CN114908023B - 一株提高肠道放线菌门相对丰度、抑制促炎症因子表达量的凝结芽孢杆菌 - Google Patents

一株提高肠道放线菌门相对丰度、抑制促炎症因子表达量的凝结芽孢杆菌 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株提高肠道放线菌门相对丰度、抑制促炎症因子表达量的凝结芽孢杆菌，属于微生物领域。本发明的菌株凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041有效缓解肠易激综合症状，凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041降低IBS小鼠结肠扩张评分、抑制结肠肥大细胞的激活、降低PAR‑2的表达，并降低血清皮质酮的浓度、能够显著提升肠易激综合症状小鼠肠道内放线菌门(Actinobacteria)的相对丰度、抑制了促炎细胞因子(IL‑1β，IL‑6与TNF‑α)的表达，因此，本发明的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041在制备肠易激综合症的产品(如药品或保健品等)中，具有巨大的应用前景。

Description

一株提高肠道放线菌门相对丰度、抑制促炎症因子表达量的 凝结芽孢杆菌
技术领域
本发明涉及一株提高肠道放线菌门相对丰度、抑制促炎症因子表达量的凝结芽孢杆菌，属于微生物领域。
背景技术
肠易激综合征(Irritable bowel syndrome，IBS)是一种具有肠道功能性障碍的慢性肠道疾病，通常伴随着腹痛、腹胀与排便习惯的变化。现行的IBS常用诊断标准是多位胃肠病学学者共同制订的“Rome IV标准”。根据该标准规定的粪便状态，IBS被分为四个亚型，腹泻型IBS(IBS-D)、便秘型IBS(IBS-C)、腹泻便秘混合型(IBS-M)与未确定型(IBS-U)，具有不同的临床表现。据统计，目前的肠易激综合症状(IBS)患病率大于10％，且女性的IBS发病率高于男性。然而，由于社会对IBS的认知的缺乏，预计超过三分之一符合IBS罗马Ⅲ标准的IBS患者仍未被正式诊断为IBS。这表明，IBS的潜在患者仍然众多。
环境变化、情绪变化、肠道感染等因素直接引起的免疫激活(肠道炎症等)、内脏超敏症状(心理压力、脑肠轴紊乱等)及肠道菌群紊乱(多样性及组成改变)，均被认为可能是IBS的共同诱因。研究发现，肠道菌群参与了宿主的免疫应答、神经信号传导等多个生理生化过程，并对数个疾病的发生发展具有显著影响。与健康人相比，IBS患者肠道菌群的多样性显著降低，肠道菌群的组成发生了显著变化。而免疫系统对肠道菌群过度的免疫反应能够诱发产生肠道损伤性炎症，这说明肠道菌群的紊乱极可能在IBS的发病中具有重要作用。
在先前的研究中，IBS被认为不涉及到患者器质性病变及生化指标异常，但最新的IBS相关研究推翻了该结论。证据显示，IBS患者的肠道具有一种非常轻的、低度的粘膜炎症、并伴随着轻微的纤维化与溃疡。这种肠道炎症同样被报道能够引起患者免疫应答的变化，先天免疫激活状态。因此，机体的免疫过度激活，被认为可能是IBS的共同诱因。目前，已有大量研究证明了益生菌恢复细胞因子平衡的能力。一项针对IBS患者的安慰剂对照随机临床试验表明，12周的婴儿双歧杆菌导致IL-10/IL-12比率增加，与健康患者中发现的水平相似。此外，也有研究报道，益生菌长双歧杆菌可降低小鼠体内的促炎因子TNF-α。而嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、双歧双歧杆菌和保加利亚乳杆菌的益生菌组合可降低小鼠体内的TNF-α、干扰素-γ和PGE 2水平这些研究表明，益生菌可以调节先天性和适应性免疫，从而潜在地赋予治疗益处并治疗IBS中的免疫失调。
对IBS而言，饮食是公认的可能诱发IBS的因素。普遍认为，在饮食中限制短链碳水化合物(Fermentable oligo-,di-,and monosaccharides and polyols，FODMAPs)有助于缓解IBS患者的腹痛、腹胀、排便频率等临床症状。然而，关于低FODMAP饮食并非都是统一支持的声音。部分临床试验发现，不同亚型IBS患者对低FODMAP饮食的响应具有显著差异，效果与患者的基因型也具有一定相关性。且低FODMAP饮食由于改变了患者的饮食习惯，并限制摄入部分饮食成分，从而对肠道菌群组成与代谢具有显著的影响，这可能是不利于人体健康的。而除膳食疗法外，药物疗法同样被应用于IBS的治疗中。诸如抗痉挛药物、5-HT受体抑制剂、利福昔明抗抑郁药物等药物被报道具有一定IBS缓解功效，但带来的诸如致使患者口干、眼涩、缺血性结肠炎、低血压及性功能障碍等数个副作用相比于膳食疗法更是巨大的。因此，新型的IBS治疗方法的开发是势在必行的。
