CN115060908A - 检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β‑IgG抗体的试剂盒，由抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β(F‑actin‑capping protein subunit beta)、固相载体、标记抗体、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、底物显色剂、洗涤液、标准品、阳性质控品、阴性质控品组成。通过特定试剂盒检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β‑IgG自身抗体。本发明首次鉴定了针对靶抗原丝状肌动蛋白成帽蛋白β的自身抗体，并针对该自身抗体提供了检测试剂盒。本发明提供的试剂盒，为国内外针对与丝状肌动蛋白成帽蛋白β和丝状肌动蛋白成帽蛋白β‑IgG自身抗体有关的自身免疫性肾病综合征的分子机制研究和临床诊疗提供依据。

Description

检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的试剂盒
本申请是申请号为202110742935.7，申请日为2021年7月1日，发明名称为检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的试剂盒的分案申请。
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，涉及检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG 抗体的试剂盒，是一种用于检测患者样本中的抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG 抗体的试剂盒。
背景技术
自身免疫性疾病是由人体对正常存在于体内的物质和组织的异常免疫反应引起的疾病。可能仅限于某些器官，涉及不同位置的特定组织，也可能是全身性的。自身免疫性疾病的治疗通常涉及免疫抑制，即降低免疫反应的药物。
原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)的特征是患者水肿，尿液中蛋白质增加，血液中蛋白质减少，血液中脂肪增加(Roth KS,Amaker BH, Chan JC:Nephrotic syndrome:pathogenesis and management.Pediatr Rev(2002) 23(7):237-48)。90％以上儿童原发性肾病综合征的病理类型是以足细胞损伤为主要特征的微小病变或局灶节段性肾小球硬化。足细胞的炎症会增加对蛋白质的渗透性，导致分泌的蛋白质增加。当尿液中排泄的蛋白质量超过肝脏的补偿能力时，血液中检测到的蛋白质就更少了，特别是白蛋白，而白蛋白占了循环蛋白的大部分。随着血液中蛋白质的减少，血液中的渗透压会降低。由于组织中的渗透压保持不变，因此会导致水肿。肾上腺分泌醛固酮会加剧这种情况，它是根据循环血液的减少而分泌的，导致钠和水滞留。高脂血症被认为是肝脏活动增加的结果(Brinkkoetter PT,Ising C,Benzing T:The role of the podocyte in albuminfiltration.Nat Rev Nephrol(2013)9(6):328-36)。已有证据表明，儿童绝大多数激素敏感型肾病综合征和2/3的激素耐药型肾病综合征的发病与自身免疫功能紊乱有关(Li J,Wang L,Wan L,Lin T,Zhao W,Cui H,et al:Mutational spectrum and novel candidategenes in Chinese children with sporadic steroid-resistant nephroticsyndrome.Pediatr Res(2019)85(6):816-21)。我们在自身免疫性肾病综合征患者中筛查到针对丝状肌动蛋白成帽蛋白β蛋白 (F-actin-capping protein subunit beta)的自身抗体。丝状肌动蛋白成帽蛋白β是F-肌动蛋白加帽蛋白家族的成员。该基因编码倒钩末端肌动蛋白结合蛋白的β亚基。该蛋白质通过覆盖生长的肌动蛋白丝的带刺末端来调节肌动蛋白丝的生长。在肌肉中，丝状肌动蛋白成帽蛋白β与肌动蛋白的相互作用在肌原纤维生成过程中至关重要(Pyle WG,Hart MC,Cooper JA,Sumandea MP,de Tombe PP,SolaroRJ.Actin capping protein:an essential element in protein kinase signaling tothe myofilaments.Circulation Research.(2002)90(12):1299–306)。
