CN114885870B - 一种澳洲管体星虫的催产方法 - Google Patents
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Abstract
本申请提供了一种澳洲管体星虫的催产方法,所述方法包括:对采集获得的天然星虫进行性成熟度检查,获取满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫;对所述雌性亲虫和雄性亲虫依次进行阴干刺激、降温刺激、升温及臭氧刺激,获得刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫;对所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵。应用本方法,提高了澳洲管体星虫催产的产卵量,提高排卵速度,使催产效果趋于稳定可控,提高了澳洲管体星虫的催产效果,为后期的大规模苗种培育提供了保证,切实推进了澳洲管体星虫资源的开发和利用。
Description
技术领域
本申请涉及海洋生物繁育技术领域,尤其涉及一种澳洲管体星虫的催产方法。
背景技术
星虫,俗称沙虫,肉质鲜美脆嫩,营养丰富,血液可入汤,性寒,有滋阴降火、清肺补虚的功效。星虫隶属星虫动物门(Sipuncula),包括方格星虫纲(Sipunculidea Hatschek,1883)和革囊星虫纲(Phascolosomatidea Cutler et Gibbs, 1985)。在我国沿海方格星虫和可口革囊星虫最为常见,食用价值高,也是我国红树林区或者泥沙质滩涂中的底栖经济动物。澳洲管体星虫(Siphonosoma australe)是海南当地极具特色的新沙虫资源。
澳洲管体星虫(Siphonosoma australe Keferstein, 1865) 隶属方格星虫纲(Sipunculidea Haschek, 1883)、方格星虫目(Sipunculiformes Cutler et Gibbs,1985)、方格星虫科(Sipunculidae Rafinesque, 1814)、管体星虫属(SiphonosomaSpengel, 1912),一般分布在热带及亚热带海域,多栖息于海湾或泥砂底,穴深50cm以上,潮间带至水深600m,主要分布于海南三亚至文昌海域。由于澳洲管体星虫资源保护及开发的相关技术支持不足,其获得方式均为野生采集,资源量严重下降。着力开展澳洲管体星虫的种质资源与生殖繁育研究变得尤为重要。
目前澳洲管体星虫国内外人工增养殖尚未开展,人工繁育技术属于空白,星虫的年生殖周期表明其产卵高峰时间只有近2个月,工厂化大规模的人工催产时间并不长,所以从产业角度讲如何延长其高峰期,有利于这个产业的稳定发展。
目前光裸方格星虫已经实现规模化的人工繁育,而室内人工繁育的技术基础首先要实现规模化催产以获得足量的受精卵。但存在方格星虫人工育苗成本较高,效果很不稳定,很大程度与方格星虫亲体的人工催产效果差,亲虫死亡率高,产卵质量参差不齐有关问题。
可口革囊星虫人工催产技术验证在催产后,可放入水泥池中自然产卵,也可采用取肾管中的卵细胞和精细胞进行体外受精的方法获得受精卵。但采集肾管中卵细胞和精细胞一般获得的受精卵数量极少,并不适合大规模生产,且导致亲虫直接死亡,而无法再次进行育肥和二次催产。
目前已经报道的星虫亲虫培育饵料,主要有底栖硅藻,有机碎屑,螺旋藻粉、鳗鱼粉,干贝粉。其中天然活的底栖硅藻生长慢,产量不大,大规模工厂化培育亲虫所需量大,往往厂家没有较大的空间用于底栖硅藻的培育。且根据研究,上述配方虽然可保持精细胞数量8月份后性细胞成熟度的衰减水平慢于野外群体,来年5月份时可达自然月份性细胞成熟水平时一半;但卵细胞数量比自然环境中的衰减速度快,5月份卵细胞成熟水平远低于野外自然成熟水平,无法保持体腔液中的较高密度在繁殖季节进行育苗。
结合光裸方格星虫和可口革囊星虫以及星虫亲虫培育饵料的研究可知,目前星虫的催产效果均存在产卵持续期短,产后亲虫死亡率高等问题。
发明内容
本申请提供了一种澳洲管体星虫的催产方法,以至少解决现有技术中存在的以上技术问题。
根据本申请实施例的第一方面,提供了一种澳洲管体星虫的催产方法,所述方法包括:对采集获得的天然星虫进行性成熟度检查,确定满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫;对所述雌性亲虫和雄性亲虫依次进行阴干刺激、降温刺激、升温及臭氧刺激,获得刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫;对所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵。
在一可实施方式中,所述对采集获得的星虫进行性成熟度检查,获取满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫,包括:提取所述天然星虫的体腔液,根据体腔液中的成熟性细胞数量确定所述星虫的性成熟度;根据所述星虫的性成熟度确定满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫。
