CN114867748A

CN114867748A - 结合胸腺基质淋巴细胞生成素(tslp)的抗体的干粉制剂及其使用方法

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Publication number: CN114867748A
Application number: CN202080086052.9A
Authority: CN
Inventors: C·E·C·亨廷顿; S·霍; P·马尼克瓦; R·W·科尔贝克; E·S·科恩; S·加兹维尼; D·莱丘加巴列斯托罗斯; K·B·汉森; D·J·德萨
Original assignee: MedImmune Ltd
Current assignee: MedImmune Ltd
Priority date: 2019-10-28
Filing date: 2020-10-27
Publication date: 2022-08-05
Also published as: JP2022554249A; TW202131947A; AU2020376222A1; US20210121406A1; US20230201120A1; MX2022005083A; CA3154999A1; AR120309A1; US11904053B2; IL292437A; CO2022005391A2; KR20220088752A; BR112022008031A2; EP4051708A1; WO2021083908A1; CR20220189A

Abstract

本发明技术总体上涉及对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)具有特异性的抗体的干粉制剂，以及使用所述干粉制剂适当地经由肺递送来治疗哮喘的方法。

Description

结合胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的抗体的干粉制剂及其使用方法

发明领域

本发明技术总体上涉及衍生自对胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)具有特异性的抗体的抗原结合片段的干粉制剂，以及使用所述干粉制剂经由肺递送来治疗哮喘(包括轻度哮喘、中度哮喘和重度哮喘，嗜酸性粒细胞型哮喘和非嗜酸性粒细胞型哮喘/低嗜酸性粒细胞型哮喘)的方法。干粉制剂包括亮氨酸和三亮氨酸的混合物，其导致制剂特别适于经由吸入来递送衍生自抗TSLP抗体的抗原结合片段。

背景技术

哮喘影响到全世界约3亿人，包括所有年龄范围内的人，并对卫生保健系统和社会造成严重负担，因为它使工作场所丧失生产力并破坏家庭。(“Pocket Guide for AsthmaManagement and Prevention，”Global Initiative for Asthma；2019)。哮喘会引起诸如喘息、气短、胸闷和咳嗽等症状，这些症状的发生、频率和强度会随时间而变化。症状通常与支气管收缩、气道壁增厚和粘液产生增加相关。哮喘可能具有不同程度的症状，基于发作次数和严重程度，可得到良好控制或控制不佳。

胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是一种上皮细胞衍生的细胞因子，响应于环境和促炎性刺激而产生，导致多种炎症细胞和下游途径的活化。TSLP在哮喘患者的气道中增加，并与Th2细胞因子和趋化因子表达以及疾病严重程度相关。尽管TSLP对于Th2免疫调节极为重要，但它也可能在其他炎症途径中起关键作用，因此与多种哮喘表型有关。

将针对TSLP的抗体(特别是经由吸入)递送至患者能为哮喘患者(包括每天可能需要低剂量施用的轻度哮喘患者)提供改善的治疗方法。

发明内容

鉴于上述内容，在一方面，本文提供了一种干粉制剂，所述干粉制剂包含多个微粒，所述微粒包含：亮氨酸、按重量计约1％至约10％的三亮氨酸，和抗胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)抗体的抗原结合片段。

在一些实施方案中，抗胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)抗体的抗原结合片段包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域包含：包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的重链CDR2序列和包含SEQID NO：3所示的氨基酸序列的重链CDR3序列，其中重链CDR1、2或3中的任一者任选地包含单一氨基酸取代，所述轻链可变结构域包含：包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的轻链CDR2序列和包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的轻链CDR3序列，其中轻链CDR1、2或3中的任一者任选地包含单一氨基酸取代，其中亮氨酸和三亮氨酸以约0.1∶1至约30∶1的亮氨酸：三亮氨酸浓度比存在。

在另一方面，提供了一种治疗患者的哮喘的方法，所述方法包括经由吸入施用第一方面的干粉制剂。

在另一方面，提供了根据第一方面的干粉制剂，所述制剂用于治疗方法中，其中所述制剂通过吸入施用。在一些实施方案中，所述制剂用于治疗哮喘。

附图说明

通过以下对实施方案的描述，并如附图所示，可更好地理解本发明技术的上述及其他特征和方面。并入本文中并形成本说明书的一部分的附图进一步用于说明本发明技术的原理。附图不一定是按比例的。

图1示出了如通过KinExA所测量的Fab₁与人TSLP的结合。

图2示出了如通过KinExA所测量的Fab₁与食蟹猴(cyno)TSLP的结合。

图3示出了如使用HTRF测定所测量的Fab₁与人TSLP的竞争性结合。

图4示出Fab₁抑制由TSLP激发的CCL17从PBMC的释放。

图5示出Fab₁、Fab₂和Fab₃抑制TSLP诱导的CCL17从PBMC的释放。

图6A至图6C示出了单一剂量递增(第1组和第2组)和重复剂量递增(第3组)吸入后的Fab₁血清、BAL和ELF PK曲线。

图7示出了来自根据本发明实施方案的干粉制剂的微粒。

图8A示出了干粉制剂中压缩堆积密度作为亮氨酸和三亮氨酸的函数的结果。

图8B示出了用本文所述的干粉制剂填充胶囊。

图9示出了使用BET测量的根据本发明实施方案的干粉制剂的微粒的比表面积的结果(以m²/g计)。

图10示出了水分含量与亮氨酸浓度的间接相关性。

图11A至图11D示出了如通过SEM所检测的微粒的表面皱褶度。

图12示出了质量中值空气动力学直径(MMAD)与亮氨酸和三亮氨酸wt％值之间的相关性。

图13示出了装置沉积与亮氨酸和三亮氨酸wt％值之间的相关性。

图14示出了细颗粒级分(FPF)与亮氨酸和三亮氨酸wt％值之间的相关性。

图15A示出了将包含40％(w/w)Fab₁和不同浓度的聚山梨糖醇酯-80(PS-80)的制剂重构至30mg/ml Fab₁的溶液浓度后的亚可见颗粒的数量(图中“≥”包括200μm的尺寸上限)。

图15B示出了将包含40％(w/w)Fab₁和不同浓度的PS-80的制剂重构至2.5mg/mlFab₁的溶液浓度后的亚可见颗粒的数量(图中“≥”包括200μm的尺寸上限)。

图16A示出了将包含40％(w/w)Fab₁和不同浓度的泊洛沙姆-188的制剂重构至30mg/ml Fab₁的溶液浓度后的亚可见颗粒的数量(图中“≥”包括200μm的尺寸上限)。

图16B示出了将包含40％(w/w)Fab₁和不同浓度的泊洛沙姆-188的制剂重构至2.5mg/ml Fab₁的溶液浓度后的亚可见颗粒的数量(图中“≥”包括200μm的尺寸上限)。

图17A示出了将包含40％(w/w)Fab₁和1.1％PS-80的制剂在40℃和75％相对湿度(40/75)下存储1或3个月以及在25℃和60％相对湿度(25/60)下储存3个月后的水分含量％。

图17B示出了将包含40％(w/w)Fab₁和1.1％PS-80的制剂在40℃和75％相对湿度(40/75)下存储1或3个月以及在25℃和60％相对湿度(25/60)下储存3个月后的粒度分布(PSD)。

图17C示出了将包含40％(w/w)Fab₁和1.1％PS-80的制剂在40℃和75％相对湿度(40/75)下存储1或3个月以及在25℃和60％相对湿度(25/60)下储存3个月后的颗粒形态。

图18A示出了将包含1％(w/w)Fab₁和1.1％PS-80的制剂在40℃和75％相对湿度(40/75)下存储1或3个月以及在25℃和60％相对湿度(25/60)下储存3个月后的水分含量％。

图18B示出了将包含1％(w/w)Fab₁和1.1％PS-80的制剂在40℃和75％相对湿度(40/75)下存储1或3个月以及在25℃和60％相对湿度(25/60)下储存3个月后的粒度分布(PSD)。

图18C示出了将包含1％(w/w)Fab₁和1.1％PS-80的制剂在40℃和75％相对湿度(40/75)下存储1或3个月以及在25℃和60％相对湿度(25/60)下储存3个月后的颗粒形态。

图19A示出了将包含40％Fab₁和1.1％PS-80(w/w)的制剂重构至30mg/ml Fab₁的溶液浓度后、在40/75下储存1或3个月以及在25/60下储存3个月后的亚可见颗粒的数量。

