CN115025016A - 一种川芎酶解液及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种川芎酶解液及其应用，属于生物化工技术领域。本发明通过阿魏酸酯酶酶解的方法，释放中药材川芎的活性成分，获得的川芎酶解液除了具有优良的抗氧化能力外，还具有优良的酪氨酸酶抑制能力，DPPH自由基清除率90.03～97.36％，酪氨酸酶的抑制率为70.28～85.94％。阿魏酸酯酶可以释放川芎中的阿魏酸成分，阿魏酸具有较强的抗氧化能力，但是本发明意外发现，川芎酶解液还具有较强的酪氨酸酶抑制能力，本发明通过实验确认，阿魏酸并不是发挥酪氨酸酶抑制能力的活性物质。本发明中经阿魏酸酯酶酶解川芎制得的川芎酶解液可作为抗氧化和美白成分，在化妆品等领域具有良好的应用前景。

Description

一种川芎酶解液及其应用
技术领域
本发明涉及一种川芎酶解液及其应用，属于生物化工技术领域。
背景技术
随着化妆品行业的迅猛发展以及人们对美的追求，天然温和、绿色安全的环境友好型化妆品已经成为广大消费者的诉求。消费者更青睐于以天然产物为基础的化妆品，而不是合成化学品。随着天然产物化学和植物资源技术的迅速发展，植物源活性物质已得到了广泛的应用。植物源活性物质主要包括多糖、多酚、黄酮等，它们具有许多功能活性。如多糖具有抗氧化活性、免疫活性和镇静活性；多酚类物质具有抵抗紫外线照射引起的皮肤老化问题、抵御色素异常沉着、抗氧化活性、抗炎和抗菌活性；黄酮类化合物具有抗菌、抗病毒活性、抗炎镇痛活性及抗衰老活性等。由于多糖、多酚和黄酮类物质具有功效好、副作用小的特点，所以以植物源多糖、多酚和黄酮类物质为主的天然美容日化产品越来越受到消费者的青睐。崇尚绿色、回归自然已成为化妆品产业的发展趋势。然而这些活性成分在植物体内经常通过氢键与其他成分紧密结合，如何高效的从复杂的植物体中提取生物活性物质并保持其原有活性是目前研究的热点内容。
近十多年来，以作用温和又具有一定功效的中草药提取物作为天然物添加剂，应用于化妆品中已成为新产品开发的热点，这类化妆品快速的涌入化妆品市场，并已逐渐为广大消费者所认知和认可。中草药各具不同的化学成分，可对人体产生不同的药理作用，其中许多具有生理活性，为美容的有效成分，主要有以下几类：蛋白质、肽和氨基酸类；激素与酶类；糖类；有机酸类；生物碱类等。根据以上有效成分种类，可将中草药化妆品的作用概括为：营养滋润、保护、消炎抑菌、美白、育发乌发、防腐抗氧、乳化、赋香、调色等作用。目前，如何使得中草药中的活性物质有效释放成为关键问题。中国专利文献CN111568831A(申请号202010565301.4)公开了一种用于皮肤化妆品的中草药提取物的组合物，所述的组合物含有菊花、山柳菊、当归、三七、黄芪、女贞子、甘草和接骨木的中草药提取物，可用于皮肤抗衰老，具有抗皱、抗氧化、抗自由基、增加皮肤弹性、降低黑色素含量、美白、提高皮肤光泽度等功效。中国专利文献CN108324800A(申请号201810464320.0)提供了一种中草药复方提取物，包括如下组分：川芎根提取物、当归根提取物、升麻根提取物、防风根提取物、枸杞根提取物、水和任选的辅料，该发明缓解了传统通过西药解决皮肤过敏问题容易复发的缺陷，配方简单，毒副作用低，抗炎止痒效果好，该中草药复合提取物可以在药品或化妆品中应用。
川芎(学名：Ligusticum chuanxiong hort)，栽培植物，主产于四川，在云南、贵州、广西等地也有生产，生长于温和的气候环境。其具有活血行气和祛风止痛的功效。多项动物实验表明川芎还具有镇静、镇痛、抗菌、抗放射等作用。川芎包含非常多的活性成分，如生物碱、阿魏酸等酚性物质，以及川芎酚、双藁本内酯，川芎嗪、盐酸三甲胺、盐酸胆碱等。此外，川芎根茎尚含中性油，其成分为十五、十六、十七、十八烷酸乙酯，异十七、异十八烷酸乙酯和异十七烷酸甲酯。其中，阿魏酸在川芎的中含量相对较高。阿魏酸的化学名称为4-羟基-3-甲氧基肉桂酸，是桂皮酸的衍生物之一，阿魏酸具有抗皮肤光老化以及光防护作用、能够作为天然防晒剂来使用。另外阿魏酸具有良好的抑菌和抗炎功效，在化妆品领域得到了广泛认可。它同时在人体中可起到健美和保护皮肤的作用，因而在医药、保健品、化妆品原料和食品添加剂等方面有着广泛的用途。
