CN114938813B - 负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法及其应用，该方法包括：首先制备介孔有机二氧化硅，再采用一锅法将氧化铈纳米粒子锚定于介孔有机二氧化硅上，极大提高了氧化铈纳米粒子的分散性，即得负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂。本发明的制备方法简单、成本低廉、反应条件温和、使用方法便捷。本发明所制备的杀虫剂纳米增效剂具有活性氧清除能力，可显著降低虫体活性氧水平进而降低害虫解毒酶活力，并且下调害虫P450基因表达水平，在同等杀虫剂使用剂量下，可提高杀虫活性39％‑64％，有效克服和延缓有害生物抗药性，减少环境污染，具有巨大的经济效益和可持续发展意义。

Description

负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法 及其应用
技术领域
本发明涉及农业领域，具体涉及一种负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法及其应用。
背景技术
农业害虫给粮食安全生产带来巨大损失，农业害虫的防治成为粮食稳产增产的重中之重。长期以来，农业害虫的防治主要以化学防治为主，但是由于化学农药的不科学使用，导致农业害虫对于多种杀虫剂产生了不同程度的抗药性。褐飞虱是亚洲一些国家的主要水稻害虫，目前已经对杀虫剂33种有效成分产生抗性，报道的抗药性事件达445次，在节肢动物抗药性名单中排名第11位。
针对褐飞虱的抗药性，先后提出多种抗药性治理措施，例如加强抗性监测及抗性风险评估、轮换用药、不同作用机制药剂复配、新型药剂开发和助剂的使用等。而这些抗性治理措施中，抗性监测及抗性风险评估多用于害虫预测预报；目前用于防治褐飞虱的药剂主要是新烟碱类杀虫剂，褐飞虱对其产生了不同程度抗性，导致药剂复配的效果较差；新型农药创制是一种效果较好的抗性治理办法，但是新型农药创制花费巨大且耗时。基于此，开发杀虫剂增效剂更为省时省力，既能减少农药用量又能保证粮食安全生产。
近年来，快速发展的纳米技术广泛应用于医学、能源、环境和农业等领域。纳米技术具有独特的物理和化学特性，使其成为研究和开发农业技术的独特工具。迄今为止，已开发出许多纳米材料作为纳米农药的载体，使用功能化纳米载体可以响应特定的外部刺激并按需控制农药释放，具有持效期长、能减少化学农药不合理使用造成的残留、抗性问题等优点。然而纳米农药的制备过程往往需要使用苯、酮等有机溶剂可能对生物多样性造成潜在影响。并且，纳米材料常用于以单一农药的负载，在一定程度上限制了纳米技术的应用。在实际应用中，相较于使用纳米材料负载农药，开发能够直接与多种农药混用的纳米增效剂更为便捷。纳米增效剂不仅能够减少农药使用量，而且还能够降低对非靶标生物的毒性，减少农药残留，为害虫抗药性治理提供绿色可持续的方案。
研究表明，农业害虫在杀虫剂暴露后其体内活性氧水平随之升高并能够引起害虫体内解毒酶(细胞色素P450多功能氧化酶)基因上调表达进而导致害虫抗药性水平上升。因此，抑制害虫体内活性氧升高是一种潜在的新型害虫治理策略。氧化铈(CeO2)纳米粒子具有独特的活性氧清除活性，在医学领域中已有大量关于纳米氧化铈(CeO2)清除活性氧的研究，而纳米级无机材料在热力学上不稳定，有强烈的聚集倾向，影响其催化活性。
综上所述，目前的农业害虫防治存在以下问题：
1)现有农业害虫抗药性治理办法难以解决日益严重的害虫抗药性上升问题；
2)新型农药创制是一种效果较好的害虫抗性治理办法，但是新型农药创制花费巨大且耗时；
3)纳米农药的制备过程往往需要使用苯、酮等有机溶剂可能对生物多样性造成潜在影响；
4)氧化铈往往由于其热力学不稳定导致聚集，影响其活性氧清除能力。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法及其应用，本发明将纳米氧化铈锚定在介孔有机二氧化硅上制备得到了MON@CeO2，相较于易聚集的氧化铈纳米粒子，MON@CeO2具有良好的分散性并保持了较小的尺寸。传统农药助剂大多通过提升农药在作物表面的延展、黏附、渗透性等性能实现对农药的生物活性进行增效，
