CN114886981A - 中药组合物及其在制备颈肩腰腿痛药中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药组合物及其在制备颈肩腰腿痛药中的应用。按质量份数计，该中药组组合物包括：制乳香4～8份，制没药4～8份，肉桂4～8份，冰片2～4份，血竭2～4份，甘松2～4份，细辛2～4份，川椒目2～4份，煅自然铜2～4份和丁香1～3份。本发明的中药组合物已经过专利权人50余年的临床应用，证实其对跌倒扭挫伤、瘀肿疼痛有着很好的疗效，具有改善血循环、抗炎镇痛、减轻或防止粘连和疤痕的形成及促进损伤组织修复的作用，且未发现明显过敏反应及毒副作用，深受广大医生和患者的好评，适用于各类急慢性软组织损伤疼痛的患者。

Description

中药组合物及其在制备颈肩腰腿痛药中的应用

技术领域

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中药组合物及其在制备颈肩腰腿痛药中的应用。

背景技术

现代医学研究证实，急性软组织损伤的病理机制主要是受损组织的炎症反应，血管内活性物质以及组胺等炎性介质大量释放导致酸性代谢产物进一步积聚，从而使损伤局部发生一系列微循环的改变，以致血管张力下降、毛细血管通透性增加，使得局部血流变缓慢甚至停滞，从而加重了炎症病变，若不能及时痊愈，可能迁延形成慢性软组织损伤。

当前，现代医学对待急性软组织损伤的主要治疗方法有：包扎、局部封闭、理疗、抗炎镇痛药物等。但这些方法仍不足以全面有效地控制急性软组织损伤所产生的所有症状，不仅疗效有限，而且常用的抗炎镇痛药(包括非甾体抗炎免疫药、甾体抗炎免疫药及合成类固醇等)副作用比较大，大量或长期服用均会造成某些器官和系统的功能受损，从而导致很多的副反应及并发症。

急性软组织损伤在祖国医学中被称为筋伤，如《灵枢本脏篇》记载：“经脉者，所以行气血而营阴阳，濡筋骨，利关节也”；《医宗金鉴》云：“损伤之症，肿痛者，乃瘀血凝结作痛也”；《素问阴阳应象大论》载：“气伤痛，形伤肿”；《圣济总录折伤门》云：“若因伤折内动经络，血行之道不得宜通。瘀积不散，为肿为痛”。这些医学典籍中均明确指出疼痛和肿胀是软组织损伤后主要的症状表现。因此，祖国医学认为急性软组织损伤的本质是血瘀，主要病机为气滞血瘀，脉络不和。急性的跌、打、扭、挫伤等外来暴力损伤于外而伤气于内，损伤之后络脉破损，血液离经而成瘀，血瘀则气滞，瘀血不行则化热，气滞不行则疼痛。针对软组织损伤气滞血瘀的本质，当以“活血化瘀、行气止痛”为治则。在该治则的指导下，中医研究者大多采用内病外治法治疗急性软组织损伤，将外用药敷于局部患处，不仅起效相对较快，而且避免了胃肠道的不良反应及药物的毒副作用，取得了良好的临床效验。

现有技术中常用的活血止痛膏，如国药准字Z42021573为的活血止痛膏，其原料组成包括：白芷45g，牡丹皮10g，荆芥20g，干姜80g，细辛20g，山奈45g，生天南星25g，辣椒10g，川芎15g，独活15g，没药10g，香加皮20g，丁香25g，生半夏40g，甘松40g，当归25g，冰片20g，乳香10g，桂枝20g，胡辣25g，苍术10g，陈皮45g，辛夷15g，薄荷脑20g，大黄40g，樟脑20g，颠茄流浸膏30g，水杨酸甲酯30g。

上述活血止痛膏虽然疗效甚佳，但其原料组成过于复杂，有待精简；且其中添加了西药成分(水杨酸甲酯)，水杨酸甲酯不仅具有一定的毒副作用，而且对皮肤的刺激性较强。

发明内容

本发明的发明目的是提供一种中药组合物及其在制备颈肩腰腿痛药中的应用，该中药组合物组成简单，配伍合理，且疗效良好。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案为：

一种中药组合物，按质量份数计，包括：制乳香4～8份，制没药4～8份，肉桂4～8份，冰片1～4份，血竭1～4份，甘松1～4份，细辛1～4份，川椒目1～4份，煅自然铜1～4份和丁香1～3份。

本发明的中药组合物遵循祖国医学对创伤病理机制的认识，从对软组织损伤的治则的深刻认识出发，以“活血化瘀、舒筋通络、消肿止痛”为治则，针对急慢性软组织损伤后的临床表现重新辩证、确定治法、选药配伍。

方中，以制乳香、制没药活血化瘀、散血止痛、消肿生肌，是为君药；辅以丁香、肉桂助阳补虚、散寒止痛、温通经脉，以血竭活血定痛，化瘀止血，生肌敛疮，三药合用加强主药活血化瘀、续筋疗伤之功，是为臣药；佐以甘松行气止痛、温肾壮阳，细辛解表散寒、祛风止痛，冰片清热止痛、消肿、防腐生肌，川椒目温中止痛、利水消肿，是为佐药；煅自然铜活血化瘀、散瘀止痛、续筋接骨，是为使药。纵观全方君臣佐使，相得益彰，相辅相成，共奏活血化瘀、舒筋活络、消肿止痛之功。

因没药、乳香药效较制乳香和制没药更优，现有的软组织损伤治疗药中倾向于选用没药和乳香；然而，因乳香和没药的药性较强、毒副作用相对较大，因此，现有的软组织损伤治疗药中乳香和没药的用量较少，常作为臣药使用，即使在使用制乳香和制没药时也仍旧以作为臣药为主。

本发明以制乳香和制没药作为君药，与乳香和没药相比，制乳香和制没药药性虽然较弱，但不含有刺激性的挥发油，杂质少，在相同用量下能够获得更多的有效提取成分；而且基本无毒副作用，药性温和；同时，本发明以血竭、肉桂和丁香作为臣药，这一臣药组合的药效也十分温和，在加强君药活血化瘀功效的同时，还起到温补元阳，行气止痛的作用，与佐药相辅相成。君药、臣药和佐药均选择药性较为温和的组分，缓缓从治，与软组织损伤更加对症。

与目前公认的疗效药-活血止痛膏相比，本发明的中药组合物重新确定了君臣佐使成分，由于君臣佐使相得益彰，在全方用药十分精简的情况下，仍旧具备比活性止痛膏更加优异的疗效；制药成本大大降低，制药工序也更加简便。本发明的中药组合物已经过专利权人50余年的临床应用，证实其对跌倒扭挫伤、瘀肿疼痛有着很好的疗效(有效率达到95％以上)，具有改善血循环、抗炎镇痛、减轻或防止粘连和疤痕的形成及促进损伤组织修复的作用，且未发现明显过敏反应及毒副作用，深受广大医生和患者的好评，适用于各类急慢性软组织损伤疼痛的患者。

作为优选，按质量份数计，上述的中药组合物包括：制乳香6份，制没药6份，肉桂6份，冰片3份，血竭3份，甘松2份，细辛2份，川椒目2份，煅自然铜2份和丁香1.5份。

基于上述中药组合物的优秀疗效，本发明还提供了上述的中药组合物在制备颈肩腰腿痛药中的应用。

作为优选，上述的应用包括：

(1)按预设的质量份，将制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香混合，经水提法获得提取液，并将提取液浓缩，获得浸膏；

(2)按预设的质量份，将冰片、血竭和煅自然铜研磨成粉末；

(3)按预设的剂型工艺，采用所述的浸膏和所述的粉末制成所述的颈肩腰腿痛药。

或者，包括：

(1)按预设的质量份，将制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香混合，经水提法获得提取液，所述的提取液经浓缩、干燥后造粒，获得颗粒剂；