然而，目前已报道的川芎中阿魏酸的提取方法主要有化学法、微波法回流法、超高压提取法等。以上方法不仅提取率低，更重要的是化学法中酸碱等试剂的使用带来一系列污废处理的问题，提高成本的同时对造成环境污染。生物酶解技术通过酶解作用可使植物细胞壁疏松、破裂，从而降低传质阻力，促进有效成分的溶出，提高有效成分提取率，因而被越来越多地用于中药有效成分的提取中。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种川芎酶解液，所述川芎酶解液主要是经过阿魏酸酯酶酶解后获得，发明人意外发现，所得川芎酶解液除了具有优良的抗氧化能力外，还具有优良的酪氨酸酶抑制能力，另外，还可以确定的是，阿魏酸不是发挥酪氨酸酶抑制能力的物质，但是经阿魏酸酯酶酶解的川芎酶解液，酪氨酸酶抑制能力显著提高。本发明的川芎酶解液可用于具有美白和抗氧化功效的护肤品或化妆品中。
本发明的技术方案如下：
一种川芎酶解液，是将川芎烘干粉碎后，经酶酶解后获得，所述酶包括阿魏酸酯酶。
根据本发明优选的，所述酶还包括木聚糖酶。
根据本发明优选的，所述川芎酶解液的DPPH自由基清除率90.03～97.36％，酪氨酸酶抑制率为70.28～85.94％。
上述川芎酶解液的制备方法，具体步骤如下：
(1)将川芎烘干后，粉碎、灭菌后得川芎粉末；
(2)将步骤(1)得到的川芎粉末加入到酶液中，所述酶液包含阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶的用量为200～400U/g川芎，37～45℃酶解12～24h，得川芎酶解液。
根据本发明优选的，步骤(1)所述烘干是将川芎置于65℃烘箱中烘干至恒重。
根据本发明优选的，步骤(1)所述粉碎后过50～200目筛子。
根据本发明优选的，步骤(1)所述灭菌是于85℃进行低温干燥灭菌。
根据本发明优选的，步骤(2)所述酶液还包括木聚糖酶。
进一步优选的，所述木聚糖酶与步骤(2)的阿魏酸酯酶的酶活单位比为1:(1～2)。
上述川芎酶解液在制备护肤品或化妆品中的应用。
根据本发明优选的，所述护肤品或化妆品具有美白和抗氧化的功效。
有益效果：
本发明通过阿魏酸酯酶酶解的方法，释放中药材川芎的活性成分，获得的川芎酶解液除了具有优良的抗氧化能力外，还具有优良的酪氨酸酶抑制能力，DPPH自由基清除率90.03～97.36％，酪氨酸酶的抑制率为70.28～85.94％。阿魏酸酯酶可以释放川芎中的阿魏酸成分，阿魏酸具有较强的抗氧化能力，但是本发明意外发现，川芎酶解液还具有较强的酪氨酸酶抑制能力，本发明通过实验确认，阿魏酸并不是发挥酪氨酸酶抑制能力的活性物质，但是本发明经阿魏酸酯酶酶解的川芎酶解液，酪氨酸酶抑制能力显著提高。
本发明中经阿魏酸酯酶酶解川芎制得的川芎酶解液可以作为抗氧化和美白成分，在化妆品中具有良好的应用前景。
附图说明
图1为实施例2制备的川芎酶解液的高效液相色谱(HPLC)图。
图2为对比例1制备的川芎炮制液的高效液相色谱(HPLC)图。
图3为对比例3制备的当归酶解液的高效液相色谱(HPLC)图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但是本发明的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的实验操作，若无特殊说明，均为本领域常规实验操作。实施例中涉及的药品及试剂，若无特殊说明，均为普通市售产品。
实施例中仅提供一种阿魏酸酯酶的简单制备方法，不作为阿魏酸酯酶来源的限制，市售或采用其他方法制备得到的阿魏酸酯酶同样适用于本发明。
