CN114891196B - 可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯及其制备方法和用途。其中制备方法包括有机体系降解步骤和水性体系降解步骤，有机体系降解步骤包括使PHA原料与有机溶剂混合溶解，升温反应后加入水得到纯度达到99.90％以上的8‑20万道尔顿的第一降解物；使第一降解物在水性体系中溶解下进一步降解得到重均分子量为0.1‑2.5万道尔顿的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯。本发明解决了现有制备技术中无法完全杜绝微球粒径过小或过大，以及无法保证微球的规整度的问题。此外，本发明的制备方法解决了现有的液体PHA材料制备中存在的制备后难以净化，难以达到医疗级应用标准的问题。同时，使可注射凝胶PHA在体内的降解物不会带来其他无益或有害的物质，大大增加了其应用安全性。

Description

可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及生物化学工程领域，具体地涉及可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯及其制备方法和用途。
背景技术
随着人类年龄增长或受某些疾病影响，人体中肌肉和胶原蛋白组织会产生不同程度的功能性退化，造成皮肤凹陷、胃液反流等问题。因此，制备了多种填充剂来填补所凹陷的皮肤或通过其他异物来刺激肌肉和胶原蛋白的再生长，如玻尿酸、牛胶原蛋白等。但这些物质作为填充剂所起到的填充效果维持时间较短，需要频繁注射以保持其填充效果。为达到长期填充效果，人们尝试了降解速度慢或不可降解材料制作成的微球作为填充剂，如聚乙烯醇，聚甲基丙基酸甲酯等。虽然此类材料的填充效果维持时间明显延长，但这些材料在体内随着时间延长，也会被腐蚀或降解，并释放出有害物质，引发危害人体健康的副反应。
而由生物发酵获得的生物聚合物材料是近年来发展最为迅速的生物医用友好材料之一。在这些生物材料当中，聚羟基脂肪酸酯(简称为PHA)性能尤为优异，使用其制成的神经导管、促进软骨材料和食管再生辅助功能材料的报道诸多。这类材料可以生物降解，对人体无排斥反应，并可以随着人体代谢逐渐降解排除体外。
PHA是一种天然高分子生物材料，由微生物合成的一种细胞内酯。由于其具有良好的生物相容性、生物可降解性，是目前理想的生物医用材料之一。可作为体内植入支架与体内填充物。为了便于使用，通常将其制为微球，可以通过针头进行注射。由于人体吞噬细胞的存在，微球直径通常在20μm以上，但如果微球过大，造成栓塞，不易注射，且针管推助力大，病患痛感明显，甚至引起皮肤破裂。另外，微球因其疏水性能，从而需要加入CMC等助悬剂，注射推助力大，注射微球粘度大，且CMC不易被人体代谢。
现有的PHA材料可注射微球制备技术中均无法完全杜绝微球粒径过小或过大，并且无法保证微球的规整度，规整度不够，往往会引起体内细胞组织的排斥，导致人体不适。另外，也存在着团聚、粘连，形成较大的块状物质的风险，给后续注射带来不便，极大的阻碍了生物可降解材料微球作为填充剂的应用。
因此，亟需提供一种可直接体内注射凝胶PHA的制备方法，解决固体PHA微球所带来的潜在风险以及避免体内降解所产生不良物问题。
背景技术中的信息仅仅在于说明本发明的总体背景，不应视为承认或以任何形式暗示这些信息构成本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
为解决现有技术中的技术问题，本发明提供一种可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯，通过控制PHA的目标分子量或粘度，使其为特定的凝胶状，避免分子量过高或过低，解决了例如分子量过高导致的难以注射，以及分子量过低导致的体内降解时间过快，注射频率的增加，或注射后容易流动到所需要注射区域外等一系列问题。本发明所制备的凝胶PHA在室温条件下，具备适中粘度，在正常使用的推力作用下，可以无障碍注射。这既具备了液体PHA可以无障碍注射，同时保证了其较高分子量，避免分子量过低所带来缺点。具体地，本发明包括以下内容。
本发明的一方面，提供一种可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其包括以下步骤：
(1)有机体系降解步骤，其包括使PHA原料与有机溶剂以1:1-1:10的重量比混合溶解，升温至70-100℃反应，然后加入水析出较低分子量的PHA后得到重均分子量为8-20万道尔顿的第一降解物，其纯度可达到99.90％以上，满足医疗级使用要求；
(2)水性体系降解步骤，其包括使所述第一降解物在水性体系中溶解下进一步降解得到重均分子量为0.1-2.5万，优选为0.5-2万道尔顿的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯。
根据本发明所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，优选地，所述PHA原料选自PHB、PHBV、PHBHHx、P34HB、PHBVHHx和PHHx中的一种或几种，且重均分子量为20-55万道尔顿。
根据本发明所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，优选地，步骤(1)中的所述有机溶剂为N-甲基吡咯烷酮，且水的加入量为N-甲基吡咯烷酮体积的1.5-3倍，重复加水析出多次。
根据本发明所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，优选地，步骤(2)中所述水性体系为碱性水溶液体系，其包括：
(2-1)使第一降解物按照重量比1：(2-8)范围加入碱，于25-80℃温度范围反应，直到体系为凝胶状态时停止反应；
(2-2)加入硫酸、盐酸或醋酸中和碱，至体系PH为中性；
(2-3)室温条件下过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉；
(2-4)过滤所得的凝胶状PHA，60-65℃进行减压蒸馏，去除所残留的水，固体盐析出，于40-45℃过滤去除固体盐，得到凝胶状PHA。
根据本发明所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，优选地，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钙的强碱。
根据本发明所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，优选地，所述碱选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾的弱碱，所述步骤(2-1)包括于60-80℃温度范围反应直到体系出现凝胶状态，然后于35-45℃温度范围继续反应至体系为凝胶状态时停止反应。