图19B示出了将包含1％Fab₁和1.1％PS-80(w/w)的制剂重构至0.75mg/ml Fab₁的溶液浓度后、在40/75下储存1或3个月以及在25/60下储存3个月后的亚可见颗粒的数量。

具体实施方式

本文所述的干粉制剂能够实现使用抗TSLP抗体结合片段治疗初级护理环境中的哮喘，从而解决未满足的需求。患有哮喘的受试者通常通过经由吸入自递送药物组合物(如长效β激动剂和/或糖皮质激素)来控制哮喘症状。

然而，现有生物药物(无论是已批准的还是正在临床研究中的)为哮喘患者提供了新的治疗范例，但这些药物通常无法通过熟悉的肺途径递送至受试者。特折鲁单抗(Tezepelumab)(新一代生物药物)是人免疫球蛋白G2(lgG2)单克隆抗体(mAb)，可与TSLP结合，从而阻止其与TSLP受体复合物的相互作用。在最近的2期、随机、双盲、安慰剂对照试验中，接受皮下注射特折鲁单抗的哮喘受试者比那些接受安慰剂的受试者具有更低的临床上显著的哮喘发作率(Corren等人(2017)NEJM 377：936-946)。

本文所述的发明将新一代生物药物(如特折鲁单抗)的治疗优点与对患有哮喘的受试者而言更熟悉的施用途径相结合。因此，本发明能够实现在初级护理环境中施用此类新一代疗法，从而将这些药物的可用性扩展到专业护理能力之外的受试者。

另外，本文所述的制剂可特别用于治疗通常可在初级护理环境中得到控制的不太严重的哮喘患者。例如，患有全球哮喘防治倡议(GINA)等级为3或更低(适当地GINA等级为2或3)的患者特别适于用本文所述的制剂进行治疗。在某些实施方案中，患有GINA评分为3的患者适于用本文所述的制剂进行治疗。在某些实施方案中，患有GINA评分为2的患者适于用本文所述的制剂进行治疗。此外，通过直接向肺递送生物药物，减少了与全身性施用相关的副作用(如注射部位炎症)。

另外，制剂提供了对可在初级护理环境中得到控制的中度-重度哮喘患者或通过专业护理难以治疗的中度-重度哮喘患者进行治疗的可能性。例如，制剂可用于治疗患有全球哮喘防治倡议(GINA)等级为4-5的中度-重度哮喘患者。适当地，制剂提供了对未控制的中度-重度哮喘进行治疗的可能性。适当地，制剂提供了对具有一次或多次发作和频繁症状的、中等剂量至高剂量ICS：LABA未控制的中度-重度哮喘进行治疗的可能性。

本文使用术语“约”来意指大约(approximately)、在......附近(in the regionof)、粗略地(roughly)、或在......左右(around)。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过扩展所列举数值的上限和下限对所述范围加以修饰。通常，本文使用术语“约”修饰偏差为10％的所述值的上下数值。

如本文所述，提供了干粉制剂用于稳定和递送药物活性剂。适当地，配制干粉制剂用于肺递送，包括通过干粉吸入器(DPI)经由吸入进行肺递送。

如本文所用，“干粉制剂”是指在粉末组合物中包括多个固体微粒的制剂，所述粉末组合物适当地含有小于约20％水分、更适当地小于10％水分、小于约5％-6％水分、或小于约3％水分。如本文所述，干粉制剂可用于经由吸入递送至患者。在其他实施方案中，可将干粉制剂进行重构，并且以液体形式通过口服、静脉内、肠胃外等方式进行施用。如本文所述，所提供的干粉制剂的优点是增加生产量用于改善可制造性。另外的优点是本文所述的制剂平台提供了高压缩堆积密度。这意味着每个递送单元(例如，在胶囊内)可包装更大质量的粉末。这意味着每个单位递送可将高剂量的活性剂递送至受试者。这种令人惊讶的优点可通过降低需要服用的单位剂量的数量来改善患者依从性。另外，高压缩堆积密度能够实现递送更高剂量的活性剂，从而增加了施用剂量范围上限。这能够实现以先前不可能的治疗有效剂量来递送活性剂。

如本文所用的“微粒”是指尺寸质量平均直径(MMD)小于20μm的固体颗粒。质量平均直径是微粒平均粒度的量度，其通过使用合适的方法(包括例如，离心沉降、电子显微镜、光散射、激光衍射等)进行测量。

本文所述的干粉制剂适当地含有多个微粒。如本文所用，“多个”是指2个或更多个物品，并且适当地是指5个或更多个、10个或更多个、50个或更多个、100个或更多个、500个或更多个、1000个或更多个等。

在实施方案中，干粉制剂包括多个微粒，所述微粒适当地包含亮氨酸；按重量计约1％至约10％的三亮氨酸；以及本文所定义的抗TSLP抗体结合片段。除非另有说明，否则“活性剂”是指衍生自如本文所定义的抗TSLP抗体的抗原结合片段。

图7示出了本文所提供的示例性干粉制剂的微粒的扫描电子显微照片。在另外的实施方案中，包括多个微粒的干粉制剂适当地包含约1％至约25％的亮氨酸；约1％至约10％的三亮氨酸；和活性剂。

如本文所用，无论是作为单一氨基酸存在还是作为肽的氨基酸组分存在，“亮氨酸”是指氨基酸亮氨酸(C₆H₁₃NO₂)，其可以是外消旋混合物或呈其D形式或L形式、以及亮氨酸的修饰形式(即，其中亮氨酸的一个或多个原子已被另一个原子或官能团取代)。以下提供了亮氨酸的化学结构：

如本文所利用的“三亮氨酸”是指其中三个亮氨酸分子在肽中连接在一起的化学化合物，如亮氨酸-亮氨酸-亮氨酸(Leu-Leu-Leu)，C₁₈H₃₅N₃O₄。以下提供了三亮氨酸的化学结构：

除非另有说明，否则将本文所提供的亮氨酸和三亮氨酸的量提供为制剂的重量百分比(wt％)。由于干粉制剂几乎不含水(即使含有水，也非常少)，因此干粉制剂的重量组分为最终制剂的干重百分比。

在包含亮氨酸、三亮氨酸和抗原结合片段的制剂的实施方案中，亮氨酸和三亮氨酸保持在所需比率范围内，所述比率范围提供了本文所述的改善的压缩堆积密度特征，以及提供了允许改善储存和递送的所需微粒特征。在实施方案中，亮氨酸和三亮氨酸在微粒中的重量比(即亮氨酸∶三亮氨酸)为约0.1∶1至约30∶1。在另外的实施方案中，亮氨酸和三亮氨酸以约0.1∶1至约25∶1、约0.5∶1至约20∶1、约1∶1至约20∶1、约1∶1至约15∶1、约1∶1至约12∶1、约1∶1至约10∶1、约1∶1至约7∶1、约1∶1至约6∶1、或约1∶1、约2∶1、约3∶1、约4∶1、约5∶1、约5.1∶1、约5.2∶1、约5.25∶1、约5.3∶1、约5.4∶1、约5.5∶1、约5.75∶1或约6∶1的亮氨酸：三亮氨酸重量比存在。

除非另有说明，本文所述的比表达为按重量计的比％(w/w-也称为“重量比”)，即在本文所述的制剂中的亮氨酸重量：三亮氨酸重量。通过以下方式实现这些比率：在原料中提供所需的亮氨酸和三亮氨酸的mg/mL浓度，接着干燥以去除原料溶剂，从而形成雾化的微粒，其中将起始浓度比(以mg/mL表示)保持为亮氨酸：三亮氨酸的最终重量比。

本文描述了可在干粉制剂中使用以实现这些比率的亮氨酸和三亮氨酸的示例性重量百分比。适当地，干粉制剂包含约5％至约15％的亮氨酸和约1％至约5％的三亮氨酸。在实施方案中，干粉制剂包含约8％至约11％的亮氨酸和约2％至约4％的三亮氨酸，且在实施方案中，干粉制剂包含约10.5％的亮氨酸和约2％的三亮氨酸。

在示例性实施方案中，干粉制剂包含按重量计约1％至约10％的三亮氨酸，更适当地按重量计约1％至约9％、约1％至约8％、约1％至约7％、约1％至约6％、约1％至约5％、约2％至约10％、约2％至约9％、约2％至约8％、约2％至约7％、约2％至约6％、约2％至约5％、约2％至约4％、或约1％、约1.5％、约2％、约2.5％、约3％、约3.5％、约4％、约4.5％、约5％、约5.5％或约6％的三亮氨酸。

