CN114916678B - 一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，涉及具有益生元的植物多糖技术领域，复合植物多糖由人参多糖和黄精多糖组成；制备方法包括S1原料混合、浸泡，S2合并提取液并过滤，将滤液浓缩后醇沉，S3收集醇沉沉淀物，溶解到蒸馏水中后离心并收集上清液，冷冻干燥；S4利用有机溶剂多次洗涤后冷冻干燥。本发明所提供的复合植物多糖符合益生元的标准，而且复合植物多糖与单独使用的人参多糖、黄精多糖或常用的益生元菊粉相比对有益细菌的增值促进作用更为明显。
Description
技术领域
本发明涉及具有益生元的植物多糖技术领域，尤其涉及一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法。
背景技术
随着人们生活水平的提高，越来越多的人不再满足于普通食品提供的基本营养需要，而是关注如何能够从食品中获得更多的营养，从而改变膳食结构，合理饮食，使自己更健康，更长寿，于是功能性食品便应运而生。双歧杆菌、乳杆菌等益生菌由于其独特的促进人体健康的生理活性，备受人们瞩目。益生元是指一些不被宿主消化吸收却能够选择性地促进体内有益菌的代谢和增殖，从而改善宿主健康的有机物质，最重要的是它只能刺激有益菌群的生长，而不刺激有潜在致病性或腐败活性的有害细菌。由于益生元可以稳定的提高体内双歧杆菌、乳杆菌等益生菌的数量，更为有效地促进益生菌益生作用的发挥，因此对于益生元的研究也越来越多，获取一种益生元作用更突出的物质一直是营养学家研究的热点。
发明内容
针对现有技术方案中如何获取一种益生元作用更突出的物质的问题，本发明提供了一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法。
本发明提供如下的技术方案：一种具有益生元作用的复合植物多糖，由人参多糖和黄精多糖组成。
一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，包括以下步骤，
S1，将人参原料、黄精原料混合后按比例加入到蒸馏水中浸泡；
S2，进行多次提取并合并提取液，过滤，将滤液浓缩后进行醇沉并冷藏；
S3，收集醇沉沉淀物，再溶解到蒸馏水中，离心后收集上清液，冷冻干燥后得到粗复合植物多糖；
S4，将粗复合植物多糖用有机溶剂洗涤后，冷冻干燥得到复合植物多糖。
优选地，所述人参原料为干燥的人参粉末，所述黄精原料为干燥的黄精粉末。
优选地，在步骤S1中，所述人参粉末和黄精粉末的重量比为2~3:3~2。
优选地，在步骤S1中，所述人参粉末、黄精粉末的混合物与蒸馏水的重量比为1:20。
优选地，在步骤S1中，所述人参粉末和黄精粉末的粒径小于等于80目。
优选地，在步骤S2中，首先在常温下进行超声提取，再将剩余的溶解液加热后进行超声提取。
优选地，在步骤S3中，利用硫酸-苯酚法显色检测溶解液中的多糖含量，直至无多糖残留后，将收集到的上清液合并后冷冻干燥。
优选地，在步骤S4中，所述有机溶剂包括无水乙醇、丙酮和乙醚。
优选地，在步骤S4中，将粗复合植物多糖分别用无水乙醇、丙酮和乙醚各洗涤3次。
本发明的有益效果是：复合植物多糖不被人体胃肠道消化，能够比较完整地到达大肠，具有益生元的非消化性，并且能刺激双歧杆菌、乳杆菌等有益菌群的生长，而对拟杆菌、大肠杆菌等有害细菌具有抑制作用，符合益生元的标准，而且复合植物多糖与单独使用的人参多糖、黄精多糖或常用的益生元菊粉相比对有益细菌的增值促进作用更为明显。
附图说明
图1为本发明中体外消化性实验的电泳结果图。
实施方式
以下结合附图及附图标记对本发明的实施方式做更详细的说明，使熟悉本领域的技术人在研读本说明书后能据以实施。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例
本发明提供了一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，包括以下步骤：