但目前丝状肌动蛋白成帽蛋白β和抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β的自身抗体在泌尿系统疾病，特别是在肾病综合征中未有报道。另外现有的技术中，没有涉及基于靶点丝状肌动蛋白成帽蛋白β或其自身抗体作为一种血清学标志物在自身免疫性肾病综合征中的应用。通过检测血清抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体鉴别出自身免疫性肾病综合征的研究是空白的。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的试剂盒，是一种基于靶点丝状肌动蛋白成帽蛋白β及其相应自身抗体的检测试剂盒。所述试剂盒可通过与抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β(特别根据序列识别号SEQ ID NO.1所示)的抗原抗体反应对来自组织(肾活检组织)或体液(特别是血液、血浆、血清)中的自身抗体进行检测。
本发明涉及用于检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β自身抗体的检测试剂盒，该试剂盒包含抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β、固相载体、标记抗体、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、底物显色剂、洗涤液、终止液、标准品、阳性质控品、阴性质控品。
根据本发明，所述抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β可表达于细菌如大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞中。
根据本发明，抗原蛋白可以是融合蛋白，使用具有某些生物学或物理功能的标签，这些标签的存在有利于抗原蛋白纯化，固定，沉淀或鉴定本发明多肽的其他序列基序或多肽。在一个更优选的实施方案中，标签是能够特异性结合配体的序列或结构域，例如，选自：GST标签、c-Myc标签、His标签、Flag 标签或生物素标签。
根据本发明，所述抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β固定于固相载体上，优选的固相载体包括：硝酸纤维素膜、磁珠、酶标微孔板。
本发明一个实施方案中，所述标准品和阳性质控品，标准品和阳性质控品为重组人抗标签肽IgG或其片段、或从病人血清中提取抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗体作为阳性质控品和标准品，健康体检者血清为阴性质控品。
根据本发明，所述抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β经Ni柱亲和层析、分子筛层析、离子交换层析、疏水柱纯化。
本文中的样品是待检的体液或组织的样品。优选的测试样品包括血液、血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液、痰和胸腔积液。此外，在分离或纯化程序之后，例如将全血分离成血清或血浆成分，将更容易分析某些测试样品。因此，在本发明的优选实施方案中，样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊液样品、唾液样品和尿液样品或任何上述样品的提取物。优选地，样品是血液样品，更优选血清样品或血浆样品。
所述检测试剂盒还包括底物显色剂、抗原稀释液、样品稀释缓冲液、抗体稀释液、洗涤液和终止液。所述底物显色剂为TMB、BCIP、AMPPD、4-MUP；所述抗原稀释液为pH7.4 1xPBS、163mM NaCL、1％TritonX-100；所述样品稀释缓冲液为pH7.4含有10％BSA的0.01M PBS缓冲液；所述抗体稀释液为取1MD glucose(19.82g)、2％甘油(2ml)加入含0.2％Tween20的0.01M PBS 至100ml；所述洗涤液为：1x PBS pH7.4、NaCL 163mM、1％TritonX-100、甘油10％；所述终止液为：2M硫酸。
本发明所述的抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β固定方法为直接包被法： 1.抗原通过物理吸附方式或非共价键结合到硝酸纤维素膜或聚苯乙烯微孔板上；2.带有羧基功能团的磁微粒带与蛋白质氨基结合，抗原通过化学偶联方式结合在磁微粒上。
本发明所选的标记抗体可以是辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase， HRP)标记抗人IgG、吖啶酯标记抗人IgG、生物素标记抗人IgG。
本发明采用基因重组原核表达方法成功表达并纯化出重组蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β，以此作为试剂盒中抗原蛋白，研发出一套适合于检测自身免疫性肾病综合征患者抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的试剂盒。包括是一种定性或定量分析检测人血清中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的检测试剂盒。
一种检测血清中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体试剂盒的原理采用抗原吸附于固相载体作为包被抗原，然后加入阳性质控品或标准品或待检血清样本进行孵育，再加入标记二抗反应后，形成包被抗原丝状肌动蛋白成帽蛋白β-待检血清抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体-标记抗人IgG抗体三元复合物，最后利用光显色法、化学发光法、荧光发光法来检测光信号，以达到定性或定量分析人血清中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的目的。