随着肠道菌群在人类健康中的重要性与日俱增，人们对可以调节肠道菌群的干预措施及其与宿主的相互作用的兴趣也逐渐增长。除饮食外与FMT外，益生菌是人们最熟知的，亦是最公认的能够调节人体肠道菌群的物质。
如何通过对益生菌预防IBS的发生甚至缓解IBS的症状，将会对食品科学、微生物学以及预防医学等各方面产生巨大的影响。
发明内容
本发明提供了一种凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GDMCC No.60538在制备改善肠易激综合症的微生物菌剂中的应用；所述凝结芽孢杆菌GDMCC No.60538记载于公开号为CN111004731B的中国发明专利文本中；在本发明中，将凝结芽孢杆菌GDMCC No.60538以凝结芽孢杆菌CCFM1041命名。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂为包括细胞形态为营养细胞的凝结芽孢杆菌生物制剂或细胞形态为芽孢的凝结芽孢杆菌生物制剂。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物制剂中，凝结芽孢杆菌的芽孢数为不低于5×109CFU/mL或5×109CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述细胞形态为营养细胞的凝结芽孢杆菌生物制剂，是将凝结芽孢杆菌在MRS培养基中活化培养后，离心获得凝结芽孢杆菌菌体，洗涤后收集菌体用保护剂重悬，得到凝结芽孢杆菌生物制剂；或者，再将重悬的菌体干燥得到凝结芽孢杆菌菌粉生物制剂。
在本发明的一种实施方式中，所述微生物菌剂具有以下至少一种功能：
(a)降低IBS小鼠结肠扩张评分，缓解外部刺激造成的小鼠内脏痛觉增强；
(b)提高肠易激综合症状小鼠的肠道菌群多样性；
(c)改善小鼠肠道菌群组成，主要包括提高肠易激综合症小鼠肠道放线菌门相对丰度；
(d)缓解肠易激综合症；
(e)改善结肠组织的病理损伤；
(f)抑制结肠组织中促炎症因子的表达量。
本发明提供了一种凝结芽孢杆菌GDMCC No.60538在制备改善肠易激综合症的产品中的应用。
在本发明的一种实施方式中，所述产品为药品、保健品、饲料或饲料添加剂。
在本发明的一种实施方式中，所述产品中，凝结芽孢杆菌的芽孢数为不低于5×109CFU/mL或5×109CFU/g。
在本发明的一种实施方式中，所述药品含有凝结芽孢杆菌、药物载体和/或药用辅料。
在本发明的一种实施方式中，所述药物载体包含微囊、微球、纳米粒和/或脂质体。
在本发明的一种实施方式中，所述药用辅料包含赋形剂和/或附加剂。
在本发明的一种实施方式中，所述赋形剂包含黏合剂、填充剂、崩解剂和/或润滑剂。
在本发明的一种实施方式中，所述附加剂包含增溶剂、助溶剂、潜溶剂和/或防腐剂。
在本发明的一种实施方式中，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
在本发明的一种实施方式中，所述产品具有以下至少一种功能：
(a)降低IBS小鼠结肠扩张评分，缓解外部刺激造成的小鼠内脏痛觉增强；
(b)提高肠易激综合症状小鼠的肠道菌群多样性；
(c)改善小鼠肠道菌群组成，主要包括提高肠易激综合症小鼠肠道放线菌门相对丰度；
(d)缓解肠易激综合症；
(e)改善结肠组织的病理损伤；
(c)抑制结肠组织中促炎症因子的表达量。
有益效果
本发明的菌株凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041有效缓解肠易激综合症状，具体体现在：
(1)本发明的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041降低IBS小鼠结肠扩张评分，缓解外部刺激造成的小鼠内脏痛觉增强。
(2)本发明的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041能够抑制结肠肥大细胞的激活，降低PAR-2的表达，并降低血清皮质酮的浓度。