在一可实施方式中,所述确定满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫,包括:确定所述雌性亲虫体腔液中卵径超过100μm的卵细胞含量;当所述卵径100μm的卵细胞含量超过全部卵细胞含量的30%情况下(即约达到6×104个∙mL-1 左右),将所述天然星虫中的雌性星虫确定为满足性成熟度指标的雌性亲虫;确定所述雄性亲虫体腔液中直径超过50μm的精细胞团含量;当所述直径50μm的精细胞团含量超过全部精细胞团含量的30%的情况下(约1.8 ×105个∙mL-1),将所述天然星虫中的雄性星虫确定为满足性成熟度指标的雄性亲虫。
在一可实施方式中,所述对所述雌性亲虫和雄性亲虫进行阴干刺激,包括:将所述雌性亲虫和雄性亲虫平摊至网帘上, 设置在室内通风处,28-30℃阴干2-4小时。
在一可实施方式中,所述对所述雌性亲虫和雄性亲虫进行降温刺激,包括:在降温刺激装置内设置沙层和低温海水层,其中,所述低温海水层为经沉淀、沙滤处理后的自然海水,所述海水的温度设置为22-24 ℃,盐度设置为28,pH设置为 8-8.3;将阴干刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫移动至所述降温刺激装置中,降温刺激2-3小时,其中,降温刺激装置内的亲虫密度设置为40-60条/ m³。
在一可实施方式中,所述对所述雌性亲虫和雄性亲虫进行升温及臭氧刺激,包括:在臭氧刺激装置内设置升温海水层,所述升温海水层的海水温度设置为28-31 ℃,在所述升温海水层内设置臭氧发生器和曝气装置,通过所述臭氧发生器和曝气装置对所述升温海水层进行紫外处理和臭氧曝气处理,至所述升温海水层的海水中臭氧浓度控制在0.2-0.4mg/L;将降温刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫移动至所述臭氧刺激装置中,臭氧刺激30-40min;期间,通过臭氧发生器和曝气装置控制所述升温海水层的海水中臭氧浓度在0.2-0.4mg/L之间。
在一可实施方式中,所述对所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵,包括:设置流水刺激装置,所述流水刺激装置底部依次铺设有支架、目筛绢和细沙层,所述细沙层上方设置有25-35cm的海水层,所述流水刺激装置还设置有进水口和排水口,所述进水口及排水口设置有目筛绢;将所述升温及臭氧刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至流水刺激装置,通过进水口进水和排水口排水实现对雌性亲虫和雄性亲虫的流水刺激;根据预设时间间隔通过排水口进行受精卵收集,若收集到受精卵,将所述流水刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置,催产孵化装置一般采用体积为1-2m3的孵化桶。
在一可实施方式中,所述对所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵,包括:设置催产孵化装置,在催产孵化装置中设置海水和曝气装置,控制海水温度为28-31℃,将所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置中,每隔设定时间,通过目绢在催产孵化装置中进行收集,获得受精卵。
在一可实施方式中,所述方法还包括:对星虫进行培育,根据星虫的体重对星虫投喂星虫培育液;其中,所述星虫培育液包括干饲料、发酵液、活菌液;星虫投饵量为每一克星虫日投喂0.005-0.015g干饲料;其中,所述干饲料包括螺旋藻、虾片、鳗鱼粉、冻干粉海洋小球藻和冻干粉海洋红酵母;所述发酵液包括乳酸菌粉;所述活菌液包括光合细菌液、EM菌液。
在一可实施方式中,所述星虫培育液的制备方法包括:将螺旋藻2-4g、虾片2-4g、鳗鱼粉1-3g加入80-120mL水中,混合均匀,获得混合溶液;向混合溶液中加入0.2-0.4g乳酸菌粉,混合均匀,获得饲料发酵液;将80-120mL饲料发酵液、80-120mL光合细菌液、80-120mLEM菌液、0.5-1.5g海洋小球藻粉和0.5-1.5g海洋红酵母混合均匀,获得星虫培育液。
本申请提供的澳洲管体星虫的催产方法,从采集到的天然星虫中挑选满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫,再依次通过阴干、降温刺激、流水刺激和升温及臭氧刺激,提高了澳洲管体星虫催产的产卵量,提高排卵速度,使催产效果趋于稳定可控,提高了澳洲管体星虫的催产效果,为后期的大规模苗种培育提供了保证,切实推进了澳洲管体星虫资源的开发和利用。
应当理解,本部分所描述的内容并非旨在标识本申请的实施例的关键或重要特征,也不用于限制本申请的范围。本申请的其它特征将通过以下的说明书而变得容易理解。
附图说明
通过参考附图阅读下文的详细描述,本申请示例性实施方式的上述以及其他目的、特征和优点将变得易于理解。在附图中,以示例性而非限制性的方式示出了本申请的若干实施方式,其中:
在附图中,相同或对应的标号表示相同或对应的部分。
图1示出了本申请实施例一种澳洲管体星虫的催产方法的实现流程示意图;
图2示出了本申请实施例一种澳洲管体星虫的催产方法的雌性亲虫卵细胞示意图;
图3示出了本申请实施例一种澳洲管体星虫的催产方法的雄性亲虫精细胞团示意图;
图4示出了本申请实施例一种澳洲管体星虫的催产方法的受精卵发育示意图。
具体实施方式