(2)按预设的质量份，将冰片、血竭和煅自然铜研磨成粉末；

(3)按预设的剂型工艺，采用所述的颗粒剂和所述的粉末制成所述的颈肩腰腿痛药。

其中，冰片、血竭和煅自然铜由于不溶于水，因此本发明先将这三种原料研磨成粉末，再通过其他手段溶解后使用或直接使用。

为了便于冰片、血竭和煅自然铜的有效利用，在上述应用中，步骤(2)中，所述的粉末的粒径为100～200目。粒径越小，则对其的利用率越高。

而其余组分既可采用水提法提取获得浸膏(即浸膏)后直接使用，也可以将浸膏干燥制粒，获得可溶于水的颗粒剂后再使用。颗粒剂的粒径优选小于25目(即目数要大于25目，目数越大，粒径越小)，以确保颗粒剂可快速在水中溶解。

实施水提法时，可以采用多功能提取罐、动态提取罐、篮式提取罐等设备进行提取，采用单效浓缩器、双效浓缩器、MVR浓缩器、强制循环浓缩器等设备对提取液进行浓缩，采用喷雾干燥塔、真空带式浓缩器、微波干燥器等设备对浸膏进行干燥，采用干法制粒机进行制粒。

本发明还提供了一种颈肩腰腿痛药，该颈肩腿痛药包含有从上述的中药组合物中提取的有效成分，以及药学上可接受的辅料；且可根据需要制成多种不同的剂型，如膏剂、贴膏剂、搽剂、散剂、气雾剂或巴布剂等。

本发明还提供了一种颈肩腰腿痛巴布膏，该颈肩腰腿痛巴布膏采用如下制备方法制成：

(1)将水性凝胶基质按1:(25-35)的质量比分散到水中，获得水相A；

该水性凝胶基质可以是卡波姆，卡波姆与水的质量比优选为1:30；

(2)将本发明中药组合物中的制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香制成浸膏或颗粒剂，将本发明中药组合物中的血竭和煅自然铜研磨成粉末；

(3)将保湿剂、交联剂和交联调节剂按(55-86):1:0.1的质量比混匀，获得混合液；将步骤(2)获得的浸膏或颗粒剂以及粉末添加到该混合液中，混匀，获得油相；

其中，所述的保湿剂为甘油和丙二醇中的至少一种，所述的交联剂可以采用复合铝盐，所述的交联调节剂可以采用EDTA；作为优选，该混合液由甘油、丙二醇、复合铝盐和EDTA按(20-30):1.9:0.35:0.035的质量比混匀获得；

其中，粉末与交联剂的质量比为(4.5-5):1；粉末与浸膏或颗粒剂的质量比，按照本发明中药组合物预设的质量比即可；

(4)将本发明中药组合物中的冰片溶解到酒精中，获得酒精相；

其中，冰片和酒精的质量比为1:(2-5)；作为优选，冰片和酒精的质量比为1:3；

酒精相中还可以加入适量的防腐剂(如尼泊金甲酯)。

(5)将增稠剂按1：(2-4)的质量比溶解于水中，获得水相B；

所述的增稠剂可以采用吡咯烷酮，作为优选，吡咯烷酮和水的质量比为1:2.5；

(6)将步骤(4)获得的酒精相加入到步骤(3)获得的油相中，混匀，获得大油相；

其中，酒精相与油相的质量比优选为1：(4.5～7.5)；

(7)将步骤(6)获得的大油相加入步骤(1)获得的水相A中，真空搅拌2-5min后加入步骤(5)获得的水相B，继续真空搅拌5-10min，获得含药凝胶；

其中，大油相与水相A的质量比优选为(0.4-0.6)：1；水相B与水相A的质量比优选为(0.1-0.15)：1；

(8)将步骤(7)获得的含药凝胶涂布在基材上，获得所述的颈肩腰腿痛巴布膏。

本发明根据中药组合物的药方，对颈肩腰腿痛巴布膏的制备方法作了针对性的改进。其中，冰片可溶于酒精，即将冰片先溶解到酒精相中；血竭和煅自然铜既不溶于水，也不溶于酒精，因此直接以粉末形式添加；中药组合物中的其他组分即经过提取后，以浸膏或颗粒剂的形式添加；如此可将中药组合物的有效成分充分融合到巴布膏中。

与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

(1)本发明的中药组合物，以制乳香、制没药活血化瘀、散血止痛、消肿生肌，是为君药；辅以丁香、肉桂助阳补虚、散寒止痛、温通经脉，以血竭活血定痛，化瘀止血，生肌敛疮，三药合用加强主药活血化瘀、续筋疗伤之功，是为臣药；佐以甘松行气止痛、温肾壮阳，细辛解表散寒、祛风止痛，冰片清热止痛、消肿、防腐生肌，川椒目温中止痛、利水消肿，是为佐药；煅自然铜活血化瘀、散瘀止痛、续筋接骨，是为使药；纵观全方君臣佐使，相得益彰，相辅相成，共奏活血化瘀、舒筋活络、消肿止痛之功。

(2)本发明以制乳香和制没药作为君药，与乳香和没药相比，制乳香和制没药药性虽然较弱，但不含有刺激性的挥发油，杂质少，在相同用量下能够获得更多的有效提取成分；而且基本无毒副作用，药性温和；同时，本发明以血竭、肉桂和丁香作为臣药，这一臣药组合的药效也十分温和，在加强君药活血化瘀功效的同时，还起到温补元阳，行气止痛的作用，与佐药相辅相成。君药、臣药和佐药均选择药性较为温和的组分，缓缓从治，与软组织损伤更加对症。

(3)与目前公认的疗效药-活血止痛膏相比，本发明的中药组合物重新确定了君臣佐使成分，由于君臣佐使相得益彰，在全方用药十分精简的情况下，仍旧具备比活性止痛膏更加优异的疗效；制药成本大大降低，制药工序也更加简便。

(4)该中药组合物已经过专利权人50余年的临床应用，证实其对跌倒扭挫伤、瘀肿疼痛有着很好的疗效(有效率达到95％以上)，具有改善血循环、抗炎镇痛、减轻或防止粘连和疤痕的形成及促进损伤组织修复的作用，且未发现明显过敏反应及毒副作用，深受广大医生和患者的好评，适用于各类急慢性软组织损伤疼痛的患者。

附图说明

图1为贴敷不含有中药提取物的空白基质贴膏的大鼠皮肤组织病理学检查结果；

图2为贴敷本发明颈肩腰腿痛贴膏的大鼠皮肤组织病理学检查结果；

图3为不贴敷任何贴膏的空白对照组大鼠的肝脏形态观察图；

图4为贴敷不含有中药提取物的空白基质贴膏的阴性对照组大鼠的肝脏形态观察图；

图5为贴敷本发明颈肩腰腿痛贴膏的大鼠的肝脏形态观察图；

图6为不贴敷任何贴膏的空白对照组大鼠的肾脏形态观察图；

图7为贴敷不含有中药提取物的空白基质贴膏的阴性对照组大鼠的肾脏形态观察图；

图8为贴敷本发明颈肩腰腿痛贴膏的大鼠的肾脏形态观察图；

图9为不贴敷任何贴膏的空白对照组大鼠的肝脏病理组织学检查结果；

图10为贴敷不含有中药提取物的空白基质贴膏的阴性对照组大鼠的肝脏病理组织学检查结果；

图11为贴敷本发明颈肩腰腿痛贴膏的大鼠的肝脏病理组织学检查结果；

图12为不贴敷任何贴膏的空白对照组大鼠的肾脏病理组织学检查结果；

图13为贴敷不含有中药提取物的空白基质贴膏的阴性对照组大鼠的肾脏病理组织学检查结果；

图14为贴敷本发明颈肩腰腿痛贴膏的大鼠的肾脏病理组织学检查结果；

图15为热板刺激小鼠疼痛反应的状态图；

图16为在大鼠腹部贴敷本发明颈肩腰腿痛巴布剂的状态图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细说明。

本发明实施例中所采用的实验试剂包括：颈肩腰腿痛贴膏(浙江中医药大学附属江南医院与杭州市萧山区中医院共同研制)、空白基质贴膏(浙江中医药大学附属江南医院提供)，苏木素、伊红(购自上海沪震实业有限公司)，乙醇(购自杭州化学试剂有限公司)、二甲苯(购自埃克森美孚公司)、盐酸(购自华富化工有限公司)，氨水(购自杭州长征化工厂)，封片剂(购自上海科汇生物技术有限公司)，多聚甲醛(购自上海试剂三厂)，ELISA试剂盒(购自assay公司)。

