CN115040521A - B族维生素和丁酸盐组合物在制备对胃癌细胞杀伤的药物中的应用 - Google Patents

B族维生素和丁酸盐组合物在制备对胃癌细胞杀伤的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了B族维生素和丁酸盐组合物在制备对胃癌细胞杀伤的药物中的应用。本发明通过纳米纤维固相萃取技术对胃癌患者血清中多种肠道菌群/营养相关代谢物进行提取、代谢组学筛选及建立代谢产物筛选模型，最终本发明发现维生素B2，或者维生素B2与维生素B9组合，或者维生素B2与维生素B12组合，或者维生素B2、维生素B9和维生素B12组合联合丁酸盐对胃癌细胞有显著的抑制效果，可用于预防和/或治疗胃癌。

Description

B族维生素和丁酸盐组合物在制备对胃癌细胞杀伤的药物中 的应用
技术领域
本发明涉及抗肿瘤药物，特别涉及B族维生素和丁酸盐组合物在制备对胃癌细胞杀伤的药物中的应用。
背景技术
近年来肠道菌群成为国际研究热点，多项研究表明胃癌的发生发展与肠道菌群变化有着密切的关系(G. Nardone,and D.Compare,The human gastric microbiota:Is ittime to rethink the pathogenesis of stomach diseases？United EuropeanGastroenterology Journal,2015. 3.)。
肠道菌群及其产生的代谢物丁酸具有调节宿主能量代谢、保护肠粘膜完整性的功能。已有研究显示产生丁酸的菌属可以通过调节Wnt信号转导通路和肠道菌群来抑制肠道肿瘤的发展，Wnt/β-catenin信号转导通路通常被认为是潜在的治疗靶标(Y.F.Qi,J.N.Sun,L.F.Ren,et al.,Intestinal Microbiota Is Altered in Patients withGastric Cancer from Shanxi Province,China.Digestive Diseases and Sciences,2019.64(5):1193-1203；Z.Bai,Z.Zhang,Y.Ye,et al.,Sodium butyrate inducesdifferentiation of gastric cancer cells to intestinal cells via the PTEN/phosphoinositide 3-kinase pathway.Cell biology international,2010.34: 1141-1145.)。丁酸生产菌群还能够改善肠道菌群失调，通过释放有益代谢产物抑制致病菌的增殖。其产生的丁酸盐作为一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂，可抑制组蛋白去乙酰化酶的活性从而抑制组蛋白的乙酰化，重新激活表观遗传沉默基因的表达，包括那些参与分化、细胞周期调节、凋亡、血管生成、侵袭和转移的基因，从而达到预防和治疗癌症的作用(M.Myzak,and R.Dashwood,Histone Deacetylases as Targets for Dietary Cancer PreventiveAgents:Lessons Learned with Butyrate,Diallyl Disulfide,andSulforaphane.Current drug targets,2006.7: 443-452.)。丁酸盐最显著的作用还在于可以诱导多种肿瘤细胞的分化。它可以通过PTEN/PI3K(磷酸肌醇3-激酶)通路诱导分化和调节粘膜因子MUC2的表达(Z. Bai,Z.Zhang,Y.Ye,et al.,Sodium butyrate inducesdifferentiation of gastric cancer cells to intestinal cells via the PTEN/phosphoinositide 3-kinase pathway.Cell biology international,2010.34:1141-1145)。多种研究已证实丁酸盐可以抑制肿瘤细胞的生长，诱导细胞分化、成熟和细胞周期阻滞，但其诱导肿瘤细胞凋亡的机制尚不清楚(M.Lea,C.Ibeh,N.Shah,et al.,Inductionof differentiation of colon cancer cells by combined inhibition of kinasesand histone deacetylase.Anticancer research, 2007.27:741-748.)。因此，丁酸盐在癌症治疗中具有潜在的应用价值。