实施例中涉及的噬淀粉乳杆菌CGMCC11056菌株已经在文献中公开，属于现有技术，本发明不涉及微生物保藏。
实施例中使用的川芎购自北京同仁堂。
实施例1：阿魏酸酯酶的制备
(1)获取噬淀粉乳杆菌DNA：
将噬淀粉乳杆菌CGMCC11056菌株接种于MRS培养基，37℃培养活化，MRS培养基成分为：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温801.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，琼脂18.0g，蒸馏水1000mL，pH 6.2～6.6；取活化的噬淀粉乳杆菌CGMCC11056菌液1mL，6000rpm，4℃离心3min收集菌体，重悬于567μL TE缓冲液(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0)，添加25μL 50mg/mL溶菌酶，混匀，37℃水浴处理1h；加入30μL 10％(质量百分比)SDS、3μL 20mg/mL的蛋白酶K，65℃条件下水浴1h，再加入预冷的氯仿3mL，混匀后离心收集上清；加入等体积预冷的苯酚：氯仿：异戊醇(25：24：1，体积比)溶液，颠倒混匀后离心，取上层水相加入等体积的24：1(氯仿：异戊醇，体积比)，再次离心，取水相加入0.6倍体积的预冷异丙醇，室温水浴醇沉1h，离心收集沉淀；最后用70％乙醇清洗沉淀2次，吹干，TE缓冲液溶解，得噬淀粉乳杆菌DNA。
(2)PCR扩增：
PCR反应条件为：2×Taq Master Mix 25μL，上下游引物(10μM)各2μL，噬淀粉乳杆菌DNA 1μL，ddH2O补足至50μL；
上游引物FaeLam-F：5′-atacatatgtcccgcgttacaattg-3′(SEQ ID NO.1)，
下游引物FaeLam-R：5′-gcgctcgagaaataatggttttaaaaattg-3′(SEQ ID NO.2)，
PCR反应条件：95℃预变性5min；95℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸45s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保存。将PCR产物电泳，采用胶回收试剂盒，得到纯化的阿魏酸酯酶基因PCR产物。
(3)构建重组表达载体pET-FaeLam：
将上述阿魏酸酯酶基因PCR产物进行NdeI和XhoI双酶切，酶切条件为：37℃、3h；酶切体系为：NdeI 5μL，XhoI 5μL，10×K Buffer 10μL，0.1％BSA 10μL，阿魏酸酯酶基因PCR产物5μg，ddH2O补足至100μL；将酶切产物电泳，采用胶回收试剂盒得到纯化的酶切DNA片段；
采用质粒抽提试剂盒提取pET-22b(+)质粒，进行NdeI和XhoI双酶切，酶切条件为：37℃、3h，酶切体系为：NdeI 5μL，XhoI 5μL，10×K Buffer 10μL，0.1％BSA 10μL，pET-22b(+)质粒5μg，ddH2O补足至100μL；采用胶回收试剂盒得到纯化的酶切载体；
将经过双酶切回收的酶切DNA片段和pET-22b(+)酶切载体按照10:1的摩尔比例混合，加入T4DNA连接酶，16℃过夜连接，将10μL连接产物加入100μL大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，冰上孵育30min，42℃水浴热激60s，后加入900μL LB液体培养基，37℃孵育1h，150rpm将菌液离心去掉上清液800μL，用剩余菌液将菌体进行重悬，涂布于加有100μg/mL氨苄霉素的LB平板，进行蓝白斑筛选，挑取白色菌斑，接种到LB液体培养基，37℃摇床培养12h，对菌液进行测序，测序结果显示，与阿魏酸酯酶基因序列一致，并将已整合阿魏酸酯酶基因的pET-22b(+)质粒命名为pET-FaeLam。