为使本申请的目的、特征、优点能够更加的明显和易懂,下面将结合本申请实施例中的附图,对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例,而非全部实施例。基于本申请中的实施例,本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本申请保护的范围。
图1示出了本申请实施例一种澳洲管体星虫的催产方法的实现流程示意图。
参见图1,根据本申请实施例的第一方面,提供了一种澳洲管体星虫的催产方法,方法包括:首先,对采集获得的天然星虫进行性成熟度检查,确定满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫;然后,对雌性亲虫和雄性亲虫依次进行阴干刺激、降温刺激、升温及臭氧刺激,获得刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫;再后,对刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵。
本申请提供的澳洲管体星虫的催产方法,从采集到的天然星虫中挑选满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫,再依次通过阴干、降温刺激、流水刺激和升温及臭氧刺激,提高了澳洲管体星虫催产的产卵量,提高排卵速度,使催产效果趋于稳定可控,提高了澳洲管体星虫的催产效果,为后期的大规模苗种培育提供了保证,切实推进了澳洲管体星虫资源的开发和利用。
在本方法操作101中,天然星虫可以从天然海区中采集,具体的根据星虫的特性,大多数星虫的天然繁育期基本都在春末夏初,此时水温较高。具体的,本方法可以通过星虫的天然繁育期确定对天然星虫的采集时间。例如,根据观察实验结果表明,海南文昌海域的澳洲管体星虫的繁殖期为4月至8月,其中5月至7月是繁殖高峰期,这段时间内成熟期卵细胞在体腔中维持较高的密度,进而可以确定最有利于催产的时间是5月下旬到7月上旬。即可以在5月至6月在海南文昌的天然海域对澳洲管体星虫进行采集,获得天然星虫。本方法在采集天然星虫时,可以根据星虫的外表进行预筛选,具体的,可以选择体重位于20-50g之间的星虫。将采集获得的星虫放入运输容器中,采用干法运输将其运输至指定催产地点,具体的,可以使用细沙覆盖在星虫表面,常温条件下运输至实验室,在运输过程中,控制运输时间不超过2h,运输时运输容器内的温度保持在26-28℃之间,以降低星虫在运输过程中的死亡率。
在实验室中对采集获得的天然星虫进行性成熟度检查,其中,雌性星虫的性成熟度可以通过雌虫卵细胞的直径进行评估,例如,根据本领域的常识,当雌虫卵细胞的直径超过100μm或110μm的情况下,可以认为雌性星虫的性成熟度满足性成熟度指标,雌性星虫进入了性成熟期;当雄性星虫的生殖细胞的细胞团直径超过45μm或50μm且细胞团数量较多的情况下,可以认为雄性星虫的性成熟度满足性成熟度指标,雄性星虫进入了性成熟。满足性成熟度指标的雌性星虫和雄性星虫可以作为用于进行催产的雌性亲虫和雄性亲虫。
在本方法操作102中,催产效果除了排卵量高和排卵速度外,受精率也是需要考虑的因素,亲虫从催产到开始排放精卵所需的时间越短,排放率越高,催产效果越好。通过对雌性亲虫和雄性亲虫依次进行阴干刺激、降温刺激、升温及臭氧刺激方式进行催产,能够使雌性亲虫的排放速度较快,受精率也较高。
在本方法操作103中,将刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置中,以使雌性亲虫和雄性亲虫在催产孵化装置中进行排卵,对受精卵进行收集,以完成对澳洲管体星虫的催产。本方法适用于对澳洲管体星虫进行工厂化大规模的催产。
需要补充的是,据研究星虫的年生殖周期的产卵高峰时间只有近2个月,因此,工厂化大规模的人工催产时间较短,且每一轮用于催产的亲虫总数量和总重量较大,通常每批次催产需要同时对几十至几百公斤的星虫进行催产,通常,每一公斤星虫的数量为20-50条, 故需要的星虫数量大。
在一可实施方式中,操作101,对采集获得的星虫进行性成熟度检查,获取满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫,包括:提取天然星虫的体腔液,根据体腔液中的成熟性细胞数量确定星虫的性成熟度;根据星虫的性成熟度确定满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫。
具体的,本方法对每批次采集回来的星虫,先随机挑选10 -20条进行解剖,或挑选每批次总重量的0.1-1%对应的星虫进行解剖,以确定挑选的星虫的雌雄比例和体腔液中的性细胞成熟度。若性细胞成熟度满足要求,且雌雄比例在1:0.5-1.5之间,可以认为该批次采集回来的星虫已经进入性成熟期,且成熟度同步。具体的,本方法可以通过雌性亲虫的卵细胞和雄性亲虫的精细胞团的细胞尺寸和/或细胞数量确定天然星虫的性成熟度。
在一可实施方式中,根据星虫的性成熟度确定满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫,包括:确定体腔液中卵径超过100μm的卵细胞含量;当卵径100μm的卵细胞含量超过全部卵细胞含量的30%情况下(即约达到6×104个∙mL-1 左右),将天然星虫中的雌性星虫确定为满足性成熟度指标的雌性亲虫;确定体腔液中直径超过50μm的精细胞团含量;当直径超过50μm的精细胞团含量超过全部精细胞团含量30%的情况下(约1.8 ×105个∙mL-1),将天然星虫中的雄性星虫确定为满足性成熟度指标的雄性亲虫。