为实现上述目的，本发明所设计一种负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，包括以下步骤：
1)按重量份数比称取1.0-3.0份的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、0.3-0.5份的水杨酸钠(NaSal)、0.1-0.6份的三乙醇胺(TEA)、8.0-20.0份的原硅酸四乙酯(TEOS)和8.0-15.0份的双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)，备用；
2)将十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠和三乙醇胺混于水中，超声分散，然后在高温搅拌，得到混合反应物；
3)再将原硅酸四乙酯(TEOS)和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)混合，混合液；
4)向混合反应物中加入混合液，搅拌反应，离心收集得到反应产物；
5)反应产物经无水乙醇洗涤多次去除游离的杂质(为了去除模板剂十六烷基三甲基溴化铵CTAB)，离心得到固体，将固体加入酸性乙醇中高温洗涤多次，离心收集产物并用无水乙醇洗涤多次，离心后置于真空干燥箱中干燥，得到介孔有机二氧化硅纳米颗粒MONs；
6)按重量份数称取1.0-5.0份的介孔有机二氧化硅MONs、1.0-4.0份的六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]和15.0-30.0份的氨水，备用，同时六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]溶于乙二醇中，得到含有六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]的乙二醇溶液；
7)向介孔有机二氧化硅MONs中加入水，加热搅拌；然后加入含有六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]的乙二醇溶液，持续搅拌，再加入氨水，剧烈搅拌后离心收集沉淀，将沉淀用水洗涤多次，最后用无水乙醇洗涤后真空干燥，获得纳米增效剂MON@CeO2。
进一步地，所述步骤1)中，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、水杨酸钠(NaSal)、三乙醇胺(TEA)、原硅酸四乙酯(TEOS)和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)的重量份数比分别为：1.5-2.5份、0.35-0.50份、0.10-0.45份、10.0-16.0份和10.0-13.0份。
再进一步地，所述步骤1)中，十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、水杨酸钠(NaSal)、三乙醇胺(TEA)、原硅酸四乙酯(TEOS)和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)的重量份数比分别为：1.9份、0.475份、0.41份、11.16份和10.37份。
再进一步地，所述步骤2)中，超声分散为10-30min，搅拌温度为70-90℃，搅拌时间为0.5-1.5h。
再进一步地，所述步骤4)中，搅拌温度80℃，搅拌时间为12h。
再进一步地，所述步骤5)中，酸性乙醇由质量分数为36％-38％的盐酸和无水乙醇体积比＝4：96混合而成；高温洗涤的温度为60℃，洗涤时间为12h；所述介孔有机二氧化硅纳米颗粒MONs的粒径为40-80nm。
再进一步地，所述步骤6)中，介孔有机二氧化硅MONs、六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]和氨水的重量份数比分别为2份、2.6份、18.2份。
再进一步地，所述氨水的质量分数为25％-28％。
再进一步地，所述步骤7)中，加热温度为60℃，搅拌1h。
再进一步地，所述步骤7)中，持续搅拌时间为10min；剧烈搅拌时间为3h；所述步骤7)中，真空干燥温度为60℃，干燥时间为12h。