纵观目前抗肿瘤疗法，辅助治疗及分子靶向治疗已经逐渐替代广谱化疗药，逐步走向市场。辅助治疗通常是手术后给予的治疗，包括营养治疗、激素治疗等。营养治疗是胃癌临床综合治疗的重要组成部分，对于临床治疗的效果和预后极为关键。但目前临床营养辅助治疗并未受到重视，临床上也缺少针对性的治疗方案，导致胃癌患者的配套精准辅助疗法及机制研究十分欠缺。
发明内容
发明目的：本发明的目的是提供一种能够抑制胃癌细胞生长，进一步用于预防和/或治疗胃癌的B族维生素和丁酸盐组合物在制备对胃癌细胞杀伤的药物中的应用。
技术方案：为了实现以上述目的，本发明提供一种B族维生素和丁酸盐组合物在制备对胃癌细胞杀伤的药物中的应用。
进一步地，所述B族维生素为维生素B2，或者维生素B2与维生素B9组合，或者维生素B2与维生素B12组合，或者维生素B2、维生素B9和维生素B12 组合。
进一步地，所述胃癌细胞为低分化胃癌细胞BGC-823细胞系。
进一步地，所述丁酸盐为丁酸或者丁酸钠。
进一步地，所述维生素B2与丁酸盐的浓度比为0.5μM-500μM：0.5mM-10mM。
进一步地，所述维生素B2、维生素B9与丁酸盐的浓度比为0.5μM-250μM： 0.5μM-250μM：0.5mM-10mM。
进一步地，所述维生素B2、维生素B12与丁酸盐的浓度比为0.5μM-250μM： 0.5μM-100μM：0.5mM-10mM。
进一步地，所述维生素B2、维生素B12、维生素B9与丁酸盐的浓度比为 0.5μM-250μM：0.5μM-100μM：0.5μM-250μM：0.5mM-10mM。
本发明对胃癌患者和正常人群血清中营养及肠道菌群相关的主要代谢产物 (包括：短链脂肪酸(SCFAs)、氨基酸、B族维生素、吲哚类物质等)通过纳米纤维固相萃取技术提取并进行代谢组学检测。
本发明运用多元分析主成分分析(Principal components analysis，PCA)，偏最小二乘判别分析法(Partial Least Squares-Discriminant Analysis,PLS-DA)，正交偏最小二乘－判别分析法(Orthogonal to Partial Least Squares-Discriminant Analysis,OPLS-DA)建立代谢产物筛选模型，筛选出对区分健康人群和胃癌人群关键性的目标物。筛选的目标物通过CCK-8法验证其对胃癌细胞的杀伤力和抑制作用，最终筛选出基于B族维生素的可以协同增强丁酸盐对胃癌细胞杀伤力的作用方案。
大量的流行病学和动物实验资料表明，核黄素(VB2)等微量营养素具有防癌和抗癌作用。研究表明，核黄素缺乏会导致慢性食道炎甚至食道癌的发生，原因是核黄素可抑制食管上皮增生或促进其向正常转化。除影响上皮组织完整性外，核黄素还有抗突变作用。核黄素依赖的谷胱甘肽还原酶促进了还原型谷胱甘肽 GSH的再生，而GSH作为还原剂有利于GSH-Px清除过氧化物及作为亲核试剂与细胞色素P450代谢活化的亲电子性终致癌物结合排出体外，避免终致癌物与 DNA结合发生甲基化，从而保护细胞内大分子免受损伤。同时核黄素作为各种黄素酶辅基的构成组分参与某些致癌物的代谢，核黄素缺乏可影响间接致癌物的体内解毒。