根据本发明所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，优选地，所述水性体系为酸性水溶液体系，其包括：
(2-1’)将第一降解物按照重量比1：(2-8)范围加入95％酒精，在35-80℃条件下，搅拌溶胀2-8小时，然后加入95％酒精体积1/4-2的水配制的酸溶液于80-85℃反应至体系中开始出现凝胶状态，接下来降温至40-55℃，继续反应至体系为凝胶状态停止反应；
(2-2’)加入碳酸钠或碳酸氢钠中和酸，至体系PH为中性；
(2-3’)室温条件下过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉；
(2-4’)过滤所得的凝胶状PHA，60-65℃进行减压蒸馏，去除所残留的乙醇与水，固体钠盐析出，于40-45℃过滤去除固体钠盐，得到凝胶状PHA。
根据本发明所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，优选地，进一步包括通过伽马射线照射或使用环氧乙烷对可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯进行处理的步骤。
本发明的第二方面，提供一种可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯，其通过本发明第一方面所述的制备方法制备得到。
本发明的第三方面，提供可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯在制备组织填充剂中的用途。
本发明的制备方法可工业化大规模制备医疗级可注射凝胶PHA，解决了现有的PHA材料可注射微球制备技术中，均无法完全杜绝微球粒径过小或过大，以及无法保证微球的规整度的问题。同时避免了制备过程中团聚、粘连，形成较大的块状物质的风险，因此为后续注射带来便利，大大扩展了生物可降解材料微球作为填充剂的应用。
另外，本发明的制备方法解决了现有液体PHA材料制备中存在的制备后难以净化，难以达到医疗级应用标准的问题。同时，通本发明的方法制备得到的可注射凝胶PHA在体内的降解物不会带来其他无益或有害的物质，大大增加了其应用安全性。传统的制备方法中由于使用1,3-丁二醇或甲醇进行醇解，并且产物分子链末端会带有-OC4H8OH或-OCH2OH，从而使得到的PHA注射入体内后其降解产物会相应产生1,3-丁二醇或甲醇等有毒物，进而在体内引起不良炎症反应。另外，由于1,3-丁二醇沸点高(207℃、760mmHg)，如果使用1,3-丁二醇进行醇解，其难以去除干净，会残留在产物中。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分数。除非另有说明，否则“分子量”为重均分子量，即MW分子量，其单位为道尔顿。
本发明提供一种可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯有时也称为“可注射凝胶PHA微球”，其包括有机体系降解步骤和水性体系降解步骤，下面进行详细说明。
[可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法]
本发明的第一方面，提供一种可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其至少包括以下两步：
(1)有机体系降解步骤，其包括使PHA原料与有机溶剂以1:1-1:10的重量比混合溶解，升温至70-100℃反应，然后加入水析出较低分子量的PHA后得到重均分子量为8-20万道尔顿的第一降解物，其纯度可达到99.90％以上，以满足医疗级使用要求；
(2)水性体系降解步骤，其包括使所述第一降解物在水性体系中溶解下进一步降解得到重均分子量为0.1-2.5万，优选0.5-2万道尔顿的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯。
本发明通过在两种不同溶解体系里进行分别降解能够更快地得到所需分子量范围的降解产物，并且得到分子量更加均匀的PHA降解产物，从而使其纯度更高。下面详细说明两个步骤。
[有机体系降解步骤]
本发明的步骤(1)为有机体系降解步骤，其包括将PHA原料与有机溶剂混合溶解，升温反应，可选地，进一步干燥的步骤。
本发明中，PHA原料与有机溶剂的用量比优选为1:2-8，还优选为1:2-5。混合后升温的温度一般为70-100℃，优选为70-90℃，更优选80-90℃进行反应。然后，通过加入水终止反应，同时析出较低分子量的PHA，得到重均分子量为8-20万道尔顿的第一降解物。
本发明中，所用PHA原料一般为工业级PHA。其重均分子量的大小不特别限定，一般为20万首尔顿以上，例如分子量范围为20-55万，优选35-40万，例如35、36、37、38、39、40万道尔顿。PHA原料不特别限定，其实例包括但不限于PHB、PHBV、PHBHHx、P34HB、PHBVHHx和PHHx。本发明可使用上述成分的一种或多种。在使用多种成分的情况下，各成分的用量比不特别限定，可以使用任意混合比。
本发明所用有机溶剂一般是指烷基吡咯烷酮。其中，烷基是指C1-10的饱和直链或支链烷基基团，烷基吡咯烷酮的实例包括但不限于N-甲基吡咯烷酮、N-乙基吡咯烷酮、N-丙基吡咯烷酮。
在步骤(1)中降解的时间一般为6-15h，优选为8-13h，还优选为9-11h。降解后，使用有机溶剂体积1-5倍，优选2倍的注射用水进行析出，然后使用1-3倍，优选为3倍体积的注射用水搅拌清洗。清洗次数不特别限定，本领域技术人员可以根据需要进行调整，但保持清洗时的pH为中性。
经上述步骤得到较低分子量的PHA，其分子量为8-20万道尔顿，优选10-12万道尔顿。同时其纯度可达到99.5％以上，例如99.6％、99.7％、99.8％，甚至是99.9％及以上、99.95％以上，例如99.96％、99.97％、99.98％，甚至是99.98％及以上。
[水性体系降解步骤]
本发明的步骤(2)为水性体系降解步骤，其包括使特定分子量的第一降解物在水性体系中溶解下进一步降解得到重均分子量为0.1-2.5，优选为0.5-2万道尔顿的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯。
本发明的水性体系一般是指非中性休系，包括碱性水溶液体系和酸性水溶液体系。
在一些实施方案中，使用碱性水溶液体系进行水性体系降解。其中，第一降解物按照重量比1:2-8，优选1:2-6，还有选为1:4-6的范围与碱混合。碱包括强碱或弱碱，强碱的实例包括但不限于氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙等。弱碱的实例包括但不限于碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾等。当使用碱溶液时，其浓度不特别限定，一般优选为0.1-1.5mol/L，还优选为0.1-1mol/L，进一步优选为0.4-0.6mol/L。
在一些实施方案中，使用强碱水溶液体系进行水性体系降解。第一降解物与强碱混合的温度为25-60℃，优选为40-60℃，还优选为45-55℃。在另外的实施方案中，使用弱碱水溶液体系进行水性体系降解，第一降解物与弱碱混合的温度为60-90℃，优选为60-80℃，还优选为65-75℃。
第一降解物与碱溶液反应时间不特别限定，直至体系为凝胶状态时停止反应，然后进行酸中和，中和过程中所使用的酸不特别限定，只要能够实现中和后体系pH为中性即可。随后进行室温过滤，从而将颗粒去除掉。过滤所得的凝胶状PHA，在温度60-65℃下进行减压蒸馏，去除所残留的溶剂，固体盐如氯化钠析出，PHA为凝胶状态，于40-45℃过滤去除固体盐如氯化钠。
在一些实施方案中，使用酸性水溶液体系进行水性体系降解。其中，第一降解物按照重量比1:2-8，优选1:2-6，还有选为1:4-6的范围与酸混合。酸包括强酸或弱酸，强酸的实例包括但不限于盐酸、硫酸、硝酸等。弱酸的实例包括但不限于醋酸、柠檬酸等。在具体实施方案中，本发明采用硫酸作为第一降解物的降解溶剂。优选地，酸溶液可以使用质量分数大于70％，例如98％的浓硫酸与纯化水混合后得到所述酸溶液。
本发明中，在使用酸溶液体系进行降解之前，首先使用醇溶剂进行第一降解物的溶胀。醇溶剂优选具有一定浓度的酒精，例如95％酒精。第一降解物与酒精按照重量比1:2-8，优选1:2-6，还优选1:2-5进行混合。时间为2-8h，还优选为2-5h，进一步优选为3-5h。溶胀温度优选为70-80℃，还优选为70-75℃，例如70℃、71℃、72℃、73℃、74℃、75℃。
随后，加入95％酒精体积1/4-2的水配制的酸溶液于80-85℃，例如80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃反应至体系中开始出现凝胶状态。然后降温至40-55℃，优选42-48℃反应至体系为凝胶状态停止反应。上述反应后进行碱中和，中和过程中所用的碱不特别限定，只要能够实现中和后体系pH为中性即可。随后进行室温过滤、减压蒸馏、去除固体盐如氯化钠，上述步骤参见碱性水溶液体系制备步骤，在此不再赘述。
可以理解的是，对于医疗用途，可以对PHA聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷，某些PHA聚合物也可以在高压灭菌器中用蒸汽进行灭菌。
经上述水性体系步骤处理后，可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的重均分子量为0.1-2.5，优选0.1-2万道尔顿，还优选0.5-2万道尔顿。上述分子量对于实现液体(本文有时也称为“凝胶状”)可注射是重要的，若分子量过低，体内降解速度过快，也容易在体内发生移动。分子量过高，则难以注射。而本发明制备方法中，有机体系降解步骤和水性体系降解步骤结合可制备所需分子量的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯。
本领域技术人员应理解，只要能够实现本发明的目的，在上述步骤(1)-(2)前后，或这些任意步骤之间还可包含其他步骤或操作，例如进一步优化和/或改善本发明所述的方法。
[可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯]
本发明的第二方面，提供一种可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯，其可以以凝胶制剂形式用于医疗用途，凝胶聚羟基脂肪酸酯的纯度为99.90％以上，例如99.91％、99.92％、99.93％、99.94％、99.95％、99.96％、99.97％、99.98％，甚至99.99％以上。可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的重均分子量优选为0.1-2.5万)道尔顿，例如0.3、0.5、1、1.5、2.5万道尔顿。
本发明的聚羟基脂肪酸酯的粘度一般为1-45万，优选为1-25万CPS之间，由此可使其在注射使用时保持凝胶，在进入体内环境后优选进一步固化，从而更有利于填充。本申请中粘度根据GBT 2794-2013胶黏剂黏度的测定之单圆筒旋转黏度计法进行。本发明中可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的重均分子量与数均分子量的比值在1.1-1.5之间，优选1.2-1.4之间。
[用途]
本发明的第三方面，提供可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的用途，优选用于制备组织填充剂。在示例性实施方案中，本发明的用途之一在于制备一次性注射装置，其包括注射筒以及推杆，其中所述注射筒内预填充有本发明的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯。可选地，注射装置进一步包括针头，优选地所述针头的内径为20-50μm。
制备例1
取300g的PHB粉末(聚-3-羟基丁酸脂，产家为珠海麦得发生物科技股份有限公司，分子量MW为356612，MW/Mn为2.0)加入2500mL的三口烧瓶中，加入900mL分析纯N-甲基吡咯烷酮(简称NMP)，搅拌，升温至80℃溶解反应10小时后，开始每小时取一次样。
停止保温，加入1800mL的注射用水，搅拌30分钟，析出已经降解的PHB，离心分离，得到初步固体PHB。
使用3倍体积的注射用水搅拌清洗PHB固体半小时，离心，去除上清液。如此循环5次，至PHB固体的注射用水浸泡液的PH值为中性。
使用冻干或喷雾干燥方式，将以上使用注射用水冲洗干净后的PHB固体干燥，密封包装，待用。产品干燥后重量为210g，纯度为99.94％。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体分子量检测结果如表1。
表1
时间 分子量MW MW/Mn
15小时 342382 1.51
16小时 288792 1.48
17小时 231445 1.38
18小时 190282 1.35
19小时 164951 1.32
20小时 140888 1.29
21小时 110587 1.29
制备例2
取300g的P34HB粉末(聚3-羟基丁酸酯-co-4-羟基丁酸酯，产家为珠海麦得发生物科技股份有限公司，分子量MW为350602，MW/Mn为1.89)加入2500mL的三口烧瓶中，加入900mL分析纯N-甲基吡咯烷酮(简称NMP)，搅拌，升温至80℃溶解反应5小时后，开始每小时取一次样。
停止保温，加入1800mL的注射用水，搅拌30分钟，析出已经降解的P34HB，离心分离，得到初步固体P34HB。
使用3倍体积的注射用水搅拌清洗P34HB固体半小时，离心，去除上清液。如此循环5次，至P34HB固体的注射用水浸泡液的PH值为中性。
使用冻干或喷雾干燥方式，将以上使用注射用水冲洗干净后的P34HB固体干燥，密封包装，待用。产品干燥后重量为212g，纯度为99.95％。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体分子量检测结果如表2。
表2
时间 分子量MW MW/Mn
5小时 332310 1.49
6小时 278811 1.45
7小时 230165 1.36
8小时 189299 1.33
9小时 168900 1.30
10小时 119863 1.28
11小时 119863 1.28
制备例3
取300g的PHBV粉末(聚羟基丁酸酯-co-羟基戊酸酯，产家为珠海麦得发生物科技股份有限公司，分子量MW为360772，MW/Mn为1.86)加入2500mL的三口烧瓶中，加入900mL分析纯N-甲基吡咯烷酮(简称NMP)，搅拌，升温至80℃溶解反应5小时后，开始每小时取一次样。
停止保温，加入1800mL的注射用水，搅拌30分钟，析出已经降解的PHBV，离心分离，得到初步固体PHBV。
使用3倍体积的注射用水搅拌清洗PHBV固体半小时，离心，去除上清液。如此循环5次，至PHBV固体的注射用水浸泡液的PH值为中性。
使用冻干或喷雾干燥方式，将以上使用注射用水冲洗干净后的PHBV固体干燥，密封包装，待用。产品干燥后重量为213g，纯度为99.95％。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体分子量检测结果如表3。
表3
Figure BDA0003640854450000111
Figure BDA0003640854450000121
制备例4
取300g的PHBHHx粉末(聚羟基丁酸-co-羟基己酸酯，产家为珠海麦得发生物科技股份有限公司，分子量MW为389078，MW/Mn为1.76)加入2500mL的三口烧瓶中，加入900mL分析纯N-甲基吡咯烷酮(简称NMP)，搅拌，升温至80℃溶解反应5小时后，开始每小时取一次样。
停止保温，加入1800mL的注射用水，搅拌30分钟，析出已经降解的PHBHHx，离心分离，得到初步固体PHBHHx。
使用3倍体积的注射用水搅拌清洗PHBHHx固体半小时，离心，去除上清液。如此循环5次，至PHBHHx固体的注射用水浸泡液的PH值为中性。
使用冻干或喷雾干燥方式，将以上使用注射用水冲洗干净后的PHBHHx固体干燥，密封包装，待用。产品干燥后重量为215g，纯度为99.96％。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体分子量检测结果如表4。
表4
时间 分子量MW MW/Mn
5小时 336890 1.47
6小时 269891 1.41
7小时 200030 1.37
8小时 175271 1.35
9小时 109890 1.30
10小时 128895 1.25
11小时 109890 1.24
实施例1
取制备例1所制备的PHB产品50g(分子量MW＝110587，MW/Mn＝1.29)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入约100mL 95％食用酒精，70℃搅拌回流4小时。加入配好的酸溶液(15mL98％浓硫酸溶于150mL纯化水)。
保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。PHB状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
反应结束后，降温至室温。逐加分析纯或食品级的碳酸钠或碳酸氢钠中和酸，至体系PH为中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状PHB，60-65℃进行减压蒸馏，去除所残留的乙醇与水，固体硫酸钠析出，PHB为凝胶状态，并趁热(40-45℃)抽滤去除硫酸钠固体，即可得到可注射凝胶状态的PHB产品。
对于医疗用途，可以对PHB聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHB产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表5。第120分钟-第180分钟的样品均可用于注射。第140分钟-第160分钟的样品，分子量与粘度均适中，可室温注射。第120分钟样品，粘度稍大，使用前需加热至35-45℃，降低粘度，便于注射。第180分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表5相关指标的检测数据
Figure BDA0003640854450000131
Figure BDA0003640854450000141
实施例2
取制备例1所制备的PHB产品50g(分子量MW＝110587，MW/Mn＝1.29)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入250毫升0.5mol/L氢氧化钠溶液。
搅拌，并升温至50℃。保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，每20分钟取样观察。PHB状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
逐加分析纯或食品级的0.1mol/L盐酸，至体系PH为中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行抽滤过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状PHB，60-65℃进行减压蒸馏，去除水，固体氯化钠析出，PHB为凝胶状态，并趁热(40-45℃)通过抽滤去除氯化钠固体。
对于医疗用途，可以对PHB聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHB产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表6。第120分钟-第180分钟的样品均可用于注射。第120分钟-第160分钟的样品，分子量与粘度均适中，可室温注射。第200分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表6相关指标的检测数据
