至100％范围内的量时：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、 AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、 AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、 AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、 AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、 AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、 AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、 AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合，本公开的抗CD33 抗体与选自以下的一种或多种抗体竞争结合CD33：AB-14.1、 AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、 AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、 AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、 AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、 AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、 AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、 AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、 AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，当与在本公开的抗CD33抗体不存在的情况下结合CD33相比，本公开的抗CD33抗体使选自以下的一种或多种抗体与CD33的结合降低至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％时：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、 AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、 AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、 AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、 AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、 AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、 AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、 AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、 AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合，本公开的抗CD33抗体与选自以下的一种或多种抗体竞争结合CD33：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、 AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、 AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、 AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、 AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、 AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、 AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、 AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、 AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、 AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体使选自以下的一种或多种抗体与CD33的结合降低了100％：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、 AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、 AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、 AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、 AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、 AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合，表面本公开的抗CD33抗体竞争性地阻断了选自以下的一种或多种抗体与CD33的结合：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、 AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、 AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、 AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、 AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、 AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、 AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、 AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、 AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，抗CD33抗体与选自以下的一种或多种抗体：AB-14.1、AB-14.2、 AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、 AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、 AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、 AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、 AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、 AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、 AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、 AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、 AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合，以对应于抗CD33抗体与选自以下的一种或多种抗体10:1、9:1、 8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、0.75:1、0.5:1、0.25:1、0.1:1、 0.075:1、0.050:1、0.025:1、0.01:1、0.0075:、0.0050:1、0.0025:1、0.001:、 0.00075:1、0.00050:1、0.00025:1、0.0001:、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、 1:5、1:4、1:3、1:2、1:0.75、1:0.5、1:0.25、1:0.1、1:0.075、1:0.050、 1:0.025、1:0.01、1:0.0075、1:0.0050、1:0.0025、1:0.001、1:0.00075、1:0.00050、1:0.00025、或1:0.0001的量存在：AB-14.1、AB-14.2、 AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、 AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、 AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、 AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、 AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、 AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、 AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合。在一些实施方案中，与选自以下的一种或多种抗体的量相比： AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、 AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、 AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、 AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、 AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、 AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、 AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合，抗CD33抗体以超过约1.5倍至100倍或大于100倍的范围的量存在。在一些实施方案中，与选自以下的一种或多种抗体的量相比：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、 AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、 AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、 AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、 AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合，抗CD33抗体以超过约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、 7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、 45倍、50倍、55倍、60倍、65倍、70倍、75倍、80倍、85倍、 90倍、95倍、或100倍的量存在。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合的人CD33的表位与选自表1A-1C、2A-3C、3、4、5A-5D和6A-6D中列出的任何抗体的至少一种抗体结合的CD33表位相同或重叠。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合的人CD33的表位与选自以下的至少一种抗体结合的CD33表位相同或重叠：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、 AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、 AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、 AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、 AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、 AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、 AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、 AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、 AB-H64、AB-H65、AB-H66。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合的CD33表位与选自表1A-1C、2A-3C、3、4、5A-5D和6A-6D中列出的任何抗体的至少一种抗体结合的CD33表位基本上相同。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合的CD33表位与选自以下的至少一种抗体结合的CD33表位基本上相同：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、 AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、 AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、 AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、 AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、 AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、 AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、 AB-H65、AB-H66。用于绘制抗体结合的表位的详细实例性方法提供于Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols,”inMethods in Molecular Biology vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体与选自以下的一种或多种抗体竞争结合CD33：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、 AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、 AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、 AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、 AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、 AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、 AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、 AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、 AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、 AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合。
可利用本领域已知的任何合适的竞争测定或CD33结合测定(诸如BIAcore分析、ELISA测定或流式细胞术)来确定抗CD33抗体是否与选自以下的一种或多种抗体竞争结合CD33：AB-14.1、AB-14.2、 AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、 AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、 AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、 AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、 AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、 AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、 AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、 AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、 AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、AB-H66、以及它们的任何组合。在示例性竞争测定中，在溶液中孵育固定的CD33或在细胞表面上表达CD33的细胞，所述溶液包含结合CD33(例如，人或非人灵长类)的第一标记抗体和被测试其与第一抗体竞争结合CD33的能力的第二未标记抗体。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，在包含第一标记抗体但不包含第二未标记抗体的溶液中孵育固定的 CD33或表达CD33的细胞。在允许第一抗体结合CD33的条件下孵育之后，去除过量未结合抗体，并且测量与固定的CD33或表达CD33 的细胞缔合的标记的量。如果相对于对照样品，与固定的CD33或表达CD33的细胞缔合的标记的量在测试样品中显著降低，则这表明第二抗体与第一抗体竞争结合CD33。参见Harlow和Lane(1988) Antibodies:A Laboratory Manual ch.14(Cold SpringHarbor Laboratory, Cold Spring Harbor,NY)。
抗CD33抗体轻链和重链可变区
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表1A-1C 所示)的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、或全部三个)HVR。在一些实施方案中，重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2 和HVR-H3(如表1A-1C所示)。在一些实施方案中，抗体不是包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2、以及含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的 HVR-H3。
在一些实施方案中，HVR-H1包含根据式I的序列： GX1X2X3TDYNX4H(SEQ ID NO:152)，其中X1为Y、A、或V，X2为T或A，X3为F、E、或H，并且X4为L、F、Y、或N。在一些实施方案中，HVR-H1包含选自SEQ ID NO:105-114的序列。在一些实施方案中，HVR-H2包含根据式II的序列：FIYPX1NX2IX3G(SEQ ID NO:153)，其中X1为S或A，X2为G、Q、R或V，并且X3为T或R。在一些实施方案中，HVR-H2包含选自SEQ ID NO:115-120的序列。在一些实施方案中，HVR-H3包含根据式III的序列：SX1VDYFDX2 (SEQ ID NO:154)，其中X1为T、D、F或S，并且X2为Y、D或L。在一些实施方案中，HVR-H3包含选自SEQ ID NO:121-126的序列。
在一些实施方案中，重链可变区包含根据式I的HVR-H1、根据式II的HVR-H2和根据式III的HVR-H3，并且抗体不是包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO: 105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2、以及含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的 HVR-H3。在一些实施方案中，重链可变区包含含有选自SEQ ID NO: 105-114的序列的HVR-H1、和含有选自SEQ ID NO:115-120的序列的HVR-H2、以及含有选自SEQ ID NO:121-126的序列的HVR-H3，并且抗体不是包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有 GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有 FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2、以及含有 STVDYFDY(SEQ IDNO:121)的序列的HVR-H3。
在一些实施方案中，重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、 HVR-H2、和HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、 AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、 AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、 AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、 AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、 AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15、以及它们的任何组合(如表1A至1C所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，其中重链可变区包含以下中的一种或多种：(a)HVR-H1，其包含与以下抗体的HVR-H1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、 AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、 AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、 AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、 AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、 AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、 AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、 AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或 AB-64.1.15；(b)HVR-H2，其包含与以下抗体的HVR-H2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少 90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、 AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、 AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、 AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、 AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、 AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15；以及(c)HVR-H3，其包含与以下抗体的HVR-H3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、 AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、 AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、 AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、 AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、 AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、 AB-64.1.14、或AB-64.1.15，并且抗体不是包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的 HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ IDNO:115)的序列的HVR-H2、以及含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的HVR-H3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有氨基酸序列 GYTFTDYNLH(SEQID NO:105)的HVR-H1、含有氨基酸序列 FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)的HVR-H2和含有氨基酸序列 SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的HVR-H3。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的HVR-H1、含有氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118) 的HVR-H2和含有氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的 HVR-H3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含选自HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表2A-2C所示)的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、或全部三个)HVR。在一些实施方案中，轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和 HVR-L3(如表2A-2C所示)。在一些实施方案中，抗体不是包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH (SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO: 135)的序列的HVR-L2、以及含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，HVR-L1包含根据式IV的序列： X1X2SQX3VX4X5STYSYMH(SEQ IDNO:155)，其中X1为R或K， X2为A、G、或V，X3为S或D，X4为S、G、或H，并且X5为T 或A。在一些实施方案中，HVR-L1包含选自SEQ ID NO:127-134的序列。在一些实施方案中，HVR-L2包含根据式V的序列： YX1X2X3X4X5S(SEQ ID NO:156)，其中X1为A、V或E，X2为S、 V、或F，X3为N、A、Y或F，X4为L或V，并且X5为E、G或N。在一些实施方案中，HVR-L2包含选自SEQ ID NO:135-145的序列。在一些实施方案中，HVR-L3包含根据式VI的序列： X1HSX2X3X4PLX5(SEQ ID NO:157)，其中X1为Q或E，X2为W或E， X3为E或A，X4为I或L，并且X5为T或E。在一些实施方案中， HVR-l3包含选自SEQ ID NO:146-151的序列。
在一些实施方案中，轻链可变区包含根据式IV的HVR-L1、根据式V的HVR-L2和根据式VI的HVR-L3，并且抗体不是包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH (SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO: 135)的序列的HVR-L2、以及含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。在一些实施方案中，轻链可变区包含含有选自SEQ ID NO:127-134的序列的HVR-L1、和含有选自SEQ ID NO:135-145 的序列的HVR-L2、以及含有选自SEQ ID NO:146-151的序列的 HVR-L3，并且抗体不是包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2、以及含有 QHSWEIPLT(SEQ IDNO:146)的序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、 HVR-L2、和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、 AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、 AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、 AB-64.7、或AB-64.8、以及它们的任何组合(如表2A至2C所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，其中轻链可变区包含以下中的一种或多种：(a)HVR-L1，其包含与以下抗体的HVR-L1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、 AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、 AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、 AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、 AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、 AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、 AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、 AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或 AB-64.1.15；(b)HVR-L2，其包含与以下抗体的HVR-L2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少 90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、 AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、 AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、 AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、 AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、 AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15；以及(c)HVR-L3，其包含与以下抗体的HVR-L3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、 AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、 AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、 AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、 AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、 AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、 AB-64.1.14、或AB-64.1.15，并且抗体不是包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127) 的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ IDNO:135)的序列的 HVR-L2、以及含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有氨基酸序列 RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2和含有氨基酸序列 QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH (SEQ ID NO:127)的HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2和含有氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO: 146)的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含选自HVR-H1、HVR-H2和 HVR-H3(如表1A-1C所示)的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、或全部三个)HVR，所述轻链可变区包含选自HVR-L1、 HVR-L2和HVR-L3(如表2A-2C所示)的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、或全部三个)HVR。在一些实施方案中，重链可变区包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3(如表1A-1C所示)，并且轻链可变区包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3(如表2A-2C所示)。在一些实施方案中，抗体不是包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的 HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2、以及含有STVDYFDY(SEQID NO:121)的序列的HVR-H3，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2、以及含有QHSWEIPLT(SEQID NO:146)的序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，重链可变区包含根据式I的HVR-H1、根据式II的HVR-H2、以及根据式III的HVR-H3，并且轻链可变区包含根据式IV的HVR-L1、根据式V的HVR-L2、以及根据式VI的 HVR-L3，并且抗体不是包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的 HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的HVR-H2、以及含有STVDYFDY(SEQ ID NO:121)的序列的HVR-H3，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2、以及含有QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。