具体的,以测定卵细胞为例,通过计数法确定雌性星虫的体腔液中卵细胞数量,根据卵细胞数量确定雌性星虫的性成熟度,包括:首先,提取雌性星虫的体腔液,按照设定比例通过无菌海水对雌性星虫的体腔液进行稀释,获得体腔稀释液;然后,在计数过程中,可以将卵细胞按直径分为以下三种尺寸范围,分别为“30-60μm”、“60-100μm”、“>100μm”,确定体腔稀释液中卵细胞直径和卵细胞数量;再后,根据卵细胞直径、卵细胞数量和设定比例确定体腔液中卵径>100μm的卵细胞含量;之后,当卵径>100μm的卵细胞数量超过全部卵细胞数量的30%的情况下,即达到约6×104个∙mL-1,将天然星虫中的雌性星虫确定为雌性亲虫。
图2示出了本申请实施例一种澳洲管体星虫的催产方法的雌性亲虫卵细胞示意图;图3示出了本申请实施例一种澳洲管体星虫的催产方法的雄性亲虫精细胞团示意图。
参见图2和图3,在雌性星虫进入性成熟期的情况下,雌性星虫的卵细胞直径可以超过100μm,甚至超过110μm,本方法可以对卵细胞直径进行测量,并通过计数法计算体腔液中卵细胞数量,根据卵细胞直径和卵细胞数量确定雌性星虫的性成熟度。
在雄性星虫进入性成熟期的情况下,雄性星虫的精细胞团直径达到50μm左右且数量多。本方法可以通过对雄性星虫的精细胞团直径进行测量,直径超过50μm的精细胞团含量超过全部精细胞团含量30%的情况下(约1.8 ×105个∙mL-1),确定为天然星虫中的雄性星虫已经进入性成熟期,可以用于催产。
在一可实施方式中,操作102,对雌性亲虫和雄性亲虫进行阴干刺激,包括:将雌性亲虫和雄性亲虫平摊至网帘上, 设置在室内通风处,28-30℃阴干2-4小时。
阴干刺激的具体操作为,将满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫摊于网帘上,置室内通风处阴干2-4小时,进一步控制在3小时,控制室温在28-30℃范围内。
在一可实施方式中,操作102,对雌性亲虫和雄性亲虫进行降温刺激,包括:首先,在降温刺激装置内设置沙层和低温海水层,其中,低温海水层为经沉淀、沙滤处理后的自然海水,海水的温度设置为22-24 ℃,盐度设置为28,pH设置为 8-8.3;然后,将阴干刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫移动至降温刺激装置中,降温刺激2-3小时,其中,降温刺激装置内的亲虫密度设置为40-60条/ m³。
降温刺激的具体操作为:选择尺寸为1m³的水产养殖孵化桶作为降温刺激装置,在水产养殖孵化桶底部铺沙形成沙层;其中,沙层厚度为5-10cm和海水深度为50-70cm。再往水产养殖孵化桶内注入海水,海水为经沉淀、沙滤处理后的自然海水;再往水产养殖孵化桶内加入冰块,使海水降至水温22-24 ℃,控制盐度为28,pH为 8-8.3;将阴干后的亲虫放入水产养殖孵化桶进行降温刺激,保持2h, 每桶可放入40-60条,进一步可以选择为每桶放50条。
在一可实施方式中,操作102,对雌性亲虫和雄性亲虫进行升温及臭氧刺激,包括:在臭氧刺激装置内设置升温海水层,升温海水层的海水温度设置为28-31 ℃,在升温海水层内设置臭氧发生器和曝气装置,通过臭氧发生器和曝气装置对升温海水层进行紫外处理和臭氧曝气处理,至升温海水层的海水中臭氧浓度控制在0.2-0.4mg/L;将降温刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫移动至臭氧刺激装置中,臭氧刺激30-40min;期间,通过臭氧发生器和曝气装置控制升温海水层的海水中臭氧浓度在0.2-0.4mg/L之间。
升温及臭氧刺激的具体操作为:
首先进行升温及臭氧准备:选择尺寸为1m³的水产养殖孵化桶作为臭氧刺激装置,在桶内注入海水,控制海水温度在28-31℃之间,若温度过低,可以采用加热棒加热,若温度过高,可以加入冰块降温。将沉没式紫外灯管水浸入海水中,照射30min,以产生臭氧。
然后进行臭氧检查:开启曝气装置,若能够闻到淡淡的臭氧味,则此时臭氧条件已准备就绪,用臭氧仪测定臭氧浓度为0.2-0.4mg/L,若满足该浓度,关闭紫外灯管,完成臭氧检查,若不满足该浓度,启动紫外灯管继续照射,直至臭氧浓度为0.2-0.4mg/L。
之后进行升温及臭氧刺激:开启人工曝气,将降温刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫放入完成臭氧检查的水产养殖孵化桶,每隔10分钟,可采用臭氧发生盘进行臭氧补充,以将臭氧浓度控制在0.2-0.4mg/L。30-40分钟后,完成对雌性亲虫和雄性亲虫的升温及臭氧刺激,可将雌性亲虫和雄性亲虫捞出,以进行进一步催产。
具体的,进一步催产可以是放入水泥池进行流水刺激,也可以直接转移至催产孵化装置中,进行受精卵的收集。
在一可实施方式中,操作103,对刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵,包括:首先,设置催产孵化装置,在催产孵化装置中设置海水和曝气装置,控制海水温度为28-31℃,将刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置中,每隔设定时间,通过目绢在催产孵化装置中进行收集,获得受精卵。