在示例性实施方案中，干粉制剂包含按重量计约1％至约25％的亮氨酸，更适当地按重量计约2％至约20％、约3％至约20％、约4％至约20％、约5％至约20％、约5％至约15％、约7％至约12％、约8％至约11％、约9％至约11％、约10％至约11％、或约5％、约6％、约7％、约8％、约8.5％、约9％、约10％、约10.5％、约11％、约11.5％、约12％、约12.5％或约13％的亮氨酸。

在合适的实施方案中，干粉制剂包含按重量计约8％至约11％的亮氨酸和约2％至约4％的三亮氨酸，更适当地按重量计约9％至约11％的亮氨酸和约2％至约3％的三亮氨酸。在示例性实施方案中，干粉制剂包含按重量计约10.5％的亮氨酸和约2％的三亮氨酸。

如本文所述，令人惊讶地发现在干粉制剂中使用亮氨酸和三亮氨酸的组合允许减少制备微粒所需的亮氨酸和三亮氨酸的总量(与仅含有这些组分中的一种的干粉制剂相比)，同时还提供了所需的稳定性。在某些实施方案中，与本领域中的制剂相比，本发明的制剂具有增加的压缩堆积密度，这能够实现吸入后向患者的肺递送更高浓度的活性剂。这些改善的特征似乎与将亮氨酸和三亮氨酸掺入微粒中有关。

根据本发明的实施方案，制备干粉制剂的示例性方法可如下进行。使用雾化器将含有干粉制剂的所需最终组分的液体原料雾化成细小薄雾。接着如本文所述将薄雾干燥。雾化的液滴含有最初呈液滴形式的溶解组分。随着液滴干燥，制剂的不同组分开始以不同的速率饱和并沉淀。如本文所述，在干粉制剂的微粒的外表面周围开始形成壳。此壳适当地在壳的外表面包括亮氨酸和三亮氨酸组分。应该注意的是亮氨酸和三亮氨酸优先位于微粒的外表面，同时少量的亮氨酸和三亮氨酸也可存在于整个微粒。在实施方案中，较高浓度的亮氨酸和三亮氨酸适当地存在于微粒表面或微粒表面附近，而不是靠近微粒中心。在实施方案中，微粒的中心含有大量的活性剂，以及如本文所述的其他赋形剂组分，这些组分适当地呈无定形形式。如本文所用，“大量”的活性剂意指至少约60％的活性剂(即，占制剂中的总活性剂)位于微粒中心或微粒中心附近，适当地至少约70％、且更适当地至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、以及在实施方案中约95％-100％的活性剂位于微粒中心或微粒中心附近。

在另外的实施方案中，微粒含有亮氨酸和三亮氨酸，它们基本上遍布整个微粒，但在微粒表面或微粒表面附近含量较高。如本文所用，“基本上遍布整个微粒”意指亮氨酸和/或三亮氨酸呈梯度式位于从微粒外表面至微粒中心，但越靠近中心亮氨酸和/或三亮氨酸的量适当地越少，并且在实施方案中，活性剂所在的微粒的中心没有发现亮氨酸或三亮氨酸。在其他实施方案中，亮氨酸和三亮氨酸的量在微粒的整个横截面上可为基本上均匀的。

在实施方案中，干粉制剂的基本上每个微粒都包含亮氨酸和三亮氨酸。即，适当地至少约60％的微粒含有亮氨酸和三亮氨酸，或至少约70％、且更适当地至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、以及在实施方案中约95％-100％的微粒包含亮氨酸和三亮氨酸。在实施方案中，干粉制剂的每个微粒都包含亮氨酸和三亮氨酸。

在另外的实施方案中，亮氨酸和/或三亮氨酸可存在于干粉制剂中，但是不包含在制剂的微粒内或不与制剂的微粒缔合。因此，在实施方案中，可在干粉制剂中发现不与微粒缔合的游离亮氨酸和/或三亮氨酸。然而，通常，游离(即，不与微粒缔合的)亮氨酸和/或三亮氨酸的量近似于占制剂中亮氨酸和/或三亮氨酸的总量的小于约10％、小于约5％、小于约1％、且更适当地小于约0.1％。

在某些实施方案中，本文所述的干粉制剂具有允许递送大量活性剂的压缩堆积密度。“压缩堆积密度”是指当在以下条件下测量时粉末的每单位体积的质量(适当地，g/cm³)。实施例中描述了测量压缩堆积密度(cBD)的合适的测定(参见例如实施例6)。适当地，使用密度分析仪，如

模型1360密度分析仪(Micromeritics，Norcross，GA)来测量粉末的压缩堆积密度(CBD)。适当地在低湿度环境(＜5％RH)中制备粉末样品，之后将样品转移到已用氮气吹扫的密度分析仪样品室。记录粉末样品的净重，接着通过柱塞以每秒250-350个固结步骤(适当地每秒300个固结步骤)的速率向样品施加10-14N(适当地12N)的压缩力。将每个固结步骤中柱塞行进的直线距离转换为粉末样品的体积位移。接着将来自每个固结步骤的测量值平均数转换为计算的干粉制剂的堆积密度值，以g/cm³表示。

适当地，本文所述的干粉制剂的压缩堆积密度为至少0.4g/cm³，且适当地在约0.4g/cm³至约1.0g/cm³之间，且适当地为约0.4-0.9gm/cm³、约0.4-0.8gm/cm³、约0.5-0.8gm/cm³、约0.6-0.8gm/cm³、或约0.4gm/cm³、约0.5gm/cm³、约0.6gm/cm³、约0.7gm/cm³或约0.8gm/cm³。在某些实施方案中，本文所述的干粉制剂的压缩堆积密度为约0.4gm/cm³至约0.9gm/cm³。在某些实施方案中，本文所述的干粉制剂的压缩堆积密度为约0.5gm/cm³至约0.8gm/cm³。

图8A示出了本文所述的干粉制剂中压缩堆积密度作为亮氨酸和三亮氨酸的函数的结果。每一列代表制剂中三亮氨酸的量。每列中，亮氨酸的量从约1％增长至约20％。如图所示，增加三亮氨酸的量导致压缩堆积密度较低，而在每组内增加亮氨酸也降低了压缩堆积密度。为了实现在约0.5g/cm³至约0.8g/cm³之间的压缩堆积密度，应将三亮氨酸的量保持在按重量计低于4％。

本文所述的制剂包含抗胸腺基质淋巴细胞生成素(抗TSLP)抗体的抗原结合片段。有利地，发明人已发现本文所述的制剂能够实现经由吸入将抗原结合片段直接递送到肺中。经由吸入递送抗TSLP抗体的治疗活性抗原结合片段有利地允许在初级护理环境中使用生物药物治疗哮喘。

以下提供了TSLP多肽的序列：

Met Phe Pro Phe Ala Leu Leu Tyr Val Leu Ser Val Ser Phe Arg Lys IlePhe Ile Leu Gln Leu Val Gly Leu Val Leu Thr Tyr Asp Phe Thr Asn Cys Asp PheGlu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr Leu Ser Thr Ile Ser Lys Asp Leu Ile Thr Tyr MetSer Gly Thr Lys Ser Thr Glu Phe Asn Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro HisCys Leu Thr Glu Ile Gln Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala Ser LeuAla Lys Glu Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala Ile Trp Cys Pro GlyTyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala Met Lys Lys Arg Arg Lys Arg LysVal Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu Gln Gly Leu Trp Arg ArgPhe Asn Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln(SEQ ID NO：27)

如本文所用，术语“抗体”是指包含通过二硫键连接的至少两条重链和两条轻链的蛋白。术语“抗体”包括天然存在的抗体以及所有重组形式的抗体，例如人源化抗体、完全人抗体和嵌合抗体。每条重链通常由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。每条轻链通常由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。然而，术语“抗体”还包括其他类型的抗体，如单结构域抗体、重链抗体(即，仅由一条或多条，尤其是两条重链组成的抗体)和纳米抗体(即，仅由单个单体可变结构域组成的抗体)。

抗体结合片段包括：(i)Fab片段，即由重链和轻链各自的可变区和第一恒定结构域组成的单价片段；(ii)F(ab)2片段，即包含两个在铰链区通过二硫桥连接的Fab片段的二价片段；(iii)由重链的可变区和第一恒定结构域CH1组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的重链可变区和轻链可变区组成的Fv片段；(v)scFv片段，即由单条多肽链组成的Fv片段；(vi)由两个共价连接在一起的Fv片段组成的(Fv)2片段；(vii)重链可变结构域；和(viii)由共价连接在一起的重链可变区和轻链可变区组成的多体，这种共价连接方式使得重链可变区和轻链可变区的缔合只能在分子间发生，而不能在分子内发生。在实施方案中，本发明的抗体结合片段选自Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv、微型抗体或双抗体。在某些实施方案中，抗体结合片段是Fab。在一些实施方案中，衍生抗原结合片段的抗TSLP抗体是IgG1。

