CN114917232A - Ch5126766在制备缓解或治疗动物骨关节炎的药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了CH5126766在制备缓解或治疗动物骨关节炎的药物中的应用，属于生物医药领域，CH5126766能显著抑制软骨细胞的炎症性退变，同时抑制破骨细胞的分化及其骨吸收功能，并且可以通过抑制炎症性软骨退变和破骨细胞的激活来缓解骨关节炎，将其制备成缓解骨关节炎的药物不仅可以增加临床上对骨关节炎病人的治疗方案，且对于骨关节炎新药物的开发有重要的指导意义。

Description

CH5126766在制备缓解或治疗动物骨关节炎的药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种CH5126766在制备缓解或治疗动物骨关节炎的药物中的应用。

背景技术

骨关节炎(OA)是一种退行性关节疾病，主要特征表现为关节软骨的退变。膝关节的软骨下骨微结构的改变被人们普遍认为是关节软骨损伤的前兆，软骨下骨血管的异常激活和软骨下骨硬化和水肿、炎症和骨赘形成都是骨关节炎所产生的表型。在骨关节炎(OA)动物模型中软骨下骨的破骨细胞活性激活骨吸收增加，解除骨吸收和骨形成，导致骨关节炎(OA)动物模型软骨下骨硬化表型。对于轻、中度骨关节炎患者主要通过口服或者关节内注射镇痛药、抗炎药以及营养物质等来缓解病情，传统的治疗骨关节炎药物仅仅局限于抗炎和镇痛，只能控制骨关节炎症状，并不能真正延缓疾病进展且伴随着不良反应的副作用，严重影响了患者的治疗效果和生活质量。而末期的骨关节炎患者最终需要通过关节置换手术(TJA)来减轻患者症状。但由于手术治疗的费用高，置换关节存在免疫反应、人工关节易松动等治疗风险，所以药物治疗仍然是治疗骨关节炎的主力军。

随着人们对骨关节炎发病机制研究的不断深入，更有效的、副作用更少的新型骨关节炎治疗药物如雨后春笋一样拔地而起，如默沙东研发的促软骨形成剂Sprifermin(AS-902330)、安进研发的抑炎因子制剂AMG108都到了II期临床研究阶段。对于现阶段已进入临床研究的骨关节炎药物，我们不难发现大多数都聚焦于靶点鲜明的生物制剂上，因此探索靶点明确的治疗骨关节炎新型制剂是一种在临床上亟待解决的难题。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提出化合物CH5126766在制备缓解或治疗动物骨关节炎的药物中的应用，为研发在临床上治疗骨关节炎的药物提供新的思路。

为了实现上述目的，本发明的实施例提出了CH5126766在制备缓解或治疗动物骨关节炎的药物中的应用，所述药物包含缓解或治疗有效量的化合物CH5126766。

根据本发明实施例，RAF/MEK双重抑制剂CH5126766在体外能显著抑制软骨细胞的炎症性退变，并能抑制破骨细胞的分化及其骨吸收功能。同时CH5126766在体内可以通过抑制炎症性软骨退变和破骨细胞的激活来缓解骨关节炎，将其制备成缓解骨关节炎的药物不仅可以增加临床上对骨关节炎病人的治疗方案，且对于骨关节炎新药物的开发有重要的指导意义。

另外，根据本发明上述实施例提出的CH5126766在制备缓解或治疗动物骨关节炎的药物中的应用，还可以具有如下附加的技术特征：

可选地，所述动物为人或小鼠。

可选地，所述药物还包括药学上可接受的载体、赋形剂、添加剂。

可选地，所述骨关节炎为炎症因子激活所导致的软骨退变及破骨细胞的过度分化形成。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