在一可实施方式中,操作103,对刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫继续进行流水刺激催产,收集受精卵,包括:首先,设置流水刺激装置,流水刺激装置底部依次铺设有支架、目筛绢和细沙层。先在水泥池底部10cm处先铺支撑架并覆盖100目筛绢;然后,在100目筛绢上铺设5-10cm的细沙层,如此操作,水泥池的底层可完全底排水。细沙层5-10cm厚,细沙层上方设置有25-35cm的海水层。流水刺激装置还设置有进水口和排水口,进水口及排水口设置有目筛绢,在进水口及排水口处套上300目筛绢,以避免受精卵从进水口或出水口排出,其中,注水可以注入经沉淀、沙滤处理后的自然海水。然后,将升温及臭氧刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至流水刺激装置,通过进水口进水和排水口排水实现对雌性亲虫和雄性亲虫的流水刺激;再后,根据预设时间间隔通过排水口进行受精卵收集,若收集到受精卵,将流水刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置。具体的可以每隔1h,收集排放的卵,并对其进行镜检。如果当晚3点前未排卵,可关闭进排水的水阀,次日上午9点到11点,再放水收集受精卵,次日下午5点-6点可再收集一次,以基本达到催产效果。即,本方法的流水刺激可以为多次流水刺激,从而收集较多的受精卵。
在一可实施方式中,在另一种实施场景下,操作103,将刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置中,以使雌性亲虫和雄性亲虫在催产孵化装置中进行排卵,获得受精卵,包括:在催产孵化装置中设置海水和曝气装置,控制海水温度为28-31℃,将刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置中,每隔设定时间,通过目绢在催产孵化装置中进行收集,获得受精卵。
在另一种实施场景中,可以在催产孵化装置中进行催产,在刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置中,以使雌性亲虫和雄性亲虫在催产孵化装置中受精并进行自然产卵,催产孵化装置同样可以选为孵化桶,在孵化桶内设置曝气装置进行曝气,并保持孵化桶内的水温在28-31℃之间。每隔一段时间,如每隔1-2h,用300目筛绢对孵化桶内的受精卵进行收集,经过在2-5次的收集后,可收集到大量的受精卵。图4示出了本申请实施例一种澳洲管体星虫的催产方法的受精卵发育示意图。参见图4,收集获得受精卵后,可对受精卵进行培育。图中,A对应为受精卵,B对应为囊胚期, C对应为原肠胚后期(类似于担轮幼体期),D对应为胚胎卵膜内发育的幼虫形成,E对应为破膜前幼虫,F对应为破膜后发育的幼虫。
在一可实施方式中,方法还包括:对星虫亲虫进行培育,根据星虫的体重对星虫投喂星虫培育液;其中,星虫培育液包括饲料发酵液、活菌液和干饲料;其中,星虫投饵量为每一克星虫日投喂约0.01g干饲料;其中,干饲料包括螺旋藻、虾片、鳗鱼粉、冻干粉海洋小球藻和冻干粉海洋红酵母;发酵液包括乳酸菌粉;活菌液包括光合细菌液、EM菌液。
在一种实施场景中,收集获得的天然星虫无法直接进行催产,需要先进行人工育肥,以满足催产条件。或者,已经完成一次或多次催产的星虫需要进行人工育肥后,使其再次满足催产条件。
具体的,针对澳洲管体星虫的人工育肥方法,包括以下步骤:
设置亲虫育肥池:搭建面积不限的水泥池,在水泥池底部铺5-10cm厚的细沙层,向水泥池注入海水至水深30cm,进水口及排水口处套上300目筛绢;水泥池底部还可以在底部10cm处设置先铺支撑架并覆盖100目筛绢,然后在100目筛绢上铺5-10cm的细沙层,底层可完全底排水。水深50cm,投放密度为按10-15条/m³放入星虫。
星虫在培育池中进行培育时,根据培育池内星虫的体重计算星虫培育液的投饵量,具体计算公式为:星虫克重×0.01g,求得每天所需的干饲料的投入量,然后根据星虫培育液中干饲料的含量求得每日所需的星虫培育液的投饵量。
具体的,若水泥池中有100条星虫,星虫平均重约20克。干饲料的投入量为20克/天。进一步的,星虫培育液可以一天投喂两次。
在培育过程中,水泥池每天定时把底排水打开,排至只有水深10cm时,投喂饲料混合液,保持3小时后,开始加水至50cm。每天投喂饲料前,进水口及排水口同时打开,使水保持流动1h,以保持底质及水质干净。
在培育过程中,还需要定期对星虫进行成熟度检查:成熟度检查的方法同本方法操作101,以下不做赘述。具体的,可以设置为每半个月进行一次解剖观察,以评估饲料育肥效果。
在一种实施情况下,干饲料配比为:3g螺旋藻:3g虾片:2g鳗鱼粉:1g海洋小球藻粉:1g 海洋红酵母。其中,虾片可以为进口虾片。
具体的,星虫培育液制备方法如下:
首先,制作饲料发酵液,先将3g螺旋藻:3g虾片:2g鳗鱼粉放入100毫升水中,加入0.3克乳酸菌粉,混匀后室温发酵1天,放入冰箱进行存储。
然后,当需要使用时,每次按100mL饲料发酵液:100mL光合细菌液:100mL EM菌液:1g海洋小球藻粉:1g海洋红酵母的比例进行混合,投喂给100条星虫。一天需投喂2次。