本发明的示例性Fab(本文称为Fab₁)的序列包括：

HCDR1 FAB1

Thr Tyr Gly Met His(SEQ ID NO：1)

HCDR2 FAB1

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly(SEQ ID NO：2)

HCDR3 FAB1

Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile(SEQ ID NO：3)

重链VH FAB1

Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg SerLeu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr Gly Met His TrpVal Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp GlySer Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp AsnSer Lys Asn Thr Leu Asn Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala ValTyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile TrpGly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser(SEQ ID NO：4)

LCDR1 FAB1

Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His(SEQ ID NO：5)

LCDR2 FAB1

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser(SEQ ID NO：6)

LCDR3 FAB1

Gln Val Trp Asp Ser Ser SerAsp His Val Val(SEQ ID NO：7)

轻链VL FAB1

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln ThrAla Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro SerTrp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr IleSer Arg Gly Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser SerSer Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu(SEQ ID NO：8)

FAB1可变重链VH(核酸)

FAB1可变轻链VL(核酸)

FAB1重链(多肽)

Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg SerLeu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr Gly Met His TrpVal Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp GlySer Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp AsnSer Lys Asn Thr Leu Asn Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala ValTyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile TrpGly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val PhePro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys LeuVal Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu ThrSer Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu SerSer Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn ValAsn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys AspLys(SEQ ID NO：28)

FAB1轻链(多肽)

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln ThrAla Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro SerTrp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr IleSer Arg Gly Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser SerSer Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro LysAla Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn LysAla Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala TrpLys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys GlnSer Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp LysSer His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys ThrVal Ala Pro Thr Glu Cys Ser(SEQ ID NO：29)

FAB1重链(核酸)

FAB1轻链(核酸)

本文所提供的干粉制剂包含多个微粒，所述微粒包含：亮氨酸；按重量计约1％至约10％的三亮氨酸；和抗胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)抗体的抗原结合片段，其中亮氨酸和三亮氨酸以约0.1∶1至约30∶1的亮氨酸：三亮氨酸浓度比存在。

在某些实施方案中，干粉制剂内的抗原结合片段包含

a.重链可变结构域，所述重链可变结构域包含：

包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的重链CDR2序列和包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的重链CDR3序列，其中重链CDR1、2或3中任一个视需要包含单一氨基酸取代，以及

b.轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含：

包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的轻链CDR2序列和包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的轻链CDR3序列；其中轻链CDR 1、2或3中的任一者任选地包含单一氨基酸取代。

在某些实施方案中，干粉制剂内的抗原结合片段包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的轻链CDR1序列、具有SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的重链CDR2序列和具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的重链CDR3序列，以及具有SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的轻链CDR1序列、具有SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的轻链CDR2序列和具有SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的轻链CDR3序列。

在另外的实施方案中，用于干粉制剂中的抗原结合片段包含有包含SEQ ID NO：4的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：8的轻链可变结构域。在另外的实施方案中，用于干粉制剂中的抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：28所示的序列的重链；和具有SEQ ID NO：29所示的序列的轻链。

在另外的实施方案中，用于干粉制剂中的抗原结合片段包含：重链可变结构域，所述重链可变结构域是与SEQ ID NO：4具有至少95％、90％、85％或80％同一性的氨基酸序列；和轻链可变结构域，所述轻链可变结构域是与SEQ ID NO：8具有至少95％、90％、85％或80％同一性的氨基酸序列。

在另外的实施方案中，用于干粉制剂中的抗原结合片段包含：(a)重链可变结构域，所述重链可变结构域是与SEQ ID NO：4具有至少95％、90％、85％或80％同一性的氨基酸序列、或由与SEQ ID NO：30具有至少80％同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；(b)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域是与SEQ ID NO：8具有至少95％、90％、85％或80％同一性的氨基酸序列、或由与SEQ ID NO：31具有至少80％同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；或(a)的重链可变结构域和(b)的轻链可变结构域。

本发明的抗原结合片段的其他轻链CDR(LCDR)、轻链可变域(VL)、重链CDR(HCDR)和重链可变域(VH)序列包括：

LCDR1 FAB2

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His(SEQ ID NO：11)

轻链VL FAB2

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln ThrAla Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro SerTrp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr IleSer Arg Gly Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser SerSer Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu(SEQ ID NO：12)

LCDR1 FAB3

Gly Gly Asn Asn Val Gly Ser Lys Ser Val His(SEQ ID NO：13)

轻链VL FAB3

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln ThrAla Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Val Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro SerTrp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr IleSer Arg Gly Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser SerSer Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu(SEQ ID NO：14)

HCDR2 FAB4

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly(SEQ ID NO：15)

重链VH FAB4

Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg SerLeu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr Gly Met His TrpVal Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp GlySer Asn Lys His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp AsnSer Lys Asn Thr Leu Asn Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala ValTyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile TrpGly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser(SEQ ID NO：16)

HCDR2 FAB5

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala(SEQ ID NO：17)

重链VH FAB5

Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg SerLeu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr Gly Met His TrpVal Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Val Ile Trp Tyr Asp GlySer Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys Ala Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp AsnSer Lys Asn Thr Leu Asn Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala ValTyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile TrpGly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser(SEQ ID NO：18)

LCDR1 FAB6

Gly Gly Gln Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His(SEQ ID NO：19)

轻链VL FAB6

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln ThrAla Arg Ile Thr Cys Gly Gly Gln Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro SerTrp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr IleSer Arg Gly Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser SerSer Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu(SEQ ID NO：20)

LCDR1 FAB7

Gly Gly Asn Gln Leu Gly Ser Lys Ser Val His(SEQ ID NO：21)

轻链VL FAB7

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln ThrAla Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Gln Leu Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro SerTrp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr IleSer Arg Gly Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser SerSer Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu(SEQ ID NO：22)

LCDR3 FAB8

Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Asp His Val Val(SEQ ID NO：23)

轻链VL FAB8

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pr0 Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln ThrAla Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro SerTrp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr IleSer Arg Gly Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Thr SerSer Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu(SEQ ID NO：24)

LCDR3 FAB9

Gln Val Trp Asp Ser Thr Ser Asp His Val Val(SEQ ID NO：25)

轻链VL FAB9

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val A1a Pro Gly Gln ThrAla Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr GlnGln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro SerTrp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr IleSer Arg Gly Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser ThrSer Asp His Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu(SEQ ID NO：26)。

在某些实施方案中，本发明的抗原结合片段的重链可变结构域和轻链可变结构域包含下表中列出的CDR序列的任何组合：

	VH CDR 1、2和3	VL CDR 1、2和3
			Fab<sub>1</sub>	SEQ ID NO：1、2和3	SEQ ID NO：5、6和7
Fab<sub>2</sub>	SEQ ID NO：1、2和3	SEQ ID NO：11、6和7
			Fab<sub>3</sub>	SEQ ID NO：1、2和3	SEQ ID NO：14、6和7
Fab<sub>4</sub>	SEQ ID NO：1、15和3	SEQ ID NO：5、6和7
			Fab<sub>5</sub>	SEQ ID NO：1、17和3	SEQ ID NO：5、6和7
Fab<sub>6</sub>	SEQ ID NO：1、2和3	SEQ ID NO：19、6和7
			Fab<sub>7</sub>	SEQ ID NO：1、2和3	SEQ ID NO：19、6和7
Fab<sub>8</sub>	SEQ ID NO：1、2和3	SEQ ID NO：5、6和23
			Fab<sub>9</sub>	SEQ ID NO：1、2和3	SEQ ID NO：5、6和25

本文所公开的制剂可与另外的活性剂组合施用，用于治疗哮喘。可与本文所述的干粉制剂组合施用的示例性活性剂包括但不限于吸入性皮质类固醇(ICS)、支气管扩张剂(包括长效β激动剂(LABA)、长效抗毒蕈碱激动剂(LAMA)、短效β激动剂(SABA)和毒蕈碱β2激动剂(MABA))、抗组胺药、抗白三烯、PDE-4抑制剂、janus激酶抑制剂和磷酸肌醇3激酶抑制剂。在某些实施方案中，将另外的活性剂与本文所公开的抗TSLP抗体结合片段一起合并到本发明的制剂中。