图1为根据本发明实施例的CH5126766对软骨细胞系(ATDC5)的毒性检测；

图2为根据本发明实施例的CH5126766对LPS诱导的软骨细胞炎性退变的的抑制作用(阿利辛蓝染色)；

图3为根据本发明实施例的CH5126766对LPS诱导的软骨细胞炎性退变的的抑制作用(番红O染色)；

图4为根据本发明实施例的CH5126766对LPS诱导的软骨细胞炎性特异性基因表达检测；

图5为根据本发明实施例的CH5126766对单核巨噬细胞细胞(BMMs)的毒性检测；

图6为根据本发明实施例的CH5126766对RANKL诱导的破骨细胞分化的抑制作用(TRAP染色)；

图7为根据本发明实施例的CH5126766对RANKL诱导的破骨细胞分化抑制作用的定量分析；

图8为根据本发明实施例的CH5126766对RANKL诱导的破骨细胞的骨吸收功能的抑制作用；

图9为根据本发明实施例的CH5126766对RANKL诱导的破骨细胞的骨吸收抑制作用的定量分析；

图10为根据本发明实施例的CH5126766对RANKL诱导的破骨细胞的肌动蛋白环的抑制作用；

图11为根据本发明实施例的CH5126766对RANKL诱导的破骨细胞的特异性基因表达检测；

图12为根据本发明实施例的CH5126766缓解小鼠骨关节炎后软骨下骨的Micro-CT扫描后的3D重构图像；

图13为根据本发明实施例的CH5126766缓解小鼠骨关节炎后软骨下骨的Micro-CT扫描后的相关骨参数的定量分析；

图14为根据本发明实施例的CH5126766缓解小鼠骨关节炎后软骨的组织学HE染色；

图15为根据本发明实施例的CH5126766缓解小鼠骨关节炎后软骨的组织学番红O固绿染色；

图16为根据本发明实施例的CH5126766缓解小鼠骨关节炎后软骨下骨的组织学抗酒石酸活性酶(TRAP)染色；

图17为根据本发明实施例的CH5126766缓解小鼠骨关节炎后软骨下骨的破骨细胞数量的定量分析。

具体实施方式

以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。

为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

需要说明的是化合物CH5126766(RO5126766)是一种强效的选择性双重RAF/MEK抑制剂，分子量为：471.46；结构式如下：

下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。

实施例1 CH5126766对软骨细胞炎性退变的抑制作用

(1)检测天然小分子化合物CH5126766对软骨细胞系(ATDC5)的毒性实验：将软骨细胞(ATDC5)接种在含有10％的FBS和1％的青链霉素的完全培养基DMEM中，之后放在含有5％CO₂的37℃恒温培养箱中进行培养。待细胞长满后以5000个/孔的细胞密度接种于96孔板中，细胞培养于恒温箱中(37℃、5％CO₂)培育过夜，待细胞贴壁后用不同浓度(0.5、1、2、4、8、16μM)的CH5126766进行药物干预，孵育48h后在避光条件下，每孔加入10μL CCK-8溶液，置于37℃温箱中孵育1.5h，用TriStar2多功能酶标仪于450nm处测量OD值。如图1所示，小分子化合物CH5126766在2μM及其以下浓度对软骨细胞ATDC5没有毒性作用，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；n＝6。

(2)检测天然小分子化合物CH5126766对LPS诱导的软骨细胞炎性退变的作用：将软骨细胞ATDC5以密度为2万/孔的密度以聚团的形式接种在6孔板中，细胞培养于恒温箱中(37℃、5％CO₂)，过夜贴壁后，换成含1％ITS的DMEM完全培养基诱导软骨细胞分化，阳性对照组和药物组加入浓度为1ug/mL的LPS诱导软骨细胞的炎性退变，同时药物组用不同浓度(1μM、2μM)的CH5126766进行药物干预，每隔一天换一次诱导培养基。待分别诱导至7和14天时，吸走培养基用PBS洗三次，加入4％的多聚甲醛固定20min，再用PBS洗两次后分别进行阿利辛蓝和番红O染色。如图2和图3所示，阿利辛蓝和番红O染色所示，小分子化合物CH5126766在浓度为1μM和2μM可以明显抑制LPS诱导的软骨细胞分化炎性退变。

(2)检测天然小分子化合物CH5126766对LPS诱导的软骨细胞炎性退变特异性基因的表达情况：将软骨细胞系(ATDC5)以密度为6万/孔的密度接种在6孔板中，细胞培养于恒温箱中(37℃、5％CO₂)，过夜贴壁后，换成含1％ITS的DMEM完全培养基诱导软骨细胞分化，阳性对照组和药物组加入浓度为1ug/mL的LPS诱导软骨细胞的炎性退变，同时药物组用不同浓度(1μM和2μM)的CH5126766进行药物干预，每隔一天换一次诱导培养基。待诱导至7天时，按照下列步骤进行实时荧光定量PCR：

1)总RNA的提取：弃掉6孔板上的培养基，预冷PBS洗2次，每孔加入1mL的Trizol试剂冰上裂解30min用枪头吹打混匀后，收集裂解液至1.5mL离心管。接着在每个离心管中加入约200μL氯仿，剧烈振荡15s使溶液呈粉红色，室温静置5min。将离心管置入低温离心机中以转速为12000r/min，在4℃条件下离心15min。取出离心管后，样品分三层(无色上清水相，中间白色层，粉色下层为有机相)，小心吸取无色上清至另一1.5mL离心管，注意不要吸到中间层的物质。加入等体积异丙醇，轻轻混匀(上下颠倒2次)，冰上静置10min。将EP管放置低温离心机以转速为12000r/min，在4℃条件下离心5min，RNA沉于管底。弃上清，最后加入75％乙醇1mL，温和振荡，用移液枪将沉淀打起，EP管置入低温离心机以转速为5000r/min，在4℃条件下离心5min。弃上清，加入75％乙醇1mL，温和振荡，用移液枪将沉淀打起，EP管置入低温冷冻离心机5000r/min，在4℃条件下离心5min。弃上清，用移液枪将残余的乙醇吸出，沉淀于室温下晾干，加入15μL DEPC处理的水溶解RNA，冰上放置备用。

2)cDNA的合成：按Thermo公司的逆转录试剂盒进行逆转录。取以上RNA溶液11μL于微量离心管，加入oligo(dT)1μL，10000r/min，短暂离心10s，将液体混匀，放入ProFlex PCR仪，65℃反应5min，下降至4℃，冰上放置备用。取5×Reaction Buffer 4μL，RibolockDnase inhibitor 1μL，10Mm dNTP Mix 2μL,Revert Aid M-MulvRT 1μL，加入上述微量离心管10000r/min，短暂离心10s，将液体混匀，放入ProFlex PCR仪，42℃，60min，70℃，5min，下降到4℃。合成的cDNA保存于-20℃冰箱冻存。

3)实时荧光定量PCR(Real-time PCR)：使用Thermo公司提供的实时荧光定量PCR试剂盒进行实时荧光定量PCR实验。取200ng/μL的cDNA模板2μL放入微量离心管，加入5μL

Green Master荧光染料，上下游引物各0.5μL，DEPC水2μL，反应体系为10μL体系，加入PCR专用8联管中，每个样品3个孔。加样完成后，8连管放入

96PCR仪按以下条件进行PCR反应：94℃，变性2min，56℃30s，72℃35s，76℃2s共40个循环。以GAPDH或β-actin作为内参基因，以不同浓度的CH5126766药物组和对照组做为待测样本，用2^-ΔΔCt比较待测样本目的基因的表达相对于校准样本的变化。如图4所示，在小分子化合物CH5126766的作用下，软骨细胞特异性基因ACAN和COL2A1的降解得到了明显的抑制，同时诱导软骨细胞炎症退变的相关基因MMP13和ADAMTS5都得到了抑制，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；n＝3。

实施例2 CH5126766对破骨细胞分化的抑制作用

(1)骨髓来源巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)的提取和培养：4-8周龄C57BL/6小鼠于实验台上用10％水合氯醛麻醉后，经颈椎脱臼处死，酒精完全浸泡3min。在无菌条件下，用镊子及组织剪(经高压消毒)剔除下肢毛皮、肌肉等软组织，取股骨、胫骨于无菌培养皿，放入5mLα-MEM培养基(含10％FBS+1％青霉素/链霉素双抗+30ng/mL的M-CSF)。用5mL注射器冲洗骨髓腔，100μm滤网过滤于50mL离心管。离心管置于离心机中离心5min，转数为1500r/min。离心后，轻缓倒去上清，用10mL的α-MEM培养基(含10％FBS+1％青霉素/链霉素双抗+30ng/mL的M-CSF)重悬细胞，而后移入T-75培养瓶中，大约经4-5天BMMs长满后即可进行下一步实验。