(4)阿魏酸酯酶的诱导表达：
将含有重组质粒pET-FaeLam的大肠杆菌接种至LB液体培养基，37℃过夜培养，取菌液，以1％接种量加入到100mL的LB液体培养基中，37℃培养，生长至菌液OD为0.6时，加入终浓度10g/L的乳糖，继续诱导发酵24h；将诱导表达的大肠杆菌培养液，13000rpm离心10min，去除菌体，收集上清液用0.22μm滤膜过滤后，即得阿魏酸酯酶酶液，所得酶液中阿魏酸酯酶的酶活为40U/mL。
实施例2:川芎酶解液的制备
将川芎置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的川芎过50目筛子，称取0.5g过筛后的川芎，于85℃进行低温干燥灭菌，得川芎粉末；取实施例1中获得的阿魏酸酯酶酶液5mL加入到川芎粉末中，37℃摇床酶解24h，得川芎酶解液。
所得川芎酶解液的高效液相色谱(HPLC)图如图1所示，其中，阿魏酸的出峰时间为15.5min，阿魏酸的含量为0.32mg/mL，得率为3.2‰。
实施例3：川芎酶解液的制备
将川芎置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的川芎过200目筛子，称取0.5g过筛后的川芎，于85℃进行低温干燥灭菌，得川芎粉末；取实施例1中获得的阿魏酸酯酶酶液2.5mL加入到川芎粉末中，37℃摇床酶解24h，得川芎酶解液。
所得川芎酶解液中阿魏酸的含量为0.30mg/mL，得率为3.0‰。
实施例4：川芎酶解液的制备
将川芎置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的川芎过200目筛子，称取0.5g过筛后的川芎，于85℃进行低温干燥灭菌，得川芎粉末；取实施例1中获得的阿魏酸酯酶酶液5mL加入到川芎粉末中，45℃摇床酶解24h，得川芎酶解液。
所得川芎酶解液中阿魏酸的含量为0.33mg/mL，得率为3.3‰。
实施例5：川芎酶解液的制备
将川芎置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的川芎过200目筛子，称取0.5g过筛后的川芎，于85℃进行低温干燥灭菌，得川芎粉末；取实施例1中获得的阿魏酸酯酶酶液5mL加入到川芎粉末中，37℃摇床酶解12h，得川芎酶解液。
所得川芎酶解液中阿魏酸的含量为0.29mg/mL，得率为2.9‰。
实施例6：川芎酶解液的制备
将川芎置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的川芎过200目筛子，称取0.5g过筛后的川芎，于85℃进行低温干燥灭菌，得川芎粉末；取实施例1中获得的阿魏酸酯酶酶液5mL加入到川芎粉末中，再加入相同酶活单位的木聚糖酶干粉，37℃摇床酶解24h，得川芎酶解液。
所得川芎酶解液中阿魏酸的含量为0.35mg/mL，得率为3.5‰。
实施例7：川芎酶解液的制备
将川芎置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的川芎过200目筛子，称取0.5g过筛后的川芎，于85℃进行低温干燥灭菌，得川芎粉末；取实施例1中获得的阿魏酸酯酶酶液5mL加入到川芎粉末中，再加入一半酶活单位的木聚糖酶干粉，37℃摇床酶解24h，得川芎酶解液。
所得川芎酶解液中阿魏酸的含量为0.34mg/mL，得率为3.4‰。
对比例1：川芎炮制液的制备
将川穹置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的川芎过50目筛子，称取0.5g处理好的川芎，于85℃进行低温干燥灭菌，得川芎粉末；取5mL水加入到川芎粉末中，于100℃水浴锅处理3h，得川芎炮制液。
所得川芎炮制液的高效液相色谱(HPLC)图如图2所示，其中，阿魏酸的出峰时间为15.5min，阿魏酸的含量为0.08mg/mL，得率为0.8‰。
