CN114966008A - 一种均相化学发光检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种均相化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括发光胶乳微球溶液和其他试剂，所述发光胶乳微球中含有光学反应物质，表面连接有生物活性物质；所述发光胶乳微球溶液和/或其他试剂中还含有空白胶乳微球，所述空白胶乳微球不含有任何光学反应物质，表面也没有连接生物活性物质。采用本发明提供的试剂盒可以消除待测样本在光激化学发光方法中产生干扰的作用，避免产生非特异性信号，提高检测的准确性。
Description
技术领域
本发明属于光激化学发光分析领域，具体涉及一种均相化学发光检测试剂盒。
背景技术
口咽拭子或鼻咽拭子样本通常用比较长的棉拭子在从口咽部或鼻咽部采取的口咽部或鼻咽部分泌物，然后置于病原微生物提取液中的一类用于临床检验病原微生物的样本类型，临床常用于流感病毒、冠状病毒等呼吸系统感染病原体的检测。唾液是一种消化液，大部分是水，同时还含有黏蛋白和唾液淀粉酶等。鼻腔抽取液是利用特殊装置从鼻腔内抽取出来的分泌液，这类的样本均含有上皮细胞分泌的黏蛋白等组分。利用光激化学发光方法检测这些样本类型时，黏蛋白会对检测系统产生较强的干扰作用，这是由于黏蛋白带有电荷，而光激化学发光方法所采用的微球带有相反的电荷，在反应体系内黏蛋白可以通过正负电荷相吸引的作用直接将两种微球联在一起，从而达到光激化学发光产生信号的作用。因此，采用光激法学发光方法检测这些类型的样本时需要解决样本的干扰作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供一种均相化学发光检测试剂盒，解决咽拭子等样本在采用光激化学发光分析技术时产生非特性信号的问题。
为此，本发明的第一方面提供了一种均相化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括发光胶乳微球溶液和其他试剂，所述发光胶乳微球中含有光学反应物质，表面连接有生物活性物质；所述发光胶乳微球溶液和/或其他试剂中还含有空白胶乳微球，所述空白胶乳微球不含有任何光学反应物质，表面也没有连接生物活性物质。
根据本发明的一些实施方式，所述其他试剂包括生物素标记的抗原或抗体溶液。
根据本发明的一些实施方式，所述其他试剂还包括样本稀释液。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的表面修饰有化学基团，所述化学基团选自环氧基、氯甲基、巯基、氨基、羟基、马来胺基、磺酸基、羧基和醛基中的至少一种。
根据本发明的一些实施方式，所述化学基团选自磺酸基、羧基和醛基中的至少一种。
根据本发明的一些实施方式，所述化学基团为羧基。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球为聚苯乙烯微球。
根据本发明的一些实施方式，所述发光胶乳微球与空白胶乳微球均为聚苯乙烯微球。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的平均粒径为60-1000nm，例如可以是100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm。
根据本发明的优选实施方式，所述空白胶乳微球的平均粒径为100-300nm。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的粒径小于所述发光胶乳微球的粒径。根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的表面带有负电荷。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的Zeta电位为-10至-50mV，例如可以是-15mV、-20mV、-25mV、-30mV、-35mV、-40mV、-45mV、-50mV。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的Zeta电位为-15至-30mV。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球与所述发光胶乳微球带有相同种类的电荷。
