CN114903878B - 倍半萜类化合物在抑制trpa1通道的活性中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，本发明发现如式I所示的化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐用于制备药物或制剂，所述药物或制剂用于：(a)抑制TRPA1通道的活性；(b)治疗与TRPA1通道相关的疾病。实验表明，所述的式(I)化合物对TRPA1通道有较好的抑制效果，本发明的式(I)化合物可用于治疗与TRPA1靶点相关的疼痛、炎症、呼吸道疾病(如呼吸障碍)、瘙痒、皮肤病(痤疮、粉刺)、尿路障碍、炎症性肠病等。

Description

倍半萜类化合物在抑制TRPA1通道的活性中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其是涉及一种瞬时受体电位(TRP)离子通道家族的拮抗剂，具体地，本发明涉及倍半萜类化合物在抑制TRPA1通道的活性中的应用。

背景技术

瞬时受体电位(TRP)通道是广泛存在于哺乳动物中的离子通道类型。该家族一共划分为7个亚家族，即TRPC、TRPV、TRPM、TRPN、TRPML、TRPA和TRPP。TRP通道均为六次跨膜蛋白，其N末端和C末端均在胞内,由第五和第六跨膜结构域共同构成非选择性阳离子孔道。这些通道通常作为多种化学和物理刺激的感受器，可被许多种因素调节,包括温度、渗透压、pH值、机械力,以及一些内、外源性配体和细胞内信号分子。

TRPA1通道是瞬时受体电位通道家族的成员，因其N端至少存在14个锚蛋白重复序列，也被称为带有跨膜结构域蛋白1的锚蛋白样蛋白(ANKTM1)，广泛分布于哺乳动物的神经和非神经细胞中，前者主要包括三叉神经节、背根神经节和迷走神经节等外周神经系统的感觉神经元，后者包括如血管内皮细胞、胰岛细胞、心肌细胞、内耳毛细胞、肝细胞、胃肠粘膜、胰腺细胞、肾上皮细胞、前列腺上皮细胞、乳腺细胞、B淋巴细胞、T淋巴细胞、肺成纤维细胞、黑色素细胞、牙髓成纤维细胞、肥大细胞和肠嗜铬细胞和角质细胞等。

TRPA1通道是配体依赖性的非选择性阳离子传导通道，通过结合特异性的配体而发生结构变化，由此通道打开，钙离子、钠离子、钾离子等阳离子流入胞内，对细胞的膜电位加以调节，对维持机体的正常生理功能有重要意义。该通道通常被认为是人类和其他哺乳动物各种感觉(疼痛、寒冷、机械、瘙痒、视觉、嗅觉、听觉等)的传感器，同时也作为刺激物引起保护性反应(眼泪、气道阻力和咳嗽)的传感器，几年来的研究发现，该受体还参与炎症和免疫反应。除外生理功能，TRPA1通道还在人和动物各个系统的病理过程中发挥重要作用，参与了包括疼痛和炎症、瘙痒、神经疾病、胃肠道疾病、糖尿病、肥胖、泌尿系统疾病、呼吸道疾病、心血管疾病、皮肤疾病等多种病理过程。

