CN115043942A - Ror1结合蛋白及其用途 - Google Patents

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CN115043942A CN202110254676.3A CN202110254676A CN115043942A CN 115043942 A CN115043942 A CN 115043942A CN 202110254676 A CN202110254676 A CN 202110254676A CN 115043942 A CN115043942 A CN 115043942A
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田海军
陈扬徳
张盈华
朱志强
吴文慧
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Konasi Pharmaceutical Co ltd
Sichuan Kelun Biotech Biopharmaceutical Co Ltd
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Abstract

本发明涉及疾病治疗领域，具体而言，本发明涉及抗ROR1的抗体或其抗原结合片段，编码它们的核酸分子，制备它们的方法。本发明的抗ROR1抗体或其抗原结合片段对ROR1具有高特异性和高亲和力，能够有效结合ROR1并介导杀伤ROR1表达细胞。因此，本发明进一步涉及包含所述抗体或其抗原结合片段的药物组合物，以及其在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗肿瘤。

Description

ROR1结合蛋白及其用途
技术领域
本发明属于治疗性单克隆抗体领域，更具体地，本发明涉及一种针对ROR1的抗体；还涉及所述抗体在治疗疾病中的用途。
技术背景
受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase,RTKs)是作用于细胞因子、生长因子、激素和其他信号分子受体的一种多基团跨膜蛋白，在多种细胞过程中起重要作用，包括生长、分化、血管生成以及多种癌症的发展进程。受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(receptortyrosine kinase-like orphan receptor 1,ROR1)是受体RTKs家族成员之一，其与生长因子受体的酪氨酸激酶结构域具有很高的同源性,低表达于胚胎发育过程中,而高表达于多种实体和血液恶性肿瘤中，包括各类白血病、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、肺腺癌等。因此，ROR1是一种具有广谱抗癌潜力的新药靶点。
近几年，靶向ROR1的基因工程抗体都已经被陆续的开发用于肿瘤免疫治疗的研究中，包括单链片段可变抗体(single-chain fragment variables,scFvs)、嵌合抗体(chimeric antibody)、Fab类抗体、抗体药物偶联物(antibody-drug conjugate,ADC)、嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)和双特异性抗体(bispecific antibody,BiAb)等。目前，研究进展较快的抗ROR1单抗为Oncternal Therapeutics公司的cirmtuzumab，其临床数据具有良好的抗癌效果，可以较好的抑制慢性白血病肿瘤细胞的增殖抑制、迁移和存活。
现暂无靶向ROR1抗体药物上市，因此，发展具有更高的特异性、更低的毒副作用、更优的临床药效、更方便给药方式的的抗靶向ROR1抗体是迫切而必要的，这将给患者提供更多的用药选择。
发明内容
在本申请中，发明人开发了具有优良性质的鼠源抗体，其能够特异性识别/结合ROR1，而不结合ROR2。在此基础上，发明人又付出了大量的创造性劳动，对该鼠源抗体进行了深入的研究和改造，从而开发了该鼠源抗体的高亲和力嵌合抗体，具有用于预防和治疗肿瘤的潜力。
本发明的抗体
在一个方面，本发明提供了一种能够特异性结合ROR1的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，本发明提供了一种能够特异性结合ROR1胞外结构域(ECD)的抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，其中所述抗体或其抗原结合片段包含如下的互补决定区(CDRs)：
(a)SEQ ID NO：1所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：2所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(b)SEQ ID NO：3所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：4所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(c)SEQ ID NO：5所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：6所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(d)SEQ ID NO：7所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：8所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(e)SEQ ID NO：9所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：10所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(f)SEQ ID NO：11所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：12所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(g)SEQ ID NO：13所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：14所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(h)下述重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3，和/或下述轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3，其中，所述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)与(a)至(g)任一所述的重链可变区和/或轻链可变区相比，至少一个CDR含有突变，所述突变为一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换为保守置换。
在某些优选的实施方案中，所述CDR根据Kabat，IMGT，Chothia或AbM编号系统定义；优选地，所述抗体或其抗原结合片段的VH和/或VL中包括来自人或鼠的免疫球蛋白的构架区(FRs)，优选地，所述抗体或其抗原结合片段结合人ROR1。
在一些实施方案中，提供了一种能够特异性结合ROR1的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按IMGT编号系统定义：
(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:15的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:16的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:17的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:18的CDR-L1，序列为SEQID NO:19的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:20的CDR-L3；
或
(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:39的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:40的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:41的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:42的CDR-L1，序列为SEQID NO:43的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:44的CDR-L3；
或
(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:63的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:64的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:65的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:66的CDR-L1，序列为SEQID NO:67的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:68的CDR-L3；
或
(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:87的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:88的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:89的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:90的CDR-L1，序列为SEQID NO:91的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:92的CDR-L3；
或
(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:111的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:112的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:113的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:114的CDR-L1，序列为SEQID NO:115的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:116的CDR-L3；
或
(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:135的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:136的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:137的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:138的CDR-L1，序列为SEQID NO:139的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:140的CDR-L3；
或
(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:159的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:160的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:161的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:162的CDR-L1，序列为SEQID NO:163的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:164的CDR-L3。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按AbM编号系统定义：
(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:21的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:22的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:23的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:24的CDR-L1，序列为SEQID NO:25的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:26的CDR-L3；
或
(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:45的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:46的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:47的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:48的CDR-L1，序列为SEQID NO:49的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:50的CDR-L3；
或
(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:69的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:70的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:71的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:72的CDR-L1，序列为SEQID NO:73的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:74的CDR-L3；
或
(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:93的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:94的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:95的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:96的CDR-L1，序列为SEQID NO:97的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:98的CDR-L3；
或
(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:117的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:118的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:119的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:120的CDR-L1，序列为SEQID NO:121的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:122的CDR-L3；
或
(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:141的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:142的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:143的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:144的CDR-L1，序列为SEQID NO:145的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:146的CDR-L3；
或
(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:165的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:166的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:167的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:168的CDR-L1，序列为SEQID NO:169的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:170的CDR-L3。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按Kabat编号系统定义：
(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:27的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:28的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:29的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:30的CDR-L1，序列为SEQID NO:31的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:32的CDR-L3；
或
(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:51的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:52的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:53的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:54的CDR-L1，序列为SEQID NO:55的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:56的CDR-L3；
或
(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:75的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:76的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:77的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:78的CDR-L1，序列为SEQID NO:79的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:80的CDR-L3；
或
(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:99的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:100的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:101的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:102的CDR-L1，序列为SEQID NO:103的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:104的CDR-L3；
或
(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:123的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:124的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:125的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:126的CDR-L1，序列为SEQID NO:127的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:128的CDR-L3；
或
(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:147的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:148的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:149的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:150的CDR-L1，序列为SEQID NO:151的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:152的CDR-L3；
或
(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:171的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:172的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:173的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:174的CDR-L1，序列为SEQID NO:175的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:176的CDR-L3。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按Chothia编号系统定义：
(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:33的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:34的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:35的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:36的CDR-L1，序列为SEQID NO:37的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:38的CDR-L3；
或
(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:57的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:58的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:59的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:60的CDR-L1，序列为SEQID NO:61的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:62的CDR-L3；
或
(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:81的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:82的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:83的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:84的CDR-L1，序列为SEQID NO:85的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:86的CDR-L3；
或
(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:105的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:106的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:107的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:108的CDR-L1，序列为SEQID NO:109的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:110的CDR-L3；
或
(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:129的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:130的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:131的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:132的CDR-L1，序列为SEQID NO:133的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:134的CDR-L3；
或
(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:153的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:154的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:155的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:156的CDR-L1，序列为SEQID NO:157的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:158的CDR-L3；
或
(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:177的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:178的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:179的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:180的CDR-L1，序列为SEQID NO:181的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:182的CDR-L3。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含下述下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中，所述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)与前述IMGT、AbM、Kabat或Chothia定义下(a)至(g)任一所述的重链可变区和/或轻链可变区相比，至少一个CDR含有突变，所述突变为一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换为保守置换。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含来源于鼠免疫球蛋白的重链可变区(VH)构架区(FR)，和/或所述抗体或其抗原结合片段的VL包含来源于鼠免疫球蛋白的轻链可变区(VL)构架区(FR)。因此，在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段是鼠源的。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)重链可变区(VH)，其包含选自下列的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NOs：1、3、5、7、9、11、13任一项所示的序列；
(ii)与SEQ ID NOs：1、3、5、7、9、11、13任一项所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与SEQ ID NOs：1、3、5、7、9、11、13任一项所示的序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；
和/或
(b)轻链可变区(VL)，其包含选自下列的氨基酸序列：
(iv)SEQ ID NOs：2、4、6、8、10、12、14任一项所示的序列；
(v)与SEQ ID NOs：2、4、6、8、10、12、14任一项所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或
