CN115028700A

CN115028700A - 一种调控野牡丹属植物花色形成的转录因子及其编码基因和应用

Info

Publication number: CN115028700A
Application number: CN202210739301.0A
Authority: CN
Inventors: 彭东辉; 郝杨; 刘仲健; 陈桂珍; 黄捷; 陈进燎; 石晓玲; 杨松敏
Original assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Current assignee: Fujian Agriculture and Forestry University
Priority date: 2022-06-28
Filing date: 2022-06-28
Publication date: 2022-09-09

Abstract

本发明公开了一种调控野牡丹属植物花色形成的转录因子及其编码基因和应用。所述的转录因子包括MedPAP1和MedTT8，MedPAP1的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，MedTT8的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。利用瞬时表达方法分别转化至本氏烟草叶片及白花蝴蝶兰花瓣及萼片，结果显示，共表达转录因子MedPAP1和MedTT8的编码基因MedPAP1和MedTT8能够使烟草叶片和蝴蝶兰花瓣呈现红色和淡紫红色，并且能够提高烟草及蝴蝶兰花青苷合成途径关键酶基因的表达水平，支持转录因子MedPAP1和MedTT8形成复合体共同调控地菍花色形成。

Description

一种调控野牡丹属植物花色形成的转录因子及其编码基因和应用

技术领域

本发明属于植物基因工程领域，具体涉及一种调控野牡丹属植物花色形成的转录因子及其编码基因和应用。

背景技术

地菍（Melastoma dodecandrum）又名铺地锦和地石榴，为野牡丹科（Melastomataceae）野牡丹属（Melastoma）多年生匍匐状亚灌木植物。地菍在我国广泛分布于长江流域以南各地区，其适应性强、生长快、花期长、花量大、花色艳，植株低矮匍匐，可作为优良的园林观赏植物，开发利用潜力巨大。花色是地菍主要的观赏性状之一，为进一步发挥地菍的园林应用价值，可将花色改良作为其品种开发的新目标。

杂交育种目前是野牡丹属新品种培育的主要手段，通常要经过多代选育获得理想品种，育种周期长且目标性状不稳定。近些年，分子定向育种手段发展迅速，通过转基因技术改变调控观赏性状基因的表达水平，从而获得新表型的转基因植株，最终得到理想的品种。挖掘调控观赏性状的关键基因可为分子育种的开展提供重要的遗传资源和信息。

花青苷是高等植物中重要的次生代谢产物并且分布广泛，能使植物器官呈现红色、紫色和蓝色等，其生物合成途径已被完全解析。花色的本质是花青苷物质在花瓣上的累积而形成。高等植物R2R3-MYB转录因子家族及bHLH转录因子家族参与调控多种生物过程，包括调控次生代谢产物的合成。这两类转录因子在花青苷合成调控中具有重要作用，其功能在模式和非模式植物中都得到了验证。例如，红掌（Anthurium andraeanum）中AaMYB6蛋白和AabHLH1蛋白存在互作关系，调控其佛焰苞呈现粉红色；中国水仙（Narcissus tazettavar. chinensis）NtMYB8蛋白和NtbHLH1蛋白存在互作关系，激活类黄酮合成途径，可能促进副冠中黄酮醇的合成；蜡梅（Chimonanthus praecox）bHLH类转录因子CpTT8是花青素苷合成过程中正向调控因子，其与CpMYB蛋白互相作用共同调控CpANS基因表达进而使蜡梅中花青苷累积。

目前，野牡丹属植物未见到关于其花色等观赏性状形成的分子机制研究报道，其花色形成分子机制尚不明确。为使地菍得到进一步的开发利用，丰富野牡丹属观赏品种资源，有必要揭示调控地菍花色形成的分子机制，为其新花色品种的培养提供重要的分子资源。

发明内容

本发明的目的在于提供一种调控野牡丹属植物花色形成的转录因子及其编码基因和应用，从地菍中克隆得到调控野牡丹属植物花色形成的转录因子MedPAP1和MedTT8的编码基因MedPAP1和MedTT8，并且明确这两个转录因子的应用，即转录因子MedPAP1和转录因子MedTT8在调控野牡丹属植物花色形成及调控野牡丹属植物中花青苷合成中的应用。