在一些实施方案中，重链可变区包含含有选自SEQ ID NO:105-114的序列的HVR-H1、包含选自SEQ ID NO:115-120的序列的HVR-H2、以及包含选自SEQ ID NO:121-126的序列的HVR-H3，并且轻链可变区包含含有选自SEQ ID NO:127-134的序列的HVR-L1、含有选自SEQ ID NO:135-145的序列的HVR-L2、以及含有选自SEQ ID NO:146-151 的序列的HVR-L3，并且抗体不是包含重链可变区和轻链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO:115)的序列的 HVR-H2、以及含有STVDYFDY(SEQ IDNO:121)的序列的 HVR-H3，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、含有YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2、以及含有QHSWEIPLT(SEQID NO:146)的序列的 HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含以下抗体的HVR-H1、HVR-H2和 HVR-H3：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、 AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、 AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、 AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、 AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15、以及它们的任何组合(如表 1A至1C所示)；并且所述轻链可变区包含以下抗体的HVR-L1、 HVR-L2、和HVR-L3：AB-14.3、AB-14.4、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、 AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、 AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、 AB-63.17、AB-63.18、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、 AB-64.7、或AB-64.8、以及它们的任何组合(如表2A至表2C所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有HVR-H1、 HVR-H2和HVR-H3的重链可变区和包含HVR-L1、HVR-L2和 HVR-L3的轻链可变区，其中所述抗体包含以下抗体的HVR-H1、 HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3：AB-14.1、AB-14.2、 AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、 AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、 AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、 AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、 AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、 AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、 AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、 AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15(如表1A至表1C和表2A至表2C所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区包含以下中的一种或多种：(a)HVR-H1，其包含与以下抗体的HVR-H1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、 AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、 AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、 AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、 AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、 AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、 AB-64.1.14、或AB-64.1.15；(b)HVR-H2，其包含与以下抗体的 HVR-H2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、 AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、 AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、 AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、 AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、 AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、 AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、 AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15；以及(c)HVR-H3，其包含与以下抗体的HVR-H3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列： AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、 AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、 AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、 AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、 AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15，并且抗体不是包含重链可变区的抗体，所述重链可变区包含含有GYTFTDYNLH (SEQ ID NO:105)的序列的HVR-H1、含有FIYPSNGITG(SEQ ID NO: 115)的序列的HVR-H2、以及含有STVDYFDY(SEQ IDNO:121)的序列的HVR-H3；并且其中轻链可变区包含以下中的一种或多种：(a) HVR-L1，其包含与以下抗体的HVR-L1氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、 AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、 AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、 AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、 AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、 AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、 AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、 AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15；(b)HVR-L2，其包含与以下抗体的HVR-L2氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、 AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、 AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、 AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、 AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、 AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、 AB-64.1.14、或AB-64.1.15；以及(c)HVR-L3，其包含与以下抗体的 HVR-L3氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、 AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、 AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、 AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、 AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、 AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、 AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15，并且抗体不是包含轻链可变区的抗体，所述轻链可变区包含含有RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的序列的HVR-L1、包含 YASNLES(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2、以及包含 QHSWEIPLT(SEQ ID NO:135)的序列的HVR-L2、以及包含 QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的序列的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有氨基酸序列 GYTFTDYNLH(SEQID NO:105)的HVR-H1、含有氨基酸序列 FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)的HVR-H2、含有氨基酸序列 SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的HVR-H3、含有氨基酸序列 RASQSVSTSTYSYMH(SEQ IDNO:127)的HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2和含有氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的HVR-H1、含有氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ IDNO:118) 的HVR-H2、含有氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的 HVR-H3、含有氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127) 的HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2 和含有氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有选自SEQ ID NO:34-72的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，重链可变区包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变区包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含以下抗体的重链可变区：AB-14.1、AB-14.2、 AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、 AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、 AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、 AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、 AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、 AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15(如表3所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的HVR-H1、含有氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)的HVR-H2和含有氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的HVR-H3。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的HVR-H1、含有氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)的HVR-H2和含有氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的HVR-H3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有选自SEQ ID NO:77-101的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，轻链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含以下抗体的轻链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、 AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、 AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、 AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、 AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、 AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、 AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15(如表4所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的 HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2 和含有氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127) 的HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2 和含有氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有选自SEQ ID NO:34-72的氨基酸序列的重链可变区和含有选自SEQ ID NO:77-101 的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，重链可变区包含 SEQ ID NO:59的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ IDNO:86 的氨基酸序列。在一些实施方案中，重链可变区包含SEQ ID NO:65 的氨基酸序列，并且轻链可变区包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含以下抗体的重链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、 AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、 AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、 AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、 AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、 AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15(如表3所示)，和以下抗体的轻链可变区：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、 AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、 AB-63.4、AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、 AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、 AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、 AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、 AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、 AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或 AB-64.1.15(如表4所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的HVR-H1、含有氨基酸序列 FIYPSNRITG(SEQ IDNO:119)的HVR-H2和含有氨基酸序列 SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的HVR-H3，并且所述轻链可变区包含含有氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的 HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2 和含有氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO: 105)的HVR-H1、含有氨基酸序列FIYPSNQITG(SEQ ID NO:118)的 HVR-H2和含有氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID 122)的HVR-H3，并且所述轻链可变区包含含有氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH (SEQ ID NO:127)的HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2和含有氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQID NO: 146)的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有选自SEQ ID NO:34、40、42、52、53和73-76的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗体包含AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、 AB-H64、AB-H65或AB-H66的重链可变区(如表3所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含含有选自SEQ ID NO:77、86 和102的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含抗体AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65 或AB-H66的轻链可变区(如表4所示)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:34、40、42、52、53和73-76的氨基酸序列，所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:77、86和102的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、 AB-H64、AB-H65、或AB-H66的重链可变区(如表3所示)，以及抗体AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、或AB-H66的轻链可变区(如表4所示)。
本公开的任何抗体可由细胞系产生。在一些实施方案中，细胞系可以是哺乳动物细胞系。在某些实施方案中，细胞系可以是杂交瘤细胞系。在其他实施方案中，细胞系可以是酵母细胞系。可使用适合抗体产生的本领域已知的任何细胞系来产生本公开的抗体。用于抗体产生的示例性细胞系在整个本公开中进行描述。
在一些实施方案中，抗CD33抗体是选自以下的抗CD33单克隆抗体：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、 AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、 AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、 AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、 AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、 AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、或AB-H66。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1的HVR-H1、 HVR-H2、和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗 CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体 AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1的HVR-L1、 HVR-L2、和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体 AB-64.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗 CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ IDNO:52的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1的HVR-H3 氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体 AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33 的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至 5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的 HVR：(a)抗体AB-64.1的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1的 HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.1 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.1的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.1的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:58的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.1的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.1的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.1 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.1的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.1的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.1的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.1 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.2 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.2的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.2的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:59的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.2的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:59的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:59的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.2的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.2的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.2 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.2的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.2的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.2的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.2 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.3 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.3的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.3的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:60的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:60的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.3的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:60的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:60的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.3的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.3的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.3 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.3的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.3的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.3的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.3的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.3 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.4 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:61的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:61的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.4的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.4的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:61的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:61的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.4的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:61的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:61的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.4的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.4的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.4 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.4的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.4的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.4的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.4的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.4 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.5 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:62的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:62的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.5的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.5的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:62的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:62的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.5的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:62的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:62的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.5的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.5的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.5 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.5的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.5的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.5的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.5的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.5 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.6 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:63的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:63的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.6的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.6的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:63的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:63的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:63的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:63的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.6的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.6的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.6 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.6的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.6的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.6的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.6 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.7 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:64的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:64的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.7的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.7的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:64的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:64的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.7的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:64的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:64的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.7的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.7的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.7 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.7的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.7的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.7的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.7的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.7 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.8 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.8的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.8的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:65的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:65的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.8的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:65的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:65的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.8的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.8的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.8 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.8的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.8的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.8的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.8 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.9 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少 89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.9的 HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.9的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗 CD33抗体包含与抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:66的氨基酸序列中的总共 1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.9的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:66的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:66的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.9的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.9的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.9 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.9的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.9的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.9的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.9的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.9 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.10 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.10的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.10 的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.10 的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.10的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.10 的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:67的氨基酸序列中的总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.10的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:67的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:67的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.10的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.10的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.10 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体 AB-64.1.10的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.10的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.10的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.10的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.10 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.11 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.11的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:68 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.11 的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.11 的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.11的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:68的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.11 的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:68的氨基酸序列中的总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.11的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:68的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:68的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.11的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.11的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.11 