(vi)与SEQ ID NOs：2、4、6、8、10、12、14任一项所示的序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段具有如下的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)：SEQ ID NOs：1、3、5、7、9、11、13任一项所示的VH序列，和/或,SEQ IDNOs：2、4、6、8、10、12、14任一项所示VL的序列。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
(1)SEQ ID NO：1所示序列的VH和SEQ ID NO：2所示序列的VL；
(2)SEQ ID NO：3所示序列的VH和SEQ ID NO：4所示序列的VL；
(3)SEQ ID NO：5所示序列的VH和SEQ ID NO：6所示序列的VL；
(4)SEQ ID NO：7所示序列的VH和SEQ ID NO：8所示序列的VL；
(5)SEQ ID NO：9所示序列的VH和SEQ ID NO：10所示序列的VL；
(6)SEQ ID NO：11所示序列的VH和SEQ ID NO：12所示序列的VL；
(7)SEQ ID NO：13所示序列的VH和SEQ ID NO：14所示序列的VL。
在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)与(1)至(7)中任一组相比，重链可变区(VH)具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性；和/或，轻链可变区(VL)具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性。
在某些优选的实施方案中，所述重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)与(1)至(7)中任一组相比，重链可变区(VH)具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；和/或，轻链可变区(VL)具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换。
在以上任一方面中，本发明的抗体或其抗原结合片段可以进一步包含来源于哺乳动物(例如，鼠或人)免疫球蛋白的恒定区序列或其变体。在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含人或鼠免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；和/或，本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含人或鼠免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)。
在某些优选实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)；和/或，本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含人免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含鼠免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)；和/或，本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含鼠免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)。
在一些实施方案中，恒定区被改变，例如被突变，以修饰抗ROR1抗体分子的性质(例如改变下列中的一个或更多个特性：Fc受体结合、抗体糖基化、半胱氨酸残基的数目、效应细胞功能或补体功能)。可以通过将抗体恒定区中的至少一个氨基酸残基替换为不同残基，产生功能改变，例如，改变抗体对效应子配体(如FcR或补体C1q)的亲和力，从而改变效应子功能(例如增强)。抗体的Fc区介导几种重要的效应子功能，例如ADCC、吞噬作用、CDC等。在某些情况下，这些效应子功能对于治疗性抗体是需要的。
在某些实施方案中，抗ROR1抗体分子具有重链恒定区(Fc)，其选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE的重链恒定区；特别地选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链恒定区，更特别地选自IgG1或IgG4(例如是人IgG1或IgG4)的重链恒定区。在一些实施方案中，抗ROR1抗体分子具有轻链恒定区，其选自例如κ或λ的轻链恒定区，优选κ轻链恒定区(例如人κ轻链)。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含选自下列的重链恒定区：
(1)人IgG1重链恒定区；或
(2)人IgG4重链恒定区。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)重链恒定区(CH)，其包含选自下列的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO:197所示的序列；
(ii)与SEQ ID NO:197所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或
(iii)与SEQ ID NO:197所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列；
和/或
(b)轻链恒定区(CL)，其包含选自下列的氨基酸序列：
(iv)SEQ ID NO:198所示的序列；
(v)与SEQ ID NO:198所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列；或
(vi)与SEQ ID NO:198所示的序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中，(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中，本发明抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)和如SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体包括SEQ ID NO：1所示序列的VH和SEQID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：2所示序列的VL和SEQ IDNO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体包括SEQ ID NO：3所示序列的VH和SEQID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：4所示序列的VL和SEQ IDNO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体包括SEQ ID NO：5所示序列的VH和SEQID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：6所示序列的VL和SEQ IDNO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体包括SEQ ID NO：7所示序列的VH和SEQID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：8所示序列的VL和SEQ IDNO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体包括SEQ ID NO：9所示序列的VH和SEQID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：10所示序列的VL和SEQ IDNO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体包括SEQ ID NO：11所示序列的VH和SEQID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：12所示序列的VL和SEQ IDNO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体包括SEQ ID NO：13所示序列的VH和SEQID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：14所示序列的VL和SEQ IDNO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体是嵌合抗体或人源化抗体。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段选自ScFv、Fab、Fab’、(Fab’)2、Fv片段、二硫键连接的Fv(dsFv)、双抗体(diabody)、双特异性抗体、和多特异性抗体。
在某些实施方案中，本发明的抗体分子或其抗原结合片段可以显示出以下性质中的至少一种：
(a)以小于约100nM，例如小于约50nM,40nM,30nM,20nM,10nM,1nM,0.1nM或更低的KD结合ROR1(例如，人ROR1)；例如所述KD通过生物薄膜干涉技术(BLI)(如ForteBio
Figure BDA0002967576420000151
)测得；
(b)以小于约500nM，例如小于约100nM、10nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM或更小的EC50结合ROR1(例如，人ROR1)；例如所述EC50通过流式细胞技术或竞争ELISA技术测得；
(c)所述抗体或其抗原结合片段不结合ROR2(如人ROR2)。
在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段具有ADCC活性。
在某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段具有CDC活性。
在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段具有ADCC和CDC活性。
在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段具有增强的ADCC和/或CDC活性。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段具备以下生物学功能中的至少一项：
(a)诱导肿瘤细胞凋亡；
(b)抑制肿瘤细胞生长、增殖、分化、和/或血管生成；
(c)诱发和/或增加补体依赖性细胞毒活性；
(d)诱发和/或增加抗体依赖性细胞毒活性；
(e)抑制ROR1的表达和活化；
(f)抑制ROR1介导的细胞信号传导；
(g)预防和/或治疗ROR1介导的疾病/病症；或
(h)(a)-(g)的任意组合。
在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段具备上述生物学功能的任意组合。
衍生的抗体
本发明的抗体或其抗原结合片段可进行衍生化，例如被连接至另一个分子(例如另一个多肽或蛋白)。通常，抗体或其抗原结合片段的衍生化(例如，标记)不会不利影响其对ROR1(特别是人ROR1)的结合。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段还意欲包括此类衍生化的形式。例如，可以将本发明的抗体或其抗原结合片段功能性连接(通过化学偶合、基因融合、非共价连接或其它方式)于一个或多个其它分子基团，例如另一个抗体(例如，形成双特异性抗体)，检测试剂，药用试剂，和/或能够介导抗体或抗原结合片段与另一个分子结合的蛋白或多肽(例如，抗生物素蛋白或多组氨酸标签)。
一种类型的衍生化抗体(例如，双特异性抗体)是通过交叉连接2个或多个抗体(属于同一类型或不同类型)而产生的。获得双特异性抗体的方法是本领域公知的，其实例包括但不限于，化学交联法、细胞工程法(杂交杂交瘤法)或基因工程法。
另一种类型的衍生化抗体是标记的抗体。例如，可以将本发明的抗体或其抗原结合片段连接至可检测的标记。本发明所述的可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。这类标记是本领域熟知的，其实例包括但不限于，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶，等)、放射性核素(例如，3H、125I、35S、14C或32P)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC)、藻红蛋白(PE)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如Cy7、Alexa 750))、吖啶酯类化合物、磁珠(例如，
Figure BDA0002967576420000171
)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如，链霉亲和素)的生物素。教导该标记物的使用的专利包括，但不限于，美国专利3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；及4,366,241(全部通过引用并入本文)。如上所述的可检测的标记可通过本领域已知的方法检测。例如，放射性标记可使用摄影胶片或闪烁计算器检测，荧光标记物可使用光检测器检测，以检测发射的光。酶标记物一般通过给酶提供底物及检测通过酶对底物的作用产生的反应产物来检测，及测热标记物通过简单可视化着色标记物来检测。在某些实施方案中，此类标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。在某些实施方案中，可通过不同长度的接头(linker)将如上所述的可检测的标记连接至本发明的抗体或其抗原结合片段，以降低潜在的位阻。
此外，本发明的抗体或其抗原结合片段还可以用化学基团进行衍生，例如聚乙二醇(PEG)，甲基或乙基，或者糖基。这些基团可用于改善抗体的生物学特性，例如增加血清半衰期。
作为抗体的衍生物之一，本发明提供一种偶联物，其包括本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段以及偶联部分，所述偶联部分选自：可检测的标记、放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质、酶、聚乙二醇(PEG)、核素、核酸、小分子毒素，具有结合活性多肽、蛋白、受体、配体，以及其它抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡或坏死的活性物质。
作为抗体的衍生物之一，本发明提供一种嵌合抗原受体，其包括所述单克隆抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中，所述嵌合抗原受体包括本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段(例如，ScFv)、跨膜结构域、以及一个或多个细胞内T细胞信号结构域。本发明同时提供含有或表达所述嵌合抗原受体的宿主细胞，如免疫细胞(例如T淋巴细胞，NK细胞)。
作为抗体的衍生物之一，本发明提供一种多特异性抗体，所述抗体由第一抗体或其片段与其他抗体或其片段或抗体类似物通过偶联形成，各抗体或其片段或抗体类似物保持原结合特异性，所述第一抗体或其片段为本发明所述的抗体或其抗原结合片段；优选的，所述多特异性抗体为双特异性抗体或三特异性抗体或四特异性抗体。
抗体的制备
本发明的抗体可以本领域已知的各种方法来制备，例如通过基因工程重组技术来获得。例如，通过化学合成或PCR扩增获得编码本发明抗体的重链和轻链基因的DNA分子。将所得DNA分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞。然后，在特定条件下培养转染后的宿主细胞，并表达本发明的抗体。
本发明的抗原结合片段可以通过水解完整的抗体分子获得(参见Morimoto etal.,J.Biochem.Biophys.Methods 24:107-117(1992)and Brennan et al.,Science 229:81(1985))。另外，这些抗原结合片段也可以直接由重组宿主细胞产生(reviewed inHudson,Curr.Opin.Immunol.11:548-557(1999)；Little et al.,Immunol.Today,21:364-370(2000))。比如，Fab’片段可以直接从宿主细胞中获得；可以将Fab’片段化学偶联形成F(ab’)2片段(Carter et al.,Bio/Technology,10:163-167(1992))。另外，Fv、Fab或F(ab’)2片段也可以直接从重组宿主细胞培养液中直接分离得到。本领域的普通技术人员完全知晓制备这些抗原结合片段的其它技术。
因此，在另一个方面，本发明提供了一种分离的核酸分子，其包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段，或其重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸序列。根据本领域的密码子简并性，在某些实施方案中，所述核苷酸序列是可以根据密码子简并性进行替换的。在某些实施方案中，所述核苷酸序列是密码子最优化的。
在某些优选的实施方案中，本发明提供了一种的分离的核酸分子，其包含编码抗体重链可变区的核酸分子，和/或编码抗体轻链可变区的核酸分子，其中，所述编码抗体重链可变区的核酸分子具有选自下列的序列：(a).如SEQ ID NOs:183、185、187、189、191、193、195任一所示的核苷酸序列，或(b).与(a)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(a)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或(c).与(a)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列；所述编码抗体轻链可变区的核酸分子具有选自下列的序列：(d).如SEQ ID NOs:184、186、188、190、192、194、196任一所示的核苷酸序列，或(e).与(d)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(d)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或(f)与(d)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列。
在某些优选的实施方案中，所述编码抗体重链可变区的核酸分子具有如SEQ IDNOs:183、185、187、189、191、193、195任一所示的核苷酸序列，以及所述编码抗体轻链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NOs:184、186、188、190、192、194、196任一所示的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，本发明的分离的核酸分子包含如SEQ ID NOs:183、185、187、189、191、193、195任一所示的编码抗体重链可变区的核酸分子，和/或如SEQ ID NOs:184、186、188、190、192、194、196任一所示的编码抗体轻链可变区的核酸分子。
在某些优选的实施方案中，本发明提供了一种的分离的核酸分子。其包含编码抗体重链恒定区的核酸分子，和/或编码抗体轻链恒定区的核酸分子，其中，所述编码抗体重链恒定区的核酸分子具有选自下列的序列：(a).如SEQ ID NO:199所示的核苷酸序列，或(b).与(a)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(a)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或(c).与(a)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列，和/或，所述编码抗体轻链恒定区的核酸分子具有选自下列的序列：(d).如SEQ ID NO:200所示的核苷酸序列，或(e).与(d)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(d).所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或(f).与(d)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列。
在某些优选的实施方案中，所述编码抗体重链恒定区的核酸分子具有如SEQ IDNO:199所示的核苷酸序列，和/或所述编码抗体轻链恒定区的核酸分子具有如SEQ ID NO:200所示的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，本发明的分离的核酸分子包含具有如SEQ ID NO:199所示的核苷酸序列，其编码抗体重链恒定区，和/或包含具有如SEQ ID NO:200所示的核苷酸序列，其编码抗体轻链恒定区。
本发明另一方面，本发明提供了一种载体(例如克隆载体或表达载体)，其包含本发明的分离的核酸分子。在某些优选的实施方案中，本发明的载体是例如质粒，粘粒，噬菌体，慢病毒等。在某些优选的实施方案中，所述载体能够在受试者(例如哺乳动物，例如人)体内表达本发明的抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段可用于构建嵌合抗原受体(CAR)，所述嵌合抗原受体包含特异性结合ROR1的细胞外抗原结合结构域(例如，ScFv)、跨膜结构域、以及一个或多个细胞内T细胞信号结构域。在此类实施方案中，本发明的分离的核酸分子可以包含编码嵌合抗原受体的核苷酸序列，所述编码嵌合抗原受体的核苷酸序列进一步包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段(例如ScFv)的核苷酸序列。在某些实施方案中，本发明的分离的核酸分子编码包含本发明抗体的抗原结合片段(例如ScFv)的嵌合抗原受体。
在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段可用于构建嵌合抗原受体修饰的免疫细胞，所述嵌合抗原受体修饰的免疫细胞包含嵌合抗原受体(CAR)以及免疫细胞(例如T淋巴细胞，NK细胞)。
本发明另一方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含本发明的分离的核酸分子或本发明的载体。宿主细胞可以是真核细胞(例如哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞)或原核细胞(例如大肠杆菌)。合适的真核细胞包括但不限于NS0细胞、Vero细胞、Hela细胞、COS细胞、CHO细胞、ExpiCHO细胞、HEK293细胞、Expi293细胞、BHK细胞、和MDCKII细胞。适宜的昆虫细胞包括但不限于Sf9细胞。在某些优选的实施方案中，本发明的宿主细胞是哺乳动物细胞，例如CHO(例如CHO-K1、CHO-S、CHO DXB11、ExpiCHO、CHO DG44)。
在某些实施方案中，本发明的宿主细胞可以是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)。在此类实施方案中，所述宿主细胞所包含的分离的核酸分子可以包含编码嵌合抗原受体的核苷酸序列，所述编码嵌合抗原受体的核苷酸序列进一步包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段(例如ScFv)的核苷酸序列。在某些实施方案中，所述宿主细胞所包含的分离的核酸分子编码包含本发明抗体的抗原结合片段(例如ScFv)的嵌合抗原受体。
本发明另一方面，提供了制备本发明的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养本发明的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
治疗方法和药物组合物
本发明另一方面，公开了药物组合物，其包含本发明的抗体或其抗原结合片段、载体、宿主细胞、偶联物、嵌合抗原受体、或多特异性抗体，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
在某些优选的实施方案中，本发明的药物组合物包含本发明的抗体或其抗原结合片段，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
在某些优选的实施方案中，本发明的药物组合物包含本发明的载体或宿主细胞，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。在此类实施方案中，所述载体所包含的分离的核酸分子包含编码嵌合抗原受体的核苷酸序列，所述编码嵌合抗原受体的核苷酸序列进一步包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段(例如ScFv)的核苷酸序列；所述宿主细胞包含如前所述的分离的核酸分子或载体。在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子编码包含本发明抗体的抗原结合片段(例如ScFv)的嵌合抗原受体。在某些优选的实施方案中，所述宿主细胞是T细胞。在某些优选的实施方案中，所述宿主细胞是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)。
在某些优选的实施方案中，所述药物组合物还可以包含另外的药学活性剂。在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂是用于治疗淋巴瘤，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，肺癌和/或胰腺癌的药物。在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂是具有抗肿瘤活性的药物。在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂是表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、免疫检查点抑制剂、B细胞抗原抑制剂、BTK抑制剂、化疗药物中的一种或多种。
在某些优选的实施方案中，在所述药物组合物中，本发明的抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂作为分离的组分或作为同一组合物的组分提供。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂可以同时、分开或相继施用。
在某些优选的实施方案中，所述药物组合物还可以包含另外的药学活性剂。所述另外的药学活性剂选自：表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、免疫检查点抑制剂、B细胞抗原抑制剂、BTK抑制剂、化疗药物中的一种或多种。
在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂可选自：抗PD1/PD-L1抗体，抗CD20抗体，抗EGFR抗体中的一种或多种。
另一方面，本发明的药物组合物中的抗体或其抗原结合片段、载体、宿主细胞、偶联物、嵌合抗原受体、或者多特异性抗体足以在受试者中：
(a)诱导肿瘤细胞凋亡；
(b)抑制肿瘤细胞生长、增殖、分化、和/或血管生成；
(c)诱发和/或增加补体依赖性细胞毒活性；
(d)诱发和/或增加抗体依赖性细胞毒活性；
(e)抑制ROR1的表达和活化；
(f)抑制ROR1介导的细胞信号传导；
(g)预防和/或治疗ROR1介导的疾病/病症；或
(h)(a)-(g)的任意组合。
本发明另一方面，提供本发明的抗体或其抗原结合片段、载体、宿主细胞、偶联物、嵌合抗原受体、或者多特异性抗体在制备药物中的用途，所述药物用于：
(a)诱导肿瘤细胞凋亡；
(b)抑制肿瘤细胞生长、增殖、分化、和/或血管生成；
(c)诱发和/或增加补体依赖性细胞毒活性；
(d)诱发和/或增加抗体依赖性细胞毒活性；
(e)抑制ROR1的表达和活化；
(f)抑制ROR1介导的细胞信号传导；
(g)预防和/或治疗ROR1介导的疾病/病症；或
(h)(a)-(g)的任意组合。
在某些优选的实施方案中，当本发明的载体或宿主细胞用于制备药物时，所述载体所包含的分离的核酸分子包含编码嵌合抗原受体的核苷酸序列，所述编码嵌合抗原受体的核苷酸序列进一步包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段(例如ScFv)的核苷酸序列；所述宿主细胞包含如前所述的分离的核酸分子或载体。在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子编码包含本发明抗体的抗原结合片段(例如ScFv)的嵌合抗原受体。在某些优选的实施方案中，所述宿主细胞是T细胞。在某些优选的实施方案中，所述宿主细胞是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)。
在某些优选的实施方案中，当本发明的载体或宿主细胞用于制备药物时，所述药物用于在受试者(例如人)中治疗肿瘤。
在某些优选的实施方案中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段、载体、宿主细胞、偶联物、嵌合抗原受体、或者多特异性抗体涉及的肿瘤选自淋巴瘤，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，肺癌和/或胰腺癌。
在某些优选的实施方案中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段涉及的肿瘤选自淋巴瘤，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，肺癌和/或胰腺癌。
在某些优选的实施方案中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段涉及的肿瘤为ROR1阳性。
在另一个方面，本发明提供了一种在受试者中预防和/或治疗肿瘤的方法。在另一个方面，本发明提供了一种在受试者中延迟肿瘤进展的方法。在另一个方面，本发明提供了一种在受试者中降低或抑制肿瘤复发的方法。以上所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明所述的抗体或其抗原结合片段、载体、宿主细胞、偶联物、嵌合抗原受体、或者多特异性抗体、药物组合物。