本发明研究发现，核黄素的上述功能是其辅助丁酸盐杀伤胃癌细胞的主要作用机制。而维生素B9(叶酸)参与的“一碳单位”代谢过程对DNA合成、修复和甲基化(表观遗传学)过程是必需的，这一代谢过程的紊乱会促使肿瘤的发生。除叶酸外，DNA甲基化和合成还受到与一碳代谢途径相关的其它维生素的影响，包括作为B12循环的蛋氨酸合成酶的辅助因子维生素B2，MTHFR的辅助因子的维生素B6和作为甲硫氨酸合成酶(MethionineSynthetas,MTR)辅助因子的维生素B12。哺乳动物细胞中维生素B12的摄取是由一种可以和B12的结合蛋白 (运钴胺素蛋白II)特异性结合的高亲和受体所介导，这种受体在细胞质膜上表达。在许多种人类的肿瘤细胞中这种B12的受体都是过表达的。并且此外，氰钴胺结合物与细胞表面转钴胺素蛋白II受体的亲和力似乎足够高，因此，维生素B12有潜力作为载体用于肿瘤靶向化疗和靶向诊断。
本发明进一步运用Western blot检测丁酸盐和维生素B2联合使用对胃癌细胞系BGC-823中PTEN、PI3K分子水平的表达情况，实验结果表明，丁酸盐和维生素B2联合使用能够显著上调BGC-823细胞中PTEN蛋白表达水平，进而下调PI3K的蛋白表达水平。上述结果提示，丁酸盐和维生素B2联合使用可能一 PTEN/PI3K信号通路作为靶标发挥作用，从而诱导细胞凋亡和分化。
最终本发明在筛选过程中发现维生素B2，或者维生素B2与维生素B9组合，或者维生素B2与维生素B12组合，或者维生素B2、维生素B9和维生素B12 组合联合丁酸盐使用具有明确的抑制胃癌细胞作用。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下显著优点：B族维生素与丁酸盐联合使用，与单独使用丁酸盐相比，进一步提高肿瘤细胞增殖的抑制效果，增加细胞凋亡，同时细胞周期发生了改变，细胞更多的阻滞在SubG1期和G2/M期，肿瘤模型小鼠瘤块的体积明显减小，为开发具有临床治疗价值的药物奠定基础。
附图说明
图1为代谢组学检测胃癌患者血清中多种肠道菌群/营养相关代谢物，对代谢物进行多元分析建模后筛选出的重要指标及通路聚集图；A为(O)PLS-DA 模型下VIP指标排序，B为通路聚集情况；
图2为CCK-8法检测B族维生素联合丁酸盐体外抑制胃癌细胞系BGC-823 增殖的能力图；A为不同浓度丁酸盐作用于BGC-823细胞的抑制效果；B为丁酸盐联合维生素B2组及单独维生素B2组作用于BGC-823细胞的抑制效果对比； C为丁酸盐联合维生素B2、B12、B9共同作用于BGC-823细胞的抑制效果；
图3为丁酸盐与B族维生素联用24h对BGC-823形态产生的影响图；
图4为流式细胞仪ANNEXIN-V/PI法检测丁酸盐与B族维生素联用48h后对BGC-823凋亡和细胞周期产生的影响图；
图5为丁酸盐和B族维生素联用对裸鼠成瘤的影响图；
图6不同丁酸盐与B族维生素联用情况下，BGC-823细胞中PTEN和PI3K 蛋白水平的表达情况图。
具体实施方式
下面通过实施例具体说明本发明的内容。
实施例1
对胃癌患者、正常人群血清中多种肠道菌群/营养相关代谢物进行提取、代谢组学筛选、建立代谢产物筛选模型以及对数据模型进行验证，具体如下：
步骤(1)：本发明分别采集70名胃癌患者及100名正常人的血清样品，患者年龄45到90岁，呈正态分布，男女数量相近。样品采集立刻在5000r/min的速度下离心3.0min，取出上清液，后储存于-80℃，检测前取出解冻；
步骤(2)：样品进行检测前，需要在室温条件下避光自然解冻，以12000rpm 的速度离心5.0min，取上清。随后基于实验室已经建立好的各类目标物检测方法，优化条件，对血清中营养及肠道菌群相关的主要代谢产物(包括：短链脂肪酸(SCFAs)、氨基酸、B族维生素、吲哚类物质等)通过纳米纤维固相萃取技术提取并进行了代谢组学筛选。
步骤(3)：对于代谢组学数据进行主成分分析(Principal components analysis，PCA)，偏最小二乘判别分析法(Partial Least Squares-Discriminant Analysis, PLS-DA)，并在PLS-DA的基础上结合正交信号校正(Orthogonal Signal Correction,OSC)的方法，称为正交偏最小二乘－判别分析法(Orthogonal to Partial Least Squares-Discriminant Analysis,OPLS-DA)。由于代谢组学的样本成分复杂，受影响的因素很多，例如年龄、饮食、作息习惯、药物刺激等。由于实验目的专注于一种因素刺激所引起的代谢差别，因此需要使用OPLS-DA模式识别方法对所测数据进行滤噪，提高样品组间差异物分析的针对性和有效性。通过 VIP(Variable Important in Projection)值获得(O)PLS-DA模型变量的变量权重值， VIP≥1为常见的差异代谢物筛选标准。
