CN115028691A - 一种检测试纸用的独立质控系统、杂交瘤细胞株、质控线用包被单克隆抗体及其应用 - Google Patents
一种检测试纸用的独立质控系统、杂交瘤细胞株、质控线用包被单克隆抗体及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种检测试纸用的独立质控系统、杂交瘤细胞株、质控线用包被单克隆抗体及其应用,所述独立质控系统包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的抗原蛋白C‑L以及该抗原蛋白对应的单克隆抗体C‑C。表达单克隆抗体C‑C的杂交瘤细胞株于2021年8月12日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏地址为中国武汉市武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:C2021185。抗原蛋白C‑L可作为金标垫的标记原料进行应用,单克隆抗体C‑C作为质控线的包被原料进行应用,可用于多种检测试剂盒或检测试纸的制备,用于准确检测试纸条是否有效可控,特异性和准确性高,可省去了阻断剂的使用,在实际应用中能大幅度地降低批间差异。此外,上述独立质控线系统的原料易于进行大批量生产,利于降低成本。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域,尤其涉及一种检测试纸用的独立质控系统、杂交瘤细胞株、质控线用包被单克隆抗体及其应用。
背景技术
在POCT(point-of-care testing,即现场快速检验)检测试剂盒中,质控线系统的C线(即质控线)用于检测试纸条是否有效可控。目前,C线的原料主要为羊多抗作为的二抗(如羊抗鼠、羊抗兔或羊抗鸡,来源均为羊血清),而对应的金标垫上常规使用鼠抗作为一抗;检测时,金标垫上的鼠抗移动到与C线的羊多抗结合,大量聚集后在C线处显色,从而表示该试纸质量可控。但是,由于羊个体差异、生长环境等影响,羊多抗的批间差异会比较大,主要体现在收率、效价和亲和力等方面。
另外,由于人血液样本中含有异嗜性抗体,通常会在待测血液样品中添加一些阻断剂,用以消除样品中异嗜性抗体对检测结果带来的干扰。而目前常用的阻断剂通常为鼠源IgG,这种阻断剂在检测过程会对检测结果造成干扰(如胶体金检测试纸中,所述阻断剂由于未进行胶体金标记,在检测过程中,该阻断剂移动到质控线处会与羊多抗结合且并不显色,从而导致只有少量或不足量的金标鼠抗与羊多抗结合,最终导致C线不显色或者显色弱,难以准确判断试纸条的质量是否可控)。
基于上述多种因素,使用上述传统质控线系统会影响检测试剂盒质控系统的稳定性和准确性。
因此,为了克服羊多抗的批间差异、不稳定问题,阻断剂与C线处羊多抗易结合影响试剂盒稳定性和准确性的问题,现有的试剂盒的质控线系统有待进一步改进。
发明内容
针对上述问题,本发明提供了一种检测试纸用的独立质控系统,该独立质控系统包括一种抗原蛋白C-L以及该抗原蛋白对应的单克隆抗体C-C,并提供了分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株,上述抗原蛋白C-L和单克隆抗体C-C可用于制备检测试剂盒,抗原蛋白C-L作为金标垫的标记原料,单克隆抗体C-C作为质控线的包被原料,该独立质控系统的原料批间差异小,不受干扰物质影响,特异性和准确性高。
为了提高独立质控系统的特异性,降低干扰物质的影响,通过对不同生物的大量基因的研究分析和实验,本发明创新性地选择二硫键形成蛋白作为质控线的标记原料,并将该原料命名为C-L,该原料与试剂盒的其他组成原料和检验样本均无交叉反应,保证该质控系统的特异性;同时,制备针对该抗原C-L的特异性单克隆抗体C-C作为质控线的包被原料。
二硫键形成蛋白是大肠杆菌中的一种外源性蛋白,参与蛋白质合成过程中二硫键的形成,在重组蛋白的融合表达过程中,发挥重要的作用,同时该蛋白还有分子伴侣的功能。通过对二硫键形成蛋白基因序列的分析和比对,发现其与人源、鼠源蛋白无同源性,同时该蛋白的表达纯化过程比较简单,获取容易。
本发明的技术方案具体如下:
第一方面,本发明提供一种检测试纸用的独立质控系统,其包括氨基酸序列如SEQID NO:1所示的抗原蛋白C-L以及该抗原蛋白对应的单克隆抗体C-C。