在合适的实施方案中，本文所述的干粉制剂还包含玻璃稳定剂以帮助稳定制剂，特别是稳定活性剂。“玻璃稳定剂”是指稳定干粉制剂中的活性剂(适当地为多肽)并形成包含所述活性剂的无定形固体的赋形剂，所述稳定是适当地通过在干燥期间取代所述活性剂表面的水或以其他方式阻止降解过程来进行。玻璃稳定剂的实例包括无定形糖、聚合糖、缓冲剂、盐、或合成聚合物(例如聚-L-乙醇酸)、以及此类组分的混合物。在合适的实施方案中，玻璃稳定剂是无定形糖。在另外的实施方案中，玻璃稳定剂是缓冲剂。在仍另外的实施方案中，本文所述的制剂可包含无定形糖和缓冲剂两者，这两者可一起或分别充当玻璃稳定剂。

用于本文所述的制剂中的示例性无定形糖包括但不限于海藻糖、蔗糖、棉子糖、菊糖、葡聚糖、甘露醇和环糊精。适当地，无定形糖以干粉制剂的约30％至约70％(重量百分比)存在。在另外的实施方案中，无定形糖以约30％至约65％、约35％至约65％、约35％至约60％、约40％至约60％、约30％至约50％、或约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、或约60％存在。适当地，无定形糖是海藻糖，并且以干粉制剂重量的约30％-60％、更适当地约35％-55％、或约35％、约40％、约45％或约50％存在于制剂中。

可包含于干粉制剂中的示例性缓冲剂(适当地作为玻璃稳定剂)包括各种柠檬酸盐缓冲剂(如柠檬酸钠)、磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙酸盐缓冲剂和酒石酸盐缓冲剂，以及此类缓冲剂的组合。可包含于干粉制剂中的缓冲剂的量的范围可为约0.1％至约20％、更适当地约0.5％至约15％、约1％至约10％、约2％至约8％、约3％至约7％、或约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％或约10％。

缓冲剂还提供了对干粉制剂的pH的控制，适当地将pH维持在约pH 5至约8之间，例如，pH在约pH 5至约pH 6、或约pH 5.5至约pH 6.5、或约pH 6至约pH 7、或约pH 6.5至约pH7.5、或约pH 7至约pH 8之间。

在另外的实施方案中，提供了干粉制剂，所述干粉制剂包含约30％-50％的海藻糖、约10％-11％的亮氨酸、约1％-3％的三亮氨酸、约8％-9％的柠檬酸盐缓冲剂和活性剂，更适当地约39％的海藻糖、约10.5％的亮氨酸、约2％的三亮氨酸、约8.5％的柠檬酸盐缓冲剂和活性剂。

在另外的实施方案中，提供了干粉制剂，所述干粉制剂基本上由约30％-50％的无定形糖、亮氨酸、约1％至约10％的三亮氨酸、约1％至约10％的缓冲剂和活性剂组成，其中亮氨酸和三亮氨酸以约0.1∶1至约30∶1的亮氨酸：三亮氨酸浓度比存在。在另外的实施方案中，提供了干粉制剂，所述干粉制剂基本上由约30％-50％的无定形糖、约8％至约11％的亮氨酸、约2％至约4％的三亮氨酸、约1％至约10％的缓冲剂和活性剂组成。提供了另外的干粉制剂，所述干粉制剂基本上由约35％-45％的海藻糖、约9％至约11％的亮氨酸、约2％至约3％的三亮氨酸、约2％至约85％的柠檬酸盐缓冲剂和活性剂组成。在另外的实施方案中，干粉制剂基本上由约39％的海藻糖、约10.5％的亮氨酸、约2％的三亮氨酸、约8.5％的柠檬酸盐缓冲剂和活性剂组成。

在“基本上由”所列举的成分组成的组合物和制剂中，此类组合物和制剂含有所列举的组分以及实质上不影响要求保护的制剂的基本和新颖特征的那些组分。实质上不影响要求保护的制剂的基本和新颖特征的组分是那些不限制亮氨酸和三亮氨酸稳定干粉制剂的能力的组分。适当地，基本上由所列举的成分组成的组合物和制剂特别排除其他氨基酸或三肽氨基酸，但是可包括另外的糖、缓冲剂等。

在示例性实施方案中，提供了干粉制剂，所述干粉制剂包含约30％-50％的海藻糖、约10％-11％的亮氨酸、约1％-3％的三亮氨酸、约8％-9％的柠檬酸盐缓冲剂和约30％-50％的抗TSLP抗体片段，更适当地约39％的海藻糖、约10.5％的亮氨酸、约2％的三亮氨酸、约8.5％的柠檬酸盐缓冲剂和约40％的抗TSLP抗体片段。

在另外的示例性实施方案中，提供了基本上由以下组成的干粉制剂：约30％-50％的海藻糖、约10％-11％的亮氨酸、约1％-3％的三亮氨酸、约8％-9％的柠檬酸盐缓冲剂和约30％-50％的抗TSLP抗体片段，更适当地约39％的海藻糖、约10.5％的亮氨酸、约2％的三亮氨酸、约8.5％的柠檬酸盐缓冲剂和约40％的活性剂。

组成本文所述的干粉制剂的微粒当以气溶胶形式提供时，适当地具有指定的质量中值空气动力学直径(MMAD)。微粒也可具有指定的等效光学体积平均直径(oVMD)。oVMD也可称为粒度分布(PSD或pPSD)。

如本文所用，“质量中值空气动力学直径”或“MMAD”是分散微粒的空气动力学粒度的量度。空气动力学直径用于描述雾化粉末的沉降行为，并且是在空气中与微粒具有相同沉降速率的单位密度球体的直径。空气动力学直径涵盖微粒的颗粒形状、密度和物理尺寸。如本文所用，除非另外指明，否则MMAD是指由级联撞击(cascade impaction)确定的雾化粉末的空气动力学粒度分布的中点或中值。适当地，本文所提供的干粉制剂的微粒具有如下质量中值空气动力学直径(MMAD)：约1μm至约10μm、更适当地约2μm至约8μm、约2μm至约7μm、约2μm至约6μm、约2μm至约5μm、约2μm至约4μm、约3μm至约7μm、约4μm至约7μm、约3μm至约6μm、或约2μm、约3μm、约4μm、约5μm、约6μm或约7μm。

适当地，本文所述的干粉制剂的细颗粒级分(从吸入装置射出的空气动力学粒径小于5μm的颗粒的级分)≥50％、更适当地≥60％。这种细颗粒级分(FPF)可有助于递送至患者后在装置中残留小于20％、适当地小于15％、小于10％、或小于5％的干粉制剂的低装置残留。

在另外的实施方案中，微粒适当地具有约0.5μm至约7μm的等效光学体积平均直径(oVMD)。等效光学体积平均直径(oVMD)是指最接近微粒与光的特异性光学相互作用的球体的平均直径，其中当使用合适的光学技术进行测量时，一半的微粒最接近小于平均值的等效球体，而一半的微粒则最接近大于平均值的等效球体。在示例性实施方案中，微粒具有约0.5μm至约6μm、或约1μm至约5μm、或约1μm至约4μm、或约2μm至约4.5μm、或约2.5μm至约4μm、或约2μm至约4μm、或约2μm至约3μm、或约2μm至约3.5μm、或约1μm、约1.5μm、约2μm、约2.5μm、约3μm、约3.5μm、约4μm、约4.5μm、或约5μm的等效光学体积平均直径(oVMD)。

如本文所述，高压缩堆积密度允许使用相同的递送体积来递送更大量的活性剂。某些生物制剂可能需要递送多达50mg/剂量或更高剂量的有效负载以进行有效治疗。如图8B图示所示，亮氨酸和三亮氨酸的组合可产生具有较高堆积密度的干粉制剂，因此对于相同量的填充重量而言，占据了显著更小的体积。

以下提供了图8B中所示的示例性平台制剂。LTC指示不含三亮氨酸(TLeu)，但含有亮氨酸、海藻糖和柠檬酸盐缓冲剂的制剂；TTC指示不含亮氨酸(Leu)，但含有三亮氨酸、海藻糖和柠檬酸盐缓冲剂的制剂；TLTC指示包含亮氨酸和三亮氨酸两者，以及海藻糖和柠檬酸盐缓冲剂。Cit是指柠檬酸盐缓冲剂。Tre是指海藻糖。

表1：示例性平台制剂

平台	％Tre	％Leu	％TLeu	％Cit
					LTC	46	45	0	9
TTC	81	0	11.2	7.8
					TLTC	79	10.5	2	8.5