其中,乳酸菌粉、光合细菌液达到200万个/mL,EM菌液为80亿个/mL,可通过市售购买获得。小球藻粉和红酵母均为真空干燥后的活体细胞,在混合前,先用海水溶解开,再与发酵饲料液与活菌液混合,获得饲料混合液。红酵母具体为红发夫酵母。
通过育肥处理,无需进行天然星虫的收集,有利于延长产卵期,且有利于进行多次的催产及收集,进而有利于产业的稳定发展。
为方便上述实施方式的进一步理解,以下提供若干实施例进行说明。
实施例1:
在2021年6月-7月,对海南文昌野生的澳洲管体星虫进行采集,获得亲体进行人工催产,持续15日,具体过程如下:
a.星虫的采集:于2021年6月至7月上旬,在海南文昌东阁镇采集体重在20-50g范围内的星虫,使用干燥的细沙将星虫表面覆盖,常温条件下运输至实验室,运输时间为2h,运输时温度为26-28℃。
b.成熟度检查:每批次采集回来的星虫,先挑选10条进行解剖,检查其雌雄的比例和体腔液中的性细胞成熟度。检查结果为:天然亲虫雌雄比为1:1,且性成熟度同步。
其中,性成熟度通过以下方法确定:为取体腔液100µL,用无菌海水稀释20倍,再从中取10µL稀释液放入凹玻片或者浮游生物计数框中,进行卵细胞直径测量和计数。卵细胞按直径分为30-60μm,60-100μm,>100μm三个尺寸,每种尺寸分别进行计数,将各尺寸相应卵径范围的卵细胞数取均值后,计算每ml体腔液中卵细胞密度,当确定为体腔液中成熟卵细胞直径>100μm,且占全部卵细胞30%以上的情况下,即达到6×104个∙mL-1,可进行下面的人工催产。
c.阴干刺激:将可以进行催产的星虫摊于网帘上,置室内通风处阴干3小时左右,室温控制在在28-30℃。
d.降温刺激:选取1m³的水产养殖孵化桶,在桶底铺沙,注入海水,海水为经沉淀、沙滤处理后的自然海水,加入冰块,使海水降至水温22-24℃,盐度降为28,pH8-8.3。将阴干刺激后的星虫放入水产养殖孵化桶进行降温刺激,保持2h,每桶可放入50条。
e.升温及臭氧准备:选取1m³的水产养殖孵化桶,无需铺沙,向桶内注入自然海水,海水温度控制在28-31℃之间。同时采用沉没式紫外灯管水内照射30min,以产生臭氧。
臭氧检查:紫外灯管水内照射30min后开启人工曝气,若闻到淡淡的臭氧味,可关闭紫外灯管,用臭氧仪测定臭氧浓度是否满足0.2-0.4mg/L,若满足,则进行升温及臭氧刺激,若不满足,继续通过沉没式紫外灯管水内照射以产生臭氧。
f.升温及臭氧刺激:开启人工曝气,将星虫放入水产养殖孵化桶内,每隔10分钟,可采用臭氧发生盘进行臭氧补充。30-40min后,将星虫捞起,放入水泥池进行进一步催产。
g.水泥池构造与建设:水泥池横截面为6㎡,底部铺细沙5-10cm,注水至水深30cm,进水口及排水口处套上300目筛绢,投放密度为按12-15条/㎡放入星虫。
h.流水刺激:升温及臭氧刺激后的星虫放入水泥池后进行流水刺激。流水刺激时进水口及排水口同时打开,每1h镜检一次收集排放的卵,如果当晚3点前未排卵,可关闭进排水的水阀,次日上午上午9点到11点,再放水收集受精卵,次日下午5点-6点可再收集一次,陆续共收集了3万枚受精卵,用于孵化。
应用上述方法,用于催产的星虫亲体的死亡率低,仅为3%,且经过人工饵料培育强化,还可多次产卵。
实施例2:
2021年6月-7月,对海南文昌野生群体采集亲体进行人工催产,持续15日,具体实施步骤包括降温,自然温+臭氧,孵化桶自然温产卵:
a.星虫的采集:于2021年6月至7月上旬,在海南文昌东阁镇采集体重在20-50g范围内的星虫,使用干燥的细沙将星虫表面覆盖,常温条件下运输至实验室,运输时间为2h,运输时温度为26-28℃。
b.成熟度检查:每批次采集回来的星虫,先挑选10条进行解剖,检查其雌雄的比例和体腔液中的性细胞成熟度。检查结果为:天然亲虫雌雄比为1:1,且性成熟度同步。
其中,性成熟度通过以下方法确定:为取体腔液100µL,用无菌海水稀释20倍,再从中取10µL稀释液放入凹玻片或者浮游生物计数框中,进行卵细胞直径测量和计数。卵细胞按直径分为30-60μm,60-100μm,>100μm三个尺寸,每种尺寸分别进行计数,将各尺寸相应卵径范围的卵细胞数取均值后,计算每ml体腔液中卵细胞密度,当确定为体腔液中成熟卵细胞直径>100μm,且占全部卵细胞30%以上的情况下,即达到6×104个∙mL-1,可进行下面的人工催产。
c.阴干刺激:将可以进行催产的星虫摊于网帘上,置室内通风处阴干3小时左右,室温控制在在28-30℃。
d.降温刺激:选取1m³的水产养殖孵化桶,在桶底铺沙,注入海水,海水为经沉淀、沙滤处理后的自然海水,加入冰块,使海水降至水温22-24℃,盐度降为28,pH8-8.3。将阴干刺激后的星虫放入水产养殖孵化桶进行降温刺激,保持2h,每桶可放入50条。
e.升温及臭氧准备:选取1m³的水产养殖孵化桶,无需铺沙,向桶内注入自然海水,海水温度控制在28-31℃之间。同时采用沉没式紫外灯管水内照射30min,以产生臭氧。
臭氧检查:紫外灯管水内照射30min后开启人工曝气,若闻到淡淡的臭氧味,可关闭紫外灯管,用臭氧仪测定臭氧浓度是否满足0.2-0.4mg/L,若满足,则进行升温及臭氧刺激,若不满足,继续通过沉没式紫外灯管水内照射以产生臭氧。
f.升温及臭氧刺激:开启人工曝气,将星虫放入水产养殖孵化桶内,每隔10分钟,可采用臭氧发生盘进行臭氧补充。30-40min后,将星虫捞起,放入孵化桶进行进一步催产。
