CN106093414A - 一种同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种能同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，包括设置有样品池和观察窗口的试纸条卡盒，以及配套试纸条，所述试纸条由硬质聚氯乙烯衬板、硝酸纤维素膜、左侧胶体金结合垫、中部胶体金结合垫及吸水垫按顺序搭接而成，左侧和中部胶体金结合垫上分别涂布有胶体金标记的抗半乳甘露聚糖或抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体和牛血清蛋白‑二硝基苯，硝酸纤维素膜上依次平行设置有包被了抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体的左侧检测线、包被了抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体的中部检测线，和包被了抗二硝基苯抗体的质控线。本发明的试纸可同时检测曲霉菌和隐球菌，操作简单方便，检测快速准确，灵敏度和特异度高。
Description
技术领域
本发明属于临床医学诊断和体外真菌检测技术领域，特别是一种同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸。
背景技术
近年来，随着皮质激素、免疫抑制剂、各种抗生素的大量滥用，以及器官移植、侵入性检查等医疗技术的开展，侵袭性真菌感染的发病率越来越高。尤其是曲霉菌、隐球菌等临床常见真菌，其病死率极高。目前真菌感染疾病的临床治疗手段比较单一、有效药物缺乏，因此早期、快速、便捷的体外真菌检测和诊断非常重要。目前临床常用的真菌检测方法可分为培养法和非培养法，具体地包括形态学检查、生化指标检测和分子生物学测试。形态学检查耗时较长，而分子生物学测试对仪器要求较高，因此基于真菌特异性代谢产物和特异性酶的生化检测由于操作简单、快捷可靠，而备受研究者和市场的关注。
曲霉感染的临床表现不具特异性，很容易在检测中忽略。半乳甘露聚糖是曲霉菌的细胞壁组成成分，随着曲霉菌的生长被释放到外界中，而血清中的半乳甘露聚糖具有较高的敏感性和特异性，基于血清中半乳甘露聚糖的免疫分析的诊断效力甚至被认为高于G实验和PCR实验。该技术被伯瑞(Bio-Rad)实验室用于检测曲霉菌，并通过美国食品药品监督管理局的审核。隐球菌脑膜炎是HIV感染患者最为常见的中枢神经系统机会性感染，而针对隐球菌荚膜多糖抗原的免疫检测与传统的培养法相比具有更高的灵敏度和特异度，有报道称隐球菌荚膜多糖抗原的乳胶凝集实验的灵敏度高达98％，特异度高达99％。
免疫胶体金技术是一种新型高效的免疫诊断技术，以胶体金作为示踪标志物用于抗原抗体的检测。胶体金颗粒在弱碱环境下带负电，可与蛋白质分子等的正电基团静电结合，同时不影响其生物特性，可实现抗体抗原的特异性结合，从而实现相应生物大分子的快速便捷检测。目前国内尚无成熟的曲霉菌或隐球菌的免疫胶体金试纸检测技术，且所有的检测均需要进行血样的预处理以获得血清用于检测，更无法同时检测多种真菌感染，限制了实际真菌检测的效率和临床推广。
发明内容
本发明的目的在于提高目前体外真菌检测的效率、便捷性和准确性，提出一种能同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸及应用，无需血样的预处理，实现了多种真菌的同时检测，灵敏度和特异度高，方便了临床快速诊断。
本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：
一种同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，包括试纸条卡盒以及置于该卡盒内的试纸条，所述卡盒包括上开口的盒体及与盒体配合装配的盒盖，在盒盖的左侧制有样品池安装孔，在样品池安装孔内安置有样品池，在样品池的上开口处安置有样品池的按压盖，在样品池底部安置有微孔滤膜，在盒盖的中部制有显色区观察窗口，所述试纸条包括置于卡盒底板上的硬质聚氯乙烯的衬板，在衬板的中部上表面安置有硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜的右侧安置有左侧端头搭接在硝酸纤维素膜上方的吸水垫，在硝酸纤维素膜的左侧安置有右侧端头搭接在硝酸纤维素膜上方的中部胶体金结合垫，在中部胶体金结合垫的左侧安置有左端置于样品池下方，右侧端头搭接在中部胶体金结合垫上方的左侧胶体金结合垫，在硝酸纤维素膜的中部由左至右匀距间隔依次设置有左侧检测线、中部检测线及右侧质控线。
而且，所述硝酸纤维素膜上设置的左侧检测线上包被有抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体；所述中部检测线上包被有抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体；所述右侧质控线上包被有抗二硝基苯抗体。
