CN114966018B - 能监测采样的病毒抗原检测试纸及其试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种能监测采样的病毒抗原检测试纸及其试剂盒，所述试纸在常规的病毒抗原检测试纸的基础上还具有针对采样部位特异性抗原的监测线，所述采样部位特异性抗原是正常组织细胞表面抗原，该监测线通过胶体金或乳胶显色法使采样部位的特异性抗原显色，从而监测采样的有效性。本发明的检测试纸及其试剂盒可以避免因不规范采样而造成的抗原假阴性的情况，提高了抗原检测的准确率，为新冠抗原联合筛查提供了可靠的技术手段和产品。

Description

能监测采样的病毒抗原检测试纸及其试剂盒

技术领域

本发明涉及一种病毒抗原检测试纸，尤其涉及一种能监测采样的病毒抗原检测试纸及其试剂盒。

背景技术

新冠病毒大流行期间，抗原自测成为控制病毒传播，及早发现阳性病人的一种重要手段。目前，对新冠病毒的抗原检测已经常态化，特别是一些医疗机构或重要部门在来访人员无即时核酸结果情况下，往往采用抗原自测的方法控制阳性人员入内，但是因为对检测要求理解不充分，受检人不配合等问题，时常出现受检测人采样不到位的情况，而现有的抗原检测试纸的质控线仅用于检测标记抗体，在采样不到位甚至于未采样的情况下，质控线依旧能显示，容易造成假阴性的结果。因此，急需一种可以监测采样的抗原检测试纸，避免出现不规范采样而造成的抗原假阴性的情况，为新冠抗原联合筛查提供可靠的技术手段和产品。

发明内容

为实现上述目的，本发明提供了一种能监测采样的病毒抗原检测试纸，其在常规的病毒抗原检测试纸的基础上还设置有针对采样部位特异性抗原的监测线。

进一步，所述采样部位特异性抗原是正常组织细胞表面抗原，现有的新冠抗原检测都是采用鼻拭子采样，因此优选地，所述采样部位特异性抗原是指鼻黏膜中的鳞状上皮细胞表面抗原，例如细胞角蛋白，可选择广谱细胞角蛋白(CKpan)、细胞角蛋白5/6(CK5/6)或高分子量细胞角蛋白(HCK)。

优选地，本发明的检测试纸为层析试纸，采用胶体金法或乳胶法显色。

在本发明的一种实施方式中，所述检测试纸包括加样垫、标记垫、检测线(T线)、质控线(C线)和监测线(K线)，所述标记垫上涂覆有标记了显色颗粒的第一物种来源的抗病毒抗原抗体I和标记了显色颗粒的第二物种来源的抗采样部位特异性抗原抗体II，所述T线上包被有抗病毒抗原抗体III，所述C线上包被有抗第一物种来源的抗病毒抗原抗体I的抗体A，所述K线上包被有抗采样部位特异性抗原抗体IV；优选地，所述第一物种和所述第二物种为不同物种。

在一种更具体的实施方式中，所述抗病毒抗原抗体III也为第一物种来源的抗体，所述抗采样部位特异性抗原抗体IV也为第二物种来源的抗体。

在另一种更具体的实施方式中，所述抗第一物种来源的抗病毒抗原抗体I的抗体A为抗第一物种来源蛋白的普适抗体。

优选地，当所述第一物种与所述第二物种不同时，所述检测试纸还具有监控线(M线)，其上包被有抗第二物种来源的抗采样部位特异性抗原抗体II的抗体B，该抗体B优选为抗第二物种来源蛋白的普适抗体。