TRPA1通道的激活在疼痛的产生和增强中起重要作用，该通道广泛参与到伤害感受性疼痛、神经病理性疼痛、癌症性疼痛、功能失调性疼痛、偏头痛、三叉神经痛、炎症性疼痛、慢性疼痛等各类疼痛的发生发展中。TRPA1的激活在炎症的快速发生和维持中起主要作用。在炎症过程中会产生许多内源性TRPA1激动剂。TRPA1的激活可以导致血管舒张，这是炎症组织的一个主要症状。同时，表皮角化细胞中TRPA1的激活增强了已知的促炎细胞因子的表达，这是皮肤炎症的关键因素。如特应性皮炎、变应性皮炎、中耳炎、粉刺、痤疮、酒糟鼻等疾病导致的炎症。瘙痒与TRPA1激活有关，包括组胺依赖性和非组胺依赖性的瘙痒。有文献提示TRPA1的激活与接触性皮炎、特应性皮炎(AD)、变应性皮炎和淋巴瘤导致的瘙痒密切相关。TRPA1广泛分布于胃肠道细胞网络，被认为参与了胃肠道炎症(如特发性炎症性肠病，IBD)及其疼痛反应机制。有研究显示，TRPA1可能是治疗肠易激综合征(IBS)应激性内脏痛觉过敏的靶点。至于常见的胰腺炎，有实验发现TRPA1拮抗剂或TRPA1基因的缺失可减轻胰腺炎症，而激活TRPA1的炎症介质会增加胰腺炎症和疼痛。TRPA1不仅在正常气道功能中发挥着重要作用，而且在以过敏为特征的呼吸系统疾病中尤为重要，如哮喘、鼻炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、支气管炎和慢性咳嗽。TRPA1通道大量存在于动物下尿路细胞中，因此TRPA1被认为对泌尿系统有调节作用。实验表明TRPA1可能在膀胱收缩调节中发挥重要作用，TRPA1拮抗剂可减轻膀胱过度活动症(OAB)症状并降低排尿反射。另外，有研究人员发现TRPA1、P物质和CGRP在膀胱神经末梢共表达，提示TRPA1在炎症性膀胱炎中起重要作用。周围性糖尿病神经病变(PDN)是糖尿病的并发症，神经纤维末端的TRPA1激活可能是导致该并发症的一种机制。另外，有研究提示TRPA1介导的机制参与了糖尿病性心肌病的发生发展。人们还在不断深入了解TRPA1通道的功能和作用，最新研究发现其拮抗剂具有抗抑郁和抗焦虑作用。

TRPA1通道可以被许多化学或物理因素激活，包括亲电性激动剂、非亲电性激动剂、天然化合物、钙离子、金属离子、PH、冷热刺激、光照、多聚磷酸盐、磷酸化修饰等。而TRPA1通道的拮抗剂种类则少了很多，经典的拮抗剂包括HC-030031、GRC17536、A-967079、ALGX-2513、ALGX-2541、ALGX-2563、ALGX-2561、ALGX-2542等。

TRPA1在疼痛、炎症和许多其他获得性疾病的潜在适应症中发挥重要作用，已经证实许多TRPA1激动剂能在人和动物中引起疼痛、刺激、炎症并加重疾病症状，可以预期TRPA1拮抗剂可能在相关疾病中发挥治疗作用，因此市场对TRPA1拮抗剂的需求也将稳步增加。虽然在过去的十年中，TRPA1通道相关的疾病的研究取得了巨大的进展，发现了许多TRPA1的激动剂，但是其拮抗剂只有少数几种，进入临床实验的仅仅只有5种，几乎没有将临床前的结果转化为临床实践，而且目前关于这些拮抗剂的研究全部陷入了停滞状态。当下很少有新的治疗药物提供给患者，旧的药物有相当大的副作用和不完全的疗效。由于这些原因，患者往往得不到充分治疗，显然需要新的、更安全和更有效的TRPA1拮抗剂。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种倍半萜类化合物在抑制TRPA1通道的活性中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

第一目的，本发明提供了一种化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备药物或制剂，所述药物或制剂用于：(a)抑制TRPA1通道的活性；(b)治疗与TRPA1通道相关的疾病；

所述化合物的结构如式I所示：

R1-R17选自下组中至少一种：氢、氧代(＝O)、卤素、-OH、取代或未取代的C₁-C₈烷基、取代或未取代的C₃-C₈环烷基、取代或未取代的C₁-C₈烷氧基、取代或未取代的C₃-C₈环烷氧基、或取代或未取代的5-8元杂环，所述杂环含有1-3个选自N、O、S的杂原子。

倍半萜是由三个异戊二烯单元组成的一类萜，分子式通常为C₁₅H₂₄。像单萜一样，倍半萜可能是无环或含有环，包括许多独特的组合。生物化学的变化，如氧化或重排产生相关的倍半萜。倍半萜天然存在于植物和昆虫中，是一种信号化学物质，如防御剂或信息素。植物、真菌和动物产生了一系列不同的倍半萜，可以有效调节TRPA1通道的活性，从而对外界刺激做出反应。

