CN115029412A - 一种铀酰离子荧光传感核酸探针、试剂盒、制备方法与应用 - Google Patents

一种铀酰离子荧光传感核酸探针、试剂盒、制备方法与应用 Download PDF

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李云
付军
唐伟
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Abstract

本发明提供了铀酰离子荧光传感核酸探针、试剂盒、制备方法与应用，属于铀酰离子检测技术领域，所述探针的基底链序列为2‑AP‑39S：5’‑ACTHMNTATGGAAGAGATGGACGTG‑3’；所述探针的酶链序列为39E：5’‑CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAYTDAGT‑3’；所述HMN为AMA、TMA、CMA、CMT、AMC、TMC、AMG、TMG、CMG中的任意一种，其中，所述基底链序列中的M为2‑AP，H与D互补配对，N与Y互补配对。该荧光传感核酸探针无需多基团修饰，可大幅降低探针制备的成本，由于2‑AP深埋于DNA结构内部，可有效提升实际检测过程中探针的抗干扰性。此外，本发明的荧光传感核酸探针特异性强，响应时间短，灵敏度高，是一种现场化检测铀酰离子的便携式产品。

Description

一种铀酰离子荧光传感核酸探针、试剂盒、制备方法与应用
技术领域
本发明属于铀酰离子检测的技术领域，尤其涉及一种铀酰离子荧光传感核酸探针、试剂盒、制备方法与应用。
背景技术
铀酰离子(UO2 2+)是金属铀在水体中稳定存在的主要形式，具有很强的化学毒性，大量研究表明饮用水中铀酰离子浓度高于30μg/L(130nM)时会对肾、肺、肝等器官的功能造成严重破坏，因此，我国在2017年最新制定《HJ 840-2017环境样品中微量铀的分析方法》中严格规定了微量铀的排放标准。铀矿开采与提炼、核燃料循环、乏燃料后处理、核部件加工等过程都会产生大量的含铀废液，铀酰离子检测技术是铀废液精准分析、有效处理、安全排放等环节的关键基础技术之一，在很大程度上影响着涉核企业生产效率及区域环境安全。
现阶段最成熟的铀酰离子检测主要基于微量铀分析仪、质谱等设备的分析技术，从元素种类入手，通过原子核本征属性及核外电子电离效应，定性、定量测定铀酰离子。这些技术虽然具备很高的检测精度和灵敏度，但由于设备昂贵、体积较大、需要较多的制样处理程序等因素，使得铀酰离子检测的时间成本和经济成本偏高，且难以发展成为具备现场化检测能力的便携式装备。
2-氨基嘌呤(缩写为2-AP)，是腺嘌呤(缩写为A)的同分异构体，而A是组成DNA的四种碱基之一，因其与腺嘌呤结构相似，现有研究已经完全证实，2-AP与T配对并不影响DNA的稳定性，也不影响其双链结构，与A不同的是，2-AP具有荧光性质(激发波长为315nm，发射波长为365nm)，而且，2-AP在双链DNA中，其荧光强度会由于碱基之间的π-π堆叠而淬灭，在单链DNA中，由于π-π堆叠的破坏，2-AP的荧光强度会恢复。因此，采用2-AP取代A，即将2-AP内植于DNA中，并利用双链DNA与目标物发生相互作用之后双链结构的破坏，进行荧光传感，是分子生物学、生物传感领域常见的方式。
DNAzyme(39E/39S，下文中的DNAzyme如无特殊说明，均指39E/39S)，是一种经过体外筛选和特殊改造的DNA结构，含有基底链和酶链两条序列，其中基底序列含有一个切割位点，酶序列含有识别并结合金属离子的核酸“口袋”(催化反应区)，离子进入口袋后会引起基底链在切割位点处断裂。由于DNAzyme对相应金属离子具有极强的专一识别度、敏感度，切断反应也可瞬时完成，因此该类探针与其他探针相比更具实际应用的潜力。但传统DNAzyme探针仍存在诸多弊端：1)该荧光探针需要多基团修饰，每个探针至少需要三个功能基团予以修饰，导致信号基团的修饰耗时、成本高；2)信号基团裸露，易受环境中杂质干扰；3)传感体系信噪比低，导致检测灵敏度受限。
发明内容
有鉴于此，为了克服上述技术问题，本发明的目的在于提供一种成本低、灵敏度高、抗干扰性好的新一代铀酰离子荧光传感核酸探针及其试剂盒。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种铀酰离子荧光传感核酸探针，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTHMNTATGGAAGAGATGGACGTG-3’；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAYTDAGT-3’；所述HMN为AMA、TMA、CMA、CMT、AMC、TMC、AMG、TMG、CMG中的任意一种，其中，所述基底链序列中的M为2-AP，H与D互补配对，N与Y互补配对。
本发明提供了还提供了一种荧光传感核酸探针的制备方法，包括以下步骤：
分别将2-AP-39S、39E与缓冲溶液混合，得到2-AP-39S溶液和39E溶液，混合2-AP-39S溶液和39E溶液得到混合溶液后进行退火，即得。
优选地，所述缓冲溶液包括以下浓度的成分：NaCl 200～400mM，MES45～55mM。
优选地，所述2-AP-39S溶液和39E溶液的摩尔比为1:1.2～1.7。
优选地，所述退火的方式为将所述混合溶液2min内加热至95℃，保持95℃的温度5min，之后在1h内由95℃冷却至4℃，自然恢复至室温。
优选地，所述缓冲溶液的pH为5.0～6.3。