在某些的实施方案中，发明提供了一种在受试者中预防和/或治疗肿瘤的方法，包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明所述的抗体或其抗原结合片段、载体、宿主细胞、偶联物、嵌合抗原受体、或者多特异性抗体，以及另外的药学活性剂；所述另外的药学活性剂可以分开、联合、同时、或相继施用。
在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂选自：表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、免疫检查点抑制剂、B细胞抗原抑制剂、BTK抑制剂、化疗药物中的一种或多种。
在某些优选的实施方案中，所述另外的药学活性剂可选自：抗PD1/PD-L1抗体，抗CD20抗体，抗EGFR抗体中的一种或多种。
当本发明的宿主细胞用于以上所述方法时，所述宿主细胞表达包含本发明抗体的抗原结合片段(例如ScFv)的嵌合抗原受体。因此，在某些优选的实施方案中，所述宿主细胞所包含的分离的核酸分子包含编码嵌合抗原受体的核苷酸序列，所述编码嵌合抗原受体的核苷酸序列进一步包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段(例如ScFv)的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中，所述分离的核酸分子编码包含本发明抗体的抗原结合片段(例如ScFv)的嵌合抗原受体。在某些优选的实施方案中，所述宿主细胞是T细胞。在某些优选的实施方案中，所述宿主细胞是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)。
在另一个方面，以上所述方法还包括向所述受试者施用第二疗法，所述第二疗法选自手术、化疗、放疗、免疫疗法、基因疗法、DNA疗法、RNA疗法、纳米疗法、病毒疗法、辅助疗法及其任意组合。
在某些实施方案中，所述第二疗法可以与以上所述的方法分开、联合、同时或相继应用。
在某些优选的实施方案中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段、载体、宿主细胞、偶联物、嵌合抗原受体或其修饰的免疫细胞、或者多特异性抗体涉及的肿瘤选自淋巴瘤，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，肺癌和/或胰腺癌。
在某些优选的实施方案中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段涉及的肿瘤选自淋巴瘤，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，肺癌和/或胰腺癌。
在某些优选的实施方案中，本发明所述的抗体或其抗原结合片段涉及的肿瘤为ROR1阳性。
本发明的抗体或其抗原结合片段、本发明的药物组合物可以配制成医学领域已知的任何剂型，例如，片剂、丸剂、混悬剂、乳剂、溶液、凝胶剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、锭剂、栓剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、吸入剂、喷雾剂等。优选剂型取决于预期的给药方式和治疗用途。本发明的药物组合物应当是无菌的并在生产和储存条件下稳定。一种优选的剂型是注射剂。此类注射剂可以是无菌注射溶液。例如，可通过下述方法来制备无菌注射溶液：在适当的溶剂中掺入必需剂量的本发明的重组蛋白，以及任选地，同时掺入其他期望的成分(包括但不限于，pH调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，等渗剂、防腐剂、稀释剂，或其任何组合)，随后过滤除菌。此外，可以将无菌注射溶液制备为无菌冻干粉剂(例如，通过真空干燥或冷冻干燥)以便于储存和使用。此类无菌冻干粉剂可在使用前分散于合适的载体中，例如无菌无热原水。
此外，本发明的抗体或其抗原结合片段可以以单位剂量形式存在于药物组合物中，以便于施用。
本发明的抗体或其抗原结合片段、药物组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法来施用，包括但不限于，口服、口腔、舌下、眼球、局部、肠胃外、直肠、叶鞘内、内胞浆网槽内、腹股沟、膀胱内、局部(如，粉剂、药膏或滴剂)，或鼻腔途径。但是，对于许多治疗用途而言，优选的给药途径/方式是胃肠外给药(例如静脉注射，皮下注射，腹膜内注射，肌内注射)。技术人员应理解，给药途径和/或方式将根据预期目的而发生变化。在一个优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段、药物组合物通过静脉输注或注射给予。
本发明的药物组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或其抗原结合片段。“预防有效量”是指，足以预防，阻止，或延迟疾病的发生的量。“治疗有效量”是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。本发明的抗体或其抗原结合片段的治疗有效量可根据如下因素发生变化：待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。
在本发明中，可调整给药方案以获得最佳目的反应(例如治疗或预防反应)。例如，可以单次给药，可以在一段时间内多次给药，或者可以随治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。
在本发明中，所述受试者可以为哺乳动物，例如人。
检测方法和试剂盒
本发明的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合ROR1，从而可用于检测ROR1在样品中的存在或其水平。
因此，在另一个方面，本发明提供了一种试剂盒，其包括本发明的抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段带有可检测的标记。在一个优选的实施方案中，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别本发明的抗体或其抗原结合片段。优选地，所述第二抗体还包括可检测的标记。
在本发明中，所述可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。特别优选的是，此类标记能够适用于免疫学检测(例如，酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。这类标记是本领域熟知的，包括但不限于，酶(例如，辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶，等)、放射性核素(例如，3H、125I、35S、14C或32P)、荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC)、藻红蛋白(PE)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如Cy7、Alexa 750))、吖啶酯类化合物、磁珠(例如，
Figure BDA0002967576420000261
)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶，等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如，链霉亲和素)的生物素。教导该标记物的使用的专利包括，但不限于，美国专利3,817,837；3,850,752；3,939,350；3,996,345；4,277,437；4,275,149；及4,366,241(全部通过引用并入本文)。本发明中涵盖的标记物可通过本领域已知的方法检测。例如，放射性标记可使用摄影胶片或闪烁计算器检测，荧光标记物可使用光检测器检测，以检测发射的光。酶标记物一般通过给酶提供底物及检测通过酶对底物的作用产生的反应产物来检测，及测热标记物通过简单可视化着色标记物来检测。在某些实施方案中，可通过不同长度的接头将如上所述的可检测的标记连接至本发明的重组蛋白，以降低潜在的位阻。
在另一个方面，本发明提供了检测ROR1在样品中的存在或其水平的方法，其包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段的步骤。在一个优选的实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段还带有可检测的标记。在另一个优选的实施方案中，所述方法还包括，使用带有可检测的标记的试剂来检测本发明的抗体或其抗原结合片段。所述方法可以用于诊断目的，或者非诊断目的(例如，所述样品是细胞样品，而非来自患者的样品)。
在另一个方面，本发明提供了一种检测样品中ROR1存在或其水平的方法，所述方法包括在允许所述抗体或其抗原结合片段与ROR1之间形成复合物的条件下，使所述样品与本发明所述抗体或其抗原结合片段接触，并且检测所述复合物的形成。
在另一个方面，提供了本发明的抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途，所述试剂盒用于检测ROR1在样品中的存在或其水平。在另一个方面，本发明提供了诊断性或治疗性试剂盒，其包括本发明所述的的抗体或其抗原结合片段、载体、宿主细胞、偶联物、嵌合抗原受体、或者多特异性抗体，以及使用说明书。
鉴于ROR1在正常组织中的低表达或不表达，在一些癌症中的表达或高表达，可以通过检测ROR1在样品中的存在或其水平来诊断肿瘤及肿瘤转移。因此，本发明的抗体或其抗原结合片段、偶联物、多特异性抗体、或试剂盒可以用于诊断肿瘤及肿瘤转移。因此，在另一个方面，提供了本发明的抗体或其抗原结合片段、偶联物、多特异性抗体、或试剂盒在诊断肿瘤及肿瘤转移中的用途。
本发明的抗体与ROR1的结合亲和力高，且具有极强的特异性。因此，本发明的抗体具有用于预防和/或治疗肿瘤的潜力。
缩略词
CDR 免疫球蛋白可变区中的互补决定区
FR 抗体构架区：抗体可变区中除CDR残基以外的氨基酸残基
VH 抗体重链可变区
VL 抗体轻链可变区
IgG 免疫球蛋白G
AbM AbM CDR定义方式来源于Martin的相关研究(Martin ACR,Cheetham JC,Rees AR(1989)Modelling antibody hypervariable loops:A combined algorithm.ProcNatl Acad Sci USA 86:9268–9272)。
IMGT 基于由Lefranc等人发起的国际免疫遗传学信息系统(The international ImMunoGeneTicsinformation
Figure BDA0002967576420000281
(IMGT))的编号系统，可参阅Lefranc et al.,Dev.Comparat.Immunol.27:55-77,2003。
mAb 单克隆抗体
EC50 产生50％功效或结合的浓度
IC50 产生50％抑制的浓度
ELISA 酶联免疫吸附测定
PCR 聚合酶链式反应
HRP 辣根过氧化物酶
KD 平衡解离常数
Ka 结合速率常数
Kd 解离速率常数
ADCC 抗体依赖性细胞毒性
CDC 补体依赖细胞毒性
FACS 流式细胞仪技术
CDR-H1 免疫球蛋白重链可变区中的互补决定区1
CDR-H2 免疫球蛋白重链可变区中的互补决定区2
CDR-H3 免疫球蛋白重链可变区中的互补决定区3
CDR-L1 免疫球蛋白轻链可变区中的互补决定区1
CDR-L2 免疫球蛋白轻链可变区中的互补决定区2
CDR-L3 免疫球蛋白轻链可变区中的互补决定区3
CAR 嵌合抗原受体
CFA 完全弗氏佐剂
IFA 不完全弗氏佐剂
定义
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、生物化学、核酸化学、免疫学实验室等操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
如本文中所使用的，术语“抗体”是指，通常由两对多肽链(每对具有一条轻链(LC)和一条重链(HC))组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ(kappa)和λ(lambda)轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应子功能，如可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗原结合部位。氨基酸在各区域或结构域的分配可遵循Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1987and 1991))，或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917；Chothia等人(1989)Nature 342:878-883的定义。
在本文中，除非上下文明确指出，否则当提及术语“抗体”时，其不仅包括完整抗体，而且包括抗体的抗原结合片段。
如本文中所使用的，术语“互补决定区”或“CDR”是指抗体可变区中负责抗原结合的氨基酸残基。这些氨基酸残基的精确边界可根据本领域已知的各种编号系统进行定义，例如可按照AbM编号系统(Martin ACR,Cheetham JC,Rees AR(1989)Modelling antibodyhypervariable loops:A combined algorithm.Proc Natl Acad Sci USA 86:9268–9272)或IMGT编号系统(Lefranc et al.,Dev.Comparat.Immunol.27:55-77,2003)中的定义。对于给定的抗体，本领域技术人员将容易地鉴别各编号系统所定义的CDR。并且，不同编号系统之间的对应关系是本领域技术人员熟知的(例如，可参见Lefranc et al.,Dev.Comparat.Immunol.27:55-77,2003)。
在本发明中，本发明的抗体或其抗原结合片段含有的CDR可根据本领域已知的各种编号系统确定。在某些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段含有的CDR优选地通过Kabat、Chothia、AbM、IMGT编号系统确定。
如本文中所使用的，术语“构架区”或“FR”残基是指，抗体可变区中除了如上定义的CDR残基以外的那些氨基酸残基。
“胚系抗体基因”是由非淋巴细胞编码的免疫球蛋白序列，它没有经历导致表达特异免疫球蛋白的遗传学重排及成熟的成熟过程。本发明的各种实施方案所提供的一个优点来源于一种认识，那就是胚系抗体基因比成熟抗体基因更多地保留了动物物种个体的特征性的重要氨基酸序列结构。因此当被治疗性应用于该物种时，更少地被该物种识别为外源物质。
术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合片段”是指抗体的片段的多肽,例如全长抗体的片段的多肽，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合，其也被称为“抗原结合部分”。通常参见，FundamentalImmunology,Ch.7(Paul,W.,ed.,第2版，Raven Press,N.Y.(1989)，其以其全文通过引用合并入本文，用于所有目的。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。抗原结合片段的非限制性实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如，scFv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)、线性抗体(linearantibody)、纳米抗体(技术来自Domantis)、结构域抗体(技术来自Ablynx)、和这样的多肽，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。工程改造的抗体变体综述于Holliger等,2005；Nat Biotechnol,23:1126-1136中。
如本文中所使用的，术语“全长抗体”意指，由两条“全长重链”或“重链”和两条“全长轻链”或“轻链”组成的抗体。其中，“全长重链”或“重链”是指这样的多肽链，其在N端到C端的方向上由重链可变区(VH)、重链恒定区CH1结构域、铰链区(HR)、重链恒定区CH2结构域、重链恒定区CH3结构域组成；并且，当所述全长抗体为IgE同种型时，任选地还包括重链恒定区CH4结构域。优选地，“全长重链”是在N端到C端方向上由VH、CH1、HR、CH2和CH3组成的多肽链。“全长轻链”或“轻链”是在N端到C端方向上由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成的多肽链。两对全长抗体链通过在CL和CH1之间的二硫键和两条全长重链的HR之间的二硫键连接在一起。本发明的全长抗体可以来自单一物种，例如人；也可以是嵌合抗体或人源化抗体。本发明的全长抗体包含分别由VH和VL对形成的两个抗原结合部位，这两个抗原结合部位特异性识别/结合相同的抗原。
如本文中所使用的，术语“Fd片段”意指由VH和CH1结构域组成的抗体片段；术语“dAb片段”意指由VH结构域组成的抗体片段(Ward等人,Nature341:544 546(1989))；术语“Fab片段”意指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗体片段；术语“F(ab’)2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的抗体片段；术语“Fab’片段”意指还原连接F(ab’)2片段中两个重链片段的二硫键后所获片段，由一条完整的轻链和重链的Fd片段(由VH和CH1结构域组成)组成。
如本文中所使用的，术语“Fv片段”意指由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段。Fv片段通常被认为是，能形成完整的抗原结合位点的最小抗体片段。一般认为，六个CDR赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即便是一个可变区(例如Fd片段，其仅仅含有三个对抗原特异的CDR)也能够识别并结合抗原，尽管其亲和力可能低于完整的结合位点。
如本文中所使用的，术语“Fc片段”意指，由抗体的第一重链的第二、第三恒定区与第二重链的第二、第三恒定区经二硫键结合而形成的抗体片段。抗体的Fc片段具有多种不同的功能，但不参与抗原的结合。
如本文中所使用的，术语“scFv”是指，包含VL和VH结构域的单个多肽链，其中所述VL和VH通过接头(linker)相连(参见，例如,Bird等人,Science 242:423-426(1988)；Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988)；和Pluckthun，ThePharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Roseburg和Moore编，Springer-Verlag，纽约，第269-315页(1994))。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(GGGGS)4的接头，但也可使用其变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448)。可用于本发明的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8:725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immunol.31:94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56:3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。在一些情况下，scFv的VH与VL之间还可以存在二硫键。如本文中所使用的，术语“di-scFv”是指，由两个scFv连接形成的抗体片段。
如本文中所使用的，术语“双抗体(diabody)”意指，其VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见，例如,Holliger P.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)，和Poljak R.J.等人,Structure 2:1121-1123(1994))。
上述各个抗体片段均保持了特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合。
如本文中所使用的，术语“多特异性抗体”是指具有多种不同抗原结合特异性的抗体，包括例如：双特异性抗体,三特异性抗体和四特异性抗体。“双特异性抗体”是指，具有两种不同抗原结合特异性的抗体，其由第一抗体(或其片段)和第二抗体(或其片段)或抗体类似物通过偶联臂所形成的偶联物，偶联的方式包括但不限于化学反应、基因融合和酶促。“多特异性抗体”包括，例如，三特异性抗体和四特异性抗体，三特异性抗体是具有三种不同抗原结合特异性的抗体，四特异性抗体是具有四种不同抗原结合特异性的抗体。
如本文中所使用的，“抗体类似物(antibody mimetics)”，指与抗体一样特异性结合抗原，但却没有抗体结构。它们通常是人工肽或蛋白质，摩尔质量约为3至20kDa。例如，锚蛋白重复蛋白(DARPin)和fynomer。经设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)，与IgG抗体，scFv-Fc抗体片段相连或其组合，如CN104341529A。抗IL-17a的fynomer与抗IL-6R抗体结合，如WO2015141862A1。
如本文中所使用的，“嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)”指一种融合到细胞内信号转导域的肿瘤抗原结合结构域，能激活T细胞。常见地，CAR的胞外结合结构域来源于小鼠或人源化或人的单克隆抗体。
如本文中所使用的，“免疫球蛋白”或“Ig”可以指作为抗体起作用的一类蛋白质。由B细胞表达的抗体有时称为嵌合抗原受体或抗原受体。包括在这类蛋白质中的五个成员是IgA、IgG、IgM、IgD和IgE，其中IgG是最常见的循环抗体。它是凝集、补体固定和其他抗体反应中最有效的免疫球蛋白，在防御细菌和病毒方面是重要的。
在本文中，获得抗体的技术可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如，重组DNA技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如本发明提供的抗体)获得抗体的抗原结合片段(例如，上述抗体片段)，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。
如本文中所使用的，术语“单克隆抗体”、“单抗”、“mAb”具有相同的含义且可互换使用可互换，其是指，来自一群高度同源的抗体分子中的一个抗体或抗体的一个片段，也即，除可能自发出现的自然突变外，一群完全相同的抗体分子。单抗对抗原上的单一表位具有高特异性。多克隆抗体是相对于单克隆抗体而言的，其通常包含至少2种或更多种的不同抗体，这些不同的抗体通常识别抗原上的不同表位。此外，修饰语“单克隆”仅表明该抗体的特征为从高度同源的抗体群中获得，不能理解为需要通过任何特定方法来制备所述抗体。
本发明的单克隆抗体可以通过多种技术进行制备，例如杂交瘤技术(参见，例如Kohler等人.Nature,256:495,1975)，重组DNA技术(参见，例如美国专利申请4,816,567)，或噬菌体抗体库技术(参见，例如Clackson等.Nature352：624-628,1991，或Marks等.J.Mol.Biol.222：581-597,1991)。
例如，可以如下来制备单克隆抗体。首先用免疫原(必要时候添加佐剂)免疫注射小鼠或其它合适的宿主动物。免疫原或佐剂的注射方式通常为皮下多点注射或腹腔注射。可将免疫原预先偶联到某些已知蛋白，如血清白蛋白或大豆胰酶抑制剂上，以增强抗原在宿主内的免疫原性。佐剂可以是弗氏佐剂或MPL-TDM等。动物在接受免疫后，体内将产生分泌特异性结合免疫原的抗体的淋巴细胞。另外，淋巴细胞也可以利用体外免疫获得。收集目的淋巴细胞，并用合适的融合剂，如PEG，使其与骨髓瘤细胞融合以获得杂交瘤细胞(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,pp.59-103,AcademicPress,1996)。上述制备的杂交瘤细胞可以接种到合适的培养液中生长，培养液中优选含有一种或多种能够抑制未融合的、母体骨髓瘤细胞生长的物质。例如，对于缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶(HGPRT或HPRT)的母体骨髓瘤细胞，在培养液中添加次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶(HAT培养基)等物质将可以抑制HGPRT-缺陷细胞的生长。优选的骨髓瘤细胞应该具有融合率高，抗体分泌能力稳定，对HAT培养液敏感等特征。其中，骨髓瘤细胞首选鼠源骨髓瘤，如MOP-21或MC-11小鼠肿瘤衍生株(THE Salk Institute Cell Distribution Center,San Diego,Calif.USA)，和SP-2/0或X63-Ag8-653细胞株(American Type CultureCollection,Rockville,Md.USA)。另外也有研究报道，利用人骨髓瘤和人鼠异源骨髓瘤细胞株制备人单抗(Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur et al.,MonoclonalAntibody Production Techniques and Applications,pp.51-63,Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)。生长杂交瘤细胞的培养液用于检测针对特异抗原的单抗的产生。测定杂交瘤细胞产生的单抗的结合特异性的方法包括例如，免疫沉淀或体外结合试验，如放射免疫试验(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)。例如，可利用Munson等在Anal.Biochem.107:220(1980)描述的Scatchard分析法来测定单抗的亲和力。当确定了杂交瘤产生的抗体的特异性、亲和力和反应性之后，目的细胞株可以通过(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,pp.59-103,Academic Press,1996)所描述的标准的有限稀释法进行亚克隆化。合适的培养液可以是DMEM或RPMI-1640等。另外，杂交瘤细胞还可以腹水瘤的形式在动物体内生长。利用传统的免疫球蛋白纯化方法，如蛋白A琼脂糖凝胶、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析等，可以将亚克隆细胞分泌的单抗从细胞培养液、腹水或血清中分离出来。
还可以通过基因工程重组技术获得单克隆抗体。利用特异性结合单抗重链和轻链基因的核酸引物进行PCR扩增，可以从杂交瘤细胞中分离得到编码单抗重链和轻链基因的DNA分子。将所得的DNA分子插入表达载体内，然后转染宿主细胞(如E.coli细胞、COS细胞、CHO细胞、或其它不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞)，并在合适的条件下进行培养，可以获得重组表达的目标抗体。
抗体可通过公知的技术，例如使用蛋白A或蛋白G的亲和层析进行纯化。随后或作为替代，可将特异性抗原(该抗体识别的靶分子)或其抗原表位固定在柱上，并通过免疫亲合层析法来纯化免疫特异性抗体。免疫球蛋白的纯化可参考例如D.Wilkinson(TheScientist,published by The Scientist,Inc.,Philadelphia Pa.,Vol.14,No.8(Apr.17,2000),pp.25-28)。
如本文中所使用的，术语“鼠源抗体”是指，来源于免疫接种过的小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合，继而筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的鼠杂交融合细胞，进而进行筛选、抗体制备和抗体纯化。或者由于抗原侵入小鼠体后B细胞分化增殖而形成浆细胞，浆细胞可产生分泌抗体。由特异性抗原刺激产生，抗体的产生是由于抗原侵入人体后引起各种免疫细胞相互作用，使淋巴细胞中的B细胞分化增殖而形成浆细胞，浆细胞可产生分泌抗体。
如本文中所使用的，术语“嵌合抗体(Chimeric antibody)”是指，这样的抗体，其轻链或/和重链的一部分源自一个抗体(其可以源自某一特定物种或属于某一特定抗体类或亚类)，且轻链或/和重链的另一部分源自另一个抗体(其可以源自相同或不同的物种或属于相同或不同的抗体类或亚类)，但无论如何，其仍保留对目标抗原的结合活性(U.S.P4,816,567to Cabilly et al.；Morrison et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:68516855(1984))。例如，术语“嵌合抗体”可包括这样的抗体(例如人鼠嵌合抗体)，其中抗体的重链和轻链可变区来自第一抗体(例如鼠源抗体)，而抗体的重链和轻链恒定区来自第二抗体(例如人抗体)。
如本文中所使用的，术语“人源化抗体”是指，经基因工程改造的非人源抗体，其氨基酸序列经修饰以提高与人源抗体的序列的同源性。通常而言，人源化抗体的全部或部分CDR区来自于非人源抗体(供体抗体)，全部或部分的非CDR区(例如，可变区FR和/或恒定区)来自于人源免疫球蛋白(受体抗体)。人源化抗体通常保留了供体抗体的预期性质，包括但不限于，抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力、增强免疫应答的能力等。供体抗体可以是有预期性质(例如，抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力)的小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物(例如，食蟹猴)抗体。
人源化抗体既能够保留非人源供体抗体(例如鼠源抗体)的预期性质，又能够有效降低非人源供体抗体(例如鼠源抗体)在人受试者中的免疫原性，因此，是特别有利的。然而，由于供体抗体的CDR与受体抗体的FR之间的匹配问题，人源化抗体的预期性质(例如，抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力)通常低于非人源供体抗体(例如鼠源抗体)。