而且，所述左侧胶体金结合垫上涂布有胶体金标记的抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体和胶体金标记的牛血清蛋白-二硝基苯；中部胶体金结合垫上涂布有胶体金标记的抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体和胶体金标记的牛血清蛋白-二硝基苯。
而且，所述左侧检测线、中部检测线及右侧质控线位置与所述显色区观察窗口相对应。
而且，所述按压盖的材质为顺丁橡胶、丁苯橡胶及异戊橡胶中的一种；所述微孔滤膜的材质为聚酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯及聚丙烯中的一种。
而且，所述左侧胶体金结合垫及中部胶体金结合垫的材质均为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜中的一种。
本发明的优点和积极效果是：
1、本发明提供的试纸条适用于曲霉菌和隐球菌的同时快速检测；
2、本发明的检测结果灵敏度和特异度高，临床诊断准确性高；
3、本发明检测血样无需进行预处理，可直接加入到样品池中进行过滤；
4、本发明提供的试纸条不需要任何仪器设备，携带轻便，检测成本低；
5、本发明提供的试纸条保存方便，操作简单，适用于常规检测的推广。
附图说明
附图1是本发明的立体结构示意图；
附图2是本发明中硬质聚氯乙烯的衬板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维膜材质的左侧及中部胶体金结合垫和吸水垫的结构示意图；
附图3是本发明中卡盒的结构示意图。
具体实施方式
以下对本发明实施做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
一种同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，如图1或2或3所示，包括试纸条卡盒以及置于该卡盒内的试纸条，所述卡盒包括上开口的盒体9及与盒体配合装配的盒盖3，在盒盖的左侧制有样品池安装孔，在样品池安装孔内安置有样品池2，在样品池的上开口安置有样品池的按压盖1，在样品池底部安置有微孔滤膜14，在盒盖的中部制有显色区观察窗口7，所述试纸条包括置于卡盒底板上的硬质聚氯乙烯的衬板10，在衬板的中部上表面安置有硝酸纤维素膜6，在硝酸纤维素膜的右侧安置有左侧端头搭接在硝酸纤维素膜上方的吸水垫8，在硝酸纤维素膜的左侧安置有右侧端头搭接在硝酸纤维素膜上方的中部胶体金结合垫5，在中部胶体金结合垫的左侧安置有左端置于样品池下方，右侧端头搭接在中部胶体金结合垫上方的左侧胶体金结合垫4，在硝酸纤维素膜的中部由左至右匀距间隔依次设置有左侧检测线13、中部检测线12及右侧质控线11。
在本发明的具体实施中，所述硝酸纤维素膜上设置的左侧检测线上包被有抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体；所述中部检测线上包被有抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体；所述右侧质控线上包被有抗二硝基苯抗体。
在本发明的具体实施中，所述左侧检测线、中部检测线及右侧质控线位置与所述显色区观察窗口相对应。
在本发明的具体实施中，所述按压盖的材质为顺丁橡胶、丁苯橡胶及异戊橡胶中的一种；所述微孔滤膜的材质为聚酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯及聚丙烯中的一种。
在本发明的具体实施中，所述左侧胶体金结合垫及中部胶体金结合垫的材质均为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜中的一种。
在本发明的具体实施中，所述左侧胶体金结合垫上涂布有胶体金标记的抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体和胶体金标记的牛血清蛋白-二硝基苯；中部胶体金结合垫上涂布有胶体金标记的抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体和胶体金标记的牛血清蛋白-二硝基苯。
一种同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸的应用，该应用是直接将被检测血清置于样品池进行对曲霉菌和隐球菌的检测。
在本发明的具体实施中，所述被检测血清用磷酸缓冲盐溶液稀释1-20倍后置于样品池中进行对曲霉菌和隐球菌的检测。
实施例