本发明还提供了一种用于检测铀酰离子的试剂盒，所述试剂盒包括上述荧光传感核酸探针。
优选地，所述试剂盒还包括缓冲溶液，所述缓冲溶液包括以下浓度的成分：NaCl200～400mM，MES 45～55mM，pH为5.0～6.3。
本发明还提供了一种上述荧光传感核酸探针或试剂盒在制备检测铀酰离子产品中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明首次提出了一种铀酰离子荧光传感核酸探针，该荧光传感核酸探针为2-AP内植式荧光探针，无需多基团修饰，可大幅降低探针制备的成本。相比于传统铀酰离子荧光核酸探针功能基团裸露的情况，由于2-AP深埋于DNA结构内部，可有效提升实际检测过程中探针的抗干扰性。此外，本发明的荧光传感核酸探针特异性强，响应时间短，灵敏度高，是一种现场化检测铀酰离子的便携式产品。
附图说明
图1为铀酰离子荧光传感核酸探针的二级结构；
图2为不同铀酰离子荧光传感核酸探针的荧光增强的结果图；
图3为当HMN为TMG时，荧光传感核酸探针对铀酰离子检测灵敏度的结果；
图4为当所述HMN为TMG时，荧光传感核酸探针对不同浑浊度状态下杂质离子的抗干扰性。
具体实施方式
本发明提供了一种铀酰离子荧光传感核酸探针，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTHMNTATGGAAGAGATGGACGTG-3’；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAYTDAGT-3’；所述HMN为AMA、TMA、CMA、CMT、AMC、TMC、AMG、TMG、CMG中的任意一种，其中，所述基底链序列中的M为2-AP，H与D互补配对，N与Y互补配对。
其中，当所述HMN为AMA时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTAMATATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ ID NO:1)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATATTTAGT-3’(SEQ ID NO:2)。当所述HMN为TMA时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTTMATATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ ID NO:3)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATATTAAGT-3’(SEQ ID NO:4)。当所述HMN为CMA时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTCMATATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ ID NO:5)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATATTGAGT-3’(SEQ ID NO:6)。当所述HMN为CMT时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTCMTTATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ ID NO:7)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAATGAGT-3’(SEQ ID NO:8)。当所述HMN为AMC时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTAMCTATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ ID NO:9)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAGTTAGT-3’(SEQ ID NO:10)。当所述HMN为TMC时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTTMCTATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ ID NO:11)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAGTAAGT-3’(SEQ ID NO:12)。当所述HMN为AMG时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTAMGTATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ ID NO:13)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATACTTAGT-3’(SEQ ID NO:14)。当所述HMN为TMG时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTTMGTATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ IDNO:15)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATACTAAGT-3’(SEQ ID NO:16)。当所述HMN为CMG时，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTCMGTATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ ID NO:17)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATACTGAGT-3’(SEQ ID NO:18)。