图8B中以相应填充重量示出了每种制剂的胶囊(3号胶囊)。如所示出的，对于TLTC制剂，三亮氨酸和亮氨酸的组合允许用100mg干粉制剂填充胶囊，同时使胶囊中仍保持一些剩余空间。其他制剂无法填充超过约70-80mg的填充重量。这代表通过将亮氨酸和三亮氨酸组合使用以制备具有高压缩堆积密度、从而允许高填充重量的制剂而提供的显著改善。

如本文所述，在干粉制剂中使用亮氨酸和三亮氨酸还产生具有所需尺寸(MMAD)以及期望比表面积(SSA)和粗糙度的微粒，从而产生可适当流动并使用各种吸入平台递送至肺的微粒。

将微粒的比表面积(SSA)定义为每单位质量的微粒的总表面积(适当地以m²/g为单位)。测量SSA的方法在本领域中是已知的，并且包括例如布鲁诺尔-埃梅特-泰勒(Brunauer-Emmett-Teller，BET)测量，其使用测量为相对压力的函数的氮吸附来评估材料的比表面积。通过计算对应于微粒表面上的单分子层的吸附气体的量来确定表面积。此技术测量了外部面积和任何孔隙面积评估值，以确定总比表面积。用于测量BET的仪器在本领域中是已知的。

在实施方案中，干粉制剂的微粒的比表面积(SSA)为约3m²/g至约8m²/g。在合适的实施方案中，多个微粒的SSA为约3.5m²/g-7.5m²/g、或约4m²/g-7m²/g、或约4.5m²/g-7m²/g、或约5m²/g-7m²/g、或约4.5m²/g-6m²/g、或约5m²/g-6m²/g、或约4m²/g、约4.5m²/g、约5m²/g、约5.5m²/g、约6m²/g、约6.5m²/g、或约7m²/g。

图9示出了使用BET测量的比表面积(以m²/g计)的结果。图9中的每列代表制剂中三亮氨酸的不同量。每列中，亮氨酸的量从约1％增长至约20％。插图显微照片显示了在低SSA(左下)和较高SSA(右上)下微粒的物理外观。如图所示，在较低的wt％三亮氨酸下，SSA保持在低于约5m²/g，但随亮氨酸增加而增大。大于约2％的三亮氨酸，SSA增大至大于3.0m²/g，并且还随着亮氨酸百分比增加而增大。三亮氨酸的量大于约4％时，实现的SSA值大于5.5m²/g并且接近7.0m²/g。使用在约1％-6％之间的三亮氨酸以及在约1％-20％之间的亮氨酸的量可容易地实现约4-7m²/g的比表面积的期望范围。如图所示，通过使用低于约6％的三亮氨酸的量，可将亮氨酸的量保持在低于10％、甚至低于5％，并且仍然保持期望SSA和具有表面粗糙度的微粒。左上方的显微照片示出了本文所述的干粉制剂的微粒形状，表现出期望尺寸、比表面积和表面粗糙度。

在某些实施方案中，干粉制剂的压缩堆积密度为约0.4-1.0g/cm³。适当地，干粉制剂的压缩堆积密度为约0.5-0.8g/cm³。在实施方案中，本文所述的干粉制剂的压缩堆积密度为约0.4-0.9gm/cm³、约0.4-0.8gm/cm³、约0.5-0.8gm/cm³、约0.6-0.8gm/cm³、或约0.4gm/cm³、约0.5gm/cm³、约0.6gm/cm³、约0.7gm/cm³、或约0.8gm/cm³。在某些实施方案中，本文所述的干粉制剂的压缩堆积密度为约0.4gm/cm³至约0.9gm/cm³。在某些实施方案中，本文所述的干粉制剂的压缩堆积密度为约0.5gm/cm³至约0.8gm/cm³。

干粉制剂适当地包含如本文所述的玻璃稳定剂，所述玻璃稳定剂包括无定形糖或缓冲剂，或使用无定形糖和缓冲剂两者。示例性无定形糖包括本文所述的那些，包括海藻糖、蔗糖、棉子糖、菊糖、葡聚糖和环糊精。适当地，无定形糖以约30％至约70％存在；并且在实施方案中无定形糖是海藻糖，其适当地以约35％-60％、或35％-55％存在。

本文描述了用于干粉制剂中的示例性缓冲剂，并且这些缓冲剂包括柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和酒石酸盐缓冲剂。适当地，缓冲剂以约1％至约10％存在，并且在实施方案中缓冲剂是柠檬酸盐缓冲剂。在某些实施方案中，柠檬酸盐缓冲剂的pH为约pH 5.5至约pH 6.5，如约pH 5.5、约pH 5.6、约pH 5.7、约pH 5.8、约pH 5.9、约pH 6.0、约pH 6.1、约pH6.2、约pH 6.3、约pH 6.4或约pH 6.5。在某些实施方案中，柠檬酸盐缓冲剂的pH为约pH6.4。

在某些实施方案中，本文所述的干粉制剂包含表面活性剂。如本文所定义，“表面活性剂”是指降低颗粒凝聚、颗粒粘附在胶囊、容器壁或可吸入递送装置的阀部件的表面的分子或化合物。还发现表面活性剂在制剂重构后减少了亚可见颗粒(SVP)的形成。去除或减少SVP的形成简化了制剂的分析表征，因为它消除了在制造期间跟踪SVP形成的负担。SVP的分析表征可能涉及开发正交技术以鉴定和定量SVP用于质量控制目的。因此，去除SVP或将其降低到可接受的水平消除了制造过程中此表征步骤的必要性，从而使制造流线化。由于来自SVP的药物释放动力学是未知的，去除SVP还可使剂量范围更加可预测。此外，去除SVP可能增加重构后可用于发挥药理活性的活性剂的量，这可能意味着不仅可实现更高的递送剂量，还可计算出更准确的递送剂量预测值。较高的递送剂量还可例如通过潜在地减少为提取药理益处而必须递送的剂量的数量或频率而使患者受益。

“亚可见颗粒”(“SVP”)是约1μm至约200μm的肉眼不可见的颗粒。可通过重构干粉制剂和具有浑浊质量的液体来确定亚可见颗粒的存在。可使用微流成像等技术来确认实际存在SVP。微流成像(或MFI)结合了微流显微镜和高分辨率成像颗粒分析来定量SVP计数。MFI可跨越粒度范围将这些计数进行分类，例如通过在约1至约200μm、约2μm至约200μm、约5μm至约200μm、约10μm至约200μm和约25μm至约200μm的尺寸范围内对颗粒计数进行分类。实例表明，与不存在表面活性剂的对照制剂相比，在干粉制剂中包含表面活性剂减少了每个粒度范围内SVP的存在(例如图15A)。因此，在某些实施方案中，本文所公开的干粉制剂包含表面活性剂，其中在重构后，制剂中亚可见颗粒的数量减少。在一些实施方案中，与不含表面活性剂的等效制剂相比，亚可见颗粒的数量减少。

在某些实施方案中，将尺寸为约25μm至约200μm的SVP的数量减少至低于30,000个颗粒/ml，如25,000个颗粒/ml、20,000个颗粒/ml、15,000个颗粒/ml、10,000个颗粒/ml或5,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约25μm至约200μm的SVP的数量减少至低于1,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约25μm至约200μm的SVP的数量减少至低于1,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约25μm至约200μm的SVP的数量减少至低于100个颗粒/ml。

在某些实施方案中，将尺寸为约10μm至约200μm的SVP的数量减少至低于100,000个颗粒/ml，如90,000个颗粒/ml、80,000个颗粒/ml、70,000个颗粒/ml、60,000个颗粒/ml、50,000个颗粒/ml、40,000个颗粒/ml或30,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约10μm至约200μm的SVP的数量减少至低于10,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约10μm至约200μm的SVP的数量减少至低于1,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约10μm至约200μm的SVP的数量减少至低于100个颗粒/ml。

在某些实施方案中，将尺寸为约5μm至约200μm的SVP的数量减少至低于200,000个颗粒/ml，如180,000个颗粒/ml、170,000个颗粒/ml、160,000个颗粒/ml、150,000个颗粒/ml或140,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约5μm至约200μm的SVP的数量减少至低于50,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约5μm至约200μm的SVP的数量减少至低于10,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约5μm至约200μm的SVP的数量减少至低于2,000个颗粒/ml。