上述抗体均优选为单克隆抗体，此外还需注意：病毒抗原与采样部位特异性抗原与它们各自的抗体之间不会产生交叉结合。

所述第一物种和所述第二物种可分别优选自鼠、兔、羊、狗、鸡。

此外，本发明的所述检测试纸还具有常规的硝酸纤维素膜、吸水垫和PVC底板。

在本发明的一种具体实施方式中，所述病毒抗原为新冠病毒(COVID-19)S蛋白或N蛋白。

在本发明的一种较佳实施方式中，所述检测线(T线)、质控线(C线)、监测线(K线)以及在一些情况下的监控线(M线)平行排列于一条直线形检测试纸上。

进一步，本发明提供了另一种较佳的具体实施方式，在该实施方式中所述检测试纸具有分支结构，其主干上具有共同的加样垫，其第一分支包括第一标记垫、检测线(T线)和质控线(C线)，第二分支包括第二标记垫和监测线(K线)，或在一些情况下还具有监控线(M线)，加样垫与第一标记垫及第二标记垫分别有重叠，但第一标记垫与第二标记垫无接触。本实施方式特别适用于所述第一物种与所述第二物种相同的情况。

在本发明的又一种实施方式中，所述检测试纸为两张组合试纸，其中一张为常规的抗原检测试纸，具有检测线(T线)和质控线(C线)，另一张为监测试纸，具有监测线(K线)，或在一些情况下还具有监控线(M线)，两张试纸都分别具有加样点。

进一步，本发明提供了含有上述检测试纸的病毒抗原检测卡，该检测卡具有卡壳，所述检测试纸固定在卡壳内，卡壳上设置有观察窗，用于显示检测线(T线)、质控线(C线)和监测线(K线)，在一些情况下还显示监控线(M线)。

在分支结构的检测试纸或两张组合试纸的实施方式中，所述观察窗一分为二，其中第一观察窗用于显示检测线(T线)和质控线(C线)，第二观察窗用于显示监测线(K线)，在一些情况下还显示监控线(M线)。

进一步，本发明还提供了含有上述病毒抗原检测卡的试剂盒，该试剂盒还包括样本提取液、拭子、滴液管等。

优选地，本发明的能监测采样的病毒抗原检测试纸及其试剂盒用于新冠病毒抗原检测。

本发明人在长期从事人体鼻粘膜活检组织切片免疫组织化学染色的过程中发现：所有人的鼻粘膜鳞状上皮细胞表面的细胞角蛋白(如CKpan、CK5/6、HCK)呈特异性阳性反应(如图1-3所示)，因此设计出了能监测采样的病毒抗原检测试纸，通过检测细胞角蛋白来判断鼻腔采样是否到位，同理该方案的思路也可扩展至其它采样部位的监测。

在本发明的描述中，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。

本发明具有以下有益技术效果：

本发明提供的能监测采样的病毒抗原检测试纸及其试剂盒除了可以检测病毒抗原以外还可以监测采样情况，如果采样不到位可以直接由监测线显示出来，从而可以避免因不规范采样而造成的抗原假阴性的情况，提高了抗原检测的准确率，节省了因假阴性而产生的事后复查的人力物力资源，为新冠抗原联合筛查提供了可靠的技术手段和产品。此外该检测试纸及检测卡的结构简单，只需在原有试纸基础上增加监测线即可，不会对生产或改造造成很大的成本负担，且使用方便，采样的步骤保持不变。