(3)本发明的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041能够改善IBS小鼠肠道菌群的严重的失调症状，包括提高小鼠肠道菌群多样性水平(提高Observed_OTUs多样性指数及Shannon多样性指数)。
(4)本发明的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041能够显著提升肠易激综合症状小鼠肠道内放线菌门(Actinobacteria)的相对丰度。
(5)本发明的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041缓解了小鼠结肠所受的组织病理学损伤，抑制了促炎细胞因子(IL-1β，IL-6与TNF-α)的表达。这说明凝结芽孢杆菌(B.coagulans)CCFM1041能够缓解结肠炎症。
(6)本发明的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041能够抑制结肠肥大细胞的激活，降低PAR-2的表达，并降低血清皮质酮的浓度，从而缓解IBS小鼠的内脏超敏症状。
本发明的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)CCFM1041在制备肠易激综合症的产品(如药品或保健品等)中，具有巨大的应用前景。
附图说明
图1：小鼠腹部回撤反射评分标准。
图2：小鼠腹部撤回反射评分；其中，A为气体压力在0.1mL条件下的评分结果，B为气体压力在0.2mL条件下的评分结果；备注：小写字母a～c表示该数据具有统计学差异(P<0.05)。
图3：小鼠结肠组织中肥大细胞类胰蛋白酶的水平。
图4：小鼠结肠组织病理学分析(放大倍数＝5×；比例尺＝200μm)；其中，A组为空白组；B组为模型组，C组为凝结芽孢杆菌GBI-30，6086组；D组为凝结芽孢杆菌CCFM1041组；E组为凝结芽孢杆菌BC-21组；F组为凝结芽孢杆菌BC-30组；G组为凝结芽孢杆菌BC-60组；H组为凝结芽孢杆菌BC-90组；注：黑色箭头指示该位置存在炎性细胞浸润，红色箭头指示该位置存在少量淤血。
图5：小鼠结肠促炎细胞因子及抑炎细胞因子的表达；其中，A为小鼠结肠组织中IL-1β的表达量；B为小鼠结肠组织中IL-6的表达量；C为小鼠结肠组织中IL-10的表达量；D为小鼠结肠组织中TNF-α的表达量；注：小写字母表示组间具有显著性差异(P<0.05)。
图6：小鼠肠道菌群的多样性分析；其中，A为Observed_OTUs多样性指数，B为Shannon多样性指数。
图7：小鼠肠道菌群的进化分枝图。
图8：造模组、空白组、凝结芽孢杆菌CCFM1041组之间差异属的线性判别分析得分，其中，A为空白组和造模组之间差异属的线性判别分析得分，B为CCFM1041组和造模组之间差异属的线性判别分析得分。
具体实施方式
下述实施例中所涉及的鼠柠檬酸杆菌DBS100购自美国ATCC菌种保藏库，所涉及的凝结芽孢杆菌GBI-30，6086购自美国Ganeden公司，所述凝结芽孢杆菌BC21(VYNDL1M1)、凝结芽孢杆菌BC30(VHuBXY1M1)、凝结芽孢杆菌BC60(VJSNJ4M1)、凝结芽孢杆菌BC90(VGZTR1M1)公开于江南大学食品生物技术中心菌种保藏库。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS液体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、三水磷酸氢二甲2.6g/L、七水硫酸镁0.5g/L、七水硫酸锰0.25g/L、吐温-80 1g/L、蒸馏水1000g/L。
MRS固体培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、葡萄糖20g/L、无水乙酸钠2g/L、柠檬酸氢二胺2g/L、三水磷酸氢二甲2.6g/L、七水硫酸镁0.5g/L、七水硫酸锰0.25g/L、吐温-80 1g/L、琼脂20g/L、蒸馏水1000g/L。
产芽孢培养基(g/L)：酵母膏0.7g/L、蛋白胨1g/L、葡萄糖1g/L、硫酸铵0.2g/L、七水硫酸镁0.2g/L、磷酸氢二钾1g/L。
下述实施例中所涉及的检测方法如下：
小鼠结肠扩张内脏敏感性的检测：
