CN114891279B - 一种复合水凝胶及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域,具体涉及一种复合水凝胶及其制备方法与应用。具体技术方案为:一种复合水凝胶,包括以下组分,羧甲基壳聚糖、氧化透明质酸、美洲大蠊提取物。本发明解决了现有敷料不能有效阻挡外界病原菌的入侵、容易粘连伤口,加重炎症反应,同时去除敷料时会对新生上皮组织造成二次伤害的问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,具体涉及一种复合水凝胶及其制备方法与应用。
背景技术
糖尿病是最常见的慢性疾病之一,糖尿病人长期处于高血糖状态,导致微血管、神经系统和免疫系统都有一定的损伤。因此,一旦出现伤口,就很容易形成慢性炎症,久治不愈。慢性炎症主要表现为炎性免疫细胞、炎性细胞因子、ROS和蛋白酶的大量存在,以及长期反复的细菌感染。因此发生创伤后,应该及时覆盖合适的伤口敷料,以保护创面免受外界细菌和机械应力造成二次伤害,针对临床上出现的皮肤伤口,通常覆盖以医用敷料来进行止血、消炎并促进创面愈合。
目前临床上最常用的医用敷料是传统的伤口敷料,传统伤口敷料包括纱布、薄膜、粉末等,虽然原料来源广泛、成本低廉、能有效吸收渗出液保持伤口部位干燥,但同时会破坏人体分泌的一些促进伤口愈合的生长因子,而且其止血时间过长,渗出液管理能力也有限;不能有效阻挡外界病原菌的入侵;容易粘连伤口,加重炎症反应,去除敷料时会对新生上皮组织造成二次伤害,导致出血,因此传统的伤口敷料难以满足日常和临床需求。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明提供了一种复合水凝胶及其制备方法与应用,解决了现有敷料不能有效阻挡外界病原菌的入侵、容易粘连伤口,加重炎症反应,同时去除敷料时会对新生上皮组织造成二次伤害的问题。
为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:
本发明公开了一种复合水凝胶,包括以下组分,羧甲基壳聚糖、氧化透明质酸、美洲大蠊提取物。
优选的,所述羧甲基壳聚糖、氧化透明质酸和美洲大蠊提取物的质量比为1.0~5.0:2.0~5.0:1.0~3.0。
相应的,一种复合水凝胶的制备方法,将氧化透明质酸溶液滴加到羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液混合物中,搅拌均匀后可得羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶。
优选的,所述氧化透明质酸的制备过程为:将透明质酸溶于去离子水中,加入高碘酸钠溶液进行避光氧化,淬灭过量的高碘酸钠,将得到的产物透析、冻干后即得氧化透明质酸。
优选的,用乙二醇淬灭过量的高碘酸钠。
优选的,所述美洲大蠊提取物的制备过程为:将美洲大蠊冻干粉与去离子水混合后进行超声处理,处理后加入胰蛋白酶,酶解后杀灭胰蛋白酶,将获得的酶解液进行超声处理、离心抽滤、冷冻干燥后得提取物。
优选的,将所述美洲大蠊提取物溶解于羧甲基壳聚糖溶液中,制得羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液混合物。
优选的,所述氧化透明质酸溶液的浓度为2~5%,所述羧甲基壳聚糖溶液的浓度为1~5%,所述美洲大蠊提取物的质量占羧甲基壳聚糖溶液体积的1~3%。
相应的,一种复合水凝胶在促进外伤愈合的医用敷料中的应用。
本发明具备以下有益效果:
本发明所制备的羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶具有多孔结构,通过希夫碱反应发生化学交联,失水率、溶胀率与水蒸气透过率测定结果表明其保水性能、溶胀性能和水蒸气透过性能良好;合适的多孔结构有利于创面气体(如O2、CO2)交换,保证创面组织的呼吸,有利于微环境的物质代谢;流变学特征表明其储能模量>损耗模量,呈固态弹性特征;细胞划痕实验结果表明其对小鼠表皮成纤维细胞具有良好的促进增殖和迁移效果;动物实验结果表明其在糖尿病小鼠创面模型中具有较好的促进皮肤伤口愈合潜力。