一种能同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，如附图1所示，包括试纸条卡盒以及置于该卡盒内的试纸条。试纸条由硬质聚氯乙烯衬板、硝酸纤维素膜、玻璃纤维膜材质的左侧胶体金结合垫、中部胶体金结合垫和吸水垫按附图2顺序依次粘结而成。左侧胶体金结合垫涂布有胶体金标记的抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体和胶体金标记的牛血清蛋白-二硝基苯；中部胶体金结合垫上涂布有胶体金标记的抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体和胶体金标记的牛血清蛋白-二硝基苯。在硝酸纤维素膜上依次平行涂有两条检测线，以及一条质控线。左侧检测线包被有抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体，中部检测线包被有抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体，质控线包被有抗二硝基苯抗体。卡盒结构如图3所示，卡盒一端设有样品池，上部具有一个顺丁橡胶材质的柔性按压盖，底部由一层聚对苯二甲酸乙二醇酯微孔滤膜构成，显色区窗口与检测线和质控线相对应，样品池位于胶体金结合垫的上方，如附图1所示。
检测时，将血样加入到样品池中，盖上按压盖并用手指按压，血清透过过滤膜均匀滴入左侧胶体金结合垫，层析依次通过中部胶体金结合垫，硝酸纤维素膜、左侧检测线、中部检测线、质控线和吸水垫。10min之后检测结束，左侧检测线、中部检测线与质控线均显色，则结果表明该血样为曲霉菌阳性、隐球菌阳性。
Claims (6)
1.一种同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，包括试纸条卡盒以及置于该卡盒内的试纸条，其特征在于：所述卡盒包括上开口的盒体及与盒体配合装配的盒盖，在盒盖的左侧制有样品池安装孔，在样品池安装孔内安置有样品池，在样品池的上开口处安置有样品池的按压盖，在样品池底部安置有微孔滤膜，在盒盖的中部制有显色区观察窗口，所述试纸条包括置于卡盒底板上的硬质聚氯乙烯的衬板，在衬板的中部上表面安置有硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜的右侧安置有左侧端头搭接在硝酸纤维素膜上方的吸水垫，在硝酸纤维素膜的左侧安置有右侧端头搭接在硝酸纤维素膜上方的中部胶体金结合垫，在中部胶体金结合垫的左侧安置有左端置于样品池下方，右侧端头搭接在中部胶体金结合垫上方的左侧胶体金结合垫，在硝酸纤维素膜的中部由左至右匀距间隔依次设置有左侧检测线、中部检测线及右侧质控线。
2.根据权利要求1所述的同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上设置的左侧检测线上包被有抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体；所述中部检测线上包被有抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体；所述右侧质控线上包被有抗二硝基苯抗体。
3.根据权利要求1所述的同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，其特征在于：所述左侧胶体金结合垫上涂布有胶体金标记的抗半乳甘露聚糖的单克隆抗体和胶体金标记的牛血清蛋白-二硝基苯；中部胶体金结合垫上涂布有胶体金标记的抗隐球菌荚膜多糖的单克隆抗体和胶体金标记的牛血清蛋白-二硝基苯。
4.根据权利要求1所述的同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，其特征在于：所述左侧检测线、中部检测线及右侧质控线位置与所述显色区观察窗口相对应。
5.根据权利要求1所述的同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，其特征在于：所述按压盖的材质为顺丁橡胶、丁苯橡胶及异戊橡胶中的一种；所述微孔滤膜的材质为聚酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯及聚丙烯中的一种。
6.根据权利要求1所述的同时检测曲霉菌和隐球菌的免疫胶体金试纸，其特征在于：所述左侧胶体金结合垫及中部胶体金结合垫的材质均为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜中的一种。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20161109 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |