CN114917214A

CN114917214A - Trpm2抑制剂在制备治疗和/或预防肝癌的药物中的应用

Info

Publication number: CN114917214A
Application number: CN202210684841.3A
Authority: CN
Inventors: 徐迅迪; 曹振宇
Original assignee: Second Xiangya Hospital of Central South University
Current assignee: Second Xiangya Hospital of Central South University
Priority date: 2022-06-17
Filing date: 2022-06-17
Publication date: 2022-08-19

Abstract

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及TRPM2抑制剂在制备抗肿瘤的药物中的应用。本发明研究表明，TRPM2通道抑制剂FFA能够显著抑制Huh7与HepG2的增殖，显著减少集落的大小和数量，显著减小肿瘤大小和重量。因此，本发明提供了TRPM2抑制剂在制备抗肿瘤的药物中的应用，并提供了一种含有TRPM2抑制剂的抗肿瘤的药物。

Description

TRPM2抑制剂在制备治疗和/或预防肝癌的药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及TRPM2抑制剂在制备治疗和/或预防肝癌的药物中的应用。

背景技术

原发性肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是指发生于肝细胞或肝内胆管的恶性肿瘤，是世界上第六常见的癌症类型，在癌症相关死亡中排名第四，虽然肝癌的治疗方法在过去的几十年里得到了长足发展，但疗效果仍不理想，长期预后的改善主要依赖于早期诊断，因此寻找能够预测早期肝癌的潜在生物标志物是迫切需要的。

TRPM2通道于1998年首次从人脑中分离出来，是一种对钙离子(Ca2+)具有通透性的阳离子通道。它广泛分布于多种组织和细胞中，在脑中的表达最高，在骨髓细胞和巨噬细胞中的表达相对较高。鉴于TRPM2通道作为活性氧(ROS)的重要内源性感受器在钙动员中的作用，TRPM2通道参与了许多钙依赖的生理和病理生理过程，如免疫细胞中促炎细胞因子的产生、内皮通透性等。钙超载可导致细胞毒性，参与缺血/再灌注损伤、阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化症、神经血管功能障碍、心血管疾病、糖尿病、慢性肾脏疾病、肝脏损伤、癌症和炎症性疾病。

已有大量文献报道其参与多种恶性肿瘤的发生发展，TRPM2的抑制剂已在胃癌，结直肠癌，乳腺癌，前列腺癌中的作用已有报道。本团队已有研究表明TRPM2在原发性肝癌中显著高表达，在肝癌的发生发展中扮演着重要角色。Flufenamic acid(FFA),氟芬那酸,化学式为C14H10F3NO2，其抑制TRPM2通道功能、控制其介导的原发性肝癌的发生发展过程在疾病的治疗中具有巨大的潜在价值。

氟芬那酸(Flufenamic Acid，FFA)，为非甾体抗炎镇痛药，具有抗炎、镇痛、解热等作用，作为一种TRPM2通道抑制剂能够抑制TRPM2通道功能，其分子式为C₁₄H₁₀F₃NO₂，CASNO.530-78-9，结构式如式I所示。目前，尚未见FFA治疗肝癌的相关报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了TRPM2抑制剂在制备抗肿瘤的药物中的应用。

本发明利用TRPM2通道抑制剂FFA进行了体外和体内试验。体外实验结果显示，TRPM2通道抑制剂FFA能够显著抑制Huh7与HepG2的增殖，显著减少集落的大小和数量。体内实验结果显示，TRPM2通道抑制剂FFA能够显著减小肿瘤大小和重量。

在本发明所述的应用中，所述肿瘤为肝癌，具体为原发性肝癌。

在本发明所述的应用中，所述抗肿瘤包括：抑制肿瘤细胞的增殖和/或抑制肿瘤体积增长。

进一步地，所述抑制肿瘤细胞的增殖包括：抑制肿瘤细胞数量的增加和/或抑制克隆的形成。

在本发明所述的应用中，所述TRPM2抑制剂为氟芬那酸，或其盐、溶剂化物、水合物或立体异构体。

本发明还提供一种抗肿瘤的药物，包括TRPM2抑制剂。

在本发明所述的药物中，所述TRPM2抑制剂为氟芬那酸。

在本发明所述的药物中，所述TRPM2抑制剂为氟芬那酸的盐、溶剂化物、水合物或立体异构体。

在本发明所述的药物中，还包括药学上可接受的辅料，所述药学上可接受的辅料包括矫味剂、渗透压调节剂、填充剂、润滑剂、防腐剂、助悬剂、食用色素、稀释剂、乳化剂、崩解剂或增塑剂中的至少一种。

在本发明所述的药物中，其剂型为口服制剂或注射用剂；其中，口服制剂的剂型为片剂、丸剂、口服液剂、胶囊剂、糖浆剂、滴丸剂或颗粒剂；所述注射用剂包括注射粉针剂或注射液。其中，口服制剂的剂型为片剂、丸剂、口服液剂、胶囊剂、糖浆剂、滴丸剂或颗粒剂。优选的，胶囊剂为硬胶囊剂或软胶囊剂。片剂为口服片剂或口腔片剂。所述口服片剂指供口服的片剂，多数此类片剂中的药物是经胃肠道吸收而发挥作用，也有的片剂中的药物是在胃肠道局部发挥作用。在本发明提供的一些实施例中，口服片剂为普通压制片、分散片、泡腾片、咀嚼片、包衣片或缓控释片。所述注射用剂包括注射粉针剂或注射液。