附图说明
图1为美洲大蠊提取物的DPPH·清除率图;
图2为美洲大蠊提取物的·OH清除率图;
图3为美洲大蠊提取物的还原力图;
图4为复合水凝胶外观图;
图5为复合水凝胶的流变学性能储能模量(G’)和损耗模量(G”)图;
图6为复合水凝胶的保水率、溶胀率、水蒸气透过率和氧气透过率图;
图7为复合水凝胶的扫描电镜图;
图8为复合水凝胶的傅里叶红外分析图;
图9为复合水凝胶的划痕实验图;
图10为复合水凝胶的划痕覆盖率图;
图11为复合水凝胶在糖尿病小鼠创伤模型中的创面愈合情况图;
图12为复合水凝胶在糖尿病小鼠创伤模型中的创面愈合率图;
图13为复合水凝胶在糖尿病小鼠创伤模型中的创面组织病理切片H&E染色图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
若未特别指明,实施举例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
1.本发明公开了一种复合水凝胶,包括以下组分,羧甲基壳聚糖、氧化透明质酸、美洲大蠊提取物。其中,羧甲基壳聚糖、氧化透明质酸和美洲大蠊提取物的质量比为1.0~5.0:2.0~5.0:1.0~3.0。羧甲基壳聚糖、氧化透明质酸和美洲大蠊提取物的溶剂均为水,质量比为1.0~5.0:2.0~5.0:1.0~3.0:200。
2.本发明还公开了一种复合水凝胶的制备方法,将氧化透明质酸溶液滴加到羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液混合物中,搅拌均匀后可得羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶。
其中,氧化透明质酸的制备过程为:将1.8~2g透明质酸溶于200mL去离子水中,得透明质酸溶液;将1~1.1g高碘酸钠溶于10mL去离子水中,并将其滴入透明质酸溶液中,并用铝箔完全覆盖以避免光照,反应在室温下黑暗环境中搅拌1.8~2.2h。随后加入1mL乙二醇淬灭过量的高碘酸钠,载搅拌1h。将得到的产物在透析袋(10~12kd)中透析3天以去除副产物,透析液每天更换3次。再将氧化后的透明质酸溶液冻干至粉末状态,即得氧化透明质酸,于2~4℃保存。
将氧化透明质酸溶于去离子水中,制得氧化透明质酸溶液,浓度为2~5%。将羧甲基壳聚糖溶解于去离子水中,制得羧甲基壳聚糖溶液,浓度为1~5%。
美洲大蠊提取物的制备过程为:将美洲大蠊冻干粉与去离子水混合后进行超声处理,处理后加入胰蛋白酶,酶解后杀灭胰蛋白酶,将获得的酶解液进行超声处理、离心抽滤、冷冻干燥后得提取物。将美洲大蠊提取物溶解于羧甲基壳聚糖溶液中,制得羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液混合物。其中,美洲大蠊提取物的质量占羧甲基壳聚糖溶液体积的1~3%。
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
实施例1美洲大蠊提取物的制备
1.制备美洲大蠊提取物:称取美洲大蠊冻干粉1g,加入30mL去离子水,以固定温度50℃超声20min,向超声后美洲大蠊提取液中加入2000U胰蛋白酶,在37℃,pH=8的条件下,酶解3h,每小时调一次pH值,调至pH=8,然后将温度升至80℃杀灭胰蛋白酶,酶解液在40℃条件下超声70min充分提取有效成分,提取液在3000r/min离心10min,取上清液抽滤,冷冻干燥得提取物。
2.美洲大蠊提取物抗氧化活性测定
(1)将美洲大蠊提取物溶于去离子水中,分别配制成浓度为0.2~5mg/mL的样品溶液,备用。
(2)DPPH·清除能力测定:称取5mgDPPH,用无水乙醇溶解后转移至250mL容量瓶中,定容,4℃棕色瓶保存。取2mL样品溶液,加入2mL DPPH溶液,混合均匀,暗处反应30min,517nm测吸光度,Vc做阳性对照。测定体系如下表1所示。
表1测定体系