所述单克隆抗体C-C为以上述抗原蛋白C-L作为抗原通过现有免疫的方法制备得到的单克隆抗体。优选的,其为保藏编号为CCTCC NO:C2021185的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体。
上述包含二硫键形成蛋白C-L和C-C单克隆抗体的质控线系统不仅满足检验试剂盒的有效性的基本要求,并且其特异性和准确性高,省去了阻断剂的使用,即使样品中混有阻断剂,阻断剂也对检测结果难以造成影响。此外,该独立质控线系统的原料获取容易,易于进行大批量生产,加快研发进度,节省成本,且基于其特异性高,在实际应用中能大幅度地降低批间差异。
第二方面,本发明提供一种表达如上所述的单克隆抗体C-C的杂交瘤细胞株,被命名为杂交瘤细胞株5E9,其保藏编号为CCTCC NO:C2021185。该杂交瘤细胞株,于2021年8月12日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏地址为中国武汉市武汉大学,保藏编号为CCTCC NO:C2021185。
第三方面,本发明提供上述杂交瘤细胞株在制备上述的单克隆抗体C-C中的应用。可通过将杂交瘤细胞株接种到小鼠腹腔中制备腹水,并进行纯化得到单克隆抗体C-C。
第四方面,本发明提供一种质控线用包被单克隆抗体C-C,其由上述的杂交瘤细胞株所分泌。
第五方面,本发明提供一种上述单克隆抗体C-C的制备方法,其包括以下步骤:
将上述杂交瘤细胞株接种到小鼠腹腔中制备腹水,然后进行纯化得到单克隆抗体。
优选地,所述制备方法中,所述杂交瘤细胞的制备方法为:
以前述的抗原蛋白C-L作为免疫原,免疫注射BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏细胞并将其与骨髓瘤细胞进行融合,筛选获得表达单克隆抗体C-C的杂交瘤细胞株;所述抗原蛋白C-L的氨基酸序列如SEQID NO:1所示。
第六方面,本发明提供上述抗原蛋白C-L在制作检测试纸的金标垫中的应用,其中,抗原蛋白C-L的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
第七方面,本发明提供上述单克隆抗体C-C在制作检测试纸的质控线中的应用。应用时,将单克隆抗体C-C作为质控线的包被原料,处理后喷涂NC膜,制备质控线。
第八方面,本发明提供上述独立质控系统在制备检测试剂盒或检测试纸中的应用。所述检测试剂盒、检测试纸包括金标层析检测试剂盒、荧光层析检测试剂盒、金标渗滤检测试剂盒等可适用上述独立质控系统的检测产品。
第九方面,本发明还提供一种检测试剂盒,其包括上述的抗原蛋白C-L和上述的单克隆抗体C-C;其中,抗原蛋白C-L作为金标垫的标记原料,单克隆抗体C-C作为质控线的包被原料。
本发明具有以下有益效果:
1、本发明提供了一种独立质控线系统,该系统包括抗原蛋白C-L和对应的单克隆抗体C-C;抗原蛋白C-L可作为金标垫的标记原料进行应用,单克隆抗体C-C作为质控线的包被原料进行应用,可用于多种检测试剂盒或检测试纸的制备,用于准确检测试纸条是否有效可控;其特异性和准确性高,检测时可省去阻断剂的使用,在实际应用中能大幅度地降低批间差异,具有很好的应用前景。
2、本发明还提供了分泌单克隆抗体C-C的杂交瘤细胞株5E9,保藏编号为CCTCCNO:C2021185,该杂交瘤细胞株及其传代细胞株能够稳定分泌C-C,可用于批量生产单克隆抗体C-C。由此可见,本发明提供的独立质控线系统的原料容易制备,易于进行大批量生产,便于加快研发进度,节省成本。
附图说明
图1是C-L SDS-PAGE检测结果;
图2是C-C纯度检测结果;
图3是杂交瘤细胞株5E9分泌抗体稳定性检测结果;
图4是C-C特异性检测结果;
图5是独立质控线系统特异性检测结果;
图6是独立质控线系统稳定性检测结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。在本发明中,若非特指,所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法,如无特别说明,均为本领域的常规方法。
实施例1抗原蛋白C-L的制备
1、C-L序列分析