Figure BDA0003640854450000142
Figure BDA0003640854450000151
实施例3
取制备例1所制备的PHB产品50g(分子量MW＝110587，MW/Mn＝1.29)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入250毫升0.5mol/L碳酸钠溶液，并升温至80℃。保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，每20分钟取样观察。PHB状态变化过程是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
逐加分析纯或食品级的0.1mol/L盐酸至中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状PHB，60-65℃进行减压蒸馏，去除水，固体氯化钠析出，PHB为凝胶状态，趁热(40-45℃)抽滤去除氯化钠固体。
对于医疗用途，可以对PHB聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHB产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表7。第120分钟-第200分钟的样品均可用于注射。第140分钟-第180分钟的样品，分子量与粘度均适中，可室温注射。第120分钟样品，粘度稍大，使用前需加热至35-45℃，降低粘度，便于注射。第200分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表7相关指标的检测数据
Figure BDA0003640854450000152
Figure BDA0003640854450000161
实施例4
取制备例2所制备的P34HB产品50g(分子量MW＝119863，MW/Mn＝1.28)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入约100mL 95％食用酒精，70℃搅拌回流4小时。加入配好的酸溶液(15mL 98％浓硫酸溶于150mL纯化水)。
保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。P34HB状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
反应结束后，降温至室温。逐加分析纯或食品级的碳酸钠或碳酸氢钠中和酸，至体系PH为中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状P34HB，60-65℃进行减压蒸馏，去除所残留的乙醇与水，固体硫酸钠析出，P34HB为凝胶状态，并趁热(40-45℃)抽滤去除硫酸钠固体，即可得到可注射凝胶状态的P34HB产品。
对于医疗用途，可以对P34HB聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶P34HB产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表8。第100分钟-第180分钟的样品均可用于注射。第120分钟-第160分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第100分钟样品，粘度稍大，使用前需加热至35-45℃，降低粘度，便于注射。第180分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表8相关指标的检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 101445 1.31 -- --
40 81282 1.30 -- --
60 64951 1.30 -- --
80 46908 1.29 -- --
100 26120 1.25 99.94 248500
120 21018 1.23 99.95 206700
140 15860 1.16 99.98 149000
160 9881 1.18 99.97 89800
180 1306 1.17 99.98 12600
实施例5
取制备例2所制备的P34HB产品50g(分子量MW＝119863，MW/Mn＝1.28)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入250毫升0.5mol/L氢氧化钠溶液。
搅拌，并升温至50℃。保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。P34HB状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
逐加分析纯或食品级的0.1mol/L盐酸，至体系PH为中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行抽滤过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状P34HB，60-65℃进行减压蒸馏，去除水，固体氯化钠析出，P34HB为凝胶状态，并趁热(40-45℃)通过抽滤去除氯化钠固体。
对于医疗用途，可以对P34HB聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶P34HB产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表9。第120分钟-第180分钟的样品均可用于注射。第140分钟-第160分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第120分钟样品，粘度稍大，使用前需加热至35-45℃，降低粘度，便于注射。第180分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表9相关指标的检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 100382 1.48 -- --
40 93282 1.33 -- --
60 78901 1.33 -- --
80 57008 1.30 -- --
100 41168 1.29 -- --
120 26038 1.23 99.95 251200
140 19550 1.19 99.98 189100
160 9550 1.20 99.977 85800
180 1361 1.18 99.98 12900
实施例6
取制备例2所制备的P34HB产品50g(分子量MW＝119863，MW/Mn＝1.28)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入250毫升0.5mol/L碳酸钠溶液，并升温至80℃。保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，每20分钟取样观察。P34HB状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
逐加分析纯或食品级的0.1mol/L盐酸至中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状P34HB，60-65℃进行减压蒸馏，去除与水，固体氯化钠析出，P34HB为凝胶状态，趁热(40-45℃)抽滤去除氯化钠固体。
对于医疗用途，可以对P34HB聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶P34HB产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表10。第140分钟-第200分钟的样品均可用于注射。第160分钟-第180分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第140分钟样品，粘度稍大，使用前需加热至35-45℃，降低粘度，便于注射。第200分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表10相关检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 101045 1.38 -- --
40 96980 1.32 -- --
60 85059 1.33 -- --
80 69888 1.31 -- --
100 51120 1.29 -- --
120 39790 1.30 -- --
140 26167 1.27 99.95 250200
160 19001 1.29 99.98 160200
180 10811 1.28 99.96 99600
200 1490 1.28 99.98 13700
实施例7
取制备例3所制备的PHBV产品50g(分子量MW＝117809，MW/Mn＝1.31)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入约100mL 95％食用酒精，70℃搅拌回流4小时。加入配好的酸溶液(15mL98％浓硫酸溶于150mL纯化水)。
保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。PHBV状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
反应结束后，降温至室温。逐加分析纯或食品级的碳酸钠或碳酸氢钠中和酸，至体系PH为中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状PHBV，60-65℃进行减压蒸馏，去除所残留的乙醇与水，固体硫酸钠析出，PHBV为凝胶状态，并趁热(40-45℃)抽滤去除硫酸钠固体，即可得到可注射凝胶状态的PHBV产品。
对于医疗用途，可以对PHBV聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHBV产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表11。第120分钟-第160分钟的样品均可用于注射。第140分钟-第160分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第120分钟样品，粘度稍大，使用前需加热至35-45℃，降低粘度，便于注射。
表11相关指标的检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 101005 1.31 -- --
40 83288 1.30 -- --
60 69051 1.29 -- --
80 50900 1.29 -- --
100 44120 1.26 -- --
120 26018 1.22 99.95 255100
140 13160 1.20 99.98 128100
160 5009 1.18 99.97 48700
实施例8
取制备例3所制备的PHBV产品50g(分子量MW＝117809，MW/Mn＝1.31)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入250毫升0.5mol/L氢氧化钠溶液。
搅拌，并升温至50℃。保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。PHBV状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
逐加分析纯或食品级的0.1mol/L盐酸，至体系PH为中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行抽滤过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状P34HB，60-65℃进行减压蒸馏，去除水，固体氯化钠析出，PHBV为凝胶状态，并趁热(40-45℃)通过抽滤去除氯化钠固体。
对于医疗用途，可以对PHBV聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHBV产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表12。第140分钟-第200分钟的样品均可用于注射。第160分钟-第180分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第140分钟样品，粘度稍大，使用前需加热至35-45℃，降低粘度，便于注射。第200分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表12相关指标的检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 109458 1.36 -- --
40 90281 1.33 -- --
60 76901 1.32 -- --
80 64018 1.30 -- --
100 46167 1.27 -- --
120 32038 1.24 -- --
140 26009 1.20 99.96 249200
160 15990 1.20 99.95 131900
180 8900 1.21 99.97 78900
200 1001 1.19 99.96 9800
实施例9
取制备例3所制备的PHBV产品50g(分子量MW＝117809，MW/Mn＝1.31)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入250毫升0.5mol/L碳酸钠溶液，并升温至80℃。保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。PHBV状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
逐加分析纯或食品级的0.1mol/L盐酸至中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状PHBV，60-65℃进行减压蒸馏，去除水，固体氯化钠析出，PHBV为凝胶状态，趁热(40-45℃)抽滤去除氯化钠固体。
对于医疗用途，可以对PHBV聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHBV产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表13。第140分钟-第200分钟的样品均可用于注射。第140分钟-第180分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第200分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表13相关检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 108184 1.33 -- --
40 96696 1.32 -- --
60 80888 1.33 -- --
80 65090 1.30 -- --
100 48167 1.28 -- --
120 34091 1.29 -- --
140 23811 1.28 99.96 220900
160 19089 1.26 99.96 162100
180 10079 1.24 99.98 90400
200 1500 1.25 99.97 14600
实施例10
取制备例4所制备的PHBHHx产品50g(分子量MW＝109890，MW/Mn＝1.30)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入约100mL 95％食用酒精，70℃搅拌回流4小时。加入配好的酸溶液(15mL 98％浓硫酸溶于150mL纯化水)。
保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。PHBHHx状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
反应结束后，降温至室温。逐加分析纯或食品级的碳酸钠或碳酸氢钠中和酸，至体系PH为中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状PHBHHx，60-65℃进行减压蒸馏，去除所残留的乙醇与水，固体硫酸钠析出，PHBHHx为凝胶状态，并趁热(40-45℃)抽滤去除硫酸钠固体，即可得到可注射凝胶状态的PHBHHx产品。
对于医疗用途，可以对PHBHHx聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHBHHx产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表14。第120分钟-第180分钟的样品均可用于注射。第120分钟-第160分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第180分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表14相关指标的检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 136980 1.34 -- --
40 109905 1.32 -- --
60 84298 1.33 -- --
80 63057 1.31 -- --
100 46910 1.30 -- --
120 21990 1.26 99.95 207100
140 12918 1.23 99.94 113800
160 5960 1.21 99.96 52400
180 1023 1.22 99.97 10100
实施例11
取制备例4所制备的PHBHHx产品50g(分子量MW＝109890，MW/Mn＝1.30)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入250毫升0.5mol/L氢氧化钠溶液。
搅拌，并升温至50℃。保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。PHBHHx状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
逐加分析纯或食品级的0.1mol/L盐酸，至体系PH为中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行抽滤过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状P34HB，60-65℃进行减压蒸馏，去除水，固体氯化钠析出，PHBV(改为PHBHHx)为凝胶状态，并趁热(40-45℃)通过抽滤去除氯化钠固体。
对于医疗用途，可以对PHBHHx聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHBHHx产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表15。第80分钟-第140分钟的样品均可用于注射。第100分钟-第120分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第80分钟样品，粘度稍大，使用前需加热至35-45℃，降低粘度，便于注射。第140分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表15相关指标的检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 93298 1.35 -- --