本发明还提供了一种上述方法制备的的杀虫剂纳米增效剂在提高杀虫剂的杀虫效果中的应用。
本发明的原理：
本发明以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和水杨酸钠(NaSal)作为共模板剂，三乙醇胺作为反应的催化剂，原硅酸四乙酯(TEOS)和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)作为硅源，本合成方法可以通过控制三乙醇胺(TEA)的用量控制合成的介孔有机二氧化硅纳米颗粒MONs的粒径大小；所得到的介孔有机二氧化硅纳米颗粒MONs具有良好分散性，将其作为氧化铈纳米粒子(CeO2)的生长模板，在很大程度上改善了现有技术(水热法)合成的氧化铈纳米粒子的热力学稳定性差的缺点，提升了氧化铈纳米粒子的活性氧清除功能。
本发明所开发的纳米增效剂MON@CeO2与传统助剂不同之处在于：
1.针对传统杀虫剂能够增强杀虫剂在作物上的黏附性或者是渗透性等，所以才具有增效作用，本发明纳米增效剂MON@CeO2基于氧化铈纳米粒子的活性氧清除功能进而抑制害虫体内解毒酶细胞色素P450多功能氧化酶基因表达水平，显著提升害虫对杀虫剂的敏感性，其能够显著抑制害虫体内的活性氧水平，显著抑制害虫体内解毒酶细胞色素P450多功能氧化酶活力，显著抑制害虫解毒酶细胞色素P450多功能氧化酶基因的表达水平，进而导致害虫对于杀虫剂的敏感性上升。
2.本发明能够提高纳米氧化铈分散性，这种纳米增效剂需要具有活性氧清除能力、负调控害虫解毒酶基因表达、合成方法简单、成本低廉、对杀虫剂增效作用明显和生物相容性良好等优点。
综上所述：本发明的制备方法简单、成本低廉、反应条件温和、使用方法便捷。本发明所制备的杀虫剂纳米增效剂具有活性氧清除能力，可显著降低虫体活性氧水平进而降低害虫解毒酶活力(细胞色素P450多功能氧化酶)，并且下调害虫P450基因表达水平，在同等杀虫剂使用剂量下，可提高杀虫活性39％-64％，有效克服和延缓有害生物抗药性，减少环境污染，具有巨大的经济效益和可持续发展意义。
附图说明
图1为80nm MONs的扫描电镜图。
图2为80nm MON@CeO2的扫描电镜图。
图3为50nm MONs的扫描电镜图。
图4为50nm MON@CeO2的扫描电镜图。
图5为50nm MON@CeO2的元素分布图。
图6为MON@CeO2对田间品系褐飞虱JXF和抗烯啶虫胺品系褐飞虱NR体内ROS水平的影响图，
图中，柱形图表示平均数±标准误，*表示差异显著P<0.05，**表示差异显著P<0.01；
图7为MON@CeO2对烯啶虫胺毒力的影响图，
图中，柱形图表示平均数±标准误，柱上不同字母表示在0.05水平上差异显著。
图8为MON@CeO2对褐飞虱体内解毒酶细胞色素P450多功能氧化酶活力的影响图，
图中，柱形图表示平均数±标准误，*表示差异显著P<0.05；
图9为MON@CeO2对褐飞虱体内解毒酶细胞色素P450多功能氧化酶基因表达量的影响图，
图中，柱形图表示平均数±标准误，*表示差异显著P<0.05，**表示差异显著P<0.01；
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述，以便本领域技术人员理解。
实施例1
一种负调控害虫解毒酶基因的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，包括以下步骤：
1)按重量份数比称取1.9g的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、0.475g的水杨酸钠(NaSal)、0.41g的三乙醇胺(TEA)、11.16g的原硅酸四乙酯(TEOS)和10.37g的双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)，备用；
2)将十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠和三乙醇胺混于150ml蒸馏水中，超声分散30min，然后在温度为80℃条件下搅拌1h，得到混合反应物；
3)再将原硅酸四乙酯(TEOS)和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)混合，得到混合液；