(2)检测天然小分子化合物CH5126766对BMMs的毒性实验：将培养好的BMMs消化收集后，用培养基(含10％FBS+1％青霉素/链霉素双抗+30ng/mL的M-CSF)重悬，以6000个/孔的细胞密度接种于96孔板，每个浓度设置6个孔。接种好的细胞于37℃、5％CO₂培养箱中稳定过夜，待细胞贴壁后在各孔加入不同浓度(0、0.01、0.02、0.039、0.078、0.156、0.3125、0.625、1.25、2.5、5、10、20μM)的小分子化合物CH5126766。分别孵育48h和96h(每两天换液一次)后，在避光条件下每孔加入10μL CCK-8溶液，置于37℃温箱中孵育1.5h，用TriStar2多功能酶标仪于450nm处测量OD值。如图5所示，小分子化合物CH5126766在0.078μM及其以下浓度对BMMs没有毒性作用，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；n＝3。如图6所示，CH5126766在浓度为39nM及以下对BMMs无明显的毒性作用，*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001；n＝6。

(3)检测小分子化合物CH5126766对破骨细胞分化的实验：将上述(1)收集好的小鼠骨髓源巨噬细胞BMMs以6000个/孔的细胞密度接种于96孔板，每个浓度设置3个孔。培养24h待细胞贴壁后用α-MEM培养基(含10％FBS+1％青霉素/链霉素双抗+30ng/mL的M-CSF)在100ng/mL RANKL刺激下诱导破骨细胞分化。设置阳性对照组，同时药物组加入不同浓度的CH5126766(10、20、39nM)，每2天换液1次。细胞培养5天左右至破骨细胞形成后，吸去培养基，用PBS洗1次，4％甲醛细胞组织固定液固定10min，吸除固定液，PBS洗2次；吸去PBS，加入TRAP染液，于37℃温箱孵育30min，每10min观察一次，待染色合适，弃掉TRAP液，1×PBS清洗2次。于显微镜下拍照，同时计数每个孔破骨细胞数目(TRAP阳性且细胞核≥3个视为破骨细胞)。结果如图6和图7所示，小分子化合物CH5126766以浓度依赖方式显著抑制了破骨细胞的分化，**p<0.01，***p<0.001；n＝3。

实施例3 CH5126766对破骨细胞骨吸收功能的抑制作用

(1)检测小分子化合物CH5126766对破骨细胞的骨吸收影响实验：将BMMs以1.5×10⁵/孔的细胞密度接种于6孔板。待细胞稳定过夜后，每孔加入RANKL(100ng/mL)刺激破骨分化，每两天换液一次，直到开始形成小破骨细胞。吸去培养基，1×PBS洗1次，0.25％胰蛋白酶消化细胞3min，轻轻分离多核细胞并接种在含有牛骨片的96孔板上，每组药物浓度设置3个孔。待细胞培养过夜贴壁后，在各组继续加入RANKL(100ng/ml)刺激破骨分化，设置阳性对照组，同时药物组加入不同浓度的CH5126766(10、20、39nM)。隔天换液，培养2天左右至有大破骨形成后吸走培养基后将骨片取出用牙刷将骨片上的细胞刷干净，晾干后在电镜下拍照，利用Image J软件计算骨吸收陷窝的面积占比。如图8和图9所示，小分子化合物CH5126766以浓度依赖的方式显著抑制了破骨细胞的骨吸收面积，***p<0.001；n＝3。

(2)检测小分子化合物CH5126766对RANKL诱导的破骨细胞肌动蛋白环的影响实验：将上述的BMMs以6000个/孔的细胞密度接种于96孔板中，细胞培养于恒温箱中(37℃、5％CO₂)培育过夜待细胞贴壁后，用含30ng/ml MCSF和100ng/ml RANKL的完全α-MEM培养基刺激，同时用不同浓度的CH5126766(10、20、39nM)进行药物干预，每两天换液一次。细胞培养6天左右至破骨细胞的形成后，吸去培养基，用PBS洗1次，然后用4％PFA固定细胞，用含0.1％Triton 100-X的PBS对细胞进行透化反应5min，接下来用含3％BSA的PBS与细胞一起孵育30min以阻断非特异性免疫反应性。用含0.2％BSA的PBS洗涤2次后，将细胞与罗丹明缀合的鬼笔环肽在无光照的条件下孵育1-2h，再用含0.2％BSA的PBS洗涤4次，接着用无菌PBS洗4次，在避光条件下用DAPI复染以显现细胞核，最后用无菌PBS洗涤几次后，使用共聚焦显微镜对荧光进行成像拍照。如图10所示，小分子化合物CH5126766显著抑制了破骨细胞肌动蛋白环的数目。

(3)检测小分子化合物CH5126766对RANKL诱导的破骨细胞特异性基因表达的影响：BMMs以1×10⁵/孔密度接种于6孔板。待细胞过夜贴壁后，第二天在阳性及药物组中加入RANKL(100ng/ml)刺激破骨分化，同时药物组加入不同浓度的CH5126766(10、20、39nM)进行干预，每2天换液1次。细胞培养至6天左右形成破骨细胞时用Trizol裂解液对细胞进行裂解，提取细胞中的RNA及进行后期Real Time PCR的试验。具体步骤如下：

1)总RNA的提取：弃掉6孔板上的培养基，预冷PBS洗2次，每孔加入约1mL的Trizol试剂在冰上裂解30min后用枪头吹打混匀后，收集裂解液至1.5mL离心管中。接着在每个离心管中加入200μL氯仿，剧烈振荡15s使溶液呈粉红色，室温静置5min。将离心管置入低温离心机中以转速为12000r/min，在4℃条件下离心15min。取出离心管后，样品分三层(无色上清水相，中间白色层，粉色下层为有机相)，小心吸取无色上清至另一1.5mL离心管，注意不要吸到中间层的物质。加入等体积异丙醇，轻轻混匀(上下颠倒2次)，冰上静置10min。将EP管放置低温离心机以转速为12000r/min，在4℃条件下离心5min，RNA沉于管底。弃上清，最后加入75％乙醇1mL，温和振荡，用移液枪将沉淀打起，EP管置入低温离心机以转速为5000r/min，在4℃条件下离心5min。弃上清，加入75％乙醇1mL，温和振荡，用移液枪将沉淀打起，EP管置入低温冷冻离心机5000r/min，在4℃条件下离心5min。弃上清，用移液枪将残余的乙醇吸出，沉淀于室温下晾干，加入15μL DEPC处理的水溶解RNA，冰上放置备用。

2)cDNA的合成：按Thermo公司的逆转录试剂盒进行逆转录。取以上RNA溶液11μL于微量离心管，加入oligo(dT)1μL，10000r/min，短暂离心10s，将液体混匀，放入ProFlex PCR仪，65℃反应5min，下降至4℃，冰上放置备用。取5×Reaction Buffer 4μL，RibolockDnase inhibitor 1μL，10Mm dNTP Mix 2μL,Revert Aid M-MulvRT 1μL，加入上述微量离心管10000r/min，短暂离心10s，将液体混匀，放入ProFlex PCR仪，42℃，60min，70℃，5min，下降到4℃。合成的cDNA保存于-20℃冰箱冻存

3)实时荧光定量PCR(Real-time PCR)：使用Thermo公司提供的实时荧光定量PCR试剂盒进行实时荧光定量PCR实验。取200ng/μL的cDNA模板2μL放入微量离心管，加入5μL