本发明人经过广泛而深入地研究，首次意外地发现了一类结构如式(I)所示化合物(倍半萜)可以显著地抑制TRPA1的活性。实验表明，所述的式(I)化合物对TRPA1通道有较好的抑制效果，本发明的式(I)化合物可用于治疗与TRPA1靶点相关的疼痛、炎症、呼吸道疾病(如呼吸障碍)、瘙痒、皮肤病(痤疮、粉刺)、尿路障碍、炎症性肠病等。

作为本发明所述用途的优选实施方式，所述R1、R10和R15选自CH₃；R2～R9、R11～R14及R16～R17选自下组中至少一种：氢、氧代(＝O)、卤素、-OH、取代或未取代的C₁-C₈烷基、取代或未取代的C₃-C₈环烷基、取代或未取代的C₁-C₈烷氧基、取代或未取代的C₃-C₈环烷氧基、或取代或未取代的5-8元杂环，所述杂环含有1-3个选自N、O、S的杂原子。

所述R2选自-OH，R1、R3-R17选自下组中至少一种：氢、氧代(＝O)、卤素、-OH、取代或未取代的C₁-C₈烷基、取代或未取代的C₃-C₈环烷基、取代或未取代的C₁-C₈烷氧基、取代或未取代的C₃-C₈环烷氧基、或取代或未取代的5-8元杂环，所述杂环含有1-3个选自N、O、S的杂原子。

所述R3选自COOH；R1-2、R4-R17选自下组中至少一种：氢、氧代(＝O)、卤素、-OH、取代或未取代的C₁-C₈烷基、取代或未取代的C₃-C₈环烷基、取代或未取代的C₁-C₈烷氧基、取代或未取代的C₃-C₈环烷氧基、或取代或未取代的5-8元杂环，所述杂环含有1-3个选自N、O、S的杂原子。

更优选地，所述R4可选自-NO₂；所述R5可选自-NH₂；R6可选自-X(卤素)；所述R7可选自-CN；所述R8可选自-SH；所述R9可选自-C＝C；所述R11可选自-C＝O；所述R12可选自-CHO；所述R13可选自-SO₃H；所述R14可选自-C₆H₆。

作为本发明所述用途的优选实施方式，所述化合物的结构如式II所示：

作为本发明所述用途的优选实施方式，所述疾病包括疼痛、炎症、瘙痒、神经疾病、胃肠道疾病、糖尿病、肥胖、泌尿系统疾病、呼吸道疾病、心血管疾病、皮肤疾病中的至少一种。

作为本发明所述用途的优选实施方式，所述疼痛包括慢性疼痛、神经性疼痛、急性疼痛、炎症性疼痛、带状疱疹后疼痛、神经病变、神经痛、糖尿病性神经病变、HIV相关神经病变、神经损伤、类风湿关节炎痛、骨关节炎痛、背痛、腰痛、癌性疼痛、牙痛、头痛、偏头痛、三叉神经痛、腕管综合征、纤维肌痛症、神经炎、坐骨神经痛、骨盘过敏症、骨盘痛、月经痛、内脏痛、术后疼痛中的至少一种；所述炎症包括烧伤或骨关节炎；所述神经疾病包括由抗癌剂诱发的神经障碍；所述胃肠道疾病包括功能性胃肠病、反流性食管炎、溃疡、炎症性肠病、呕吐、胰腺炎中的至少一种；所述功能性胃肠病包括咽下障害、肠易激综合征、功能性腹痛综合征中的至少一种；所述泌尿系统疾病包括膀胱过度活动症、排尿异常、膀胱炎中的至少一种；所述呼吸道疾病包括哮喘、打喷嚏、慢性咳嗽、慢性阻塞性肺疾病、支气管收缩、过敏性鼻炎中的至少一种；所述皮肤疾病包括特应性皮炎、变应性皮炎、瘙痒症、粉刺、痤疮、酒糟鼻中的至少一种。

更优选地，所述疾病包括慢性疼痛、神经性疼痛、急性疼痛、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、功能性胃肠病、反流性食管炎、炎症性肠病、瘙痒症、抗癌剂诱发的神经障碍中的至少一种。

