CN114983855A - 一种具有抑制酪氨酸酶活性的复合肽及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种具有抑制酪氨酸酶活性的复合肽及其制备方法和应用，其中，所述的复合肽由胶原肽与小麦肽按特定的质量比复合得到。本发明所述复合肽具有显著提高的酪氨酸酶抑制活性，能够抑制黑色素的形成，从而达到对皮肤更优异的美白与保护效果。本发明中的组分完全来自纯天然原料，不会产生药物引起的依赖性，安全性更高，美白性能更好。

Description

一种具有抑制酪氨酸酶活性的复合肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种具有抑制酪氨酸酶活性的复合肽及其制备方法和应用。
背景技术
传统的美白化妆品中添加的美白成分虽然对皮肤黑素细胞具有可观的清除效果，与此同时，这类添加剂也对皮肤细胞带来的细胞毒性也非常明显。对苯二酚对黑色素细胞具有细胞毒性并刺激皮肤，长期使用还会带来潜在的致癌风险；曲酸等存在皮肤渗透率低、稳定性低等问题。
自由基能够通过破坏角质层细胞间的皮脂和神经酰胺的脂质成分或细胞膜磷脂的多不饱和脂肪酸的氧化来损害皮肤。现有的合成类抗氧化剂如BHA、BHT及TBHQ等存在较强的毒副作用和弱稳定性，且对人体肝、脾、肺等均有不利影响。由于这类人工合成助剂的副作用及安全性问题，天然来源化妆品原料越来越受到人们的青睐。
胶原肽是动物结缔组织中胶原蛋白的酶解产物，含有胶原蛋白所有的氨基酸，其具有良好的水溶性，更易被吸收利用。目前已有关于胶原肽的抗氧化活性和美白活性等的研究报道。抗氧化活性主要取决于肽的氨基酸序列中存在一些疏水性氨基酸残基如丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸等可以通过转移电子或氢，进而和自由基反应形成更稳定的化合物；美白保湿活性是因为胶原肽中还有大量的氨基、羧基、羟基等亲水基团，同时由于胶原肽中大量的甘氨酸的存在，使胶原肽具有一定的酪氨酸酶抑制活性。
小麦肽是由小麦蛋白经酶解制得，具有水溶性好、稳定性高、易于消化吸收等优点。小麦肽具有抗氧化、抑制酪氨酸酶活性等多种生理功能。抗氧化活性主要取决于肽的氨基酸序列中存在大量的谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸，与自由基反应形成更稳定的化合物。将牛骨胶原肽和小麦肽复合可以在提高美白性能，保证复合肽的生物相容性。
同时，天然活性肽能够发挥多种代谢和生理调节功能，且具有易于吸收，安全性高等优点，成为当前食品、医药及化妆品等领域的研究热点。
发明内容
胶原肽和小麦肽均具有抑制黑色素活性，且胶原肽对皮肤有修复作用。为了克服现有技术中存在的抑制黑色素活性低的问题，本发明提供了一种具有抑制酪氨酸酶活性的复合肽及其制备方法和应用，所述的复合肽具有显著提高的酪氨酸酶抑制活性，能够抑制黑色素的形成，从而达到对皮肤更优异的美白与保护效果。本发明中的组分完全来自纯天然原料，不会产生药物引起的依赖性，安全性更高，美白性能更好。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种具有抑制酪氨酸酶活性复合肽，由胶原肽与小麦肽复合得到。
在本发明的优选的实施方式中，胶原肽是从动物骨骼或皮肤中提取获得。
在本发明的优选的实施方式中，所述的胶原肽优选为牛骨胶原肽。
在本发明的优选的实施方式中，胶原肽与小麦肽的复合质量比例为10:1-100:1；更优选的，胶原肽与小麦肽的复合质量比为30:1-50:1；最优选的，胶原肽与小麦肽的复合质量比例为30:1。
在本发明的优选的实施方式中，复合肽的浓度为10-50mg/mL；更优选的，复合肽的浓度为10-30mg/mL。
本发明还保护所述的复合肽的制备方法，包括如下步骤：
按相应的质量比例称取胶原肽与小麦肽，加入溶剂使其分别溶解，然后置于具有搅拌或震荡功能的反应器中进行恒温反应，反应一定时间后得到复合肽。
在本发明的优选的实施方式中，所述的胶原肽是从动物骨骼或皮肤中提取获得；所述的胶原肽优选为牛骨胶原肽。
在本发明的优选的实施方式中，胶原肽与小麦肽的复合质量比例为10:1-100:1；更优选的，胶原肽与小麦肽的复合质量比为30:1-50:1；最优选的，胶原肽与小麦肽的复合质量比例为30:1。
在本发明的优选的实施方式中，复合肽的浓度为10-50mg/mL；更优选的，复合肽的浓度为10-30mg/mL。
在本发明的优选的实施方式中，反应器设定温度为10-70℃，反应时间为5-60min。
本发明还保护所述的复合肽在药物或保健品或化妆品或医疗器械中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1、本发明中活性组分来源于天然物质，避免了合成类产物在使用过程中所引起的副作用。
2、本发明具有酪氨酸酶抑制活性和抗氧化作用的复合肽的制备方法能够为多功能美白及护肤产品的开发与利用提供新思路。
3、本发明经过长期研究，优化原料和工艺参数，将牛骨胶原肽与小麦肽以特定的比例复合，显著提高了复合肽的酪氨酸酶抑制活性。实验表明该复合肽能够抑制黑色素的生成，从而达到对皮肤更优异的美白与保护效果。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明：