g.孵化桶内自然产卵:将经过臭氧刺激过的星虫放入新的孵化桶,孵化桶条件设置为:人工曝气,保持水温28-31℃。每隔1h,用300目筛绢收集一次,投入密度为每1m³的桶内放入40尾星虫,在2-5个小时后,收集到约3000枚受精卵,可进行进一步的幼体培育。
实施例3:
a.亲虫的采集及育肥期:亲虫的来源分别于2021年5月下旬至7月上旬,在海南文昌东阁镇采集亲虫,使用干燥的细沙将星虫表面覆盖,常温条件下运输至实验室,一般运输时间为2h,运输时温度为26-28℃。体重20-50g/条。育肥周期为采集期至8月底。
b.亲虫育肥池:水泥池面积不限,铺细沙5-10cm厚,水深30cm,进水口及排水口处套上300目筛绢。水泥池最好在下方10cm处先铺支撑架并覆盖100目筛绢,然后再铺5-10cm的细砂(在100目筛绢上),底层可完全底排水。水深50cm,投放密度为按10-15条/m2放入星虫。
c.亲虫在培育池中进行培育时,每天的投饵量为:干饲料量按体重每克沙虫投喂量为0.01g/d。如果按100条计算,约20g/d.100条。干饲料配比为3g螺旋藻:3g虾片(进口):2g鳗鱼粉:1g海洋小球藻粉:1g海洋红酵母。首先制作饲料发酵液,先将3g螺旋藻:3g虾片(进口):2g鳗鱼粉放入100毫升水中后,加入0.3g乳酸菌粉,混匀,室温发酵1天后,放入冰箱。用时按100mL饲料发酵液:100mL光合细菌液(实验室培养或者其他厂家生产):100mLEM菌液:1g海洋小球藻粉:1g海洋红酵母,现用现混,投喂给100条星虫。一天投2次。本养殖实验所用乳酸菌粉、光合细菌液达到200万个/mL,EM菌液为80亿个/mL,均为山东宝来利来生物工程公司生产。小球藻粉和红酵母均为真空干燥后的活体细胞。故需要用前用海水溶解开,再与发酵饲料液与活菌液混合。
d.每天底排水打开,排至只有水深10cm时,投喂饲料混合液。保持3小时后,开始加水至50cm。每天下午投饵前,进水及出水同时打开,使水保持流动1h。此法可保持底质及水质干净。
e.定期成熟度检查:每批次采集回来的亲虫,先挑选10条进行解剖,检查其雌雄的比例和体腔液中的性细胞成熟度。一般天然亲虫雌雄比为1:1,且成熟度同步。进入性成熟期,雌虫卵细胞直径达到110μm。雄虫粗细胞团直径达到50μm左右且数量巨大,故一般只需计数体腔液中卵细胞数量为确定成熟度。具体方法为取体腔液100µL,用无菌海水稀释20倍。再从中取10µL稀释液放入凹玻片或者浮游生物计数框中,进行卵细胞直径测量和计数。卵细胞按直径分为30-60μm,60-100μm,>100μm分别进行计数,将各样品相应卵径范围的卵细胞数取均值后,计算每ml体腔液中卵细胞密度。一般每半个月进行一次解剖观察,以评估饲料育肥效果。
育肥效果:此配方可保持精细胞数量8月份后成熟度的衰减水平明显慢于野外群体;卵细胞数量比自然环境中的衰减速度慢,8月份卵细胞成熟水平高于野外自然成熟水平。
应该理解,可以使用上面所示的各种形式的流程,重新排序、增加或删除步骤。例如,本发公开中记载的各步骤可以并行地执行也可以顺序地执行也可以不同的次序执行,只要能够实现本申请公开的技术方案所期望的结果,本文在此不进行限制。
此外,术语“第一”、“第二”仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或隐含地包括至少一个该特征。在本申请的描述中,“多个”的含义是两个或两个以上,除非另有明确具体的限定。
以上所述,仅为本申请的具体实施方式,但本申请的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本申请揭露的技术范围内,可轻易想到变化或替换,都应涵盖在本申请的保护范围之内。因此,本申请的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (10)
1.一种澳洲管体星虫的催产方法,其特征在于,所述方法包括:
对采集获得的天然星虫进行性成熟度检查,确定满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫;
对所述雌性亲虫和雄性亲虫依次进行阴干刺激、降温刺激、升温及臭氧刺激,获得刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫;
对所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵;
所述确定满足性成熟度指标的雌性亲虫和雄性亲虫,包括:
确定所述雌性亲虫体腔液中卵径超过100μm的卵细胞含量;
当所述卵径超过100μm的卵细胞含量超过全部卵细胞含量的30%情况下,将所述天然星虫中的雌性星虫确定为满足性成熟度指标的雌性亲虫;
确定所述雄性亲虫体腔液中直径超过50μm的精细胞团含量;
当所述直径超过50μm的精细胞团含量超过全部精细胞团含量的30%的情况下,将所述天然星虫中的雄性星虫确定为满足性成熟度指标的雄性亲虫;
对所述雌性亲虫和雄性亲虫进行阴干刺激,包括:
将所述雌性亲虫和雄性亲虫平摊至网帘上, 设置在室内通风处,28-30℃阴干2-4小时;
对所述雌性亲虫和雄性亲虫进行降温刺激,包括:
在降温刺激装置内设置沙层和低温海水层,其中,所述低温海水层为经沉淀、沙滤处理后的自然海水,所述海水的温度设置为22-24 ℃,盐度设置为28,pH设置为 8-8.3;
将阴干刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫移动至所述降温刺激装置中,降温刺激2-3小时,其中,降温刺激装置内的亲虫密度设置为40-60条/ m³;