作为本发明所述用途的优选实施方式，所述药物中含有0.001-99wt％，优选为0.1-90wt％，更优选为1-80wt％的式(I)化合物、或其光学异构体或其外消旋体、或其溶剂化物、或其药学上可接受的盐，按组合物的总重量计。

第二目的，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如上述应用中的化合物和其他能抑制TRPA1通道的活性的药物。其他能抑制TRPA1通道的活性的药物如HC-030031、A-967079、AP-18、PF-04745637、Chembridge-5861528等。

作为本发明所述药物组合物的优选实施方式，所述药物组合物还包括药物上可接受的载体。

术语“药物上可接受的载体”包括与药物施用相容的任意和所有物质，包括溶剂、分散介质、包衣、抗细菌和抗真菌剂、等渗和吸收延缓剂和与药物施用相容的其它物质和化合物。除非到了某一常规介质或试剂与活性化合物不相容的程度，否则考虑其在本发明组合物中的用途。补充的活性化合物也可以整合入组合物。

用于制备其组合物的有用的载体可以是固体，液体或气体；因此，所述组合物可以采用片剂、丸剂、胶囊、栓剂、粉末剂、肠包衣的或其它保护的制剂(例如结合于离子交换树脂或包装在脂蛋白泡囊中)、缓释制剂、溶液、混悬剂、酏剂、气溶胶等的形式。所述载体可以选自不同油，包括石油、动物油、植物油或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。水、盐水、含水葡萄糖和二元醇是优选的液体载体，特别是(当与血液等渗时)用于可注射溶液。例如，用于静脉施用的制剂包括活性成分的无菌水溶液，其通过将固体活性成分溶解于水来产生水溶液，并使得所述溶液无菌来制备。合适的药物赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、滑石、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅石、硬脂酸镁、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、氯化钠、无水脱脂乳、甘油、丙二醇、水、乙醇等。组合物可以加入常规药物添加剂比如防腐剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、用于调节渗透压的盐、缓冲剂等。合适的药物载体。在任何情况中，这种组合物将含有与合适的载体一起的有效量活性化合物，以制备适当剂型用于适当施用于接受者。

本发明的化合物可以以任何合适的方式施用，例如口服(例如，颊)、局部、舌下、直肠、阴道、经皮、肠胃外、皮下、腹膜内、肺内、皮内、鞘内以及硬膜外和鼻内、并且、如果需要用于局部治疗、病灶内的施用。肠胃外注入包括肌肉内、静脉内、动脉内、腹膜内、脑内、眼内、病灶内或皮下施用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明药物包括特定的倍半萜化合物，对于可以显著地抑制TRPA1通道的活性。实验表明，所述的式(I)化合物对TRPA1通道有较好的抑制效果，可用于治疗与TRPA1靶点相关的疼痛、炎症、呼吸道疾病(如呼吸障碍)、瘙痒、皮肤病(痤疮、粉刺)、尿路障碍、炎症性肠病等。

附图说明

图1为化合物A抑制hTRPA1-HEK293中由AITC激活的TRPA1电流图；

图2为hTRPA1-HEK293中，TRPA1激动剂AITC和化合物A产生的浓度-响应曲线图；

图3为实施例2各组对CFA诱导的模型组小鼠机械痛阈值的影响图；

图4为实施例3各组对SADBE诱导的小鼠慢性瘙痒模型在1h内挠痒次数的结果图；

图5为实施例4各组对大鼠变异性哮喘模型的咳嗽次数的结果图。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。

在以下实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

本发明涉及到膜片钳技术，该技术是一种以记录离子通道的离子电流来反映细胞膜上单个的(或多个的)离子通道分子活动的技术。利用全细胞膜片钳技术验证化合物A是否在TRPA1通道中起拮抗作用。化合物A的结构为：