4)向混合反应物中加入混合液，80℃条件下搅拌反应12h，离心收集得到反应产物；
5)反应产物经无水乙醇洗涤3次去除游离的杂质(为了去除模板剂十六烷基三甲基溴化铵CTAB)，离心得到固体，将固体加入酸性乙醇(酸性乙醇由质量分数为36％-38％的盐酸和无水乙醇体积比＝4：96混合而成)中在温度为60℃洗涤12h，重复多次，离心收集产物并用无水乙醇洗涤三次，离心后置于真空干燥箱中干燥12h，得到粒径为80nm的介孔有机二氧化硅纳米颗粒MONs(图1-2)；
6)按重量份数称取2g的介孔有机二氧化硅MONs、2.6g的六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]和18.2g的浓度为25％-28％氨水，备用，同时六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]溶于100ml的乙二醇中，得到含有六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]的乙二醇溶液；
7)向介孔有机二氧化硅MONs中加入100ml的蒸馏水，在温度为60℃条件下加热搅拌1h；然后加入含有六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]的乙二醇溶液，持续搅拌10min，再加入氨水，剧烈搅拌3h后离心收集沉淀，将沉淀用蒸馏水洗涤5次，最后用无水乙醇洗涤后在温度为60℃条件下真空干燥12h，获得纳米增效剂MON@CeO2。
实施例2
一种负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂1的制备方法，包括以下步骤：
1)按重量份数比称取1.9g的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、0.495g的水杨酸钠(NaSal)、0.10g的三乙醇胺(TEA)、11.16g的原硅酸四乙酯(TEOS)和10.37g的双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)，备用；
2)将十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠和三乙醇胺混于150ml蒸馏水中，超声分散10min，然后在温度为80℃条件下搅拌1h，得到混合反应物；
3)再将原硅酸四乙酯(TEOS)和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物(BTES)混合，得到混合液；
4)向混合反应物中加入混合液，80℃搅拌反应12h，离心收集得到反应产物；
5)反应产物经无水乙醇洗涤3次去除游离的杂质(为了去除模板剂十六烷基三甲基溴化铵CTAB)，离心得到固体，将固体加入酸性乙醇(酸性乙醇由质量分数为36％-38％的盐酸和无水乙醇体积比＝4：96混合而成)中在温度为60℃洗涤12h，重复多次，离心收集产物并用无水乙醇洗涤三次，离心后置于真空干燥箱中干燥12h，得到粒径为50nm的介孔有机二氧化硅纳米颗粒MONs(图3-5)；
6)按重量份数称取2g的介孔有机二氧化硅MONs、2.6g的六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]和20g的浓度为25％-28％氨水，备用，同时六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]溶于50ml的乙二醇中，得到含有六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]的乙二醇溶液；
7)向介孔有机二氧化硅MONs中加入50ml的蒸馏水，在温度为60℃条件下加热搅拌1h；然后加入含有六水硝酸铈[Ce(NO3)3·6H2O]的乙二醇溶液，持续搅拌10min，再加入氨水，剧烈搅拌3h后离心收集沉淀，将沉淀用蒸馏水洗涤5次，最后用无水乙醇洗涤后在温度为60℃条件下真空干燥12h，获得纳米增效剂MON@CeO2。
实施例3
上述实施例2制备的纳米增效剂MON@CeO2的活性氧清除活性进行测定：