本发明采取的技术方案是：

本发明首先提供了一种调控野牡丹属植物花色形成的转录因子，所述的转录因子包括转录因子MedPAP1和转录因子MedTT8，MedPAP1的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，MedTT8的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。

本发明进一步提供了一种编码上述的转录因子的基因，所述的基因包括基因MedPAP1和基因MedTT8，基因MedPAP1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，基因MedTT8的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

本发明还提供了一种用于扩增上述的基因的引物，扩增基因MedPAP1的引物为：

MedPAP1_KF：5’-ATGAGGGTGAAGTCGAGTC-3’，

MedPAP1_KR：5’- TCACGCGACGGGTTGAGG-3’；

扩增基因MedTT8的引物为：

MedTT8_KF：5’- ATGGCCGCGCCGCCTAGT-3’

MedTT8_KR：5’- TGAGTCCGTATGGGGGATGA-3’。

本发明还提供了一种包含上述的基因的重组载体。

本发明还提供了一种包含上述的基因或上述的重组载体的重组菌。

本发明还提供了上述的转录因子及其编码基因在调控野牡丹属植物花色形成及调控野牡丹属植物中花青苷合成中的应用。具体的，在野牡丹属植物共表达转录因子MedPAP1和MedTT8的编码基因MedPAP1和MedTT8，可提高野牡丹属植物中花青苷的含量，进而使花色发生变化。

本发明的显著优点在于：

本发明克隆了与野牡丹属植物花色形成相关的转录因子MedPAP1和MedTT8的编码基因MedPAP1和MedTT8，进一步将构建的pMDC202-MedPAP1和pMDC202-MedTT8重组植物表达载体转化烟草和白花蝴蝶兰，证明转录因子MedPAP1和转录因子MedTT8二者之前存在互作关系，二者共同参与调控花青苷物质合成，提高野牡丹属植物中花青苷的含量。转录因子MedPAP1和MedTT8及其编码基因，为通过植物基因工程的手段培育野牡丹属植物新花色品种提供了分子生物学基础。

附图说明

图1为不同处理组的烟草叶片颜色变化情况。

图2为不同处理组的烟草叶片表皮细胞着色情况。

图3为不同处理组的烟草叶片花青苷合成途径结构基因表达情况。

图4为不同处理组的烟草叶片花青苷含量情况。

图5为不同处理组的白花蝴蝶兰花瓣和萼片颜色变化情况。

图6为不同处理组的白花蝴蝶兰花瓣和萼片瞬时表达后解剖示意图。

图7为不同处理组的白花蝴蝶兰花瓣花青苷合成途径结构基因表达情况。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

实施例1：转录因子编码基因MedPAP1和MedTT8的克隆与测序

分别从地菍中分离获得转录因子编码基因MedPAP1和MedTT8，其序列分别如SEQID No.1~2和SEQ ID No.3~4所示。根据SEQ ID No.1所示序列设计MedPAP1引物对，根据SEQID No.3所示序列设计MedTT8引物对：

MedPAP1_KF：5’-ATGAGGGTGAAGTCGAGTC-3’，

MedPAP1_KR：5’- TCACGCGACGGGTTGAGG-3’；

MedTT8_KF：5’- ATGGCCGCGCCGCCTAGT-3’，

MedTT8_KR：5’- TGAGTCCGTATGGGGGATGA-3’。

取地菍花瓣，采用植物总RNA提取试剂盒（购自天根生化科技（北京）有限公司）提取总RNA，用反转录试剂盒（购自宝日医（TaKaRa）生物技术（北京）有限公司）按试剂盒的方法进行反转录，以得到的cDNA片段作为模板利用MedPAP1_KF / MedPAP1_KR和MedTT8_KF /MedTT8_KR引物进行PCR扩增。

将扩增获得的转录因子编码基因MedPAP1和MedTT8分别连入18-T载体（购自宝日医（TaKaRa）生物技术（北京）有限公司），筛选阳性克隆并测序，获得所需的CDS序列。将该测序正确的阳性克隆分别命名为MedPAP1-T和MedTT8-T质粒。