腹部撤退反射(Abdominal withdrawal reflex，AWR)法测定小鼠结肠扩张内脏敏感性。各组小鼠禁食16h后进行实验。实验开始后，用4％异氟烷麻醉小鼠，并继续以2％异氟烷持续麻醉小鼠。将儿童尿导管(6Fr，2mm外径)以液体石蜡进行润滑，从肛门插入小鼠的降结肠中。将尿道管与小鼠尾部用胶带固定，并将小鼠放置到透气塑料盒中。在塑料盒中，小鼠仅能前后行走，不能转身。待小鼠适应30min后，以逐步打气加压的方式进行结肠直肠扩张。压力从0.1、0.2至0.3ml逐步上升，每个压力扩张20s。更换压力时需将气体排空，每次20秒的扩张之后均有5min休息时间。在评估结束后，将球囊放气并撤回。AWR评分标准如图1所示，0分-无明显反应；1分-短暂头部摆动再停止；2分-腹部肌肉收缩；3分-腹部提起；4分-弓背、抬起骨盆。该评分由两名不知道小鼠详细分组的实验人员进行。
实施例1：凝结芽孢杆菌CCFM1041对肠易激综合征小鼠内脏敏感性的缓解作用
(1)凝结芽孢杆菌芽孢悬液的制备
将活化后的凝结芽孢杆菌菌种按2mL/100mL的接种量，接种至产芽孢培养基中，在37℃下，250r/min摇瓶培养48h，制备得到凝结芽孢杆菌芽孢悬液。
(2)乳酸林格氏液的制备
在1L蒸馏水中加入9g氯化钠，0.12g氯化钾，0.24g氯化钙，0.2g碳酸氢钠，制备得到乳酸林格氏液。
(3)建立小鼠IBS模型
使用鼠柠檬酸杆菌感染与避水应激压力结合法，建立小鼠IBS模型。将80只C57BL/J小鼠被随机分为8组(每组10只)，分组方式如表1所示。
小鼠适应一周后开始实验，实验时间为30天。实验第1天，空白组小鼠灌胃0.2ml无菌生理盐水，其余组小鼠灌胃鼠柠檬酸杆菌DBS100(1.2×1010CFU/0.2ml/只)。
第2天到第8天，所有小鼠皮下注射0.5ml乳酸林格氏溶液，以防止腹泻引起的脱水。
第9天到第17天的具体处理方法详见表1；
实验第18天至第30天，所有小鼠均接受避水应激压力(Water avoidance stress，WAS)。WAS装置为一个直径27cm、高33cm的水桶。桶底装有一个直径4cm、高9cm的干燥平台。水桶中装水，水位低于平台1厘米。每天将小鼠置于平台上1小时，如果小鼠掉进水里，立即捞起并用毛巾擦干。空白组小鼠在无水条件下放置于平台上1h。
除上述处理外，从第2天至第29天，对照组小鼠和模型组小鼠灌胃给予无菌生理盐水(0.2ml/只/天)。其他组小鼠灌胃给予相应凝结芽孢杆菌芽孢悬液0.2ml(5×109CFU/ml/只/天)。各组的具体处理方法详见表1～2。
表1：各组的具体处理方法(1)
表2：各组的具体处理方法(2)
(3)用腹部撤退反射(Abdominal withdrawal reflex，AWR)法测定小鼠结肠扩张内脏敏感性。
将步骤(2)实验结束后的各组小鼠禁食16h后用腹部撤退反射法测定小鼠结肠扩张内脏敏感性，结果如图2A～B所示。
结果显示：在0.2ml和0.1ml的气体压力下，凝结芽孢杆菌CCFM1041均具有较好的效果；其中，在0.2ml气体压力下，空白组和造模组的AWR评分分别0.5和3.5，CCFM1041组为1.2，GBI-30,6086组为1.6，BC-21组为3.7，BC-30组为3，BC60组为3.6，BC90组为3.9。与其他实验组比较，凝结芽孢杆菌CCFM1041可以显著降低小鼠内脏敏感性，最为接近空白组，这说明凝结芽孢杆菌CCFM1041具有缓解内脏超敏症状的功效。
(4)将步骤(2)实验结束后的各组小鼠使用异氟烷麻醉处死后，收集小鼠的血清，并精确取0.1g结肠组织，以预冷过的无菌生理盐水匀浆，以3000×g，4℃条件离心5min收集上清液。用相应的ELISA试剂盒测定小鼠结肠组织中PAR-2、肥大细胞类胰蛋白酶含量及血清中的皮质酮水平，其中，肥大细胞类胰蛋白酶含量的结果如图3所示。
结果显示，由图3可知，空白组和造模组中小鼠的结肠肥大细胞类胰蛋白酶表达量为别为210pg/mg protein和440pg/mg protein，实验组中CCFM1041组为220pg/mgprotein，GBI-30,6086组为260pg/mg protein，BC-21组为420pg/mg protein，BC-30组为450pg/mg protein，BC-60组为390pg/mg protein，BC-90组为430pg/mg protein；可见，CCFM1041组的效果优于GBI-30,6086组。