步骤(4)：采用CV-ANOVA检验方法对数据模型进行验证，通常是用于对 PLS-DA和OPLS-DA模型显著性验证。其检验结果是给出一个p值来表示模型的显著性，在p＜0.05时，则认为模型有效成立，在组间存在统计学上的显著性差异。
模型验证参数在OPLS-DA模式下对C和T组进行Observed vs Predicted回归曲线制作，得到回归曲线方程为y＝1.006x+0.02666，R2＝0.8803。由表1可知，模型成立。如图1A所示，对于对照组和胃癌组的判别，VIP评分大于1的代谢目标物排序为：丁酸、VB2、异戊酸、庚酸、VB9、VB12、精氨酸、天冬氨酸、维生素B6、乙酰腐胺、乙酰尸胺、缬氨酸、乙酸、异丁酸、甲硫氨酸。如图1B 通路聚集所示，丁酸盐和核黄素(VB2)代谢通路在胃癌患者体内发生显著的变化。
表1胃癌病人和正常对照组血清肠道菌群代谢相关目标物的多变量模型验证参数
Figure BDA0003636437480000051
考察不同浓度及代谢目标物对胃癌细胞的抑制率。
采用CCK-8法检测B族维生素联合丁酸盐体外抑制胃癌细胞系BGC-823增殖的能力。所筛选肠道菌群/营养相关代谢目标物主要包含三类：B族维生素类 (维生素B2、B6、B9、B12)、短链脂肪酸类(丁酸、异戊酸、乙酸、异丁酸)、氨基酸类(天冬氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸)。
取对数生长期的BGC-823胃癌细胞经0.25％胰蛋白酶消化，吹打分散后计数，按每孔5x103个细胞接种于96孔板中。置于37℃，5％CO2培养箱中培养过夜后，洗掉原培养液，然后每孔分别加入100μl新鲜培养液和100μl稀释有目标物的培养液，对照组不加任何目标物。培养72h后，洗掉培养液并用新鲜培养液清洗1次。然后加入100μl不含血清RPMI1640培养液和10μl CCK-8试剂， 37℃培养1.5h后酶标仪测试波长450nm，参考波长650nm进行检测。每组设定3个复孔。
采用CCK-8法以多元分析模型VIP筛选出的指标中胃癌组中显著下降的化合物为目标物对胃癌细胞进行作用，计算体外抑制胃癌细胞系BGC-823增殖的能力，每种目标物设置三个浓度梯度，分别为0.05mM、1mM、10mM。
表2不同代谢目标物对胃癌细胞的抑制率
Figure BDA0003636437480000061
表3不同代谢目标物对胃癌细胞的抑制率
Figure BDA0003636437480000062
表4不同代谢目标物对胃癌细胞的抑制率
Figure BDA0003636437480000063
不同浓度、不同代谢目标物对胃癌细胞的抑制率如表2-4所示，B族维生素普遍对胃癌细胞未展现出较好的抑制作用；其中，短链脂肪酸中丁酸的抑制效果最好；氨基酸中，天冬氨酸对胃癌细胞抑制作用不佳，缬氨酸和甲硫氨酸对胃癌细胞抑制作用较好。
考察不同代谢目标物组合对胃癌细胞的抑制率。
设计实验如下：对胃癌细胞抑制效果好的组别选取丁酸、缬氨酸、甲硫氨酸，设为组1；对胃癌细胞抑制效果不好的选取B族维生素、天冬氨酸，设为组2。将组1与组2目标物浓度均设为0.5mM，进行两两配对与胃癌细胞作用，采用 CCK-8法检测细胞活性。
表5不同代谢目标物组合对胃癌细胞的抑制率
Figure BDA0003636437480000071
表6不同代谢目标物组合对胃癌细胞的抑制率
Figure BDA0003636437480000072
不同代谢目标物组合对胃癌细胞的抑制率如表5-6所示，丁酸与B族维生素联用可显著增强对胃癌细胞杀伤作用。
实施例2
考察由维生素B2与维生素B9组合，或者维生素B2与维生素B12组合，或者维生素B2、维生素B9和维生素B12组合协同增强丁酸盐对BGC-823胃癌细胞的抑制作用。