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体 AB-64.1.11的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.11的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.11的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.11的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.11 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.12 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:69 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.12 的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.12 的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.12 的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:69的氨基酸序列中的总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:69的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:69的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.12的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.12的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.12 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体 AB-64.1.12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.12的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.12的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.12的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.12 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.13 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.13的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.13 的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.13 的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.13的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:52的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.13 的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:52的氨基酸序列中的总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.13的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:52的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:52的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.13的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.13的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.13 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体 AB-64.1.13的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.13的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.13的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.13的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.13 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.14 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.14的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:71 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.14 的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.14 的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.14的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:71的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.14 的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:71的氨基酸序列中的总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.14的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:71的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:71的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.14的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.14的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.14 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体 AB-64.1.14的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.14的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.14的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.14的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.14 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.15 的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列；和 /或所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含与抗体AB-64.1.15的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:72 的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AB-64.1.15 的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含与抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO: 86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AB-64.1.15 的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.15的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:72的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33 抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.15 的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:72的氨基酸序列中的总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.15的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:72的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR 区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体CD33的或SEQ ID NO:72的VH序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.15的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.15的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.15 的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含与抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:86的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并且含有取代(例如，相对于参照序列的保守性取代、插入或缺失)，但是包含该序列的抗CD33抗体保留结合CD33的能力。在某些实施方案中，抗体AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:86的氨基酸序列中的总共1至10 个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体 AB-64.1.15的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:86的氨基酸序列中的总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR外部的区域(即，FR区中)。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，抗CD33抗体包含抗体AB-64.1.15的或SEQ ID NO:86的VL序列，包括该序列的翻译后修饰。在特定的实施方案中，VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AB-64.1.15的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AB-64.1.15的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AB-64.1.15 的HVR-L3氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体 AB-64.1.2。在一些实施方案中，抗CD33抗体是与AB-64.1.2基本上结合相同的CD33表位的分离的抗体。在一些实施方案中，抗CD33 抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.2的重链可变结构域的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.2的轻链可变结构域的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.2的重链可变结构域的 HVR-H1、HVR-H2、和HVR-H3以及轻链可变结构域的HVR-L1、 HVR-L2、和HVR-L3。
在一些实施方案中，抗CD33抗体是抗CD33单克隆抗体 AB-64.1.8。在一些实施方案中，抗CD33抗体是与AB-64.1.8基本上结合相同的CD33表位的分离的抗体。在一些实施方案中，抗CD33 抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.8的重链可变结构域的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.8的轻链可变结构域的 HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3。在一些实施方案中，抗CD33抗体是分离的抗体，其包含单克隆抗体AB-64.1.8的重链可变结构域的 HVR-H1、HVR-H2、和HVR-H3以及轻链可变结构域的HVR-L1、 HVR-L2、和HVR-L3。
在某些实施方案中，抗CD33抗体是拮抗剂抗体。在某些实施方案中，抗CD33抗体是激动剂抗体或惰性抗体。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体属于IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3 或IgG4同种型。
另外的抗CD33抗体(例如，特异性结合本公开的CD33蛋白的抗体)可通过本领域已知的各种测定来鉴定、筛选和/或表征其物理/化学性质和/或生物活性。
能够结合Fcγ受体的抗CD33抗体
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体保留了结合Fcγ受体的能力。在一些实施方案中，当此类抗体具有与受体激活相容的正确表位特异性时，此类抗体可具有使它们能够簇集和瞬时刺激例如 CD33受体的特征。在一些实施方案中，此类抗体随后可通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33切割、CD33内化、CD33脱落、CD33 表达下调和/或CD33溶酶体降解来充当CD33表达和/或CD33的一种或多种活性的长期抑制剂。
在体内，本公开的抗CD33抗体可以通过多种潜在机制中的任何一种或多种来簇集受体并瞬时激活CD33。人抗体的同种型(诸如 IgG2)，由于其独特的结构，具有簇集受体、或使受体保留在簇集构型中、从而瞬时激活受体(诸如CD33)而不结合Fc受体的固有能力(例如,White等人，(2015)Cancer Cell 27,138–148)。
在一些实施方案中，其他抗体可以通过结合相邻细胞上的Fcg受体来簇集受体(例如，CD33)。在一些实施方案中，抗体的恒定IgG Fc区与Fcg受体的结合可导致抗体的聚集，并且抗体继而可聚集所述抗体通过其可变区结合的受体(Chu等人(2008)Mol Immunol,45:3926-3933；和Wilson等人，(2011)Cancer Cell 19,101–113)。在一些实施方案中，与不引发细胞因子分泌、氧化爆发、吞噬作用增加、以及抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)增强的抑制性Fcg受体 FcgR(FcgRIIB)的结合是在体内簇集抗体的优选方式，因为与FcgRIIB的结合不与不良免疫应答作用相关。
存在本公开的抗CD33抗体可以簇集受体的其他机制。例如，交联在一起的抗体片段(例如，Fab片段)可用于以与如上所述的具有结合Fcg受体的Fc区的抗体相似的方式簇集受体(例如，CD33)。在一些实施方案中，如果交联的抗体片段(例如，Fab片段)诱导细胞表面上的受体簇集并且结合靶标(例如，CD33)上的适当表位，则所述交联的抗体片段可瞬时充当激动剂抗体。
因此，在一些实施方案中，在本公开的结合CD33蛋白的抗体可包括在例如降低CD33的细胞水平、抑制一种或多种CD33活性和/ 或抑制CD33和一种或多种CD33配体的相互作用(例如，结合)之前，由于其表位特异性结合CD33并瞬时激活一种或多种CD33活性的抗体。在一些实施方案中，此类抗体可结合CD33上的配体结合位点并且瞬时模拟天然配体的作用、或通过结合一个或多个不是配体结合位点的结构域来刺激靶抗原转导信号。在一些实施方案中，此类抗体将不干扰配体结合。在一些实施方案中，无论抗体是否与CD33上的配体结合位点结合，所述抗体随后可通过诱导CD33降解、CD33脱敏、 CD33切割、CD33内化、CD33脱落、CD33表达下调和/或CD33溶酶体降解来充当CD33表达和/或CD33的一种或多种活性的长期抑制剂。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体是瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性的抗体。在一些实施方案中，抗体在结合在细胞中表达的CD33蛋白之后瞬时诱导一种或多种活性。在一些实施方案中，CD33蛋白在细胞表面上表达。在一些实施方案中，由本公开的抗CD33抗体瞬时诱导的CD33蛋白的一种或多种活性可包括但不限于：Src家族酪氨酸激酶(诸如LCK和FYN)对Tyr-340和Tyr-358的磷酸化中的一种或多种；募集并结合酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1 和SHP2；募集并结合PLC-γ1，其充当Dynamini-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子；募集并结合含有SH2结构域的蛋白质(例如，Crk1)；募集并结合脾脏酪氨酸激酶Syk；募集并结合SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白2(Grb2)；募集并结合多种含含有SH2的蛋白质；蛋白激酶C磷酸化Ser-307和Ser-342；调节一种或多种抗炎细胞因子IL-4、 IL-10、IL-13、IL-35、IL-16、TGF-β、IL-1Ra、G-CSF、以及TNF、 IFN-β1a、IFN--β1b、或IL-6的可溶性受体在单核细胞、巨噬细胞、T 细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞中的表达；减少细胞内钙动员；调节一种或多种促炎细胞因子IFN-a4、IFN-b、IL-1β、 TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IL-20家族成员、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、 CRP、IL-33、MCP-1、以及MIP-1-β在单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞中的表达；调节选自以下的一种或多种蛋白质的表达：C1qa、C1qB、C1qC、C1s、C1R、 C4、C2、C3、ITGB2、HMOX1、LAT2、CASP1、CSTA、VSIG4、 MS4A4A、C3AR1、GPX1、TyroBP、ALOX5AP、ITGAM、SLC7A7、 CD4、ITGAX、PYCARD、CD14、CD16、HLA-DR、以及CCR2；抑制细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化；减少对多种细胞蛋白的酪氨酸磷酸化；调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达；抑制小胶质细胞对表达CCL19和CCL21的细胞的趋化性；激活磷酸肌醇3-激酶；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞和/或小胶质细胞的细胞生长；降低由树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞、M2小胶质细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、和/或M2巨噬细胞诱导的T细胞增殖；抑制破骨细胞产生、降低破骨细胞生成速率、或两者；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的存活；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的增殖；抑制嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的迁移；减少嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2 小胶质细胞的一种或多种功能；抑制嗜中性粒细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、 M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和/或M2小胶质细胞的成熟；增加单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的细胞死亡和凋亡；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的吞噬活性；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的增殖；降低单核细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、嗜中性粒细胞和/或小胶质细胞的整体功能性、含有ITAM的受体的磷酸化；介导ITAM信号传导的信号传导分子的磷酸化；减少模式识别受体的激活；减少Toll样受体的激活；减少与清除细胞和蛋白质碎片相关的损伤的激活；CD33与其配体中的一种或多种的相互作用；CD33与共受体(诸如CD64)之间的相互作用；减少对选自以下的一种或多种类型的清除：凋亡神经元清除、功能障碍的突触清除、神经组织碎片清除、非神经组织碎片清除、细菌或其他异物清除、致病蛋白清除、以及肿瘤细胞清除；抑制对凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他异物、致病蛋白、致病多肽、致病核酸、致病脂质、或肿瘤细胞中的一种或多种的吞噬作用；抑制对致病核酸的清除，诸如致病核酸是反义GGCCCC(G2C4) 重复序列扩增RNA；激活对选自以下的致病蛋白的清除：淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前提蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框 72)、c9RAN蛋白、朊蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降血钙素、过氧化物歧化酶、ataxin、ataxin 1、ataxin 2、ataxin3、ataxin 7、ataxin 8、 ataxin 10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、血清胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP) 重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、泛素、以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽；抑制对选自以下的不同类型癌症的有益免疫应答：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、和甲状腺癌；抑制对选自以下的不同类型的神经系统病症的有益免疫应答：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、特发性震颤、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、以及多发性硬化症；抑制对选自以下的不同类型的炎性和感染性病症的有益免疫应答：狼疮、急性和慢性结肠炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、以及佩吉特氏骨病；抑制对凋亡神经元、神经组织碎片、功能障碍的突触、非神经组织碎片、细菌、其他异物、致病蛋白、致病多肽、致病核酸、或肿瘤细胞中的一种或多种的吞噬作用，其中致病核酸可以是反义GGCCCC(G2C4)重复序列扩增RNA，致病蛋白可包括淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前提蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、 c9RAN蛋白、朊蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降血钙素、过氧化物歧化酶、ataxin、ataxin 1、ataxin 2、ataxin 3、ataxin 7、ataxin 8、ataxin 10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白 AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、血清胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、泛素、以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽，并且肿瘤细胞可来自选自以下的癌症：膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、或甲状腺癌；与肿瘤细胞上的CD33 配体结合；与树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、单核细胞、小胶质细胞、T细胞、嗜中性粒细胞和/或巨噬细胞上的CD33配体结合；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T细胞中的一种或多种的肿瘤细胞杀伤；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T 细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞增殖活性；抑制小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞、或细胞毒性T细胞中的一种或多种的抗肿瘤细胞转移活性；促进免疫抑制剂树突状细胞、免疫抑制剂巨噬细胞、骨髓源性抑制剂细胞、肿瘤相关巨噬细胞、或调节性T细胞；抑制一种或多种含有ITAM基序的受体，诸如TREM1、TREM2、FcgR、DAP10、以及DAP12；抑制一种或多种含有基序D/Ex0–2YxxL/IX6–8YxxL/I (SEQ ID NO:165)的受体；抑制一种或多种模式识别受体(PRR)的信号传导，所述受体诸如鉴定病原体相关分子模式(PAMP)的受体和鉴定损伤相关分子模式的受体(DAMP)；抑制一种或多种Toll样受体的信号传导；抑制JAK-STAT信号传导途径；抑制活化的B细胞的核因子κ轻链增强子(NFκB)；抑制PLCγ/PKC/钙动员；抑制PI3K/Akt、 Ras/MAPK信号传导；调节在小胶质细胞、巨噬细胞、树突状细胞、骨髓源性树突状细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、辅助T细胞或细胞毒性T细胞中的一种或多种上表达的一种或多种炎性受体(诸如CD86) 的表达；增加一种或多种CD33依赖性基因的表达；破坏的CD33依赖性基因表达的正常化；以及减少一种或多种ITAM依赖性基因(诸如NFAT转录因子)的表达。可利用本领域已知的和本文公开的任何合适的技术或测定来测试本公开的抗CD33抗体瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性的能力。无论此类抗体瞬时诱导的活性如何，此类抗体随后可通过诱导CD33降解、CD33脱敏、CD33切割、CD33内化、CD33脱落、CD33表达下调和/或CD33溶酶体降解来充当CD33 表达和/或CD33的一种或多种活性的长期抑制剂。在一些实施方案中，CD33抗体瞬时诱导CD33蛋白的一种或多种活性，而与与Fc受体的结合无关。
示例性抗体Fc同种型和修饰在下文的表B中提供。在一些实施方案中，能够结合Fcγ受体的本公开的抗CD33抗体具有下文的表B 中列出的Fc同种型。
表B：能够结合Fcγ受体的示例性抗CD33抗体Fc同种型
Figure BDA0003787403120001281
Figure BDA0003787403120001291
Figure BDA0003787403120001301
除了表C中所描述的同种型之外，并且不希望受到理论的束缚，认为结合人的Fcg受体I、IIA、IIC、IIIA、IIIB和/或小鼠的Fcg受体I、III和IV的、具有人IgG1或IgG3同种型及其突变体(例如，Strohl (2009)Current Opinion in Biotechnology 2009,20:685–691)的抗体也可充当瞬时激动剂抗体。
在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体属于IgG类、IgM类或IgA 类。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG1、IgG2、IgG3 或IgG4同种型。在一些实施方案中，抗体包含Fc区中的由以下组成的组的残基位置处的1个或多个(例如，1个或多个、2个或更多个、 3个或更多个、4个或更多个、5个或更多个、6个或更多个、7个或更多个、8个或更多个、9个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、或全部13个)氨基酸取代：C127S、L234A、L234F、 L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、 E430G、S440Y的任何组合(根据EU或Kabat编号的残基位置)。在一些实施方案中，Fc区包含位置E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置L243A、L235A和P331A处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置L243A、L235A、P331A处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置K322A和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置A330S、P331S 和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置 K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc 区包含位置K322A、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置A330S、P331S和E430G处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置S267E和L328F处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置C127S处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代。在一些实施方案中，Fc区包含位置L243A、L235A和P331S处的氨基酸取代。
在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体含有人IgG2恒定区。在一些实施方案中，人IgG2恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自V234A(Alegre等人，(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人，(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A (Cole等人(1999)Transplantation,68:563-571)、H268Q、V309L、 A330S、P331S(US 2007/0148167；Armour等人(1999)Eur J Immunol 29:2613-2624；Armour等人(2000)The Haematology Journal 1(Suppl.1):27；Armour等人(2000)The Haematology Journal 1(Suppl.1):27)、C232S和/或C233S(White等人(2015)Cancer Cell 27, 138–148)、S267E、L328F(Chu等人，(2008)MolImmunol, 45:3926-3933)、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置根据 EU或Kabat编号惯例。
在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型，所述 IgG2同种型具有含有C127S氨基酸取代的重链恒定结构域，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例(White等人，(2015)Cancer Cell 27, 138-148；Lightle等人，(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；和 WO2008079246)。
在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG2同种型，所述IgG2同种型具有含有C214S氨基酸取代的κ轻链恒定结构域，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例(White等人，(2015)Cancer Cell 27,138-148；Lightle等人，(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；和 WO2008079246)。
在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体含有小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体含有人IgG1恒定区。在一些实施方案中，人IgG1恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性 Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自N297A(Bolt S等人(1993)Eur J Immunol 23:403-411)、D265A(Shields等人(2001)R.J.Biol.Chem.276, 6591–6604)、D270A、L234A、L235A(Hutchins等人(1995)Proc Natl Acad Sci USA,92:11980-11984；Alegre等人，(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人，(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A (Alegre等人(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人(2000) Cell Immunol,200:16-26)、P238D、L328E、E233D、G237D、H268D、 P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、L234V、L234F、L235E(McEarchern等人，(2007)Blood,109:1185-1192)、P331S(Sazinsky等人，(2008)Proc NatlAcad Sci USA 2008,105:20167-20172)、S267E、 L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、 A327Q、A327G、P329A、K322A和/或T394D，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。
在一些实施方案中，抗体包括IgG2同种型重链恒定结构域1(C H1)和铰链区(White等人，(2015)Cancer Cell 27,138–148)。在某些实施方案中，IgG2同种型CH1和铰链区含有ASTKGPSVFPLAPCS RSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVE CPPCP(SEQ ID NO:166)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体F c区含有S267E氨基酸取代、L328F氨基酸取代、或两者和/或N297 A或N297Q氨基酸取代，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。
在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体含有人IgG4恒定区。在一些实施方案中，人IgG4恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自L235A、G237A、S228P、L236E(Reddy等人，(2000)JImmunol,164:1925-1933)、S267E、E318A、L328F、M252Y、 S254T和/或T256E，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。
在某些实施方案中，Fcγ受体结合抗体具有杂交体IgG2/4同种型。在一些实施方案中，Fcγ受体结合抗体包括含有人IgG2的根据 EU或Kabat编号的氨基酸118至260和人IgG4的根据EU或Kabat 编号的氨基酸261-447的氨基酸序列(WO 1997/11971；WO 2007/106585)。
在某些实施方案中，抗体含有小鼠IgG4恒定区(Bartholomaeus 等人(2014).J.Immunol.192,2091–2098)。
在一些实施方案中，Fc区还含有选自由以下组成的组的一个或多个另外的氨基酸取代：根据EU或Kabat编号的A330L、L234F； L235E、或P331S；以及它们的任何组合。
在某些实施方案中，抗体含有Fc区中的选自C127S、L234A、 L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、 E345R、E430G、S440Y、以及它们的任何组合的残基位置处的一个或多个氨基酸取代，其中残基的编号根据EU或Kabat编号。在一些实施方案中，Fc区含有位置E430G、L243A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中， Fc区含有位置E430G和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有位置E430G和K322A 处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有位置E430G、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有位置 E430G、K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有位置E430G、K322A 和A330S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有位置E430G、K322A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc 区含有位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区含有位置C127S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc 区含有位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc区包含位置L243A、 L235A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置的编号根据EU编号。
惰性抗体
本公开的另一类抗CD33抗体包括惰性抗体。如本文所用，“惰性”抗体是指特异性结合其靶抗原(例如，CD33)但不调节(例如，降低 /抑制或激活/诱导)抗原功能的抗体。例如，在CD33的情况下，惰性抗体不调节CD33的细胞水平、不调节CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)、或不调节CD33蛋白的一种或多种活性。在一些实施方案中，不具有将CD33簇集在细胞表面上的能力的抗体可以是惰性抗体，即使它们具有与受体激活相容的表位特异性。