因此，尽管本领域的研究人员已对抗体的人源化展开了深入的研究，并取得了一些进展(参见例如，Jones et al.,Nature,321:522 525(1986)；Reichmann et al.,Nature,332:323 329(1988)；Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593 596(1992)；andClark,Immunol.Today 21:397 402(2000))，但是，如何对某一供体抗体进行充分的人源化，以使得所产生的人源化抗体既具有尽可能高的人源化程度，又能够尽可能地保留供体抗体的预期性质，现有技术并没有提供详尽的指导。技术人员需要针对具体供体抗体进行摸索、探究和改造，付出大量的创造性劳动才有可能获得，既具有高人源化程度(例如至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％的人源化程度)、又保留具体供体抗体的预期性质的人源化抗体。
在本发明中，为了使人源化抗体尽可能保留供体抗体的性质(包括例如，抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力)，本发明的人源化抗体中构架区(FR)可以既包含人源受体抗体的氨基酸残基，也包含相应的非人源供体抗体的氨基酸残基。
本发明的嵌合抗体或人源化抗体可以根据上述制备的鼠单克隆抗体的序列进行制备。编码重链和轻链的DNA可以从目标鼠杂交瘤中获得，并且使用标准分子生物学技术进行工程改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。
为制备嵌合抗体，可使用本领域已知的方法将鼠免疫球蛋白可变区连接至人免疫球蛋白恒定区(参见例如Cabilly等人的美国专利No.4,816,567)。例如，将编码VH的DNA可操作的连接至编码重链恒定区的另一DNA分子以获得全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242)，包含这些区的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但是通常优选为IgG1或IgG4恒定区。例如，将编码VL的DNA可操作的连接至编码轻链恒定区CL的另一DNA分子以获得全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如Kabat，E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and Human Services，NIH PublicationNo.91-3242)，包含这些区的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区，但通常优选为κ恒定区。
为制备人源化抗体，可以使用本领域已知的方法将鼠CDR区插入人源框架序列(参见Winter的美国专利No.5,225,539；Queen等人的美国专利Nos.5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370；以及Lo,Benny,K.C.,editor,in Antibody Engineering:Methodsand Protocols,volume 248,Humana Press,New Jersey,2004)。或者，还可以利用转基因动物，其能够在免疫后不产生内源性免疫球蛋白、并且能够产生完整人抗体库。例如，已有报道在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失可以完全抑制了内源性抗体产生，然后将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到所述种系突变小鼠中将导致该小鼠在遇到抗原刺激时产生人抗体(参见例如，Jakobovits等，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：2551；Jakobovits等，1993，Nature362：255-258；Bruggermann等，1993，Year inImmunology 7：33；和Duchosal等，1992，Nature 355：258)。上述转基因动物的非限制性实例包括，HuMAb小鼠(Medarex,Inc.)，其含有编码未重排的人重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微型基因座(miniloci)，加之使内源μ和κ链基因座失活的靶向突变(参见例如Lonberg等人(1994)Nature 368(6474):856-859)；或携带人重链转基因和人轻链转染色体的“KM小鼠TM”(参见专利申请WO02/43478)。其他抗体人源化改造的方法还包括噬菌体展示技术(Hoogenboom等，1991，J.Mol.Biol.227：381；Marks等，J.Mol.Biol.1991，222：581-597；Vaughan等，1996，Nature Biotech 14：309)。
如本文中所使用的，术语“人源化程度”是用于评价人源化抗体中非人源氨基酸残基的数量的指标。人源化抗体的人源化程度例如可通过IMGT网站DomainGapAlign来预测可变区序列与人V结构域的同源性。
如本文中所使用的，“同源抗体”指抗体的变体，其包含的重链和轻链可变区所包含的氨基酸序列与本文中所提供的抗体或其抗原结合片段的氨基酸序列同源，且其中所述变体保留了本发明抗ROR1抗体的期望的功能特性。
用于比较的序列比对方法在本领域是熟知的。多种程序和比对算法描述于：SmithTF和Waterman MS,Adv.Appl.Math.,2:482,1981；Higgins DG和Sharp PM,CABIOS5:151,1989。Altschul SF等,Nature Genet.,6:119,1994提供了序列比对方法和同源性计算的详细思路。
如本文中所使用的，术语“特异性结合”是指，两分子间的非随机的结合反应，如抗体和其所针对的抗原之间的反应。特异性结合相互作用的强度或亲和力可以该相互作用的平衡解离常数(KD)或半最大效应浓度(EC50)表示。
两分子间的特异性结合性质可使用本领域公知的方法进行测定。一种方法涉及测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速度。“结合速率常数”(ka或kon)和“解离速率常数”(kdis或koff)两者都可通过浓度及缔合和解离的实际速率而计算得出(参见Malmqvist M,Nature,1993,361:186-187)。kdis/kon的比率等于解离常数KD(参见Davies等人,Annual Rev Biochem,1990；59:439-473)。可用任何有效的方法测量KD、kon和kdis值。在某些实施方案中，可以使用生物发光干涉测量法(例如ForteBio Octet法)来测量解离常数。除此以外还可用表面等离子共振技术(例如Biacore)或Kinexa来测量解离常数。
如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌粒；柯斯质粒；人工染色体，例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC)；噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于，逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件，包括但不限于，启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外，载体还可含有复制起始位点。
表达及克隆载体含有使载体能在一或多个所选宿主细胞中复制的核酸序列。通常，在克隆载体中，此序列为使载体能独立于宿主染色体DNA而复制者，且其包括复制起点或自主复制序列。本文所用的术语“表达载体”是指包含重组多核苷酸的载体，其包含与待表达的核苷酸序列有效连接的表达调控序列。表达载体包含用于表达的足够的顺式作用元件(cis-acting elements)；用于表达的其它元件可以由宿主细胞或体外表达系统提供。表达载体包括本领域所有已知的那些，例如粘粒、质粒(例如裸露或包含在脂质体中的)和病毒(例如，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。
如本文中所使用的，术语“宿主细胞”是指，可用于导入载体的细胞，其包括但不限于，如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞，如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞，如S2果蝇细胞或Sf9等的昆虫细胞，或者如纤维原细胞，NS0细胞、Vero细胞、Hela细胞、COS细胞、CHO细胞(例如CHO-K1、CHO-S、CHO DXB11、ExpiCHO、CHO DG44细胞)、ExpiCHO细胞、HEK293细胞、Expi293细胞、BHK细胞、和MDCKII细胞等的动物细胞。在本文中，宿主细胞还包括用于构建嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的免疫细胞，例如T淋巴细胞，NK细胞等。
如本文中所使用的，术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如，两个DNA分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据，或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据)，那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如，如果两个序列的10个位置中有6个匹配，那么这两个序列具有60％的同一性。例如，DNA序列CTGACT和CAGGTT共有50％的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常，在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用，例如，可通过计算机程序例如Align程序(DNAstar,Inc.)方便地进行的Needleman等人(1970)J.Mol.Biol.48：443-453的方法来实现。还可使用已整合入ALIGN程序(版本2.0)的E.Meyers和W.Miller(Comput.ApplBiosci.，4:11-17(1988))的算法，使用PAM120权重残基表(weight residue table)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外，可使用已整合入GCG软件包(可在www.gcg.com上获得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J MoIBiol.48:444-453(1970))算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gap weight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。
如本文中所使用的，术语“保守置换”意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的预期性质的氨基酸置换。例如，可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和PCR介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换，例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质，包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的(参见，例如，Brummell等人，Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人Proc.NatlAcad.Set USA 94:412-417(1997)，其通过引用并入本文)。
本文涉及的二十个常规氨基酸的编写遵循常规用法。参见例如，Immunology-ASynthesis(2nd Edition,E.S.Golub and D.R.Gren,Eds.,Sinauer Associates,Sunderland,Mass.(1991))，其以引用的方式并入本文中。在本发明中，术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中，氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如，丙氨酸可用A或Ala表示。
如本文中所使用的，术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences.Edited by Gennaro AR,19thed.Pennsylvania:Mack Publishing Company,1995)，并且包括但不限于：pH调节剂，表面活性剂，佐剂，离子强度增强剂，稀释剂，维持渗透压的试剂，延迟吸收的试剂，防腐剂。例如，pH调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液。表面活性剂包括但不限于阳离子，阴离子或者非离子型表面活性剂，例如Tween-80。离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。维持渗透压的试剂包括但不限于糖、NaCl及其类似物。延迟吸收的试剂包括但不限于单硬脂酸盐和明胶。稀释剂包括但不限于水，水性缓冲液(如缓冲盐水)，醇和多元醇(如甘油)等。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂，例如硫柳汞，2-苯氧乙醇，对羟苯甲酸酯，三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等。稳定剂具有本领域技术人员通常理解的含义，其能够稳定药物中的活性成分的期望活性，包括但不限于谷氨酸钠，明胶，SPGA，糖类(如山梨醇，甘露醇，淀粉，蔗糖，乳糖，葡聚糖，或葡萄糖)，氨基酸(如谷氨酸，甘氨酸)，蛋白质(如干燥乳清，白蛋白或酪蛋白)或其降解产物(如乳白蛋白水解物)等。
如本文中所使用的，术语“预防”是指，为了阻止或延迟疾病或病症或症状(例如，肿瘤)在受试者体内的发生而实施的方法。如本文中所使用的，术语“治疗”是指，为了获得有益或所需临床结果而实施的方法。为了本发明的目的，有益或所需的临床结果包括但不限于，减轻症状、缩小疾病的范围、稳定(即，不再恶化)疾病的状态，延迟或减缓疾病的发展、改善或减轻疾病的状态、和缓解症状(无论部分或全部)，无论是可检测或是不可检测的。此外，“治疗”还可以指，与期望的存活期相比(如果未接受治疗)，延长存活期。
如本文中使用的，术语“受试者”是指哺乳动物，例如灵长类哺乳动物，例如人。在某些实施方式中，所述受试者(例如人)患有肿瘤，或者，具有患有上述疾病的风险。
如本文中所使用的，术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如，预防疾病(例如，肿瘤)有效量是指，足以预防，阻止，或延迟疾病(例如，肿瘤)的发生的量；治疗疾病有效量是指，足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如，对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫系统的总体状态、患者的一般情况例如年龄，体重和性别，药物的施用方式，以及同时施用的其他治疗等等。
如本文中所使用的，术语“效应子功能(effector function)”是指，那些可归因于抗体Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的生物学活性，且其随抗体同种型而变化。抗体效应子功能的例子包括但不限于：Fc受体结合亲和性、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调、B细胞活化、细胞因子分泌、抗体和抗原-抗体复合物的半衰期/清除率等。改变抗体的效应子功能的方法是本领域已知的，例如通过在Fc区引入突变来完成。
如本文中所使用的，术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)”是指，一种细胞毒性形式，Ig通过与细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞或巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)结合，使这些细胞毒性效应细胞特异性结合到抗原附着的靶细胞上，然后通过分泌细胞毒素杀死靶细胞。检测抗体的ADCC活性的方法是本领域已知的，例如可通过测定待测抗体与Fc受体(例如CD16a)之间的结合活性来评价。
如本文中所使用的，术语“补体依赖的细胞毒性(CDC)”是指，通过使补体成分C1q与抗体Fc结合来激活补体级联的细胞毒性形式。检测抗体的CDC活性的方法是本领域已知的，例如可通过测定待测抗体与Fc受体(例如C1q)之间的结合活性来评价。
如本文中所使用的，术语“药学上可接受的”指当分子本体、分子片段或组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其他不良反应。可作为药学上可接受的载体或其组分的一些物质的具体示例包括糖类(如乳糖)、淀粉、纤维素及其衍生物、植物油、明胶、多元醇(如丙二醇)、海藻酸等。
在本文中，组合疗法包括将本发明涵盖抗ROR1抗体或其抗原结合片段与一或多种另外的第二疗法的活性治疗剂(例如化学治疗剂)或其他预防或治疗模式(例如，放疗)组合使用。
在此类组合疗法中，各种活性剂经常具有不同的互补作用机制，组合疗法可能导致协同效应。组合疗法包含影响免疫反应(例如增强或活化反应)之治疗剂及影响(例如抑制或杀死)肿瘤/癌细胞之治疗剂。组合疗法可降低抗药性癌细胞发生的可能性。组合疗法可允许试剂中的一或多种试剂剂量减少，以减少或消除与试剂中之一或多种相关的不良作用。此类组合疗法可对潜在疾病、病症或病状具有协同的治疗或预防作用。
在本文中，“组合”包括可以分开施用的疗法，例如针对单独投药分开调配(例如，可以在套组中提供)，及可以按单一调配物(亦即“共调配物”)一起施用的疗法。在某些实施方案中，本发明的抗ROR1抗体或其抗原结合片段可依次序施用。在其他实施方案中，抗ROR1抗体或其抗原结合片段可同时施用。本发明的抗ROR1抗体或其抗原结合片段可以与至少一种其他(活性)药剂以任何方式组合使用。
在本文中，ROR1阳性，由专业临床病理医师进行免疫组化和染色强度评价获得。
术语“癌症”“肿瘤”可互换使用，其是指以体内异常细胞的不受控生长为特征的一大类疾病。不受管制的细胞分裂可能导致恶性肿瘤或侵入邻近组织的细胞的形成，并可能通过淋巴系统或血流转移到身体的远端部位。癌症包括良性和恶性癌症以及休眠肿瘤或微转移。癌症也包括血液学恶性肿瘤。
术语“血液学恶性肿瘤”包括淋巴瘤，白血病，骨髓瘤或淋巴恶性肿瘤，以及脾癌和淋巴结肿瘤。示例性淋巴瘤包括B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤。B细胞淋巴瘤，包括例如霍奇金淋巴瘤。T细胞淋巴瘤，包括例如皮肤T细胞淋巴瘤。血液学恶性肿瘤还包括白血病，例如继发性白血病或急性淋巴细胞性白血病。血液恶性肿瘤还包括骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)及其他血液学和/或B细胞或T细胞相关的癌症。
下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述，本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得可实施。
附图说明
图1：Ba/F3细胞过表达人ROR1蛋白检测
图2：鼠抗人ROR1抗体与Ba/F3-ROR1细胞结合检测
图3：鼠抗人ROR1抗体与Jeko-1细胞结合检测
图4：鼠抗人ROR1抗体与HT29细胞结合检测
图5：鼠抗人ROR1抗体与A549细胞结合检测
图6：鼠抗人ROR1抗体与人ROR2胞外区蛋白结合检测
图7：抗人ROR1嵌合抗体与细胞结合测定-1
图8：抗人ROR1嵌合抗体与细胞结合测定-2
序列信息
本发明涉及的序列的信息描述于下面的表中：
Figure BDA0002967576420000451
Figure BDA0002967576420000461
Figure BDA0002967576420000471
具体实施方式
现参照下列意在举例说明本发明(而非限定本发明)的实施例来描述本发明。
除非特别指明，本发明中所使用的分子生物学实验方法和免疫检测法，基本上参照J.Sambrook等人，分子克隆：实验室手册，第2版，冷泉港实验室出版社，1989，以及F.M.Ausubel等人，精编分子生物学实验指南，第3版，John Wiley&Sons,Inc.，1995中所述的方法进行。本领域技术人员知晓，实施例以举例方式描述本发明，且不意欲限制本发明所要求保护的范围。
实施例1.鼠抗人ROR1抗体的产生
1)抗体产生和鉴定材料的制备
(1)人ROR1稳定表达细胞系构建：为验证人ROR1抗体的特异性及功能，用包含人ROR1完整编码序列(基因编号：Q01973)的慢病毒(G&P Biosciences，货号：LTV-ROR1)感染Ba/F3细胞，通过嘌呤霉素筛选阳性转导细胞，并通过有限稀释法进行单克隆筛选获得单克隆的BA/F3-ROR1稳定细胞系。通过流式细胞术(Luminex，Guava easyCyte HT)鉴定ROR1的表达。抗人ROR1抗体D10(专利序列：美国专利9217040B2)用作检测抗体。如图1所示，流式细胞仪结果表明Ba/F3-ROR1的阳性率很高(接近100％)，可用于后续实验。
(2)在Expi293或ExpiCHO哺乳动物细胞中表达并纯化重组人ROR ECD-his、ECD-小鼠Fc及ECD-T细胞表位融合蛋白(ECD：胞外结构域aa30-406)，通过ELISA用抗体D10对纯化得到的蛋白进行鉴定。通过基因合成(Genscript,Piscataway，NJ)构建了带有全长人ROR1编码序列的pcDNA3.4质粒，并进行了扩增。
2)小鼠免疫
采用带有上述不同标签的人ROR1 ECD蛋白、编码全长ROR1序列的pcDNA3.4质粒和Ba/F3-ROR1细胞用于免疫野生型小鼠。使用如下四种小鼠品系进行免疫：Balb/c，C57Bl/6，NZB和A/J。采用三种免疫方案，概述如下：1)首先采用含100μg包含人ROR1完整编码序列的pcDNA3.4质粒尾静脉注射1-2次，然后用2-4x106Ba/F3-ROR1细胞增强免疫，每次免疫间隔2-3周；2)首先采用含100μg包含人ROR1完整编码序列的pcDNA3.4质粒尾静脉注射1-2次，然后用不完全弗氏佐剂(IFA)混合50μ-100μg重组ROR1 ECD蛋白增强免疫，每次免疫间隔2-3周；3)首先采用50μg重组ROR1 ECD蛋白与完全弗氏佐剂(CFA)混合免疫，然后再将50μg重组ROR1 ECD蛋白与IFA混合增强免疫，每次免疫间隔2-3周。从第二次加强免疫后，通过流式细胞仪采用Ba/F3-ROR1细胞检测血清滴度。选择具有高滴度的小鼠在融合前3-5天用ROR-1ECD蛋白进行加强免疫。
3)产生抗人ROR1抗体的鼠源杂交瘤的制备与筛选
采用标准化学融合程序使用聚乙二醇(分子量1500Da，Roche，产品编号：10 783641 001)将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞(ATCC，产品编号：CRL-1581)融合在一起，比例为5：1。用含有20％胎牛血清(Hyclone，货号：SH30080.03)的DMEM培养基(Gibco，产品号：12430-47)将细胞调节至5×105个脾细胞/mL。将0.2mL细胞加入96孔板的每个孔中，并在37℃，5％CO2的培养箱中培养。融合后第二天向每孔中添加HAT(Sigma，货号：H0262-10VL)用于筛选选择。通过高通量流式细胞仪(Sartorius，型号：iQue Screener Plus)选择可产生与Ba/F3-ROR1细胞结合的抗体的克隆。进一步通过流式细胞仪(Luminex，型号：Guava easyCyte HT)选择仅结合Ba/F3-ROR1细胞而不结合Ba/F3野生型细胞的阳性克隆。最后，通过有限稀释获得单克隆杂交瘤，并通过FACS证实其与ROR1细胞的结合。从每个选定的阳性单克隆杂交瘤中进行小规模抗体纯化。用50-100mL无血清培养基(Thermo Fisher，Hybridoma-SFM，货号：12045084)培养杂交瘤细胞，通过蛋白A(GE Healthecare，MabSelectSuRe，货号：17543802)纯化上清液中的抗体并洗脱，洗脱的单克隆抗体以150mM NaCl进行透析。将透析的抗体过滤并通过0.2μm过滤器过滤除菌。通过流式细胞术检测纯化抗体与Ba/F3-ROR1细胞结合，选择7个鼠抗人ROR1单克隆抗体(12A8.1、17D3.1、18B6.1.2、18H2.5.3、24A1.3、29E2.1.3、33B8.16.1)作为进一步表征的候选分子。
实施例2.鼠抗人ROR1单克隆抗体亲和力的检测
通过流式方法检测候选抗体与人细胞表面的ROR1亲和力。除Ba/F3-ROR1过表达细胞外，人套细胞淋巴瘤细胞系Jeko-1(ATCC，货号：CRL-3006)、人结肠癌细胞系HT-29(ATCC，货号：HTB-38)、人肺癌细胞系A549(ATCC，货号：CCL-185)也被用于结合力分析。采用带有鼠或人IgG1 Fc的抗ROR1抗体抗人ROR1抗体UC961(专利序列：WO2018237335A1)作为阳性对照，带有相应鼠或人IgG1 Fc的抗2，4，6-三硝基苯酚抗体(ATCC)为阴性对照。小鼠IgG同种型对照(Thermo Fisher，目录号：31903)也用作阴性对照。将Ba/F3-ROR1、Jeko-1、HT-29和A549细胞与不同浓度的纯化后鼠源抗体和对照抗体在冰上孵育30分钟后，用流式缓冲液(PBS+2％FBS)清洗两次，再用羊抗人或鼠荧光二抗(Jackson ImmunoResearch，货号：109-605-098或115-605-071)在冰上孵育30分钟，最后上机检测(Luminex，型号：GuavaeasyCyte HT)。
检测结果如图2-5所示，7个抗人ROR1鼠源抗体均能特异性识别Ba/F3-ROR1、Jeko-1、HT-29和A549细胞表面的人ROR1。
采用人ROR2的胞外域(ECD)蛋白通过ELISA确认了候选抗体对人ROR1的结合特异性高于人ROR2。具体方法如下：1μg/mL人ROR2胞外区(ECD)蛋白(Sino Biological s，货号：16133-H08H)100μL/孔，4℃包被96孔ELISA酶标板(Thermo Fisher，货号：5129)过夜。使用200μL清洗缓冲液(1×TBS包含0.05％吐温-20)清洗3次,加入100μL不同浓度的8株纯化后鼠抗人ROR1候选抗体和UC961，37℃孵育1小时，用鼠抗人ROR2抗体(R&D systems,货号：MAB2064)作为阳性对照。使用200μL清洗缓冲液清洗3次,每孔加入100μL比例为1：10000稀释的抗人IgG(Rockland Inc，货号609-1304)或抗鼠IgG二抗(Rockland Inc，货号610-1304)，37℃孵育1小时。使用200μL清洗缓冲液清洗3次,加入100μL的TMB(Thermo Fisher，货号：TMBW-1000-01)避光显色10分钟,然后加入100μL终止液(Thermo Fisher，货号：13361-100-10)终止显色反应，酶标仪450nm读数。如图6所示，检测的所有5个抗体都不与人ROR2 ECD蛋白结合。
实施例3.抗人ROR1鼠源抗体的亚型鉴定及可变区扩增
采用Pierce Rapid Isotyping试剂盒(购自Thermo Fisher，货号：26179)对所有鼠抗人ROR1候选抗体(12A8.1、17D3.1、18B6.1.2、18H2.5.3、24A1.3、29E2.1.3、33B8.16.1)的亚型进行了鉴定。鉴定结果表明候选克隆重链为IgG1亚型，轻链为Kappa亚型。
为克隆可变区基因，从裂解的杂交瘤细胞中提取总RNA，采用cDNA反转录试剂盒(购自Thermo Fisher，货号：18080-200)合成第一链cDNA，采用抗体特殊引物用PCR方式使用Platinum Taq DNA polymerase(购自Thermo Fisher，货号：1304011)扩增VH和VK基因，PCR产物通过DNA纯化试剂盒(购自Qiagen，货号：28104)纯化，并连接到TOPO TA克隆载体(购自Thermo Fisher，货号：K457540)上，用于E.coli转化。每一个连接反应大概挑取6-12个E.coli克隆进行测序。测序结果通过Vector NTI11.5(购自Thermo Fisher)和Sequencer5.4.6(购自Genecodes)进行分析，获得抗人ROR1鼠源候选抗体可变区序列以及CDR序列如表1序列信息表所示。
表1.抗人ROR1鼠源抗体可变区及CDR氨基酸序列
Figure BDA0002967576420000511
Figure BDA0002967576420000521
实施例4.抗人ROR1嵌合抗体的亲和力检测
通过将17D3.1、18H2.5.3、24A1.3、29E2.1.3的轻链和重链可变区分别与人轻链κ恒定区(氨基酸序列：SEQ ID NO：198/核苷酸序列：SEQ ID NO：200)及人IgG1重链恒定区(氨基酸序列：SEQ ID NO：197/核苷酸序列：SEQ ID NO：199)连接进行工程化改造，构建嵌合抗体。合成每一抗体的重、轻链的编码DNA序列并进行密码子优化后，克隆到pcDNA3.4质粒(委托苏州泓迅科技股份有限公司)中。将每一嵌合抗体重链和轻链对应的pcDNA3.4质粒同时转染到Expi293F细胞中(Thermo Fisher,货号：A14527)，利用蛋白A纯化上清中表达的抗体，纯化后的嵌合抗体分别命名为17D3-Chi、18H2-Chi、24A1-Chi、29E2-Chi。
通过流式细胞仪分析纯化的抗人ROR1嵌合抗体对Ba/F3-ROR1，Jeko-1，HT-29和A549细胞的结合亲和力。具体实验步骤如下：将Ba/F3-ROR1、Jeko-1、HT-29和A549细胞与不同浓度梯度的纯化后嵌合抗体在冰上孵育30分钟后，分别采用带有人IgG1的抗ROR1抗体UC961和抗TNP抗体作为阳性对照和阴性对照。用流式缓冲液(PBS+2％FBS)清洗两次，再用羊抗人荧光二抗(Jackson ImmunoResearch，货号：109-605-098)在冰上孵育30分钟，最后采用流式细胞仪进行检测。