以下将结合附图对本发明的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本发明的目的、特征和效果。

附图说明

图1是四例人体鼻黏膜活检组织切片免疫组化染色显微照片，其中深色为CKpan蛋白阳性显示；

图2是四例人体鼻黏膜活检组织切片免疫组化染色显微照片，其中深色为CK5/6蛋白阳性显示；

图3是是四例人体鼻黏膜活检组织切片免疫组化染色显微照片，其中深色为HCK蛋白阳性显示；

图4是实施例1中检测试纸的结构示意图；

图5是实施例2中检测试纸的俯视结构示意图；

图6是实施例2中检测卡的俯视结构示意图；

图7是实施例3中组合检测试纸的俯视结构示意图；

图8是实施例3中检测卡的俯视结构示意图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

实施例1

如图4所示，本实施例的病毒抗原检测层析试纸为直线形试纸条，其包括加样垫1、标记垫2、硝酸纤维素膜3、吸水垫4和PVC底板5，在硝酸纤维素膜3上依次设置有检测线(T线)、监测线(K线)和质控线(C线)，其中，标记垫2上涂覆有标记了胶体金颗粒的鼠源抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体I和标记了胶体金颗粒的兔源抗CKpan蛋白单克隆抗体II，T线上包被有鼠源抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体III，C线上包被有羊抗鼠抗体A，K线上包被有兔源抗CKpan蛋白单克隆抗体IV，此外，该试纸条还可以设置一条监控线(M线)，其上可包被羊抗兔抗体B。以标记垫2为基准，C线的位置要远于T线，M线的位置要远于K线。

本实施例中的试纸条在使用时的显色原理为：当提取液滴加到加样垫1上后，在层析作用下，样品会向着吸水垫4的方向移动，先经过标记垫2。当样品中含有新冠病毒S蛋白时，它会与标记了胶体金颗粒的鼠源抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体I结合，再慢慢移动至T线，新冠病毒S蛋白会再次与鼠源抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体III结合，聚集在T线上，显示出胶体金的颜色，未结合的标记了胶体金颗粒的鼠源抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体I继续移动至C线与羊抗鼠抗体A结合，并在该处显示出胶体金的颜色；而样品中的CKpan蛋白会在标记垫2处与标记了胶体金颗粒的兔源抗CKpan蛋白单克隆抗体II结合，再慢慢移动至K线，CKpan蛋白会再次与兔源抗CKpan蛋白单克隆抗体IV结合并显色，如还有M线，则未结合的标记了胶体金颗粒的兔源抗CKpan蛋白单克隆抗体II会继续移动至M线，并与M线上的羊抗兔抗体B结合显色。无论T线是否显色，如C线未显色则表明试纸本身有问题、检测无效，如K线未显色则表明采样不到位、检测无效，如M线未显色则表明采样监测无效。

本实施例中的抗体来源也可以是同一物种，如标记垫2上涂覆有标记了胶体金颗粒的鼠源抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体I和标记了胶体金颗粒的鼠源抗CKpan蛋白单克隆抗体II，T线上包被有鼠源抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体III，C线上包被有羊抗鼠抗体A，K线上包被有鼠源抗CKpan蛋白单克隆抗体IV，这种情况下不设M线，因为标记了胶体金颗粒的鼠源抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体I和标记了胶体金颗粒的鼠源抗CKpan蛋白单克隆抗体II都会被C线上的羊抗鼠抗体A捕获，且C线的位置要远于T线和K线。

实施例2

如图5所示为本发明的另一优选实施例的检测试纸，该试纸从加样垫1向上延伸出两条并列的分支，左侧分支具有常规层析试纸结构，包括标记垫21、硝酸纤维素膜31、吸水垫41，其中硝酸纤维素膜31上设置有T线和C线，右侧分支也是层析试纸，包括标记垫22、硝酸纤维素膜32、吸水垫42，其中硝酸纤维素膜32上设置有K线。本实施例中标记垫21上涂覆有标记了乳胶颗粒的鼠源抗新冠病毒N蛋白单克隆抗体I和标记了乳胶颗粒的鼠源抗HCK蛋白单克隆抗体II，T线上包被有鼠源抗新冠病毒N蛋白单克隆抗体III，C线上包被有羊抗鼠抗体A，K线上包被有鼠源抗HCK蛋白单克隆抗体IV，如右侧还设置有M线，其上可包被与C线上相同的羊抗鼠抗体A。

图6所示为含有本实施例检测试纸的检测卡，包括卡壳6，其上设有加样孔61、观察窗62、监测窗63，加样孔61对应试纸上的加样垫1，观察窗62可观察试纸上的T线和C线，监测窗63可观察试纸上的K线。