在一些实施方案中，结合CD33蛋白的抗体可以包括结合CD33 但由于它们的表位特异性或特性不降低CD33的细胞水平和/或抑制 CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)的抗体。在一些实施方案中，此类抗体可用作例如将毒素(例如，化学治疗剂) 转运到肿瘤细胞中的货物。因此，在一些实施方案中，本公开的抗体是惰性抗体，其结合CD33但不能降低CD33的细胞水平、抑制CD33 与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合)、或诱导CD33 蛋白的一种或多种活性。
降低或不降低CD33在细胞上的细胞水平的抗体可以与显示出与一种或多种Fcg受体的结合减少的惰性Fc区组合。下文的表D中提供了此类Fc区和修饰的实例。在一些实施方案中，具有惰性Fc区的抗体具有下文的表D中列出的Fc同种型。
抑制性抗CD33抗体
本公开的第三类抗CD33抗体包括阻断或以其他方式抑制一种或多种CD33活性的抗体。在一些实施方案中，结合CD33蛋白的抗体可包括降低CD33的细胞水平(例如，CD33的细胞表面水平、CD33 的细胞内水平和/或CD33的总水平)、抑制CD33和/或一种或多种 CD33配体之间的相互作用(例如，结合)、且抑制CD33蛋白的一种或多种活性的抗体。在一种或多种CD33配体的存在下，此类抗体通过阻止CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用(例如，结合) 或通过阻止信号从CD33的细胞外结构域转导到细胞质中来抑制 CD33蛋白的一种或多种活性。抗体还可以通过诱导CD33降解、CD33 脱敏、CD33切割、CD33内化、CD33脱落、CD33表达下调和/或 CD33溶酶体降解来降低CD33的细胞表面水平来抑制CD33蛋白的一种或多种活性。在一些实施方案中，此类抗CD33抗体可能不瞬时激活CD33。
在某些实施方案中，本公开提供了抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体降低CD33的细胞水平、降低CD33的细胞表面水平、降低CD33的细胞内水平、降低CD33的总水平或它们的任何组合。在某些实施方案中，抗CD33抗体在单核细胞、粒细胞、外周血单核细胞、外周血粒细胞、CSF单核细胞和/或CSF粒细胞中降低CD33的细胞水平、降低CD33的细胞表面水平、降低CD33的细胞内水平、降低CD33的总水平或它们的任何组合。
在某些实施方案中，本公开提供了抗CD33抗体，其中所述抗 CD33抗体诱导CD33降解、CD33切割、CD33内化、CD33下调或它们的任何组合。在某些实施方案中，抗CD33抗体在单核细胞、粒细胞、外周血单核细胞、外周血粒细胞、CSF单核细胞和/或CSF粒细胞中诱导CD33降解、CD33切割、CD33内化、CD33下调或它们的任何组合。
在某些实施方案中，本公开提供了抗CD33抗体，其中所述抗 CD33抗体降低CD33的细胞水平并且抑制CD33与CD33配体之间的相互作用。在某些实施方案中，抗CD33抗体在单核细胞、粒细胞、外周血单核细胞、外周血粒细胞、CSF单核细胞和/或CSF粒细胞中降低CD33的细胞水平并且抑制CD33与CD33配体之间的相互作用。
在一些实施方案中，与施用抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，根据本文提供的方法施用抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低至少约70％(例如，至少约70％、至少约75％、至少约 80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％)。在一些实施方案中，与施用抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，根据本文提供的方法施用抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低至少约75％。在一些实施方案中，与施用抗CD33抗体之前的 CD33的细胞表面水平相比，根据本文提供的方法施用抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低至少约80％。在一些实施方案中，与施用抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，根据本文提供的方法施用抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低至少约85％。在一些实施方案中，与施用抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，根据本文提供的方法施用抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低至少约90％。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后， CD33的细胞表面水平的降低存在至少约10天(例如，至少10天、至少15天、至少20天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40 天、至少45天、至少50天、至少55天、至少60天、至少70天、至少80天、至少90天、或至少100天)。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约12天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约17天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约29天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约42天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33 的细胞表面水平的降低存在至少约56天。在一些实施方案中，在施用抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约84天。在一些实施方案中，CD33的细胞表面水平的降低是个体的单核细胞、粒细胞、外周血单核细胞、外周血粒细胞、CSF单核细胞和/或CSF 粒细胞上CD33的细胞表面水平的降低。
在一些实施方案中，与施用本公开的抗CD33抗体之前的CD33 的细胞表面水平相比，本公开的抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低了超过约70％(例如，约70％或更多、约75％或更多、约80％或更多、约85％或更多、约90％或更多、约95％或更多、或约99％或更多)。在一些实施方案中，与施用本公开的抗CD33抗体之前的 CD33的细胞表面水平相比，在单次静脉内给药1.6mg/kg和约15 mg/kg之间(例如，约1.6mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10 mg/kg、约11mg/kg、约12mg/kg、约13mg/kg、约14mg/kg、或约 15mg/kg)的抗体之后，本公开的抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低了超过约70％。在一些实施方案中，与施用本公开的抗CD33 抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，在单次静脉内给药1.6mg/kg 的抗体之后，本公开的抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低了超过约70％。在一些实施方案中，与施用本公开的抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，在单次静脉内给药15mg/kg的抗体之后，本公开的抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低了超过约 70％。在一些实施方案中，与施用本公开的抗CD33抗体之前的CD33 的细胞表面水平相比，在单次静脉内给药15mg/kg的抗体之后，本公开的抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低了超过约80％。在一些实施方案中，与施用本公开的抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，在单次静脉内给药15mg/kg的抗体之后，本公开的抗CD33抗体使CD33的细胞表面水平降低了超过约85％。在一些实施方案中，与施用本公开的抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，在单次静脉内给药15mg/kg的抗体之后，本公开的抗CD33 抗体使CD33的细胞表面水平降低了超过约90％。在一些实施方案中， CD33的细胞表面水平的降低发生在来自个体的全血、粒细胞、外周血单核细胞、外周血粒细胞、CSF单核细胞和/或CSF粒细胞的单核细胞中。
在一些实施方案中，CD33的细胞表面水平可根据本领域已知的任何方法来确定。在一些实施方案中，CD33的细胞表面水平可使用流式细胞术来确定。在一些实施方案中，CD33的细胞表面水平表示为平均荧光强度(MFI)。在一些实施方案中，CD33的细胞表面水平表示为等量可溶性荧光分子(MESF)(例如，参见Schawrts等人，(2004) Clin Cytometry57B:1-6)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可具有本公开的瞬时激动剂抗CD33抗体的表位特异性，但是具有不能结合Fcg受体并因此不能例如瞬时簇集并激活CD33的Fc结构域。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体具有但不限于以下活性中的一种或多种：降低CD33蛋白与一种或多种CD33配体(诸如含有唾液酸的糖脂或含有唾液酸的糖蛋白)的结合的能力，降低细胞因子信号传导(SOCS)蛋白(例如，SOCS3蛋白)的抑制剂与CD33蛋白的结合的能力，增加CD33蛋白的蛋白酶体降解的能力，降低CD33在循环树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、T细胞和/或小胶质细胞的表面上的功能表达的能力，降低Src家族酪氨酸激酶(诸如LCK和FYN) 对Tyr-340和Tyr-358的磷酸化的能力，降低募集和结合酪氨酸特异性蛋白磷酸酶SHP1和SHP2的能力，降低募集和结合PLC-g1的能力，PLC-g1充当Dynamin-1的鸟嘌呤核苷酸交换因子、降低募集和结合Crkl的能力，降低募集和结合脾脏酪氨酸激酶Syk的能力，降低募集和结合SH3-SH2-SH3生长因子受体结合蛋白2(Grb2)的能力，降低募集和结合多种含有SH2的蛋白质的能力，增加细胞内钙动员的能力，调节促炎细胞因子IL-1β、IL-8和TNF-α的产生的能力，降低磷酸肌醇3-激酶的活化的能力，增加单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、T细胞和/或小胶质细胞的生长的能力，增加单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、T细胞和/或小胶质细胞的存活的能力，增加对多种细胞蛋白的酪氨酸磷酸化的能力，增加单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞和/或小胶质细胞的吞噬活性的能力，增加单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞、T细胞和/或小胶质细胞的细胞增殖的能力，增加介导 ITAM信号传导的信号传导分子的磷酸化的能力，增加模式识别受体的功能的能力，增加Toll样受体的功能的能力，增加损伤相关分子模式(DAMP)受体的功能的能力，调节C-C趋化因子受体7(CCR7)的表达的能力，以及增加细胞和蛋白质碎片的清除的能力。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体具有显示出与一种或多种Fcg受体结合减少的Fc区。下文的表D中提供了此类Fc区和修饰的实例。在一些实施方案中，抗体具有在下文的表D中列出的 Fc同种型。
与Fcγ的受体结合减少的抗体Fc同种型
在一些实施方案中，与Fcγ受体的结合减少的抗CD33抗体具有下文的表C中列出的Fc同种型。
表C：与Fcγ受体的结合减少的示例性抗CD33抗体Fc同种型
Figure BDA0003787403120001401
在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，抗体含有小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，抗体含有人IgG1恒定区。在一些实施方案中，人IgG1恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。
在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自N297A、N297 Q(Bolt S等人(1993)Eur J Immunol 23:403-411)、D265A、D270A、 L234A、L235A(McEarchern等人，(2007)Blood,109:1185-1192)、C 226S、C229S(McEarchern等人，(2007)Blood,109:1185-1192)、P2 38S(Davis等人，(2007)J Rheumatol,34:2204-2210)、E233P、L234 V(McEarchern等人，(2007)Blood,109:1185-1192)、P238A、A327 Q、A327G、P329A(ShieldsRL等人，(2001)J Biol Chem.276(9): 6591-604)、K322A、L234F、L235E(Hezareh等人，(2001)J Virol 75,12161–12168；Oganesyan et al.,(2008).Acta Crystallographica 64,700–704)、P331S(Oganesyan等人，(2008)Acta Crystallographic a 64,700–704)、T394D(Wilkinson等人(2013)MAbs 5(3):406–41 7)、A330L、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置根据EU 或Kabat编号惯例。在某些实施方案中，Fc区还包括根据EU或Kab at编号惯例的对应于甘氨酸236的位置处的氨基酸缺失。
在一些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG1同种型，所述IgG1 同种型具有含有根据EU或Kabat编号惯例的C220S氨基酸取代的重链恒定区。在一些实施方案中，Fc区还含有选自根据EU或Kabat 编号惯例的A330L、L234F；L235E和/或P331S的一个或多个另外的氨基酸取代。在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，抗CD33抗体含有人IgG2恒定区。在一些实施方案中，人IgG2恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自P238S、V234A、G237A、H268A、 H268Q、H268E、V309L、N297A、N297Q、V309L、A330S、P331S、 C232S、C233S、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置根据 EU或Kabat编号惯例(Vafa O.等人，(2014)Methods 65:114–126)。
在某些实施方案中，抗CD33抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，抗CD33抗体含有人IgG4恒定区。在一些实施方案中，人IgG4恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个修饰。例如，在一些实施方案中，Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，一个或多个氨基酸取代选自E233P、F234V、L235A、G237A、E318A (Hutchins等人(1995)Proc Natl Acad Sci USA,92:11980-11984)、 S228P、L234A/F234A、L236E、S241P、L248E(Reddy等人，(2000)J Immunol,164:1925-1933；Angal等人，(1993)Mol Immunol.30(1):105-8； US 8614299B2；Vafa O.等人，(2014)Methods 65:114–126)、T394D、 M252Y、S254T、T256E、N297A、和/或N297Q，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。在一些实施方案中，抗体具有IgG4同种型，并且包含残基位置228处的S228P氨基酸取代、残基位置234 处的F234A氨基酸取代和残基位置235处的L235A氨基酸取代(根据 EU编号的残基位置)。
在一些实施方案中，Fc区还含有选自M252Y、S254T和/或T256E 的一个或多个另外的氨基酸取代，其中氨基酸位置根据EU或Kabat 编号惯例。
另外的IgG突变
在一些实施方案中，本文所述的IgG1变体中的一个或多个可与 A330L突变(Lazar等人，(2006)Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010)、或L234F、L235E和/或P331S突变(Sazinsky等人， (2008)Proc Natl Acad Sci USA,105:20167-20172)中的一个或多个组合来消除补体激活，其中氨基酸位置根据EU或Kabat编号惯例。在一些实施方案中，本文所述的IgG变体可与一个或多个突变(例如，根据EU或Kabat编号惯例的M252Y、S254T、T256E突变)(Dall’Acqua 等人，(2006)J Biol Chem,281:23514-23524；和Strohl等人，(2009)Current Opinion in Biotechnology,20:685–691)组合来增强人血清中的抗CD33抗体半衰期。
在一些实施方案中，本公开的IgG4变体可与根据EU或Kabat 编号惯例的S228P突变(Angal等人，(1993)Mol Immunol,30:105-108) 和/或与描述于Peters等人，(2012)JBiol Chem.13；287(29):24525-33) 中的一个或多个突变组合来增强抗体稳定化。
双特异性抗体
本公开的某些方面涉及结合本公开的CD33蛋白上的一个或多个结构域、和第二抗原的双特异性抗体。生成双特异性抗体的方法是本领域众所周知的并且在本文中进行描述。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体结合本公开的CD33蛋白的一个或多个氨基酸残基，诸如人CD33(SEQ ID NO:1)的一个或多个氨基酸残基、或对应于 SEQ ID NO:1的氨基酸残基的CD33蛋白上的氨基酸残基。在一些实施方案中，本公开的双特异性抗体识别第一抗原和第二抗原。在一些实施方案中，第一抗原是CD33蛋白或其天然存在的变体。在一些实施方案中，第二抗原也是CD33蛋白或其天然存在的变体。在一些实施方案中，第二抗原是有利于跨血脑屏障转运的抗原(参见例如， Gabathuler R.,Neurobiol.Dis.37(2010)48-57)。此类第二抗原包括但不限于：转铁蛋白受体(TR)、胰岛素受体(HIR)、胰岛素样生长因子受体(IGFR)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和2(LPR-1和2)、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单结构域抗体、TMEM 30(A)、蛋白转导结构域、TAT、Syn-B、穿膜肽、聚精氨酸肽、Angiopep肽，诸如 ANG1005(参见例如，Gabathuler,2010)、以及在血脑屏障内皮细胞上富集的其他细胞表面蛋白(参见例如，Daneman等人，PLoS One.2010 Oct 29；5(10):e13741)。在一些实施方案中，第二抗原是致病蛋白，包括但不限于淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前提蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、 FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊蛋白、 PrPSc、亨廷顿蛋白、降血钙素、过氧化物歧化酶、ataxin、ataxin 1、ataxin 2、ataxin 3、ataxin 7、ataxin 8、ataxin 10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、 medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、血清胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN)翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸-脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA)重复肽、泛素、以及脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽。在一些实施方案中，第二抗原是在免疫细胞上表达的一种或多种配体和/或蛋白质，包括但不限于CD40、OX40、ICOS、CD28、 CD137/4-1BB、CD27、GITR、PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、 B7-H4、HVEM、LIGHT、BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、 TIM1、TIM3、TIM4、A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、 TREM1、TREM2、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、SirpA、 CD47、CSF1受体、CD3、和磷脂酰丝氨酸。在一些实施方案中，第二抗原是在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖或糖脂。
抗体片段
本公开的某些方面涉及结合本公开的CD33蛋白、CD33蛋白的天然存在的变体、和CD33蛋白的疾病变体中的一种或多种的抗体片段。在一些实施方案中，抗体片段是Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、 Fv或scFv片段。
在一些实施方案中，抗体片段与第二CD33抗体和/或与一种或多种特异性结合选自以下的致病蛋白的抗体组合使用：淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑块、淀粉样蛋白前提蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72(染色体9开放阅读框72)、c9RAN蛋白、朊蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降血钙素、过氧化物歧化酶、ataxin、ataxin 1、ataxin 2、ataxin 3、ataxin 7、ataxin 8、ataxin 10、路易体、心房利钠因子、胰岛淀粉样多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、催乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、血清胱抑素、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复相关非ATG(RAN) 翻译产物、二肽重复(DPR)肽、甘氨酸-丙氨酸(GA)重复肽、甘氨酸- 脯氨酸(GP)重复肽、甘氨酸-精氨酸(GR)重复肽、脯氨酸-丙氨酸(PA) 重复肽、泛素、和脯氨酸-精氨酸(PR)重复肽、以及它们的任何组合；或与一种或多种结合选自自由以下组成的组的免疫调节蛋白的抗体组合使用：CD40、OX40、ICOS、CD28、CD137/4-1BB、CD27、GITR、 PD-L1、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、LIGHT、 BTLA、CD38、TIGIT、VISTA、KIR、GAL9、TIM1、TIM3、TIM4、 A2AR、LAG3、DR5、CD39、CD70、CD73、TREM1、TREM2、CD47、 CSF-1受体、Siglec-5、Siglec-7、Siglec-9、Siglec-11、磷脂酰丝氨酸、以及它们的任何组合。
在一些实施方案中，本公开的抗体片段可以是与本公开的抗 CD33抗体中的任一种结合相同表位的功能性片段。在一些实施方案中，抗体片段是本公开的抗CD33抗体或抗体片段的微型化版本，其具有与对应的全长抗体相同的表位，但具有小得多的分子量。这种微型化的抗CD33抗体片段可具有更好的脑渗透能力和更短的半衰期，这对于成像和诊断性用途是有利的(参见例如Lütje S等人，Bioconjug Chem.2014Feb 19；25(2):335-41；Tavaré等人，Proc Natl Acad Sci U S A.2014Jan 21；111(3):1108-13；和Wiehr S等人，Prostate.2014 May；74(7):743-55)。因此，在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体片段与其对应的全长抗体相比具有更好的脑渗透性和/或与其对应的全长抗体相比具有更短的半衰期。
抗体框架
本文所述的抗体中的任一种还包括框架。在一些实施方案中，框架是人免疫球蛋白框架。例如，在一些实施方案中，抗体(例如，抗 CD33抗体)包含如任何以上实施方案中的HVR，并且还包含接受者人框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。人免疫球蛋白框架可以是人抗体的一部分，或者非人抗体可通过使用人框架区替换一个或多个内源性框架来人源化。可用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法选择的框架区(参见例如Sims等人J.Immunol. 151:2296(1993))；衍生自轻链或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列的框架区(参见例如Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 89:4285(1992)；以及Presta等人J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(体细胞突变)框架区或人生殖系框架区(参见例如Almagro and Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及衍生自筛选FR文库的框架区(参见例如Baca等人，J.Biol.Chem.272:10678-10684 (1997)和Rosok等人，J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3、和VH FR4(如表5A-5D所示)的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)框架区。在一些实施方案中，VH FR1包含根据式VII的序列：QVQLVQSGAEVKKPGX1SVKX2SCKAS(SEQ ID NO:158)，其中X1为A或S，并且X2为V或I。在一些实施方案中，VH FR1包含选自由SEQ ID NO:2-4组成的组的序列。在一些实施方案中，VH Fr2包含SEQ ID NO:5的序列。在一些实施方案中，VH FR3包含根据式VIII的序列：X1AX2X3X4X5X6RX7TX8TV DX9X10X11STX12YMELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:159)，其中X1为Y或S、X2为Q或E，X3为K或D，X4为F或D，X5为 Q、F、E、或T，X6为G、D、或H，X7为V或A，X8为M或L， X9为T、N、或Q，X10为S或P，X11为T或A，并且X12为V或A。在一些实施方案中，VH FR3包含选自由SEQID NO:6-19组成的组的序列。在一些实施方案中，VH FR4包含根据式IX的序列：WGQGTLX1TVSS(SEQ ID NO:160)，其中X1为V或L。在一些实施方案中，VH FR4包含选自由SEQID:20-21组成的组的序列。在一些实施方案中，抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含根据式V II的VH FR1、包含SEQ ID NO:5的序列的VH FR2、根据式VII I的VH FR3和根据式IX的VH FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含：含有选自S EQ ID NO:2-4的序列的VH FR1、含有SEQ ID NO:5的序列的V H FR2、含有选自SEQ ID NO:6-19的序列的VH FR3、和含有选自SEQ ID NO:20-21的序列的VH FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含以下抗体的 VHFR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4：AB-14.1、AB-14.2、AB- 14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、 AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB- 63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB- 63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64. 5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、 AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15(如表3所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述重链可变区包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3、和VL FR4(如表6A-6D所示)的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)框架区。在一些实施方案中，VL FR1包含根据式X的序列：X1IX2X3TQSPX4SLX5X6SX7GX8RX9TIX10C(SEQ ID NO:161)，其中X1为D或G，X2为Q或V，X3为M或L，X4为S 或D，X5为S、P、或A，X6为A或V，X7为V或L，X8为D或E， X9为V或A，并且X10为T、N、或D。在一些实施方案中，VL FR 1包含选自由SEQ ID NO:22-26组成的组的序列。在一些实施方案中，VL FR2包含根据式XI的序列：WYQQKPGX1X2PKLLIK(SEQ ID NO:162)，其中X1为K或Q，并且X2为A或P。在一些实施方案中，VL FR2包含选自由SEQ ID NO:27-28组成的组的序列。在一些实施方案中，VL FR3包含根据式XII的序列：GVPX1RFSGSGSGTDFTLTISSLQX2EDX3AX4YYC(SEQ ID NO:163)，其中X1为S或D，X2为P或A，X3为F、L或V，并且X4为T或V。在一些实施方案中，VL FR3包含选自由SEQ ID NO:29-31组成的组的序列。在一些实施方案中，VL FR4包含根据式XIII的序列：FGQG TKLEIX1(SEQ ID NO:164)，其中X1为K或E。在一些实施方案中，VL FR4包含选自由SEQ ID NO:32-33组成的组的序列。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含根据式X的VL FR1、根据式XI的VL FR2、根据式XII 的VL FR3、和根据式XIII的VL FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含：含有选自S EQ ID NO:22-26的序列的VL FR1、含有选自SEQ ID NO:27-28 的序列的VL FR2、含有选自SEQ ID NO:29-31的序列的VL FR3、和含有选自SEQ ID NO:32-33的序列的VL FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含以下抗体的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VLFR4：AB-14.1、AB-1 4.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、A B-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63. 9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63. 15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、 AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB -64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、 AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB- 64.1.14、或AB-64.1.15(如表4所示)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3、和VH FR4(如表5A-5D所示)的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)框架区，所述轻链可变区包含选自VL FR1、VL FR2、VL FR3、和VL FR4(如表6A-6D所示) 的一个或多个(例如，一个或多个、两个或更多个、三个或更多个或全部四个)框架区。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：根据式VII的VH FR1、包含SEQ IDNO:5的序列的VH FR2、根据式VIII的VH FR3、和根据式IX的VH FR4，所述轻链可变区包含：根据式X的VL FR1、根据式XI的VL FR2、根据式XII的VL FR3、和根据式XIII的VH FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：包含选自SEQ ID NO:2-4的序列的VH FR1、包含SEQ ID NO:5的序列的VH FR2、包含选自SEQID NO:6-19的序列的VH FR3、和包含选自SEQ ID NO:20-21的序列的VH FR4，所述轻链可变区包含：包含选自SEQ ID NO:22-26的序列的VL FR1、包含选自SEQ ID NO:27-28的序列的VL FR2、包含选自SEQ ID NO:29-31的序列的VL FR3、和包含选自SEQ ID NO: 32-33的序列的VL FR4。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含以下抗体的VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、 AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、 AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、 AB-63.18、AB-64.1、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、 AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、 AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、 AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15(如表3所示)，所述轻链可变区包含以下抗体的VL FR1、VL FR2、VL FR3和VL FR4：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、 AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、AB-63.5、 AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、AB-63.12、AB-63.13、 AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、AB-63.18、AB-64.1、 AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、 AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、 AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、AB-64.1.11、AB-64.1.12、 AB-64.1.13、AB-64.1.14、或AB-64.1.15(如表4所示)。
抗CD33抗体的药代动力学
在一些实施方案中，抗CD33抗体在血浆中的终末半衰期介于约 4天和约12天之间(例如，约4天、约5天、约6天、约7天、约8 天、约9天、约10天、约11天、或约12天中的任一种)。在一些实施方案中，抗CD33抗体的终末半衰期为约4天。在一些实施方案中，抗CD33抗体的终末半衰期为约10天。在一些实施方案中，抗CD33 抗体的终末半衰期为约11天。在一些实施方案中，在以1.6mg/kg施用单剂量的抗体后，抗CD33抗体的终末半衰期为约4天。在一些实施方案中，在以1.6mg/kg施用单剂量的抗体后，抗CD33抗体的终末半衰期为约5天。在一些实施方案中，在以5mg/kg施用单剂量的抗体后，抗CD33抗体的终末半衰期为约7天。在一些实施方案中，在以5mg/kg施用单剂量的抗体后，抗CD33抗体的终末半衰期为约 8天。在一些实施方案中，在以15mg/kg施用单剂量的抗体后，抗 CD33抗体的终末半衰期为约10天。在一些实施方案中，在以15 mg/kg施用单剂量的抗体后，抗CD33抗体的终末半衰期为约11天。在一些实施方案中，在以30mg/kg施用单剂量的抗体后，抗CD33 抗体的终末半衰期为约9天。在一些实施方案中，在以30mg/kg施用单剂量的抗体后，抗CD33抗体的终末半衰期为约10天。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的终末半衰期使用本领域已知的任何方法来确定。在一些实施方案中，本公开的抗CD33 抗体的终末半衰期使用酶联免疫吸附测定(ELISA)来确定。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的终末半衰期在个体的血液中确定。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的终末半衰期在个体的血浆中确定。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的终末半衰期在个体的血清中确定。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体的终末半衰期在个体的CSF中确定。
CD33蛋白
在一个方面，本公开提供了与本公开的CD33蛋白内的区域(诸如表位)相互作用或以其他方式结合的抗体，诸如分离的(例如，单克隆)抗体。在一些实施方案中，抗体以改善/增强的动力学与本公开的 CD33蛋白内的区域(诸如表位)相互作用或以其他方式结合(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)。在一些实施方案中，抗体以低于对照抗体的半最大效应浓度(EC50)与人细胞(诸如树突状细胞)上的CD33蛋白内的区域(诸如表位)相互作用或以其他方式结合学(例如，相对于具有包含SEQ ID NO:103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合CD33蛋白，并且在结合CD33 蛋白后调节一种或多种CD33活性，例如与CD33在细胞上的表达相关的活性。本公开的CD33蛋白包括但不限于哺乳动物CD33蛋白、人CD33蛋白、小鼠CD33蛋白和大鼠CD33蛋白。
CD33被不同地称为CD33分子、Siglec3、Siglec-3、CD33抗原 (Gp67)、P67、Gp67、唾液酸结合Ig样凝集素3、骨髓细胞表面抗原 CD33或FLJ00391。
CD33是主要在骨髓谱系细胞(包括但不限于巨噬细胞、树突状细胞、破骨细胞、单核细胞和小胶质细胞)上表达的免疫球蛋白样受体。在一些实施方案中，CD33与CD64形成受体信号传导复合物。在一些实施方案中，CD33信号传导导致PI3K或其他细胞内信号的下游抑制。在骨髓细胞上，Toll样受体(TLR)信号对于抑制CD33活性很重要，例如在感染应答的背景中。TLR还在病理学炎性应答中发挥关键作用，例如TLR在巨噬细胞和树突状细胞中表达。
人CD33的氨基酸序列在下文列出为SEQ ID NO:1：
Figure BDA0003787403120001521