在本发明中，研究发现，在DNA结构中影响2-AP的荧光强度的因素很多，比如链的长短、碱基序列、碱基种类等，但目前还尚无一种规律性的理论体系对其进行解释，但是，2-AP在DNA中的荧光强度与紧邻碱基有相当大的关系，紧邻碱基的种类不同，如果DNA结构存在单双链变化，产生的荧光强度差异也不尽相同。当本发明的HMN优选为TMG时，即当2-AP紧邻碱基为5’-TMG-3’时，有最高的信噪比2.75:1，信噪比的提升，使得2-AP-DNAzyme对铀酰离子的检测下限提升至0.3nM，且在0.3～800nM范围内可产生进行线性响应，对高信噪比的2-AP-DNAzyme进行了抗干扰性测试，其对UO2 2+的选择性是同价态金属离子的400000倍以上。
本发明还提供了一种荧光传感核酸探针的制备方法，包括以下步骤：
分别将2-AP-39S、39E与缓冲溶液混合，得到2-AP-39S溶液和39E溶液，混合2-AP-39S溶液和39E溶液得到混合溶液后进行退火，即得。
在本发明中，分别将2-AP-39S、39E与缓冲溶液混合，得到2-AP-39S溶液和39E溶液。本发明荧光传感核酸探针是一种2-AP内植式DNAzyme，理论上，当缓冲溶液的pH为弱碱性时(如7.4)，双链DNA具有更好的稳定性，但在碱性环境中，DNAzyme与捕获铀酰离子发生的切断反应后，断裂链不能顺利脱离，2-AP与紧邻碱基的π-π堆叠作用就不能及时消除，会导致2-AP的荧光无法发出，这不利于传感信噪比的提升，且铀酰离子只能在酸性环境中稳定存在，故所述缓冲溶液的pH优选为5.0～6.3，传感信噪比最高，传感稳定性最好。
在本发明中，盐浓度在一定程度上决定着DNAzyme的稳定性，理论上盐浓度越大双链DNA越稳定，然而，过大的盐浓度将导致切断反应发生后产生的残链无法脱离，影响信噪比；而当盐浓度过小时，DNAzyme的双链结构不稳定，这同样会导致传感反应产生较高的背景噪音，从而影响最终的信噪比，因此，本发明所述缓冲溶液优选的包括以下浓度的成分：NaCl200～400mM，MES 45～55mM，传感信噪比最高，传感稳定性最好。
为保证取得更高的信噪比从而获得更大的传感灵敏度，必须保证传感体系有较低的背景噪音，同时不能影响传感的顺利进行，在本发明中，鉴于2-AP内植于基底链中，我们调控了酶链的比例。随着酶链比例的提升，传感体系的荧光背景噪音逐渐下降，但酶链的比例并不是越高越好，因为酶链本身也会捕获铀酰离子，过高的酶链比例会导致传感受影响，在本发明中，所述2-AP-39S溶液和39E溶液的摩尔比优选为1:1.2～1.7，本发明的传感信噪比最高，传感稳定性最好。
在本发明中，混合2-AP-39S溶液和39E溶液得到混合溶液后进行退火，即得。作为一优选的实施方式，所述退火的方式为将所述混合溶液2min内加热至95℃，保持95℃的温度5min，之后在1h内由95℃冷却至4℃，自然恢复至室温。
本发明还提供了一种用于检测铀酰离子的试剂盒，所述试剂盒包括上述荧光传感核酸探针。
在本发明中，所述试剂盒还优选地包括缓冲溶液，所述缓冲溶液优选地包括以下浓度的成分：NaCl 200～400mM，MES 45～55mM，pH为5.0～6.3，进一步优选地包括以下浓度的成分：NaCl 250～350mM，MES 48～52mM，pH为5.2～6.0。
本发明还提供了一种上述荧光传感核酸探针或试剂盒在制备检测铀酰离子产品中的应用。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种铀酰离子荧光传感核酸探针的制备方法，步骤如下：
(1)缓冲溶液的制备：用去离子水分别将MES和NaCl配制成50mM MES和300mMNaCl，混合均匀，调节pH为5.5。
(2)用上述缓冲溶液分别配制100mM 2-AP-39S溶液和150mM 39E溶液，分别取50μL100mM 2-AP-39S溶液和50μL 150mM 39E溶液混合得到混合溶液，将混合溶液在2min内由室温加热至95℃，保持95℃的温度5min，之后在1小时内将混合液由95℃冷却至4℃，自然恢复至室温，即得铀酰离子荧光传感核酸探针溶液；
其中所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTHMNTATGGAAGAGATGGACGTG-3’；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAYTDAGT-3’；其中，所述基底链序列中的M为2-AP，H为A、T、C、G中的任意一种碱基，N为A、T、C、G中的任意一种碱基，H与D互补配对，N与Y互补配对。
其中所述铀酰离子荧光传感核酸探针的二级结构如图1所示，rA表示核糖苷(切割位点)、M表示2-AP，其中
Figure BDA0003646599300000071
Figure BDA0003646599300000072
划横线加粗部分为释放部分，其余为非释放部分。
实验例2