1.材料

1.1细胞系：HEK293细胞(购自Invitrogen)。

1.2药物：化合物A，CAS No.5986-55-0，规格：10mg，品牌：Sigma。

1.3试剂及耗材：细胞培养基DMEM(Gibco BRL，Invitrogen)；5g/L青霉素/链霉素(5×10⁶IU/L，Gibco)；10％胎小牛血清(Hyclone，Logan UT，USA)；12孔细胞培养板、24孔细胞培养板及3.5cm细胞培养皿(Corning)；LipoD293体外DNA转染试剂(1ml,SignaGen)；NaCl(500g,Sigma)；MgCl(500g，Sigma)；EGTA(500g,Sigma)；HEPES(1g,Macklin)；AITC(1g，Sigma)。

1.4仪器：超净工作台，青岛海尔医用低温科技有限公司；CO₂培养箱，新加坡ESCO公司；倒置显微镜，日本Nikon公司；微电极拉制仪(P-1000)，美国Sutter公司；抛光仪，美国WPI公司；放大器(MultiClamp 700B)，美国Sutter公司；数字转换器(Digidata1 1550B)，美国Sutter公司；微操仪(MP-225)，美国Sutter公司。

2.试验方法

2.1细胞培养：HEK293细胞培养于含0.05g/L链霉素、0.05g/L青霉素、10％胎牛血清的DMED细胞培养基中，置37℃、5％CO2及饱和湿度的恒温孵育箱中培养。

2.2细胞转染；使用LipoD293体外DNA转染试剂瞬时转染hTRA1通道和EGFP质粒到HEK293细胞中。24h后，在荧光显微镜10X观察转染效率及细胞状态，如若皆可，即可将细胞重悬后传至3.5cm的细胞培养皿中，并在48小时内使用。

2.3配制电极内液：145mM Nacl、10mM Hepes、2mM MgCl₂、2mM EGTA PH 7.3。

配制电极外液：145mM Nacl、10mM Hepes、2mM MgCl₂、PH 7.3。

2.4全细胞记录

所有实验均在室温下进行(～22℃)。制作玻璃微电极并热抛光至2～3MΩ用于全细胞膜片钳记录，在表达hTRPA1的HEK293细胞(即hTRPA1-HEK293)中，通过500ms的电压斜坡，从-100到+100mV的连续性电压刺激，频率为0.5Hz，钳制电位为0mV，用AITC诱导TRPA1通道电流，并用化合物A抑制电流。电流用MultiClamp 700B进行放大，并用Digidata1550B(分子器件)进行数字化。电流在2kHz处进行低通滤波，并在10kHz处进行采样。采用PCLAMP软件(分子器件)进行数据采集和分析。实验前立即制备含化合物A的测试溶液，并在5min内使用。

3、实验结果

如图1，化合物A能抑制hTRPA1-HEK293中由AITC激活的TRPA1电流。

如图2，hTRPA1-HEK293中，TRPA1激动剂AITC和化合物A产生的浓度-响应曲线。半数抑制浓度为4.242μM。每个点代表平均±S.E.M.，n>10个细胞。

实施例2

先构建CFA炎性疼痛小鼠模型，然后使用化合物A治疗其小鼠，观察其疗效。

1、实验材料

1.1动物：C57BL/6J小鼠6-8周，雄性20-25g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2019-0008。

1.2药物：化合物A，CAS No.5986-55-0，规格：10mg，品牌：Sigma；HC-030031，CASNo.349085-38-7，规格：10mg，品牌：Sigma；完全弗氏佐剂(CFA)，规格：10mL，品牌：Sigma；吐温-80，规格500mL，品牌：Sigma；生理盐水，石家庄四药有限公司；二甲基亚砜(DMSO)，规格：500ml，品牌：Sigma。

1.3仪器：微量注射器，品牌：Hamilton Bonaduz AG；Von Frey纤毛机械刺激针，品牌：North Coast；测试平台，支架尺寸48*34*39cm，笼子尺寸40*23*15cm，上海玉研科学仪器有限公司。

实验步骤

2.1药物制备及溶液配制

化合物A溶液的配制：以浓度为30％的DMSO作为溶剂配制浓度为1mg/ml的化合物A溶液，然后用生理盐水稀释成浓度为100umol/L的溶液并放置4℃冰箱保存备用。

HC-030031溶液的配制：以浓度为30％的DMSO作为溶剂配制浓度为10mg/ml的HC-030031溶液，然后用生理盐水稀释成浓度为300μmol/L的溶液并放置4℃冰箱保存备用。