根据本发明的优选实施方式，所述空白胶乳微球存在于所述试剂盒的一种试剂中，优选地，所述空白胶乳微球在所述一种试剂中的浓度高于0.125mg/mL。
根据本发明的优选实施方式，所述空白胶乳微球在所述一种试剂中的浓度为0.25-50mg/mL。在本发明的一些具体实施方式中，所述空白胶乳微球在所述一种试剂中的浓度可以是0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL。
本发明的第二方面提供了一种根据第一方面所述的试剂盒在口咽拭子、鼻咽拭子、唾液或鼻腔抽取液类样本中待测物检测中的应用。
本发明采用光激法学发光方法检测抗原时，在反应系统中添加一定量的空白胶乳微球，此空白胶乳微球带有与光激化学发光所用微球相同的电荷，通过空白胶乳微球吸附黏蛋白这类的干扰物质，从而达到消除口咽拭子、鼻咽拭子、唾液和鼻腔抽取液等类型的样本在光激化学发光方法中产生干扰的作用，解决此类样本在采用光激化学发光分析技术时产生非特异性信号的问题，提高检测的准确性。
具体实施方式
为使本发明容易理解，下面将详细说明本发明。但在详细描述本发明前，应当理解本发明不限于描述的具体实施方式。还应当理解，本文中使用的术语仅为了描述具体实施方式，而并不表示限制性的。
在提供了数值范围的情况下，应当理解所述范围的上限和下限和所述规定范围中的任何其他规定或居间数值之间的每个居间数值均涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可以独立包括在较小的范围中，并且也涵盖在本发明内，服从规定范围中任何明确排除的限度。在规定的范围包含一个或两个限度的情况下，排除那些包括的限度之任一或两者的范围也包含在本发明中。
除非另有定义，本文中使用的所有术语与本发明所属领域的普通技术人员的通常理解具有相同的意义。虽然与本文中描述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可以在本发明的实施或测试中使用，但是现在描述了优选的方法和材料。
光激化学发光分析技术的技术原理为:敏化剂在激光照射下能将周围环境中的氧分子激发为单线态氧分子，单线态氧分子能够与相距200nm左右的光学反应物质反应，产生一定波长的光信号；当样品中包含待测抗原或抗体时，该抗原抗体的免疫反应能够使包含敏化剂的感光胶乳微球与包含光学反应物质的发光胶乳微球结合，从而产生特定波长的光信号，检测该光信号即可检测待测抗原或抗体的含量。
“待测样本”是指可能含有被分析物的一种混合物，可以被用在本发明公开的方法中的典型待测样本包括但不限于口咽拭子、鼻咽拭子、唾液、鼻腔抽取液、血清、血浆、腹水和胸水等。待测样本通常含有黏蛋白和/或带有与黏蛋白相同种类电荷的其他蛋白组分，这些组分带有电荷，而光激化学发光方法所采用的微球带有相反的电荷，在反应体系内黏蛋白可以通过正负电荷相吸引的作用与微球联在一起，从而达到光激化学发光产生信号的作用，从而会对检测系统产生较强的干扰作用。因此，本发明采用光激法学发光方法检测待测样本时，在反应系统中添加一定量的空白胶乳微球，此空白胶乳微球带有与光激化学发光所用微球相同的电荷，通过空白胶乳微球吸附黏蛋白这类的干扰物质，从而达到消除口咽拭子、鼻咽拭子、唾液和鼻腔抽取液等类型的样本在光激化学发光方法中产生干扰的作用，解决此类样本在采用光激化学发光分析技术时产生非特异性信号的问题，提高检测的准确性。
为此，在第一方面，本发明提供了一种均相化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括发光胶乳微球溶液和其他试剂，所述发光胶乳微球中含有光学反应物质，表面连接有生物活性物质。
根据本发明的一些实施方式，所述其他试剂包括生物素标记的抗原或抗体溶液。
根据本发明的一些实施方式，所述其他试剂还包括样本稀释液。
在本发明提供的均相化学发光检测试剂盒中，还含有空白胶乳微球，所述空白胶乳微球不含有任何光学反应物质，表面也没有连接生物活性物质。所述空白胶乳微球可以在试剂盒的任一或任几种试剂中存在。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球在发光胶乳微球溶液、生物素标记的抗原或抗体溶液、或样本稀释液中；在另一些实施方式中，所述空白胶乳微球在上述任意两种溶液中；在另一些实施方式中，在上述三种溶液中均含有所述空白胶乳微球。