本发明实施例中所采用的实验仪器包括：STP120脱水机、AP280-2包埋机和HM335E切片机(均购自MICROM公司)，DRP－9052型电热恒温箱(购自上海森信实验仪器有限公司)，LEICA全自动染色机(购自LEICA公司)，GEMSTAR全自动血液生化分析仪(购自ELECTRO-NUCLCONICS公司)，酶联免疫测试仪(购自Thermo Scientific Varioskan Flash)。

本发明实施例中所测数据均以均数加减标准差

表示，数据统计用spss19.0软件完成，多组间均数的比较采用单因素方差分析，组间均数两两比较采用LSD-t法。

实施例1

本实施例一种中药组合物，按质量份数计，包括：制乳香6份，制没药6份，肉桂6份，冰片3份，血竭3份，甘松2份，细辛2份，川椒目2份，煅自然铜2份和丁香1.5份。

将上述中药组合物制成颈肩腰腿痛贴膏，以阐述其治疗效果。

该颈肩腰腿痛贴膏的制备方法包括：

(1)按预设的质量份，将制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香混合，经水提法获得提取液，并将提取液浓缩，获得浸膏；

具体地，该水提法包括：以水为溶剂，按1g中药加10mL水的比例备水，先将制乳香、制没药、甘松、细辛、川椒目和丁香混合，加入总加水量的65％，先浸泡30min，然后大火煮开(100℃)，小火(60℃)煎煮20min后放入肉桂，继续煎煮20min，过滤，取提取液，并向药渣中加入总加水量的35％，大火煮开(100℃)后，小火(60℃)煎煮30min，过滤，取提取液；合并所有提取液，经浓缩后获得浓缩液；

(2)按预设的质量份，将冰片、血竭和煅自然铜研磨成粒径为150目的粉末；

具体地，冰片、血竭和煅自然铜可以分别研磨成粉末后，再将各粉末混合后使用，也可按预设质量份称取后，先混合，再一同研磨成粉末；

(3)按预设的剂型工艺，采用步骤(1)获得的浸膏和步骤(2)获得的粉末制成本实施例的颈肩腰腿痛药；

本实施例选用的剂型是贴膏剂，制备时按照常规的贴膏剂制备工艺即可，主要包括：药料制备→膏浆制备→涂布→回收溶剂→切割→加衬→包装的工艺流程。最终获得本实施例的颈肩腰腿痛贴膏。

实施例2

本实施例一种中药组合物，按质量份数计，包括：制乳香8份，制没药8份，肉桂8份，冰片2份，血竭2份，甘松2份，细辛3份，川椒目2份，煅自然铜3份和丁香2份。

将上述中药组合物制成颈肩腰腿痛贴膏，以阐述其治疗效果。

该颈肩腰腿痛贴膏的制备方法包括：

(1)按预设的质量份，将制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香混合，经水提法获得提取液，提取液经浓缩、干燥后造粒，获得粒径为25目的颗粒剂；

具体地，该水提法包括：以水为溶剂，按1g中药加10mL水的比例备水，先将制乳香、制没药、甘松、细辛、川椒目和丁香混合，加入总加水量的65％，先浸泡30min，然后大火煮开(100℃)，小火(60℃)煎煮20min后放入肉桂，继续煎煮20min，过滤，取提取液，并向药渣中加入总加水量的35％，大火煮开(100℃)后，小火(60℃)煎煮30min，过滤，取提取液；合并所有提取液，经浓缩后获得浓缩液；

(2)按预设的质量份，将冰片、血竭和煅自然铜研磨成粒径为150目的粉末；

具体地，冰片、血竭和煅自然铜可以分别研磨成粉末后，再将各粉末混合后使用，也可按预设质量份称取后，先混合，再一同研磨成粉末；

(3)按预设的剂型工艺，采用步骤(1)获得的浸膏和步骤(2)获得的粉末制成本实施例的颈肩腰腿痛药；

本实施例选用的剂型是贴膏剂，制备时按照常规的贴膏剂制备工艺即可，主要包括：药料制备→膏浆制备→涂布→回收溶剂→切割→加衬→包装的工艺流程。最终获得本实施例的颈肩腰腿痛贴膏。

实施例3

本实施例一种中药组合物，按质量份数计，包括：制乳香4份，制没药4份，肉桂4份，冰片4份，血竭4份，甘松2份，细辛3份，川椒目2份，煅自然铜3份和丁香3份。

采用与实施例1相同的方法，利用本实施例的中药组合物制备颈肩腰腿痛贴膏。

分别取上述实施例1-3制备的颈肩腰腿痛贴膏，对各颈肩腰腿痛贴膏的用药安全性和临床用药效果进行测试。

一、颈肩腰腿痛贴膏的用药安全性测试

1、颈肩腰腿痛贴膏的皮肤刺激性测试

实验大鼠购入后，首先进行预分笼，设定一个临时预分号并测定购入日体重。以购入日记为第1天，检疫与驯化期为2天，期间对于外观、一般状态出现异常，可能对实验有影响的动物，予以剔除；而后取健康合格大鼠16只，用电动推子在大鼠背部褪毛，面积约在5×4cm²。

将这16只大鼠随机分为2组，其中一组为颈肩腰腿痛贴膏组，在大鼠褪毛位置贴敷实施例1制备的颈肩腰腿痛贴膏；另一组为阴性对照组，贴敷不含有提取物的空白基质贴膏；每日换药3次，每次贴敷后用胶布绑缚以稳固贴膏，连续贴敷7日。

(1)大鼠大体情况观察

在实验的7天中，每天观察大鼠的行为活动、皮毛色泽、饮食、体重和死亡情况。观察结果显示，实验期间所有组别均无动物死亡，且所有组别未发现大鼠有体重异常加重或减轻，未发现实验动物的日常活动、饮水进食、粪便有明显异常，所有组别大鼠的口、眼、鼻、耳等均没有非正常渗出物分泌，所有组别大鼠皮肤的敷贴位置没有观察到有较为显眼的色素沉着，未见出血点，皮肤表面均有正常光泽。综上可以判断本发明的颈肩腰腿痛贴膏对SD大鼠皮肤无明显刺激性作用。

(2)贴敷部位的皮肤刺激性反应观察

在第1、3、7天换药期间察看大鼠背部贴敷部位皮肤有无红斑和水肿等特殊反应。按照表1《皮肤刺激反应评分标准表》，分别从红斑和水肿两个方面进行刺激反应评分。

表1皮肤刺激反应评分表

按下式计算各组的刺激性反应平均分值：

平均分值＝(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计动物数；

其中，平均分值为0-0.49表示为无刺激性，平均分值为0.5-2.99表示轻度刺激性，平均分值为3-5.99表示中度刺激性；平均分值为6.0-8表示强刺激性。

计算结果如表2所示。

表2皮肤刺激性反应的评分结果

由表2可见，在实验的第1天、3天、7天，所有大鼠均未出现红斑和水肿，也没有观察到清晰可见的色素沉着，皮肤没有观察到异常状况。表明本发明的颈肩腰腿痛贴膏在贴敷后对皮肤没有刺激性。

(3)病理组织学观察

实验第七天以戊巴比妥麻醉大鼠，剃毛后取背部皮肤，大小约为3×3cm²，取下组织后用10％福尔马林溶液固定6小时，组织经脱水、包埋后切片，厚度4μm；将切片置于60℃烤箱烘烤2h；二甲苯I、二甲苯II各冲洗15min；无水乙醇I、II各冲洗10min；95％乙醇、80％乙醇、70％乙醇各冲洗2min；自来水冲洗1min；苏木素染液染5min；流水冲洗2min；0.5％盐酸酒精分化5s；流水冲洗1min；0.5％稀氨水返蓝20s；流水冲洗3min；0.5％伊红染液染色2min；流水冲洗1min；80％乙醇、95％乙醇各30s；无水乙醇I、II各2min；二甲苯I、二甲苯II各5min，染色完毕后，中性树胶封固，作病理学检查，观察各组表皮真皮及皮下结构有无变化。