40 72001 1.33 -- --
60 47918 1.30 -- --
80 26198 1.28 99.95 250200
100 15038 1.25 99.95 131200
120 9109 1.24 99.96 86100
140 2360 1.24 99.97 21600
实施例12
取制备例4所制备的PHBHHx产品50g(分子量MW＝109890，MW/Mn＝1.30)，加入到500mL的三口烧瓶中，加入250毫升0.5mol/L碳酸钠溶液，并升温至80℃。保温反应至体系中的白色颗粒开始减少时，并开始计时，每20分钟取样观察。PHBHHx状态变化过程，是由白色固体变为凝胶状，然后，随着反应进行，凝胶状变为澄清液体。因此，当体系为凝胶状态时(取样观察，白色微粒消失)，即可停止反应。
逐加分析纯或食品级的0.1mol/L盐酸至中性。
室温条件下，使用15μm孔径的抽滤装置进行过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉。
过滤所得的凝胶状PHBHHx，60-65℃进行减压蒸馏，去除水，固体氯化钠析出，PHBHHx为凝胶状态，趁热(40-45℃)抽滤去除氯化钠固体。
对于医疗用途，可以对PHBHHx聚合物进行消毒，例如通过伽马射线照射或使用环氧乙烷。
凝胶PHBHHx产品纯度检测，为99.90％以上。23℃条件下，使用粘度计检测粘度。使用凝胶渗透色谱仪(GPC)检测分子量，具体相关数据如表16。第120分钟-第200分钟的样品均可用于注射。第120分钟-第180分钟的样品，粘度适中，可室温注射。第200分钟样品，分子量稍低，体内降解时间会相应较短。
表16相关检测数据
时间/分钟 分子量MW MW/Mn 纯度/％ 粘度/CPS
20 96798 1.34 -- --
40 76048 1.34 -- --
60 61391 1.33 -- --
80 44967 1.29 -- --
100 32091 1.29 -- --
120 22991 1.27 99.98 211900
140 15009 1.27 99.96 130900
160 10070 1.25 99.98 99400
180 6089 1.20 99.96 56100
200 1108 1.19 99.97 10100
尽管本发明已经参考示例性实施方案进行了描述，但应理解本发明不限于公开的示例性实施方案。在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的示例性实施方案做多种调整或变化。权利要求的范围应基于最宽的解释以涵盖所有修改和等同结构与功能。

Claims (8)

1.一种可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)有机体系降解步骤，其包括使重均分子量为20-55万道尔顿的PHA原料与烷基吡咯烷酮有机溶剂以1:1-1:10的重量比混合溶解，升温至70-100℃反应，然后加入水析出较低分子量的PHA后得到纯度99.90％以上、重均分子量为8-20万道尔顿的第一降解物；
(2)水性体系降解步骤，其包括使所述第一降解物在水性体系中进一步降解得到重均分子量为0.1-2.5万道尔顿、粘度为1-45万CPS的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯，其中：
所述水性体系为碱性水溶液体系，其包括：
(2-1)使第一降解物按照重量比1：(2-8)范围加入碱，于25-80℃温度范围反应，直到体系为凝胶状态时停止反应；
(2-2)加入硫酸、盐酸或醋酸中和碱，至体系PH为中性；
(2-3)室温条件下过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉；
(2-4)过滤所得的凝胶状PHA，60-65℃进行减压蒸馏，去除所残留的水，固体析出，于40-45℃过滤去除固体，得到凝胶状PHA；或者
所述水性体系为酸性水溶液体系，其包括：
(2-1’)将第一降解物按照重量比1：(2-8)范围加入95％酒精，在35-80℃条件下，搅拌溶胀2-8小时，然后加入酒精体积1/4-2的水配制的酸溶液于80-85℃反应至体系中开始出现凝胶状态，接下来降温至40-55℃，继续反应至体系为凝胶状态停止反应；
(2-2’)加入碳酸钠或碳酸氢钠中和酸，至体系PH为中性；
(2-3’)室温条件下过滤，将粒径15μm以上的颗粒去除掉；
(2-4’)过滤所得的凝胶状PHA，60-65℃进行减压蒸馏，去除所残留的乙醇与水，固体钠盐析出，于40-45℃过滤去除固体钠盐，得到凝胶状PHA。
2.根据权利要求1所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其特征在于，所述PHA原料选自PHB、PHBV、PHBHHx、P34HB、PHBVHHx和PHHx中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其特征在于，步骤(1)中水的加入量为烷基吡咯烷酮体积的1.5-3倍，重复加水析出多次。
4.根据权利要求1所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其特征在于，所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钙的强碱。
5.根据权利要求1所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其特征在于，所述碱选自碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸氢钾的弱碱，且所述步骤(2-1)包括于60-80℃温度范围反应直到体系出现凝胶状态，然后降温至35-45℃温度范围继续反应至体系为凝胶状态时停止反应。
6.根据权利要求1-5任一项所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯的制备方法，其特征在于，进一步包括通过伽马射线照射或使用环氧乙烷对可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯进行处理的步骤。
7.一种可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯，其特征在于，通过根据权利要求1-6任一项所述的制备方法制备得到。
8.根据权利要求7所述的可注射凝胶聚羟基脂肪酸酯在制备组织填充剂中的用途。
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