Green Master荧光染料，上下游引物各0.5μL(引物序列见表1-1)，DEPC水2μL，反应体系为10μL体系，加入PCR专用8联管中，每个样品3个孔。加样完成后，8连管放入

96PCR仪按以下条件进行PCR反应：94℃，变性2min，56℃30s，72℃35s，76℃2s共40个循环。以GAPDH或β-actin作为内参基因，以不同浓度的CH5126766药物组和对照组做为待测样本，用2^-ΔΔCt比较待测样本目的基因的表达相对于校准样本的变化。如图11所示，小分子化合物CH5126766能显著抑制破骨细胞特异性基因的表达，*p<0.05,**p<0.01；n＝3。

实施例4 CH5126766能延缓小鼠关节炎模型软骨退变的作用。

检测小分子化合物CH5126766对前后交叉韧带手术诱导的小鼠骨关节炎的影响：将32只8周龄的雄性C57bl/6小鼠随机分成四组，每组八只小鼠，分别为假手术组(Sham组)，模型组(Vehicle组)，低浓度药物组(RO-1mg/kg)，高浓度药物组(RO-5mg/kg)。实验过程中，对模型组、低浓度药物组、高浓度药物组这三组小鼠剪断其右后肢前后交叉韧带，而对假手术组小鼠打开其关节囊但不剪断前后交叉韧带，术后缝合伤口涂抹青霉素粉末。造模两周后，对低浓度药物组和高浓度药物组的小鼠分别以浓度为RO-1mg/kg、RO-5mg/kg进行腹腔给药，同时假手术组和模型组给予同等剂量的生理盐水，给药频率为两天一次，给药总时间4周，给药结束后，称重取材后，取右下肢固定于4％多聚甲醛48h。

固定完成后取膝关节置于Skyscan 1174Micro-CT，设定参数：电压50Kv，电流800μA，扫描范围2cm×2cm，扫描层厚9μm。扫描结束后，用NRecon软件进行三维重建，CTAN软件分析比较重建后的软骨下骨的组织相关参数，包括骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Th)和骨孔隙率(Percent of porosity)。如图12和图13所示，药物组的骨体积分数(BV/TV)和骨小梁厚度(Th)显著高于模型组，且药物组的骨小梁的孔隙率(Percent of porosity)显著低于模型组，*p<0.05,**p<0.01；n＝6。

取出用4％的多聚甲醛固定好的小鼠膝关节标本，置于10％EDTA中脱钙3周，然后进行石蜡包埋、切片。切片完成后进行H&E染色、番红O固绿染色和TRAP染色。然后再光学显微镜下拍照，并用Image J软件定量分析切片上的破骨细胞相对数目。

如图14和图15的H&E和番红O固绿染色所示，与假手术组相比较，模型组中的软骨下骨有明显的侵蚀且软骨有明显的炎症退变，同时药物组的软骨下骨的侵蚀和软骨退变程度得到了显著的缓解。如图16和图17所示，TRAP染色及破骨细胞定量分析所示，药物组的破骨细胞数目显著低于模型上的破骨细胞数目。综上所述，天然小分子化合物CH5126766在体内小鼠骨关节炎模型中可以起到缓解关节软骨炎性退变的作用，同时对关节软骨下的骨溶解也有抑制作用，***p<0.001；n＝6。

综上，根据本发明的实施例，小分子化合物CH5126766在体外能显著抑制LPS诱导的软骨细胞的炎性退变以及破骨细胞的分化及其骨吸收功能。在体内动物实验证明小分子化合物CH5126766可以缓解小鼠骨关节炎中的软骨退变及软骨下骨的骨溶解，将其制备成缓解骨关节炎的药物不仅可以增加临床上对骨关节炎病人的治疗方案，且对于骨关节炎新药物的开发有重要的指导意义。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (4)

1.CH5126766在制备缓解或治疗动物骨关节炎的药物中的应用，所述药物包含缓解或治疗有效量的化合物CH5126766。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述动物为人或小鼠。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的载体、赋形剂、添加剂。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述骨关节炎为炎症因子激活所导致的软骨退变及破骨细胞的过度分化形成。

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