在一些实施方案中，CD33是包括信号序列的原前蛋白。在一些实施方案中，CD33是成熟蛋白。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白不包括信号序列。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白在细胞上表达。在一些实施方案中，成熟CD33蛋白在细胞上(诸如细胞表面)表达，所述细胞包括但不限于人树突状细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人T细胞、人辅助T细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞和人小胶质细胞。本公开的抗CD33抗体可结合在本文公开的任何细胞上表达的本公开的任何CD33蛋白。
本公开的CD33蛋白(诸如人CD33)含有若干结构域，包括但不限于位于：位于SEQID NO:1的氨基酸残基1-17处的信号序列、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基19-135处的细胞外免疫球蛋白样可变型(IgV)结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基145-228处的Ig样 C2型结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基260-282处的跨膜结构域、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基338-343处的ITIM基序1、位于SEQ ID NO:1的氨基酸残基356-361处的ITIM基序2。如本领域的技术人员将理解的，本公开的结构域的开始和结束残基可根据用于确定结构域的所使用的计算机建模程序或方法而变化。
本公开的某些方面提供了结合人CD33或其同系物(包括但不限于哺乳动物CD33蛋白和来自其他物种的Cd33直系同源物)的抗CD33抗体。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体以改善/增强的动力学结合人CD33或其同系物(例如，相对于具有包含SEQ ID NO: 103的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:104的序列的轻链可变区的抗CD33抗体)。
因此，如本文所用，本公开的“CD33”蛋白包括但不限于哺乳动物CD33蛋白、人CD33蛋白、灵长类动物CD33蛋白、小鼠CD33 蛋白和大鼠CD33蛋白。此外，本公开的抗CD33抗体可结合人CD33 蛋白、灵长类动物CD33内的表位。在一些实施方案中，本公开的抗 CD33抗体可特异性结合人CD33。
在一些实施方案中，本公开的抗体可以pH依赖性方式结合 CD33。在一些实施方案中，本公开的抗体可以在中性pH下结合CD33 并且被内化而不与CD33蛋白解离。或者，在酸性pH下，本公开的抗体一旦被内化就可以与CD33解离，然后通过内体/溶酶体途径降解。在某些实施方案中，抗CD33抗体在以下范围内的pH下结合 CD33：5.5至8.0、5.5至7.5、5.5至7.0、5.5至6.5、5.5至6.0、6.0 至8.0、6.5至8.0、7.0至8.0、7.5至8.0、6.0至7.5、6.0至7.0、6.5 至7.5。在某些实施方案中，抗CD33抗体在低于6.0、低于5.5、低于5.0、低于4.5、低于4.0、低于3.5、低于3.0、低于2.5或低于2.0 的pH下与CD33解离。
在一些实施方案中，本公开的抗体结合本公开的野生型CD33蛋白、其天然存在的变体和/或其疾病变体。
在一些实施方案中，本公开的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有具有(C)核苷酸的单核苷酸多态性(SNP)rs3865444C。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的本公开的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有具有(A)核苷酸的SNP rs3865444。在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有SNP rs3865444AC或 rs3865444CC。
在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的本公开的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有具有GG核苷酸、AA核苷酸、或AG核苷酸的SNPrs35112940。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的本公开的抗体结合人CD33的变体，其中所述变体含有具有CC、 CT或TT基因型的SNPrs12459419。在某些实施方案中，受试者具有用于编码具有GG核苷酸、CG核苷酸、或CC核苷酸的SNP rs1803 的纯合子或杂合子。
在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的本公开的抗体结合在细胞表面上表达的CD33蛋白，所述细胞包括但不限于人树突状细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人T细胞、人辅助T细胞、人细胞毒性T 细胞、人粒细胞和人小胶质细胞。在一些实施方案中，降低CD33的细胞水平和/或与CD33结合或相互作用的本公开的抗体与在细胞表面上表达的CD33蛋白结合，并且在结合在表面表达的CD33蛋白之后调节(例如，诱导或抑制)本公开的至少一种CD33活性。在本公开的一些实施方案中，抗CD33抗体特异性结合CD33蛋白。在本公开的一些实施方案中，抗CD33抗体还结合至少一种另外的Siglec蛋白。在一些实施方案中，抗CD33抗体调节至少一种另外的Siglec蛋白的一种或多种活性或表达至少一种另外的Siglec蛋白的细胞的一种或多种活性。
CD33配体
本公开的CD33蛋白可以与一种或多种CD33配体相互作用(例如，结合)。
示例性CD33配体包括但不限于：唾液酸、含有唾液酸的糖脂、含有唾液酸的糖蛋白、含有α-2,6-连接唾液酸的糖脂、含有α-2,6-连接唾液酸的糖蛋白、含有α-2,3-连接唾液酸的糖脂、含有α-2,3-连接唾液酸的糖蛋白、α-1-酸糖蛋白(AGP)、CD24蛋白、神经节苷脂(例如，含有与唾液酸化聚糖连接的神经酰胺的糖脂)、分泌粘蛋白、在红细胞上表达的CD33配体、在细菌细胞上表达的CD33配体、在凋亡细胞上表达的CD33配体、在肿瘤细胞上表达的CD33配体、在病毒上表达的CD33配体、在树突状细胞上表达的CD33配体、在神经细胞上表达的CD33配体、在胶质细胞上表达的CD33配体、在小胶质细胞上表达的CD33配体、在星形胶质细胞上表达的CD33配体、在β淀粉样蛋白斑块上表达的CD33配体、在Tau缠结上表达的CD33配体、在致病蛋白上表达的CD33配体、在致病多肽上表达的CD33 配体、在巨噬细胞上表达的CD33配体、在自然杀伤细胞上表达的 CD33配体、在T细胞上表达的CD33配体、在辅助T细胞上表达的 CD33配体、在细胞毒性T细胞上表达的CD33配体、在B细胞上表达的CD33配体、在肿瘤包埋的免疫抑制剂树突状细胞上表达的CD33 配体、在肿瘤包埋的免疫抑制剂巨噬细胞上表达的CD33配体、在骨髓源性抑制剂细胞上表达的CD33配体、在调节性T细胞上表达的 CD33配体。在一些实施方案中，本公开的CD33配体是神经节苷脂。神经节苷脂通常共享一个共同的乳神经酰胺核心和一个或多个唾液酸残基。
合适的神经节苷脂配体的另外的实例在表A中列出。一般来讲，神经节苷脂是由糖链上连接有一个或多个唾液酸(例如，n-乙酰神经氨酸，NANA)的鞘糖脂组成的分子。
表A：示例性神经节苷脂CD33配体的结构
Figure BDA0003787403120001551
Figure BDA0003787403120001561
CD33活性
免疫相关蛋白的经调节的表达
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可在结合在细胞中表达的CD33蛋白后调节PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、 CD163和/或CD206的表达。经调节(例如，增加或减少)的表达可包括但不限于基因表达的调节、转录表达的调节、蛋白质表达的调节。可使用本领域已知的用于确定基因、转录物(例如，mRNA)和/或蛋白质表达的任何方法。例如，可使用RNA印迹分析来确定抗炎介质基因表达水平，可使用RT-PCR来确定抗炎介质转录的水平，并且可使用蛋白质印迹分析来确定抗炎介质蛋白水平。
如本文所用，如果与在未使用本公开的抗CD33抗体治疗的对应受试者的一种或多种细胞中表达的PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、 CD200R、CD163和/或CD206的表达相比，PD-L1、PD-L2、B7-H2、 B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206在使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种细胞中的表达被调节(例如，增加或减少)，则PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206 可具有经调解的表达。在一些实施方案中，例如与PD-L1、PD-L2、 B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206在未使用本公开的抗 CD33抗体治疗的受试者的一种或多种细胞中的表达相比，本公开的抗CD33抗体可使PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163 和/或CD206在对应受试者的一种或多种细胞中的表达调节至少 10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少 130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％。在其他实施方案中，例如与PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206在未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种细胞中的表达相比，本公开的抗CD33抗体使PD-L1、PD-L2、 B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206在对应受试者的一种或多种细胞中的表达调节至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少 6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、或至少10倍。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可用于预防、降低与 PD-L1、PD-L2、B7-H2、B7-H3、CD200R、CD163和/或CD206的异常水平相关的疾患或疾病的风险、或治疗所述疾患或疾病，所述疾患或疾病包括但不限于：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、佩吉特氏骨病、癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓样白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性脊髓硬化症、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、Cruzi感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏球菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌。
骨髓源性树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力的增强或正常化
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可在结合在细胞中表达的CD33蛋白后使骨髓源性树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强或正常化。
在一些实施方案中，例如与骨髓源性树突状细胞在未使用本公开的拮抗剂抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种骨髓源性树突状细胞中诱导抗原特异性T细胞增殖的能力相比，本公开的拮抗剂抗 CD33抗体可使骨髓源性树突状细胞在对应受试者的一种或多种骨髓源性树突状细胞中诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强或正常化至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少 130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％。在其他实施方案中，例如与骨髓源性树突状细胞在未使用本公开的拮抗剂抗CD33 抗体治疗的受试者的一种或多种骨髓源性树突状细胞中诱导抗原特异性T细胞增殖的能力相比，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可使骨髓源性树突状细胞在对应受试者的一种或多种骨髓源性树突状细胞中诱导抗原特异性T细胞增殖的能力增强或正常化至少1.5倍、至少1.6 倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少 8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、或至少10倍。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体有益于预防与骨髓源性树突状细胞诱导抗原特异性T细胞增殖的能力降低或失调相关的疾患或疾病、降低所述疾患或疾病的风险、或治疗所述疾患或疾病，所述疾患或疾病包括但不限于：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、佩吉特氏骨病、癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓样白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性脊髓硬化症、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、Cruzi感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏球菌感染、I型HIV和/或流感嗜血杆菌。
表达CD33的细胞的增殖和存活
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体在结合在细胞上表达的CD33蛋白后可增加以下细胞的增殖、存活和/或功能：树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞 (Langerhans cell of skin)、库普弗细胞(Kupffer cell)、T细胞、辅助T 细胞、细胞毒性T细胞和小胶质细胞。
小胶质细胞是脑和脊髓的常驻型巨噬细胞的胶质细胞类型，并且因此充当中枢神经系统(CNS)中的主动免疫防御的第一和主要形式。小胶质细胞占脑内总胶质细胞群体的20％。小胶质细胞不断清除CNS 的斑块、受损神经元和感染剂。脑和脊髓被认为是“免疫特许的”器官，因为它们通过被称为血脑屏障的一系列内皮细胞而与身体其他部分分开，所述血脑屏障防止大部分病原体到达脆弱的神经组织。在感染剂直接引入到脑或穿过血脑屏障的情况下，小胶质细胞必须快速反应以在感染剂损害敏感的神经组织之前限制炎症并消灭感染剂。由于来自身体其他部分的抗体的不可用性(很少有抗体足够小到穿过血脑屏障)，小胶质细胞必须能够识别异物、将其吞并并且充当激活T细胞的抗原呈递细胞。由于此过程必须快速完成以防止潜在致命的损害，因此小胶质细胞对于CNS中的甚至较小的病理学变化也是极其敏感的。它们部分地通过具有对细胞外钾的甚至较小的变化进行响应的独特的钾通道来实现此敏感性。
如本文所用，本公开的巨噬细胞包括但不限于M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、和M2巨噬细胞。如本文所用，本公开的小胶质细胞包括但不限于M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞、和M2 小胶质细胞。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可增加树突状细胞、单核细胞和/或巨噬细胞上的CD80、CD83和/或CD86的表达。
如本文所用，如果使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能大于未使用本公开的抗CD33抗体治疗的对应受试者的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能，则巨噬细胞、树突状细胞、单核细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能可包括增加的表达。在一些实施方案中，例如与未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能相比，本公开的抗CD33抗体可使对应受试者的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能增加至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少 145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％。在其他实施方案中，例如与未使用本公开的抗CD33 抗体治疗的受试者的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能相比，本公开的抗CD33抗体可使对应受试者的树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少 2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少 2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少 3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5 倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、或至少10倍。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体有益于预防与树突状细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、T细胞和/或小胶质细胞的增殖减少、存活、凋亡增加和/或功能相关的疾患或疾病，降低所述疾患或疾病的风险，或治疗所述疾患或疾病，所述疾患或疾病包括但不限于：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、 Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、佩吉特氏骨病、癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓样白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性脊髓硬化症、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、Cruzi感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B 族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏球菌感染、I型HIV 和/或流感嗜血杆菌。
免疫细胞的CD33依赖性激活
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗-CD33抗体可增加细胞毒性T细胞、辅助T细胞或两者的活性。在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体有益于预防与细胞毒性T细胞、辅助T细胞或两者的活性降低相关的疾患和/或疾病，降低所述疾患和/或疾病的风险，或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患或疾病包括但不限于：肿瘤，包括实体瘤，诸如膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、以及甲状腺癌。
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可诱导以下细胞的增殖、存活、活性和/或数量的增加：T细胞、细胞毒性T细胞、 CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞。在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体在骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的存在下诱导以下细胞的增殖、存活、活性和/ 或数量的增加：T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞。
如本文所用，如果用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活、活性和/或数量大于未使用本公开的抗CD33抗体治疗的对应受试者的T细胞、细胞毒性 T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和 /或小胶质细胞的增殖速率、存活、活性和/或数量，则T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活、活性和/或数量可包括增加的速率。在一些实施方案中，例如与未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖水平、存活、活性和/或数量相比，本公开的抗CD33抗体可使对应受试者的T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖水平、存活、活性和/或数量增加至少 10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少 130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％。在其他实施方案中，例如与未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的T细胞、细胞毒性T细胞、CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖水平、存活、活性和/或数量相比，本公开的抗CD33抗体可使对应受试者的T细胞、细胞毒性T细胞、 CD3+ T细胞、辅助T细胞、树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖水平、存活、活性和/或数量增加至少1.5倍、至少1.6 倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少 8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、或至少10倍。
肿瘤相关免疫细胞的CD33依赖性抑制
在一些实施方案中，本公开的激动剂抗CD33抗体可降低CD14+骨髓细胞的活性、增殖、存活、功能性、对肿瘤或淋巴器官(例如，脾脏和淋巴结)的浸润、数量，降低肿瘤生长速率，减少肿瘤体积，降低或抑制骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能，和/或促进调节性T细胞、或抑制性肿瘤包埋的免疫抑制剂树突状细胞、或肿瘤相关巨噬细胞、或骨髓源性抑制剂细胞的凋亡。在一些实施方案中，本公开的激动剂抗CD33抗体有益于预防与一种或多种类型的免疫抑制剂细胞的活性相关的疾患和/或疾病、降低所述疾患和/或疾病的风险、或治疗所述疾患和/或疾病，所述疾患或疾病包括但不限于：肿瘤，包括不表达CD33的实体瘤，诸如膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、甲状腺癌、以及表达CD33的血液肿瘤，诸如白血病。
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可减少CD14+骨髓细胞的数量、降低肿瘤生长速率、减少肿瘤体积、或减少或抑制骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能。
在一些实施方案中，例如与未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的CD14+骨髓细胞的数量、肿瘤生长速率、肿瘤体积、或骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能的水平相比，本公开的抗CD33抗体可使对应受试者的CD14+骨髓细胞的数量、肿瘤生长速率、肿瘤体积、或骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能降低至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少 145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％。在其他实施方案中，例如与未使用本公开的抗CD33 抗体治疗的受试者的CD14+骨髓细胞的数量、肿瘤生长速率、肿瘤体积、或骨髓源性抑制剂细胞(MDSC)的分化、存活和/或一种或多种功能的水平相比，本公开的抗CD33抗体可使对应受试者的CD14+骨髓细胞的数量、肿瘤生长速率、肿瘤体积、或骨髓源性抑制剂细胞(MDSC) 的分化、存活和/或一种或多种功能降低至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少 2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少 2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少 3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0 倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍、或至少10倍。
检查点抑制剂疗法的功效增加
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可增加一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向 CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的功效。
在一些实施方案中，例如与接收一种或多种检查点抑制剂疗法和 /或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、 PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、 PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法) 的有效性水平相比，本公开的抗CD33抗体可使接收此类一种或多种疗法的对应受试者的一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、 TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的功效增加至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少 135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％。在其他实施方案中，例如与接收一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或 LAG3中的一种或多种的疗法)的未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如 PD-1抑制剂或靶向CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3 和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的有效性水平相比，本公开的抗CD33抗体可使接收此类一种或多种疗法的对应受试者的一种或多种检查点抑制剂疗法和/或免疫调节疗法(诸如PD-1抑制剂或靶向 CTL4、腺苷途径、PD-L1、PD-L2、OX40、TIM3和/或LAG3中的一种或多种的疗法)的功效增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少 9.0倍、至少9.5倍、或至少10倍。
化学治疗剂的功效增加
在一些实施方案中，本公开的拮抗剂抗CD33抗体可增加一种或多种化学治疗剂的功效，所述化学治疗剂诸如吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、阿霉素
Figure BDA0003787403120001681
泛艾霉素
Figure BDA0003787403120001682
紫杉烷、紫杉醇
Figure BDA0003787403120001683
多西他赛
Figure BDA0003787403120001684
5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺
Figure BDA0003787403120001685
卡铂
Figure BDA0003787403120001686
奥沙利铂
Figure BDA0003787403120001687
亚叶酸和/或替莫唑胺
Figure BDA0003787403120001688
在一些实施方案中，例如与接收一种或多种化学治疗剂的未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种化学治疗剂的有效性水平相比，本公开的抗CD33抗体可使接收此类一种或多种疗法的对应受试者的一种或多种化学治疗剂的功效增加至少10％、至少 15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少 135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％、或至少200％。在其他实施方案中，例如与接收一种或多种化学治疗剂的未使用本公开的抗CD33抗体治疗的受试者的一种或多种化学治疗剂的有效性水平相比，本公开的抗CD33 抗体可使接收此类一种或多种疗法的对应受试者的一种或多种化学治疗剂的功效增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少 9.5倍、或至少10倍。
抗体制备
本公开的抗CD33抗体可以涵盖多克隆抗体、单克隆抗体、人源化和嵌合抗体、人抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab’-SH、Fv、scFv、以及F(ab’)2)、双特异性和多特异性抗体、多价抗体、异源缀合抗体、缀合抗体、文库衍生抗体、具有经修饰的效应子功能的抗体、含有抗体部分的融合蛋白、以及包括抗原识别位点(诸如具有本公开的CD33 蛋白的氨基酸残基的表位)的任何其他经修饰构型的免疫球蛋白分子，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体、以及共价修饰的抗体。抗CD33抗体可以是人、鼠、大鼠、或属于任何其他来源(包括嵌合或人源化抗体)。
(1)多克隆抗体
多克隆抗体(诸如多克隆抗CD33抗体)通常通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂在动物中产生。使用双功能性或衍生化的剂将相关抗原(例如，本公开的纯化的或重组的CD33蛋白)与在待免疫的物种中是免疫原性的蛋白质(例如，钥孔虫戚血蓝蛋白 (KLH)、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白、或大豆胰蛋白酶抑制剂)缀合可能是有用的，所述双功能性或衍生化的剂例如马来酰亚胺苯甲酰基磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2、或R1N＝C＝NR，其中R和R1独立地为低级烷基。可采用的佐剂的实例包括弗氏完全佐剂 (Freund’s completeadjuvant)和MPL-TDM佐剂(单磷酰脂质A、合成的海藻糖二霉菌酸酯(trehalosedicorynomycolate))。免疫方案可由本领域的技术人员选择而无需过多的实验。
通过将例如100μg(针对兔)或5μg(针对小鼠)的蛋白质或缀合物与3个体积的弗氏完全佐剂组合并且在多个部位处皮内注射溶液来针对期望的抗原、免疫原性缀合物、或衍生物对动物进行免疫。一个月后，通过在多个部位处进行皮下注射，使用1/5至1/10初始量的弗氏完全佐剂中的肽或缀合物物对动物加强免疫。七天至十四天后，对动物进行放血，并且测定血清的抗体滴度。对动物加强免疫，直到滴度达到稳定。缀合物也可以在重组细胞培养物中制备为蛋白质融合体。另外，聚集剂(诸如明矾)适合增强免疫应答。
(2)单克隆抗体
单克隆抗体(诸如单克隆抗CD33抗体)从基本上均质的抗体的群体(即，构成所述群体的个体抗体是相同的，除了可能以微量存在的可能天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)之外) 获得。因此，修饰语“单克隆”指示抗体的特征不是离散抗体的混合物。
例如，单克隆抗CD33抗体可使用首先由Kohler等人，Nature, 256:495(1975)所述的杂交瘤方法制备，或者可通过重组DNA方法(美国专利号4,816,567)制备。
在杂交瘤方法中，如本文以上所述使小鼠或其他适当的宿主动物 (诸如仓鼠)免疫以引发产生或能够产生将特异性地与用于免疫的蛋白质(例如，本公开的纯化的或重组的CD33蛋白)结合的抗体的淋巴细胞。或者，可体外免疫淋巴细胞。然后使用合适的融合剂(诸如聚乙二醇)使淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以形成杂交瘤细胞(Goding, MonoclonalAntibodies:Principles and Practice,pp.59-103(Academic Press,1986))。
免疫剂将通常包括抗原蛋白(例如，本公开的纯化的或重组的 CD33蛋白)或其融合变体。一般来讲，如果期望人来源的细胞，则使用外周血淋巴细胞(“PBL”)，而如果期望非人哺乳动物来源，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后使用合适的融合剂(诸如聚乙二醇)使淋巴细胞与永生细胞系融合以形成杂交瘤细胞。Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,Academic Press(1986),pp.59-103。
永生细胞系通常是转化的哺乳动物细胞，具体地是啮齿动物、牛或人来源的骨髓瘤细胞。通常，采用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。接种由此制备的杂交瘤细胞，并且使其在优选地含有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的一种或多种物质的合适的培养基中生长。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺少酶次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶 (HGPRT或HPRT)，则用于杂交瘤的培养基通常将包括次黄嘌呤、氨基蝶呤、和胸苷(HAT培养基)，它们是防止HGPRT缺陷细胞的生长的物质。
优选的永生骨髓瘤细胞是有效地融合、支持通过产生所选抗体的细胞稳定高水平地产生抗体、并且对培养基(诸如HAT培养基)敏感的那些骨髓瘤细胞。在这些中，优选的是鼠骨髓瘤系，诸如衍生自 MOPC-21和MPC-11小鼠肿瘤(可从Salk Institute CellDistribution Center,San Diego,California USA获得)的那些以及SP-2细胞及其衍生物(例如，X63-Ag8-653)(可从American Type Culture Collection, Manassas,VirginiaUSA获得)。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系还被描述用于人单克隆抗体的产生(Kozbor,J.Immunol.,133:3001 (1984)；Brodeur等人，Monoclonal Antibody ProductionTechniques and Applications,pp.51-63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987))。
测定杂交瘤细胞生长所处的培养基中的针对抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的单克隆抗体的产生。优选地，由杂交瘤细胞产生的单克隆抗体的结合特异性通过免疫沉淀或通过体外结合测定(诸如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA))来确定。
可以测定培养杂交瘤细胞的培养基中针对期望抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的单克隆抗体的存在。优选地，单克隆抗体的结合亲和力和特异性可以通过免疫沉淀或通过体外结合测定(诸如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测定(ELISA))来确定。此类技术和测定是本领域已知的。例如，结合亲和力可通过Munson等人，Anal. Biochem.,107:220(1980)的斯卡查德分析(Scatchard analysis)来确定。
在鉴定产生具有期望特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞之后，可通过有限稀释程序对克隆体进行亚克隆并且通过标准方法使其生长(Goding，同上)。用于此目的的合适的培养基包括例如 D-MEM或RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可作为肿瘤在哺乳动物中体内生长。
由亚克隆体分泌的单克隆抗体通过常规免疫球蛋白纯化程序(诸如例如蛋白质A-琼脂糖、色谱法、羟基磷灰石色谱法、凝胶电泳、透析、亲和色谱法、以及如上所述的其他方法)与培养基、腹水液、或血清合适地分开。
抗CD33单克隆抗体还可通过重组DNA方法(诸如美国专利号 4,816,567中所公开的和如上所述的那些方法)来制备。编码单克隆抗体的DNA易于分离并且使用常规程序进行测序(例如，通过使用与编码鼠抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞充当这种DNA的优选来源。一旦分离，DNA可放置到表达载体中，所述表达载体然后转染到不以其他方式产生免疫球蛋白的宿主细胞(诸如大肠杆菌(E.coli)细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、或骨髓瘤细胞)中，以便在此类重组宿主细胞中合成单克隆抗体。关于在细菌中重组表达编码抗体的DNA的综述文章包括Skerra等人，Curr.Opin.Immunol.,5:256-262(1993)and Plückthun,Immunol. Rev.130:151-188(1992)。
在某些实施方案中，抗CD33抗体可以从使用描述于McCafferty 等人，Nature,348:552-554(1990)中的技术生成的抗体噬菌体文库分离。Clackson等人，Nature,352:624-628(1991)和Marks等人，J.Mol. Biol.,222:581-597(1991)分别描述鼠抗体和人抗体从噬菌体文库的分离。随后的公布描述了通过链改组产生高亲和力(纳摩尔(“nM”)范围)人抗体(Marks等人，Bio/Technology,10:779-783(1992))，以及作为用于构建极大噬菌体文库的策略的组合感染和体内重组(Waterhouse等人，Nucl.Acids Res.,21:2265-2266(1993))。因此，这些技术是用于分离具有期望特异性的单克隆抗体(例如，结合本公开的CD33蛋白的那些单克隆抗体)的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行替代方案。
编码抗体或其片段的DNA还可例如通过用人重链和轻链恒定结构域的编码序列取代同源鼠序列(美国专利号4,816,567；Morrison等人，Proc.Natl Acad.Sci.USA,81:6851(1984))或通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列的全部或一部分共价连接到免疫球蛋白编码序列来进行修饰。通常，此类非免疫球蛋白多肽取代抗体的恒定结构域，或者它们取代抗体的一个抗原组合位点的可变结构域以创建嵌合二价抗体，所述嵌合二价抗体包含具有针对抗原的特异性的一个抗原组合位点和具有针对不同抗原的特异性的另一个抗原组合位点。
本文所述的单克隆抗体(例如，本公开的抗CD33抗体或其片段) 可以是单价的，其制备是本领域众所周知的。例如，一种方法涉及免疫球蛋白轻链和经修饰的重链的重组表达。重链通常在Fc区中的任何点处截短，以便防止重链交联。或者，相关的半胱氨酸残基可使用另一种氨基酸残基取代或缺失，以便防止交联。体外方法也适合制备单价抗体。消化抗体以产生其片段(具体地是Fab片段)可以使用本领域已知的常规技术来实现。