采用CCK-8法检测，首先检测丁酸盐对胃癌细胞抑制作用浓度梯度，丁酸盐浓度分别设为0.1mM、0.5mM、1mM、2.5mM、5mM、10mM、50mM、100mM，如图2A所示，当丁酸盐浓度达到5mM时对胃癌细胞抑制率达到饱和。
其次，重复实施例1细胞培养及CCK-8实验，加药分为两组，一组为单独维生素B2，另一组为丁酸盐5mM联合不同浓度维生素B2，维生素B2浓度分别为0.5μM、1μM、5μM、10μM、50μM、100μM、250μM、500μM、1000μM；如图2B所示，当维生素B2浓度为50μM时与丁酸盐5mM联合对胃癌细胞抑制率最高。
最后，将联合作用途径分为两组，组1为丁酸盐5mM+维生素B2 50μM+不同浓度维生素B12组，组2为丁酸盐5mM+维生素B2 50μM+不同浓度维生素 B9组，组1及组2中维生素B12、维生素B9浓度梯度分别为0.1μM、1μM、10μM、 100μM、250μM、500μM、1000μM。如图2C所示，维生素B12和维生素B9均可不同程度的增强维生素B2联合丁酸盐对胃癌细胞的杀伤作用。
在上述实验基础上，重复实施例1细胞培养及CCK-8实验，加入丁酸盐 5mM+维生素B2 50μM+维生素B12 50μM+维生素B9 50μM；如图2C所示，丁酸盐与B族维生素联用可显著增强对胃癌细胞的杀伤作用。
实施例3
考察维生素B2与维生素B9组合，或者维生素B2与维生素B12组合，或者维生素B2、维生素B9和维生素B12组合和丁酸盐联用促使BGC-823胃癌细胞形态学的改变。
图3为24h细胞培养的光镜图，如图3所示，丁酸盐与维生素B2单独或者维生素B2与维生素B12、维生素B9中的一种或者几种组合的联用处理后的 BGC-823细胞出现了类似于分化细胞的形态学改变，如图3C、3D黑色箭头示例，细胞的伸长/拉伸提示丁酸盐和B族维生素联用对胃癌细胞的分化产生影响。
实施例4
对丁酸盐和维生素B2联用处理BGC-823细胞后进行流式细胞分析。
相比较于丁酸盐和维生素B2单独对BGC-823细胞的作用，如图4A所示，对照组BGC-823细胞凋亡率为9.1％，维生素B2 50μM作用凋亡率为10.9％，丁酸盐5mM作用凋亡率为39％，丁酸盐5mM+维生素B2 50μM凋亡率为49.3％；
丁酸盐+维生素B2联用可以提高BGC-823细胞的凋亡率；如图4B所示，对照组BGC-823细胞周期中Sub-G1期、G0-G1期(2倍体)、G2/M期(4倍体) 比例分别为4.5％、60.2％、15.3％；维生素B2 50μM单独作用细胞周期比例变化不明显；丁酸盐5mM作用后，Sub-G1期、G0-G1期(2倍体)、G2/M期(4倍体) 比例分别为11.5％、40.7％、35.2％；丁酸盐5mM+维生素B250μM作用后，Sub-G1期、G0-G1期(2倍体)、G2/M期(4倍体)比例分别为15.9％、40.7％、41.8％；丁酸盐+维生素B2联用可以使细胞周期聚集发生改变，处于Sub-G1期和G2/M 期的细胞比例上升。
实施例5
丁酸盐和B族维生素联用对BGC-823小鼠成瘤的影响。
在裸鼠皮下注射BGC-823细胞诱导成瘤，分为五组，每组六只。将BGC-823 肿瘤细胞(8-10×106cells/只小鼠)皮下接种于C57/BL6裸鼠(5-8周，18-22g)的后肢。当肿瘤平均体积达到300mm3(接种后6天)时，老鼠被随机分为五组(每组六只)，然后直接注入肿瘤细胞及50μL的目标物溶液，依次为：生理盐水、维生素B2 50μM、丁酸盐5mM、丁酸盐5mM+维生素B250μM、丁酸盐5mM+维生素B2 50μM+维生素B12 50μM+维生素B9 50μM。注射后，进行20天的随访实验，每隔一天用游标卡尺测量肿瘤大小，计算肿瘤体积(TV)，TV＝1/2×a×b2(其中a和b表示肿瘤最短和最长直径，单位为mm)，并对所有被试小鼠的体重和临床情况进行观察。相对肿瘤体积(RTV)计算公式如下:RTV＝TVt/TV0。TVt为分组处理时肿瘤体积的平均值。TV0为治疗前肿瘤体积的平均值。