本发明所述“生物活性物质”是指具有生物活性的化合物，通常是具有生物活性的“特异性结合配对成员”中的一员。“特异性结合配对成员”是指这样一对分子，它们能够相互特异性结合，例如，酶-底物、抗原-抗体、配基-受体。一个具体的特异性结合配对成员对的例子是生物素-亲和素系统，其中“生物素”广泛存在于动植物组织中，其分子上有两个环状结构，分别为咪唑酮环和噻吩环，其中咪唑酮环是与亲和素结合的主要部位。活化的生物素可以在蛋白质交联剂的介导下，与已知的几乎所有生物大分子偶联，包括蛋白质、核酸、多糖和脂类等；而“亲和素”是由链霉菌分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。“亲和素”分子由4条相同的肽链组成，其中每条肽链都能结合一个生物素。因此每个抗原或抗体可同时偶联多个生物素分子，从而产生“触手效应”提高分析灵敏度。
本发明所用术语“光学反应物质”是指能够参与光学反应的物质，包括能够吸收或者发出特定波长的光的物质。根据本发明的一些实施方式，所述“光学反应物质”包含化学发光化合物和金属螯合物。进一步地，所述化学发光化合物选自烯烃化合物，优选选自二甲基噻吩、双丁二酮化合物、二氧杂环己烯、烯醇醚、烯胺、9-亚烷基苍耳烷、9-亚烷基-N-9,10二氢化吖啶、芳基乙醚烯、芳基咪唑和光泽精以及它们的衍生物，更优选选自二甲基噻吩及其衍生物。所述金属螯合物的金属是稀土金属或VIII族金属，优选选自铕、铽、镝、钐、锇和钌，更优选为铕。所述金属螯合物包含选自下列的螯合剂：NHA、BHHT、BHHCT、DPP、TTA、NPPTA、NTA、TOPO、TPPO、BFTA、2,2-二甲基-4-全氟丁酰-3-丁酮、2,2’-联吡啶、联吡啶基羧酸、氮杂冠醚、氮杂穴状配体和三辛基氧化膦以及它们的衍生物。
本发明所述的空白胶乳微球和发光胶乳微球主要区别在于其含有的物质和表面修饰的物质不同，使其具有不同的功能。发光胶乳微球含有光学反应物质且表面连接有生物活性物质，而空白胶乳微球则不含有这两种物质。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的表面修饰有化学基团，所述化学基团选自环氧基、氯甲基、巯基、氨基、羟基、马来胺基、磺酸基、羧基和醛基中的至少一种。经过实验发现，在同一试剂盒中不同化学基团修饰的空白胶乳微球均能达到实验目的，所用化学基团可以根据试剂盒中其他试剂的性质搭配选定，通过反应体系优化使得试剂盒性能最优。根据本发明的一些优选实施方式，所述化学基团选自磺酸基、羧基和醛基中的至少一种，也可以多种混用。根据本发明的一些更优选实施方式，所述化学基团为羧基。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球通过无乳化剂的乳液聚合方法制备得到。在本发明的一些实施方式中，所述无乳化剂的乳液聚合方法包括：将去离子水、苯乙烯、甲基丙烯酸羟乙酯和少量二乙烯基苯在过硫酸钾引发剂存在下反应，经纯化后得到表面清洁带有羟基的直径约60-1000nm的微球。优选地，所述反应的条件包括：于60-90℃例如70℃的氮气气氛下聚合反应5-6h。
本发明所述胶乳微球可选材质包括，但不限于：琼脂糖、纤维素、硝化纤维素、醋酸纤维素、聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、尼龙、聚丁酸乙烯或聚丙烯酸酯；优选选自聚苯乙烯、聚丙烯、聚(4-甲基丁烯)、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯或聚丙烯酸酯。根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球为聚苯乙烯微球。根据本发明的优选实施方式，所述发光胶乳微球与空白胶乳微球均为聚苯乙烯微球。
本发明所述的胶乳微球并不限定其形状为正球形，可以是球形、类球形、不规则形状颗粒等，所述“微球”和“微珠”、“微粒”指代意义相同，重点在于说明其粒径。根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的平均粒径为60-1000nm，例如可以是100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm。根据本发明的优选实施方式，所述空白胶乳微球的平均粒径为100-300nm。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的粒径小于所述发光胶乳微球的粒径。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的表面带有负电荷。根据本发明的一些优选实施方式，所述空白胶乳微球与所述发光胶乳微球带有相同种类的电荷。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球的Zeta电位为-10至-50mV，例如可以是-15mV、-20mV、-25mV、-30mV、-35mV、-40mV、-45mV、-50mV。根据本发明的一些优选实施方式，所述空白胶乳微球的Zeta电位为-15至-30mV。