实施例2：重组植物表达载体pMDC202- MedPAP1和pMDC202- MedTT8的构建

设计含有同源序列的重组引物：

MedPAP1_KLF：5‘-ggagaggacctcgactctagaATGAGGGTGAAGTCGAGTCT-3‘，

MedPAP1_KLR：5‘-ctcattttttctaccggtaccTCACGCGACGGGTTGAGG-3‘；

MedTT8_KLF：5‘-ggagaggacctcgactctagaATGGCCGCGCCGCCTAGT-3‘，

MedTT8_KLR：5‘-ctcattttttctaccggtaccTGAGTCCGTATGGGGGATGA-3‘。

以测序正确的MedPAP1-T和MedTT8-T载体质粒作为模板，加入含有同源序列的重组引物进行PCR扩增，得到带有表达载体同源序列的目的基因CDS。以pMDC202-GFP作为表达载体，经双酶切线性化及纯化回收后，将目的基因插入表达载体，完成重组质粒构建，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中并进行扩繁，进行阳性克隆检测及测序，得到重组植物表达载体pMDC202-MedPAP1和pMDC202-MedTT8。

实施例3：侵染菌液制备

将已经构建好的重组植物表达载体pMDC202-MedPAP1和pMDC202-MedTT8分别转化农杆菌GV3101感受态细胞，PCR筛选阳性转化子。用接种环蘸取含重组植物表达载体的农杆菌，接种于5 mL YEB液体培养基（含50 mg/L庆大霉素、50 mg/L卡那霉素和25 mg/L利福平），28 ℃振荡培养至对数生长期，取2 mL活化菌液接入10 mL YEB液体培养基（含50 mg/L庆大霉素、50 mg/L卡那霉素和25 mg/L利福平）中，28 ℃振荡培养10 h，此时菌液呈浑浊及橙黄色，备用。

称取1.9524 g吗啉乙磺酸（MES）溶于10 mL灭菌水中，得到MES溶液。称取0.1962 g乙酰丁香酮（AS）溶于10 mL二甲基亚枫（DMSO）中，得到AS溶液。称取2.03 g氯化镁（MgCl₂·6H₂O）溶于10 mL灭菌水中，得到MgCl₂溶液。称取4.34 g MS培养基粉末及5 g蔗糖溶于灭菌水并定容至1 L，将pH值调整至5.7，得到MS培养基。取100 mL MS培养基，121 ℃，20 min高压灭菌后向其中加入1 mL MES溶液、1 mL MgCl₂溶液、和100 μL AS溶液后混匀，作为侵染缓冲液，备用。

将前述培养得到的呈浑浊及橙黄色的菌液放入离心机，以8,000 rpm的速度离心8min，弃去上清液；利用配制好的侵染缓冲液冲洗管底的农杆菌，吹打混匀，以8,000 rpm的速度离心8 min，弃去上清液；利用配制好的侵染缓冲液冲洗管底的农杆菌，吹打混匀，以8,000 rpm的速度离心8 min，弃去上清液。利用紫外分光光度计，在离心管中加入适量侵染缓冲液，将菌液OD₆₀₀的值分别调至0.4左右和0.8左右，再在28 ℃培养箱中避光静置3 h，以作为侵染菌液。

实施例4：烟草叶片瞬时表达

使用1 mL的一次性医用注射器吸取适量上述制备好的的侵染菌液（OD₆₀₀=0.4），选取较为幼嫩的本氏烟草叶片，用针头轻轻划伤叶片背部组织，将液体注射进叶片中，一次注射量约为100~200 μL，在同一叶片上注射3~4处，注射后可观察到液体在叶片中的侵染痕迹，表明注射成功。实验设计见表1：各盆烟草进行编号1~9，每盆选择4片叶，编号Y1~Y4，设置3次生物学重复。其中，1~3号烟草：Y1~Y3叶注射含pMDC202-MedPAP1的侵染菌液，Y4叶注射含空载pMDC202的侵染菌液；4~6号烟草：Y1~Y3叶注射含pMDC202-MedTT8的侵染菌液，Y4叶注射含空载pMDC202的侵染菌液；7~9号烟草：Y1~Y3叶注射含pMDC202-MedPAP1和pMDC202-MedTT8的侵染菌液（含pMDC202-MedPAP1的侵染菌液与含pMDC202-MedTT8的侵染菌液等体积比混合），Y4叶注射含空载pMDC202的侵染菌液。