结果如图7-8及表2所示，18H2-Chi在细胞上的亲和力EC50低于阳性对照抗体UC961，表明上述抗人ROR1嵌合抗体较UC961有更强的亲和力。
表2.抗人ROR1嵌合抗体的细胞亲和力测定
Figure BDA0002967576420000531
*代表该数值为二次测定的平均值
Octet ForteBio被广泛用于抗体抗原动态亲和力的检测，候选嵌合抗体17D3-Chi、18H2-Chi、24A1-Chi、29E2-Chi和阳性对照抗体UC961采用此方法测定与人ROR1动态亲和力。具体实验步骤如下：抗人IgG Fc的AHC探头(ForteBio，货号：18-5060)先与待测抗体结合至应答信号值0.8-1.0nm，通过将抗体包被的探头浸入含有不同浓度(4、2、1、0.5、0.25、0.13、0.06和0μg/mL)的人ROR1 ECD蛋白的孔中来测量动态亲和力，结合5分钟，然后解离10分钟，1：1动力学结合模型用于全部拟合分析。如表3所示，17D3-Chi、18H2-Chi、24A1-Chi、29E2-Chi解离速率明显比对照抗体UC961更慢(如Kdis数值所示)，18H2-Chi、24A1-Chi亲和力比对照抗体UC961分别强4.4、5.0倍(如KD值所示)。
表3.抗人ROR1嵌合抗体与人ROR1的动态亲和力测定
抗体 KD(M) kon(1/Ms) kdis(1/s)
17D3-Chi 1.88E-08 2.03E+05 3.81E-03
18H2-Chi 3.56E-09 1.27E+06 4.51E-03
24A1-Chi 3.15E-09 2.92E+05 9.20E-04
29E2-Chi 1.67E-08 3.67E+05 6.11E-03
UC961 1.58E-08* 9.81E+5* 1.37E-02*
*代表该数值为二次测定的平均值
综上所述，与对照抗体相比，本发明抗体显示了更强的抗原结合能力。
尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，但本领域技术人员将理解：根据已经公布的所有教导，可以对细节进行各种修改和变动，并且这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部分为由所附权利要求及其任何等同物给出。
SEQUENCE LISTING
<110> 四川科伦博泰生物医药股份有限公司
科纳思药业有限公司
<120> ROR1结合蛋白及其用途
<130> IDC210066
<160> 200
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体12A8.1重链可变区
<400> 1
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Ser Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体12A8.1轻链可变区
<400> 2
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Asn
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体17D3.1重链可变区
<400> 3
Glu Phe Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Met Lys Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Phe Gly Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Ile Gln Ser His Gly Lys Asn Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Asn Pro Phe Asn Gly Ile Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Arg Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Leu Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Asp Ala Ser Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 4
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体 17D3.1轻链可变区
<400> 4
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 5
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体18B6.1重链可变区
<400> 5
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体18B6.1轻链可变区
<400> 6
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Phe Thr Ser Leu Glu Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体18H2.5.3重链可变区
<400> 7
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Arg Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体18H2.5.3轻链可变区
<400> 8
Glu Thr Thr Val Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Met Ala Ile Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Ile Ala Ser Ile Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Glu Gly Lys Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
50 55 60
Thr Gly Phe Gly Thr Asp Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Met Phe Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体24A1.3重链可变区
<400> 9
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ile Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ala Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Phe Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体 24A1.3轻链可变区
<400> 10
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Met Ala Ile Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Arg Cys Ile Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp
20 25 30
Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Ser
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Tyr Phe Val Phe Thr Ile Glu Asn Met Leu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体29E2.1.3重链可变区
<400> 11
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Arg Asn Ile Leu Phe Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体29E2.1.3轻链可变区
<400> 12
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Ile Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Phe Ser Leu Thr Val Ser Ser Leu Glu His
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体33B8.16.1重链可变区
<400> 13
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Cys Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Val Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体33B8.16.1轻链可变区
<400> 14
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Asp Tyr
65 70 75 80
Glu Asp Met Gly Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Phe Asp Glu Phe Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 12A8.1 CDR-H1
<400> 15
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 12A8.1 CDR-H2
<400> 16
Ile Asn Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 17
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 12A8.1 CDR-H3
<400> 17
Ala Arg Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 18
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 12A8.1 CDR-L1
<400> 18
Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
1 5
<210> 19
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 12A8.1 CDR-L2
<400> 19
Arg Ala Asn
1
<210> 20
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 12A8.1 CDR-L3
<400> 20
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 12A8.1 CDR-H1
<400> 21
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 12A8.1 CDR-H2
<400> 22
Ser Ile Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr
1 5
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 12A8.1 CDR-H3
<400> 23
Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 12A8.1 CDR-L1
<400> 24
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 12A8.1 CDR-L2
<400> 25
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 26
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 12A8.1 CDR-L3
<400> 26
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 27
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 12A8.1 CDR-H1
<400> 27
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 28
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 12A8.1 CDR-H2
<400> 28
Ser Ile Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 29
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 12A8.1 CDR-H3
<400> 29
Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 30
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 12A8.1 CDR-L1
<400> 30
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 12A8.1 CDR-L2
<400> 31
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 12A8.1 CDR-L3
<400> 32
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 12A8.1 CDR-H1
<400> 33
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 34
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 12A8.1 CDR-H2
<400> 34
Asn Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 12A8.1 CDR-H3
<400> 35
Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 12A8.1 CDR-L1
<400> 36
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 12A8.1 CDR-L2
<400> 37
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 12A8.1 CDR-L3
<400> 38
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 39
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 17D3.1 CDR-H1
<400> 39
Gly Tyr Ser Phe Phe Gly Tyr Thr
1 5
<210> 40
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 17D3.1 CDR-H2
<400> 40
Ile Asn Pro Phe Asn Gly Ile Thr
1 5
<210> 41
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 17D3.1 CDR-H3
<400> 41
Ala Arg Arg Gly Asp Ala Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 42
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 17D3.1 CDR-L1
<400> 42
Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Ser
1 5 10
<210> 43
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 17D3.1 CDR-L2
<400> 43
Trp Ala Ser
1
<210> 44
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 17D3.1 CDR-L3
<400> 44
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 17D3.1 CDR-H1
<400> 45
Gly Tyr Ser Phe Phe Gly Tyr Thr Met Asn
1 5 10
<210> 46
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 17D3.1 CDR-H2
<400> 46
Leu Ile Asn Pro Phe Asn Gly Ile Thr Ser
1 5 10
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 17D3.1 CDR-H3
<400> 47
Arg Gly Asp Ala Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 17D3.1 CDR-L1
<400> 48
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 17D3.1 CDR-L2
<400> 49
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 17D3.1 CDR-L3
<400> 50
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 51
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 17D3.1 CDR-H1
<400> 51
Gly Tyr Thr Met Asn
1 5
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 17D3.1 CDR-H2
<400> 52
Leu Ile Asn Pro Phe Asn Gly Ile Thr Ser Tyr Asn Gln Asn Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 17D3.1 CDR-H3
<400> 53
Arg Gly Asp Ala Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 54
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 17D3.1 CDR-L1
<400> 54
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 55
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 17D3.1 CDR-L2
<400> 55
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 17D3.1 CDR-L3
<400> 56
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 17D3.1 CDR-H1
<400> 57
Gly Tyr Ser Phe Phe Gly Tyr
1 5
<210> 58
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 17D3.1 CDR-H2
<400> 58
Asn Pro Phe Asn Gly Ile
1 5
<210> 59
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 17D3.1 CDR-H3
<400> 59
Arg Gly Asp Ala Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5
<210> 60
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 17D3.1 CDR-L1
<400> 60
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 17D3.1 CDR-L2
<400> 61
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 62
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 17D3.1 CDR-L3
<400> 62
Gln Gln Tyr Tyr Ser Tyr Pro Arg Thr
1 5
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18B6.1 CDR-H1
<400> 63
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 64
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18B6.1 CDR-H2
<400> 64
Ile Asn Ser Gly Gly Thr Thr
1 5
<210> 65
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18B6.1 CDR-H3
<400> 65
Ala Arg Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 66
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18B6.1 CDR-L1
<400> 66
Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
1 5
<210> 67
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18B6.1 CDR-L2
<400> 67
Arg Ala Asn
1
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18B6.1 CDR-L3
<400> 68
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 69
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18B6.1 CDR-H1
<400> 69
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18B6.1 CDR-H2
<400> 70
Ser Ile Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr
1 5
<210> 71
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18B6.1 CDR-H3
<400> 71
Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18B6.1 CDR-L1
<400> 72
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 73
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18B6.1 CDR-L2
<400> 73
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18B6.1 CDR-L3
<400> 74
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 75
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18B6.1 CDR-H1
<400> 75
Thr Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 76
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18B6.1 CDR-H2
<400> 76
Ser Ile Asn Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 77
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18B6.1 CDR-H3
<400> 77
Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18B6.1 CDR-L1
<400> 78
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 79
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18B6.1 CDR-L2
<400> 79
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18B6.1 CDR-L3
<400> 80
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 81
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18B6.1 CDR-H1
<400> 81
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
1 5
<210> 82
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18B6.1 CDR-H2
<400> 82
Asn Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 83
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18B6.1 CDR-H3
<400> 83
Val Asn Tyr Tyr Gly Tyr Gly Asp Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18B6.1 CDR-L1
<400> 84
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18B6.1 CDR-L2
<400> 85
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 86
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18B6.1 CDR-L3
<400> 86
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 87
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18H2.5.3 CDR-H1
<400> 87
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18H2.5.3 CDR-H2
<400> 88
Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr
1 5
<210> 89
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18H2.5.3 CDR-H3
<400> 89
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 90
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18H2.5.3 CDR-L1
<400> 90
Ile Asp Ile Asp Asp Asp
1 5
<210> 91
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18H2.5.3 CDR-L2
<400> 91
Glu Gly Lys
1
<210> 92
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 18H2.5.3 CDR-L3
<400> 92
Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 93
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18H2.5.3 CDR-H1
<400> 93
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5 10
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18H2.5.3 CDR-H2
<400> 94
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Arg
1 5
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18H2.5.3 CDR-H3
<400> 95
Gly Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18H2.5.3 CDR-L1
<400> 96
Ile Ala Ser Ile Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
1 5 10
