CN114886009B - 一种微生态制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种微生态制剂及其制备方法和应用。属于饲用微生态制剂领域，特别涉及一种改善蛋品质的微生态制剂及其制备方法和应用。所述微生态制剂主要包含如下成分：罗伊氏乳杆菌DBN‑SKL01冻干粉，红法夫酵母CICC NO.33064冻干粉及姜黄生粉。本发明的微生态制剂具有显著提高鸡蛋蛋黄颜色、降低总胆固醇含量、延长鸡蛋保质期等效果，使用安全性高，不会对环境造成污染。

Description

一种微生态制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于饲用微生态制剂领域，特别涉及一种改善蛋品质的微生态制剂及其制备方法和应用。
背景技术
禽蛋中含有较高的优质蛋白和人体必需氨基酸和多种微量元素，具有较高的营养价值，蛋品质和蛋保质期直接影响人类健康和养殖效益。
随着人们生活水平的提高，对蛋品质的要求也越来越高，蛋黄中较高水平的胆固醇已经不能满足人们对禽蛋营养的要求。低胆固醇、高品质的禽蛋产品成为关注患有高血脂症和健身人群的迫切要求。随着电商网络的发展，新鲜食品远距离运输已成为我国食品行业的常态，能够承受远距离运输，更长的蛋的保鲜时间是禽蛋类产品适应当前市场需求的亟需。
影响蛋品质的因素主要有遗传、日龄、疾病、饲养方式、营养和储存时间等。目前为提高蛋品质、降低蛋黄胆固醇含量，在养殖过程中通常通过在蛋鸡饲粮中添加益生菌(如光合细菌、荚膜乳杆菌等)、营养素(如铬、铜、大蒜素)、抗氧化剂(如硒、维生素E)、Ω-3脂肪酸等来改善降低蛋黄中胆固醇含量，以提高蛋品质。调控蛋中抗氧化物质的沉积，降低蛋白的氧化，延长蛋的保鲜时间。但上述添加物质不在饲料添加剂目录中，也容易造成环境污染，并且存在使用成本高等问题，因此亟需开发一种安全、环保、低成本的产品来降低蛋黄中胆固醇含量、提高蛋品质、延长蛋的保鲜期。
发明内容：
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种微生态制剂及其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种微生态制剂，所述微生态制剂包含如下有效成分：罗伊氏乳杆菌，红法夫酵母菌，姜黄生粉。
进一步，所述微生态制剂包含如下含量有效成分：罗伊氏乳杆菌5×1012～5×1014cfu/kg，红法夫酵母菌5×1011～5×1013cfu/kg，姜黄生粉350～550g/kg。
优选地，所述微生态制剂包含如下含量有效成分：罗伊氏乳杆菌5×1013cfu/kg，红法夫酵母菌5×1012cfu/kg，姜黄生粉450g/kg。
其中，所述罗伊氏乳杆菌名称为DBN-SKL01，该罗伊氏乳杆菌(Lactobacillusreuteri)于2020年3月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为：CGMCCNO.19491；所述红法夫酵母菌菌株编号为CICC NO.33064，购买自工业微生物所。
本发明还提供了所述微生态制剂在改善蛋品质中的应用。
进一步，所述微生态制剂在降低蛋黄胆固醇、提高蛋白高度、提高哈氏单位、提高蛋黄颜色、延长蛋保鲜期中的应用。
本发明还提供了所述的微生态制剂的制备方法：首先将罗伊氏乳杆菌冻干粉(活菌数5×1012cfu/g)1～100g、红法夫酵母冻干粉(活菌数5×1011cfu/g)1～100g与姜黄生粉350～550g混合均匀后，少量多次地加入载体至1000g，调整水分至10％以下。
优选地，所述方法为将罗伊氏乳杆菌冻干粉(活菌数5×1012cfu/g)10g、红法夫酵母冻干粉(活菌数5×1011cfu/g)10g与姜黄生粉450g混合均匀后，少量多次地加入载体530g，调整水分至10％以下。
优选地，所述载体包括但不限于沸石粉、石粉、玉米芯粉或其它蛋鸡用微生态制剂常用的载体。
本发明还提供了一种改善蛋品质的饲粮，其含有所述的饲用微生态制剂。
进一步，所述微生态制剂的用量为全价饲粮用量的0.05％～0.5％。