表1 烟草瞬时表达实验设计

注射后放至人工气候箱培养，培养条件为：22℃光照16 h，黑暗8 h，湿度70%。培养4 d后，观察烟草叶片的颜色变化，利用光学显微镜成像系统观察烟草叶片表皮细胞，进行拍照记录。并利用分光光度计法测定烟草叶片花青苷含量。此外，提取烟草叶片总RNA，反转录后利用qRT-PCR技术分析烟草叶片花青苷途径相关结构基因的表达情况。

从图1中可以看出，pMDC202-MedTT8组烟草叶片未变红，pMDC202-MedPAP1组烟草叶片表面形成一些不规则的红斑、而非片状成色，pMDC202-MedPAP1+pMDC202-MedTT8组烟草叶片变红。

从图2中可以看出，pMDC202-MedTT8组烟草叶片表皮细胞与pMDC202组烟草叶片表皮细胞均未出现着色情况；与对照组pMDC202组相比，pMDC202-MedPAP1组烟草叶片小部分表皮细胞出现颜色变深变红的特征；与对照组pMDC202组、pMDC202-MedTT8组和pMDC202-MedPAP1组相比，pMDC202-MedPAP1+pMDC202-MedTT8组烟草叶片大部分细胞变红颜色变深，且面积相对较大。

从图3中可以看出，与对照组pMDC202组相比，pMDC202-MedPAP1+pMDC202-MedTT8组烟草叶片中NbCHS、NbCHI、NbF3H等结构基因表达显著上调，pMDC202-MedPAP1组烟草叶片结构基因也有一定程度的表达，表明MedPAP1和MedTT8协同调控地菍花青苷物质合成，而瞬时表达MedPAP1的烟草叶片，与瞬时表达空载的相比，结构基因的表达有略微上调，但并不显著。

从图4中可以看出，与对照组pMDC202组相比，pMDC202-MedPAP1组与pMDC202-MedPAP1+pMDC202-MedTT8组烟草叶片中均检测出了微量的花青苷物质，而pMDC202组和pMDC202-MedTT8组烟草叶片几乎未检测到花青苷物质，推测MedPAP1和MedTT8是调控地菍花色形成的关键基因。

实施例5：白花蝴蝶兰瞬时表达

将上述制备好的侵染菌液（OD₆₀₀=0.8），分别注射进入蝴蝶兰花瓣和萼片，设置3个生物学重复，实验设计见表2。对每朵蝴蝶兰进行1~9编号，每朵蝴蝶兰将花瓣编号H1（左侧花瓣）、H2（右侧花瓣）和H3（上方萼片）。其中，1~3号白花蝴蝶兰：H2~H3注射含pMDC202-MedPAP1的侵染菌液，H1注射含空载pMDC202的侵染菌液；4~6号白花蝴蝶兰：H2~H3注射含pMDC202-MedTT8的侵染菌液，H1注射含空载pMDC202的侵染菌液；7~9号白花蝴蝶兰：H2~H3注射含pMDC202-MedPAP1和pMDC202-MedTT8的侵染菌液（含pMDC202-MedPAP1的侵染菌液与含pMDC202-MedTT8的侵染菌液等体积比混合），H1注射含空载pMDC202的侵染菌液。

表2 白花蝴蝶兰瞬时表达实验设计

注射后放入人工气气候箱培养，培养条件为：24℃光照16 h，黑暗8 h，湿度70%。培养3 d后，观察表型变化并拍照记录。利用qRT-PCR技术对蝴蝶兰花瓣中花青苷途径的结构基因表达情况进行分析。

从图5和图6中可以看出，pMDC202-MedTT8组和pMDC202-MedPAP1组白花蝴蝶兰花瓣和萼片未显色，而pMDC202-MedPAP1+pMDC202-MedTT8组白花蝴蝶兰的花瓣和萼片呈现淡紫红色区域，表明MedPAP1和MedTT8之间存在互作关系，共同参与调控花青苷物质合成。