嵌合或杂交抗CD33抗体还可使用合成蛋白质化学中已知的方法 (包括涉及交联剂的那些方法)在体外制备。例如，免疫毒素可使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建。用于此目的的合适的试剂的实例包括亚氨基硫醇酯(iminothiolate)和甲基-4-巯基丁酰亚氨酸酯 (methyl-4-mercaptobutyrimidate)。
(3)人源化抗体
本公开的抗CD33抗体或其抗体片段还可包括人源化或人抗体。非人(例如，鼠)抗体的人源化形式是含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fab、 Fab’-SH、Fv、scFv、F(ab’)2或抗体的其他抗原结合亚序列)。人源化抗体包括其中来自受者的互补决定区(CDR)的残基被来自诸如小鼠、大鼠或兔的非人物种(供体抗体)的CDR的、具有期望特异性、亲和力和能力的残基替换的人免疫球蛋白(受者抗体)。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架残基被对应的非人残基替换。人源化抗体还可包含既不存在于受者抗体中也不存在于输入CDR或框架序列中的残基。一般来讲，人源化抗体将包含至少一个并且通常两个可变结构域的基本上全部，其中全部或基本上全部的CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些CDR区，并且全部或基本上全部的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗体最佳地还将包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常人免疫球蛋白的免疫球蛋白恒定区的至少一部分。Jones等人，Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人， Nature 332:323-329(1988)和Presta,Curr.Opin.Struct.Biol.2: 593-596(1992)。
用于人源化非人抗体的方法是本领域众所周知的。一般来讲，人源化抗体具有从非人来源引入到其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基经常被称为“输入”残基，其通常取自“输入”可变结构域。人源化可以基本上遵循Winter和合作者的方法(Jones等人，Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人，Nature 332:323-327(1988)；Verhoeyen等人，Science 239:1534-1536(1988))、或通过用啮齿动物 CDR或CDR序列取代人抗体的对应序列来执行。因此，此类“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利号4,816,567)，其中基本上小于完整的人可变结构域已经被来自非人物种的对应序列取代。实际上，人源化抗体通常是人抗体，其中一些CDR残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代。
用于制备人源化抗体的人可变结构域轻链与重链的选择对降低抗原性是非常重要的。根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知的人可变结构域序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变结构域的序列。与啮齿动物的序列最接近的人序列然后被接受作为人源化抗体的人框架(FR)。Sims等人，J.Immunol.,151:2296(1993)；Chothia等人，J.Mol. Biol.,196:901(1987)。另一种方法使用衍生自特定亚组的轻链或重链的全部人抗体的共有序列的特定框架。相同的框架可用于若干不同的人源化抗体。Carter等人，Proc.Nat’lAcad.Sci.USA 89:4285(1992)； Presta等人，J.Immunol.151:2623(1993)。
此外，重要的是，抗体保持对抗原的高亲和力和其他有利的生物性质而被人源化。为了实现此目标，根据优选的方法，人源化抗体通过使用亲本和人源化序列的三维模型分析亲本序列和各种概念人源化产物的过程来制备。三维免疫球蛋白模型是普遍可用的，并且为本领域的技术人员所熟悉。说明并显示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可用的。检查这些显示允许对残基在候选免疫球蛋白序列的功能方面的可能的作用进行分析，即，对影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基进行分析。以这种方式，可选择FR残基并且使其与受者序列和输入序列组合，使得实现期望的抗体特性，诸如对靶抗原或抗原(例如，本公开的CD33蛋白)的亲和力增加。一般来讲，CDR残基直接并且最基本地参与影响抗原结合。
考虑了各种形式的人源化抗CD33抗体。例如，人源化抗CD33 抗体可以是抗体片段，诸如Fab，其任选地与一种或多种细胞毒剂缀合以生成免疫缀合物。或者，人源化抗CD33抗体可以是完整抗体，诸如完整IgG1抗体。
(4)抗体片段
在某些实施方案中，使用抗CD33抗体片段而非全抗CD33抗体具有优点。较小的片段大小允许快速清除和更好的脑渗透。
已经开发了各种技术用于产生抗体片段。传统上，这些片段是经由完整抗体的蛋白水解消化而衍生的(参见例如，Morimoto等人，J. Biochem.Biophys.Method.24:107-117(1992)；和Brennan等人，Science 229:81(1985))。然而，这些片段现在可以例如使用编码本公开的抗 CD33抗体的核酸直接由重组宿主细胞产生。Fab、Fv和scFv抗体片段全部可以在大肠杆菌中表达并且从其分泌，从而允许直接产生大量这些片段。抗CD33抗体片段还可以从如上所讨论的抗体噬菌体文库分离。或者，Fab’-SH片段可直接从大肠杆菌回收并且化学偶合以形成F(ab’)2片段(Carter等人，Bio/Technology 10:163-167(1992))。根据另一种方法，F(ab’)2片段可以直接从重组宿主细胞培养物中分离。体内半衰期增加的Fab和F(ab’)2抗体片段的产生描述于美国专利号 5,869,046中。在其他实施方案中，所选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185；美国专利号5,571,894和美国专利号5,587,458。抗CD33抗体片段还可以是“线性抗体”，例如，如美国专利5,641,870 中所述。此类线性抗体片段可以是单特异性的或双特异性的。
(5)双特异性和多特异性抗体
双特异性抗体(BsAb)是对至少两种不同的表位(包括同一蛋白质或另一种蛋白质(例如，本公开的一种或多种CD33蛋白)上的那些表位)具有结合特异性的抗体。或者，BsAb的一部分可以被武装以结合靶CD33抗原，并且另一部分可与结合第二蛋白质的臂组合。此类抗体可以衍生自全长抗体或抗体片段(例如，F(ab’)2双特异性抗体)。
用于制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的传统产生基于两条免疫球蛋白重链/轻链对的共表达，其中所述两条链具有不同的特异性。Millstein等人，Nature,305:537-539(1983)。因为免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四价体瘤 (quadroma))产生10种不同的抗体分子的潜在混合物，其中仅一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和色谱步骤完成的正确分子的纯化是相当繁杂的，并且产物产率很低。相似的程序在WO 93/08829 中和Traunecker等人，EMBO J.,10:3655-3659(1991)中公开。
根据不同的方法，具有期望的结合特异性(抗体-抗原结合位点) 的抗体可变结构域融合至免疫球蛋白恒定结构域序列。融合体优选地具有免疫球蛋白重链恒定结构域，其包含铰链区、CH2区、和CH3区的至少一部分。优选具有第一重链恒定区(CH1)，其含有存在于融合体中的至少一个中的、轻链结合所必需的位点。将编码免疫球蛋白重链融合体和(如果期望的话)免疫球蛋白轻链的DNA插入到单独表达载体中，并且共转染到合适的宿主生物体中。当在构建中使用的不等比率的三条多肽链提供最佳产率时，这在实施方案中提供了调整三种多肽片段的相互比例的极大的灵活性。然而，当相等比率的至少两条多肽链的表达导致高产率时或当比率不具有特定的重要性时，可能将两条或全部三条多肽链的编码序列插入一个表达载体中。
在此方法的优选的实施方案中，双特异性抗体由一个臂中的具有第一结合特异性的杂交免疫球蛋白重链和另一个臂中的杂交免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。发现这种不对称结构有利于期望的双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开，因为免疫球蛋白轻链仅存在于一半的双特异性分子中提供容易的分开方法。这种方法在WO 94/04690中公开。关于生成双特异性抗体的更多细节，参见例如Suresh等人，Methods in Enzymology 121:210 (1986)。
根据描述于WO 96/27011或美国专利号5,731,168中的另一种方法，可以对一对抗体分子之间的界面进行工程改造，以使从重组细胞培养物回收的异源二聚体的百分比最大化。优选的界面包含抗体恒定结构域的CH3区的至少一部分。在此方法中，来自第一抗体分子的界面的一条或多条小氨基酸侧链使用更大的侧链(例如，酪氨酸或色氨酸)来替换。具有与大侧链相同或相似大小的补偿性“腔穴”通过使用更小的氨基酸侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)替换大氨基酸侧链在第二抗体分子的界面上进行创建。这提供了用于使异源二聚体的产率增加超过其他不需要的最终产物(诸如同源二聚体)的机制。
用于由抗体片段生成双特异性抗体的技术已经描述于文献中。例如，可以使用化学键联来制备双特异性抗体。Brennan等人，Science 229:81(1985)描述了其中完整抗体被蛋白水解切割以生成F(ab')2片段的程序。在二硫醇复合剂亚砷酸钠的存在下还原这些片段，以稳定邻近的二硫醇并防止分子间二硫化物形成。然后将生成的Fab’片段转化为硫硝基苯甲酸酯(TNB)衍生物。然后将Fab’-TNB衍生物中的一个再转化为Fab’-TNB衍生物以形成双特异性抗体。所产生的双特异性抗体可以用作用于酶的选择性固定的试剂。
Fab'片段可直接从大肠杆菌回收并且化学偶合以形成双特异性抗体。Shalaby等人，J.Exp.Med.175:217-225(1992)描述了完全人源化的双特异性抗体F(ab')2分子的产生。每个Fab’片段单独地从大肠杆菌分泌并且在体外经受定向化学偶合以形成双特异性抗体。由此形成的双特异性抗体能够与过表达ErbB2受体的细胞和正常人T细胞结合，以及触发人细胞毒性淋巴细胞针对人乳腺肿瘤靶标的裂解活性。
还已经描述了用于直接从重组细胞培养物制备和分离二价抗体片段的各种技术。例如，已使用亮氨酸拉链(leucine zipper)产生二价异源二聚体。Kostelny等人，J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992)。来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合连接至两个不同抗体的Fab’部分。在铰链区还原抗体同源二聚体以形成单体，并且然后再氧化以形成抗体异源二聚体。Hollinger等人，Proc.Nat’l Acad.Sci. USA,90:6444-6448(1993)所描述的“双抗体”技术已经提供了用于制备双特异性/二价抗体片段的替代机制。片段包含通过接头连接到轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)，所述接头太短而不允许同一链上的两个结构域之间进行配对。因此，一个片段的VH结构域和 VL结构域被迫与另一个片段的互补VL结构域和VH结构域配对，从而形成两个抗原结合位点。还已经报道了用于通过使用单链Fv(sFv) 二聚体制备双特异性/二价抗体片段的另一策略。参见Gruber等人， J.Immunol.,152:5368(1994)。
还考虑了具有超过两个化合价的抗体。例如，可以制备三特异性抗体。Tutt等人，J.Immunol.147:60(1991)。
示例性双特异性抗体可结合给定分子(例如，本公开的CD33蛋白)上的两个不同的表位。或者，靶向CD33信号传导组分的臂可与结合白细胞上的触发分子(诸如T细胞受体分子(例如，CD2、CD3、 CD28或B7))、或IgG的Fc受体(FcγR)(诸如FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16))的臂组合，以便使细胞防御机制集中于表达特定抗原的细胞。双特异性抗体还可用于使细胞毒性剂定位于表达特定蛋白的细胞。此类抗体拥有抗原结合臂和结合细胞毒性剂或放射性核素螯合剂(诸如EOTUBE、DPTA、DOTA或TETA)的臂。另一种感兴趣的双特异性抗体结合感兴趣的蛋白质并且还结合组织因子 (TF)。
(6)多价抗体
与二价抗体相比，多价抗体可被表达抗体所结合的抗原的细胞更快地内化(和/或分解代谢)。本公开的抗CD33抗体或其抗体片段可以是具有三个或更多个抗原结合位点的多价抗体(其不属于IgM类)(例如，四价抗体)，所述多价抗体可通过重组表达编码抗体的多肽链的核酸来容易地产生。多价抗体可以包含二聚化结构域以及三个或更多个抗原结合位点。优选的二聚化结构域包含Fc区或铰链区。在此情形中，抗体将包含Fc区和在Fc区氨基末端的三个或更多个抗原结合位点。本文中的优选多价抗体含有三个至约八个、但是优选地四个抗原结合位点。多价抗体含有至少一条多肽链(并且优选地两条多肽链)，其中所述一条或多条多肽链包含两个或更多个可变结构域。例如，一条多肽链或多条多肽链可包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc，其中VD1 是第一可变结构域，VD2是第二可变结构域，Fc是Fc区的一条多肽链，X1和X2表示氨基酸或多肽，并且n为0或1。相似地，一条多肽链或多条多肽链可包含VH-CH1-柔性接头-VH-CH1-Fc区链；或 VH-CH1-VH-CH1-Fc区链。本文中的多价抗体优选地还包含至少两条(并且优选地四条)轻链可变结构域多肽。本文中的多价抗体可例如包含约两条至约八条轻链可变结构域多肽。在此考虑的轻链可变结构域多肽包含轻链可变结构域，并且任选地还包含CL结构域。多价抗体可识别CD33抗原以及但不限于另外的抗原Aβ肽、抗原或α突触核蛋白抗原、或Tau蛋白抗原、或TDP-43蛋白抗原、或朊蛋白抗原、或亨廷顿蛋白抗原、或RNA、翻译产物抗原(包括由甘氨酸-丙氨酸 (GA)、甘氨酸-脯氨酸(GP)、甘氨酸-精氨酸(GR)、脯氨酸-丙氨酸(PA)、或脯氨酸-精氨酸(PR)构成的二肽重复序列(DPR肽))、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体、转铁蛋白受体、或有利于抗体跨血脑屏障转移的任何其他抗原。
(7)异源缀合抗体
异源缀合抗体也在本公开的范围内。异源缀合抗体由两个共价连接的抗体(例如，本公开的抗CD33抗体或其抗体片段)构成。例如，异源缀合物中的一个抗体可以与抗生物素蛋白偶合，另一个抗体可以与生物素偶合。此类抗体已经例如被提出使免疫系统细胞靶向不需要的细胞(美国专利号4,676,980)，并且已经被用于治疗HIV感染。国际公开号WO 91/00360、WO 92/200373和EP 0308936。考虑可使用合成蛋白质化学中的已知方法(包括涉及交联剂的那些)在体外制备抗体。例如，免疫毒素可使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建。用于此目的的合适的试剂的实例包括亚氨基硫醇酯和甲基-4-巯基丁酰亚氨酸酯、以及例如美国专利号4,676,980中公开的那些。异源缀合抗体可使用任何便利的交联方法来制备。合适的交联剂是本领域众所周知的，并且与多种交联技术一起在美国专利号4,676,980中公开。
(8)效应子功能工程化
还可能期望修饰本公开的抗CD33抗体以修改效应子功能和/或增加抗体的血清半衰期。例如，可对恒定区上的Fc受体结合位点进行修饰或突变以去除或降低对某些Fc受体(诸如FcγRI、FcγRII和/或 FcγRIII)的结合亲和力。在一些实施方案中，通过去除抗体的Fc区(例如，在IgG的CH 2结构域中)的N-糖基化来减弱效应子功能。在一些实施方案中，通过修饰诸如人IgG的233-236、297和/或327-331 的区域来减弱效应子功能，如PCT WO99/58572和Armour等人， Molecular Immunology 40:585-593(2003)；Reddy等人，J.Immunology 164:1925-1933(2000)中所述。
为了增加抗体的血清半衰期，可将补救受体结合表位并入到抗体 (尤其是抗体片段)中，如例如美国专利5,739,277中所述。如本文所用，术语“补救受体结合表位”是指IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4) 的Fc区的负责增加IgG分子的体内血清半衰期的表位。
(9)其他氨基酸序列修饰
还考虑本公开的抗CD33抗体或其抗体片段的氨基酸序列修饰。例如，可能期望改善抗体或抗体片段的结合亲和力和/或其他生物性质。抗体或抗体片段的氨基酸序列变体通过将适当的核苷酸变化引入到编码抗体或抗体片段的核酸中来制备，或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内的残基的缺失和/或插入和/或取代。进行缺失、插入、和取代的任何组合来得到最终构建体，前提是最终构建体拥有期望的特性(即，结合本公开的CD33蛋白或与其物理地相互作用的能力)。氨基酸变化还可改变抗体的翻译后加工，诸如改变糖基化位点的数量或位置。
可用于鉴定抗CD33抗体的作为优选的诱变位置的某些残基或区域的方法被称为“丙氨酸扫描诱变”，如Cunningham和Wells在Science, 244:1081-1085(1989)中所述。在此，鉴定残基、或靶残基组(例如，带电荷残基，诸如arg、asp、his、lys、以及glu)并且用中性或带负电荷的氨基酸(最优选的是丙氨酸或聚丙氨酸)替换，以影响氨基酸与靶抗原的相互作用。然后通过在取代位点处或为取代位点引入另外的或其他的变体来改进对取代展示出功能敏感性的那些氨基酸位置。因此，虽然用于引入氨基酸序列变异的位点是预先确定的，但突变本身的性质不需要预先确定。例如，为了分析给定位点处的突变的性能，在靶密码子或区域处进行丙氨酸扫描或随机诱变，并且针对期望活性筛选所表达的抗体变体。
氨基酸序列插入包括长度范围是一个残基至含有一百个或更多个残基的多肽的氨基(“N”)末端和/或羧基(“C”)末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰基残基的抗体或融合至细胞毒性多肽的抗体。抗体分子的其他插入变体包括抗体的N末端或C末端与增加抗体的血清半衰期的酶或多肽的融合。
另一种类型的变体是氨基酸取代变体。这些变体在抗体分子中具有至少一个被不同的残基替换的氨基酸残基。取代诱变的最感兴趣的位点包括高变区，但是也考虑FR改变。保守性取代以标题“优选取代”在下文的表D中示出。如果此类取代导致生物活性改变，则可引入在表D中命名为“示例性取代”的或如参考氨基酸类别在下文进一步描述的更多实质性变化，并且筛选产物。
表D：氨基酸取代
Figure BDA0003787403120001831
抗体的生物性质的实质性修饰通过选择对维持以下方面的影响显著不同的取代来实现：(a)取代区域中的多肽骨架的结构，例如呈折叠或螺旋构象；(b)分子在靶标位点处的电荷或疏水性；或(c)侧链体积。天然存在的残基基于共同的侧链性质分为以下组：
(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水性：cys、ser、thr；
(3)酸性：asp、glu；
(4)碱性：asn、gln、his、lys、arg；
(5)影响链定向的残基：gly、pro；以及
(6)芳族：trp、tyr、phe。
非保守取代需要将这些类别中的一类的成员更换为另一类别。
通常还可用丝氨酸取代不参与维持抗体正确构象的任何半胱氨酸残基，以改善分子的氧化稳定性并且防止异常交联。相反地，可向抗体添加半胱氨酸键以提高抗体的稳定性(特别是在抗体是抗体片段 (诸如Fv片段)的情况下)。
特定优选类型的取代变体涉及取代亲本抗体(例如，人源化或人抗CD33抗体)的一个或多个高变区残基。一般来讲，为进一步开发所选择的所得变体相对于产生它们的亲本抗体将具有改善的生物性质。用于生成此类取代变体的便利方式涉及使用噬菌体展示的亲和力成熟。简而言之，使若干高变区位点(例如，6-7个位点)突变，以在每个位点处生成所有可能的氨基取代。由此生成的抗体变体以单价方式从丝状噬菌体颗粒展示，作为与包装在每个颗粒内的M13的基因 III产物的融合体。然后针对如本文所公开的生物活性(例如，结合亲和力)筛选噬菌体展示的变体。为了用于鉴定修饰的候选高变区位点，可以执行丙氨酸扫描诱变以鉴定显著地促进抗原结合的高变区残基。或者或另外地，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原 (例如，本公开的CD33蛋白)之间的接触点可能是有益的。此类接触残基和邻近残基是根据本文详述的技术进行的取代的候选者。一旦生成此类变体，变体组就经受如本文所述的筛选，并且可选择在一个或多个相关测定中具有优异性质的抗体用于进一步开发。亲和力成熟也可通过采用酵母呈递技术(诸如在WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568；和Xu等人，Protein Eng.Des.Sel., 26(10):663-70(2013)中公开的技术)来执行。
抗体的氨基酸变体的另一种类型改变抗体的原始糖基化模式。改变意指使存在于抗体中的一个或多个碳水化合物部分缺失和/或添加不存在于抗体中的一个或多个糖基化位点。
抗体的糖基化通常是N-连接或O-连接的。N-连接是指碳水化合物部分与天冬酰胺残基的侧链的连接。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X为除脯氨酸外的任何氨基酸)是碳水化合物部分至天冬酰胺侧链的酶促连接的识别序列。因此，存在于多肽中的这些三肽序列的任一个创建潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化是指糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖、或木糖中的一种与羟基氨基酸的连接，羟基氨基酸最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
向抗体添加糖基化位点通过改变氨基酸序列、使得其含有上文所述的三肽序列中的一个或多个来便利地实现(针对N连接的糖化位点)。改变还可通过向原始抗体的序列添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基或者用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代来进行(对于O-连接的糖基化位点)。
编码抗IgE抗体的氨基酸序列变体的核酸分子通过本领域已知的各种方法制备。这些方法包括但不限于从天然来源分离(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)或通过抗体(例如，本公开的抗CD33 抗体)或抗体片段的较早制备的变体或非变体版本的寡核苷酸介导的 (或位点定向的)诱变、PCR诱变、以及盒式诱变来制备。
(10)抗体缀合物
本公开的抗CD33抗体或其抗体片段可以与可检测标记、毒素或治疗剂缀合。可使用本领域已知的用于将分子(诸如可检测标记、毒素或治疗剂)与抗体缀合的任何合适方法。
例如，药物缀合涉及生物活性细胞毒性(抗癌)有效负荷或药物与特异性地靶向某一肿瘤标记物(例如，理想地仅存在于肿瘤细胞中或肿瘤细胞上的蛋白质)的抗体的偶合。抗体在体内追踪这些蛋白质并且将其本身连接至癌细胞的表面。抗体与靶蛋白(抗原)之间的生物化学反应触发肿瘤细胞中的信号，所述肿瘤细胞然后将抗体连同细胞毒素一起吸收或内化。在ADC内化之后，细胞毒性药物被释放并杀伤癌症。由于这种靶向，理想地，药物具有较低的副作用，并且比其他化学治疗剂给出更宽的治疗窗口。缀合所公开的抗体的技术是本领域已知的(参见例如，Jane de Lartigue,OncLive July 5,2012；ADC Review onantibody-drug conjugates；和Ducry等人(2010).Bioconjugate Chemistry 21(1):5–13)。
在一些实施方案中，本公开的抗CD33抗体可以缀合至选自以下的毒素：蓖麻毒素(ricin)、蓖麻毒素A链、阿霉素、柔红霉素 (daunorubicin)、美登木素(maytansinoid)、紫杉醇、溴化乙锭、丝裂霉素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、替诺泊苷(tenoposide)、长春新碱(vincristine)、长春碱(vinblastine)、秋水仙碱(colchicine)、二羟基蒽二酮、放线菌素(actinomycin)、白喉毒素、假单胞菌外毒素(PE)A、 PE40、相思豆毒素(abrin)、相思豆毒素A链、蒴莲素A链(modeccin A chain)、α-sarcin、白树毒素(gelonin)、丝裂素(mitogellin)、局限曲菌素 (restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)、麻疯树毒蛋白(curicin)、巴豆毒素(crotin)、卡奇霉素(calicheamicin)、肥皂草抑制剂、糖皮质激素、澳瑞他汀(auristatin)、金霉素(auromycin)、钇、铋、康布瑞汀(combrestatin)、倍癌霉素(duocarmycins)、尾海兔素 (dolastatin)、cc1065、以及顺铂。
(11)其他抗体修饰
可以对本公开的抗CD33抗体或其抗体片段进行进一步修饰以含有本领域已知且容易获得的另外的非蛋白质部分。优选地，适合抗体的衍生化的部分是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊环、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)、和右旋糖酐或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇、以及它们的混合物。聚乙二醇丙醛因其于水中的稳定性而可在制造中具有优势。聚合物可具有任何分子量，并且可为分支或未分支的。连接至抗体的聚合物的数量可变化，并且如果连接多于一个聚合物，则它们可以是相同或不同分子。一般来讲，用于衍生化的聚合物的数量和 /或类型可基于包括但不限于以下的考虑因素来确定：待改善的抗体的特定性质或功能、抗体衍生物是否将用于限定条件下的疗法等。此类技术和其他合适的配制公开在Remington:The Science and Practice of Pharmacy,20th Ed.,Alfonso Gennaro,Ed.,Philadelphia College of Pharmacy and Science(2000)中公开。
结合测定和其他测定
可例如通过已知的方法(诸如ELISA、表面等离振子共振(SPR)、蛋白质印迹等)测试本公开的抗CD33抗体的抗原结合活性。
在一些实施方案中，竞争测定可用于鉴定与本文所述的任何抗体竞争的抗体。在一些实施方案中，竞争测定可用于鉴定与表1A-1C、 2A-3C、3、4、5A-5D和6A-6D中列出的或选自以下的任何抗体竞争结合CD33的抗体：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、 AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、 AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、 AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、 AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、 AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、 AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、 AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、或AB-H66。在某些实施方案中，这种竞争抗体与表1A-1C、2A-2C、3、4、5A-5D 和6A-6D中列出的或选自以下的任何抗体结合相同的表位(例如，线性或构象表位)：AB-14.1、AB-14.2、AB-14.3、AB-14.4、AB-14.5、 AB-14.6、AB-14.7、AB-14.8、AB-14.9、AB-14.10、AB-14.11、AB-63.4、 AB-63.5、AB-63.6、AB-63.7、AB-63.8、AB-63.9、AB-63.10、AB-63.11、 AB-63.12、AB-63.13、AB-63.14、AB-63.15、AB-63.16、AB-63.17、 AB-63.18、AB-64.1、AB-64.2、AB-64.3、AB-64.4、AB-64.5、AB-64.6、 AB-64.7、AB-64.8、AB-64.1.1、AB-64.1.2、AB-64.1.3、AB-64.1.4、 AB-64.1.5、AB-64.1.6、AB-64.1.7、AB-64.1.8、AB-64.1.9、AB-64.1.10、 AB-64.1.11、AB-64.1.12、AB-64.1.13、AB-64.1.14、AB-64.1.15、AB-H2、 AB-H9、AB-H14、AB-H15、AB-H63、AB-H64、AB-H65、或AB-H66。用于绘制抗体结合的表位的详细实例性方法提供于Morris(1996) “Epitope Mapping Protocols,”in Methods in MolecularBiology vol.66 (Humana Press,Totowa,NJ)。
在示例性竞争测定中，在溶液中孵育固定的CD33或在细胞表面上表达CD33的细胞，所述溶液包含结合CD33(例如，人或非人灵长类)的第一标记抗体和被测试其与第一抗体竞争结合CD33的能力的第二未标记抗体。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，在包含第一标记抗体但不包含第二未标记抗体的溶液中孵育固定的 CD33或表达CD33的细胞。在允许第一抗体结合CD33的条件下孵育之后，去除过量未结合抗体，并且测量与固定的CD33或表达CD33 的细胞缔合的标记的量。如果相对于对照样品，与固定的CD33或表达CD33的细胞缔合的标记的量在测试样品中显著降低，则这表明第二抗体与第一抗体竞争结合CD33。参见Harlow和Lane(1988) Antibodies:A Laboratory Manual ch.14(Cold SpringHarbor Laboratory, Cold Spring Harbor,NY)。
核酸、载体、和宿主细胞
本公开的抗CD33抗体可使用例如如美国专利号4,816,567中所述的重组方法和组合物来产生。在一些实施方案中，提供了具有编码本公开的抗CD33抗体中的任一种的核苷酸序列的分离的核酸。此类核酸可编码含有抗CD33抗体的VL的氨基酸序列和/或含有抗CD33 抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在一些实施方案中，提供了一种或多种含有此类核酸的载体(例如，表达载体)。在一些实施方案中，还提供了含有类核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，宿主细胞含有(例如，已转导有)：(1)含有编码含有抗体的VL 的氨基酸序列和含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2) 含有编码含有抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体，和含有编码含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一些实施方案中，宿主细胞为真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞 (例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。
提供了制备本公开的抗CD33抗体的方法。在一些实施方案中，方法包括在适合抗体的表达的条件下培养本公开的含有编码抗CD33 抗体的核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
对于本公开的抗CD33抗体的重组产生，将编码抗CD33抗体的核酸分离，并且将其插入到一个或多个载体中以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。此类核酸可易于分离并使用常规程序(例如，通过使用能够特异性地结合编码抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)测序。
含有编码本公开的抗CD33抗体或本文所述的其片段多肽(包括抗体)中的任一种的核酸序列的合适的载体包括但不限于克隆载体和表达载体。合适的克隆载体可以根据标准技术构建，或可选自本领域可获得的多种克隆载体。虽然所选择的克隆载体可根据意图使用的宿主细胞而变化，但是可用的克隆载体通常具有自我复制的能力、可拥有针对特定限制性核酸内切酶的单一靶标、和/或可携带可以用于选择含有载体的克隆的标记物的基因。合适的实例包括质粒和细菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)以及其衍生物、 mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA、以及穿梭载体，诸如pSA3和pAT28。这些和许多其他克隆载体可从商业供应商(诸如BioRad、Strategene和Invitrogen)获得。
表达载体通常是含有本公开的核酸的可复制多核苷酸构建体。表达载体可在宿主细胞中作为游离体或作为染色体DNA的整体部分复制。合适的表达载体包括但不限于质粒、病毒载体(包括腺病毒 (adenovirus)、腺病毒相关病毒(adeno-associated virus)、逆转录病毒 (retrovirus)、粘粒(cosmid))、以及PCT公布号WO 87/04462中公开的表达载体。载体组分通常可包括但不限于以下中的一种或多种：信号序列；复制起点；一种或多种标记物基因；合适的转录控制元件(诸如启动子、增强子和终止子)。对于表达(即，翻译)，通常还需要一种或多种翻译控制元件，诸如核糖体结合位点、翻译起始位点、和终止密码子。
含有感兴趣的核酸的载体可以通过多种适当的方式中的任一种引入到宿主细胞中，所述适当的方式包括采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-右旋糖酐、或其他物质的电穿孔、转染；微粒轰击；脂转染；以及感染(例如，在载体是感染剂(诸如牛痘病毒)的情况下)。引入载体或多核苷酸的选择将经常取决于宿主细胞的特征。在一些实施方案中，载体含有核酸，所述核酸含有编码本公开的抗CD33抗体的一种或多种氨基酸序列。
用于克隆或表达编码抗体的载体的合适的宿主细胞包括原核或真核细胞。例如，本公开的抗CD33抗体可在细菌中产生，特别是当不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达(例如，美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523；和Charlton， Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ,2003),pp.245-254，描述抗体片段在大肠杆菌中的表达)。在表达之后，抗体可从细菌细胞糊状物分离于可溶性级分中并且可以进一步纯化。
除原核生物之外，真核微生物(诸如丝状真菌或酵母)也是编码抗体的载体的合适的克隆或表达宿主，包括糖基化途径已被“人源化”、从而导致具有部分或完全人糖基化模式的抗体的产生真菌和酵母菌株(例如，Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)；和Li等人， Nat.Biotech.24:210-215(2006))。
用于表达糖基化抗体的合适的宿主细胞还可以衍生自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的实例包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了可与昆虫细胞结合使用、特别是用于转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞的多种杆状病毒株。植物细胞培养物也可以用作宿主(例如，美国专利号5,959,177、6,040,498、6,420,548、 7,125,978、以及6,417,429，描述用于在转基因植物中产生抗体的 PLANTIBODIESTM技术。)。
脊椎动物细胞也可用作宿主。例如，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可以是可用的。可用的哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚胎肾系(293或293细胞，如例如Graham等人，J.Gen Virol.36:59(1977)中所述)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞尔托利氏细胞(sertoli cell)(TM4细胞，如例如 Mather，Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；布法罗大鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞 (Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如例如Mather 等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC 5细胞；以及FS4细胞。其他可用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci. USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。对于适合抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki 和Wu，Methods inMolecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ),pp.255-268(2003)。
药物组合物
本公开的抗CD33抗体可以通过将抗CD33抗体与适当的药学上可接受的载体或稀释剂组合来并入到用于治疗性施用的多种制剂中，并且可配制成呈固体、半固体、液体或气体形式的制品。此类制剂的实例包括但不限于片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、膏剂、溶液、栓剂、注射液、吸入剂、凝胶、微球、以及气溶胶。根据期望的制剂，药物组合物可以包括稀释剂的药学上可接受的无毒载体，所述无毒载体是常用于配制用于动物或人施用的药物组合物的媒介物。对稀释剂进行选择以免影响组合的生物活性。此类稀释剂的实例包括但不限于蒸馏水、缓冲水、生理盐水、PBS、林格氏溶液(Ringer’s solution)、右旋糖溶液、以及汉克氏溶液(Hank’s solution)。本公开的药物组合物或制剂还可以包括其他载体、佐剂、或无毒非治疗性非免疫原性稳定剂、赋形剂等。组合物还可以包括另外的物质以接近生理条件，所述另外的物质诸如pH调整和缓冲剂、毒性调整剂、润湿剂以及洗涤剂。
本公开的药物组合物还可以包括多种稳定剂中的任一种，诸如例如抗氧化剂。当药物组合物包括多肽时，多肽可以与各种众所周知的化合物复合，所述化合物增强多肽的体内稳定性或以其他方式增强多肽的药理学性质(例如，增加多肽的半衰期、降低其毒性、以及增强溶解性或摄取)。此类修饰或复合剂的实例包括但不限于硫酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐以及磷酸盐。组合物的多肽还可以与增强其体内属性的分子复合。此类分子包括但不限于碳水化合物、聚胺、氨基酸、其他肽、离子(例如，钠、钾、钙、镁、锰)、以及脂质。
适合各种施用类型的制剂的另外的实例可见于Remington’s PharmaceuticalSciences,Mace Publishing Company,Philadelphia,PA, 17th ed.(1985)。对于用于药物递送的方法的简要综述，参见Langer, Science 249:1527-1533(1990)。
对于口服施用，活性成分可以以固体剂型(诸如胶囊、片剂、和粉剂)施用或以液体剂型(诸如酏剂、糖浆剂、和悬浮液)施用。活性组分可以与失活成分和粉末状载体(诸如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、淀粉、纤维素或纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸、糖精钠、滑石粉、碳酸镁)一起包封在明胶胶囊中。可添加来提供期望的颜色、味道、稳定性、缓冲容量、分散性或其他已知期望的特征的另外的失活成分的实例是红色氧化铁、硅胶、月桂基硫酸钠、二氧化钛、以及可食用的白色墨水。可以使用相似的稀释剂来制备压片。片剂和胶囊两者均可以制造为缓释产物以提供药品在一段时间内的连续释放。压片可以包糖衣或包膜衣以掩盖任何令人不悦的味道并保护片剂免受大气影响，或包肠溶衣以在胃肠道中选择性崩解。用于口服施用的液体剂型可以含有着色剂和调味剂以增加患者接受性。