CFA溶液及吐温-80溶液的配制：将20ul吐温-80与180ul的生理盐水均匀混合后，加入800ul的CFA，置于涡旋混合器上混合均匀配置成CFA溶液，并放置在4℃冰箱保存备用；将20ul吐温-80与980ul的生理盐水混合均匀后，配置成吐温-80溶液，并放置在4℃冰箱保存备用。

2.2造模及分组给药

取C57BL/6J小鼠12只，6-8周，雄性，体重20-25g，随机分为四组。正常组，CFA组，CFA+化合物A组(100umol/L)，CFA+HC-030031(300umol/L)阳性对照组。取25ul微量注射器给CFA组和CFA+给药组小鼠右后足底皮下缓慢注射20ul上述配制的CFA溶液，小鼠自主活动量减少，右后足与左后足比较出现明显的红肿，与正常组比较其活动行为明显减少，说明造模成功。30min后，正常组和CFA模型组灌胃双蒸水，CFA+给药组分别灌胃上述浓度的化合物A及HC-030031 50ul，并进行机械刺激痛阈测定。

2.3机械刺激痛阈值测定

将实验小鼠置于测试平台上，盖上透明的有分格的有机玻璃罩，先让小鼠适应20min，等小鼠安静下来及其探究活动明显减少或者消失后，用0.04～2g范围内的Von-Frey机械刺激针垂直刺激小鼠右后足底中部，使其成90°弯曲并维持6s，观察小鼠足趾的反应情况，若小鼠在刺激时间内出现迅速的缩足、弹腿、舔足活动则记为阳性反应，若没有此类反应则记为阴性；该方法按照Dixon的up-down法测定及分析，机械刺激痛阈值分别在CFA注射前1h、注射后1h、2h测定。

3.实验结果

如图3，CFA诱导的模型组小鼠机械痛阈值均显著降低，实验组及阳性对照组均能逆转。

采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析，t检验得P＜0.05，差异有统计学意义。通过上述实验说明，采用本发明所述方法可以缓解CFA炎性疼痛。

实施例3

先构建SADBE诱导小鼠慢性瘙痒模型，然后使用化合物A治疗其小鼠，观察其疗效。

1.1动物：C57BL/6J小鼠6-8周，雄性20-25g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2019-0008。动物饲养环境:温度(24+2)℃，相对湿度50％～70％，采用12h:12h昼夜间断照明。SPF级饲料和纯化水饲养，适应性饲养1周，各组小鼠分笼饲养。

1.2药物：化合物A，CAS No.5986-55-0，规格：10mg，品牌：Sigma；SADBE(J&KScientific公司，批号：481805，含量：98％)；地塞米松磷酸钠注射液(湖北天药药业股份有限公司，批号：H42020019)；生理盐水，石家庄四药有限公司。

1.3仪器：微量注射器，品牌：Hamilton Bonaduz AG；录像相机；透明观察笼。

2实验步骤：

2.1SADBE诱导小鼠慢性瘙痒模型建立：

选取18只小鼠适应性饲养1周后随机数字表法分为空白组、模型对照组、地塞米松组及化合物A低(1mg/kg)、中(5mg/kg)、高剂量(10mg/kg)组，每组3只。实验前2天剃光小鼠颈背部发,面积约为2cmx3 cm。除空白组外，其他组将20μL 0.5％SADBE的丙酮局部应用于小鼠已剃毛腹部皮肤，连续三天每天一次进行敏化。5天后，连续三天每天一次将20μL0.5％SADBE的丙酮局部应用于小鼠已剃毛颈部皮肤。1天后，化合物A低、中、剂量组通过皮下注射方式每天一次应用于小鼠背部皮肤连续用药3天。对照组小鼠皮下注射生理盐水，时间和频率与给药组相同。在第15天采用录像机观察并记录小鼠的瘙痒行为学变化。