同时，用相应的ELISA试剂盒测定小鼠结肠组织中PAR-2、血清中的皮质酮水平，可知在凝结芽孢杆菌CCFM1041干预后，小鼠结肠组织中PAR-2、血清中的皮质酮水平的表达水平均有所下降，接近空白组。进一步提示凝结芽孢杆菌CCFM1041具有较优秀的改善小鼠肠道敏感症状的作用。
实施例2：凝结芽孢杆菌CCFM1041对肠易激综合征小鼠结肠组织的影响
具体实施方式同实施例1，区别在于，实验结束后，将小鼠解剖后，取新鲜结肠组织放入多聚甲醛固定液，浸泡后，过夜冲洗。将样品依次经70％、80％、90％各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95％、100％各2次，每次20min进行脱水。放入1/2纯酒精，1/2二甲苯等量混合液15min，二甲苯前洗液15min、二甲苯后洗液15min至透明为止。放入二甲苯和石蜡各半的混合液15min，再放入石蜡Ⅰ、石蜡Ⅱ透蜡各50～60分钟来除去透明剂。将处理好的样品进行包埋切片、展片、烤片、H&E染色与封片。
观察小鼠结肠组织的病理切片，结果如图4所示，空白组，CCFM1041组和GBI-30,6086组小鼠结肠无明显病理性症状，造模组小鼠的结肠中出现了低度炎性损伤，具体表现为轻微的炎性细胞浸润症状，而其余凝结芽孢杆菌处理组(BC-21组，BC-30组，BC-60组，BC-90组)也均呈现出炎症细胞浸润现象，在用凝结芽孢杆菌CCFM1041处理的小鼠中，没有观察到明显的组织病理学损伤，这表明该菌株可能具有缓解肠道炎症的功效。
实施例3：凝结芽孢杆菌CCFM1041对肠易激综合征小鼠结肠促炎细胞因子及抗炎细胞因子的调节作用
具体实施方式同实施例1，区别在于，实验结束后，分别将小鼠解剖，精确取0.1g结肠组织，以预冷过的无菌生理盐水匀浆，以3000×g，4℃条件离心5min收集上清液。用相应的ELISA试剂盒测定小鼠结肠组织中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α表达量，结果如图5A～D所示。
由图5A可知，IL-1β的表达量在空白组和造模组中分别为38pg/mg protein和58pg/mg protein，在CCFM1041组中为45pg/mg protein，在GBI-30,6086组中为48pg/mgprotein，在BC-21组中为51pg/mg protein，在BC-30中为53pg/mg protein，在BC-60中为53pg/mg protein，在BC-90中为55pg/mg protein。相比于其他凝结芽孢杆菌处理组，凝结芽孢杆菌CCFM1041的摄入显著降低了小鼠结肠中促炎症因子1β的表达量，最为接近空白组。
由图5B可知，空白组小鼠、造模组的结肠组织中IL-6表达量分别为44pg/mgprotein和64pg/mg protein，凝结芽孢杆菌CCFM1041组中IL-6表达量为41pg/mg protein，而GBI-30,6086组中IL-6表达量为：48pg/mg protein，可见CCFM1041组的效果优于GBI-30,6086组。
由图5C可知，空白组小鼠、造模组的结肠组织中IL-10表达量分别为72pg/mgprotein和134pg/mg protein，凝结芽孢杆菌CCFM1041组中IL-10表达量为87pg/mgprotein，而GBI-30,6086组中IL-10表达量为：98pg/mg protein，可见CCFM1041组的效果优于GBI-30,6086组。
由图5D可知，空白组小鼠、造模组的结肠组织中TNF-α表达量分别为13pg/mgprotein和17pg/mg protein，凝结芽孢杆菌CCFM1041组中TNF-α表达量为8pg/mg protein，而GBI-30,6086组中TNF-α表达量为：9.2pg/mg protein，可见CCFM1041组的效果优于GBI-30,6086组。
这说明经凝结芽孢杆菌CCFM1041处理后，小鼠结肠促炎细胞因子IL-1β，IL-6，IL-10与TNF-α的表达量有显著降低，并能够恢复至正常水平，与实施例2结果吻合。
在过去的实验中，研究人员研究发现凝结芽孢杆菌专利菌株Unique IS2的摄入无法改善患者体内促炎症因子IL-6、IL-12、TNF-α、INF-γ的水平(Randomized clinicaltrial:the effect of probiotic Bacillus coagulans Unique IS2 vs.placebo on thesymptoms management of irritable bowel syndrome in adults,DOI:10.1038/s41598-019-48554-x)；可见，凝结芽孢杆菌CCFM1041对促炎症因子的缓解作用有其菌株特异性。