观察结果如图1和图2。由图1和图2可见，对照组与给药组的皮肤层面在镜下观察到组织层次相似，表皮角化层未见异常；棘细胞近似于层状排列；基底细胞分布规律不疏松，胞体较丰满；真皮层胶原束状走向且形态细而长，弹力纤维常表现为网状结构，纤维体排列有序且粗而长；真皮及皮下组织未见明显异常，无血肿、色素沉积变性、坏死等改变,毛囊、皮脂腺等结构正常，皮下有少量炎性渗出。

2、颈肩腰腿痛贴膏对豚鼠的皮肤致敏性试验

取健康白化豚鼠16只，雄性，称重后分组、编号，随机分为2组，即阴性对照组(8只)，实验组(8只)，其中，阴性对照组贴敷不含药的空白基质贴膏，颈肩腰腿痛贴膏组贴敷实施例1的颈肩腰腿痛贴膏，连续贴敷7天；重复致敏三次，给药间隔为一周，末次给药后的第14日，再次给药继发，并观察豚鼠的各项生理情况。

(1)豚鼠的大体情况观察

在连续贴敷的七天中，每天观察豚鼠的行为活动，皮毛色泽、饮食、体重和死亡情况。

观察结果显示，实验期间所有组别均无动物死亡，所有组别均未发现豚鼠有体重异常加重或减轻，未发现实验动物的日常活动、饮水进食、粪便有明显异常，所有组别豚鼠口、眼、鼻、耳等均没有非正常渗出物分泌。

2.皮肤致敏结果

于最后一次给药激发后1、6、24、48和72小时，观察豚鼠皮肤红斑、水肿和其他过敏反应情况，记录每一个时间点每一只豚鼠的分值。同时关注动物的大体情况，包括死亡、休克、无法站立或者哮喘等明显的全身症状。每个豚鼠的实验结果按照表2“皮肤过敏反应评分标准表”进行过敏反应评分，计算各组豚鼠的致敏反应平均分值：

平均分值＝(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计动物数；

其中，平均分值为0-0.49表示无刺激性，为0.5-2.99表示轻度刺激性，为3-5.99表示中度刺激性，为6.0-8表示强刺激性。

并按下式计算致敏率：

致敏率＝(出现皮肤过敏反应阳性数/受试动物总数)×100％；

其中，致敏率0-10％表示无致敏性；致敏率11-30％表示轻度致敏性；致敏率31-60％表示中度致敏性；致敏率61-80％表示高度致敏性；致敏率81-100％表示极度致敏性。皮肤致敏试验的结果如表3和表4所示。

表3皮肤致敏实验结果

表4皮肤致敏实验结果(续)

由表3和表4所示，阴性对照组与颈肩腰腿痛贴膏组自给药激发后1h-72h均未出现异常，致敏率为0，皮肤刺激反应平均分值为0，由此可见本发明的颈肩腰腿痛贴膏对皮肤不产生致敏作用。

3、颈肩腰腿痛贴膏对大鼠肝肾的影响

取健康SD大鼠，雄性，称重后分组、编号，用电动推子在大鼠背部褪毛并脱毛，面积约在5×4cm2，而后随机分为3组：空白对照组、阴性对照组和颈肩腰腿痛贴膏组，其中，空白对照组不贴敷任何贴膏，阴性对照组贴敷不含有提取物的空白基质贴膏，颈肩腰腿痛贴膏组贴敷实施例1制备的颈肩腰腿痛贴膏；每日换药3次，每次贴敷完后用胶布绑缚以稳固贴膏，连续贴敷7日。

(1)肝肾的病理组织学观察

实验第七天用戊巴比妥麻醉大鼠，摘取大鼠的肝脏与肾脏，经形态观察后，取下部分组织，用10％福尔马林溶液固定6小时，组织经脱水、包埋后切片，厚度4μm；切片置于60℃烤箱烘烤2h；二甲苯I、二甲苯II各15min；无水乙醇I、II各10min；95％乙醇、80％乙醇、70％乙醇各2min；自来水冲洗1min；苏木素染液染5min；流水冲洗2min；0.5％盐酸酒精分化5s；流水冲洗1min；0.5％稀氨水返蓝20s；流水冲洗3min；0.5％伊红染液染色2min；流水冲洗1min；80％乙醇、95％乙醇各30s；无水乙醇I、II各2min；二甲苯I、二甲苯II各5min，染色完毕后，中性树胶封固。

如图3、图4和图5所示，空白对照组大鼠的肝脏形态正常，质地柔软，颜色淡红有光泽，表面光滑，边缘整齐；阴性对照组与颈肩腰腿痛贴膏组的大鼠肝脏在形态、质地、颜色等方面与空白组比较均无明显差别，也未观察到该两组大鼠的肝脏表面有瘀斑、脂肪颗粒等异常表现。

如图6、图7和图8所示，空白对照组大鼠的肾脏形态正常，颜色红润有光泽，包膜光整；阴性对照组与颈肩腰腿痛贴膏组的大鼠肾脏在形态、颜色、包膜光整度等方面与空白组比较均无明显差别，同样未见该两组肾脏外表有瘀斑瘀点等异常，未见肾脏有萎缩的现象。

如图9、图10和图11的肝脏病理组织学检查结果显示：空白对照组大鼠的肝脏组织结构完整，形态正常；以中央静脉为中心，细胞向四周放射排列，排列有序无紊乱，局部未见肝脏细胞坏死，也未见炎性浸润。与空白对照组相比较，阴性对照组与颈肩腰腿痛贴膏组的大鼠肝脏结构的完整性、形态、细胞排列的有序度、坏死细胞和炎性浸润均未见明显差异。提示本发明的颈肩腰腿痛贴膏对大鼠的肝脏无影响。

如图12、图13和图14的大鼠肾脏病理组织学检查结果显示：空白对照组大鼠的肾脏组织结构完整，肾小球及肾小管等结构正常，细胞排列有序未见紊乱，局部未见肾脏细胞坏死，也未见炎性浸润。而与空白对照组相比，阴性对照组与颈肩腰腿痛贴膏组组的大鼠肾脏未见结构的完整性被破坏、未见肾小球及肾小管等结构的异常、未见细胞排列紊乱、未见坏死细胞及炎性浸润，三个组别镜下结构无明显差异。提示本发明的颈肩腰腿痛贴膏对大鼠的肾脏无影响。

(2)肝肾损伤指标检测

于实验第三天以及第七天实验结束时，各组取8只大鼠，戊巴比妥麻醉下，经腹主动脉取血，采集大鼠动脉血，肝素抗凝，用全自动生化仪检测肝脏损伤指标AST、ALT，以及肾脏损伤指标SCR、BUN。

实验第三天的肝脏损伤指标AST检测结果见表5，实验第七天的肝脏损伤指标AST的检测结果见表6。

表5第三天各组大鼠肝功能指标的比较

注：*表示与空白对照组相比，P＞0.05；#表示与阴性对照组相比，P＞0.05。

表6第七天各组大鼠肝功能指标的比较

注：*表示与空白对照组相比，P＞0.05。#表示与阴性对照组相比，P＞0.05。

由表5和图6可见，所有组别大鼠的AST、ALT含量在第3天和第7天都接近正常值，未见有组别的AST、ALT指标有异常的增高。在对空白组、基质对照组、颈肩腰腿痛贴膏组各组组内在实验的第3天和第7天的AST、ALT含量进行比较后发现，各组在第3天和第7天的AST、ALT含量均处于正常范围，数值无较大波动，趋于平稳，说明各组大鼠的肝损指标随着时间的推移处于一个稳定的状态，含药贴膏及空白贴膏的贴敷对大鼠AST、ALT水平不会造成影响。

同时，组间对比发现，在实验第3天，基质对照组、空白组和颈肩腰腿痛贴膏组的AST、ALT水平均处于同一水平，无明显差异(P＞0.05)，说明含药贴膏及空白贴膏贴敷3天不会对大鼠的肝脏造成损伤。在实验的第7天，三个组别的AST、ALT水平仍处于同一水平，无明显差异(P＞0.05)，说明实验结束时，大鼠的肝脏也没有受到损伤。该结果提示在贴敷含药贴膏及空白贴膏时，随着时间的推移，两者均不会对大鼠造成肝损伤。