将纳米增效剂MON@CeO2溶于水中配置100mg/L的MON@CeO2溶液，将长约10cm的水稻苗浸泡在MON@CeO2溶液中30s，将水稻苗取出并于阴凉处晾干，褐飞虱(田间品系JXF和抗烯啶虫胺品系NR)取食水稻24h后，测定褐飞虱体内的ROS水平，
结果如图6所示：与取食清水浸泡的水稻苗的褐飞虱相比，取食经MON@CeO2处理的水稻苗的褐飞虱体内ROS水平显著降低，证明MON@CeO2具有良好的活性氧清除活性。
实施例4
上述实施例2制备的纳米增效剂MON@CeO2在提高烯啶虫胺的杀虫效果中的应用，具体如下：
使用抗烯啶虫胺品系褐飞虱对烯啶虫胺敏感性的LC30＝20mg/L作为诊断剂量(对照)，分别与50、100、200mg/L MON@CeO2混用，采用稻苗浸渍法，对比褐飞虱死亡率变化以筛选出对烯啶虫胺具有增效作用的MON@CeO2使用剂量。
结果如图7所示：对照组褐飞虱死亡率约为20％，而添加50、100、200mg/L MON@CeO2后，褐飞虱死亡率分别为35.6％、40％和42.2％。其中100、200mg/L MON@CeO2对烯啶虫胺的杀虫活性具有显著增效作用，并且100mg/L和200mg/L MON@CeO2对烯啶虫胺的增效作用之间无显著差异，为节约成本，后续使用100mg/L MON@CeO2进行增效实验。
实施例5
基于上述得到的100mg/L MON@CeO2作为后续增效实验添加剂量，使用室内饲养的抗烯啶虫胺、氟啶虫胺腈、噻虫胺品系褐飞虱，采用稻苗浸渍法，对比抗性品系褐飞虱对杀虫剂的敏感性变化。
结果如表1所示，与单独使用杀虫剂的处理组相比，添加100mg/L MON@CeO2后，抗烯啶虫胺、氟啶虫胺腈、噻虫胺品系褐飞虱对烯啶虫胺、氟啶虫胺腈、噻虫胺的敏感性分别上升2.1、2.2、2.6倍，由此可见，100mg/L MON@CeO2可显著提高抗性品系褐飞虱对杀虫剂的敏感性。
表1MON@CeO2对抗性品系褐飞虱杀虫剂敏感性的增效作用
Figure BDA0003603969200000101
注：a增效比＝杀虫剂的LC50/(杀虫剂+MON@CeO2)的LC50，如果增效比的95％置信区间不包括1.0，则表示MON@CeO2对杀虫剂的毒力具有显著增效作用。
实施例6
使用从田间采集的褐飞虱，采用稻苗浸渍法，对比田间品系褐飞虱对杀虫剂的敏感性变化，
结果如表2所示，与单独使用杀虫剂的处理组相比，添加100mg/L MON@CeO2后，田间品系褐飞虱对烯啶虫胺、吡虫啉、呋虫胺、噻虫胺、毒死蜱、异丙威和氟啶虫胺腈的敏感性上升1.6-2.1倍，由此可见，100mg/L MON@CeO2可显著提高田间品系褐飞虱对多种作用机制杀虫剂的敏感性。
表2MON@CeO2对田间品系褐飞虱杀虫剂敏感性的增效作用
Figure BDA0003603969200000111
注：a增效比＝杀虫剂的LC50/(杀虫剂+MON@CeO2)的LC50，如果增效比的95％置信区间不包括1.0，则表示MON@CeO2对杀虫剂的毒力具有显著增效作用。
实施例7
将纳米增效剂MON@CeO2溶于水中配置100mg/L的MON@CeO2溶液，将长约10cm的水稻苗浸泡在MON@CeO2溶液中30s，将水稻苗取出并于阴凉处晾干，褐飞虱取食水稻24h后，测定褐飞虱体内的解毒酶细胞色素P450多功能氧化酶活力和P450基因的表达水平。
结果如图8-9所示：与取食清水浸泡的水稻苗的褐飞虱相比，取食经MON@CeO2处理的水稻苗的褐飞虱体内解毒酶细胞色素P450多功能氧化酶活力(图8)和P450基因的表达水平(图9)均显著降低。
实施例8
测定了MON@CeO2对蚜虫、白背飞虱和草地贪夜蛾杀虫剂敏感性的影响。
结果如表3所示，与单独使用杀虫剂的处理组相比，添加100mg/L MON@CeO2后，蚜虫对氟啶虫胺腈的敏感性上升2.8倍，白背飞虱对毒死蜱的敏感性上升2.3倍，草地贪夜蛾对高效氯氟氰菊酯的敏感性上升1.9倍，由此可见，100mg/L MON@CeO2不仅可以提高褐飞虱对杀虫剂的敏感性，也能够提高其他多种害虫对杀虫剂的敏感性。
表3 MON@CeO2对害虫杀虫剂敏感性的增效作用
Figure BDA0003603969200000121
注：a增效比＝杀虫剂的LC50/(杀虫剂+MON@CeO2)的LC50，如果增效比的95％置信区间不包括1.0，则表示MON@CeO2对杀虫剂的毒力具有显著增效作用。