从多种生物中选择大肠杆菌,并分析NCBI上公布的大肠杆菌的众多蛋白序列,利用GenBank数据库,对序列进行分析和比对,筛选到与人、鼠均无交叉、特异性好且易于表达纯化的二硫键形成蛋白,命名为C-L蛋白,其氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO:1所示:
MKKIWLALAGLVLAFSASAAQYEDGKQYTTLEKPVAGAPQVLEFFSFFCPHCYQFEEVLHISDNVKKKLPEGVKMTKYHVNFMGGDLGKDLTQAWAVAMALGVEDKVTVPLFEGVQKTQTIRSASDIRDVFINAGIKGEEYDAAWNSFVVKSLVAQQEKAAADVQLRGVPAMFVNGKYQLNPQGMDTSNMDVFVQQYADTVKYLSEKK
2、C-L重组表达
(1)基因序列c-l的获得:
提取DH5α大肠杆菌的基因组,并以该基因组为模板,采用引物对:
F:5'-CGggatccatgaaaaagatttggctggcgct-3'(SEQ ID NO:2)
R:5'-CCctcgagttttttctcgcttaagtattt-3'(SEQ ID NO:3)
进行PCR扩增,进行电泳检测,回收目标PCR产物(624bp),用限制性内切酶BamH I和XhoI对PCR产物进行酶切,通过T4 DNA连接酶,将C-L的基因片段c-l连接到PET28a质粒中,得到重组质粒PET28a-c-l。
再通过转化和诱导表达,将上述构建好的重组质粒转入DH5α感受态细胞中,并将感受态细胞涂布到LB平板(卡那霉素)上,置于37℃培养箱培养24h,挑选单菌落进行PCR鉴定,选择表达C-L蛋白的阳性重组表达菌株进行扩大培养和保种。
3、C-L蛋白的纯化鉴定
取上述菌种接种到LB培养基(加有卡那霉素)中37℃,200rpm振荡培养过夜(16h以上),按照5ml-50ml-1L的体积,进行逐步放大培养。最终放大结束后,6000rpm离心10min,收集菌沉淀,用10mM PBS重悬、离心清洗。收集菌沉淀,用30ml 10mM PBS重悬,进行低温超声破碎。
收集破碎上清进行博格隆protein-A镍柱进行纯化,按照该产品说明书进行操作,收集洗脱液,用10mM PBS透析96h,即得到C-L蛋白。经过SDS-PAGE检测,结果如图1所示,C-L蛋白大小为27.7KD,与理论分子量一致;通过SDS-PAGE灰度分析得到该C-L蛋白纯度大于90%。
实施例2C-C的制备
1、小鼠免疫
用C-L蛋白免疫6-8周龄的雌性balb/c小鼠,免疫采用背部皮下多点免疫的方式。C-L蛋白的初次免疫剂量为100μg/只,将C-L蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合,乳化完全。三周后进行加强免疫,C-L蛋白的免疫剂量为50μg/只,与等体积的不完全弗氏佐剂混合,乳化完全。加强免疫1周后,对小鼠进行断尾采血,用间接ELISA方法进行血清效价检测,若效价不达标,每两周进行一次加强免疫。直至血清效价达到5万以上,准备后续的细胞融合。融合前3天,对小鼠进行腹腔注射免疫,不加佐剂,C-L蛋白的免疫剂量为100μg/只。
2、细胞融合
(1)融合前一周,复苏小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0),确保融合时细胞处于最佳状态;经过培养和传代,融合时,收集对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞并计数,进行清洗离心,彻底去除小鼠骨髓瘤细胞中的胎牛血清。在无菌环境下,取免疫小鼠的脾脏,研磨分散脾脏细胞,经过离心过滤,去除该细胞中的杂质,收集小鼠脾脏细胞并计数。
(2)将脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0按照5:1的比例进行混合,离心,用无血清DMEM培养基清洗细胞,确保混合细胞中无胎牛血清,在37℃水浴中,用1mL PEG进行细胞融合,在1min内边滴加PEG,边轻柔混合,静置30s,使PEG充分作用。
(3)融合结束后,加入20ml无血清的DMEM终止细胞融合,加入速度由慢到快,5~8min加完。终止结束后,将融合细胞放入二氧化碳培养箱中孵育20min,800rpm/min离心10min,用HAT培养基重悬融合细胞,置于96孔细胞培养板中,放入二氧化碳培养箱进行培养。
3、杂交瘤细胞筛选和亚克隆