实验第三天的肾脏损伤指标SCR检测结果见表7，实验第七天的肾脏损伤指标BUN的检测结果见表8。

表7第三天各组大鼠血清SCR和BUN指标的比较

注：*表示与空白组相比，P＞0.05。#表示与基质对照组相比，P＞0.05。

表8第七天各组大鼠血清SCR和BUN指标的比较

注：*表示与空白组相比，P＞0.05。#表示与基质对照组相比，P＞0.05。

如表7、表8所示，所有组别大鼠的的SCR、BUN含量在第3天和第7天都接近正常值，未见有组别的指标有异常的增高。在对空白组、基质对照组、颈肩腰腿痛贴膏组各组组内在实验的第3天和第7天的SCR、BUN含量进行比较后发现，各组在第3天和第7天的SCR、BUN含量均处于正常范围内，各时间点的数值无较大波动，整体趋于平稳，说明各组大鼠的肾脏损伤的指标随着时间的推移处于一个相对稳定的状态，含药贴膏及空白贴膏的贴敷对大鼠血液内SCR、BUN的含量不会造成影响。

同时，组间对比发现，在实验第3天，基质对照组、空白组和颈肩腰腿痛贴膏组的SCR、BUN含量处于同一水平，无明显差异(P＞0.05)，说明含药贴膏及空白贴膏贴敷3天没有对大鼠的肾脏造成损伤。在实验的第7天，三个组别的SCR、BUN含量仍处于同一水平，无明显差异(P＞0.05)，说明实验结束时，所有组别大鼠的肾脏均未受到损伤。该结果提示在贴敷含药贴膏及空白贴膏时，随着时间的推移，两者均不会对大鼠造成肾损伤。

(3)血清中炎性因子的检测

ELISA检测：于实验第三天以及第七天实验结束时，各组取8只大鼠，戊巴比妥麻醉下，取大鼠腹主动脉血，肝素抗凝，离心分离血清，用ELISA试剂盒，检测大鼠血液中炎性因子IL-1β和TNF-a含量；检测结果见表9和表10。

表9第三天各组大鼠血清炎性因子指标的比较

注：*表示与空白组相比，P＞0.05。#表示与基质对照组相比，P＞0.05。

表10第七天各组大鼠血清炎性因子指标的比较

注：*表示与空白组相比，P＞0.05。#表示与基质对照组相比，P＞0.05。

如表9和表10所示，在实验的第3天和第7天，所有组别大鼠血液中的IL-1β、TNF-α含量都接近正常值，未见有组别的炎性指标有异常的增高。在对空白组、基质对照组、颈肩腰腿痛贴膏组各组组内在实验的第3天和第7天的IL-1β、TNF-α含量进行比较后发现，各组在第3天和第7天的IL-1β、TNF-α含量均处于正常范围内，两个时间点的数值无较大波动，整体趋于平稳，说明各组大鼠血液中炎性因子的含量随着时间的推移处于一个相对稳定的状态，疗伤续筋膏及基质的贴敷对大鼠血液内IL-1β、TNF-α的含量不会造成影响。

同时，组间比对发现，在实验第3天，基质对照组、空白组和颈肩腰腿痛贴膏组的IL-1β、TNF-α含量处于同一水平，无明显差异(P＞0.05)，说明在含药贴膏及空白贴膏贴敷的第3天，所有大鼠均没有全身性炎症的表现。在实验的第7天，三个组别的IL-1β、TNF-α含量仍处于同一水平，无明显差异(P＞0.05)，说明实验结束时，所有组别大鼠血液中的炎性因子含量均没有升高，没有引起全身性的炎症反应。该结果提示在贴敷含药贴膏及空白贴膏时，随着时间的推移，两者均不会激发大鼠全身性的炎症反应。

以上试验结果表明，本发明的中药组合物不会导致大鼠发生过敏反应，且无毒副作用，可以安全使用。

综上所述，本发明的颈肩腰腿痛贴膏对皮肤无刺激性、无肝肾毒性、无致敏性，表明其是使用安全、低毒、低皮肤刺激性、低过敏率的中药外用制剂。

二、颈肩腰腿痛贴膏的临床治疗效果

1、颈肩腰腿痛贴膏对神经根型颈椎病的治疗效果

按如下的纳入标准和排除标准，从杭州市萧山区中医院收治的颈椎病患者中征集了120名志愿者参与治疗：

(1)纳入标准：①患者属于神经根型颈椎病患者，无手术指征；②年龄为25-80岁；③近2周未行相关治疗和口服药物者；④VAS评分小于9分者；⑤自愿参与，积极配合治疗与评估；

(2)排除标准：①不符合上述纳入标准者；②确诊为强直性脊桂炎或类风湿关节炎者；③合并严重内科疾病，智力、精神障碍，皮肤病者；④既往有颈椎手术史或颈部严重外伤史者；⑤有本巴布剂相关药物过敏史者及外用膏药严重过敏者及颈椎牵引不耐受者。

将所有志愿者随机分为三个颈肩腰腿痛贴膏组和一个阳性对照组，每组30人。其中，各颈肩腰腿痛贴膏组给予每日贴敷实施例1、2或3制备的颈肩腰腿痛贴膏，而阳性对照组则给予每日贴敷活血止痛膏(购自安徽安科余良卿药业有限公司，国药准字Z34020905)，连续治疗28天，并分别在治疗前、治疗14天和治疗28天时，采用视觉模拟评分法(visualanalogue scale，VAS)对每一患者的颈椎疼痛程度进行评分，评分结果如表11所示。

表11治疗前、治疗14天、治疗28天时的颈椎VAS评分比较(分，

)

注：与治疗前比较⁽¹⁾P<0.05，与阳性对照组比较⁽²⁾P<0.05。

由表11可以看出，各颈肩腰腿痛贴膏组和阳性对照组经过28天的治疗后，患者的VAS评分均大大降低，其中，颈肩腰腿痛贴膏组2和颈肩腰腿痛贴膏组3的VAS评分与阳性对照组相当，而颈肩腰腿痛贴膏组1的VAS评分则显著低于阳性对照组(P<0.05)。

同时，采用颈椎JOA评分法对每一患者的病情程度进行分级，其中，运动功能占8分(上肢运动功能4分，下肢运动功能4分)，感觉占6分(其中，上肢感觉2分，下肢感觉2分，躯干感觉2分)，膀胱功能占3分，总分共计17分；分数越低表明功能障碍越明显，其中JOA评分<9表示严重，JOA评分在9～13之间表示中度，JOA评分大于13表示轻度。评分结果如表12所示。

表12治疗前、治疗14天、治疗28天时的颈椎JOA评分比较(分，

)

注：与治疗前比较⁽¹⁾P<0.05，与阳性对照组比较⁽²⁾P<0.05。

由表12可见，各颈肩腰腿痛贴膏组和阳性对照组经过28天的治疗后，患者的JOA评分均显著提高，其中，颈肩腰腿痛贴膏组2和颈肩腰腿痛贴膏组3的JOA评分与阳性对照组相当，而颈肩腰腿痛贴膏组1的JOA评分则显著高于阳性对照组(P<0.05)。

并且，根据国家中医药管理局《中医病证诊断疗效标准》，对颈肩腰腿痛贴膏对神经根型颈椎病的治疗效果进行评定。评定标准为：①显效：局部轻微压痛，旋颈诱发试验弱阳性，颈椎活动基本正常；②好转：症状减轻，体征不明显，易复发；③无效：症状与治疗前相比，基本无变化。

评定结果如表13所示。

表13治疗28天后的颈椎病疗效比较(例(％))

注：与对照组比较⁽¹⁾P<0.05。

由表13可见，各颈肩腰腿痛贴膏组和阳性对照组经过28天的治疗后，总有效率均达到90％及以上，其中，颈肩腰腿痛贴膏组1的总有效率达到96.7％且显效率达到66.7％，显著优于阳性对照组。且颈肩腰腿痛贴膏组1患者中的显效数比阳性对照组更多，表明实施例1的颈肩腰腿痛贴膏比现有的活血止痛膏具有更好的肩周炎治疗效果。