一种用于检测铀酰离子的试剂盒，包括缓冲溶液和铀酰离子荧光传感核酸探针；其中所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTHMNTATGGAAGAGATGGACGTG-3’；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAYTDAGT-3’；其中，所述基底链序列中的M为2-AP，所述HMN为AMA、TMA、CMA、CMT、AMC、TMC、AMG、TMG、CMG中的任意一种。
其中，缓冲溶液的制备：用去离子水分别将MES和NaCl配制成50mM MES和300mMNaCl，混合均匀，调节pH为5.5。
实施例3
一种铀酰离子荧光传感核酸探针的制备方法，步骤如下：
(1)缓冲溶液的制备：用去离子水分别将MES和NaCl配制成45mM MES和200mMNaCl，混合均匀，调节pH为5.0。
(2)用上述缓冲溶液分别配制100mM 2-AP-39S溶液和120mM 39E溶液，分别取50μL100mM 2-AP-39S溶液和50μL 120mM 39E溶液混合得到混合溶液，将混合溶液在2min内由室温加热至95℃，保持95℃的温度5min，之后在1小时内将混合液由95℃冷却至4℃，自然恢复至室温，即得铀酰离子荧光传感核酸探针溶液；
其中所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTHMNTATGGAAGAGATGGACGTG-3’；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAYTDAGT-3’；其中，所述基底链序列中的M为2-AP，所述HMN为AMA、TMA、CMA、CMT、AMC、TMC、AMG、TMG、CMG中的任意一种。
实施例4
一种铀酰离子荧光传感核酸探针的制备方法，步骤如下：
(1)缓冲溶液的制备：用去离子水分别将MES和NaCl配制成55mM MES和400mMNaCl，混合均匀，调节pH为6.3。
(2)用上述缓冲溶液分别配制100mM 2-AP-39S溶液和170mM 39E溶液，分别取50μL100mM 2-AP-39S溶液和50μL 170mM 39E溶液混合得到混合溶液，将混合溶液在2min内由室温加热至95℃，保持95℃的温度5min，之后在1小时内将混合液由95℃冷却至4℃，自然恢复至室温，即得铀酰离子荧光传感核酸探针溶液；
其中所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTHMNTATGGAAGAGATGGACGTG-3’；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAYTDAGT-3’；其中，所述基底链序列中的M为2-AP，所述HMN为AMA、TMA、CMA、CMT、AMC、TMC、AMG、TMG、CMG中的任意一种。
实施例5
本实施例与实施例2的不同之处在于，缓冲溶液的制备：用去离子水分别将MES和NaCl配制成45mM MES和200mM NaCl，混合均匀，调节pH为5.0，其余相同。
实施例6
本实施例与实施例2的不同之处在于，，缓冲溶液的制备：用去离子水分别将MES和NaCl配制成55mM MES和400mM NaCl，混合均匀，调节pH为6.3，其余相同。
试验例1
将实施例1步骤(2)制得的探针溶液用缓冲溶液稀释，得到2.5μM的探针溶液，将400μL探针溶液置于标准石英比色皿，采用荧光计(PTI QM-40；Horiba、加拿大)进行测试，其中激发光为315nm，发射光为365nm，测试铀酰离子时，将800nM 40μL铀酰离子溶液加入含有400μL探针溶液的比色皿中，监测10分钟内溶液荧光强度的变化。
由图2可知，2-AP紧邻的碱基种类不同，其荧光强度也不相同，而当所述HMN为CMC的传感信噪比仅为1.35:1，当所述HMN为AMA、TMA、CMA、CMT、AMC、TMC、AMG、TMG、CMG、GMA时，其荧光增强初始速率均比所述HMN为CMC的高，尤其是当所述HMN为TMG荧光增强初始速率最高，有最高的传感信噪比2.75：1。
试验例2
当所述HMN为TMG时，有最高的信噪比，故对该探针进行了不同浓度铀酰离子的检测研究，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTTMGTATGGAAGAGATGGACGTG-3’(SEQ IDNO:15)；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATACTAAGT-3’(SEQ ID NO:16)。
将该探针溶液用缓冲溶液稀释，得到2.5μM的探针溶液，将400μL探针溶液置于标准石英比色皿，采用荧光计(PTI QM-40；Horiba、加拿大)进行测试，其中激发光为315nm，发射光为365nm，测试铀酰离子时，将40μL不同浓度铀酰离子溶液(100pM、300pM、500pM、800pM、1nM、3nM、5nM、8nM、10nM、30nM、50nM、80nM、100nM、300nM、500nM、800nM、2μM)加入含有400μL探针溶液的比色皿中，监测10分钟内溶液荧光强度的变化。
由图3可知，当所述HMN为TMG时，该探针对铀酰离子的检测下限为0.3nM，且在0.3～800nM范围内可产生进行线性响应。