从图7中可以看出，与瞬时表达空载pMDC202组蝴蝶兰花瓣相比，pMDC202-MedPAP1 +pMDC202-MedTT8组蝴蝶兰花瓣花青苷合成途径的结构基因表达显著上调，表明MedPAP1和MedTT8是调控地菍花色形成的关键基因。

以上所述表明本发明提供给的两个转录因子及其编码基因MedPAP1和MedTT8能够调控转基因植株合成花青苷物质，证明了本发明可行且有效。

以上仅以烟草与蝴蝶兰为例，相应的转录因子及其编码基因也可以应用于其他近缘物种中调控花青苷物质合成，本发明为野牡丹植物花色等观赏性状研究提供了遗传资源，有潜力培育出地菍及其他野牡丹植物新花色品种。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 福建农林大学

<120> 一种调控野牡丹属植物花色形成的转录因子及其编码基因和应用

<130>

<160> 12

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 732

<212> DNA

<213> 地菍（Melastoma dodecandrum）

<400> 1

atgagggtga agtcgagtct cgggttgagg aaaggttctt ggactgagga ggaggatgca 60

ctactccgga agtgcgtgca gcgccacggc gaagggaggt ggcacctcgt tccttgccga 120

gcagggttga accggtgccg gaagagctgc cggctgaggt ggttgaatta ccttaagccg 180

aatataaaga ggggcgagtt ccaggaagac gaggtcgaca ttattatcag actccacaac 240

ctcctgggca atcggtggtc cctgatcgcg ggaagaatcc cggggaggac cgcgaatgac 300

gtgaagaact attggaacac ccaccttgct aagaagacca cattcaaggg cgaaaatccg 360

aaagaacagc ctgaaaaaat agtcaaagtt accgccttta ggccgcgcgc gcgaaccttc 420

tctaagagct tggcttggct cagtggccgg gcaacattga tcacttcgtc cgcccttcga 480

ccagacaaca acatcaccaa taaccacgac tcgcgatctc cagtaatgga agagccttgg 540

tgggaagagt tgttgggcaa cacggacgaa tttgccctag caatcccctc gggagaggat 600

ccgtcggcaa agacagccga agaagcatgc gtcgaggcgc ctgacagggt aaacggtgaa 660

cggtgggacg atctttcctt ggatgtggat ctttggcagt tcttgggcaa cgcacctcaa 720

cccgtcgcgt ga 732

<210> 2

<211> 243

<212> PRT

<213> 地菍（Melastoma dodecandrum）

<400> 2

Met Arg Val Lys Ser Ser Leu Gly Leu Arg Lys Gly Ser Trp Thr Glu

1 5 10 15

Glu Glu Asp Ala Leu Leu Arg Lys Cys Val Gln Arg His Gly Glu Gly

20 25 30

Arg Trp His Leu Val Pro Cys Arg Ala Gly Leu Asn Arg Cys Arg Lys

35 40 45

Ser Cys Arg Leu Arg Trp Leu Asn Tyr Leu Lys Pro Asn Ile Lys Arg

50 55 60

Gly Glu Phe Gln Glu Asp Glu Val Asp Ile Ile Ile Arg Leu His Asn

65 70 75 80

Leu Leu Gly Asn Arg Trp Ser Leu Ile Ala Gly Arg Ile Pro Gly Arg

85 90 95

Thr Ala Asn Asp Val Lys Asn Tyr Trp Asn Thr His Leu Ala Lys Lys

100 105 110

Thr Thr Phe Lys Gly Glu Asn Pro Lys Glu Gln Pro Glu Lys Ile Val

115 120 125

Lys Val Thr Ala Phe Arg Pro Arg Ala Arg Thr Phe Ser Lys Ser Leu

130 135 140

Ala Trp Leu Ser Gly Arg Ala Thr Leu Ile Thr Ser Ser Ala Leu Arg

145 150 155 160

Pro Asp Asn Asn Ile Thr Asn Asn His Asp Ser Arg Ser Pro Val Met

165 170 175

Glu Glu Pro Trp Trp Glu Glu Leu Leu Gly Asn Thr Asp Glu Phe Ala

180 185 190

Leu Ala Ile Pro Ser Gly Glu Asp Pro Ser Ala Lys Thr Ala Glu Glu

195 200 205

Ala Cys Val Glu Ala Pro Asp Arg Val Asn Gly Glu Arg Trp Asp Asp

210 215 220

Leu Ser Leu Asp Val Asp Leu Trp Gln Phe Leu Gly Asn Ala Pro Gln