本发明所述的ZETA电位值是指空白胶乳微球在pH为6～9的分散体系中的电位值。颗粒的ZETA电位(ZETA potential)是指颗粒在剪切面处的电位；即连续相与附着在微球上的流体稳定层之间的电势差。由于分散粒子表面带有电荷而吸引周围的反号离子，这些反号离子在两相界面呈扩散状态分布而形成扩散双电层。根据Stern双电层理论可将双电层分为两部分，即Stern层和扩散层。Stern层定义为吸附在电极表面的一层离子(IHP orOHP)电荷中心组成的一个平面层，此平面层相对远离界面的流体中的某点的电位称为Stern电位。稳定层(Stationary layer)(包括Stern层和滑动面slipping plane以内的部分扩散层)与扩散层内分散介质(dispersion medium)发生相对移动时的界面是滑动面(slipping plane)，该处对远离界面的流体中的某点的电位称为ZETA电位或电动电位(ζ-电位)，即ZETA电位是连续相与附着在分散粒子上的流体稳定层之间的电势差。它可以通过电动现象直接测定。目前测量ZETA电位的方法主要有电泳法、电渗法、流动电位法以及超声波法，其中以电泳法应用最广。
根据本发明的一些实施方式，所述空白胶乳微球可以存在于试剂盒中的一种或多种试剂中，所述空白胶乳微球的量满足在使用时，其在包含待测样本、空白胶乳微球、发光胶乳微球、样本稀释液等试剂的混合物中的浓度高于31.25μg/mL，优选为40μg/mL-15mg/mL，更优选为62.5μg/mL-12.5mg/mL。例如，如果检测中需要n种试剂，而试剂盒中只有一种试剂含有空白胶乳微球，当测试中各试剂等量使用时，则该试剂中空白胶乳微球的浓度不低于(40n)μg/mL，不高于(12.5n)mg/mL；如果试剂盒中有两种试剂含有等浓度的空白胶乳微球，当测试中各试剂等量使用时，则该两种试剂中空白胶乳微球的浓度均不低于(20n)μg/mL，不高于(6.25n)mg/mL。若试剂盒中有多种试剂中含有空白胶乳微球，不同的试剂含有空白胶乳微球的浓度可以相同也可以不同，依据试剂原有的组分特性调整其含有空白胶乳微球浓度。
根据本发明的优选实施方式，所述空白胶乳微球存在于所述试剂盒的一种试剂中，优选地，所述空白胶乳微球在所述一种试剂中的浓度高于0.125mg/mL。
根据本发明的优选实施方式，所述空白胶乳微球在所述一种试剂中的浓度为0.25-50mg/mL。在本发明的一些具体实施方式中，所述空白胶乳微球在所述一种试剂中的浓度可以是0.25mg/mL、0.5mg/mL、1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL。
根据本发明的一些实施方式，所述试剂盒还包括临界值对照品。
在测试中，临界值对照品按照待测样本的检测模式加入到测试样本外的反应微孔中样本同时检测，其发光信号强度作为阳性结果的临界值。当待测样品发光信号强度≥临界值(即S/CO值≥1)时判定样本为样本靶标阳性，反之判定为样本靶标阴性。
在第二方面，本发明提供了一种根据第一方面所述的试剂盒在口咽拭子、鼻咽拭子、唾液或鼻腔抽取液类样本中待测物检测中的应用。
根据本发明的一些实施方式，所述试剂盒可用于一系列上呼吸道病原微生物的检测，如：唾液中人类免疫缺陷病毒p24抗原的检测、鼻咽拭子中新型冠状病毒(SARS-Cov-2)抗原的检测、鼻咽拭子中冠状病毒(SARS-Cov-1)抗原的检测、鼻咽拭子中副流感病毒抗原的检测、鼻拭子中鼻病毒抗原的检测、鼻咽拭子中呼吸道合包病毒抗原的检测、或者鼻咽拭子中腺病毒抗原的检测，等。
根据本发明的一些实施方式，所述试剂盒在检测上述样本的待测物的方法包括以下步骤：
S1：将待测样本与试剂盒中的检测试剂进行第一混合，使待测样本中的靶分子与空白胶乳微球和发光胶乳微球相接触，得到第一混合物；
S2：将所述第一混合物与感光胶乳微球溶液进行第二混合，得到第二混合物；
S3：对所述第二混合物进行激光照射，检测化学发光信号。