2、颈肩腰腿痛贴膏对肩周炎的治疗效果

按如下的纳入标准和排除标准，从杭州市萧山区中医院收治的肩周炎患者中征集了120名志愿者参与治疗：

(1)纳入标准：①符合肩周炎诊断者；②年龄50～70岁；③自愿接受治疗并能按疗程配合者。

(2)排出标准：①不符合《中医病证诊断疗效标准》者；②合并有心、肝、肾脏等重要器官原发性疾病者；③有严重高血压、糖尿病血糖控制不佳、精神病患严重者；④外伤引起的肩痛者；⑤已采用手术治疗者。

将所有志愿者随机分为三个颈肩腰腿痛贴膏组和一个阳性对照组，每组30人。其中，各颈肩腰腿痛贴膏组给予每日贴敷实施例1、2或3制备的颈肩腰腿痛贴膏，而阳性对照组则给予每日贴敷活血止痛膏(购自购自安徽安科余良卿药业有限公司，国药准字Z34020905)，连续治疗28天，并分别在治疗前、治疗14天和治疗28天时，采用视觉模拟评分法(visual analogue scale，VAS)对每一患者的肩部疼痛程度进行评分，评分结果如表14所示。

表14治疗前、治疗14天、治疗28天时的肩关节VAS评分比较(分，

)

注：与治疗前比较⁽¹⁾P<0.05，与阳性对照组比较⁽²⁾P<0.05。

由表14可见，随着治疗时间的延长，各组患者的VAS分均逐渐降低，表明各组药物均具有良好的治疗效果。其中，颈肩腰腿痛贴膏组1所采用的颈肩腰腿痛贴膏对患者的治疗效果最佳。

同时采用欧洲肩关节协会的CMS评分法(Constant-Murley Score，肩关节功能评分系统)对各组患者肩关节的功能进行客观评价。CMS评分方法为：总分100分，其中疼痛15分，日常生活活动能力(ADL)20分，关节活动度(ROM)40分，肌力25分；评分越高，则肩关节功能越好。

评价结果见表15。

表15治疗前、治疗14天、治疗28天时的肩关节CMS评分比较(分，

)

注：与治疗前比较⁽¹⁾P<0.05，与阳性对照组比较⁽²⁾P<0.05。

由表15可见，随着治疗时间的延长，各组患者的CMS评分均越来越高，表明各组药物对肩周炎均具有良好的治疗效果。其中，与对照组相比，颈肩腰腿痛贴膏组1患者的恢复速度和疗愈进展更快，在治疗14天时已表现出更优的治疗效果。

参照《中医病证诊断疗效标准》及Cunstant-Mulye肩功能评定标准制定相应疗效等级：①治愈(临床痊愈)：肩部疼痛消失，肩关节活动范围恢复正常，临床症状、体征全部消失，CMS评分≥90分；②显效：肩部疼痛缓解明显，肩关节活动范围改善明显，CMS评分70-89分；③有效：肩部疼痛基本缓解，肩关节活动范围部分改善，CMS评分46-69分；④无效：肩部疼痛与关节活动无明显改善，CMS评分≤45分。

根据上述CMS评分和疗效等级评定方法，对各药物的疗效进行评价，评价结果如表16所示。

表16治疗28天后的肩周炎疗效比较(例(％))

注：与对照组比较⁽¹⁾P<0.05。

由表16可见，实施例1的颈肩腰腿痛贴膏对颈肩腰腿痛贴膏组1患者的肩周炎总有效率达到98.4％，显著优于阳性对照组；且颈肩腰腿痛贴膏组1患者中的痊愈数和显效数比阳性对照组更多，表明实施例1的颈肩腰腿痛贴膏比现有的活血止痛膏具有更好的肩周炎治疗效果。4、颈肩腰腿痛贴膏对腰椎间盘突出症的治疗效果

按如下的纳入标准和排除标准，从杭州市萧山区中医院收治的腰椎间盘突出症患者中征集了120名志愿者参与治疗：

(1)纳入标准：①符合LDH的诊断标准；②年龄18-50岁，依从性好；③患者签署知情同意书并愿意接受治疗，治疗方案经医院伦理委员会审批；

(2)排除标准：①巨大腰椎间盘突出、伴有马尾神经压迫症状或出现肌力明显下降等具有手术指征者；②严重骨质疏松及合并有严重心脑血管或肝肾等疾病，危及生命以及意识不清者；③合并严重感染；④妇女妊娠期；⑤腰椎结核、肿瘤患者；⑥合并腰椎滑脱或椎体压缩性骨折及伴严重椎管狭窄或有较大的骨赘等；⑦有腰椎间盘突出但临床症状不明显者；⑧依从性较差的患者。

将所有志愿者随机分为三个颈肩腰腿痛贴膏组和一个阳性对照组，每组30人。其中，各颈肩腰腿痛贴膏组给予每日贴敷实施例1、2或3制备的颈肩腰腿痛贴膏，而阳性对照组则给予每日贴敷活血止痛膏(购自购自购自安徽安科余良卿药业有限公司，国药准字Z34020905)，连续治疗28天，并分别在治疗前、治疗14天和治疗28天时，采用视觉模拟评分法(visual analogue scale，VAS)对每一患者的下腰疼痛程度进行评分，评分结果如表17所示。

表17治疗前、治疗14天、治疗28天时的下腰VAS评分比较(分，

)

注：与治疗前比较⁽¹⁾P<0.05，与阳性对照组比较⁽²⁾P<0.05。

由表17可见，随着治疗时间的延长，各组患者的VAS分均逐渐降低，表明各组药物对腰椎间盘突出症均具有良好的治疗效果。其中，颈肩腰腿痛贴膏组1所采用的颈肩腰腿痛贴膏对患者的治疗效果最佳，且显著优于阳性对照组。

同时采用M-JOA评分法对患者下腰痛功能性障碍进行评分，以对患者的病情程度进行分级。M-JOA评分法中，主观症状占6分，客观体征占12分，日常生活工作能力12分，总分共计30分；总分≤10分判断为(病情)轻度；总分≤20分则判断为(病情)中度；总分≤30分则判断为(病情)重度。

M-JOA评分结果如表18所示。

表18治疗前、治疗14天、治疗28天时腰椎间盘突出症患者的M-JOA积分比较(分，

)

注：与治疗前比较⁽¹⁾P<0.05，与阳性对照组比较⁽²⁾P<0.05。

由表18可见，经过一段时间的治疗后，各组患者的病情均从重度转为轻度。

依据上述的M-JOA积分，对治疗28天时M-JOA积分相对于治疗前M-JOA积分的变化进行计算，计算公式(尼莫地平法)为：M-JOA积分减少百分比＝(治疗前积分一治疗后积分)/治疗前积分×100.0％。

参考《中药新药临床研究指导原则》疾病疗效判定标准，以上述计算获得的M-JOA积分减少百分比作为其中一个判定因素，对本发明的巴布膏进行疗效判定。疗效评定分4级：①治愈：症状、体征完全消失，功能恢复正常，M-JOA积分减少百分比≥95％；②显效：症状、体征基本消失，M-JOA积分减少百分比≥70％且＜95％；③有效：症状、体征好转，M-JOA积分减少百分比≥30％且＜70％；④无效：症状、体征无改善，M-JOA积分减少百分比小于30％。

判定结果如表19所示。

表19不同药物处理的疗效比较(例(％))

注：与对照组比较(1)P<0.05。

由表19可见，实施例1的颈肩腰腿痛贴膏对颈肩腰腿痛贴膏组1患者的肩周炎总有效率达到96.7％，显著优于阳性对照组；且颈肩腰腿痛贴膏组1患者中的显效数比阳性对照组更多，表明实施例1的颈肩腰腿痛贴膏比现有的活血止痛膏具有更好的腰椎间盘突出症治疗效果。5、颈肩腰腿痛贴膏对膝骨关节炎的治疗效果

按如下的纳入标准和排除标准，从杭州市萧山区中医院收治的膝骨关节炎患者中征集了120名志愿者参与治疗：

(1)纳入标准：①与我国2018年《骨关节炎诊疗指南》膝关节、骨关节炎诊断标准相符；②年龄50-75岁；③X线Kellgren&Lawrence分级处于Ⅰ～Ⅳ级；④患者自愿进行受试，同时自愿接受药物治疗，配合医生，以保证疗程的完整；