对比例2：川芎醇提液的制备
将川穹置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的川芎过50目筛子，称取0.5g处理好的川芎，于85℃进行低温干燥灭菌，得川芎粉末；置于25mL圆底烧瓶中，加入10mL 90％乙醇，回流提取3次，每次1.5h；抽滤合并滤液，旋转蒸发器减压回收乙醇浓缩成浸膏。所得浸膏加适量纯化水加热溶解，最终定容至5mL。
所得川芎醇提液中阿魏酸的含量为0.29mg/mL，得率为2.9‰。
对比例3：当归酶解液的制备
将当归置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的当归过50目筛子，称取0.5g过筛后的当归，于85℃进行低温干燥灭菌，得当归粉末；取实施例1中获得的阿魏酸酯酶酶液5mL加入到当归粉末中，37℃摇床酶解24h，得当归酶解液。
所得当归酶解液的高效液相色谱(HPLC)图如图3所示，其中，阿魏酸的出峰时间为15.5min，中阿魏酸的含量为0.30mg/mL，得率为3.0‰。
对比例4：当归炮制液的制备
将当归置于65℃烘箱中烘干至恒重，然后用研磨机进行粉碎，粉碎的当归过50目筛子，称取0.5g处理好的当归，于85℃进行低温干燥灭菌，得当归粉末；取5mL水加入到当归粉末中，于100℃水浴锅处理3h，得当归炮制液。
所得当归炮制液中阿魏酸的含量为0.07mg/mL，得率为0.7‰。
实施例8：DPPH抗氧化能力测定
取1mL酶解液或炮制液于避光离心管中，加入2mL DPPH乙醇溶液(0.5mM)，混合均匀，在室温下静置反应30min，10000r/min离心10min后，于分光光度计517nm波长处测吸光度，使用无菌水调零，空白组以2mL无水乙醇代替DPPH溶液，对照组以2mL无菌水代替酶解液或炮制液。以抗坏血酸(Vc)作为阳性对照。
DPPH自由基清除率计算公式：清除率(％)＝[1-(AS-A)/A0]×100％，其中，AS为样品组的吸光度值；A0为对照组的吸光度值；A为空白组的吸光度值。
实施例9：酪氨酸酶抑制能力测定
先将50μL 5mmol/L酪氨酸溶液和100μL的待测样品混合置于96孔板，随后将以上混合溶液避光条件下加入20μL 1000U/mL酪氨酸酶溶液，25℃反应10min(另外一组不加酪氨酸酶，而加入20μL纯净水或者PBS缓冲溶液)；阳性对照组为Vc，浓度均为4mg/mL；纯净水为空白对照组。每个样品设置5个复孔。紫外分光光度计在波长为475nm下读取吸光度值。
样品对酪氨酸酶的抑制率按照下式计算：抑制比率＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100％。其中，含酪氨酸酶与不含酪酸酶吸光度差值(△A)＝C-D；A为纯净水加酪氨酸酶的吸光度数值；B为纯净水未加酪氨酸酶的吸光度数值；C为待测样本加酪氨酸酶的吸光度数值；D为待测样本未加酪氨酸酶的吸光度数值。
结果分析：
DPPH抗氧化能力和酪氨酸酶抑制能力的测定结果如下表：
表1.不同样品的DPPH抗氧化能力和酪氨酸酶抑制能力的测定结果
Figure BDA0003701206040000061
Figure BDA0003701206040000071
通过实施例2可以看出，阿魏酸酯酶能够有效的释放川芎中的阿魏酸成分，川芎酶解液中阿魏酸的浓度为0.32mg/mL，远高于对比例1川芎炮制液的0.08mg/mL。阿魏酸具有很好的抗氧化功能，这在本发明中也得到了证实，实施例2川芎酶解液的DPPH自由基清除率高达92.00％，接近Vc阳性对照组的97.14％。此外，该川芎酶解液还具有较好的抑制酪氨酸酶活性的能力，抑制率为78.88％，远高于对比例1川芎炮制液的50.31％和对比例2川芎醇提液的69.57％。