2.2检测指标和方法：

小鼠挠痒的行为学观察：

通过小鼠行为学挠痒数观察各组之间的瘙痒严重程度。小鼠皮下注射化合物A后立刻将小鼠放入透明观察笼，在无人安静的环境中拍摄90min，回放录像记录小鼠行为学挠痒数。1次挠痒为小鼠后爪抬起抓挠剃毛部位1次或连续多次抓挠，小鼠后爪落地或缩爪停顿为本次挠痒结束。

3.实验结果：

SADBE诱导小鼠慢性瘙痒模型挠痒行为学观察

为了观察化合物A对小鼠挠痒行为的影响，以小鼠抬起后爪抓挠颈部剃毛部位皮肤次数作为判断瘙痒严重程度的标准统计由SADBE诱导小鼠慢性瘙痒行为学模型的结果。与空白组比较模型组挠痒次数显著增多(P<0.001)。与模型组比较，化合物A低、中、高剂量组小鼠挠痒次数显著减少(P<0.001)，地塞米松组比模型对照组小鼠挠痒次数显著性减少(P<0.01)，化合物A剂量组药效强于地塞米松组组具有统计学差异(P<0.05)，见图4。

实施例4

先构建大鼠变异性哮喘模型，然后使用化合物A治疗其小鼠，观察其疗效。

1.1动物：SD大鼠6-8周，雄性200-250g，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK(京)2019-0008。动物饲养环境:温度(24+2)℃，相对湿度50％～70％，采用12h：12h昼夜间断照明。SPF级饲料和纯化水饲养，适应性饲养1周，各组小鼠分笼饲养。

1.2药物：化合物A，CAS No.5986-55-0，规格：10mg，品牌：Sigma；卵清白蛋白(卵蛋白，OVA)：品牌：Sigma，CAS No.9006-59-1，规格：1g；辣椒素:品牌：Sigma，CAS No.456-42-9，规格：1g。

1.3仪器：

A02AI超声波雾化器：上海鱼跃医疗设备有限公司。

2实验步骤：

2.1模型的制备及分组给药：

大鼠随机分成三组(空白组、模型对照组、化合物A组)，每组6只。第1日腹腔注射2mg卵蛋白(OVA)和100mg AI(OH)₃，3周后再次腹腔注射0.01mg OVA及100mg AI(OH)₃，空白组注射等生理盐水。3周后模型对照组和化合物A组开始用1％OVA进行雾化攻击，正常对照组用生理盐水，隔日一次，共7次。雾化当天开始给药，在雾化前30min给药组进行化合物A(0.6mg/kg)灌胃给药，模型对照组与正常对照组灌胃等量饮用水，一天一次，共14次。

2.2辣椒素引咳实验：

最后一次给药24h后，各组大鼠置于雾化箱内，雾化吸入10-4mol/L辣椒素溶液60s，记录2min内各大鼠的咳嗽次数。

3.实验结果：

辣椒素引咳实验：

与正常对照组比较，模型对照组咳嗽次数显著增多(P<0.01)；与模型对照组比较，给药组的咳嗽次数显著减少(P<0.05)，说明模型对照组对辣椒素的刺激更加敏感(见图5)。

本发明人经过广泛而深入地研究，首次意外地发现了一类结构如式(I)所示化合物(倍半萜)可以显著地抑制TRPA1的活性。实验表明，所述的式(I)化合物对TRPA1通道有较好的抑制效果，本发明的式(I)化合物可用于治疗与TRPA1靶点相关的疼痛、炎症、呼吸道疾病(如呼吸障碍)、瘙痒、皮肤病(痤疮、粉刺)、尿路障碍、炎症性肠病等。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (6)

1.如式II所示的化合物作为唯一活性成分在制备治疗慢性瘙痒药物中的用途，其特征在于，所述化合物的结构如下：

式II。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物中含有0.001-99wt％的式(II)化合物，或其药学上可接受的盐，按组合物的总重量计。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述药物中含有0.1-90wt％的式(II)化合物，或其药学上可接受的盐，按组合物的总重量计。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述药物中含有1-80wt％的式(II)化合物，或其药学上可接受的盐，按组合物的总重量计。

5.一种治疗慢性瘙痒的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括如权利要求1-4任一项所述用途中的化合物和其他能抑制TRPA1通道的活性的药物。

6.如权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药物上可接受的载体。