适合肠胃外施用的制剂包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂、和使制剂与预期接收者的血液等渗的溶质、以及水性和非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂、以及防腐剂。
用于配制药物组合物的组分优选地具有高纯度并且基本上不含潜在有害的污染物(例如，至少国家食品(NF)级、通常至少分析级并且更通常至少药物级)。此外，意图用于体内使用的组合物通常是无菌的。为了达到在使用之前必须合成给定的化合物的程度，所得产物通常基本上不含任何潜在的毒性剂，具体地是任何内毒素，所述毒性剂可在合成或纯化过程期间存在。用于肠胃外施用的组合物也是无菌的、基本上等渗的并且在GMP条件下制备。
可优化制剂以在脑或中枢神经系统中保持和稳定。当剂施用到颅隔室中时，期望剂保持在隔室中，并且不扩散或以其他方式穿过血脑屏障。稳定化技术包括交联、多聚、或连接到诸如聚乙二醇、聚丙烯酰胺、中性蛋白质载体等的组以便实现分子量增加。
用于增加保持的其他策略包括将本公开的抗CD33抗体包载在可生物降解或可生物侵蚀的植入物中。治疗活性剂的释放速率由通过聚合物基质进行的转运的速率和植入物的生物降解的速率控制。药物通过聚合物屏障进行的转运也将受到化合物溶解性、聚合物亲水性、聚合物交联的程度、水吸收之后聚合物的膨胀(以便使聚合物屏障对于药物更具渗透性)、植入物的几何形状等的影响。植入物具有与选作植入位点的区域的大小和形状相称的尺寸。植入物可以是颗粒、片材、贴片、平板、纤维、微胶囊等，并且可具有与所选插入位点相容的任何大小或形状。
植入物可以是整体的(即，具有均匀地分布于聚合物基质中的活性剂)或包封的，其中活性剂的储存器由聚合物基质包封。待采用的聚合物组合物的选择将随着施用位点、期望的治疗时间段、患者耐受性、待治疗的疾病的性质等而变化。聚合物的特性将包括植入位点处的可生物降解性、与感兴趣的剂的相容性、容易包封、在生理环境中的半衰期。
可采用的可生物降解的聚合物组合物可以是有机酯或醚，其在降解时导致生理上可接受的降解产物，包括单体。通过其本身或与其他单体组合的酸酐、酰胺、原酸酯等可得到使用。聚合物将是缩合聚合物。聚合物可以是交联的或非交联的。感兴趣的是羟基脂肪族羧酸的聚合物(均聚物或共聚物)和多糖。感兴趣的聚酯包括D-乳酸、L-乳酸、外消旋乳酸、乙醇酸、聚己内酯、以及它们的组合的聚合物。通过采用L-乳酸酯或D-乳酸酯实现缓慢生物降解的聚合物，而使用外消旋物显著地增强降解。乙醇酸和乳酸的共聚物是特别感兴趣的，其中生物降解的速率通过乙醇酸与乳酸的比率控制。最快降解的共聚物具有大致等量的乙醇酸和乳酸，其中均聚物对于降解更具抗性。乙醇酸与乳酸的比率还将影响植入物的脆弱性，其中对于较大的几何形状，更具柔性的植入物是期望的。感兴趣的多糖是海藻酸钙和官能化的纤维素(具体地是特征在于不溶于水的、分子量为约5kD至500kD的羧甲基纤维素酯)等。还可在本公开的植入物中采用可生物降解的水凝胶。水凝胶通常是共聚物材料，其特征在于吸入液体的能力。可采用的示例性可生物降解的水凝胶描述于Heller在：Hydrogelsin Medicine and Pharmacy,N.A.Peppes ed.,Vol.III,CRC Press,Boca Raton,Fla.,1987,pp 137-149中。
药物剂量
本公开的含有本公开的抗CD33抗体的药物组合物可根据已知的方法(诸如作为大丸剂的静脉内施用或通过在一段时间内的连续输注、通过肌肉内、腹膜内、脑脊液内、颅内、脊柱内、皮下、关节内、滑膜内、鞘内、口服、局部、或吸入途径)向需要使用抗体治疗的个体(优选地是人)施用。
本公开的药物组合物的剂量和期望药物浓度可根据设想的特定用途而变化。确定施用的适当剂量或途径完全在本领域的普通技术人员的能力范围内。动物实验为确定人疗法的有效剂量提供了可靠的指导。有效剂量的种间换算可遵循描述于以下中的原理来执行： Mordenti,J.和Chappell,W.“The Use of Interspecies Scaling inToxicokinetics,”In Toxicokinetics and New Drug Development，Yacobi 等人编辑,Pergamon Press,New York 1989,pp.42-46。
对于本公开的抗CD33抗体中的任一种的体内施用，正常剂量可根据施用途径从约10ng/kg个体体重/天变化至约100mg/kg个体体重 /天或更多，优选地约1mg/kg/天变化至10mg/kg/天。对于若干天或更长时间内的重复施用，根据待治疗的疾病、病症或疾患的严重程度，持续进行治疗，直到实现期望的症状抑制。
在一些实施方案中，抗CD33抗体约1.6mg/kg至约15mg/kg的剂量约每十二周施用一次或更频繁地施用。在一些实施方案中，抗 CD33抗体约1.6mg/kg至约15mg/kg的剂量约每两周施用一次至约每十二周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约1.6mg/kg、约5mg/kg、约7.5mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，抗CD33抗体每两周施用一次、每四周施用一次、每五周施用一次、每六周施用一次、每七周施用一次、每八周施用一次、每九周施用一次、每十周施用一次、每十一周施用一次或每十二周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约1.6mg/kg的剂量每两周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约1.6mg/kg 的剂量每四周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约15 mg/kg的剂量每四周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每五周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33 抗体以约15mg/kg的剂量每六周施用一次。在一些实施方案中，抗 CD33抗体以约15mg/kg的剂量每七周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每八周施用一次。
在一些实施方案中，抗CD33抗体在治疗期的第一天以约1.6 mg/kg至约30mg/kg的剂量(例如，约1.6mg/kg、约5mg/kg、约7.5 mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、或约30mg/kg中的任一种)施用并且此后每十二周施用一次或更频繁地施用(例如，每两周一次、每三周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、每十一周一次、或每十二周一次中的任一种)。在一些实施方案中，抗CD33抗体在治疗期的第一天以约1.6mg/kg的剂量施用，并且此后每两周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体在治疗期的第一天以约1.6mg/kg的剂量施用，并且此后每四周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体在治疗期的第一天以约15mg/kg的剂量施用，并且此后每四周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体在治疗期的第一天以约15mg/kg 的剂量施用，并且此后每五周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33 抗体在治疗期的第一天以约15mg/kg的剂量施用，并且此后每六周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体在治疗期的第一天以约15mg/kg的剂量施用，并且此后每八周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体在治疗期的第一天以约15mg/kg的剂量施用，并且此后每十周施用一次。在一些实施方案中，抗CD33抗体在治疗期的第一天以约15mg/kg的剂量施用，并且此后每十二周施用一次。
根据医师希望实现的药代动力学衰减的模式，其他剂量方案可以是可用的。例如，本文中考虑一周向个体给药一次至二十一次。在某些实施方案中，可使用范围为约3μg/kg至约2mg/kg(诸如约3μg/kg、约10μg/kg、约30μg/kg、约100μg/kg、约300μg/kg、约1mg/kg、以及约2/μg/kg)的给药。在某些实施方案中，给药频率是每天三次、每天两次、每天一次、每隔一天一次、每周一次、每两周一次、每四周一次、每五周一次、每六周一次、每七周一次、每八周一次、每九周一次、每十周一次、或每月一次、每两月一次、每三月一次、或更长。疗法的进展容易地通过常规技术和测定进行监测。给药方案(包括所施用的抗CD33抗体)可独立于所使用的剂量随时间变化。
用于特定抗CD33抗体的剂量可在已被给予抗CD33抗体的一次或多次施用的个体中凭经验确定。个体被给予增量剂量的抗CD33抗体。为了评估抗CD33抗体的功效，可以监测本公开的任何疾病、病症或疾患(例如，额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、癫痫发作、视网膜营养不良、创伤性脑损伤、脊髓损伤、长期抑郁症、动脉粥样硬化血管疾病、和正常老化的不期望症状)的临床症状。
根据例如受者的生理状况、施用目的是治疗性的还是预防性的、以及熟练从业人员已知的其他因素，本公开的抗CD33抗体的施用可以是连续的或间断的。抗CD33抗体的施用可在预选时间段内基本上是连续的,或者可以一系列间隔的剂量进行。
关于具体的剂量和递送方法的指导提供在文献中；参见例如美国专利号4,657,760；5,206,344；或5,225,212。在本公开的范围内的是，不同的制剂对于不同的治疗和不同的病症将是有效的，并且意图治疗指定器官或组织的施用可需要不同于对另一种器官或组织的递送方式的递送。此外，剂量可通过一次或多次个单独的施用来施用，或通过连续输注来施用。对于若干天或更长时间内的重复施用，根据疾患，持续进行治疗，直到实现期望的疾病症状抑制。然而，其他剂量方案可以是可用的。此疗法的进展容易地通过常规技术和测定来监测。
药盒/制品
本公开还提供了含有本文所述的抗CD33抗体或其功能性片段的药盒和/或制品。本公开的药盒和/或制品可包括一种或多种包含本公开的纯化抗体的容器。在一些实施方案中，药盒和/或制品还包括用于根据本公开的方法使用的说明书。
在一些实施方案中，这些说明包括根据本公开的任何方法施用本文所述的抗CD33抗体以预防、降低风险或治疗患有选自以下的疾病、病症或损伤的个体的描述：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、克-雅二氏病、正常压力脑积水、肌萎缩性侧索硬化症、亨廷顿氏病、tau蛋白病、Nasu-Hakola病、中风、急性创伤、慢性创伤、狼疮、急性和慢性结肠炎、类风湿关节炎、伤口愈合、克罗恩病、炎性肠病、溃疡性结肠炎、肥胖症、疟疾、特发性震颤、中枢神经系统狼疮、贝切特氏病、帕金森氏病、路易体痴呆、多系统萎缩、希-德二氏综合征、进行性核上性麻痹、皮层基底神经节变性、急性播散性脑脊髓炎、肉芽肿病症、结节病、老化疾病、癫痫发作、脊髓损伤、创伤性脑损伤、年龄相关性黄斑变性、青光眼、色素性视网膜炎、视网膜变性、呼吸道感染、败血症、眼部感染、全身感染、狼疮、关节炎、多发性硬化症、低骨密度、骨质疏松症、骨生成、骨质增生疾病、佩吉特氏骨病、以及癌症，包括膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓样白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓样白血病(CML)、多发性骨髓瘤、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性或特发性骨髓纤维化、原发性或特发性脊髓硬化症、骨髓源性肿瘤、表达CD33的肿瘤、甲状腺癌、感染、CNS疱疹、寄生虫感染、锥虫感染、Cruzi感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏球菌感染、I型HIV、和流感嗜血杆菌。
在一些实施方案中，说明书包含如何检测例如个体中、组织样品中、或细胞中的CD33蛋白质的描述。药盒和/或制品还可包含基于鉴定个体是否患有疾病和疾病阶段来选择适合治疗的个体的描述。
在一些实施方案中，药盒和/或制品还可包括本公开的另一种抗体(例如，特异性地结合抑制性检查点分子的至少一种抗体、特异性地结合抑制性细胞因子的至少一种抗体和/或特异性地结合刺激性检查点蛋白的至少一种激动性抗体)和/或至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，药盒和/或制品还可包括用于根据本公开的任何方法使用抗体和/或刺激性细胞因子与本文所述的抗CD33抗体的组合的说明书、用于根据本公开的任何方法使用本文所述的抗CD33抗体与抗体和/或刺激性细胞因子的组合的说明书、或用于根据本公开的任何方法使用本文所述的抗CD33抗体和抗体和/或刺激性细胞因子的说明书。
所述说明书通常包括关于意图治疗的剂量、给药时间表、和施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。供应在本公开的药盒和/或制品中的说明书通常是在标签或包装插页上的书面说明书(例如，包括在药盒中的纸张)，但是机器可读的说明书(例如，磁或光学存储盘上携带的说明书)也是可接受的。
标签或包装插页指示组合物用于治疗例如本公开的疾病。可以提供用于实践本文所述的任何方法的说明书。
本公开的药盒和/或制品处于合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、罐、柔性包装(例如，密封的聚酯薄膜或塑料袋)等。还考虑用于与指定的装置(诸如吸入器、经鼻施用装置(例如，喷雾器) 或输注装置(诸如微型泵))组合使用的包装。药盒和/或制品可具有无菌入口(例如，容器可以是具有皮下注射针可刺穿的塞子的静脉溶液袋或小瓶)。容器也可具有无菌入口(例如，容器可以是具有皮下注射针可刺穿的塞子的静脉溶液袋或小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本文所述的抗CD33抗体。容器还可包含第二药物活性剂。
药盒和/或制品可任选地提供另外的组分，诸如缓冲液和解释性信息。通常，药盒包含容器、以及在容器上或与容器相关的标签或包装插页。
通过参考以下实施例将更完全地理解本公开。然而，它们不应解释为限制本公开的范围。贯穿本公开的所有引用特此以引用方式明确并入。
实施例
实施例1：抗CD33抗体在健康人志愿者中的药代动力学
此实施例描述了根据实施例3中所述的方案的1a期研究，所述研究检查了静脉内施用的抗CD33抗体AB-64.1.2在人体中的药代动力学(PK)。
材料和方法
在大约一小时内，以静脉输注的方式向健康人志愿受试者施用单剂量的抗CD33抗体AB-64.1.2(或安慰剂对照)。用于这些研究的抗体 AB-64.1.2剂量水平为1.6mg/kg、5mg/kg、15mg/kg和30mg/kg。每个AB-64.1.2剂量队列包括6名受试者。
在多个时间点从人受试者中抽取血液，以获得血清中的抗CD33 抗体浓度用于测量药代动力学。对于所有队列(至多并包括5mg/kg 队列)，抗CD33抗体浓度在给药后至多84天可用；对于15mg/kg队列，给药后至多56天；对于30mg/kg队列，给药后至多29天。使用ELISA测定来测定抗CD33抗体血清浓度。
结果
表E中提供了来自每个剂量队列的健康志愿者的抗CD33抗体 AB-64.1.2的血清PK数据。
表E.抗CD33抗体AB-64.1.2的血清PK数据。
Figure BDA0003787403120002011
如表E所示，向健康人志愿者施用的抗CD33抗体AB-64.1.2显示出近似剂量比例的Cmax。数据还显示，在所有测试剂量下，抗CD33 抗体AB-64.1.2的血浆终末半衰期都很短，范围为1.6mg/kg剂量下的113.5小时(4.73天)至15mg/kg剂量下的246.4小时(10.27天)。
结论
此实施例中呈现的结果表明，在测试剂量下，抗CD33抗体 AB-64.1.2比其他相似类别的治疗性抗体清除得更快，因此证明了出乎意料的，与其他相似类别的抗体相比，抗CD33抗体AB-64.1.2表现出短终末半衰期(Ovacik,M and Lin,L,(2018)Clin Transl Sci11, 540-552)。AB-64.1.2的短终末半衰期表明所述抗体可能在治疗上不可用。
实施例2：抗CD33抗体AB-64.1.2对健康人志愿者单核细胞CD33水平的影响
此实施例描述了根据实施例3中所述的方案的1a期研究，所述研究检查了抗CD33抗体AB-64.1.2对人体内的单核细胞CD33表达水平的影响。
材料和方法
以1.6mg/kg或15mg/kg的剂量向健康人志愿者施用单次静脉内剂量的抗CD33抗体AB-64.1.2。每剂向六个个体施用抗CD33抗体，并且每剂向两个个体施用安慰剂对照抗体。
在施用抗CD33抗体后的第1、4、7、12、17、29、42、56和84 天从每个个体收集全血。
使用流式细胞术确定单核细胞上的CD33表达水平的变化。由于平均荧光强度(MFI)在仪器间或在同一仪器上进行的测量中随时间变化，因此使用等量可溶性荧光分子(MESF)作为荧光强度的标准化单位。MESF解释了在平均荧光强度中观察到的可变性(例如，猝灭、光谱偏移、消光系数)，并且允许随时间推移和在不同仪器间对流式细胞术测量进行定量比较(参见Schwartz等人，2004,Cytometry Part B (Clinical Cytometry),57B:1-6.)。在此实施例中呈现的流式细胞术分析中，将单核细胞门控为CD11b+CD14+CD16-HLA-DR+并且选择为单个活细胞。将粒细胞门控为CD11b+CD16+CD66+。血液样本的流式细胞术在360BioLabs(Melbourne,Australia)执行。
结果
从全血样品中测量了在向健康人志愿者施用抗CD33抗体之后，从第1天到第84天，单核细胞CD33水平相对于基线的百分比变化。如图1所示，在施用1.6mg/kg剂量或15mg/kg剂量的抗CD33抗体之后，单核细胞CD33水平快速降低。
特别地，在施用后第1天，被给予单剂量的1.6mg/kg抗体的人受试者的单核细胞CD33水平相对于基线下降了大约70％。在施用单次1.6mg/kg剂量后至少17天，单核细胞CD33水平的降低保持在比基线水平低大约70％-75％的水平。另外，在施用后至少56天，被施用15mg/kg的单次抗CD33抗体AB-64.1.2剂量的健康人受试者表现出单核细胞CD33水平比基线降低大约80％-90％。全血样品中单核细胞的总数没有减少，这表明观察到的CD33水平降低不是由于例如单核细胞死亡导致单核细胞数量减少引起的。
结论
此实施例中呈现的结果表明，抗CD33抗体AB-64.1.2引起外周单核细胞CD33水平的剂量依赖性和持久降低。
鉴于抗CD33抗体AB-64.1.2在1.6mg/kg单剂量之后大约113.5 小时(4.73天)、或在15mg/kg单剂量之后大约246.6小时(10.27天) 的短终末半衰期(参见实施例1和表E)，在向健康人受试者施用单剂量的AB-64.1.2后，单核细胞CD33水平比基线水平持久降低约70％-90％，这是出乎意料的和令人惊讶的。
实施例3：评估单剂量和多剂量抗CD33抗体AB-64.1.2在健康参与者和患有轻度至 中度阿尔茨海默病的参与者中的安全性、耐受性、药代动力学、药效动力学和免疫原性的1 期研究
此实施例描述了健康成人和患有轻度至中度阿尔茨海默病的患者的多中心、随机、双盲、安慰剂对照、剂量递增、首先对人进行(FIH) 的研究。研究被设计用于系统性地评估抗CD33抗体AB-64.1.2在作为单次递增剂量施用时在健康参与者中的和在作为多剂量施用时在患有轻度至中度阿尔茨海默病的患者中的安全性(包括免疫原性)和耐受性、药代动力学(PK)、以及药效动力学(PD)。
主要目标
本研究的主要目标是评价抗CD33抗体AB-64.1.2以单次递增剂量施用时在健康参与者中的或以多剂量施用时在患有轻度至中度阿尔茨海默病的患者中的安全性、耐受性、药代动力学和药效动力学。
研究设计
研究分两个阶段进行，如下所述。
单次递增剂量阶段
在单次递增剂量(SAD)阶段，多达49名健康成人参与者依次登记到8个预定义队列中(队列A至H)。三个初始队列以1-3名健康志愿参与者进行(全部接受活性药物，即抗CD33抗体AB-64.1.2)，然后每个后续队列具有8名健康志愿参与者/队列(6活性药物:2活性剂)。添加了另外的开放标签队列以进一步评估交替时间点处的脑脊液(CSF) 中的安全性、耐受性和PD效应，每个队列至多有8名参与者。
SAD队列的给药如表F所示。
表F.单次递增剂量(SAD)队列A-H的给药方案。
Figure BDA0003787403120002041
研究的SAD健康志愿者阶段由以下组成：筛选期、研究(治疗) 期、随访访问和最终随访访问/研究完成访问。筛选发生在登记前的4 周内，并且研究药物的首次施用发生在第1天。在输注后，跟踪所有SAD参与者12周。在筛选时、在第8天和第18天(±1天)、或在由来自先前的单剂量队列的PK和PD数据确定的那天(如适用)，指定脑脊液(CSF)队列(即，SAD队列E、F、G和H)中的参与者经受腰椎穿刺。
在不超过15mg/kg的剂量水平下，添加另外的单剂量队列作为至多8名参与者/队列的开放标签队列。在筛选时(输注研究药物之前至少4天)、在第8天和第18天(±1天)、或在由来自先前的单剂量队列的初步PK和PD数据确定的那天(如适用)，这些队列中的参与者经受腰椎穿刺。
多剂量阶段
在多剂量(MD)阶段，登记了大约12名患有轻度至中度阿尔茨海默病的患者并且，将其随机分配到1个队列中(队列I；10活性药物:2 安慰剂)。
只有在评估了SAD阶段最后一名参与者的安全性和耐受性(至多并包括第13天的访问)之后才开始进行MD队列。抗CD33抗体 AB-64.1.2经由IV输注以两剂施用，间隔4周(q4w x2)。用于2次研究药物输注的剂量水平为15mg/kg，这被认为是可耐受的，并且预期不超过在30mg/kg HV队列(队列G)中见到的最低暴露。
患有轻度至中度阿尔茨海默病的患者的研究的MD阶段由以下组成：筛选期、研究(治疗)期、随访访问和最终随访访问/研究完成访问。
筛选发生在登记前的6周内，并且研究药物的首次施用的剂发生在第1天。
向患者施用简易精神状态检查表(MMSE)、可重复的成套心理状态测量表(RBANS)、和临床痴呆评定量表(CDR)，并且患者接受脑的 MRI(包括但不限于液体衰减反转恢复[FLAIR]和T2*加权GRE序列) 评估。筛选MRI发生在尽可能接近筛选窗口开始的位置，并且发生在第1天随机分配前至少10天。
执行腰椎穿刺以获得CSF基线样品。
对所有参与者都执行了淀粉样蛋白-正电子发射断层显像(PET) 成像。参与者还可参与任选的探索性评估以评价脑中的通过转位蛋白 (TSPO)-PET测量的变化。
在第1天首次IV输注研究药物并且在第2天出院后，参与者在第8、15和22天(±2天)作为门诊患者返回研究地点以进行安全评估随访，并在第29天(±1天)施用第二剂研究药物。
在第50天和第64天(±2天)、或在由来自先前的单剂量队列的 PK和PD数据确定的那天执行腰椎穿刺，以获得CSF。在最后一次输注日后，跟踪参与者16周。
在第106天(-2天；+14天)对所有参与者执行淀粉样蛋白-PET 成像。可在第36天(+10天)执行TSPO-PET成像作为任选的评估。计划在第43天(±2天)对所有参与者进行脑部MRI。
合格标准
纳入标准
满足以下标准的受试者被纳入本研究的SAD阶段：
·SAD队列中的患者是18岁-65岁的健康成年人。
满足以下标准的受试者被纳入本研究的MD阶段：
·50岁-85岁的成年人。
·基于国家老龄化研究所阿尔茨海默氏症协会的标准，具有可能的阿尔茨海默病性痴呆的临床诊断。
·筛选MMSE评分为16分-28分，包括端值在内。
·筛选临床痴呆评定量表整体评分(CDR-GS)为0.5、1.0或2.0。
·如PET成像章程中所定义，具有通过定性读数的阳性淀粉样蛋白-PET扫描。
·如果在筛选前至少4周已经以稳定剂量服用用于阿尔茨海默病的胆碱酯酶抑制剂和/或美金刚疗法，在研究的持续时间中不意图开始、停止或改变用于阿尔茨海默病的任何疗法的剂量。
排除标准
如果受试者满足以下标准，则将其从本研究排除：
·次要等位基因rs12459419T的两个拷贝的携带者。
·有CNS或全身性自身免疫病症的病史或存在所述病症，包括但不限于类风湿关节炎、多发性硬化症、红斑狼疮、抗磷脂抗体综合征、白塞病(
Figure BDA0003787403120002071
disease)。
·患有由阿尔茨海默病以外的疾患引起的痴呆，所述疾患包括但不限于额颞叶痴呆、帕金森氏病、路易体痴呆、亨廷顿氏病或血管性痴呆。
·具有可能影响认知功能的潜在影响脑的临床明显血管疾病的病史或存在所述疾病(例如，临床上显著的颈动脉、椎骨狭窄或斑块；主动脉瘤；颅内动脉瘤；脑出血；动静脉畸形)。
·过去2年内有中风病史或存在中风，或在过去12个月内有记录的短暂性脑缺血发作史。
·有严重的、临床显著的(持续性神经功能缺陷或结构性脑损伤)CNS创伤史(例如，脑挫伤)。
·MRI证据
ο超过两个腔隙性梗塞；
ο任何>1cm3的区域性梗塞；或
ο脑白质中具有可能促进认知功能障碍的显著FLAIR高信号病变。
研究持续时间
SAD队列中每名参与者的研究参与持续时间为约16周，包括长达4周的筛选、第1天的单次治疗和随访期，最终在第85天(±5天) 完成最终研究完成访问。
MD队列中每名参与者的研究参与持续时间为约26周，包括长达6周的筛查、多次治疗(两次施用，间隔4周[q4w x2])和随访期，最终在第141天(±5天)完成最终研究完成访问。
研究药物的施用
抗CD33抗体AB-64.1.2通过静脉内(IV)输注施用约60分钟。如果发生输注相关反应，则调整输注速度。用于IV输注的安慰剂是可商购获得的生理盐水。
研究结果评估
药代动力学结果
本研究的药代动力学结果测量包括：
·指定时间点的抗CD33抗体AB-64.1.2的血清浓度。
·抗CD33抗体AB-64.1.2的血清浓度或PK参数与安全性终点之间的关系。
·抗CD33抗体AB-64.1.2的血清、CSF浓度或PK参数与活性或PD终点之间的关系(与活性的关系是仅针对MD队列(即，阿尔茨海默病患者)的终点)。
临床结果
探索性临床结果测量(仅针对MD队列，即阿尔茨海默病患者)包括：
·临床痴呆评定(CDR)总和量表(CDR-SB)评分(给药后相对于基线的变化)。
·简易精神状态检查表(MMSE)评分(给药后相对于基线的变化)。
·可重复的成套心理状态测量表(RBANS)评分(给药后相对于基线的变化)。
华盛顿大学的CDR是产生整体评分(即，CDR-GS)的整体评估工具。总和量表(即CDR-SB)评分是详细的定量通用指数，在轻度痴呆患者中比CDR-GS提供更多信息(O’Bryant等人，(2010)Arch Neurol, 67(6):746-49)。CDR表征了适用于阿尔茨海默氏病和相关痴呆的认知和功能表现的6个领域：记忆、定向、判断和解决问题、社区事务、家庭和爱好以及个人护理。用于进行每一次评定的必要信息是通过与患者和可靠的知情者或旁系亲属来源(例如，护理人员)进行半结构化面谈来获得的。
MMSE是用于筛选认知障碍的简短测试。它常规地用于估计认知障碍的严重程度和跟踪个体随时间推移的认知变化。MMSE评估定向(时间和地点)、对准、注意力和计算、近期记忆、语言(命名、理解和重复)和结构实践(复制图形)。最高总分为30分，分数越高表示认知表现越好。
RBANS是代表5个神经认知领域的12个子测试的集合：即时记忆、视觉空间/结构(Visuospatial/Constructional)、语言、注意力和延迟记忆。通过查阅规范数据表，将来自领域内每个子测试的原始评分转换为所述领域的总结评分或指数评分。RBANS还提供了整体指数评分，该评分总结了患者在此量度上的总体表现水平。
药效动力学结果
评估药效动力学生物标记物，包括以下：
·基于血液的生物标记物：
οCD33的细胞表面表达。
ο血浆中的可溶性CD33(sCD33)。
ο血液中的神经炎症的标记物。
ο相关生物标记物/抗原的细胞表面表达。
·基于CSF的生物标记物：
οsCD33。
ο与阿尔茨海默病相关的CSF生物标记物，例如Aβ、Tau、p-Tau、神经丝轻链[NF-L]、神经粒蛋白和YKL-40)。
ο其他相关的神经炎症标记物。
·与疾病适应症相关的遗传标记物，包括以下：
οApoE4。
οTREM2变体、CD33变体、TMEM106b变体、CLUSTERIN变体。
·成像生物标记物(仅针对MD队列，即阿尔茨海默病患者)：
ο磁共振成像(MRI)。
ο淀粉样蛋白-正电子发射断层显像(PET)(在所有阿尔茨海默病患者中)。
ο转位蛋白(TSPO)-PET。
·本研究的探索性生物标记物终点的分析包括：
ο细胞表面CD33的表达水平的变化。
ο给药后，血浆和CSF中的sCD33水平相对于基线浓度的变化。
ο细胞表面抗原表达的变化。
ο基线处的生物标记物(包括常见的和稀有的遗传变体，通过对从血液中提取的脱氧核糖核酸(DNA)执行全基因组测序(WGS)来鉴定)与安全性、PK、活性、免疫原性、或其他生物标记物终点的关系(与活性的关系是仅针对MD队列(即，阿尔茨海默病患者)的终点)。
ο仅在MD患者队列(即，阿尔茨海默病患者)中通过淀粉样蛋白 -PET评估的脑淀粉样蛋白负荷的变化。
ο通过转位蛋白(TSPO)-PET评估的脑炎症变化。
οCSF和血浆中的神经炎症和疾病过程的标记物的变化。
·通过全基因组测序分析的生物标记物，包括以下：
ο载脂蛋白E4(ApoE4)
οTREM2变体、CD33变体、TMEM106b变体、CLUSTERIN变体。
安全性和耐受性
本研究的安全性和耐受性终点包括：
·严重不良事件(SAE)的发生率、性质和严重程度
·剂量限制性不良事件(DLAE)的发生率。
·特别关注的不良事件(AE)(AESI)的发生率，所述不良事件包括以下：
ο新的或恶化的脑水肿。
ο新的脑微出血。
ο2级或更高级别的AE被认为可能是CD33介导的。
·由于AE而中断的治疗的发生率。
·由于AE引起的剂量减少的发生率。
·随着时间的推移，临床实验室测试相对于基线的平均变化；治疗出现的异常实验室值和报告为AE的异常实验室值的发生率。
·身体和神经系统检查异常。
·随着时间的推移，生命体征相对于基线的平均变化、和异常生命体征测量的发生率。
·使用Sheehan-STS确定的自杀意念、自杀行为和没有自杀意图的自残行为(仅针对MD患者队列)。
·抗药物抗体(ADAs)在研究期间相对于基线处的ADA的患病率的发生率(在SAD健康成人参与者队列和MD患者队列中)。
统计方法
分析人群
统计分析人群包括以下：
接受治疗的人群：接受治疗的人群包括所有随机分配的参与者，并且基于接受的治疗/剂量水平。
安全人群：安全人群包括接受任何量的研究药物(抗CD33抗体 AB-64.1.2或安慰剂)的所有随机分配的参与者，并且如果治疗/剂量水平与参与者被随机分配到的不同，则基于接受的实际治疗/剂量水平。
PK人群：PK人群包括接受任何量的活性研究药物(抗CD33抗体AB-64.1.2)的所有随机分配的参与者，其血浆浓度-时间数据足够确定至少一个PK参数。仅接受安慰剂的参与者从PK人群中排除。
PD人群：PD人群包括接受任何量的研究药物(抗CD33抗体 AB-64.1.2或安慰剂)的所有随机分配的参与者，其结果来自基线和至少一项基线后PD评估，并且如果治疗/剂量水平与参与者被随机分配到的不同，则基于接受的实际治疗/剂量水平。
药代动力学
个体和平均血清抗CD33抗体AB-64.1.2浓度-时间数据按队列/ 剂量水平制成表格和图表。使用非隔室方法从个体血清抗CD33抗体AB-64.1.2浓度计算PK参数。估计的PK参数包括：
·最大药物浓度(Cmax)。
·达到Cmax的时间(Tmax)。
·从时间0到最后可量化浓度的药物浓度-时间曲线下面积 (AUC(0-最后))。
·从时间零到无穷久的药物浓度-时间曲线下面积(AUC(0-inf))，其计算为AUC(0-最后)加上最后可测量的血浆浓度的总和除以消除速率常数(kel)。
·给药间隔内药物浓度-时间曲线下的面积(AUCtau)，其中tau是给药间隔的时间。仅针对MD队列计算。
·表观终末消除速率常数(kel)，其通过对数浓度对比时间曲线的终末线性部分的线性回归计算。
·表观终末半衰期(t1/2)。
·血管外施用后的表观全身清除(SAD队列：CL；MD队列： CLss)，计算为单次/第一剂的剂量/AUC0-inf和多剂量施用后的剂量 /AUCtau。
·血管外施用后终末期的表观总分布体积(SAD队列：Vz；MD 队列：Vzss)，计算为单次/第一剂后的剂量/(kel x AUC0-inf)和多剂量施用后的Dose/(kel x AUCtau)。
对于在浓度与时间曲线中未能表现出最终对数线性相(terminal log-linearphase)的情况，不报告kel、t1/2、AUC0-inf、CL或Vz的值。
通过描述性统计(平均值、标准偏差[SD]、中值、最小值和最大值、变异系数[CV％]、几何平均值和90％置信区间[CI]、以及几何CV％) 将PK参数的估计值制成表格并总结。
个体和平均抗CD33抗体AB-64.1.2CSF浓度-时间数据按队列/ 剂量水平制成表格。
探索了相关PK参数与剂量、人口统计学、安全性(包括QT变化) 和PD测量的潜在相关性。执行了另外的建模(包括人群PK分析)以表征这些相关性。
探索性临床结果
CDR-SB、MMSE和RBANS的个体探索性临床结果测量在所有参与者的数据列表中呈现(仅针对MD队列，即阿尔茨海默病患者)。 CDR-SB、MMSE和RBANS按时间点和治疗组(活性药物或安慰剂) 进行总结，并且呈现了治疗组相对于基线的变化的总结。
药效学和探索性生物标记物
所有个体PD生物标记物数据都在数据列表中呈现，并且使用描述性统计(例如，非缺失观察(non-missing observation)的数量、算术平均值、SD、中值、最小值、最大值和％CV)按照标称采样时间点、治疗组和队列进行总结。呈现了低于定量限(BLQ)的值的数量。观察到的PD生物标记物参数相对于基线的变化和相对于基线的百分比变化针对单剂量队列和多剂量队列单独地总结。
对生物标记物进行探索性分析以评价抗CD33抗体AB-64.1.2对探索性生物标记物的影响。另外，在给药抗CD33抗体AB-64.1.2之前和之后分析探索性生物标记物以确定PK暴露与生物标记物水平之间的关系。
表1A：抗CD33抗体的EU或Kabat重链HVR H1序列
Figure BDA0003787403120002161
表1B：抗CD33抗体的EU或Kabat重链HVR H2序列
Figure BDA0003787403120002162
表1C：抗CD33抗体的EU或Kabat重链HVR H3序列
Figure BDA0003787403120002171
表2A：抗CD33抗体的EU或Kabat轻HVR L1序列
Figure BDA0003787403120002172
表2B：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链HVR L2序列
Figure BDA0003787403120002181
表2C：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链HVR L3序列
Figure BDA0003787403120002182
表3：抗CD33抗体的EU或Kabat重链可变区序列
Figure BDA0003787403120002191
Figure BDA0003787403120002201
Figure BDA0003787403120002211
表4：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链可变区序列
Figure BDA0003787403120002212
Figure BDA0003787403120002221
Figure BDA0003787403120002231
表5A：抗CD33抗体的EU或Kabat重链框架1序列
Figure BDA0003787403120002232
Figure BDA0003787403120002241
表5B：抗CD33抗体的EU或Kabat重链框架2序列
Figure BDA0003787403120002242
表5C：抗CD33抗体的EU或Kabat重链框架3序列
Figure BDA0003787403120002243
Figure BDA0003787403120002251
表5D：抗CD33抗体的EU或Kabat重链框架4序列
Figure BDA0003787403120002252
表6A：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架1序列
Figure BDA0003787403120002253
Figure BDA0003787403120002261
表6B：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架2序列
Figure BDA0003787403120002262
表6C：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架3序列
Figure BDA0003787403120002263
Figure BDA0003787403120002271
表6D：抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架4序列
Figure BDA0003787403120002272
序列
除非另有说明，否则所有多肽序列均以N末端至C末端呈现。
亲本小鼠抗体重链可变区：
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVKLSH GKSLEWIGFIYPSNGITGYNQKFKNKATLTVDNSSSTAYMELRSLT SEDSAVYYCARSTVDYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:103)
亲本小鼠抗体轻链可变区：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATMSCRASQSVSTSTYSYMHWYQ QKPGQPPKLLIKYASNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDT ATYYCQHSWEIPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:104)
受体基序：
D/Ex0–2YxxL/IX6–8YxxL/I(SEQ ID NO:165)
IGg2的CH1和铰链区：
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHK PSNTKVDKTVERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:166)
AB-64.1 huIgG1全长抗体序列：
重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNGITGYAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK(SEQ ID NO:176)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNGITGYAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PG(SEQ ID NO:197)
轻链：
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASQSVSTSTYSYMHWYQQ KPGQPPKLLIKYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVA VYYCQHSWEIPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTA SVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:185)
AB-64.1.2 huIgG1全长抗体序列
重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNRITGYAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK(SEQ ID NO:177)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNRITGYAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PG(SEQ ID NO:198)
轻链：
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASQSVSTSTYSYMHWYQQ KPGQPPKLLIKYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVA VYYCQHSWEIPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTA SVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:185)
AB-64.1.8 huIgG1全长抗体序列
重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNQITGYAQKFQGRATLTVDNSASTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK(SEQ ID NO:178)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNQITGYAQKFQGRATLTVDNSASTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PG(SEQ ID NO:199)
轻链：
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASQSVSTSTYSYMHWYQQ KPGQPPKLLIKYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVA VYYCQHSWEIPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTA SVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:185)
AB-64.1 huIgG2全长抗体序列
重链：
