CN114917256A - 用于鸡胚卵内注射的微生态制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，主要包括益生元和复合微生物；益生元为菊粉，复合微生物主要由双歧杆菌和鸡源约翰逊乳杆菌组成。研究表明，该微生态制剂产品注射到孵化第17天的鸡胚卵黄中，对鸡胚孵化率无影响，可以促进肉鸡肠道的生长发育，提高雏鸡出生体重，改变孵化后肉鸡的肠道微生物菌群结构，提高孵化后肉鸡的生长性能，发挥促进肉鸡生长的作用，并且具有安全、无耐药性和无毒副作用的优点。因此，本发明微生态制剂是抗生素生长促进剂的替代产品，为解决肉鸡养殖中抗生素滥用提供了新思路。

Description

用于鸡胚卵内注射的微生态制剂及其制备方法
技术领域
本发明属于鸡繁育技术领域，尤其涉及一种用于鸡胚卵内注射的微生态制剂及其制备方法。
背景技术
畜禽养殖是我国的重要产业之一，随着肉禽育种的发展和养殖业规模化、集约化程度的高速发展，畜群饲养密度过大，疫病防控难度加大，导致抗生素药物预防投入的不断加大；并且随之带来的耐药病菌的传播以及畜产品药物残留问题又对公共健康构成了严重的威胁。随着人们对环境的保护意识及食品安全、自身安全的要求提高，抗生素生长促进剂被限制和禁用，开发安全有效、可提高动物生产性能和免疫能力，还可以预防常见疾病的绿色添加剂，已逐渐成为当前的研究热点。
现代肉用禽类生产周期大幅缩短，肉鸡的孵化期占整个生命周期的比重逐渐增大，对处于的孵化期的肉鸡胚蛋进行人为干预，可在较大程度的改善其出雏后的生长性能和鸡体健康，提高养殖效益。
随着抗生素生长促进剂被限制和禁用，开发安全有效的抗生素替代品已成为畜牧行业的研究热点。微生态制剂具有安全、零残留、零耐药、无毒副作用的优点，是抗生素生长促进剂的理想替代品。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种安全、无毒、无残留的用于鸡胚卵内注射的微生态制剂及其制备方法，该产品可促进鸡生长发育、改善其生长性能，作为抗生素生长促进剂的替代方案。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，主要包括益生元和复合微生物；益生元为菊粉，复合微生物主要由双歧杆菌和约翰逊乳杆菌组成。
约翰逊乳杆菌分离自由黄羽肉鸡肠道。
益生元的质量份和复合微生物的活菌数量份分别为1份和1份。
益生元的质量是1.76mg/份。
复合微生物中活菌数为2.2×106CFU/份。
双歧杆菌和约翰逊乳杆菌的活菌数量比为0.1:1。
上述微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)配制BS液体培养基和MRS液体培养基，115℃高压灭菌15min；
2)将动物源双歧杆菌按照2％的比例接种于10mL BS液体培养基中，置于37℃培养箱中，静置、厌氧培养18h；
3)将鸡源约翰逊乳杆菌按照2％的比例接种于10mL MRS液体培养基中，置于 37℃培养箱中静置培养18h；
4)将上述细菌培养物分别使用4℃离心机，3000×g离心10min，弃掉上清液，分别得到双歧杆菌和约翰逊乳杆菌菌体沉淀；利用5mL预冷的PBS溶液重悬菌体沉淀，4℃、3000×g离心10min，弃掉上清液；利用5mL PBS溶液重悬菌体沉淀，应用麦氏比浊法调整菌浓度为1×108CFU/mL 4℃保存，备用；
5)按照配方称取17.6mg菊粉，溶于1.5mL PBS溶液中，经0.45μm无菌滤器过滤除菌，4℃保存，备用；
6)将步骤3)所得双歧杆菌菌液、约翰逊乳杆菌菌液以及步骤5)所得菊粉溶液和无菌PBS溶液按1:10:75:14比例混合到一起制成微生态制剂，每份微生态制剂体积为200μL，其中菊粉的质量是1.76mg/份，复合微生物的活菌数为 2.2×106CFU/份，且双歧杆菌和约翰逊乳杆菌的活菌数量比为0.1:1。
针对现代肉鸡行业的生产存在的问题，发明人研制了一种用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，主要包括益生元和复合微生物；益生元为菊粉，复合微生物主要由双歧杆菌和约翰逊乳杆菌组成。研究表明，该微生态制剂产品注射到孵化第17天的鸡胚卵黄中，对鸡胚孵化率无影响，可以促进肉鸡肠道的生长发育，提高雏鸡出生体重，改变孵化后肉鸡的肠道微生物菌群结构，提高孵化后肉鸡的生长性能，发挥促进肉鸡生长的作用，并且具有安全、无耐药性和无毒副作用的优点。因此，本发明微生态制剂是抗生素生长促进剂的替代产品，为解决肉鸡养殖中抗生素滥用提供了新思路。
具体实施方式
实施例1
1)配制BS液体培养基和MRS液体培养基，115℃高压灭菌15min；
2)将动物源双歧杆菌按照2％的比例接种于10mL BS液体培养基中，置于37℃培养箱中，静置、厌氧培养18h；
3)将鸡源约翰逊乳杆菌按照2％的比例接种于10mL MRS液体培养基中，置于37℃培养箱中静置培养18h；
4)将上述细菌培养物分别使用4℃离心机，3000×g离心10min，弃掉上清液，分别得到双歧杆菌和约翰逊乳杆菌菌体沉淀；利用5mL预冷的PBS溶液重悬菌体沉淀，4℃、3000×g离心10min，弃掉上清液；利用5mL PBS溶液重悬菌体沉淀，应用麦氏比浊法调整菌浓度为1×108CFU/mL 4℃保存，备用。
5)按照配方称取17.6mg菊粉，溶于1.5mL PBS溶液中，经0.45μm无菌滤器过滤除菌，4℃保存，备用；
6)将步骤3)所得双歧杆菌菌液、约翰逊乳杆菌菌液以及步骤5)所得菊粉溶液和无菌PBS溶液按1:10:75:14比例混合到一起制成微生态制剂，每份微生态制剂体积为200μL，其中菊粉的质量是1.76mg/份，复合微生物的活菌数为2.2×106CFU/ 份，且双歧杆菌和约翰逊乳杆菌的活菌数量比为0.1:1。
其中，
无菌PBS溶液按以下步骤配制：
1)称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4；
2)将称取的药品溶于800mL双蒸水中，搅拌至完全溶解；
3)使用Na2HPO4和KH2PO4调节pH为7.4；
4)加双蒸水定容至1000mL；
5)121℃高压灭菌15min；
6)冷却后即可使用。
其中，鸡源约翰逊乳杆菌系从黄羽肉鸡肠道分离培养而得，经鉴定为约翰逊乳杆菌。
实验例
以下所涉及的鸡胚卵内注射用的微生态制剂按照实施例1制备得到，具体实验方法如下：
向当地孵化场购买了42枚受精卵，将受精卵随机分为对照组和试验组，每组21枚受精卵。利用多用全自动孵化机进行孵化，在温度为37.5℃，湿度为60％的条件下孵化21天，孵化第17天时试验组使用实施例1所得的鸡胚卵内注射用微生态制剂进行鸡胚卵内注射，对照组卵内注射无菌PBS溶液，孵化后统计孵化率和出生体重，之后使用商业肉鸡饲料将肉鸡饲养42天。于14和42天统计肉鸡体重和采食量，评价其生长性能；采集肉鸡血液进行血常规和血清生化检测，评价卵内注射微生态制剂安全性；采集肉鸡肠道样本制作肠道组织切片，统计回肠绒毛高度、回肠隐窝深度，评价肠道发育情况；采集肉鸡盲肠内容物，检测其肠道内微生物群变化，评价卵内注射微生态制剂对盲肠菌群的影响。综合分析卵内注射微生态制剂促生长作用及其安全性。
实验结果如表1。
表1卵内注射微生态制剂对孵化后雏鸡各项指标的影响
Figure RE-GDA0003761470810000041
从表1可知，卵内注射的微生态制剂对鸡胚孵化率没有影响，试验组的肉鸡，出生体重比对照组提升了约10％，42天体重比对照组提升了约13.7％，肉鸡采食量增加，体重增加；回肠绒毛高度增加了12％，肠道微生态指数(Shannon)下降了17％，并且血常规和血清生化指标两组无显著差异，且均在正常范围。说明本发明制得用于鸡胚卵内注射的微生态制剂具有促进肉鸡的肠道生长发育，改变成年肉鸡的肠道微生物群结构，改善肉鸡生长性能的功能，同时具有安全、无耐药和无毒副作用等优点，值得进一步开发推广利用。