优选地，所述微生态制剂的用量为全价饲粮用量的0.3％～0.5％。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明的微生态制剂仅含益生菌、姜黄生粉及载体，使用安全性高，成本低，不会对环境造成污染，可显著提高禽蛋的保鲜期和蛋品质，降低其总胆固醇含量。
通过试验验证，罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01、红法夫酵母菌CICC NO.33064及姜黄生粉联合使用具备协同增效的作用，同时可以维护肠道健康，本发明提供的微生态制剂能够明显降低蛋黄胆固醇、提高蛋白高度、提高哈氏单位、提高蛋黄颜色、延长蛋保鲜期。
附图说明
图1为罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01菌落形态；
图2为罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01耐胃酸能力；
图3为罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01耐胆盐能力；
图4为罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01生长曲线；
图5为微生态制剂对蛋黄颜色的影响；
图6为不同贮藏时间对蛋壳强度的影响；
图7为不同贮藏时间对蛋壳厚度的影响；
图8为不同贮藏时间对蛋白高度的影响；
图9为不同贮藏时间对哈氏单位的影响；
图10为添加微生态制剂对蛋鸡肠道形态的影响。
具体实施方式：
下面结合具体实施例详细描述本发明，所述实施例仅用于理解本发明而不限制本发明的范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所有数据采用IBM SPASS Statistics 24统计软件进行单因素方差分析(One-Way ANOVA)，运用Duncan’s法进行多重比较，结果用平均值±标准误差表示，以P<0.05判断差异显著性。
实施例1：罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01的筛选
从健康仔猪回肠中分离筛选到一株罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01，其菌落形态如图1所示，16sRNA测序结果如下：
16s扩增区域鉴定：
如图2和图3所示，罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01具有良好的耐酸能力，相比于正常pH值，模拟胃酸溶液pH值4.0处理仅减缓其生长速度，但不会对其致死；模拟胃酸溶液pH值2.0处理6h存活率在95％以上；其对0.3％的胆盐耐受性良好，处理8h存活率＞95％；0.5％胆盐浓度处理8h存活率可＞93％。这说明罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01具有较好的耐酸耐胆盐能力，具有作为饲用益生菌开发的潜力。
罗伊氏乳杆菌DBN-SKL011000L发酵罐发酵工艺如下：
种子培养基(g/L)：葡萄糖5，蛋白胨10，酵母膏5，牛肉膏5，氯化钠5，碳酸钙2.5，pH6.5-7.0，121℃30min灭菌。
发酵培养基(g/L)：玉米淀粉：糖蜜(1:1)15，豆粕20，橘皮提取物15，柠檬酸氢二铵[(NH4)2HC6H5O7]2.0，吐温80 1.0mL/L，乙酸钠(CH3COONa·3H2O)5.0，磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)2.0，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.58，硫酸锰(MnSO4·H2O)0.25，121℃高压灭菌30min。
温度：37℃，装液系数：0.5-0.8，罐压：0.03-0.05MPa，过程自动调控pH值为6.5，接种量10％，搅拌转速50rpm，如图4所示，发酵活菌数：6.42～7.84×109cfu/ml。
实施例2：微生态制剂的制备
罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01冻干粉(活菌数5×1012cfu/g)制备方法：发酵培养基：MRS培养基；培养条件：37℃，厌氧培养48h；冻干粉组成：脱脂奶粉10％，谷氨酸钠1.5％，L-半胱氨酸0.5％，乳糖2％，糊精10％。冻干条件：收取发酵液4000rpm离心30min取菌泥，加入保护剂，制成与离心前发酵液浓度相同的菌悬液。将菌悬液倒入实验室小型冻干机的物料干燥盘中，置于超低温冰箱(-80℃)中急速冷冻，以保证形成小的冰晶和冻结完全，预冻时间2小时；同时打开冷冻干燥机，当机器达到第二级制冷时，将物料干燥盘放入冻干机中，抽真空开始进行冻干，此时冻干机的冷井中温度为-80℃；该技术为本领域常规技术。
红法夫酵母CICC NO.33064冻干粉(活菌数5×1011cfu/g)：发酵培养基：YPD培养基；培养条件：30℃，180r/min震荡培养72h；冻干粉组成：脱脂奶粉10％，谷氨酸钠1.5％，L-半胱氨酸0.5％，乳糖2％，糊精10％。冻干条件：收取发酵液4000rpm离心30min取菌泥，加入保护剂，制成与离心前发酵液浓度相同的菌悬液。将菌悬液倒入实验室小型冻干机的物料干燥盘中，置于超低温冰箱(-80℃)中急速冷冻，以保证形成小的冰晶和冻结完全，预冻时间2小时；同时打开冷冻干燥机，当机器达到第二级制冷时，将物料干燥盘放入冻干机中，抽真空开始进行冻干，此时冻干机的冷井中温度为-80℃；该技术为本领域常规技术。
改善蛋品质的微生态制剂制备方法：
(1)取罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01冻干粉(活菌数5×1012cfu/g)1g，红法夫酵母CICCNO.33064冻干粉(活菌数5×1011cfu/g)1g，姜黄生粉350g混合均匀，少量多次地向648g沸石粉中加入上述发酵混合物，混合均匀，调整水分至10％以下。
(2)取罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01冻干粉(活菌数5×1012cfu/g)10g，红法夫酵母CICCNO.33064冻干粉(活菌数5×1011cfu/g)10g，姜黄生粉450g混合均匀，少量多次地向530g沸石粉中加入上述发酵混合物，混合均匀，调整水分至10％以下。
(3)取罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01冻干粉(活菌数5×1012cfu/g)100g，红法夫酵母CICC NO.33064冻干粉(活菌数5×1011cfu/g)100g，姜黄生粉550g混合均匀，少量多次地向250g沸石粉中加入上述发酵混合物，混合均匀，调整水分至10％以下。
实施例3：微生态制剂不同添加量对蛋黄颜色及总胆固醇的影响
选取蛋鸡产蛋高峰期健康蛋鸡2000羽，随机分组如表1，每组4个重复，每个重复50只。其中A组为每千克饲粮中添加1g实施例2第(1)组的微生态制剂；B组为每千克饲粮中添加1g实施例2第(2)组的微生态制剂；C组为每千克饲粮中添加1g实施例2第(3)组的微生态制剂；D0对照组为饲粮空白组；D1对照组为每千克饲粮中添加1g实施例2第(2)组的技术方案微生态制剂，但是该微生态制剂不添加罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01冻干粉，以等量沸石粉替代；D2对照组为每千克饲粮中添加1g实施例2第(2)组的技术方案微生态制剂，但是该微生态制剂不添加红法夫酵母CICC NO.33064冻干粉，以等量沸石粉替代；D3对照组为每千克饲粮中添加1g实施例2第(2)组的技术方案微生态制剂，但是该微生态制剂不添加姜黄生粉，以等量沸石粉替代；D4-D6对照组为每千克饲粮中添加1g实施例2第(2)组的技术方案微生态制剂，但是所述微生态制剂仅分别添加罗伊氏乳杆菌DBN-SKL01冻干粉1g、红法夫酵母CICC NO.33064冻干粉1g、姜黄生粉0.45g，余量以沸石粉替代。预饲期3天，正式期49天。按照试验鸡场的常规管理程序进行免疫和日常管理，试验在同一栏舍内进行，饲养方式为四层阶梯式散养，每日两遍给饲，即上午8:00，下午4:00。固定专人饲喂，自由采食，自动饮水器饮水，随时观察鸡群的生产情况，发现疾病及时治疗。