<![CDATA[A<sub>0</sub>]]> | <![CDATA[A<sub>i</sub>]]> | <![CDATA[A<sub>j</sub>]]> | |
DPPH | 2mL | 2mL | - |
样品 | - | 2mL | 2mL |
样品溶剂 | 2mL | - | 2mL |
DPPH清除率计算公式如下:
式中:
A0:DPPH和样品溶液的吸光度;
Ai:加入样品后的吸光度;
Aj:样品溶液本底吸光度。
结果如图1所示,从图1可知,随着美洲大蠊提取物浓度增加,DPPH·清除率呈上升趋势。当美洲大蠊提取物浓度为1.0mg/mL时DPPH·清除率可达96.00%。由此可见美洲大蠊提取物对DPPH·有明显的清除效应。
(3)OH·清除能力测定:取1mL上述步骤(1)配制的样品溶液,加入1mL、9mM水杨酸-乙醇溶液(乙醇为溶剂),再加入1mL、3mM FeSO4溶液,最后加入1mL、8.8mM H2O2溶液启动反应。混合均匀,37℃水浴30min,510nm处测吸光度,Vc做阳性对照,去离子水做空白对照。测定体系如下表2所示。
表2测定体系
<![CDATA[A<sub>0</sub>]]> | <![CDATA[A<sub>i</sub>]]> | <![CDATA[A<sub>j</sub>]]> | |
样品溶液 | - | 1mL | 1mL |
去离子水 | 1mL | - | 1mL |
<![CDATA[3mM FeSO<sub>4</sub>溶液]]> | 1mL | 1mL | 1mL |
9mM水杨酸-乙醇溶液 | 1mL | 1mL | 1mL |
<![CDATA[8.8mM H<sub>2</sub>O<sub>2</sub>]]> | 1mL | 1mL | - |
OH·清除率计算公式如下:
式中:
A0:空白对照吸光度;
Ai:加入样品后的吸光度;
Aj:样品溶液本底吸光度。
结果如图2所示,结果显示,不同浓度的美洲大蠊提取物与·OH清除活性呈量效关系,当美洲大蠊提取物浓度为5mg/mL时·OH清除活性达74.42%。Vc为阳性对照。
(3)还原力测定:取1%铁氰化钾,0.2M、pH 6.6PBS各2.5mL,分别加入1mL不同浓度的样品溶液,混匀,50℃水浴20min,迅速冷却,再加入2.5mL、10%TFA溶液,混匀;4000r/min离心10min。取2.5mL上清液,再分别加入2.5mL、1%FeCl3和2.5mL去离子水,混匀,静置10min后以去离子水调零,700nm处测吸光度,Vc做阳性对照。
结果如图3可知,随美洲大蠊提取物浓度增加,700nm处吸光度逐渐增大,即还原力逐渐增强,即吸光度大小与还原力大小成正比。
实施例2
1.复合水凝胶的制备
(1)制备氧化透明质酸:将2g透明质酸溶于200mL去离子水中,然后加1.070g高碘酸钠溶于10mL去离子水中,滴入透明质酸溶液中,并用铝箔完全覆盖以避免光照。反应在在室温下黑暗环境中搅拌2h。随后加入1mL的乙二醇淬灭过量的高碘酸钠,再搅拌1h。得到的产物在透析袋(10~12kd)中透析3天以去除副产物,透析液每天更换3次。将氧化后的透明质酸溶液冻干至粉末状态,在2~4℃保存,以便下一步使用。
(2)制备氧化透明质酸溶液:称取0.5g氧化透明质酸溶解于10mL去离子水中,制得羧甲基壳聚糖溶液;
(3)制备羧甲基壳聚糖溶液:称取0.2g羧甲基壳聚糖溶解于10mL去离子水中,制得羧甲基壳聚糖溶液;
(4)羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液:称取0.1g美洲大蠊提取物溶于步骤(3)制备的羧甲基壳聚糖溶液中,制得羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液;
(5)制备羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶:将氧化透明质酸溶液滴加到羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液混合物中,搅拌均匀后即可得到羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶。