(2)排除标准：①与纳入标准不相符合；②患者年龄＜50岁，或＞75岁；③患者患有心血管、肝肾等原发性疾病；④患者具有过敏体质，或者对多种治疗药物均过敏；⑤患有精神病的患者以及老年痴呆人群；⑥不积极配合医生治疗，不能保证疗程的患者；⑦正在进行其他临床研究，或者在近期3个月参加过其他临床研究的。

将所有志愿者随机分为三个颈肩腰腿痛贴膏组和一个阳性对照组，每组30人。其中，各颈肩腰腿痛贴膏组给予每日贴敷实施例1、2或3制备的颈肩腰腿痛贴膏，而阳性对照组则给予每日贴敷活血止痛膏(购自购自购自安徽安科余良卿药业有限公司，国药准字Z34020905)，连续治疗28天，并分别在治疗前、治疗14天和治疗28天时，采用视觉模拟评分法(visual analogue scale，VAS)对每一患者的关节疼痛程度进行评分，评分结果如表20所示。

表20治疗前、治疗14天、治疗28天时的膝骨关节VAS评分比较(分，

)

注：与治疗前比较⁽¹⁾P<0.05，与阳性对照组比较⁽²⁾P<0.05。

由表20可见，随着治疗时间的延长，各组患者的VAS分均逐渐降低，表明各组药物均具有良好的治疗效果。其中，颈肩腰腿痛贴膏组1患者在经过实施例1颈肩腰腿痛贴膏的治疗后，其VAS评分下降较快，且显著优于阳性对照组。

同时，采用WOMAC评分法对膝骨关节的患病严重程度进行判定，评分结果如表21所示。

表21治疗前、治疗14天、治疗28天时的膝骨关节WOMAC评分比较(分，

)

注：与治疗前比较⁽¹⁾P<0.05，与阳性对照组比较⁽²⁾P<0.05。

由表21可以看出，随着治疗时间的延长，各组患者的WOMAC评分均逐渐降低，表明各组药物均具有良好的治疗效果。其中，颈肩腰腿痛贴膏组1患者在经过实施例1颈肩腰腿痛贴膏的治疗后，其WOMAC评分下降较快，且显著优于阳性对照组。

依据上述的WOMAC评分，对治疗28天时WOMAC评分相对于治疗前WOMAC评分的变化进行计算，计算公式(尼莫地平法)为：WOMAC评分减少百分比＝(治疗前积分一治疗后积分)/治疗前积分×100.0％。

参考《中药新药临床研究指导原则》疾病疗效判定标准，以上述计算获得的WOMAC评分减少百分比作为其中一个判定因素，对本发明的巴布膏进行疗效判定。疗效评定分4级：①临床控制：疼痛等症状消失，膝关节活动正常，WOMAC评分减少≥95％；②显效：疼痛等症状缓解，膝关节活动正常，70％≤WOMAC评分减少＜95％；③有效：疼痛基本缓解，膝关节活动轻度受限，30％≤WOMAC评分减少＜70％；④无效：疼痛无明显改善，膝关节活动明显受限，WOMAC评分减少＜30％。

判定结果如表22所示。

表22不同药物对膝骨关节炎的疗效比较(例(％))

注：与阳性对照组比较(1)P<0.05。

由表22可见，实施例1的颈肩腰腿痛贴膏对颈肩腰腿痛贴膏组1患者的膝骨关节炎总有效率达到95％，显著优于阳性对照组；且颈肩腰腿痛贴膏组1患者中的控制数和显效数比阳性对照组更多，表明实施例1的颈肩腰腿痛贴膏比现有的活血止痛膏具有更好的膝骨关节炎治疗效果。

实施例4

本实施例一种颈肩腰腿痛巴布膏，依次包括基材层、含药凝胶层和离型层，该颈肩腰腿痛巴布膏的制备方法包括以下步骤：

(1)将200g卡波姆分散在6000g水中，过夜；而后倒入搅拌锅中，搅拌5min，获得水相A，备用；

(2)将中药组合物制成浸膏或粉末；

本实施例的中药组合物包括：制乳香200g(6份)，制没药200g(6份)，肉桂200g(6份)，冰片100g(3份)，血竭100g(3份)，甘松66.7g(2份)，细辛66.7g(2份)，川椒目66.7g(2份)，煅自然铜66.7g(2份)和丁香50g(1.5份)；

其中，采用与实施例1相同的方法，将制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香制成浸膏；将血竭和煅自然铜粉碎成粒径为150目的粉末；

(3)将2000g甘油、190g丙二醇、35g复合铝盐和3.5g EDTA混匀，获得混合液；再将步骤(2)获得的浸膏和粉末都加入到该混合液中，混匀，获得油相；

(4)将步骤(2)中药组合物中的100g冰片和45g尼泊金甲酯溶解到300g酒精中，获得酒精相；

(5)将200g吡咯烷酮溶解到500g水中，获得水相B；

(6)将步骤(4)获得的酒精相加入到步骤(3)获得的油相中，混匀，获得大油相；

(7)将步骤(6)获得的大油相加入步骤(1)获得的水相A中，先真空搅拌3min，而后加入步骤(5)获得的水相B，继续真空搅拌7min，获得含药凝胶；

(8)将步骤(7)获得的含药凝胶涂覆在基材上，而后盖上离型层，即获得本实施例的颈肩腰腿痛巴布膏。

对比例1

本对比例一种颈肩腰腿痛巴布膏，其组分和制备工艺与实施例4相同，不同之处仅在于：

中药组合物包括：制乳香200g(6份)，制没药200g(6份)，肉桂300g(9份)，冰片100g(3份)，甘松66.7g(2份)，细辛66.7g(2份)，川椒目66.7g(2份)，煅自然铜66.7g(2份)和丁香50g(1.5份)。

对比例2

本对比例一种颈肩腰腿痛巴布膏，其组分和制备工艺与实施例4相同，不同之处仅在于：采用乳香和没药替代制乳香和制没药。

分别取上述实施例4和对比例1-2制备的颈肩腰腿痛贴膏，对各颈肩腰腿痛贴膏的用药安全性和临床用药效果进行测试。

三、颈肩腰腿痛巴布膏的用药安全性测试

采用与上述“2、颈肩腰腿痛贴膏对豚鼠的皮肤致敏性试验”中相同的方法，将豚鼠分为四组，即颈肩腰腿痛巴布膏组、对比巴布膏组1、对比巴布膏组2和活血止痛巴布膏组(购自安徽安科余良卿药业有限公司)，记录四组大鼠在测试后皮肤致敏情况，结果如表23所示。

表23各巴布膏的皮肤致敏实验结果

由表23可见，对比巴布膏组2(贴敷对比例2制备的巴布膏)动物在给药后即出现了不同程度的红斑和水肿，皮肤刺激反应平均分值为2.85，属于具有轻度刺激性。活血止痛巴布膏组动物中个别出现红斑和水肿；而颈肩腰腿痛巴布膏组和对比巴布膏组1在给药后的48h内均为出现异常，表明本发明的颈肩腰腿痛巴布膏对皮肤不产生致敏作用，用药安全性良好。

四、颈肩腰腿痛巴布膏的疗效测试

1、巴布膏贴敷对热板刺激小鼠疼痛反应的影响

取健康雌性ICR小鼠，腹部脱毛(确保皮肤无破损)休息24h后，采用预热至50-55℃的热板仪选取合格动物。选取方法：如图15所示，将小鼠放入热板中开始计时，当小鼠出现舔后足的情况时停止计时，计算该过程的时间即为该鼠的初始痛阈值；凡痛阈值超过30s(痛觉不敏感)或小于5s(痛觉过于敏感)的小鼠均淘汰，取其两次的平均值作为小鼠初始痛阈值。

将合格小鼠随机分为阴性对照组、颈肩腰腿痛巴布膏组、对比巴布膏组1、对比巴布膏组2和活血止痛巴布膏组，其中，阴性对照组在小鼠足部贴敷不含药巴布膏，在给药2h、7h、24h、3d、7d后的一个小时，分别测定各小鼠的痛阈值，若小鼠痛阈测得大于60s，在60s取出并且痛阈值按60s计；测定结果如表24所示。