225 230 235 240

Pro Val Ala

<210> 3

<211> 2106

<212> DNA

<213> 地菍（Melastoma dodecandrum）

<400> 3

atggccgcgc cgcctagtag ccggctacaa ggcatgttgc aagcggcagt ccagtcagtg 60

aagtggactt acagcctctt ctggcaaatc tgtccccaac aagggatatt ggtatgggga 120

gacgggtact acaacggacc gataaagacg aggaagactg tgcagccgat ggaggtgacc 180

gcggaggagg cttccctcca gaggagtcaa cagcttcgcg agctttacga gtcattgtcg 240

gccggggaga cgaaccagcc ccctagacgg ccgtgcgtgg ccctctctcc agaggacttg 300

acagagacgg agtggttcta cctcatgtgc gtgtccttct cgttccctcc cggggtaggg 360

ttgcccggaa aggctcttgc gaggaggcag cacgtatggc agacaggagc taacgaagcg 420

gatagcaaga cattttctag agctatccta gctaagagcg ctcgaatcca gactgtggtt 480

tgcatacctt tactcgacgg cgtggtggaa ttcggctcga cggacaaggt ttccgaagat 540

gtttcattca tcaaccacgt gaagaccttc ttcgtcgacc accacccccc gcaccctccc 600

aagccggccc tctccgaaca ctcaacctca aacccagcgt catccgaaca ccccaggttt 660

cagtccccgg tccaaccccc cgtgtacgtc ccacaagaac ccccggccga tgcgggcaac 720

agggttgagg acgatgaagt agacgaggac aacgacgacg acgaggacga agacgacgac 780

gaggacgaag acgatgattc agactgcgag gccaagacgg gcaggaacag caacaggcag 840

gggttggacc caaacccagg agcggcaact gctgaaccga gcgagtttga gatgtcggag 900

gacataaggc tggggtcacc agacgacggg tcaaacaacc tcgactcgga cttccccatg 960

ctaagcataa accatcaaac ggggagggcg gcggccacgg gtgaccggca aaggttggca 1020

gagtcataca gggcggagtc gacgaggatg tggcaggcgg cagggcagga acaggcggcg 1080

aggagcggcg gcctccattc cccaccttca ggcccgccgc cgcaacctga gctgtcgcac 1140

gaggacgcac actactccca gacggtgtcg accatcctgc agtgccagcc cggtcgatgg 1200

gctgagtcgt cgtcgaatag ctatgcgggc tactcgtccc agtctgcctt ctcgaagtgg 1260

tccgcccgtg ctgatgcagt cctcagcgtg ccctccgagg ggaactcgca gtggctcctc 1320

aagtatatcc tgttcagcgt ccccctgctc cacagccagt gcagggatga gaactccccc 1380

aagtccaggg atggcggaaa cggggcggcg gccaggttta ggaaagggac ccctgcggat 1440

gagctgagcg cgaaccatgt cctggctgag cgacgcaggc gcgagaagct aaacgagagg 1500

ttcatcatcc tgaggtcgct tgtgccgttt gttaccaaga tggacaaggc ctcaatcctc 1560

ggtgacacga tcgagtacgt gaagcagctg aggaagaaga tccaggacct cgaggcaaag 1620

aaccggcaga tggaggccaa gagccggtcg agtccgggag gagaccttca gcgttccacc 1680

agcatgaagg agctgagaac actggcgggc gccagctcgg ggactgaccg gggatccgtg 1740

ggccaggaca agcggaagat gaggatcgtg gaggcaggct ccaaacccaa ggcagtggag 1800

ccgccgctgc cttctcctcc tccaccgcaa ccgacaccca cagagacgag cgtgcaggtc 1860

tcgataatag agagcgatgc gttgctcgag cttcagtgcc cgcacaggga agggctgttg 1920

ctcgacgtga tgcagatgct gagggagcac cggatagagg tcacggctgt ccagtcatcg 1980

ttgacgaacg ggttcttctc cgcggaactg agagcaaagg tgaaggagaa cacgaacgga 2040