Claims (7)

1.一种用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，其特征在于主要包括益生元和复合微生物；所述益生元为菊粉，所述复合微生物主要由双歧杆菌和约翰逊乳杆菌组成。
2.根据权利要求1所述的用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，其特征在于：所述约翰逊乳杆菌分离自黄羽肉鸡肠道。
3.根据权利要求1所述的用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，其特征在于：所述益生元的质量份和复合微生物的活菌数量份分别为1份和1份。
4.根据权利要求3所述的用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，其特征在于：所述益生元的质量是1.76mg/份。
5.根据权利要求3所述的用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，其特征在于：所述复合微生物中活菌数为2.2×106CFU/份。
6.根据权利要求5所述的用于鸡胚卵内注射的微生态制剂，其特征在于：所述双歧杆菌和约翰逊乳杆菌的活菌数量比为0.1:1。
7.权利要求1所述微生态制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)配制BS液体培养基和MRS液体培养基，115℃高压灭菌15min；
2)将动物源双歧杆菌按照2％的比例接种于10mL BS液体培养基中，置于37℃培养箱中，静置、厌氧培养18h；
3)将鸡源约翰逊乳杆菌按照2％的比例接种于10mL MRS液体培养基中，置于37℃培养箱中静置培养18h；
4)将上述细菌培养物分别使用4℃离心机，3000×g离心10min，弃掉上清液，分别得到双歧杆菌和约翰逊乳杆菌菌体沉淀；利用5mL预冷的PBS溶液重悬菌体沉淀，4℃、3000×g离心10min，弃掉上清液；利用5mL PBS溶液重悬菌体沉淀，应用麦氏比浊法调整菌浓度为1×108CFU/mL 4℃保存，备用；
5)按照配方称取17.6mg菊粉，溶于1.5mL PBS溶液中，经0.45μm无菌滤器过滤除菌，4℃保存，备用；
6)将步骤4)所得双歧杆菌菌液、约翰逊乳杆菌菌液以及步骤5)所得菊粉溶液和无菌PBS溶液按1:10:75:14比例混合到一起制成微生态制剂，每份微生态制剂体积为200μL，其中菊粉的质量是1.76mg/份，复合微生物的活菌数为2.2×106CFU/份，且双歧杆菌和约翰逊乳杆菌的活菌数量比为0.1:1。
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