上述所制备的羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶外观图如图4所示。
2.理化性能测定指标评定
2.1流变学性能测试:用M101流变仪对复合水凝胶进行储存模量(G’)、损耗模量(G”)测试。设置温度为常温,应变为1%,角频率变化幅度为1rad/s至100rad/s。流变结果如图5所示,该空白水凝胶与美洲大蠊提取物水凝胶的G’远高于G”,因此复合水凝胶呈现出弹性固态的特质。其中美洲大蠊提取物水凝胶的G’大于空白水凝胶,即美洲大蠊提取物的加入使得水凝胶的流变性能降低,增加了水凝胶的稳定性。
2.2保水率测试:取一定质量的复合水凝胶于2mL离心管中,准确称量其初始质量(m0)。将复合水凝胶样品放入硅胶干燥器里,37℃,每隔1h取出准确称取质量(ma)。保水率用以下公式计算:
式中,m0:水凝胶初始质量;
ma:干燥时每隔12h水凝胶的质量。
2.3溶胀性能测试:将一定量的复合多糖水凝胶进行冷冻干燥。再取冻干的凝胶样品适量,准确称量其质量(Wd),25℃下浸泡在生理盐水中,每隔2h将样品拿出,滤纸吸干其表面水分,准确称取其质量(Ws)。溶胀率按以下公式计算:
其中,Ws:溶胀后凝胶的质量;
Wd:冻干凝胶的初始质量。
2.4水蒸气透过率(WVTR)测试:根据美国材料测试标准(ASTM)方法E96-00,本实验采用称重法进行水蒸气透过率测试。在直径18mm的玻璃小瓶中加入10mL去离子水,瓶口覆盖一层纱布,取0.5g复合水凝胶均匀覆盖于纱布上,密封瓶口。准确称量其初始质量(W0)。将覆盖了水凝胶的瓶子放到硅胶干燥器中,37℃下分别于12h、24h、36h、48h取出准确称其质量(Wt)。WVTR(mg/m2/day)的计算公式如下:
其中,W0:为覆盖凝胶的瓶子的初始质量;
Wt:一段时间后覆盖了凝胶的瓶子的质量;
A:瓶口面积;
T:天数。
2.5透氧性测定:将3.0g脱氧剂(还原铁粉、蚕化钠、活性炭按0.5g:1.5g:1.0g组成)置试杯中,杯口用医药纱布包裹,并用2mL水凝胶样品覆盖杯口,用玻璃瓶盖密封的瓶子做负对照,完全开放的瓶口做正对照。在25土2℃下,将测试杯置于硅胶干燥器中48h。透氧性按下式计算:
式中:
mf:48h后的杯重(mg);
mi:测试杯的初始重(mg);
t:时间(s);
A:杯口的面积(m2)。
美洲大蠊水凝胶的保水率、溶胀率、水蒸气透过率和透氧率如图6所示,美洲大蠊水凝胶的保水率在在13h后仍然可以达到93.52%,较高的保水率有利于维持湿润的创面环境。
水凝胶的溶胀率均在1400%以上,显示出优异的吸水性能,作为伤口敷料应用于伤口处时可以更好的吸收伤口渗出液;;美洲大蠊水凝胶的水蒸气透过率从12h到48h呈缓慢上升趋势,在12h、24h、36h、48h分别为1.74,1.75,1.79,1.89mg/m2/day,具有适宜的水蒸气透过性能。
美洲大蠊水凝胶的透氧性能在48h为1.93mg/m2·s,在阴性对照和阳性对照之间,具有良好的透氧性,使得创面组织得以“呼吸”从而保证局部环境物质的正常代谢,加速伤口愈合。
3.结构表征测定
3.1扫描电镜检测:将空白水凝胶与美洲大蠊提取物水凝胶放入48孔板中,-40℃冷冻24h后真空干燥48h。冷冻干燥后的样品贴在导电胶上,真空环境下喷金20min。通过10KV电压下的扫描电镜观察其截面微观结构。
结果如图7所示,由图可知水凝胶表面孔隙结构比较均一,孔隙大小适宜,另外由于美洲大蠊提取物的加入,美洲大蠊水凝胶表面孔径大小略微降低,即与空白水凝胶相比,复合凝胶结构更为紧密,稳定。
3.2傅里叶红外光谱检测:分别将羧甲基壳聚糖、透明质酸、氧化透明质酸和复合水凝胶与少量KBr混合研磨均匀,压成薄片。冷冻干燥的水凝胶样品借助ATR附件,通过傅里叶红外光谱在波长500~4000cm-1范围进行扫描。