aagaaggcga gcatcgtaga ggtgaagaga gcgatccagc agatcatccc ccatacggac 2100

tcatag 2106

<210> 4

<211> 701

<212> PRT

<213> 地菍（Melastoma dodecandrum）

<400> 4

Met Ala Ala Pro Pro Ser Ser Arg Leu Gln Gly Met Leu Gln Ala Ala

1 5 10 15

Val Gln Ser Val Lys Trp Thr Tyr Ser Leu Phe Trp Gln Ile Cys Pro

20 25 30

Gln Gln Gly Ile Leu Val Trp Gly Asp Gly Tyr Tyr Asn Gly Pro Ile

35 40 45

Lys Thr Arg Lys Thr Val Gln Pro Met Glu Val Thr Ala Glu Glu Ala

50 55 60

Ser Leu Gln Arg Ser Gln Gln Leu Arg Glu Leu Tyr Glu Ser Leu Ser

65 70 75 80

Ala Gly Glu Thr Asn Gln Pro Pro Arg Arg Pro Cys Val Ala Leu Ser

85 90 95

Pro Glu Asp Leu Thr Glu Thr Glu Trp Phe Tyr Leu Met Cys Val Ser

100 105 110

Phe Ser Phe Pro Pro Gly Val Gly Leu Pro Gly Lys Ala Leu Ala Arg

115 120 125

Arg Gln His Val Trp Gln Thr Gly Ala Asn Glu Ala Asp Ser Lys Thr

130 135 140

Phe Ser Arg Ala Ile Leu Ala Lys Ser Ala Arg Ile Gln Thr Val Val

145 150 155 160

Cys Ile Pro Leu Leu Asp Gly Val Val Glu Phe Gly Ser Thr Asp Lys

165 170 175

Val Ser Glu Asp Val Ser Phe Ile Asn His Val Lys Thr Phe Phe Val

180 185 190

Asp His His Pro Pro His Pro Pro Lys Pro Ala Leu Ser Glu His Ser

195 200 205

Thr Ser Asn Pro Ala Ser Ser Glu His Pro Arg Phe Gln Ser Pro Val

210 215 220

Gln Pro Pro Val Tyr Val Pro Gln Glu Pro Pro Ala Asp Ala Gly Asn

225 230 235 240

Arg Val Glu Asp Asp Glu Val Asp Glu Asp Asn Asp Asp Asp Glu Asp

245 250 255

Glu Asp Asp Asp Glu Asp Glu Asp Asp Asp Ser Asp Cys Glu Ala Lys

260 265 270

Thr Gly Arg Asn Ser Asn Arg Gln Gly Leu Asp Pro Asn Pro Gly Ala

275 280 285

Ala Thr Ala Glu Pro Ser Glu Phe Glu Met Ser Glu Asp Ile Arg Leu

290 295 300

Gly Ser Pro Asp Asp Gly Ser Asn Asn Leu Asp Ser Asp Phe Pro Met

305 310 315 320

Leu Ser Ile Asn His Gln Thr Gly Arg Ala Ala Ala Thr Gly Asp Arg

325 330 335

Gln Arg Leu Ala Glu Ser Tyr Arg Ala Glu Ser Thr Arg Met Trp Gln

340 345 350

Ala Ala Gly Gln Glu Gln Ala Ala Arg Ser Gly Gly Leu His Ser Pro

355 360 365

Pro Ser Gly Pro Pro Pro Gln Pro Glu Leu Ser His Glu Asp Ala His

370 375 380

Tyr Ser Gln Thr Val Ser Thr Ile Leu Gln Cys Gln Pro Gly Arg Trp

385 390 395 400

Ala Glu Ser Ser Ser Asn Ser Tyr Ala Gly Tyr Ser Ser Gln Ser Ala

405 410 415

Phe Ser Lys Trp Ser Ala Arg Ala Asp Ala Val Leu Ser Val Pro Ser

420 425 430

Glu Gly Asn Ser Gln Trp Leu Leu Lys Tyr Ile Leu Phe Ser Val Pro

435 440 445

Leu Leu His Ser Gln Cys Arg Asp Glu Asn Ser Pro Lys Ser Arg Asp

450 455 460

Gly Gly Asn Gly Ala Ala Ala Arg Phe Arg Lys Gly Thr Pro Ala Asp

465 470 475 480

Glu Leu Ser Ala Asn His Val Leu Ala Glu Arg Arg Arg Arg Glu Lys

485 490 495