S1，将干燥的人参粉末和黄精粉末先分别过80目筛，再将筛下物各取50 g混合，将混合物按1:20的重量比加入到蒸馏水中浸泡12 h。
S2，浸泡完成后，首先超声提取30 min，得到第一提取液，然后将剩余液体加热到100 ℃后再超声提取2次，每次60 min，得到第二提取液。将第一、二提取液合并后利用滤纸过滤，将滤液在60 ℃下旋转蒸发浓缩至400 mL，再加入3倍体积量的无水乙醇醇沉，冷藏过夜。
S3，收集醇沉沉淀物，加少量蒸馏水充分溶解，离心收集上清液，离心时间为30min，转速为4000 rpm。重复此步骤直至硫酸-苯酚法显色检测剩余溶解液中基本无多糖，合并所有上清液，冷冻、干燥，得到粗复合植物多糖。
S4，将粗复合植物多糖分别用无水乙醇、丙酮和乙醚各洗涤3次后，低温冷冻干燥，得到由人参多糖和黄精多糖组成的A复合植物多糖。
实施例
本发明提供了一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，分别取过80目筛后的干燥人参粉末40 g、黄精粉60 g混合后，按实施例1的步骤进行制备，得到由人参多糖和黄精多糖组成的B复合植物多糖。
实施例
本发明提供了一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，分别取过80目筛后的干燥人参粉末60 g、黄精粉40 g混合后，按实施例1的步骤进行制备，得到由人参多糖和黄精多糖组成的C复合植物多糖。
对比例1
菊粉，购自安徽沐康食品有限公司，是一种应用非常广泛的益生元。
对比例2
称取过80目筛后的干燥黄精粉末100 g，采用实施例1的步骤进行制备，得到单黄精多糖。
对比例3
称取过80目筛后的干燥人参粉末100 g，采用实施例1的步骤进行制备，得到单人参多糖。
复合植物多糖能够耐受上消化道酶的消化作用，符合益生元的非消化性标准。将A、B、C复合植物多糖分别进行体外消化性实验，具体方法是，取1.0 g复合植物多糖溶于100mL的150 mmol/L的磷酸盐缓冲液（pH=7.5）中，加入5 U的消化性酶（唾液淀粉酶、胰淀粉酶、α-淀粉酶、淀粉葡萄糖苷酶和蛋白酶），在37℃下孵育，48 h后取样检测，采用荧光辅助糖电泳，检测消化性酶加入前后复合植物多糖的消化情况，取出胶板后用Gene Genius全自动凝胶成像系统进行照相，用Gene Tools软件进行分析，得到的泳道图像如图1所示。
其中，泳道1为A复合植物多糖加入消化道酶前，泳道2为A复合植物多糖加入消化道酶后，泳道3为B复合植物多糖加入消化道酶后，泳道4为复合植物多糖加入消化道酶后。由图1可知，复合植物多糖没有被消化酶破坏，仍然维持原来的结构，这说明复合植物多糖不被人体胃肠道消化，能够比较完整地到达大肠，具有益生元的非消化性。
复合植物多糖比单独使用的植物多糖对肠内有益菌的益生元作用更强。取A、B、C复合植物多糖和对比例1、2、3分别进行小鼠体内益生元效应实验。选用健康KM小鼠，雌雄各半，体重20 g左右，购于成都达硕实验动物有限公司，小鼠买回后喂养一周适应实验室环境，再随机分组将小鼠分为7组，每组10只。其中，第一组为空白对照组，第二组为菊粉阳性对照组，第三组为A复合植物多糖组（A组），第四组为B复合植物多糖组（B组），第五组为C复合植物多糖组（C组），第六组为单黄精多糖组（D组），第七组为单人参多糖组（E组）。
第二组灌胃菊粉的量为3.0 mg/(kg•bw)，第三至七组灌胃植物多糖的浓度为50.0mg/mL，各组灌胃液体总量按0.02 mL/(g•bw)计算，空白对照组灌胃等量的蒸馏水。各组每天灌胃一次，持续两周。分别于灌胃前、连续灌胃7天和14天，无菌釆取小鼠粪便进行肠道菌群的计数分析。肠道菌群主要选择了两种益生菌和两种有害菌，两种益生菌分别为双歧杆菌和乳杆菌，两种有害菌分别为大肠杆菌和拟杆菌。所用的选择性培养基分别为，双歧杆菌：BL琼脂培养基；乳杆菌：LBS琼脂；大肠杆菌：EMB 培养基；拟杆菌：BDS培养基；样品稀释用培养基为液体硫乙醇酸盐培养基。以上培养基均购于卡迈舒（上海）生物科技有限公司。粪便数据的测定参照现有技术，以无菌方法取小鼠粪便少量稀释后涂于上述各种选择性培养基上进行培养，一段时间后对菌落计数。