进一步通过实施例3、实施例4和实施例5可以看出，在一定的酶解条件下，阿魏酸酯酶酶解川芎的酶解液均能够达到一定的抗氧化能力和抑制酪氨酸酶活性的效果，并且随着川芎酶解液中阿魏酸浓度越高，DPPH自由基清除率越高，即抗氧化能力越强，但是酪氨酸酶的抑制率并没有表现出相同的规律。对此，本发明测定了阿魏酸标准品的抗氧化活性和酪氨酸酶抑制活性，结果显示阿魏酸标准品的DPPH自由基清除率为99.43％，与Vc阳性对照组相当，而酪氨酸酶的抑制率仅为4.15％，这一结果也说明该浓度的阿魏酸具有优良的抗氧化能力，但是几乎没有抑制酪氨酸酶活性的能力，从侧面证明了阿魏酸酯酶酶解川芎后，发挥抑制酪氨酸酶活性的物质不是阿魏酸。
通过实施例6和实施例7可以看出，阿魏酸酯酶和木聚糖酶同时作用，能够更多的释放出阿魏酸，提高酶解液的抗氧化能力，但是抑制酪氨酸酶活性的能力略有下降，但仍高于对比例1的川芎炮制液和对比例2的川芎醇提液，另外，这也进一步说明了川芎酶解液中发挥酪氨酸酶抑制能力的物质不是阿魏酸。
通过与对比例1和对比例2进行比较，可以看出提取方法对川芎的DPPH抗氧化能力和酪氨酸酶抑制能力的影响很大，其中以阿魏酸酯酶酶解方法制备的川芎酶解液的效果最好，相比较炮制和醇提，其DPPH抗氧化能力和抑制酪氨酸酶活性能力均为最高。而且利用炮制方法时，阿魏酸含量虽然较低，依然具有一定的抗氧化能力和抑制酪氨酸酶活性能力，表明川芎中的活性物质绝不仅仅是阿魏酸。
通过与对比例3和对比例4进行比较，可以看出不同的中药经酶解处理的效果，相较于当归，阿魏酸酯酶处理川芎后，获得的酶解液DPPH抗氧化能力和酪氨酸酶抑制能力更好。
SEQUENCE LISTING
<110> 齐鲁工业大学
<120> 一种川芎酶解液及其应用
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atacatatgt cccgcgttac aattg 25
<210> 2
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gcgctcgaga aataatggtt ttaaaaattg 30

Claims (10)

1.一种川芎酶解液，其特征在于，是将川芎烘干粉碎后，经酶酶解后获得，所述酶包括阿魏酸酯酶。
2.如权利要求1所述的川芎酶解液，其特征在于，所述酶还包括木聚糖酶。
3.如权利要求1所述的川芎酶解液，其特征在于，所述川芎酶解液的DPPH自由基清除率90.03～97.36％，酪氨酸酶的抑制率为70.28～85.94％。
4.权利要求1所述的川芎酶解液的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：
(1)将川芎烘干后，粉碎、灭菌后得川芎粉末；
(2)将步骤(1)得到的川芎粉末加入到酶液中，所述酶液包含阿魏酸酯酶，阿魏酸酯酶的用量为200～400U/g川芎，37～45℃酶解12～24h，得川芎酶解液。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述烘干是将川芎置于65℃烘箱中烘干至恒重。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述粉碎后过50～200目筛子。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述灭菌是于85℃进行低温干燥灭菌。
8.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述酶液还包括木聚糖酶；
进一步优选的，所述木聚糖酶与步骤(2)的阿魏酸酯酶的酶活单位比为1:(1～2)。
9.权利要求1所述的川芎酶解液在制备护肤品或化妆品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述护肤品或化妆品具有美白和抗氧化的功效。
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