根据本发明的一些实施方式，步骤S1中，所述第一混合的孵育温度为30-45℃，时间为10-30分钟。
根据本发明的优选实施方式，步骤S2中，所述第二混合的孵育温度为30-45℃，时间为5-30分钟。
根据本发明的一些实施方式，步骤S3中，所述激光照射的激发波长为650-700nm，检测波长为550-650nm。
根据本发明的优选实施方式，步骤S3中，所述激光照射的激发波长为675-685nm，检测波长为610-620nm。
具体实施例
为使本发明更加容易理解，下面通过具体实施例来进一步详细说明本发明，这些实施例仅起说明性作用，并不局限于本发明的应用范围。本发明中所使用的原料或组分若无特殊说明均可以通过商业途径或常规方法制得。
实施例1
(一)主要检测试剂：
试剂1：抗体1包被的发光胶乳微球溶液
试剂2：生物素标记的抗体2溶液
试剂3：样本稀释液
试剂4：表面包被链霉亲和素的感光胶乳微球溶液
(二)空白胶乳微球制备：
通过无乳化剂的乳液聚合方法制备，具体为：将去离子水、苯乙烯、甲基丙烯酸羟乙酯和少量二乙烯基苯混合，加入过硫酸钾引发反应，于60-90℃例如70℃的氮气气氛下聚合反应5-6h，经纯化后得到表面清洁带有羟基的直径约60-1000nm的微球，可对微球直径进行筛选，优选为100-300nm。制备得到的空白胶乳微球材质为聚苯乙烯，可以经化学基团修饰，修饰用的化学基团可以选自环氧基、氯甲基、巯基、氨基、羟基、马来胺基、磺酸基、羧基和醛基。
空白胶乳微球可加入到试剂1、试剂2、试剂3中的任一种、两种、或三种溶液中，按需调节其浓度。
使用NICOMP 380 Z3000运用多普勒电泳法(ELS)测定空白胶乳微球的Zeta电位为-10至-50mV。
(三)检测过程：
1、加入待测样本、试剂1、试剂2和试剂3各25μL于检测微孔内混匀，得到第一混合物，置37℃温育15分钟。
2、继续加入175μL试剂4，得到第二混合物，置37℃继续温育15分钟。
3、温育结束后，采用光激化学发光分析仪检测光信号强度(激发波长680nm，检测波长615nm)，待测样品发光信号强度≥临界值(S/CO≥1)判定为检测样本阳性。
样本检测的同时，采用已标定好的临界值对照品按照相同的检测模式加入到反应微孔中同时检测，其发光信号强度作为抗原阳性结果的临界值。
以上检测过程可在
检测平台上自动完成。
实施例2
乙型流感抗原检测试剂盒，包括如下试剂：
试剂1：含有25mg/mL的抗乙型流感病毒抗体1包被的发光胶乳微球，微球材质为聚苯乙烯，带负电，直径200±5nm；
试剂2-1：含有0.5μg/mL的生物素标记抗乙型流感病毒抗体2；
试剂2-2：在试剂2-1中加入5mg/mL的羧基空白胶乳微球，微球材质为聚苯乙烯，微球直径150±5nm，测得Zeta电位为-20mV；
试剂3：样本稀释液。
其他必需试剂：试剂4：表面包被链霉亲和素的感光胶乳微球溶液。
按照实施例1中的检测过程检测10例阳性样本和35例阴性样本，检测结果如下表1所示：
表1
从表1中可以看出，本发明试剂盒中加入空白胶乳微球使乙型流感病毒抗原检测试剂盒假阳性率由34.29％降低到了0％，效果非常明显。使试剂对样本的检测结果与第三方一致。
实施例3
甲型流感抗原检测试剂盒，包括如下试剂：
试剂1-1：含有25mg/mL的抗甲型流感病毒抗体1包被的发光胶乳微球，微球材质为聚苯乙烯，带负电，直径200±5nm；
试剂1-2：在试剂1-1中加入0.25mg/mL的羧基空白胶乳微球，微球材质为聚苯乙烯，微球直径120±5nm，测得Zeta电位分别为-30mV/-15mV；
试剂2：含有0.5μg/mL的生物素标记抗甲型流感病毒抗体2；
试剂3：样本稀释液。
其他必需试剂：试剂4：40μg/mL感光胶乳微球溶液。
按照实施例1中的检测过程检测10例阳性样本和20例阴性样本，检测结果如下表2所示：
表2不同空白胶乳微球检测临床样本结果
从表2中可以看出，使用本发明的试剂盒检测甲型流感病毒抗原，试剂中加入空白胶乳微球的Zeta电位不同，为-15至-30mV，检测结果与第三方一致。
实施例4
乙型流感抗原检测试剂盒，包括如下试剂：
试剂1：含有25mg/mL的抗乙型流感病毒抗体1包被的发光胶乳微球，微球材质为聚苯乙烯，带负电，直径200±5nm；
试剂2：含有0.5μg/mL的生物素标记抗乙型流感病毒抗体2；
试剂3-1：样本稀释液；
试剂3-2：在试剂3-1中加入0.125mg/mL/0.25mg/mL/5mg/mL/50mg/mL的羧基空白胶乳微球，微球直径120±5nm，测得Zeta电位为-25mV。