所述抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β的序列如SEQ ID NO.1所示：
MSDQQLDCALDLMRRLPPQQIEKNLSDLIDLVPSLCEDLLSSVDQPLKI ARDKVVGKDYLLCDYNRDGDSYRSPWSNKYDPPLEDGAMPSARLRKLEV EANNAFDQYRDLYFEGGVSSVYLWDLDHGFAGVILIKKAGDGSKKIKGCW DSIHVVEVQEKSSGRTAHYKLTSTVMLWLQTNKSGSGTMNLGGSLTRQME KDETVSDCSPHIANIGRLVEDENKIRSTLNEIYFGKTKDIVNGLRSIDAIPDNQ KFKQLQRELSQVLTQRQIYIQPDN。
具体的创新可以总结如下：
(1)本发明首次鉴定了针对抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β的自身抗体，并针对该自身抗体发明了检测试剂盒。
(2)目前，国内外尚无检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β自身抗体水平的试剂盒，该发明填补了国内外针对抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β自身抗体的检测试剂盒的空白。
(3)化学发光方法的优势在于测定的简单性。采用磁分离系统，吖啶酯标记化学发光技术的优点是，吖啶酯可以在不存在催化剂的情况下用作发光剂，在含有过氧化氢的稀碱溶液中也能发光；分子量小，避免屏蔽抗体结合位点，提高系统整体灵敏度，反应迅速；背景低，信噪比高，是一种有效的化学发光标记。
(4)固相膜免疫法大大缩短了检测时间，能够达到快速检测的效果。检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的试剂盒引入生物素-亲和素放大系统，大大提高了检测灵敏度。
附图说明
图1：足细胞上的丝状肌动蛋白成帽蛋白β蛋白是自身免疫性肾病综合征病人体内自身抗体针对的靶抗原之一。图1A:健康人血清的二维电泳蛋白点；图1B:自身免疫性肾病综合征患者血清的二维电泳蛋白点；图1C:靶抗原丝状肌动蛋白成帽蛋白β蛋白的质谱鉴定。
图2：重组蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β的SDS-PAGE鉴定图。
图3：固相膜免疫试剂盒检测自身免疫性肾病综合征患者血清中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体。
图4：用于检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的化学发光试剂盒的检测原理示意图。
图5：抗原蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β的包被羧基磁微粒示意图。
图6：各类肾病病人中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的检测情况，其中PNS：自身免疫性肾病综合征，HSP：过敏性紫癜，HSPN：紫癜性肾炎， IgAN：IgA肾病，NC：健康儿童。
图7：ROC曲线评估抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗体作为自身免疫性肾病综合征鉴别诊断的血清学标志物的应用价值。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例，对本发明作进一步说明。以下实施例仅用于阐述本发明而非用于限制本发明的范围。
实施例1足细胞上的丝状肌动蛋白成帽蛋白β是自身免疫性肾病综合征病人体内自身抗体针对的靶抗原之一。本发明通过前期大量临床和分子机制研究，首次发现肾病综合征患者血清IgG水平较高，并证实足细胞上的丝状肌动蛋白成帽蛋白β是自身免疫性肾病综合征病人体内自身抗体针对的靶抗原。因此检测血清中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的存在及其定量水平有助于自身免疫性肾病综合征的早期鉴别、尤其对有相关症状的患者进行筛查是有利的。
具体实施如下(1)肾小球足细胞总蛋白的提取：培养足细胞株(MPC5)，用PBS洗涤2-3次，然后用聚焦超声仪(Covaris S220,Gene)在含有30mm Tris-HCl、8m尿素、4％CHAPS和蛋白酶抑制剂(#ab65621；Abcam，1：200 稀释)的裂解缓冲液中冰上进行充分裂解，然后将样本置于离心机，12000g， 4℃，离心30min。收集上清，即为收集到的肾小球足细胞总蛋白。利用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定收集到的肾小球足细胞总蛋白浓度。(2)二维电泳：提取肾小球足细胞总蛋白进行二维电泳后转到硝酸纤维素膜上，分别用健康人和自身免疫性肾病综合征病人的血清作为一抗进行孵育，之后加上二抗进行显影，见图1A，1B。(3)基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱分析：将步骤(2) 显影后进行阳性点的差异分析，选取二维电泳胶上肾病综合征病人强阳性，而健康人阴性或者弱阳性的蛋白点，从凝胶上剪下选中的蛋白点，将干燥后的凝胶用胰蛋白酶(0.1μg/μl)进行消化，然后向反应混合物中加入10μl的25mM碳酸氢铵，37℃孵育过夜，然后用三氟乙酸(0.1％)从凝胶中提取肽。用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS)质谱仪对提取的肽进行分析，得到肽质量图谱，鉴定为丝状肌动蛋白成帽蛋白β蛋白，见图1C。
实施例2丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗原表达与纯化
利用基因工程的方法以编码丝状肌动蛋白成帽蛋白β蛋白的基因为模板，进行PCR扩增，然后构建表达载体进行蛋白表达。本发明表达的抗原蛋白上含有His标签的标签肽。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析、离子亲和层析法、疏水柱、分子筛等进行纯化，最后利用SDS-PAGE鉴定重组蛋白丝状肌动蛋白成帽蛋白β的分子量，结果见图2。
实施例3本发明采用正交试验设计对试剂盒反应条件的优化
根据抗原抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β包被浓度(50μg/ml、90μg/ml、 120μg/ml、150μg/ml四个包被浓度)、各反应时间(30min、45min)和温度(25℃、 35℃)、酶标二抗最佳稀释度(1:100、1:500、1:1000、1:1500四个稀释度)等4 个因素选择正交表，每个因素按2水平重复测定标准阳性血清和标准阴性血清。选择阳性血清的最高发光值(P)和阴性血清的最低发光值(N)的比值(P/N)。重复测定的平均P/N值，经统计处理确定最佳包被条件及二抗的最佳稀释度进行正交优化条件，显著提高了标准阳性血清的阳性检出率。通过正交设计我们得到了本试剂盒最佳抗原包被浓度为90μg/ml、最佳抗原抗体反应时间30min及最佳吖啶酯标记抗人IgG最佳工作稀释度为1：1000。
实施例4抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体固相膜免疫检测试剂盒
4.1用于检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的固相膜免疫试剂盒的组成：
表1
Figure BDA0003636984430000091
4.2用于检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG的固相膜免疫试剂盒的检测步骤如下：
(1)包被、封闭：将8μl浓度为90ug/ml的丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗原直接点于硝酸纤维素膜上置37℃孵育箱中干燥30min，将NC膜置于检测板中，加入200μl 5％BSA于37℃温盒中封闭30min，弃去封闭液后用洗涤液洗2次；
(2)抗原孵育：向检测板内加入10μl用稀释液稀释的抗体标准品或待检血清，同时做阴性对照、阳性对照，室温孵育30min，每个样品设置3个平行孔；
(3)二抗孵育：弃去检测板内液体，洗涤液洗5次×1min，加入20μl 1:500 生物素标记抗人IgG抗体，室温孵育30min；
(4)显色：弃去检测板内液体，洗涤液洗5次×1min，加500μl碱性磷酸酶-链霉亲和素，室温孵育20min，弃去检测板内液体，洗涤液洗5次×1min，然后加入BCIP显色液，室温反应20min，用流水冲洗检测板，终止酶反应；
(5)取出测试NC膜条用吹风机吹干膜条，用比色卡肉眼定性判定，出现明显棕色斑点者为阳性见图3，或将膜条置于显影仪上扫描，显影仪自带的分析软件以参考标准品浓度作为纵坐标、仪器读取的灰度值作为横坐标，绘制标准曲线对血清中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG水平进行半定量分析。
实施例5抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体化学发光法检测试剂盒
5.1抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体化学发光检测试剂盒，包括以下组成部分：
(1)吖啶酯标记的抗人IgG；
(2)与丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗原偶联的羧基磁珠；
(3)化学发光预激发液A和化学发光激发液B；
(4)抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体系列标准溶液，标准浓度：0 μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、20.0μg/ml，缓冲液为含0.5-的 Tris-HCL 5.0％BSA和0.1-0.5％PC300；
(5)清洁溶液，特别是含有0.15mol/L NaCL和0.05％Tween-20的pH 7.2、25mmol/LTris-HCL溶液。
5.2磁珠偶联抗原的制备(图4)
(1)取1mg羧基磁性颗粒于0.5mL离心管中，加入一定量的0.1mol/L MES缓冲液，涡旋混匀，置于磁力架上，静置5min，使磁性颗粒从液体，并丢弃上清液。洗涤3次，然后加入一定量的MES(pH 5.0)缓冲液并涡旋；
(2)加入18μL(18μg)丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗原，涡旋，旋转反应管，室温孵育30min；
(3)加入10μL 10mg/mL偶联试剂EDC涡旋，旋转反应管，室温孵育2 h；
(4)去除上清液，加入200μL洗涤缓冲液(TBS+0.05％Tween-20)洗涤 3次；
(5)用含1％BSA的缓冲液封闭，重复4次，每次10min。磁性颗粒悬浮液储存在2-8℃。
5.3吖啶酯标记抗体的制备
(1)将一定量的抗人IgG抗体放入透析袋中，将透析袋放入不少于1L的标记缓冲液进行透析，期间至少更换3次缓冲液，最后一次透析过夜，标记缓冲液为Na2CO3-NaHCO3缓冲液，pH为10.1，浓度为0.1mol/L；
(2)称取1.7mg吖啶酯NSP-DMAE-NHS溶于447μL无水二甲基甲酰胺 DMF中，形成6.5mmol/L NSP-DMAE-NHS DMF溶液；
(3)将透析后的抗体溶液置于500μL离心管中，加入一定量的6.5mmol/L NSP-DMAE-NHS DMF溶液，吖啶酯与抗体的摩尔比为7.4:1，加入200μL标记缓冲液、室温反应45min，加入10μL赖氨酸10μL，继续反应15min终止标记反应；
(4)通过Sephadex G-50柱(1×25cm)将标记物NSP-DMAE-NHS-Ab 与游离的NSP-DMAE-NHS分离，用含纯化缓冲液pH为6.3和浓度为0.1 mol/L；
(5)分离过程中，用色谱仪检测蛋白质峰，分别测定流出液的化学发光强度和430nm处的吸光度；
(6)收集高光度、高吸光度的洗脱液，加入1％BSA(体积)，冰上保存。
5.4样品制备:将样本按一定比例稀释
5.5用于检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的化学发光法试剂盒的检测步骤如下：
(1)100μL待测样品、150μL偶联磁粉悬液、150μL吖啶酯标记二抗依次加入反应管中，摇匀混合，37℃保温15min；
(2)隔离洗涤5次；
(3)充分振摇洗涤后的反应容器，使磁性颗粒均匀分散；
(4)加入100μL化学发光预激发液A，随后加入100μL化学发光激发液B，测定其相对发光强度。样品中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的含量与其发光强度成正比(图5)。
实施例6检测试剂盒应用
6.1受试者纳入：从2018年6月到2020年6月诊断出各类肾病的患者，包括肾病综合征患者(n＝466)，过敏性紫癜患者(n＝168)，紫癜性肾炎患者 (n＝137)、IgA肾病患者(n＝133)以及健康人(n＝195)。血清样本取自各类肾病患者和健康对照组。所有受试者在没有进行免疫抑制治疗之前进行第一次血清样本采集。
6.2各类肾病病人中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗体的检测情况。利用本发明试剂盒检测各类肾病的患者血清中抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体水平，检测结果采用ROC曲线进行分析，以判断该抗体在诊断肾病综合征中的价值。与对照组相比，患者队列中针对丝状肌动蛋白成帽蛋白β的Ab的患病率显著更高(图6)。ROC曲线评估抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体作为PNS患者诊断的血清学标志物的应用价值。当诊断界值为大于57.3时，抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β自身抗体诊断自身抗体检测肾病综合征的敏感性为 67.0％，特异性为73.5％(图7)。结果显示抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体是用于自身免疫性肾病综合征鉴别诊断的一种很好的血清学标志物。
SEQUENCE LISTING
<110> 浙江大学
<120> 检测抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体的试剂盒
<130> 2022.5.10
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 276
<212> PRT
<213> 人工序列（Unknow）
<400> 1
Met Ser Asp Gln Gln Leu Asp Cys Ala Leu Asp Leu Met Arg Arg Leu
1 5 10 15
Pro Pro Gln Gln Ile Glu Lys Asn Leu Ser Asp Leu Ile Asp Leu Val
20 25 30
Pro Ser Leu Cys Glu Asp Leu Leu Ser Ser Val Asp Gln Pro Leu Lys
35 40 45
Ile Ala Arg Asp Lys Val Val Gly Lys Asp Tyr Leu Leu Cys Asp Tyr