融合后第五天,用HAT培养基全换液,第七天通过间接ELISA的方法检测培养上清,挑选效价高的细胞进行亚克隆。亚克隆采用倍比稀释法,取200-500个细胞,转移到新的96孔细胞培养板的A1孔,按照纵向和横向各2倍稀释,进行亚克隆。七天后用间接ELISA的方法检测培养上清,选取细胞团单一的阳性孔,继续亚克隆,直至96孔板的阳性率达到100%。继续重复2次亚克隆,阳性率均在100%,结束亚克隆,保证杂交瘤细胞株的单一性。
4、杂交瘤细胞株保存
将亚克隆结束的细胞株进行传代培养,分别在第1、3、6、9、12、15、18、21、24、27、30代时收集培养上清,用间接ELISA的方法验证细胞上清的效价和传代稳定性。
如图3所示,检测结果说明,经过30次传代后,细胞分泌能力依然保持稳定。将该杂交瘤细胞命名为杂交瘤细胞株5E9,并将其保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC NO:C2021185。
5、C-C制备
(1)选取12周龄左右的Balb/c雌鼠,每只小鼠腹腔注射500μL的液体石蜡,一周后腹腔注射杂交瘤细胞,剂量为106个/只。5天后,持续观察小鼠,待其腹部膨胀明显后,收集腹水,12000rpm/min离心,去除杂质,置于-80℃冰箱保存。
(2)将腹水从冰箱取出,融化后离心,用0.22μm滤膜进行过滤。参照博格隆protein-A柱的说明书进行纯化。收集纯化的抗体,用10mM PBS进行透析,96h后收集抗体,0.22μm滤膜过滤后,分装,置于-80℃冰箱中保存,用于后续检测和验证。经过HPLC鉴定,结果如图2所示,C-C的纯度高于95%。
实施例3独立质控线系统的性能鉴定
1、批间差验证
1.1实验方法:
采用间接ELISA的方法,选取不同批次的C-L和C-C进行棋盘法检测,具体检测方法如下:
(1)包被:用CBS缓冲液将不同批次的C-L稀释成1μg/mL的浓度,空白对照包被CBS,100μL/孔包被到酶标板中,4℃包被过夜。用PBST缓冲液洗板5次,拍干酶标板。
(2)封闭:用含3%甘氨酸和0.5%海藻糖的PBST缓冲液封闭酶标板,200μL/孔,37℃孵育2h。用PBST缓冲液洗板5次,拍干酶标板。
(3)检测:将不同批次的C-C加入到酶标板中,100μL/孔,37℃孵育0.5h。用PBST缓冲液洗板5次,拍干酶标板。
(4)加酶标二抗:用PBST缓冲液将HRP标记的羊抗鼠抗体2万倍稀释,加入到酶标板中,100μL/孔,37℃孵育0.5h。用PBST缓冲液洗板5次,拍干酶标板。
(5)显色:用TMB显色液避光显色,100μL/孔,37℃孵育15min;用2M硫酸终止液进行终止,50μL/孔,于450nm波长下检测。
表1原料批间差验证结果
1.2实验结果及分析:
检测结果如表1所示,不同批次的C-L和C-C的批间差(即标准偏差)均小于0.05。
2、人血清干扰验证
基于传统的鼠源IgG的质控系统难以采用间接ELISA的方法验证抗干扰性能,因此本实验并未将其进行对照操作。
2.1实验方法
采用间接ELISA的方法,随机选取94份人血清作为干扰物质进行检测。具体检测方法如下:
(1)包被:用CBS缓冲液将C-L稀释成1μg/mL的浓度,100μL/孔包被到酶标板中,4℃包被过夜。用PBST缓冲液洗板5次,拍干酶标板。
(2)封闭:用含3%甘氨酸和0.5%海藻糖的PBST缓冲液封闭酶标板,200μL/孔,37℃孵育2h。用PBST缓冲液洗板5次,拍干酶标板。
(3)检测:将C-C稀释成1μg/mL的浓度,50μL/孔加入到酶标板中,并向每个孔中加入50μL的人血清作为干扰。对照孔不加血清(加入50μL PBST缓冲液),空白孔不加C-C和人血清。37℃孵育0.5h。用PBST缓冲液洗板5次,拍干酶标板。
(4)加酶标二抗:用PBST缓冲液将HRP标记的羊抗鼠抗体2万倍稀释,加入到酶标板中,100μL/孔,37℃孵育0.5h。用PBST缓冲液洗板5次,拍干酶标板。
(5)显色:用TMB显色液避光显色,100μL/孔,37℃孵育15min;用2M硫酸终止液进行终止,50μL/孔,于450nm波长下检测。
表2人血清干扰验证结果
2.2实验结果及分析:
从表2的检测结果可知,加入人血清作为干扰后,检测结果并未发生明显偏差,这说明本发明提供的C-L和C-C的特异性强,抗干扰能力强。
实施例4独立质控线系统的应用