本检测卡用于新冠病毒检测时，将溶有样本的提取液3-5滴滴加至加样孔中，一部分样本沿着左侧试纸分支向吸水垫41移动，如样本中含有新冠病毒N蛋白，则经过标记垫21时会与涂覆有标记了乳胶颗粒的鼠源抗新冠病毒N蛋白单克隆抗体I结合，再一起移动至T线，与鼠源抗新冠病毒N蛋白单克隆抗体III结合并聚集显色，未结合的标记了乳胶颗粒的鼠源抗新冠病毒N蛋白单克隆抗体I继续移动至C线被羊抗鼠抗体A捕获而显色，另一部分样本沿着右侧试纸分支向吸水垫42移动，如果鼻腔采样到位，则样本中含有鳞状上皮细胞，其上的HCK蛋白会与标记垫22上的标记了乳胶颗粒的鼠源抗HCK蛋白单克隆抗体II结合，再一起移动至K线，在K线与鼠源抗HCK蛋白单克隆抗体IV结合并显色。

本实施例用的单克隆抗体均是鼠源，在其它的实施方式中也可以分别来自不同的物种，且也并不限制在单克隆抗体，多克隆抗体只要符合本发明的原理也是可以应用的。

实施例3

本实施例中的检测试纸为两条直线形试纸组合，如图7所示，两条试纸各自有加样垫11和12，此外右侧试纸还多了一条M线，作为起到对监测线的质控作用，其原理与C线相同，如果本实施例中应用与实施例2中相同的抗体，那么M线也可包被与C线一样的羊抗鼠抗体A，试纸的其它结构与实施例2中的相同。其对应的检测卡如图8所示，卡壳6上设置有两个加样孔611和612，观察窗62可观察左侧试纸上的T线和C线，监测窗63可观察右侧试纸上的K线和M线。该检测卡在使用时需将样本分别滴加于两个加样孔中。

以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (8)

1.一种能监测采样的病毒抗原检测试纸，其特征在于，包括加样垫、标记垫、检测线、质控线和监测线，所述标记垫上涂覆有标记了显色颗粒的第一物种来源的抗病毒抗原抗体I和标记了显色颗粒的第二物种来源的抗采样部位特异性抗原抗体II，所述检测线上包被有抗病毒抗原抗体III，所述质控线上包被有抗第一物种来源的抗病毒抗原抗体I的抗体A，所述监测线上包被有抗采样部位特异性抗原抗体IV，所述采样部位特异性抗原是指鼻黏膜中的鳞状上皮细胞表面的细胞角蛋白。

2.如权利要求1所述的能监测采样的病毒抗原检测试纸，其特征在于，所述抗病毒抗原抗体III也为第一物种来源的抗体，所述抗采样部位特异性抗原抗体IV也为第二物种来源的抗体。

3.如权利要求1所述的能监测采样的病毒抗原检测试纸，其特征在于，所述检测试纸还具有监控线，其上包被有抗第二物种来源的抗采样部位特异性抗原抗体II的抗体B。

4.如权利要求1所述的能监测采样的病毒抗原检测试纸，其特征在于，所述检测线、质控线、监测线平行排列于一条直线形检测试纸上。

5.如权利要求1所述的能监测采样的病毒抗原检测试纸，其特征在于，所述检测试纸具有分支结构，其主干上具有共同的加样垫，其第一分支包括第一标记垫、检测线和质控线，第二分支包括第二标记垫和监测线，所述加样垫与所述第一标记垫及所述第二标记垫分别有重叠，但所述第一标记垫与所述第二标记垫无接触。

6.含有如权利要求1-5任一项所述的能监测采样的病毒抗原检测试纸的病毒抗原检测卡，其特征在于，所述检测卡具有卡壳，所述检测试纸固定在所述卡壳内，所述卡壳上设置有观察窗，用于显示检测线、质控线和监测线。

7.如权利要求6所述的病毒抗原检测卡，其特征在于，所述观察窗分为第一观察窗和第二观察窗，所述第一观察窗用于显示检测线和质控线，所述第二观察窗用于显示监测线。

8.含有如权利要求6或7所述的病毒抗原检测卡的试剂盒，还包括样本提取液、拭子、滴液管。

Images