在某些实施方案中，将尺寸为约2μm至约200μm的SVP的数量减少至低于1x10⁶颗粒/ml，如0.8x10⁶个颗粒/ml、0.7x10⁶个颗粒/ml、0.6x10⁶个颗粒/ml或0.5x10⁶个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约2μm至约200μm的SVP的数量减少至低于100,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约2μm至约200μm的SVP的数量减少至低于50,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约2μm至约200μm的SVP的数量减少至低于10,000个颗粒/ml。

在某些实施方案中，将尺寸为约1μm至约200μm的SVP的数量减少至低于2x10⁶颗粒/ml，如1.8x10⁶个颗粒/ml、1.7x10⁶个颗粒/ml、1.6x10⁶个颗粒/ml或1.5x10⁶个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约1μm至约200μm的SVP的数量减少至低于200,000个颗粒/ml。在某些实施方案中，将尺寸为约1μm至约200μm的SVP的数量减少至低于150,000个颗粒/ml。

在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约25μm至约200μm的SVP的数量减少超过2倍，如超过3倍、超过4倍、超过5倍、超过6倍、超过7倍、超过8倍或超过9倍。在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约25μm至约200μm的SVP的数量减少超过10倍。

在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约10μm至约200μm的SVP的数量减少超过2倍，如超过3倍、超过4倍、超过5倍、超过6倍、超过7倍、超过8倍或超过9倍。在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约10μm至约200μm的SVP的数量减少超过10倍。

在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约5μm至约200μm的SVP的数量减少超过2倍，如超过3倍、超过4倍、超过5倍、超过6倍、超过7倍、超过8倍或超过9倍。在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约5μm至约200μm的SVP的数量减少超过10倍。

在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约2μm至约200μm的SVP的数量减少超过2倍，如超过3倍、超过4倍、超过5倍、超过6倍、超过7倍、超过8倍或超过9倍。在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约2μm至约200μm的SVP的数量减少超过10倍。在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约2μm至约200μm的SVP的数量减少超过100倍。

在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约1μm至约200μm的SVP的数量减少超过2倍，如超过3倍、超过4倍、超过5倍、超过6倍、超过7倍、超过8倍或超过9倍。在某些实施方案中，与参考对照相比，在重构后将尺寸为约1μm至约200μm的SVP的数量减少超过10倍。

在某些实施方案中，参考对照是缺少表面活性剂的等效制剂。在一些实施方案中，将制剂在水中重构。在一些实施方案中，将制剂重构成活性剂浓度为30mg/ml。在一些实施方案中，将制剂重构成活性剂浓度为2.5mg/ml。在一些实施方案中，通过微流成像(MFI)来确定SVP的数量。在某些实施方案中，使用如实施例中所定义的方法通过微流成像(MFI)来确定SVP的数量。

适用于本文所述的干粉制剂中的示例性表面活性剂包括但不限于聚山梨糖醇酯-20(PS-20)、聚山梨糖醇酯-40(PS-40)、聚山梨糖醇酯-60(PS-60)、聚山梨糖醇酯-80(PS-80)和泊洛沙姆-188。在某些实施方案中，本文所述的制剂包含浓度范围为适当地按重量计约0.27％至按重量计约2.7％、适当地按重量计约0.27％至按重量计约1.33％、适当地按重量计约0.67％至按重量计约1.33％的PS-80。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.3％至按重量计约3％的PS-80。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.3％至按重量计约2.5％的PS-80。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.5％至按重量计约2.5％的PS-80。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.5％至按重量计约2％的PS-80。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.5％至按重量计约1.5％的PS-80。

在示例性实施方案中，制剂包含浓度范围为约0.67％至约1.33％的PS-80。

在示例性实施方案中，制剂包含浓度为0.7％(w/w)、约0.8％(w/w)、约0.9％(w/w)、约1.0％(w/w)、约1.1％(w/w)、约1.2％(w/w)或约1.3％(w/w)的PS-80。在一些实施方案中，制剂包含浓度为约1.1％(w/w)的PS-80。

在示例性实施方案中，组合物包含浓度为0.7％±0.35(w/w)、约0.8％±0.4(w/w)、约0.9％±0.45(w/w)、约1.0％±0.5(w/w)、约1.1％±0.55(w/w)、约1.2％±0.6(w/w)、约1.3％±0.65(w/w)、约1.4％±0.7(w/w)、约1.5％±0.75(w/w)、约1.6％±0.8(w/w)或约1.7％±0.75(w/w)的PS-80。在一些实施方案中，制剂包含浓度为1.1％±0.55(w/w)的PS-80。

在某些实施方案中，本文所述的制剂包含浓度范围为适当地按重量计约1％至按重量计约10％的泊洛沙姆-188。在示例性实施方案中，制剂包含浓度范围为约0.67％至约2.67％的泊洛沙姆-188(P188)。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.3％至按重量计约3％的P188。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.3％至按重量计约2.5％的P188。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.5％至按重量计约2.5％的P188。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.5％至按重量计约2％的P188。在某些实施方案中，制剂包含浓度范围为按重量计约0.5％至按重量计约1.5％的P188。

在示例性实施方案中，制剂包含浓度范围为约0.67％至约1.67％的P188。

在示例性实施方案中，制剂包含浓度为约0.7％(w/w)、约0.8％(w/w)、约0.9％(w/w)、约1.0％(w/w)、约1.1％(w/w)、约1.2％(w/w)、约1.3％(w/w)、约1.4％(w/w)、约1.5％(w/w)、约1.6％(w/w)或约1.7％(w/w)的P188。

在示例性实施方案中，干粉制剂包含约39％的海藻糖、约10.5％的亮氨酸、约2％的三亮氨酸、约8.5％的柠檬酸盐缓冲剂和活性剂。

本文描述了干粉制剂的微粒的合适尺寸，并且在实施方案中，多个微粒在以气溶胶形式提供时具有约2μm至约4pm的质量中值空气动力学直径(MMAD)。微粒的合适比表面积(SSA)描述于本文中，并且包括例如约4-7m²/g的比表面积。适当地，微粒具有约1μm至约5μm的等效光学体积平均直径(oVMD)。

在另外的实施方案中，本文提供了制备干粉制剂的方法。在实施方案中，所述方法适当地包括制备液体原料，所述液体原料包含亮氨酸、约0.1mg/mL至约6mg/mL的三亮氨酸、活性剂，且适当地还包含玻璃稳定剂。如果需要，干粉制剂中可省略如本文所述的玻璃稳定剂。液体原料还可包含表面活性剂。通过将这些组分在液体溶剂中组合来制备液体原料，以产生其中每种组分都被溶解的原料。加热可根据希望或需要而添加，以增加各种组分的溶解度从而形成液体原料。示例性液体溶剂包括水(包括去离子水)以及醇与水的稀释溶液。在实施方案中，在添加并溶解原料的其余组分后，将活性剂适当地添加至液体原料中。

在制备方法的合适的实施方案中，在液体原料中，亮氨酸和三亮氨酸以约0.1∶1至约30∶1的亮氨酸：三亮氨酸浓度比存在。如本文所述，当制备液体原料时，亮氨酸和三亮氨酸以mg/mL的量提供。因此，在此类实施方案中，在液体原料的设定体积中约0.1∶1至约30∶1的亮氨酸：三亮氨酸浓度比对应于在液体原料中按重量计的亮氨酸：三亮氨酸比。在另外的实施方案中，在液体原料中，亮氨酸和三亮氨酸以约0.1∶1至约25∶1、约0.5∶1至约20∶1、约1∶1至约20：1、约1∶1至约15∶1、约1∶1至约12∶1、约1∶1至约10∶1、约1∶1至约7∶1、约1∶1至约6∶1、或约1∶1、约2∶1、约3∶1、约4∶1、约5∶1、约5∶1∶1、约5.2∶1、约5.25∶1、约5.3∶1、约5.4∶1、约5.5∶1、约5.75∶1或约6∶1的亮氨酸：三亮氨酸浓度比存在。

接着可将液体原料雾化。在某些实施方案中，在雾化前对液体原料进行过滤。在某些实施方案中，将液体原料通过0.22微米过滤器进行过滤。在某些实施方案中，在添加活性剂之前，对包含亮氨酸和三亮氨酸的液体原料进行过滤。在某些实施方案中，在添加活性剂之后在雾化之前，对液体原料进行过滤。雾化是指适当地使用加压气体(如C0₂或惰性气体)将液体原料转化成细小液滴。用于生产雾化液体原料的示例性装置在本领域中是已知的，并且包括使用具有所需尺寸和流动特征的各种雾化喷嘴。用于雾化的示例性参数包括出口温度为约50℃-90℃，适当地约60℃-80℃、或约70℃；原料进料速率为约8-15ml/min，适当地约9-14ml/min、约10-13ml/min、或约12ml/min；雾化器气体流速为约9-15kg/小时(hr.或h)，适当地约10-14kg/h、约12-14kg/h、或约13kg/h；以及干燥气体流速为约60-100kg/h，适当地约60-90kg/h、约70-90kg/h、或约80kg/h。