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18H2.5.3 CDR-L2
<400> 97
Glu Gly Lys Thr Leu Arg Pro
1 5
<210> 98
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 18H2.5.3 CDR-L3
<400> 98
Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 99
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18H2.5.3 CDR-H1
<400> 99
Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5
<210> 100
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18H2.5.3 CDR-H2
<400> 100
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Arg Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18H2.5.3 CDR-H3
<400> 101
Gly Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 102
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18H2.5.3 CDR-L1
<400> 102
Ile Ala Ser Ile Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
1 5 10
<210> 103
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18H2.5.3 CDR-L2
<400> 103
Glu Gly Lys Thr Leu Arg Pro
1 5
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 18H2.5.3 CDR-L3
<400> 104
Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 105
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18H2.5.3 CDR-H1
<400> 105
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr
1 5
<210> 106
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18H2.5.3 CDR-H2
<400> 106
Ser Tyr Ser Gly Ile
1 5
<210> 107
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18H2.5.3 CDR-H3
<400> 107
Gly Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 108
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18H2.5.3 CDR-L1
<400> 108
Ile Ala Ser Ile Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
1 5 10
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18H2.5.3 CDR-L2
<400> 109
Glu Gly Lys Thr Leu Arg Pro
1 5
<210> 110
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 18H2.5.3 CDR-L3
<400> 110
Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 24A1.3 CDR-H1
<400> 111
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 112
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 24A1.3 CDR-H2
<400> 112
Ile Ser Tyr Ser Gly Phe Thr
1 5
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 24A1.3 CDR-H3
<400> 113
Ala Arg Ser Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 114
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 24A1.3 CDR-L1
<400> 114
Thr Asp Ile Asp Asp Asp
1 5
<210> 115
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 24A1.3 CDR-L2
<400> 115
Glu Gly Asn
1
<210> 116
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 24A1.3 CDR-L3
<400> 116
Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 117
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 24A1.3 CDR-H1
<400> 117
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Ser
1 5 10
<210> 118
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 24A1.3 CDR-H2
<400> 118
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Phe Thr Thr
1 5
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 24A1.3 CDR-H3
<400> 119
Ser Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 120
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 24A1.3 CDR-L1
<400> 120
Ile Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
1 5 10
<210> 121
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 24A1.3 CDR-L2
<400> 121
Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro
1 5
<210> 122
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 24A1.3 CDR-L3
<400> 122
Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 123
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 24A1.3 CDR-H1
<400> 123
Ser Asp Tyr Ala Trp Ser
1 5
<210> 124
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 24A1.3 CDR-H2
<400> 124
Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Phe Thr Thr Tyr Ser Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 125
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 24A1.3 CDR-H3
<400> 125
Ser Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 126
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 24A1.3 CDR-L1
<400> 126
Ile Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
1 5 10
<210> 127
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 24A1.3 CDR-L2
<400> 127
Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro
1 5
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 24A1.3 CDR-L3
<400> 128
Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 129
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 24A1.3 CDR-H1
<400> 129
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr
1 5
<210> 130
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 24A1.3 CDR-H2
<400> 130
Ser Tyr Ser Gly Phe
1 5
<210> 131
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 24A1.3 CDR-H3
<400> 131
Ser Thr Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 132
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 24A1.3 CDR-L1
<400> 132
Ile Thr Ser Thr Asp Ile Asp Asp Asp Met Asn
1 5 10
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 24A1.3 CDR-L2
<400> 133
Glu Gly Asn Thr Leu Arg Pro
1 5
<210> 134
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 24A1.3 CDR-L3
<400> 134
Leu Gln Ser Asn Asn Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 135
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 29E2.1.3 CDR-H1
<400> 135
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 136
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 29E2.1.3 CDR-H2
<400> 136
Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 137
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 29E2.1.3 CDR-H3
<400> 137
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 138
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 29E2.1.3 CDR-L1
<400> 138
Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
1 5
<210> 139
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 29E2.1.3 CDR-L2
<400> 139
Arg Ala Asn
1
<210> 140
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 29E2.1.3 CDR-L3
<400> 140
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 141
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 29E2.1.3 CDR-H1
<400> 141
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 142
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 29E2.1.3 CDR-H2
<400> 142
Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr
1 5
<210> 143
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 29E2.1.3 CDR-H3
<400> 143
Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 29E2.1.3 CDR-L1
<400> 144
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 29E2.1.3 CDR-L2
<400> 145
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 146
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 29E2.1.3 CDR-L3
<400> 146
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 147
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 29E2.1.3 CDR-H1
<400> 147
Thr Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 148
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 29E2.1.3 CDR-H2
<400> 148
Ser Ile Ser Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Leu Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 149
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 29E2.1.3 CDR-H3
<400> 149
Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 150
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 29E2.1.3 CDR-L1
<400> 150
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 151
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 29E2.1.3 CDR-L2
<400> 151
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 152
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 29E2.1.3 CDR-L3
<400> 152
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 29E2.1.3 CDR-H1
<400> 153
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
1 5
<210> 154
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 29E2.1.3 CDR-H2
<400> 154
Ser Ser Gly Gly Asn
1 5
<210> 155
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 29E2.1.3 CDR-H3
<400> 155
Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 156
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 29E2.1.3 CDR-L1
<400> 156
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 157
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 29E2.1.3 CDR-L2
<400> 157
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 158
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 29E2.1.3 CDR-L3
<400> 158
Leu Gln Tyr Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 159
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 33B8.16.1 CDR-H1
<400> 159
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 160
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 33B8.16.1 CDR-H2
<400> 160
Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr
1 5
<210> 161
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 33B8.16.1 CDR-H3
<400> 161
Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 162
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 33B8.16.1 CDR-L1
<400> 162
Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
1 5
<210> 163
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 33B8.16.1 CDR-L2
<400> 163
Arg Ala Asn
1
<210> 164
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IMGT 33B8.16.1 CDR-L3
<400> 164
Leu Gln Phe Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 165
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 33B8.16.1 CDR-H1
<400> 165
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 166
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 33B8.16.1 CDR-H2
<400> 166
Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr
1 5
<210> 167
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 33B8.16.1 CDR-H3
<400> 167
Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 168
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 33B8.16.1 CDR-L1
<400> 168
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 169
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 33B8.16.1 CDR-L2
<400> 169
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 170
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> AbM 33B8.16.1 CDR-L3
<400> 170
Leu Gln Phe Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 171
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 33B8.16.1 CDR-H1
<400> 171
Thr Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 172
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 33B8.16.1 CDR-H2
<400> 172
Ser Ile Ser Arg Gly Gly Thr Thr Tyr Cys Pro Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 173
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 33B8.16.1 CDR-H3
<400> 173
Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 174
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 33B8.16.1 CDR-L1
<400> 174
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 175
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 33B8.16.1 CDR-L2
<400> 175
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Kabat 33B8.16.1 CDR-L3
<400> 176
Leu Gln Phe Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 177
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 33B8.16.1 CDR-H1
<400> 177
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
1 5
<210> 178
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 33B8.16.1 CDR-H2
<400> 178
Ser Arg Gly Gly Thr
1 5
<210> 179
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 33B8.16.1 CDR-H3
<400> 179
Gly Tyr Arg Ser Asp Val Asn Trp Tyr Phe Asp Val
1 5 10
<210> 180
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 33B8.16.1 CDR-L1
<400> 180
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 181
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 33B8.16.1 CDR-L2
<400> 181
Arg Ala Asn Arg Leu Val Asp
1 5
<210> 182
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Chothia 33B8.16.1 CDR-L3
<400> 182
Leu Gln Phe Asp Glu Phe Pro Tyr Thr
1 5
<210> 183
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体12A8.1重链可变区核苷酸序列
<400> 183
gaagtgaagc tggtggagtc tgggggagac ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctatgcca tgtcttggat tcgccagact 120
ccagggaaga gtctggagtg ggtcgcatcc attaacagtg gtggcagcac ctactatcca 180
gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaggaacat cctgtacctg 240
caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcaag agtgaattac 300
tacggctacg gtgactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 184
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体12A8.1轻链可变区核苷酸序列
<400> 184
gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtatgcat ctctaggaga gagagtcact 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat agttatttaa gctggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctaagaccct gatctatcgt gcaaacagat tggtagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctggagaat 240
gaagatatgg gaatttatta ttgtctacag tatgatgagt ttccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaacc tggaaataaa a 321
<210> 185
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体17D3.1重链可变区核苷酸序列
<400> 185
gagttccagc tgcagcagtc tggacctgag ctggtgaagc ctggagcttc aatgaagata 60
tcctgcaggg cttctggtta ctcattcttt ggctacacca tgaactgggt gattcagagc 120
catggaaaga accttgagtg gattggactt attaatcctt tcaatggtat tactagctac 180
aaccagaact tcaagggcaa ggccacatta actgtagaca ggtcatccag cacagcctac 240
atggagctcc tcagtctgac atctgaggac tctgcagtct attactgtgc aaggagagga 300
gatgcctcct ggtttgctta ctggggccaa gggactctgg tcactgtctc tgca 354
<210> 186
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体17D3.1轻链可变区核苷酸序列
<400> 186
gacatcaaga tgacccagtc tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaaggttact 60
atgagctgta agtccagtca gagcctttta tatagtagca atcaaaagaa ctccttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttatagctat 300
cctcggacgt tcggtggagg caccaagctg gaaatcaaa 339
<210> 187
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体18B6.1重链可变区核苷酸序列
<400> 187
gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaggc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt acctatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatcc attaatagtg gtggtaccac ttactatcca 180
gacagtgtga agggccgatt caccctctcc agagataatg ccaggaacat cctgtacctg 240
caaatgaaca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcaag agtgaattac 300
tacggctacg gtgactatgc tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 188
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体18B6.1轻链可变区核苷酸序列
<400> 188
gacatcaaga tgacccagtc tccctcttcc atgtatgcat ctctaggaga gaaagtcact 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat agctatttaa gctggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctaagaccct gatctatcgt gcaaacagat tggtagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccttcaccag cctggagtat 240
gaagatatgg gaatttatta ttgtctacag tatgatgagt ttccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaacc tggaaataaa a 321
<210> 189
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体18H2.5.3重链可变区核苷酸序列
<400> 189
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtgagac cttctcagtc tctgtccctc 60
acctgcactg tcactggcta ctcaatcacc agtgattatg cctggaactg gatccggcag 120
tttccaggaa acagactgga gtggatgggc tacataagtt acagtggtat cactaggtac 180
aacccatctc tcaaaagtcg aatctctatc actcgagaca catccaagaa ccagttcttc 240
ctgcagttga attctgtgac tactgaggac acagccacat atttctgtgc aagagggact 300
gggacctact actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354
<210> 190
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体18H2.5.3轻链可变区核苷酸序列
<400> 190
gagacaaccg tgacacagag ccctgccagc ctgtctatgg ccatcggcga gaaagtgacc 60
atccggtgta tcgccagcat cgacatcgac gacgacatga actggtatca gcagaagccc 120
ggcgagcctc ctaagctgct gatctctgag ggcaagacac tgaggcctgg cgtgccaagc 180
agattcagca gcacaggctt cggcaccgac ttcgtgttca ccatcgagaa tatgttcagc 240
gaggacgtgg ccgactacta ctgcctgcag agcaacaacc tgcctctgac ctttggcgga 300
ggcaccaagc tggaaatcaa g 321
<210> 191
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体24A1.3重链可变区核苷酸序列
<400> 191
caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtgatac cttctcagtc tctgtccctc 60
acctgcactg tcgctggcta ctcaatcacc agtgattatg cctggagctg gatccggcag 120
tttccaggaa acaaactgga gtggatgggc tacataagct acagtggttt cactacctac 180
agcccatctc tcaaaagtcg aatctctatc actcgagaca catccaagaa ccagttcttc 240
ctgcagttga attctgtgac tactgaggac acagccacat attactgtgc cagatcgact 300
gggacgtact actttgacta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354
<210> 192
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体24A1.3轻链可变区核苷酸序列
<400> 192
gacatcaaga tgacccagtc tccagcatcc ctgtccatgg ctataggaga aaaagtcacc 60
atcagatgca taaccagcac tgatattgat gatgatatga actggtacca gcagaagcca 120
ggggaacctc ctaagctcct tatttcagaa ggcaatactc ttcgtcctgg agtcccatcc 180
cgattctcca gcagtggcta tggtacatat tttgttttta caattgaaaa catgctctca 240
gaagatgttg cagattacta ctgtttgcaa agtaataact tgcctctcac gttcggctcg 300
gggacaaaat tggaaataaa a 321
<210> 193
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体29E2.1.3重链可变区核苷酸序列
<400> 193
gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ctagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt acctatgcca tgtcttggat tcgccagact 120
ccggacaaga ggctggagtg ggtcgcatcc attagtagtg gtggtaatac ctactatcta 180
gacagtgtga agggccggct caccatctcc agagataatg gcaggaacat cctgttcctg 240
caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatgtatt attgtgcaag gggctatagg 300
agcgacgtaa actggtactt cgatgtctgg ggcgcaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360
<210> 194
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体29E2.1.3轻链可变区核苷酸序列
<400> 194
gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atgtatgcat ctctaggaga gagagtcact 60
atcatctgta aggcgagtca ggatattaat aactatttaa gctggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctaagaccct gatctatcgt gcaaacagat tggtagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat ttttctctca ccgtcagcag cctggagcat 240
gaagatatgg gaatttatta ttgtctacag tatgatgagt ttccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 195
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体33B8.16.1重链可变区核苷酸序列
<400> 195
gaagtgaagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt acctatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagagagga ggctggagtg ggtcgcatcc attagtcgtg gtggtaccac ctattgtcca 180
gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg tcaggaacat cctgtacttg 240
caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccatatatt actgtgcaag gggctatagg 300
tccgacgtaa actggtactt cgatgtctgg ggcgcaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360
<210> 196
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 鼠源抗体33B8.16.1轻链可变区核苷酸序列
<400> 196
gacatcaaga tgacccagtc tccatcttcc atgtatgcat ctctaggaga gagagtcact 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat agctatttaa gttggttcca gcagaaacca 120
gggaaatctc ctaagaccct gatctatcgt gcaaacagat tggtagatgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggcaagat tattctctca ccatcagcag cctggactat 240
gaagatatgg gaatttatta ttgtctacag tttgatgagt ttccgtacac gttcggaggg 300
gggaccaagc tggaaataaa a 321
<210> 197
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG1重链恒定区氨基酸序列
<400> 197
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 198
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人kappa轻链恒定区氨基酸序列
<400> 198
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 199
<211> 990
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG1重链恒定区核苷酸序列
<400> 199
gctagcacca agggacccag cgttttccct ctggctccat cctccaagag cacctctggt 60
ggaacagctg ctctgggctg cctggtcaag gactactttc ctgagcctgt gaccgtgtcc 120
tggaactctg gcgctctgac atctggcgtg cacacctttc cagctgtgct gcagtcctct 180
ggcctgtact ctctgtcctc cgtcgtgacc gtgccttcta gctctctggg cacccagacc 240
tacatctgca atgtgaacca caagccttcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggaaccc 300
aagtcctgcg acaagaccca cacctgtcct ccatgtcctg ctccagaact gctcggcgga 360
ccttccgtgt tcctgtttcc tccaaagcct aaggacaccc tgatgatctc tcggacccct 420
gaagtgacct gcgtggtggt ggatgtgtct cacgaggacc cagaagtgaa gttcaattgg 480
tacgtggacg gcgtggaagt gcacaacgcc aagaccaagc ctagagagga acagtacaac 540
tccacctaca gagtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggattggct gaacggcaaa 600
gagtacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcctgctc ctatcgaaaa gaccatctcc 660
aaggccaagg gccagcctag ggaaccccag gtttacacct tgcctccatc tcgggacgag 720
ctgaccaaga accaggtgtc cctgacctgt ctcgtgaagg gcttctaccc ctccgatatc 780
gccgtggaat gggagtctaa tggccagcct gagaacaact acaagacaac ccctcctgtg 840
ctggactccg acggctcatt cttcctgtac tccaagctga cagtggacaa gtccagatgg 900
cagcagggca acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa tcactacaca 960
cagaagtccc tgtctctgtc ccctggcaag 990
<210> 200
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人kappa轻链恒定区核苷酸序列
<400> 200
cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60
ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc cccgcgaggc caaagtacag 120
tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180
agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240
aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300
agcttcaacc gcggagagtg t 321

Claims (31)

1.特异性结合ROR1的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含如下的互补决定区(CDRs)：
(a)SEQ ID NO：1所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：2所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(b)SEQ ID NO：3所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：4所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(c)SEQ ID NO：5所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：6所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(d)SEQ ID NO：7所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：8所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(e)SEQ ID NO：9所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：10所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(f)SEQ ID NO：11所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：12所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(g)SEQ ID NO：13所示的重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3；和/或
SEQ ID NO：14所示的轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；
或
(h)下述重链可变区(VH)中含有的CDR-H1、CDR-H2以及CDR-H3，和/或下述轻链可变区(VL)中含有的CDR-L1、CDR-L2以及CDR-L3；，其中，所述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)与(a)至(g)任一所述的重链可变区和/或轻链可变区相比，至少一个CDR含有突变，所述突变为一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换为保守置换；
优选地，所述CDR根据Kabat，IMGT，Chothia或AbM编号系统定义；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段结合人ROR1。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
(1)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按IMGT编号系统定义：
(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:15所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:16所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:17所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:18所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:19所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:20所示的CDR-L3；
或
(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:39所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:40所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:41所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:42所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:43所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:44所示的CDR-L3；
或
(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:63所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:64所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:65所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:66所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:67所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:68所示的CDR-L3；
或
(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:87所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:88所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:89所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:90所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:91所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:92所示的CDR-L3；
或
(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:111所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:112所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:113所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:114所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:115所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:116所示的CDR-L3；
或
(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:135所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:136所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:137所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:138所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:139所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:140所示的CDR-L3；
或
(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:159所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:160所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:161所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:162所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:163所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:164所示的CDR-L3；
或
(2)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按AbM编号系统定义：
(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:21所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:22所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:23所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:24所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:25所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:26所示的CDR-L3；
或
(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:45所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:46所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:47所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:48所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:49所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:50所示的CDR-L3；
或
(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:69所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:70所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:71所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:72所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:73所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:74所示的CDR-L3；
或
(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:93所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:94所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:95所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:96所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:97所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:98所示的CDR-L3；
或
(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:117所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:118所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:119所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:120所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:121所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:122所示的CDR-L3；
或
(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:141所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:142所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:143所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:144所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:145所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:146所示的CDR-L3；
或
(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:165所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:166所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:167所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:168所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:169所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:170所示的CDR-L3；
或
(3)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按Kabat编号系统定义：