蛋品质分析：试验结束后，每个重复取20枚蛋，使用全自动蛋品质分析仪分析蛋黄颜色；使用ELISA试剂盒分析鸡蛋中总胆固醇。
表1微生态制剂对蛋黄颜色和总胆固醇的影响
与其它组相比，B组和C组可显著降低蛋黄颜色和鸡蛋中总胆固醇含量(P＜0.05)；与B组相比，C组蛋黄颜色和鸡蛋中总胆固醇含量差异不显著(P＞0.05)；从添加成本角度，B组为最优添加方案。
实施例4：饲粮中不同微生态制剂添加量对蛋品质及胆固醇含量的影响选取蛋鸡产蛋高峰期健康蛋鸡1000羽，随机分为空白对照组和试验组。其中空白对照组仅饲喂基础饲粮；试验组分为饲喂本发明实施例2B组所述的微生态制剂，分为0.05％组、0.1％组、0.3％组及0.5％组，在基础饲粮中按重量比分别添加0.05％、0.1％、0.3％、0.5％的微生态制剂，每个处理4个重复，每个重复50只鸡。预饲期3天，正式期49天。按照本试验鸡场的常规管理程序进行免疫和日常管理，试验在同一栏舍内进行，饲养方式为四层阶梯式散养，每日两遍给饲，即上午8:00，下午4:00。固定专人饲喂，自由采食，自动饮水器饮水，随时观察鸡群的生产情况，发现疾病及时治疗。
蛋品质分析：试验结束后，每个重复取10枚蛋，使用全自动蛋品质分析仪分析蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋白高度、哈氏单位。
胆固醇分析：总胆固醇检测试剂盒法。
表2不同添加量对蛋品质及胆固醇含量的影响
表2结果表明，与空白组相比，饲粮中添加本发明所述改善蛋品质的微生态制剂可显著提高鸡蛋蛋白高度、蛋黄颜色和哈氏单位，降低胆固醇含量(P＜0.05)。由图5可知，0.3％或0.5％组的蛋黄颜色更好，综上所述，最优添加量为0.3％～0.5％。
实施例5：微生态制剂对鸡蛋保质期的影响
分别取实施例3中0.1％组、0.3％组、0.5％组和空白组鸡蛋40枚，放置于4℃冰箱中保存，每7天取10枚蛋适用全自动蛋品质分析仪检测蛋壳厚度、蛋壳强度、蛋黄颜色、蛋白高度、哈氏单位和蛋重，试验结果如图6～9所示。添加量0.3％组和0.5％组蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度和哈氏单位下降较慢，说明饲粮中添加发明所述改善蛋品质的微生态制剂有助于延长蛋品保质期。
实施例6：微生态制剂对蛋鸡肠道的影响
分别取实施例3中空白组和0.3％组的产蛋鸡进行屠宰，通过HE染色观察蛋鸡肠道形态的变化，结果如图10所示。组织切片结果表明，在饲料中添加发明所述微生态制剂具有改善绒毛完整性，提高上皮细胞排列整齐度的有益效果，揭示发明所述微生态制剂可能可以通过维护肠道健康来提高蛋品质。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 北京青蓝伟业科技有限公司
北京大北农科技集团股份有限公司
<120> 一株罗伊氏乳杆菌及其饲料和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1422
<212> DNA
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 1
ggttaggcca ccgactttgg gcgttacaaa ctcccatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa 60
ggcccgggaa cgtattcacc gcggcatgct gatccgcgat tactagcgat tccgacttcg 120
tgtaggcgag ttgcagccta cagtccgaac tgagaacggc tttaagagat tagcttactc 180
tcgcgagctt gcgactcgtt gtaccgtcca ttgtagcacg tgtgtagccc aggtcataag 240
gggcatgatg atctgacgtc gtccccacct tcctccggtt tgtcaccggc agtctcacta 300
gagtgcccaa cttaatgctg gcaactagta acaagggttg cgctcgttgc gggacttaac 360
ccaacatctc acgacacgag ctgacgacga ccatgcacca cctgtcattg cgtccccgaa 420