结果如图8所示,3350cm-1主要为酰胺Ⅰ区N-H伸缩振动以及CMC糖环羟基的O-H伸缩振动,1580cm-1和1400cm-1处的吸收峰为羧甲基壳聚糖中的-COOH基团的反对称振动,1615cm-1和1407cm-1的峰为透明质酸中的羧基的反对称和对称伸缩振动峰,与透明质酸相比,氧化透明质酸在1730cm-1处出现了新的吸收峰,这个吸收峰是由醛基(-CH=O)的伸缩振动导致,表明透明质酸氧化成功。在水凝胶中,1730cm-1处的醛基的吸收峰消失,同时在1610cm-1的吸收峰与C=N基团的振动有关,这个峰为亚胺键的特征峰,表明羧甲基壳聚糖与氧化透明质酸间希夫碱反应成功,但是这个峰无法区分,因为它与羧甲基壳聚糖中不对称和对称-COOH基团的伸缩振动重叠,以及氧化透明质酸中酰胺I带的C=O和N-H伸缩振动重叠。
实施例3复合水凝胶体外伤口模拟修复实验
将对数生长期的L929小鼠成纤维细胞以1×106/孔接种于6孔板中,贴壁生长24h,丰度达到70%后,在孔板底部用记号笔画线标记,用10μL枪头垂直划线标记划去孔板中细胞,然后用PBS冲洗掉划下的细胞,吸弃原有DMEM培养基,加入浓度为5mg/mL的水凝胶浸提液进行培养,在0h、12h、24h、48h分别拍照观察。
细胞迁移实验结果如图9和图10所示,可以看出,水凝胶有很好的促进细胞迁移效果,美洲大蠊水凝胶组的细胞12小时后细胞覆盖率达到50.35%,48小时后的覆盖率达到76.78%,明显高于空白水凝胶组的划痕恢复效果。因此,相比于空白水凝胶组,美洲大蠊水凝胶组L929小鼠成纤维细胞的增殖主要是美洲大蠊提取物的加入具有明显的抗氧化和抗炎作用,可以通过调节细胞内细胞因子的通路促进细胞增殖和细胞迁移。
实施例4糖尿病小鼠全层皮肤创伤修复实验
取80只30~35g的一型糖尿病雄性昆明小鼠用5%水合氯醛麻醉(10g/mL),用剃毛刀脱掉小鼠背部毛发,医用酒精涂抹裸露皮肤进行消毒后,在小鼠背部用眼科小剪剪出深达筋膜、直径约7mm的全层皮肤缺损创面,将小鼠分为三组,每组24只,分别用羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶,羧甲基壳聚糖-氧化透明质酸水凝胶和生理盐水组处理,作为复合凝胶组、空白凝胶组和生理盐水组。在第5、10、15天观察伤口情况并拍摄,用ImageJ软件计算创面愈合率。创面愈合率按如下公式计算:
其中,A0天:初始创面面积;Ax天:第x天创面面积。
皮肤病理切片H&E染色实验:将取出的皮肤组织在冷的生理盐水中洗净,滤纸吸干多余的水分,用10%甲醛固定24h以上。制作切片前流水冲组织24h后分别在70%、80%、90%乙醇中脱水1h,95%、100%乙醇中脱水30min,二甲苯透明15min左右,62℃浸蜡2h,包埋。用切片机切成5μm薄片,42℃水浴展片。65℃烤片固定1h,浸入60℃二甲苯脱蜡30min。分别于100%、90%、80%、70%、水中逐级复水2min;苏木素染色10min,流水冲2min,1%盐酸-乙醇溶液分化3s,流水冲2min,稀氨水返蓝30s,流水冲2min,伊红染液染色2min,流水冲2min。再在70%、80%、90%、100%酒精中逐级脱水10s,浸入二甲苯中5min,中性树脂封片。
药理活性指标测定结果如下:
小鼠皮肤创伤恢复情况如图11和图12所示,造模后第5天结果发现,阴性空白组(即生理盐水组)的创伤区域有较小的恢复,并且伤口部位有渗出液出现,而空白水凝胶组和美洲大蠊水凝胶组的伤口区域有明显的收缩,较阴性对照组更为干燥,无渗出液出现;创伤后第10天结果发现,全部小鼠创伤区域均发生收缩和结痂,其中美洲大蠊水凝胶实验组收缩趋势最大,伤口愈合率为84.13%,生理盐水组的创面愈合率只有46.69%,明显大于生理盐水组。而且复合水凝胶组创面干净,生理盐水组伤口覆盖着褐色的硬痂,创面略显干燥,这得益于水凝胶创造的湿润环境,有利于细胞增殖迁移和组织重塑。第15天,全部小鼠的伤口进一步恢复,三组小鼠的创面均呈淡粉色,空白水凝胶组和美洲大蠊水凝胶组有新生皮肤出现且有带有新毛发生成,而且较阴性空白组伤口更为红润光滑。美洲大蠊水凝胶组的创面愈合率高达92.54%,同一时期空白水凝胶组与阴性空白组小鼠的创面愈合率只有84.13%和58.00%。综上所述,羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶在糖尿病小鼠创伤修复实验中证实具有较好的促进伤口愈合潜力。