(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:27所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:28所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:29所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:30所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:31所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:32所示的CDR-L3；
或
(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:51所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:52所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:53所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:54所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:55所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:56所示的CDR-L3；
或
(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:75所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:76所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:77所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:78所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:79所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:80所示的CDR-L3；
或
(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:99所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:100所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:101所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:102所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:103所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:104所示的CDR-L3；
或
(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:123所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:124所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:125所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:126所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:127所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:128所示的CDR-L3；
或
(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:147所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:148所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:149所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:150所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:151所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:152所示的CDR-L3；
或
(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:171所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:172所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:173所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:174所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:175所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:176所示的CDR-L3；
或
(4)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中CDR按Chothia编号系统定义：
(a)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:33所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:34所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:35所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:36所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:37所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:38所示的CDR-L3；
或
(b)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:57所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:58所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:59所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:60所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:61所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:62所示的CDR-L3；
或
(c)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:81所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:82所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:83所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:84所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:85所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:86所示的CDR-L3；
或
(d)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:105所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:106所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:107所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:108所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:109所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:110所示的CDR-L3；
或
(e)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:129所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:130所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:131所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:132所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:133所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:134所示的CDR-L3；
或
(f)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:153所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:154所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:155所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:156所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:157所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:158所示的CDR-L3；
或
(g)包含如下3个CDR的重链可变区(VH)：序列为SEQ ID NO:177所示的CDR-H1，序列为SEQ ID NO:178所示的CDR-H2，序列为SEQ ID NO:179所示的CDR-H3；和/或，
包含如下3个CDR的轻链可变区(VL)：序列为SEQ ID NO:180所示的CDR-L1，序列为SEQID NO:181所示的CDR-L2，序列为SEQ ID NO:182所示的CDR-L3；
或
(5)下述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)，其中，所述重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)与(1)至(4)中(a)至(g)任一所述的重链可变区和/或轻链可变区相比，至少一个CDR含有突变，所述突变为一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换为保守置换；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段结合人ROR1。
3.权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含：
SEQ ID NOs：1、3、5、7、9、11、13任一项所示的VH序列或其变体，和/或，SEQ ID NOs：2、4、6、8、10、12、14任一项所示的VL序列或其变体；其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或者与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换。
4.权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含选自如下任一组的重链可变区(VH)和/或轻链可变区(VL)：
(1)SEQ ID NO：1所示序列的VH或其变体和SEQ ID NO：2所示序列的VL或其变体；
(2)SEQ ID NO：3所示序列的VH或其变体和SEQ ID NO：4所示序列的VL或其变体；
(3)SEQ ID NO：5所示序列的VH或其变体和SEQ ID NO：6所示序列的VL或其变体；
(4)SEQ ID NO：7所示序列的VH或其变体和SEQ ID NO：8所示序列的VL或其变体；
(5)SEQ ID NO：9所示序列的VH或其变体和SEQ ID NO：10所示序列的VL或其变体；
(6)SEQ ID NO：11所示序列的VH或其变体和SEQ ID NO：12所示序列的VL或其变体；
(7)SEQ ID NO：13所示序列的VH或其变体和SEQ ID NO：14所示序列的VL或其变体；
其中，所述变体与其所源自的序列相比具有至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性，或者与其所源自的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；优选地，所述的置换是保守置换。
5.权利要求1-4任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段是鼠源抗体、嵌合抗体或人源化抗体。
6.权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段进一步包含：
(a)人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；和
(b)人免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体，所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如，至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)；
优选地，所述重链恒定区是IgG重链恒定区，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定区；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含选自下列的重链恒定区：
(1)人IgG1重链恒定区；
(2)人IgG4重链恒定区；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)或其变体，所述变体与SEQ ID NO：197相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)；
优选地，所述轻链恒定区是κ轻链恒定区；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)或其变体，所述变体与SEQ ID NO：198相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换；例如1个，2个，3个，4个或5个氨基酸的保守置换)；
更优选的，所述抗体或其抗原结合片段包含如SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)和如SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)。
7.权利要求1-6任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体包含如下任一组：
(1)包括SEQ ID NO：1所示序列的VH和SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：2所示序列的VL和SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链；
(2)包括SEQ ID NO：3所示序列的VH和SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：4所示序列的VL和SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链；
(3)包括SEQ ID NO：5所示序列的VH和SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：6所示序列的VL和SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链；
(4)包括SEQ ID NO：7所示序列的VH和SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：8所示序列的VL和SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链；
(5)包括SEQ ID NO：9所示序列的VH和SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：10所示序列的VL和SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链；
(6)包括SEQ ID NO：11所示序列的VH和SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：12所示序列的VL和SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链；
(7)包括SEQ ID NO：13所示序列的VH和SEQ ID NO：197所示的重链恒定区(CH)的重链，和，包括SEQ ID NO：14所示序列的VL和SEQ ID NO：198所示的轻链恒定区(CL)的轻链。
8.权利要求1-7任一项所述抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段选自ScFv、Fab、Fab’、(Fab’)2、Fv片段、二硫键连接的Fv(dsFv)、双抗体(diabody)、双特异性抗体和多特异性抗体。
9.权利要求1-8任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段带有标记；优选地，所述抗体或其抗原结合片段带有可检测的标记，例如酶(例如辣根过氧化物酶)、放射性核素、荧光染料、发光物质(如化学发光物质)或生物素。
10.权利要求1-9任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段具有选自下列的特征：
以小于约500nM，例如小于约100nM、10nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM或更小的EC50结合ROR1(例如，人ROR1)；优选地，所述EC50通过流式细胞技术或细胞竞争ELISA技术测得；和/或
以小于约100nM，例如小于约50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、1nM、0.1nM或更低的KD结合ROR1(例如，人ROR1)；优选地，所述KD通过生物薄膜干涉技术(BLI)测得；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段不结合ROR2(例如，人ROR2)；
优选地，所述抗体或其抗原结合片段具有ADCC和/或CDC活性；
更优选地，所述抗体或其抗原结合片段具有增强的ADCC和/或CDC活性。
11.分离的核酸分子，其编码权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段、其重链和/或轻链、或其重链可变区和/或轻链可变区；
优选地，所述编码的抗体或其抗原结合片段、其重链和/或轻链、或其重链可变区和/或轻链可变区包含权利要求1-4任一项中所定义的重链可变区和/或轻链可变区。
12.权利要求11所述的分离的核酸分子，其包含编码抗体重链可变区的核酸分子，和/或编码抗体轻链可变区的核酸分子，其中，
所述编码抗体重链可变区的核酸分子具有选自下列的序列：
(a)如SEQ ID NO：183、185、187、189、191、193、195任一项所示的核苷酸序列，或
(b)与(a)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(a)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或
(c)与(a)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列，和/或，
所述编码抗体轻链可变区的核酸分子具有选自下列的序列：
(d)如SEQ ID NO：184、186、188、190、192、194、196任一项所示的核苷酸序列，或
(e)与(d)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(d)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或
(f)与(d)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列。
13.权利要求11或12所述的分离的核酸分子，其包含编码抗体重链恒定区的核酸分子，和/或编码抗体轻链恒定区的核酸分子，其中，
所述编码抗体重链恒定区的核酸分子具有选自下列的序列：
(a)如SEQ ID NO：199所示的核苷酸序列，或
(b)与(a)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(a)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或
(c)与(a)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列，和/或，
所述编码抗体轻链恒定区的核酸分子具有选自下列的序列：
(d)如SEQ ID NO：200所示的核苷酸序列，或
(e)与(d)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如，与(d)所述的核苷酸序列相比，具有至少大约85％、90％、95％、99％或更高序列同一性的序列，或具有一个或更多个核苷酸取代的序列)，或
(f)与(d)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列。
14.载体，其包含权利要求11-13任一项所述的核酸分子；优选地，所述载体为克隆载体或表达载体。
15.宿主细胞，其包含权利要求11-13任一项所述的核酸分子或权利要求14所述的载体。
16.制备权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括，在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下，培养权利要求15所述的宿主细胞，和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
17.偶联物，其包括抗体或其抗原结合片段以及偶联部分，其中，所述抗体为权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
18.权利要求17所述的偶联物，其中，所述偶联部分选自可检测标记或第二生物学功能片段；
优选地，所述可检测标记选自放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质、酶中的任一项或其任意组合；
优选地，所述第二生物学功能片段选自具有结合活性的多肽、蛋白质、受体或配体，聚乙二醇(PEG)，核素，核酸，小分子毒素中的任一项或其任意组合。
19.嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段(例如，ScFv)、跨膜结构域、以及一个或多个细胞内T细胞信号结构域。
20.多特异性抗体，所述抗体由第一抗体或其片段与其他抗体或其片段或抗体类似物通过偶联形成，各抗体或其片段或抗体类似物保持原结合特异性，所述第一抗体或其片段为权利要求1至10中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；优选的，所述多特异性抗体为双特异性抗体或三特异性抗体或四特异性抗体。
21.药物组合物，其含有权利要求1至10任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或权利要求14所述的载体、或权利要求15所述的宿主细胞、或权利要求17或18所述的偶联物、或权利要求19所述的嵌合抗原受体、或者权利要求20所述的多特异性抗体，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂；
优选地，药物组合物还包含另外的药学活性剂；
更优选地，所述另外的药学活性剂是具有抗肿瘤活性的药物；
更优选地，所述另外的药学活性剂选自：表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、免疫检查点抑制剂、B细胞抗原抑制剂、BTK抑制剂、化疗药物中的一种或多种；
更优选地，所述抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂作为分离的组分或作为同一组合物的组分提供；
更优选地，所述另外的药学活性剂选自：抗PD1/PD-L1抗体，抗CD20抗体，抗EGFR抗体中的一种或多种。
22.权利要求21所述的药物组合物，其中所述药物组合物中的抗体或其抗原结合片段用于在受试者中：
(a)诱导肿瘤细胞凋亡；
(b)抑制肿瘤细胞生长、增殖、分化、和/或血管生成；
(c)诱发和/或增加补体依赖性细胞毒活性；
(d)诱发和/或增加抗体依赖性细胞毒活性；
(e)抑制ROR1的表达和活化；
(f)抑制ROR1介导的细胞信号传导；
(g)预防和/或治疗ROR1介导的疾病/病症；或
(h)(a)-(g)的任意组合。
23.一种诊断性或治疗性试剂盒，其包括权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或权利要求14所述的载体、或权利要求15所述的宿主细胞、或权利要求17或18所述的偶联物、或权利要求19所述的嵌合抗原受体、或者权利要求20所述的多特异性抗体、或者权利要求21-22任一项所述的药物组合物，以及可选地使用说明书。
24.权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或权利要求14所述的载体、或权利要求15所述的宿主细胞、或权利要求17或18所述的偶联物、或权利要求19所述的嵌合抗原受体、或者权利要求20所述的多特异性抗体、或者权利要求21-22任一项所述的药物组合物在制备预防和/或治疗和/或辅助治疗肿瘤的药物中的用途；
优选地，权利要求1至10任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或权利要求14所述的载体、或权利要求15所述的宿主细胞、或权利要求17或18所述的偶联物、或权利要求19所述的嵌合抗原受体、或者权利要求20所述的多特异性抗体与另外的药学活性剂分开、联合、同时或相继施用；
更优选地，所述另外的药学活性剂是具有抗肿瘤活性的药物；
更优选地，所述另外的药学活性剂选自：表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、免疫检查点抑制剂、B细胞抗原抑制剂、BTK抑制剂、化疗药物中的一种或多种；
更优选地，所述另外的药学活性剂选自：抗PD1/PD-L1抗体，抗CD20抗体，抗EGFR抗体中的一种或多种。
25.权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段、或权利要求14所述的载体、或权利要求15所述的宿主细胞、或权利要求17或18所述的偶联物、或权利要求19所述的嵌合抗原受体、权利要求20所述的多特异性抗体、或者权利要求21-22任一项所述的药物组合物在制备药物中的用途，所述药物用于：
(a)诱导肿瘤细胞凋亡；
(b)抑制肿瘤细胞生长、增殖、分化、和/或血管生成；
(c)诱发和/或增加补体依赖性细胞毒活性；
(d)诱发和/或增加抗体依赖性细胞毒活性；
(e)抑制ROR1的表达和活化；
(f)抑制ROR1介导的细胞信号传导；
(g)预防和/或治疗ROR1介导的疾病/病症；或
(h)(a)-(g)的任意组合。
26.根据权利要求25或26所述的用途，其中所述肿瘤为ROR1阳性肿瘤；
优选地，所述肿瘤选自淋巴瘤，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，肺癌和/或胰腺癌。
27.一种用于在受试者中预防和/或治疗肿瘤、和/或延迟肿瘤进展、和/或降低或抑制肿瘤复发的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的权利要求21-22任一项所述的药物组合物。
28.权利要求27所述的方法，其还包括向所述受试者施用第二疗法，所述第二疗法选自手术、化疗、放疗、免疫疗法、基因疗法、DNA疗法、RNA疗法、纳米疗法、病毒疗法、辅助疗法及其任意组合；
可选地，所述第二疗法可以与权利要求27所述的方法分开、联合、同时或相继应用。
29.根据权利要求27或28所述的方法，其中所述肿瘤为ROR1阳性肿瘤；
优选地，所述肿瘤选自淋巴瘤，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，肺癌和/或胰腺癌。
30.一种检测样品中ROR1存在或其水平的方法，其包括在允许所述抗体或其抗原结合片段与ROR1之间形成复合物的条件下，使所述样品与权利要求1-10任一项所述的抗体或其抗原结合片段接触，和检测所述复合物的形成。
31.权利要求1-10任一项所述的抗体或抗原结合片段、权利要求17或18所述的偶联物、权利要求20所述的多特异抗体在制备诊断性试剂盒中的用途，所述试剂盒用于诊断或鉴别诊断肿瘤或肿瘤转移；
优选地，所述肿瘤为ROR1阳性肿瘤；
优选地，所述肿瘤选自淋巴瘤，乳腺癌，结肠直肠癌，卵巢癌，肺癌和/或胰腺癌。
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