表24各组小鼠在不同时间下的痛阈值

由表24可见，阴性对照组在未采取任何给药措施的前提下，在热板刺激3天后才恢复至起始痛阈值；而颈肩腰腿痛巴布膏组在用药24小时后已恢复至起始痛阈值，继续用药后，小鼠的痛阈值较起始痛阈值更高，表现为更加耐热痛。对比巴布膏组1、对比巴布膏组2和活血止痛巴布膏组在用药24小时后也基本恢复至起始痛阈值，但在不同贴敷时间下，颈肩腰腿痛巴布膏组的痛阈值均要高于对比巴布膏组1、对比巴布膏组2和活血止痛巴布膏组。

按下述公式计算各组小鼠给药后在不同时间点的痛阈值提高百分率(％)：

痛阈值提高百分率(％)＝(用药后的平均痛阈值－用药前的平均痛阈值)/用药前的平均痛阈值×100％。

计算结果见表25。

表25各组小鼠在不同治疗之间下的痛阈值提升百分率

由表25可见，阴性对照组在给药3天和7天后，小鼠的痛阈值几乎没有提升；而颈肩腰腿痛巴布膏组在给药第三天时的痛阈值提高百分率为22.5％，在给药第七天时的痛阈提高百分率为27.86％；对比巴布膏组1在给药第三天时的痛阈值提高百分率为11.65％，在给药第七天时的痛阈提高百分率为21.90％；对比巴布膏组2在给药第三天时的痛阈值提高百分率为10.33％，在给药第七天时的痛阈提高百分率为20.70％；活血止痛巴布膏组在给药第三天时的痛阈值提高百分率为16.70％，在给药第七天时的痛阈值提高百分率为22.76％；可以看出，本发明的颈肩腰腿痛巴布膏在镇痛方面具有显著疗效，且优于活血止痛巴布膏。

2、巴布膏对乙酸刺激所致小鼠扭体数的影响

取健康雌性ICR小鼠，腹部剃毛后再脱毛，注意保护皮肤不破损，休息24小时后，再次检查小鼠脱毛后的皮肤有无破损，有皮肤破损的剔除；取32只合格ICR小鼠，雌性，称重后随机分为五组并编号，即阴性对照组、颈肩腰腿痛巴布膏组、对比巴布膏组1、对比巴布膏组2和活血止痛巴布膏组，其中，阴性对照组在小鼠腹部脱毛区贴敷不含药巴布膏，试验组1和试验组2分别在小鼠腹部脱毛区贴敷实施例1和实施例2制备的颈肩腰腿痛巴布膏(如图16所示)，而阳性对照组则给予云南白药膏，连续给药7日。

于末次给药60分钟后去除贴敷的药物，用无菌纱布蘸温水擦洗皮肤后，用无菌纱布擦干，各组小鼠均腹腔注射10％冰醋酸0.1ml/10g，而后计时，观察15分钟内小鼠的扭体反应的次数(扭体反应的表现为：腹部内凹、腹前壁贴地、后肢伸展、臀部高起)。

观察结果见表26。

表26不同处理对乙酸所致小鼠扭体反应的影响

注：单因素方差分析结果：F＝32.93，p＜0.01；#表示与阴性对照组比较(p＜0.01)差异明显；*表示与对比巴布膏组1、对比巴布膏组2比较(p＜0.01)差异明显；▲表示与阴性对照组比较(p＜0.01)差异显著，与颈肩腰腿痛巴布膏组比较(p＞0.05)无明显差异。

由表26可见，颈肩腰腿痛巴布膏组、对比巴布膏组1、对比巴布膏组2和活血止痛巴布膏组小鼠较阴性对照组小鼠的扭体次数明显减少，有统计学意义(p＜0.01)，表明本发明的颈肩腰腿痛巴布膏对乙酸所致小鼠扭体反应有抑制作用；同时，颈肩腰腿痛巴布膏组小鼠的扭体次数明显少于对比巴布膏组1和对比巴布膏组2，但与活血止痛巴布膏组小鼠的扭体反应次数接近，且比较结果无统计学意义(p＞0.05)，表明本发明的颈肩腰腿痛巴布膏对乙酸所致小鼠扭体反应的抑制程度与活血止痛巴布膏相当。

Claims (10)

1.一种中药组合物，其特征在于，按质量份数计，包括：制乳香4～8份，制没药4～8份，肉桂4～8份，冰片2～4份，血竭2～4份，甘松2～4份，细辛2～4份，川椒目2～4份，煅自然铜2～4份和丁香1～3份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，按质量份数计，包括：制乳香6份，制没药6份，肉桂6份，冰片3份，血竭3份，甘松2份，细辛2份，川椒目2份，煅自然铜2份和丁香1.5份。

3.如权利要求1或2所述的中药组合物在制备颈肩腰腿痛药中的应用。

4.如权利要求3所述的中药组合物在制备颈肩腰腿痛药中的应用，其特征在于，包括：

(1)按预设的质量份，将制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香混合，经水提法获得提取液，并将提取液浓缩，获得浸膏；

(2)按预设的质量份，将冰片、血竭和煅自然铜研磨成粉末；

(3)按预设的剂型工艺，采用所述的浸膏和所述的粉末制成所述的颈肩腰腿痛药。

5.如权利要求3所述的中药组合物在制备颈肩腰腿痛药中的应用，其特征在于，包括：

(1)按预设的质量份，将制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香混合，经水提法获得提取液，所述的提取液经浓缩、干燥后造粒，获得颗粒剂；

(2)按预设的质量份，将冰片、血竭和煅自然铜研磨成粉末；

(3)按预设的剂型工艺，采用所述的颗粒剂和所述的粉末制成所述的颈肩腰腿痛药。

6.如权利要求5所述的中药组合物在制备颈肩腰腿痛药中的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述的颗粒剂的粒径小于25目。

7.如权利要求4或5所述的中药组合物在制备颈肩腰腿痛药中的应用，其特征在于，步骤(2)中，所述的粉末的粒径为100～200目。

8.一种颈肩腰腿痛药，其特征在于，包含有从如权利要求1或2所述的中药组合物中提取的有效成分，以及药学上可接受的辅料。

9.如权利要求8所述的颈肩腰腿痛药，其特征在于，剂型为膏剂、贴膏剂、搽剂、散剂、气雾剂或巴布剂。

10.一种颈肩腰腿痛巴布膏，其特征在于，采用如下制备方法制成：

(1)将水性凝胶基质按1:(25-35)的质量比分散到水中，获得水相A；

(2)将如权利要求1或2所述的中药组合物中的制乳香、制没药、肉桂、甘松、细辛、川椒目和丁香制成浸膏或颗粒剂，将如权利要求1或2所述的中药组合物中的血竭和煅自然铜研磨成粉末；

(3)将保湿剂、交联剂和交联调节剂按(55-86):1:0.1的质量比混匀，获得混合液；将步骤(2)获得的浸膏或颗粒剂以及粉末添加到该混合液中，混匀，获得油相；

其中，粉末与交联剂的质量比为(4.5-5):1；

(4)将如权利要求1或2所述的中药组合物中的冰片溶解到酒精中，获得酒精相；

其中，冰片和酒精的质量比为1:(2-5)；

(5)将增稠剂按1：(2-4)的质量比溶解于水中，获得水相B；

(6)将步骤(4)获得的酒精相加入到步骤(3)获得的油相中，混匀，获得大油相；

其中，酒精相与油相的质量比优选为1：(4.5～7.5)；

(7)将步骤(6)获得的大油相加入步骤(1)获得的水相A中，真空搅拌2-5min后加入步骤(5)获得的水相B，继续真空搅拌5-10min，获得含药凝胶；

其中，大油相与水相A的质量比优选为(0.4-0.6)：1；水相B与水相A的质量比优选为(0.1-0.15)：1；

(8)将步骤(7)获得的含药凝胶涂布在基材上形成凝胶层，并将离型层贴覆在凝胶层上，获得所述的颈肩腰腿痛巴布膏。

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