本部分实验的数据以平均值±标准差（means±SEM）表示。统计学分析采用student-Newman-Keuls检验，显著性水平α=0.05，所有的分析过程都在软件SPSS 17.0中进行。实验结果如表一所示，菊粉能够明显促进肠道中双歧杆菌和乳杆菌的增殖（P＜0.05），灌胃14天后小鼠粪便中双歧杆菌的数量增加了7.2倍，乳杆菌的数量增加了5.3倍；D、E组小鼠粪便中，双歧杆菌与乳杆菌的数量均有一定幅度的增加（P＜0.05），与菊粉的作用相当；灌胃7天与14后，A、B、C组小鼠粪便中，双歧杆菌与乳杆菌的数量均有大幅度的增加（P＜0.05），且增加幅度大于菊粉组、D组、E组（P＜0.05），综合来说A组效果较佳；同时肠道有害菌的数量都有不同水平的降低。实验结果说明，复合植物多糖能刺激双歧杆菌、乳杆菌等有益菌群的生长，而对拟杆菌、大肠杆菌等有害细菌具有抑制作用，符合益生元的标准，而且复合植物多糖与单独使用的人参多糖、黄精多糖或常用的益生元菊粉相比对有益细菌的增值促进作用更为明显。
表1-连续灌胃后小鼠粪便菌群数量检测结果
以上为本发明的一种或多种实施方式，其描述较为具体和详细，但不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (7)
1.一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，其特征在于：所述复合植物多糖由人参多糖和黄精多糖组成，所述制备方法包括以下步骤，
S1，将人参原料、黄精原料混合后按比例加入到蒸馏水中浸泡；所述人参原料为干燥的人参粉末，所述黄精原料为干燥的黄精粉末，所述人参粉末和黄精粉末的重量比为2~3:3~2；
S2，进行多次提取并合并提取液，过滤，将滤液浓缩后进行醇沉并冷藏；
S3，收集醇沉沉淀物，再溶解到蒸馏水中，离心后收集上清液，冷冻干燥后得到粗复合植物多糖；
S4，将粗复合植物多糖用有机溶剂洗涤后，冷冻干燥得到复合植物多糖。
2.根据权利要求1所述的一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，其特征在于：在步骤S1中，所述人参粉末、黄精粉末的混合物与蒸馏水的重量比为1:20。
3.根据权利要求1所述的一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，其特征在于：在步骤S1中，所述人参粉末和黄精粉末的粒径小于等于80目。
4.根据权利要求1所述的一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，其特征在于：在步骤S2中，首先在常温下进行超声提取，再将剩余的溶解液加热后进行超声提取。
5.根据权利要求1所述的一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，其特征在于：在步骤S3中，利用硫酸-苯酚法显色检测溶解液中的多糖含量，直至无多糖残留后，将收集到的上清液合并后冷冻干燥。
6.根据权利要求1所述的一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，其特征在于：在步骤S4中，所述有机溶剂包括无水乙醇、丙酮和乙醚。
7.根据权利要求6所述的一种具有益生元作用的复合植物多糖制备方法，其特征在于：在步骤S4中，将粗复合植物多糖分别用无水乙醇、丙酮和乙醚各洗涤3次。
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