复合肽抑制酪氨酸酶活性的测定方法，包括如下步骤：
步骤1：配制反应所需的酪氨酸溶液，多酚氧化酶溶液，溶剂为PBS缓冲液；
步骤2：配制样品组溶液以及对照组溶液，实验组中滴加酪氨酸60微升，复合肽溶液60微升，PBS 80微升；对照组中PBS 替代酪氨酸溶液；空白组中去离子水替代复合肽溶液；完全对照组中去离子水替代复合肽溶液，PBS替代酪氨酸溶液。在25℃避光保存10 min，再加入多酚氧化酶20微升，在25℃下避光反应20 min，使用酶标仪测定其在475 nm处的吸光度值，分别记为As、Ac、Ab、A0；
步骤3：按以下公式计算酪氨酸酶抑制活性。
酪氨酸酶抑制率（%）=
Figure 29048DEST_PATH_IMAGE001
下面为具体的实施例。
实施例1：
按30:1的质量比例分别称取一定量的牛骨胶原肽与小麦肽，加入去离子水配制成不同浓度的溶液，然后置于具有搅拌功能的反应器中进行恒温反应，温度为25℃，反应时间为10 min，制备得到复合肽，表示成为复合肽-30。
实施例2：
按40:1的质量比例分别称取一定量的牛骨胶原肽与小麦肽，加入去离子水配制成不同浓度的溶液，然后置于具有搅拌功能的反应器中进行恒温反应，温度设定为25℃，反应时间设定为10 min，制备得到复合肽，表示成为复合肽-40。
实施例3：
按50:1的质量比例分别称取一定量的牛骨胶原肽与小麦肽，加入去离子水配制成不同浓度的溶液，然后置于具有搅拌功能的反应器中进行恒温反应，温度为70℃，反应时间为60 min，制备得到复合肽-50。
实施例1-3所制备的复合肽对酪氨酸酶抑制作用效果列于表1-3中。
表1 实施例1中的复合肽（复合肽-30）、小麦肽、牛骨胶原肽对酪氨酸酶抑制活性的影响
Figure 493527DEST_PATH_IMAGE002
表2 实施例2中的复合肽（复合肽-40）、小麦肽、牛骨胶原肽对酪氨酸酶抑制活性的影响
Figure 427985DEST_PATH_IMAGE003
表3 实施例3中的复合肽（复合肽-50）、小麦肽、牛骨胶原肽对酪氨酸酶抑制活性的影响
Figure 421349DEST_PATH_IMAGE004
表1-3给出了本发明实施例1-实施例3制备得到的复合肽与牛骨胶原肽、小麦肽对酪氨酸酶抑制活性的效果对比。从表1-3可以看出，由牛骨胶原肽与小麦肽按质量比为30:1-50:1复合得到的复合肽，其对酪氨酸酶抑制活性显著优于单独的小麦肽和单独的牛骨胶原肽，具有预料不到的技术效果。另外，从表1-3可以看出，复合物对酪氨酸酶抑制活性相比单独使用有较为明显的提升，特别是在复合肽浓度低于30 mg/mL时，其具有显著的协同效应。
可见，本发明将牛骨胶原肽与小麦肽复合后，得到的复合肽的酪氨酸酶抑制活性显著提升，即抑制了黑色素的生成，从而达到对皮肤更优异的美白效果。
上面结合实施例对本发明进行了示例性的描述，显然本发明的实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进将本发明的构思和技术方案直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种具有抑制酪氨酸酶活性的复合肽，其特征在于，由胶原肽和小麦肽复合得到。
2.根据权利要求1所述的复合肽，其特征在于，所述的胶原肽是从动物骨骼或皮肤中提取获得；所述的胶原肽优选为牛骨胶原肽。
3.根据权利要求1或2所述的复合肽，其特征在于，胶原肽与小麦肽的复合质量比例为10:1-100:1；更优选的，胶原肽与小麦肽的复合质量比为30:1-50:1；最优选的，胶原肽与小麦肽的复合质量比例为30:1。
4.根据权利要求3所述的复合肽，其特征在于，复合肽的浓度为10-50mg/mL；更优选的，复合肽的浓度为10-30mg/mL。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的复合肽的制备方法，其特征在于，按相应的质量比例称取胶原肽与小麦肽，加入溶剂使其分别溶解，然后置于具有搅拌或震荡功能的反应器中进行恒温反应。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的胶原肽是从动物骨骼或皮肤中提取获得；所述的胶原肽优选为牛骨胶原肽。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，胶原肽与小麦肽的复合质量比例为10:1-100:1；更优选的，胶原肽与小麦肽的复合质量比为30:1-50:1；最优选的，胶原肽与小麦肽的复合质量比例为30:1。
8.根据权利要求5-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，复合肽的浓度为10-50mg/mL；更优选的，复合肽的浓度为10-30mg/mL。
9.根据权利要求5-7中任一项所述的制备方法，其特征在于，反应器温度设定范围为10-70℃，反应时间为5-60min。
10.根据权利要求1-4中任一项所述的复合肽，以及权利要求5-9中任一项所述的制备方法制备得到的复合肽在药物或保健品或化妆品或医疗器械中的应用。
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