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNGITGYAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAP CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCC VECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDW LNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO:179)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNGITGYAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAP CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCC VECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDW LNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:200)
轻链：
DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCRASQSVSTSTYSYMHWYQQ KPGQPPKLLIKYASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVA VYYCQHSWEIPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTA SVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:185)
AB-64.1.2 huIgG2全长抗体序列
重链：
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轻链：
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AB-64.1.8 huIgG2全长抗体序列
重链：
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QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNQITGYAQKFQGRATLTVDNSASTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAP CSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCC VECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDW LNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSF FLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:202)
轻链：
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AB-64.1 huIgG1 LALAPS全长抗体序列
重链：
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QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNGITGYAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PG(SEQ ID NO:203)
轻链：
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AB-64.1.2 huIgG1 LALAPS全长抗体序列
重链：
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QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNRITGYAQKFQGRATLTVDNSTSTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PG(SEQ ID NO:204)
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AB-64.1.8 huIgG1 LALAPS全长抗体序列
重链：
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QVQLVQSGAEVKKPGASVKISCKASGYTFTDYNLHWVRQAP GQGLEWIGFIYPSNQITGYAQKFQGRATLTVDNSASTAYMELSSL RSEDTAVYYCARSDVDYFDYWGQGTLLTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCD KTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLH QDWLNGKEYKCKVSNKALPASIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR DELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDS DGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PG(SEQ ID NO:205)
轻链：
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序列表
<110> 艾利妥(Alector LLC)
<120> 使用抗CD33抗体的方法
<130> 73502-20033.40
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> US 62/947,455
<151> 2019-12-12
<160> 205
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 364
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
1 5 10 15
Met Asp Pro Asn Phe Trp Leu Gln Val Gln Glu Ser Val Thr Val Gln
20 25 30
Glu Gly Leu Cys Val Leu Val Pro Cys Thr Phe Phe His Pro Ile Pro
35 40 45
Tyr Tyr Asp Lys Asn Ser Pro Val His Gly Tyr Trp Phe Arg Glu Gly
50 55 60
Ala Ile Ile Ser Arg Asp Ser Pro Val Ala Thr Asn Lys Leu Asp Gln
65 70 75 80
Glu Val Gln Glu Glu Thr Gln Gly Arg Phe Arg Leu Leu Gly Asp Pro
85 90 95
Ser Arg Asn Asn Cys Ser Leu Ser Ile Val Asp Ala Arg Arg Arg Asp
100 105 110
Asn Gly Ser Tyr Phe Phe Arg Met Glu Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ser
115 120 125
Tyr Lys Ser Pro Gln Leu Ser Val His Val Thr Asp Leu Thr His Arg
130 135 140
Pro Lys Ile Leu Ile Pro Gly Thr Leu Glu Pro Gly His Ser Lys Asn
145 150 155 160
Leu Thr Cys Ser Val Ser Trp Ala Cys Glu Gln Gly Thr Pro Pro Ile
165 170 175
Phe Ser Trp Leu Ser Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Pro Arg Thr Thr
180 185 190
His Ser Ser Val Leu Ile Ile Thr Pro Arg Pro Gln Asp His Gly Thr
195 200 205
Asn Leu Thr Cys Gln Val Lys Phe Ala Gly Ala Gly Val Thr Thr Glu
210 215 220
Arg Thr Ile Gln Leu Asn Val Thr Tyr Val Pro Gln Asn Pro Thr Thr
225 230 235 240
Gly Ile Phe Pro Gly Asp Gly Ser Gly Lys Gln Glu Thr Arg Ala Gly
245 250 255
Val Val His Gly Ala Ile Gly Gly Ala Gly Val Thr Ala Leu Leu Ala
260 265 270
Leu Cys Leu Cys Leu Ile Phe Phe Ile Val Lys Thr His Arg Arg Lys
275 280 285
Ala Ala Arg Thr Ala Val Gly Arg Asn Asp Thr His Pro Thr Thr Gly
290 295 300
Ser Ala Ser Pro Lys His Gln Lys Lys Ser Lys Leu His Gly Pro Thr
305 310 315 320
Glu Thr Ser Ser Cys Ser Gly Ala Ala Pro Thr Val Glu Met Asp Glu
325 330 335
Glu Leu His Tyr Ala Ser Leu Asn Phe His Gly Met Asn Pro Ser Lys
340 345 350
Asp Thr Ser Thr Glu Tyr Ser Glu Val Arg Thr Gln
355 360
<210> 2
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 3
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 4
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 5
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 6
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 6
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 7
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 7
Tyr Ala Gln Asp Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 8
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 8
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 9
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 9
Ser Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 10
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Tyr Ala Gln Lys Asp Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 11
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 11
Tyr Ala Gln Lys Phe Thr Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 12
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 13
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
Tyr Ala Glu Lys Phe Glu Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 14
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Tyr Ala Gln Lys Phe Phe Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 15
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 15
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln His Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 16
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 17
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Gln Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 18
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser
1 5 10 15
Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 19
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 19
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Pro
1 5 10 15
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 21
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 22
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 23
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 23
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 24
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 25
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 25
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 26
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asp Cys
20
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 28
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 29
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 29
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 30
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 31
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 31
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 32
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 33
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Glu
1 5 10
<210> 34
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 34
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ala Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Phe His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Asp Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
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Gln His Ser Trp Ala Ile Pro Leu Thr
1 5
<210> 151
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 151
Gln His Ser Glu Glu Ile Pro Leu Thr
1 5
<210> 152
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa = Tyr、Ala或Val
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa = Thr或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Phe、Glu或His
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Leu、Phe、Tyr或Asn
<400> 152
Gly Xaa Xaa Xaa Thr Asp Tyr Asn Xaa His
1 5 10
<210> 153
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Gly、Gln、Arg或Val
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Thr或Arg
<400> 153
Phe Ile Tyr Pro Xaa Asn Xaa Ile Xaa Gly
1 5 10
<210> 154
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa = Thr、Asp、Phe或Ser
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Tyr、Asp或Leu
<400> 154
Ser Xaa Val Asp Tyr Phe Asp Xaa
1 5
<210> 155
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Arg或Lys
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa = Ala、Gly或Val
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Ser或Asp
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Ser、Gly或His
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Thr或Ala
<400> 155
Xaa Xaa Ser Gln Xaa Val Xaa Xaa Ser Thr Tyr Ser Tyr Met His
1 5 10 15
<210> 156
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa = Ala、Val或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa = Ser、Val或Phe
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Asn、Ala、Tyr或Phe
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Leu或Val
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Glu、Gly或Asn
<400> 156
Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser
1 5
<210> 157
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Gln或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Trp或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Glu或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Ile或Leu
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Thr或Glu
<400> 157
Xaa His Ser Xaa Xaa Xaa Pro Leu Xaa
1 5
<210> 158
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 16
<223> Xaa = Ala或Ser
<220>
<221> 变体
<222> 20
<223> Xaa = Val或Ile
<400> 158
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Xaa
1 5 10 15
Ser Val Lys Xaa Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 159
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Tyr或Ser
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa = Gln或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Lys或Asp
<220>
<221> 变体
<222> 5
<223> Xaa = Phe或Asp
<220>
<221> 变体
<222> 6
<223> Xaa = Gln、Phe、Glu或Thr
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Gly、Asp或His
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Val或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 11
<223> Xaa = Met或Leu
<220>
<221> 变体
<222> 15
<223> Xaa = Thr、Asn或Gln
<220>
<221> 变体
<222> 16
<223> Xaa = Ser或Pro
<220>
<221> 变体
<222> 17
<223> Xaa = Thr或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 20
<223> Xaa = Val或Ala
<400> 159
Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Xaa Thr Xaa Thr Val Asp Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Ser Thr Xaa Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 160
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Val或Leu
<400> 160
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Xaa Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 161
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Asp或Gly
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa = Gln或Val
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Met或Leu
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Ser或Asp
<220>
<221> 变体
<222> 12
<223> Xaa = Ser、Pro或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 13
<223> Xaa = Ala或Val
<220>
<221> 变体
<222> 15
<223> Xaa = Val或Leu
<220>
<221> 变体
<222> 17
<223> Xaa = Asp或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 19
<223> Xaa = Val或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 22
<223> Xaa = Thr、Asn或Asp
<400> 161
Xaa Ile Xaa Xaa Thr Gln Ser Pro Xaa Ser Leu Xaa Xaa Ser Xaa Gly
1 5 10 15
Xaa Arg Xaa Thr Ile Xaa Cys
20
<210> 162
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Lys或Gln
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Ala或Pro
<400> 162
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Xaa Xaa Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 163
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Ser或Asp
<220>
<221> 变体
<222> 24
<223> Xaa = Pro或Ala
<220>
<221> 变体
<222> 27
<223> Xaa = Phe、Leu或Val
<220>
<221> 变体
<222> 29
<223> Xaa = Thr或Val
<400> 163
Gly Val Pro Xaa Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Xaa Glu Asp Xaa Ala Xaa Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 164
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 10
<223> Xaa = Lys或Glu
<400> 164
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Xaa
1 5 10
<210> 165
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Asp或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 2, 3
<223> Xaa = 任何氨基酸，并且最多可存在或不存在两个
<220>
<221> 变体
<222> 5, 6
<223> Xaa = 任何氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Leu或Ile
<220>
<221> 变体
<222> 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15
<223> Xaa = 任何氨基酸，并且最多可存在或不存在两个
<220>
<221> 变体
<222> 17, 18
<223> Xaa = 任何氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> 19
<223> Xaa = Leu或Ile
<400> 165
Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa
<210> 166
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 166
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
100 105 110
<210> 167
<400> 167
000
<210> 168
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 168
Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 169
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 4
<223> Xaa = Gln或Arg
<220>
<221> 变体
<222> 8
<223> Xaa = Lys或Gln
<220>
<221> 变体
<222> 9
<223> Xaa = Ala或Pro
<400> 169
Trp Tyr Gln Xaa Lys Pro Gly Xaa Xaa Pro Lys Leu Leu Ile Lys
1 5 10 15
<210> 170
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 170
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 171
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 171
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Val Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 172
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 172
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 173
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 173
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 174
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 174
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 175
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 175
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 176
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 176
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Gly Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asp Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 177
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 177
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Pro Ser Asn Arg Ile Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Asn Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asp Val Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
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<400> 205
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Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445

Claims (35)

1.一种治疗个体的疾病或损伤和/或延缓个体的疾病或损伤的进展的方法，其包括以至少约1.6mg/kg的剂量向所述个体静脉内施用抗CD33抗体，
其中所述抗体约每十二周施用一次或更频繁地施用；并且
其中所述抗体包含：重链可变区，所述重链可变区包含含有氨基酸序列GYTFTDYNLH(SEQ ID NO:105)的HVR-H1、含有氨基酸序列FIYPSNRITG(SEQ ID NO:119)的HVR-H2和含有氨基酸序列SDVDYFDY(SEQ ID NO:122)的HVR-H3；以及
轻链可变区，所述轻链可变区包含含有氨基酸序列RASQSVSTSTYSYMH(SEQ ID NO:127)的HVR-L1、含有氨基酸序列YASNLES(SEQ ID NO:135)的HVR-L2和含有氨基酸序列QHSWEIPLT(SEQ ID NO:146)的HVR-L3。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约1.6mg/kg至约15mg/kg的剂量施用。
3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约1.6mg/kg、约5mg/kg、约7.5mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体每两周施用一次、每四周施用一次、每五周施用一次、每六周施用一次、每七周施用一次、每八周施用一次、每九周施用一次、每十周施用一次、每十一周施用一次或每十二周施用一次。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约1.6mg/kg的剂量每两周施用一次。
6.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约1.6mg/kg的剂量每四周施用一次。
7.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每四周施用一次。
8.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每五周施用一次。
9.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每六周施用一次。
10.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每七周施用一次。
11.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体以约15mg/kg的剂量每八周施用一次。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中与施用所述抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，CD33的细胞表面水平降低至少约70％。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中与施用所述抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，CD33的细胞表面水平降低至少约80％。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中与施用所述抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，CD33的细胞表面水平降低至少约85％。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中与施用所述抗CD33抗体之前的CD33的细胞表面水平相比，CD33的细胞表面水平降低至少约90％。
16.如权利要求12-15中任一项所述的方法，其中在施用所述抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约12天。
17.如权利要求12-16中任一项所述的方法，其中在施用所述抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约17天。
18.如权利要求12-17中任一项所述的方法，其中在施用所述抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约29天。
19.如权利要求12-18中任一项所述的方法，其中在施用所述抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约42天。
20.如权利要求12-19中任一项所述的方法，其中在施用所述抗CD33抗体之后，CD33的细胞表面水平的降低存在至少约56天。
21.如权利要求12-20中任一项所述的方法，其中CD33的细胞表面水平的降低包括个体的外周血单核细胞上的CD33的细胞表面水平的降低。
22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链可变区和含有SEQ ID NO:86的氨基酸序列的轻链可变区。
23.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述抗体具有IgG2同种型。
24.如权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述抗体包含含有SEQ ID NO:180或SEQ ID NO:201的氨基酸序列的重链和含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的轻链。
25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体在血浆中的终末半衰期为约4天、约5天、约6天、约7天、约8天、约9天、约10天、约11天或约12天。
26.如权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体在血浆中的终末半衰期为约10天。
27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述疾病或损伤选自由痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默病、血管性痴呆、混合性痴呆、tau蛋白病、感染和癌症组成的组。
28.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述疾病或损伤是阿尔茨海默病。
29.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述个体被诊断为患有阿尔茨海默病或具有可能的阿尔茨海默病性痴呆的临床诊断。
30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述个体具有约16分至约28分的简易精神状态检查表(MMSE)评分。
31.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述个体具有约0.5、约1.0或约2.0的临床痴呆评定量表整体评分(CDR-GS)。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述个体具有阳性淀粉样蛋白-PET扫描。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中所述个体正在服用稳定剂量的用于阿尔茨海默病的胆碱酯酶抑制剂和/或美金刚疗法。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述个体不携带rs12459419T等位基因的两个拷贝。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中所述疾病或损伤是阿尔茨海默病，并且其中使用选自由以下组成的组的一种或多种临床评估来评估对阿尔茨海默病的治疗和/或对阿尔茨海默病的进展的延缓：简易精神状态检查表(MMSE)、可重复的成套心理状态测量表(RBANS)、临床痴呆评定量表(CDR)评估、淀粉样脑正电子发射断层显像(PET)、转位蛋白(TSPO)-PET成像和它们的任何组合。
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