如图5所示，生理盐水对照组相对肿瘤体积第2、5、10、15、20天的数值分别为2.54％±0.52％、5.24％±0.91％、7.87％±1.02％、16.53％±1.03％、 24.34％±2.04％；维生素B2 50μM组相对肿瘤体积与对照组无显著差异；丁酸盐 5mM组与对照组从第15天出现显著差异；丁酸盐5mM+维生素B2 50μM组和丁酸盐5mM+维生素B2 50μM+维生素B1250μM+维生素B9 50μM组从第 10天开始出现显著差异。实验期间各组裸鼠体重无显著统计学差异(p＞0.05)。
实施例6
应用Western blot检测丁酸盐和维生素B2联合使用对胃癌细胞系BGC-823 中PTEN、PI3K分子水平的表达情况。如图6所示，试验结果表明，丁酸盐和维生素B2联合使用能够显著上调BGC-823细胞中PTEN蛋白表达水平，进而下调PI3K的蛋白表达水平。该试验结果提示，丁酸盐和维生素B2联合使用可能一PTEN/PI3K信号通路作为靶标发挥作用，从而诱导细胞凋亡和分化。

Claims (8)

1.一种B族维生素和丁酸盐组合物在制备对胃癌细胞杀伤的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述B族维生素为维生素B2，或者维生素B2与维生素B9组合，或者维生素B2与维生素B12组合，或者维生素B2、维生素B9和维生素B12组合。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述胃癌细胞为低分化胃癌细胞BGC-823细胞系。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述丁酸盐为丁酸或者丁酸钠。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述维生素B2与丁酸盐的浓度比为0.5μM-500μM：0.5mM-10mM。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述维生素B2、维生素B9与丁酸盐的浓度比为0.5μM-250μM：0.5μM-250μM：0.5mM-10mM。
7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述维生素B2、维生素B12与丁酸盐的浓度比为0.5μM-250μM：0.5μM-100μM：0.5mM-10mM。
8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述维生素B2、维生素B12、维生素B9与丁酸盐的浓度比为0.5μM-250μM：0.5μM-100μM：0.5μM-250μM：0.5mM-10mM。
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Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1045351A (zh) * 1989-03-10 1990-09-19 兰州医学院第一附属医院 一种治疗慢性萎缩性胃炎药物的制造方法
EP0572922A1 (de) * 1992-06-05 1993-12-08 ASTA Medica Aktiengesellschaft Synergistische Kombination von Liponsäure und Vitaminen in Arzneimitteln
CN1147917A (zh) * 1996-09-07 1997-04-23 李善民 灵芝猴头饮料的制做方法
CN1823766A (zh) * 2006-03-30 2006-08-30 胡正岳 一种复方氨基酸维生素分散片及其制备方法
AU2005229753A1 (en) * 2005-11-08 2007-05-24 Alice Wai Fun Ma A botanical composition for aiding optimal health and prevention of illness
CN101081225A (zh) * 2006-05-31 2007-12-05 房静远 一种通过调节表观遗传修饰防治胃肠肿瘤的药物组合物