实施例4：凝结芽孢杆菌CCFM1041对肠易激综合征小鼠肠道菌群多样性和组成分析
80只C57BL/J小鼠分组、造模及处理方法同实施例1。实验结束后，通过粪便DNA提取试剂盒提取小鼠粪便DNA，对粪便菌群进行16S rDNA V4区的扩增。并对PCR产物的回收与纯化，最后通过Illumina Miseq平台测序与生物信息学分析。检测结果如图6A～B、图7～8所示。
结果显示，由图6A～B可知，凝结芽孢杆菌CCFM1041在Observed_OTUs多样性指数及Shannon多样性指数上，均具有较好的效果，表明该菌具备改善肠道菌群多样性的功效。
由图7～8可知，造模组和其余凝结芽孢杆菌处理组中放线菌门(Actinobacteria)的丰度出现下降，而CCFM1041组小鼠肠道中放线菌门(Actinobacteria)的相对丰度则显著高于造模组和其余实验处理组(图7和图8)。
因此，实验结果表明凝结芽孢杆菌CCFM1041的摄入可以线束改善了IBS小鼠的肠道菌群组成，病提升肠道内放线菌门(Actinobacteria)相对丰度的提升，从而维持肠道稳态。
实施例5：凝结芽孢杆菌CCFM1041在制备缓解肠易激综合征的药品中的应用
将凝结芽孢杆菌CCFM1041以2-4％的接种量接种到产芽孢培养基中在37℃下，250r/min摇瓶培养48h，离心并洗涤芽孢，用生理盐水重悬浮，使芽孢浓度≥5×109CFU/ml，在分别称淀粉55.0重量份、纤维素衍生物4.5重量份、羧甲基淀粉钠12.0重量份、滑石粉0.8重量份、蔗糖1.0重量份与水1.0重量份，充分混匀，采用常规方法制成湿颗粒，然后使用例如中南制药机械厂生产的压片机进行压片，然后使用小型药物干燥剂中进行干燥，再包装得到本发明的片剂。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)GDMCC No.60538在制备改善肠易激综合症的微生物菌剂中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述微生物菌剂为细胞形态为营养细胞的凝结芽孢杆菌生物制剂，或细胞形态为芽孢的凝结芽孢杆菌生物制剂。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述细胞形态为营养细胞的凝结芽孢杆菌生物制剂，是将凝结芽孢杆菌在MRS培养基中活化培养后，离心获得凝结芽孢杆菌菌体，洗涤后收集菌体用保护剂重悬，得到凝结芽孢杆菌生物制剂；或者，再将重悬的菌体干燥得到凝结芽孢杆菌菌粉生物制剂。
4.如权利要求1～3任一所述的应用，其特征在于，所述微生物菌剂中，凝结芽孢杆菌的芽孢数为不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g。
5.凝结芽孢杆菌GDMCC No.60538在制备改善肠易激综合症的产品中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述产品为药品、保健品、饲料或饲料添加剂。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述产品中，凝结芽孢杆菌的芽孢数为不低于1×109CFU/mL或1×109CFU/g。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药品中含有凝结芽孢杆菌、药物载体和/或药用辅料。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药品的剂型为粉剂、颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液。
10.如权利要求5～9任一所述的应用，其特征在于，所述产品具有以下至少一种功能：
(a)缓解肠易激综合症；
(b)提高肠易激综合症状小鼠的肠道菌群多样性；
(c)改善小鼠肠道菌群组成，主要包括提高肠易激综合症小鼠肠道放线菌门相对丰度。
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