其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims (9)

1.一种负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)按重量份数比称取1.0-3.0份的十六烷基三甲基溴化铵、0.3-0.5份的水杨酸钠、0.1-0.6份的三乙醇胺、8.0-20.0份的原硅酸四乙酯和8.0-15.0份的双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物，备用；
2)将十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠和三乙醇胺混于水中，超声分散，然后在高温搅拌，得到混合反应物；
3)再将原硅酸四乙酯和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物混合，得到混合液；
4)向混合反应物中加入混合液，搅拌反应，离心收集得到反应产物；
5)反应产物经无水乙醇洗涤多次去除游离的杂质，离心得到固体，将固体加入酸性乙醇中高温洗涤多次，离心收集产物并用无水乙醇洗涤多次，离心后置于真空干燥箱中干燥，得到介孔有机二氧化硅纳米颗粒MONs；
6)按重量份数称取1.0-5.0份的介孔有机二氧化硅MONs、1.0-4.0份的六水硝酸铈和15.0-30.0份的氨水，备用，同时六水硝酸铈溶于乙二醇中，得到含有六水硝酸铈的乙二醇溶液；
7)向介孔有机二氧化硅MONs中加入水，加热搅拌；然后加入含有六水硝酸铈的乙二醇溶液，持续搅拌，再加入氨水，剧烈搅拌后离心收集沉淀，将沉淀用水洗涤多次，最后用无水乙醇洗涤后真空干燥，获得纳米增效剂MON@CeO2。
2.根据权利要求1所述负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠、三乙醇胺、原硅酸四乙酯和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物的重量份数比分别为：1.5-2.5份、0.35-0.50份、0.35-0.55份、10.0-16.0份和10.0-13.0份。
3.根据权利要求2所述负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，十六烷基三甲基溴化铵、水杨酸钠、三乙醇胺、原硅酸四乙酯和双[3-(三乙氧基甲硅烷基)丙基]四硫化物的重量份数比分别为：1.9份、0.475份、0.41份、11.16份和10.37份。
4.根据权利要求1所述负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤2)中，超声分散为10-30min，搅拌温度为70-90℃，搅拌时间为0.5-1.5h。
5.根据权利要求1所述负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤5)中，酸性乙醇由质量分数为36％-38％的盐酸和无水乙醇体积比＝4:96混合而成；高温洗涤的温度为80℃，洗涤时间为12h；所述介孔有机二氧化硅纳米颗粒MONs的粒径为40nm-80nm。
6.根据权利要求1所述负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤6)中，介孔有机二氧化硅MONs、六水硝酸铈和氨水的重量份数比分别为2份、2.6份、18.2份。
7.根据权利要求1或6所述负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：所述氨水的质量分数为25％-28％。
8.根据权利要求1所述负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤7)中，加热温度为60℃，搅拌1h。
9.根据权利要求1所述负调控害虫解毒酶基因表达的杀虫剂纳米增效剂的制备方法，其特征在于：所述步骤7)中，持续搅拌时间为10min；剧烈搅拌时间为3h；所述步骤7)中，真空干燥温度为60℃，干燥时间为12h。
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