本发明还提供了一种治疗肿瘤的方法，其包括给予TRPM2抑制剂。所述TRPM2抑制剂为氟芬那酸或其盐、溶剂化物、水合物或立体异构体。

本发明所述的药物可在联合治疗中使用，即与一种或多种其它药剂联合应用，其中所述联合应用包括TRPM2抑制剂与其它药剂一起施用，或者依次施用。例如，所述其它药剂可在施用氟芬那酸或其类似物之前、期间或之后施用。施用的方式可相同也可不同，例如TRPM2抑制剂与其它药剂可皆以注射形式给予，也可皆通过口服形式给予，也可一者通过注射形式给予，另一者通过口服形式给予。

本发明通过体外和体内实验结果发现，TRPM2通道抑制剂FFA能够显著抑制Huh7与HepG2的增殖，显著减少集落的大小和数量；显著减小了肿瘤大小和重量。因此，本发明提供了TRPM2抑制剂在制备抗肿瘤的药物中的应用，并提供了一种含有TRPM2抑制剂的抗肿瘤药物。

附图说明

图1示氟芬那酸对四氯化碳诱导的各组肝纤维化模型小鼠血清ALT、AST水平的影响；其中，FFA示氟芬那酸处理C57四氯化碳肝纤维化实验组组，CCL₄示DMSO处理C57四氯化碳肝纤维化实验对照组，NC示DMSO处理C57橄榄油无肝纤维化空白对照组；氟芬那酸为TRPM2激动剂，剂量为200mg/kg体重，腹腔注射；

图2示四氯化碳诱导的各组肝纤维化模型小鼠血清胆固醇结果；FFA示氟芬那酸处理C57四氯化碳肝纤维化实验组组，CCL₄示DMSO处理C57四氯化碳肝纤维化实验对照组，NC示DMSO处理C57橄榄油无肝纤维化空白对照组；

图3示氟芬那酸对四氯化碳诱导的肝组织结构损伤的影响；HE染色分析显示，氟芬那酸能够减少肝细胞坏死，减轻炎性细胞浸润、假小叶肝索结构紊乱及纤维结构的形成。

具体实施方式

本发明提供了TRPM2抑制剂在制备治疗和/或预防肝损伤的药物中的应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。

其中，部分试材如下：

人肝癌细胞系HuH7购自于中国上海中科院模式培养馆；HepG2购自美国典型培养物库。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1 TRPM2通道抑制剂FFA抑制肝癌细胞体外增殖的试验

将Huh7与HepG2细胞分别接种于96孔板(4×103个/孔)中，所有细胞均在37℃、95％空气和5％二氧化碳中培养。用不同浓度的FFA处理24、48、72h后，每孔加入20μLMTT(5mg/mL，Sigma)，继续孵育4h，用150μL二甲基亚砜温和振荡溶解甲瓒。在490mm处测量吸光度。

MTT实验结果显示，FFA显著抑制Huh7与HepG2的增殖，呈浓度与时间依赖性(如图1所示)。

将悬浮的肝癌细胞接种于6孔板(1.5×10³个/孔)中，加入2mL DMEM完全培养液，在37℃、含5％CO2的空气中进行不同浓度的FFA处理2周。每两天更换一次含有不同浓度FFA的培养液。菌落用0.5％结晶紫染色20min，放大50倍计数。

克隆形成实验表明抑制TRPM2显著减少了集落的大小和数量(如图2所示)。

MTT实验结果显示，FFA显著抑制Huh7细胞与HepG2细胞的增殖，呈浓度与时间依赖性。克隆形成实验表明抑制TRPM2显著减少了集落的大小和数量。

实施例2 TRPM2通道抑制剂FFA抑制体内肿瘤生长

建立裸鼠Huh7细胞移植瘤模型，观察TRPM2通道抑制剂FFA对肿瘤生长的影响。

6周龄雄性裸鼠(BALB/c)由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。将Huh7细胞悬浮在Matrigel(BD Biosciences，CA)中，每只裸鼠接受一次注射Huh7细胞(2×10⁶个/只)。当肿瘤体积达到100mm³时，将小鼠随机分为2组,每组各6只：阴性对照组(100μL，0.5％DMSO)、拮抗剂组(100μL 50mg/kg FFA)。FFA溶于0.5％DMSO，总体积100μL，每天腹腔注射，连续21天。麻醉后处死荷瘤小鼠，取出肿瘤进行进一步研究。动物实验按照国家实验动物保护与使用研究院指南进行，实验方案由中南大学机构动物保护与使用委员会(中国长沙)批准。

我们成功建立了裸鼠Huh7细胞移植瘤模型，观察TRPM2通道抑制剂FFA对肿瘤生长的影响。结果表明，与NC组相比，TRPM2通道阻断剂FFA显著减小了肿瘤大小和重量(如图3所示)。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.TRPM2抑制剂在制备治疗抗肿瘤的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肝癌。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为原发性肝癌。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤包括：抑制肿瘤细胞的增殖和/或抑制肿瘤体积增长。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抑制肿瘤细胞的增殖包括：抑制肿瘤细胞数量的增加和/或抑制克隆的形成。

6.根据权利要求1～5任一项所述的应用，其特征在于，所述TRPM2抑制剂为氟芬那酸，或为氟芬那酸的盐、溶剂化物、水合物或立体异构体。

7.一种抗肿瘤的药物，其特征在于，包括TRPM2抑制剂。

8.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述TRPM2抑制剂为氟芬那酸，或为氟芬那酸的盐、溶剂化物、水合物或立体异构体。

9.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料，所述药学上可接受的辅料包括矫味剂、渗透压调节剂、填充剂、润滑剂、防腐剂、助悬剂、食用色素、稀释剂、乳化剂、崩解剂或增塑剂中的至少一种。

10.根据权利要求7所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为口服制剂或注射用剂；其中口服制剂的剂型为片剂、丸剂、口服液剂、胶囊剂、糖浆剂、滴丸剂或颗粒剂；所述注射用剂包括注射粉针剂或注射液。