其他必需试剂：试剂4：40μg/mL感光胶乳微球溶液。
按照实施例1中的检测过程检测10例阳性样本和20例阴性样本，检测结果如下表3所示：
表3不同浓度空白胶乳微球检测临床样本结果
从表3中可以看出，使用本发明的试剂盒检测乙型流感病毒抗原，试剂中加入0.125mg/mL空白胶乳微球(即第一混合物中有31.25μg/mL空白胶乳微球)时，未达到预期目的，仍有假阳性结果出现，加入0.25mg/mL、5mg/mL及50mg/mL空白胶乳微球(即第一混合物中有62.5μg/mL、1.25mg/mL、12.5mg/mL空白胶乳微球)检测样本的结果与第三方一致。
应当注意的是，以上所述的实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明的任何限制。通过参照典型实施例对本发明进行了描述，但应当理解为其中所用的词语为描述性和解释性词汇，而不是限定性词汇。可以按规定在本发明权利要求的范围内对本发明作出修改，以及在不背离本发明的范围和精神内对本发明进行修订。尽管其中描述的本发明涉及特定的方法、材料和实施例，但是并不意味着本发明限于其中公开的特定例，相反，本发明可扩展至其他所有具有相同功能的方法和应用。
Claims (10)
1.一种均相化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括发光胶乳微球溶液和其他试剂，所述发光胶乳微球中含有光学反应物质，表面连接有生物活性物质；所述发光胶乳微球溶液和/或其他试剂中还含有空白胶乳微球，所述空白胶乳微球不含有任何光学反应物质，表面也没有连接生物活性物质。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述其他试剂包括生物素标记的抗原或抗体溶液；优选地，所述其他试剂还包括样本稀释液。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述空白胶乳微球的表面修饰有化学基团，所述化学基团选自环氧基、氯甲基、巯基、氨基、羟基、马来胺基、磺酸基、羧基和醛基中的至少一种，优选选自磺酸基、羧基和醛基中的至少一种；更优选为羧基。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述空白胶乳微球为聚苯乙烯微球；优选地，所述发光胶乳微球与空白胶乳微球均为聚苯乙烯微球。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述空白胶乳微球的粒径60-1000nm，优选为100-300nm。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述空白胶乳微球的粒径小于所述发光胶乳微球的粒径。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述空白胶乳微球的表面带有负电荷；优选地，所述空白胶乳微球的Zeta电位为-10至-50mV，优选为-15至-30mV。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述空白胶乳微球与所述发光胶乳微球带有相同种类的电荷。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述空白胶乳微球存在于所述试剂盒的一种试剂中，优选地，所述空白胶乳微球在所述一种试剂中的浓度高于0.125mg/mL，优选为0.25mg/ml-50mg/ml。
10.权利要求1-9中任一项所述的试剂盒在检测口咽拭子、鼻咽拭子、唾液或鼻腔抽取液类样本中待测物中的应用。
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| CN202110865905.5A Pending CN114966008A (zh) | 2021-02-26 | 2021-07-29 | 一种均相化学发光检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114966008A (zh) |
-
2021
- 2021-07-29 CN CN202110865905.5A patent/CN114966008A/zh active Pending
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