对所述雌性亲虫和雄性亲虫进行升温及臭氧刺激,包括:
在臭氧刺激装置内设置升温海水层,所述升温海水层的海水温度设置为28-31℃,在所述升温海水层内设置臭氧发生器和曝气装置,通过所述臭氧发生器和曝气装置对所述升温海水层进行紫外处理和臭氧曝气处理,至所述升温海水层的海水中臭氧浓度控制在0.2-0.4mg/L;
将降温刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫移动至所述臭氧刺激装置中,臭氧刺激30-40min;期间,通过臭氧发生器和曝气装置控制所述升温海水层的海水中臭氧浓度在0.2-0.4mg/L;
所述方法还包括:
对星虫进行培育,根据星虫的体重对星虫投喂星虫培育液;
其中,所述星虫培育液包括干饲料、发酵液、活菌液;星虫投饵量为每一克星虫日投喂0.005-0.015g干饲料;
其中,所述干饲料包括螺旋藻、虾片、鳗鱼粉、冻干粉海洋小球藻和冻干粉海洋红酵母;所述发酵液包括乳酸菌粉;所述活菌液包括光合细菌液、EM菌液;
所述星虫培育液的制备方法包括:
将螺旋藻2-4g、虾片2-4g、鳗鱼粉1-3g加入80-120mL水中,混合均匀,获得混合溶液;向混合溶液中加入0.2-0.4g乳酸菌粉,混合均匀,获得饲料发酵液;
将80-120mL饲料发酵液、80-120mL光合细菌液、80-120mL EM菌液、0.5-1.5g冻干粉海洋小球藻和0.5-1.5g冻干粉海洋红酵母混合均匀,获得星虫培育液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,对所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵,包括:
设置流水刺激装置,所述流水刺激装置底部依次铺设有支架、筛绢和细沙层,所述细沙层上方设置有25-35cm的海水层,所述流水刺激装置还设置有进水口和排水口,所述进水口及排水口设置有筛绢;
将所述升温及臭氧刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至流水刺激装置,通过进水口进水和排水口排水实现对雌性亲虫和雄性亲虫的流水刺激;
根据预设时间间隔,在排水口进行受精卵收集。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,对所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫进行催产,收集受精卵,包括:
设置催产孵化装置,在催产孵化装置中设置海水和曝气装置,控制海水温度为28-31℃,将所述刺激后的雌性亲虫和雄性亲虫转移至催产孵化装置中,每隔设定时间,通过筛绢在催产孵化装置中进行收集,获得受精卵。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在对采集获得的天然星虫进行性成熟度检查之前,所述方法还包括:
在天然海域对澳洲管体星虫进行采集,选择体重位于20-50g之间的星虫,放入运输容器中,采用干法运输将其运输至指定催产地点;
其中,在运输过程中,控制运输时间不超过2h,运输时运输容器内的温度保持在26-28℃。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,对采集获得的天然星虫进行性成熟度检查,包括:
随机挑选10 -20条进行解剖或挑选每批次总重量的0.1-1%对应的星虫进行解剖,以确定挑选的星虫的雌雄比例和体腔液中的性细胞成熟度。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,确定满足性成熟度指标的雌性亲虫,包括:
提取雌性星虫的体腔液,通过无菌海水对雌性星虫的体腔液进行稀释,获得体腔稀释液;
通过计数法确定雌性星虫的体腔液中卵细胞数量,根据卵细胞数量确定雌性星虫的性成熟度。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,对星虫进行培育,包括:
搭建水泥池,在水泥池底部铺5-10cm厚的细沙层,向水泥池注入海水至水深30cm,进水口及排水口处套上300目筛绢;水泥池还在底部10cm处设置支撑架并覆盖100目筛绢,100目筛绢上还铺设5-10cm的细沙层,投放密度为按10-15条/m³放入星虫进行培育。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述星虫培育液的制备方法具体为:
制作饲料发酵液,先将3g螺旋藻:3g虾片:2g鳗鱼粉放入100毫升水中,加入0.3g乳酸菌粉,混匀后室温发酵1天,放入冰箱;
当需要使用时,每次按100mL饲料发酵液:100mL光合细菌液:100mL EM菌液:1g冻干粉海洋小球藻:1g冻干粉海洋红酵母的比例进行混合。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述冻干粉海洋小球藻和冻干粉海洋红酵母均为真空干燥后的活体细胞。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述方法还包括:
星虫培育液一天投喂两次。
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