将400μL浓度为2.5μM的探针溶液置于标准石英比色皿，采用荧光计(PTI QM-40；Horiba、加拿大)进行测试，其中激发光为315nm，发射光为365nm，测试干扰金属离子时，将40μL不同浑浊度(NTU)的干扰金属离子溶液(NTU＝2,20,50,100)加入含有400μL探针溶液的比色皿中，监测10分钟内溶液荧光强度的变化，干扰金属离子的种类包括：Ca2+，Mn2+，Cu2 +，Ni2+，Zn2+，Co2+，Cd2+，Mg2+，Pb2+。
由图4结果表明，通过抗干扰性测试，其对UO2 2+的选择性是同价态金属离子的350000倍以上，同时也对不同浑浊度的样品具有相当的耐受性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 中国工程物理研究院材料研究所
<120> 一种铀酰离子荧光传感核酸探针、试剂盒、制备方法与应用
<160> 18
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
actamatatg gaagagatgg acgtg 25
<210> 2
<211> 52
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<400> 2
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<211> 52
<212> DNA
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<400> 4
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<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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actcmatatg gaagagatgg acgtg 25
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cacgtccatc tctgcagtcg ggtagttaaa ccgaccttca gacatattga gt 52
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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actcmttatg gaagagatgg acgtg 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cacgtccatc tctgcagtcg ggtagttaaa ccgaccttca gacataatga gt 52
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cacgtccatc tctgcagtcg ggtagttaaa ccgaccttca gacatagtta gt 52
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Claims (9)

1.一种铀酰离子荧光传感核酸探针，其特征在于，所述探针的基底链序列为2-AP-39S：5’-ACTHMNTATGGAAGAGATGGACGTG-3’；所述探针的酶链序列为39E：5’-CACGTCCATCTCTGCAGTCGGGTAGTTAAACCGACCTTCAGACATAYTDAGT-3’；所述HMN为AMA、TMA、CMA、CMT、AMC、TMC、AMG、TMG、CMG中的任意一种，其中，所述基底链序列中的M为2-AP，H与D互补配对，N与Y互补配对。
2.根据权利要求1所述荧光传感核酸探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
分别将2-AP-39S、39E与缓冲溶液混合，得到2-AP-39S溶液和39E溶液，混合2-AP-39S溶液和39E溶液得到混合溶液后进行退火，即得。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液包括以下浓度的成分：NaCl 200～400mM，MES 45～55mM。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述2-AP-39S溶液和39E溶液的摩尔比为1:1.2～1.7。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述退火的方式为将所述混合溶液2min内加热至95℃，保持95℃的温度5min，之后在1h内由95℃冷却至4℃，自然恢复至室温。
6.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH为5.0～6.3。
7.一种用于检测铀酰离子的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～6任意一项所述的荧光传感核酸探针。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括缓冲溶液，所述缓冲溶液包括以下浓度的成分：NaCl 200～400mM，MES 45～55mM，pH为5.0～6.3。
9.根据权利要求1所述的荧光传感核酸探针或权利要求2～6任意一项制备方法制得的荧光传感核酸探针或权利要求7或8所述的试剂盒在制备检测铀酰离子产品中的应用。
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