CN101478959A (zh) * 2006-06-26 2009-07-08 诺瓦提斯公司 有机化合物
CN104072593A (zh) * 2014-07-03 2014-10-01 江苏大学 一种具有抗肿瘤和凝集活性的猴头菌糖蛋白及其制备方法
US20150094277A1 (en) * 2011-08-15 2015-04-02 Mihai Ciustea Combination therapy and methods for treatment and prevention of hyperproliferative diseases

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1045351A (zh) * 1989-03-10 1990-09-19 兰州医学院第一附属医院 一种治疗慢性萎缩性胃炎药物的制造方法
EP0572922A1 (de) * 1992-06-05 1993-12-08 ASTA Medica Aktiengesellschaft Synergistische Kombination von Liponsäure und Vitaminen in Arzneimitteln
CN1147917A (zh) * 1996-09-07 1997-04-23 李善民 灵芝猴头饮料的制做方法
AU2005229753A1 (en) * 2005-11-08 2007-05-24 Alice Wai Fun Ma A botanical composition for aiding optimal health and prevention of illness
CN1823766A (zh) * 2006-03-30 2006-08-30 胡正岳 一种复方氨基酸维生素分散片及其制备方法
CN101081225A (zh) * 2006-05-31 2007-12-05 房静远 一种通过调节表观遗传修饰防治胃肠肿瘤的药物组合物
CN101478959A (zh) * 2006-06-26 2009-07-08 诺瓦提斯公司 有机化合物
US20150094277A1 (en) * 2011-08-15 2015-04-02 Mihai Ciustea Combination therapy and methods for treatment and prevention of hyperproliferative diseases
CN104072593A (zh) * 2014-07-03 2014-10-01 江苏大学 一种具有抗肿瘤和凝集活性的猴头菌糖蛋白及其制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PARAMITA KHAIRAN，等: "Association of B Vitamins and Methionine Intake with the Risk of Gastric Cancer: The Japan Public Health Center-based Prospective Study", CANCER PREVENTION RESEARCH (PHILADELPHIA), vol. 15, no. 2, pages 101 - 110 *
R OGURA，等: "Anti-oxidative effects of vitamin B2-butyrate on the cardiac mitochondrial disorders induced by adriamycin", vol. 28, no. 4, pages 329 - 334 *
沈嘉琪: "蜂胶的抗癌作用", 黑龙江科技信息, no. 19, pages 68 *
甘云辉，等: "斑蝥酸钠维生素B6注射液联合SOX方案对晚期胃癌患者miR-18a、miR-34a及免疫细胞计数的影响", vol. 26, no. 26, pages 1551 - 1555 *

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