各组小鼠皮肤伤后第5、10、15天H&E染色病理切片结果如图13所示,H&E染色观察炎症反应及细胞增殖情况来分析皮肤修复情况。第5天,空白水凝胶组未见完整皮肤组织,表皮层细胞断裂,真皮纤维组织坏死,皮肤附属器官消失,阴性对照组创面真皮层坏死现象更为严重,美洲大蠊水凝胶组有完整的真皮组织,但表皮没有恢复完整,而且创面有明显的炎症反应,并有一定数量的炎症细胞在伤口处积聚。第10天,空白水凝胶组皮肤结构已经完整,炎症反应明显减弱,但皮肤基本无毛囊、汗腺等附属器官形成,表皮层任然过厚。阴性对照组真皮组织已经恢复,但是仍然存在大量炎症细胞堆积而且阴性对照组仍然存在表皮愈合不完全的现象。美洲大蠊水凝胶组皮肤整体结构基本完整,并且开始出现一些附属器官(毛囊、汗腺等),第15天,空白组创面覆盖上皮组织,但是表皮层较厚,皮肤附属器官亦没有得到恢复,几乎看不到毛囊,空白水凝胶组炎症细胞相比阴性对照组明显减少,而且开始出现附属器官,但是毛囊和血管数量较少,与此相反,美洲大蠊水凝胶组皮肤组织基本恢复,新生毛囊和血管数量较空白水凝胶组和阴性对照组也最多。
综上所述,羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶在用于糖尿病小鼠慢性创伤治疗过程中,皮肤组织切片结果显示其对于促进皮肤组织修复具有显著效果。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述,并非对本发明的范围进行限定,在不脱离本发明设计精神的前提下,本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进,均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (8)
1.一种复合水凝胶,其特征在于:包括以下组分,羧甲基壳聚糖、氧化透明质酸、美洲大蠊提取物;所述羧甲基壳聚糖、氧化透明质酸和美洲大蠊提取物的质量比为1.0~5.0:2.0~5.0:1.0~3.0;
所述美洲大蠊提取物的制备过程为:将美洲大蠊冻干粉与去离子水混合后进行超声处理,处理后加入胰蛋白酶,酶解后杀灭胰蛋白酶,将获得的酶解液进行超声处理、离心抽滤、冷冻干燥后得提取物。
2.一种制备权利要求1所述复合水凝胶的方法,其特征在于:将氧化透明质酸溶液滴加到羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液混合物中,搅拌均匀后可得羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物-氧化透明质酸复合水凝胶。
3.根据权利要求2所述的一种复合水凝胶的制备方法,其特征在于:所述氧化透明质酸的制备过程为:将透明质酸溶于去离子水中,加入高碘酸钠溶液进行避光氧化,淬灭过量的高碘酸钠,将得到的产物透析、冻干后即得氧化透明质酸。
4.根据权利要求3所述的一种复合水凝胶的制备方法,其特征在于:用乙二醇淬灭过量的高碘酸钠。
5.根据权利要求3所述的一种复合水凝胶的制备方法,其特征在于:所述美洲大蠊提取物的制备过程为:将美洲大蠊冻干粉与去离子水混合后进行超声处理,处理后加入胰蛋白酶,酶解后杀灭胰蛋白酶,将获得的酶解液进行超声处理、离心抽滤、冷冻干燥后得提取物。
6.根据权利要求5所述的一种复合水凝胶的制备方法,其特征在于:将所述美洲大蠊提取物溶解于羧甲基壳聚糖溶液中,制得羧甲基壳聚糖-美洲大蠊提取物溶液混合物。
7.根据权利要求6所述的一种复合水凝胶的制备方法,其特征在于:所述氧化透明质酸溶液的浓度为2~5%,所述羧甲基壳聚糖溶液的浓度为1~5%,所述美洲大蠊提取物的质量占羧甲基壳聚糖溶液体积的1~3%。
8.一种权利要求1所述的复合水凝胶或权利要求2~7任一项所述制备方法制备的复合水凝胶在制备促进外伤愈合的医用敷料中的应用。
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