50 55 60
Asn Arg Asp Gly Asp Ser Tyr Arg Ser Pro Trp Ser Asn Lys Tyr Asp
65 70 75 80
Pro Pro Leu Glu Asp Gly Ala Met Pro Ser Ala Arg Leu Arg Lys Leu
85 90 95
Glu Val Glu Ala Asn Asn Ala Phe Asp Gln Tyr Arg Asp Leu Tyr Phe
100 105 110
Glu Gly Gly Val Ser Ser Val Tyr Leu Trp Asp Leu Asp His Gly Phe
115 120 125
Ala Gly Val Ile Leu Ile Lys Lys Ala Gly Asp Gly Ser Lys Lys Ile
130 135 140
Lys Gly Cys Trp Asp Ser Ile His Val Val Glu Val Gln Glu Lys Ser
145 150 155 160
Ser Gly Arg Thr Ala His Tyr Lys Leu Thr Ser Thr Val Met Leu Trp
165 170 175
Leu Gln Thr Asn Lys Ser Gly Ser Gly Thr Met Asn Leu Gly Gly Ser
180 185 190
Leu Thr Arg Gln Met Glu Lys Asp Glu Thr Val Ser Asp Cys Ser Pro
195 200 205
His Ile Ala Asn Ile Gly Arg Leu Val Glu Asp Glu Asn Lys Ile Arg
210 215 220
Ser Thr Leu Asn Glu Ile Tyr Phe Gly Lys Thr Lys Asp Ile Val Asn
225 230 235 240
Gly Leu Arg Ser Ile Asp Ala Ile Pro Asp Asn Gln Lys Phe Lys Gln
245 250 255
Leu Gln Arg Glu Leu Ser Gln Val Leu Thr Gln Arg Gln Ile Tyr Ile
260 265 270
Gln Pro Asp Asn
275

Claims (9)

1.能够与从所述患者获得的生物样品接触形成任何抗原抗体复合物的丝状肌动蛋白成帽蛋白β(F-actin-capping protein subunit beta)多肽或其抗体结合片段在制备肾病综合征检测试剂或试剂盒方面的用途；其中，所述抗原抗体复合物包括抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体(抗F-actin-capping protein subunit beta-IgG抗体)复合物。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述肾病综合征是自身免疫性肾病综合征。
3.根据权利要求2所述的用途，其中所述肾病综合征是儿童自身免疫性肾病综合征。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述丝状肌动蛋白成帽蛋白β抗体结合片段序列如SEQ ID NO.1所示。
5.根据权利要求1所述的用途，其中所述生物样品是血清。
6.根据权利要求1所述的用途，其中所述生物样品是没有进行免疫治疗之前患者的生物样品。
7.能够与从所述患者获得的生物样品接触形成任何抗原抗体复合物的丝状肌动蛋白成帽蛋白β(F-actin-capping protein subunit beta)多肽或抗体结合片段在制备用于相对于紫癜性肾炎、过敏性紫癜、IgA肾病特异性检测肾病综合征的试剂或试剂盒方面的用途；其中，所述抗原抗体复合物包括抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体(抗F-actin-capping protein subunit beta-IgG抗体)复合物。
8.一种用于诊断肾病综合征或者相对于紫癜性肾炎、过敏性紫癜、IgA肾病特异性检测肾病综合征的试剂，包括：丝状肌动蛋白成帽蛋白β(F-actin-capping protein subunitbeta)多肽或其抗体结合片段，其能够与从所述患者获得的生物样品接触形成任何抗原抗体复合物；其中，所述抗原抗体复合物包括抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体(抗F-actin-capping protein subunit beta-IgG抗体)复合物。
9.一种用于诊断肾病综合征或者相对于紫癜性肾炎、过敏性紫癜、IgA肾病特异性检测肾病综合征的试剂盒，包括：丝状肌动蛋白成帽蛋白β(F-actin-capping protein subunitbeta)多肽或其抗体结合片段，其能够与从所述患者获得的生物样品接触形成任何抗原抗体复合物；其中，所述抗原抗体复合物包括抗丝状肌动蛋白成帽蛋白β-IgG抗体(抗F-actin-capping protein subunit beta-IgG抗体)复合物。
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