gggaacgcct tatctctaag gttagcgcaa gatgtcaaga cctggtaagg ttcttcgcgt 480
agcttcgaat taaaccacat gctccaccgc ttgtgcgggc ccccgtcaat tcctttgagt 540
ttcaaccttg cggtcgtact ccccaggcgg agtgcttaat gcgttagctc cggcactgaa 600
gggcggaaac cctccaacac ctagcactca tcgtttacgg catggactac cagggtatct 660
aatcctgttc gctacccatg ctttcgagcc tcagcgtcag ttgcagacca gacagccgcc 720
ttcgccactg gtgttcttcc atatatctac gcattccacc gctacacatg gagttccact 780
gtcctcttct gcactcaagt cgcccggttt ccgatgcact tcttcggtta agccgaaggc 840
tttcacatca gacctaagca accgcctgcg ctcgctttac gcccaataaa tccggataac 900
gcttgccacc tacgtattac cgcggctgct ggcacgtagt tagccgtgac tttctggttg 960
gataccgtca ctgcgtgaac agttactctc acgcacgttc ttctccaaca acagagcttt 1020
acgagccgaa acccttcttc actcacgcgg tgttgctcca tcaggcttgc gcccattgtg 1080
gaagattccc tactgctgcc tcccgtagga gtatggaccg tgtctcagtt ccattgtggc 1140
cgatcagtct ctcaactcgg ctatgcatca tcgccttggt aagccgttac cttaccaact 1200
agctaatgca ccgcaggtcc atcccagagt gatagccaaa gccatctttc aaacaaaagc 1260
catgtggctt ttgttgttat gcggtattag catctgtttc caaatgttat cccccgctcc 1320
ggggcaggtt acctacgtgt tactcacccg tccgccactc actggtgatc catcgtcaat 1380
caggtgcaag caccatcaat cagttgggcc agtgcgtacg ac 1422

Claims (7)

1.一种微生态制剂，其特征在于，所述微生态制剂由罗伊氏乳杆菌CGMCCNO.19491，红法夫酵母菌CICC NO.33064，姜黄生粉制成；
将所述罗伊氏乳杆菌冻干粉、所述红法夫酵母冻干粉与所述姜黄生粉混合均匀后，少量多次地加入载体至1000g，调整水分至10％以下制成；
所述载体选自沸石粉、石粉、玉米芯粉或其它蛋鸡预混合饲料载体；
所述罗伊氏乳杆菌的活菌数为5×1012～5×1014cfu/kg，所述红法夫酵母菌的活菌数为5×1011～5×1013cfu/kg，所述姜黄生粉的含量为350～550g/kg。
2.根据权利要求1所述的微生态制剂，其特征在于，所述罗伊氏乳杆菌的活菌数为5×1013cfu/kg，所述红法夫酵母菌的活菌数为5×1012cfu/kg，所述姜黄生粉的含量为450g/kg。
3.权利要求1或2所述的微生态制剂在改善鸡蛋品质中的应用。
4.权利要求1或2所述的微生态制剂在改善鸡蛋蛋黄胆固醇、蛋白高度、哈氏单位、蛋黄颜色、延长保质期中的应用。
5.一种含有权利要求1或2所述的微生态制剂的饲粮。
6.根据权利要求5所述的饲粮，其特征在于，饲粮中所述微生态制剂的添加量为0.05％～0.5％。
7.根据权利要求6所述的饲粮，其特征在于，饲粮中所述微生态制剂的添加量为0.3％～0.5％。
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