Leu Asn Glu Arg Phe Ile Ile Leu Arg Ser Leu Val Pro Phe Val Thr

500 505 510

Lys Met Asp Lys Ala Ser Ile Leu Gly Asp Thr Ile Glu Tyr Val Lys

515 520 525

Gln Leu Arg Lys Lys Ile Gln Asp Leu Glu Ala Lys Asn Arg Gln Met

530 535 540

Glu Ala Lys Ser Arg Ser Ser Pro Gly Gly Asp Leu Gln Arg Ser Thr

545 550 555 560

Ser Met Lys Glu Leu Arg Thr Leu Ala Gly Ala Ser Ser Gly Thr Asp

565 570 575

Arg Gly Ser Val Gly Gln Asp Lys Arg Lys Met Arg Ile Val Glu Ala

580 585 590

Gly Ser Lys Pro Lys Ala Val Glu Pro Pro Leu Pro Ser Pro Pro Pro

595 600 605

Pro Gln Pro Thr Pro Thr Glu Thr Ser Val Gln Val Ser Ile Ile Glu

610 615 620

Ser Asp Ala Leu Leu Glu Leu Gln Cys Pro His Arg Glu Gly Leu Leu

625 630 635 640

Leu Asp Val Met Gln Met Leu Arg Glu His Arg Ile Glu Val Thr Ala

645 650 655

Val Gln Ser Ser Leu Thr Asn Gly Phe Phe Ser Ala Glu Leu Arg Ala

660 665 670

Lys Val Lys Glu Asn Thr Asn Gly Lys Lys Ala Ser Ile Val Glu Val

675 680 685

Lys Arg Ala Ile Gln Gln Ile Ile Pro His Thr Asp Ser

690 695 700

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

atgagggtga agtcgagtc 19

<210> 6

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

tcacgcgacg ggttgagg 18

<210> 7

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

atggccgcgc cgcctagt 18

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

tgagtccgta tgggggatga 20

<210> 9

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

ggagaggacc tcgactctag aatgagggtg aagtcgagtc t 41

<210> 10

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

ctcatttttt ctaccggtac ctcacgcgac gggttgagg 39

<210> 11

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

ggagaggacc tcgactctag aatggccgcg ccgcctagt 39

<210> 12

<211> 41

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

ctcatttttt ctaccggtac ctgagtccgt atgggggatg a 41

Claims

1.一种调控野牡丹属植物花色形成的转录因子，其特征在于：所述的转录因子包括转录因子MedPAP1和转录因子MedTT8，转录因子MedPAP1的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，转录因子MedTT8的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.一种编码权利要求1所述的转录因子的基因，其特征在于：所述的基因包括基因MedPAP1和基因MedTT8，基因MedPAP1的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，基因MedTT8的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

3.一种用于扩增权利要求2所述的基因的引物，其特征在于：所述的引物的核苷酸序列如下：

扩增基因MedPAP1的引物的核苷酸序列为：

MedPAP1_KF：5’-ATGAGGGTGAAGTCGAGTC-3’，

MedPAP1_KR：5’- TCACGCGACGGGTTGAGG-3’；

扩增基因MedTT8的引物的核苷酸序列为：

MedTT8_KF：5’- ATGGCCGCGCCGCCTAGT-3’

MedTT8_KR：5’- TGAGTCCGTATGGGGGATGA-3’。

4.一种包含权利要求2所述的基因的重组载体。

5.一种包含权利要求2所述的基因的重组菌。

6.权利要求1所述的转录因子或权利要求2所述的基因在促进野牡丹属植物花青苷合成和累积中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的野牡丹属植物选自本氏烟草、白花蝴蝶兰。