本实施例以胶体金试纸条为例,将本发明提供的质控线系统制备胶体金试剂条。其他实施例中,也可将本发明的质控线系统的C-L和C-C用于其他类型的试剂盒,如金标层析试剂盒、荧光层析试剂盒、金标渗滤试剂盒等,试剂盒的类型不限于本发明实施例的类型。
1、胶体金试纸条的制备:
(1)将实施例1制备的C-L加入胶体金溶液中,混匀后静置10min,加入封闭液(2%BSA和0.5%海藻糖)进行封闭,离心除去上清,用胶体金稀释液重悬,混匀后均匀铺在玻璃纤维上,干燥保存,即为试纸条独立质控线系统的金标垫。
(2)用包被缓冲液将实施例2制备的C-C用包被液(20mM PBS,PH7.4)稀释成工作浓度1mg/ml,充分混匀,制备质控线包被溶液。启动划膜仪,设置划膜参数,将质控线包被溶液均匀喷涂在NC膜上,干燥保存,即为试纸条独立质控线系统的质控线。
(3)依次将样品垫、金标垫、NC膜、吸水纸固定到PVC板上,制备胶体金试纸条。用切条机切成合适大小的试纸条备用。这些步骤为本领域的常规方法。
2、C-C的特异性验证
(1)实验方法:
分别以人IgG、鼠IgG、兔IgG、鸡IgY作为标记原料进行胶体金标记(同时以C-L作为阳性对照),制作金标垫;以C-C作为质控线原料进行划膜;在样品垫上滴加样品稀释液,检测C-C的特异性(试纸条制备方法同前述1的内容)。
(2)实验结果及分析
检测结果如图4所示,从图中的结果可知,C-C与人源、兔源、鼠源、鸡源的抗体均无交叉反应,而C-C的特异性好,仅与C-L进行特异性的结合。
3、独立质控线系统的特异性验证
(1)实验方法:
A、按照本实施例的第1部分的方法,分别以C-L(标记)和C-C(包被)为原料制备本申请的胶体金试纸条独立质控线系统,同时以鼠源单克隆抗体(标记)和羊抗鼠多抗(包被)为原料制备传统胶体金试纸条质控线系统,分别制成试纸条。
B、接着分别采用上述两种试纸条检测2份存在异嗜性干扰的血清(编号1、2)、2份正常阳性血清(编号3、4)及2份正常阴性血清(编号5、6)。
(2)实验结果及分析
检测结果如图5所示,针对不同性质的血清,本发明的质控线显色比较均一、清晰且稳定,不受血清成分干扰,特异性好。而传统质控线的显色效果容易受到异嗜性干扰血清成分的影响,稳定性不如本申请的独立质控线系统。
4、独立质控线系统的稳定性验证
(1)实验方法:选取3批C-L和C-C,进行标记和包被(试纸条制备方法同1),制成胶体金试纸条。对该胶体金试纸在55℃条件下加速破坏7天,接着用样本稀释液进行检测。
(2)实验结果及分析
检测结果如图6所示,经过55℃加速破坏7天,质控线的显色无明显差异,这说明本发明提供的独立质控线系统的稳定性高。
可以理解的是,对本领域普通技术人员来说,可以根据本发明的技术方案及本发明构思加以等同替换或改变,而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。
序列表
<110> 青岛硕景生物科技有限公司
<120> 一种检测试纸用的独立质控系统、杂交瘤细胞株、质控线用包被单克隆抗体及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 208
<212> PRT
<213> Escherichia coli
<400> 1
Met Lys Lys Ile Trp Leu Ala Leu Ala Gly Leu Val Leu Ala Phe Ser
1 5 10 15
Ala Ser Ala Ala Gln Tyr Glu Asp Gly Lys Gln Tyr Thr Thr Leu Glu
20 25 30
Lys Pro Val Ala Gly Ala Pro Gln Val Leu Glu Phe Phe Ser Phe Phe
35 40 45
Cys Pro His Cys Tyr Gln Phe Glu Glu Val Leu His Ile Ser Asp Asn
50 55 60
Val Lys Lys Lys Leu Pro Glu Gly Val Lys Met Thr Lys Tyr His Val
65 70 75 80
Asn Phe Met Gly Gly Asp Leu Gly Lys Asp Leu Thr Gln Ala Trp Ala
85 90 95
Val Ala Met Ala Leu Gly Val Glu Asp Lys Val Thr Val Pro Leu Phe
100 105 110
Glu Gly Val Gln Lys Thr Gln Thr Ile Arg Ser Ala Ser Asp Ile Arg
115 120 125
Asp Val Phe Ile Asn Ala Gly Ile Lys Gly Glu Glu Tyr Asp Ala Ala
130 135 140
Trp Asn Ser Phe Val Val Lys Ser Leu Val Ala Gln Gln Glu Lys Ala
145 150 155 160
Ala Ala Asp Val Gln Leu Arg Gly Val Pro Ala Met Phe Val Asn Gly
165 170 175
Lys Tyr Gln Leu Asn Pro Gln Gly Met Asp Thr Ser Asn Met Asp Val
180 185 190
Phe Val Gln Gln Tyr Ala Asp Thr Val Lys Tyr Leu Ser Glu Lys Lys
195 200 205
<210> 2
<211> 31
<212> PRT
<213> 上游引物F(Synthetic primer F)
<400> 2
Cys Gly Gly Gly Ala Thr Cys Cys Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
Gly Ala Thr Thr Thr Gly Gly Cys Thr Gly Gly Cys Gly Cys Thr
20 25 30
<210> 3
<211> 29
<212> PRT
<213> 下游引物R(Synthetic primer R)
<400> 3
Cys Cys Cys Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Thr Thr Thr Thr Cys Thr
1 5 10 15
Cys Gly Cys Thr Thr Ala Ala Gly Thr Ala Thr Thr Thr
20 25
Claims (10)
1.一种检测试纸用的独立质控系统,其特征在于,包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的抗原蛋白C-L以及该抗原蛋白对应的单克隆抗体C-C。
2.一种表达如权利要求1所述的单克隆抗体C-C的杂交瘤细胞株,其特征在于,被命名为杂交瘤细胞株5E9,保藏编号为CCTCC NO:C2021185。
3.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株在制备权利要求1所述的单克隆抗体C-C中的应用。
4.一种质控线用包被单克隆抗体C-C,其特征在于,由权利要求2所述的杂交瘤细胞株所分泌。
5.一种如权利要求3所述的单克隆抗体C-C的制备方法,其特征在于,至少包括以下步骤:
将如权利要求2所述的杂交瘤细胞株接种到小鼠腹腔中制备腹水,然后进行纯化得到单克隆抗体。
6.根据权利要求5所述的单克隆抗体C-C的制备方法,其特征在于,所述杂交瘤细胞的制备方法为:
以权利要求1所述的抗原蛋白C-L作为免疫原,免疫注射BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾脏细胞并将其与骨髓瘤细胞进行融合,筛选获得表达单克隆抗体C-C的杂交瘤细胞株;所述抗原蛋白C-L的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
7.如权利要求1所述的抗原蛋白C-L在制作检测试纸的金标垫中的应用,其特征在于,抗原蛋白C-L的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
8.如权利要求1所述的单克隆抗体C-C在制作检测试纸的质控线中的应用。
9.如权利要求1所述的独立质控系统在制备检测试剂盒或检测试纸中的应用。
10.一种检测试剂盒,其特征在于,包括权利要求1所述的抗原蛋白C-L和如权利要1或4所述的单克隆抗体C-C;其中,抗原蛋白C-L作为金标垫的标记原料,单克隆抗体C-C作为质控线的包被原料。
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