接着可将雾化的液体原料干燥，适当地在加热下并与流动空气组合以辅助干燥。干燥的结果产生多个微粒。干燥温度的范围通常为约50℃-100℃、或约60℃-100℃、或约70℃-90℃；空气流速可近似于约10-40m³/小时。

本文描述了示例性玻璃稳定剂，包括无定形糖和缓冲剂，以及玻璃稳定剂的合适量。此外，全文还提供了亮氨酸和三亮氨酸的合适量。作为最终品的干粉制剂应含有所列举量的亮氨酸和三亮氨酸(和其他组分)，这些量也用于液体原料中。雾化后的干燥过程的结果是液体溶剂都被去除，因此组分的原始干重的总量对应于干粉制剂中化合物的最终干重。本文还描述了示例性活性剂。

本文所述的制备干粉制剂的方法适当地提供了具有所需的记录的物理特征的微粒，这些物理特征包括所需压缩堆积密度、比表面积和尺寸。本文描述了示例性尺寸，如示例性SSA，包括小于约10m²/g、适当地约4-7m²/g的比表面积。适当地，所述方法提供了多个微粒，所述微粒具有约1μm至约5μm的等效光学体积平均直径(oVMD)，如本文所述；当以气溶胶形式提供时，约2μm至约4μm的质量中值空气动力学直径(MMAD)；约0.4g/cm³-0.8g/cm³的压缩堆积密度。

制备本文所述的干粉制剂的方法的优点涉及高生产量过程性质。例如，如果将雾化的流速设置为20ml/min，则确定以下生产量(以克/小时计)。

表2：浓度对生产量的影响

如上所述，仅在原料中使用三亮氨酸(具有5mg/mL的最大三亮氨酸浓度)，达到了25mg/mL的最大固体载荷(与最大溶解度有关)。这导致生产量为30g/小时。仅使用60％的亮氨酸(具有20mg/mL的最大亮氨酸浓度)，达到了33mg/mL的最大固体载荷和40g/小时的生产量。还示出了仅使用亮氨酸和三亮氨酸的另外的结果。相反，对于所检验的含有亮氨酸和三亮氨酸两者的三种原料，仅使用8％的亮氨酸和2％的三亮氨酸可达到250mg/mL的最大固体载荷和300g/小时的生产量。这是本文所公开的方法和制剂的优点的令人惊讶和出乎意料的发现，因为可分散的颗粒可使用相对少量的亮氨酸和三亮氨酸来提供，但是还允许大量的生产量。在需要大量制剂的情况下，这种高生产量极大地影响了扩大本文所述的干粉制剂生产的能力。

本文所述的方法和制剂允许生产胶囊、泡罩包装等，以及其他用于干粉制剂的合适容器。此类容器可生产用于10-200mg的干粉(适当地10-100mg、或25-75mg或50mg)或干粉制剂。此类容器可适当地递送0.1-10mg的干粉制剂至患者肺部。

在一些实施方案中，使用本文所述的方法提供了可降低用于吸入装置中所需的胶囊的总量的干粉制剂。例如，可将递送50-100mg活性剂所需的体积从两个较大的00胶囊减少到单个3号胶囊。

本文所述的方法还提供了增加包含多个微粒的干粉制剂的压缩堆积密度和比表面积的机制。如全文所述，通过将亮氨酸和三亮氨酸掺入干粉制剂中，可容易地实现约0.4-1.0g/cm³(适当地约0.5-0.8g/cm³)的压缩堆积密度。另外，也可实现约5-10m²/g(适当地约5m²/g至约7m²/g)的比表面积。在另外的实施方案中，可形成在本文所述范围内的微粒尺寸，包括当以气溶胶形式提供时，微粒的质量中值空气动力学直径(MMAD)为约2μm至约4μm。

生产干粉制剂的气溶胶形式的方法在本领域中是已知的，并且包括例如使用吸入器装置，如干粉吸入器(DPI)(例如，PLASTIAPE(Osnago，Italy)的Monodose RS01 DPI)。本文所述的干粉制剂可通过被动或主动吸入装置分散到气流中，并保持悬浮于气体中持续足够时间量以使至少一部分微粒被患者吸入，从而使一部分微粒到达肺。

本文还提供了治疗哺乳动物患者的医学疾患的方法，所述方法包括通过吸入(包括通过干粉吸入器)向患者施用如本文所述的干粉制剂。

可使用本文所述的方法治疗的医学疾患包括影响神经系统、内分泌系统、肌肉系统、心血管系统、消化系统、呼吸系统(且尤其是肺)、激素系统、免疫系统、生殖系统等的那些医学疾患。

在实施方案中，本文提供了一种治疗患者的TSLP相关炎性疾患的方法。TSLP相关炎性疾患可能由过敏反应或环境刺激物或刺激剂引起。在一些实施方案中，TSLP相关炎性疾患可能是哮喘、慢性阻塞性肺病、过敏性鼻炎、过敏性鼻窦炎、过敏性结膜炎、特应性皮炎或嗜酸性粒细胞型食道炎。

在一些实施方案中，TSLP相关炎性疾患是哮喘，并且所述治疗方法包括经由吸入向患者施用包含治疗有效量的抗TSLP抗体或抗体片段变体的干粉制剂。在某些实施方案中，患者是成人。在某些实施方案中，患者是儿童或青少年。

如本文所述，干粉制剂适当地包括多个微粒，所述微粒包含：亮氨酸；按重量计约1％至约10％的三亮氨酸；以及抗胸腺基质淋巴细胞生成素(抗TSLP)抗体或抗体变体，其中亮氨酸和三亮氨酸以约0.1∶1至约30∶1的亮氨酸：三亮氨酸浓度比存在。干粉制剂可包含约0.3-1.0g/cm³的压缩堆积密度。全文描述了制剂中包含的示例性组分及其量。

如本文所述，经由吸入递送抗胸腺基质淋巴细胞生成素(抗TSLP)抗体或抗体变体的能力提供了更适于在初级护理环境中使用的递送机制。

在治疗哮喘的方法的实施方案中，将干粉制剂频繁地并以相比全身性施用的抗TSLP药物较低的剂量施用。在一些实施方案中，可每天施用制剂。此类实施方案可更方便地用于受试者或患者。此外，此类实施方案可减少经由全身性施用可能发生的副作用。

适当地，用于治疗方法中的抗体的抗原结合片段包含

重链可变结构域，所述重链可变结构域包含：

包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链CDR1序列；

包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的重链CDR2序列；

包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的重链CDR3序列；

轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含：

包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的轻链CDR1序列；

包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的轻链CDR2序列；和

包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的轻链CDR3序列。

在治疗方法的另外的实施方案中，抗原结合片段包含有包含SEQ ID NO：4的重链可变结构域；和包含SEQ ID NO：8的轻链可变结构域。

在一些实施方案中，适于用本发明的制剂治疗的哮喘形式包括轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、非嗜酸性粒细胞型哮喘、低嗜酸性粒细胞型哮喘和高嗜酸性粒细胞型哮喘。在某些实施方案中，本发明的制剂可用于治疗轻度哮喘。在某些实施方案中，本发明的制剂可用于治疗中度哮喘。在某些实施方案中，本发明的制剂可用于治疗重度哮喘。在某些实施方案中，本发明的制剂可用于治疗非嗜酸性粒细胞型哮喘。在某些实施方案中，本发明的制剂可用于治疗低嗜酸性粒细胞型哮喘。在某些实施方案中，本发明的制剂可用于治疗高嗜酸性粒细胞型哮喘。

如本文所用，术语“轻度哮喘”和“中度哮喘”是指全球哮喘防治倡议(GINA)等级为3或更低、适当地GINA等级为2或3的哮喘。GINA等级基于以下标准测量哮喘的严重程度(参见“Pocket Guide for Asthma Management and Prevention，”Global Initiative forAsthma；2019)。

如本文所用，术语“重度哮喘”是指需要高强度治疗(例如，GINA步骤4和步骤5)以维持良好控制的哮喘，或尽管接受高强度治疗仍未实现良好控制的哮喘(GINA，GlobalStrategy for Asthma Management and Prevention.Global Initiative for Asthma(GINA)2012年12月)。术语“重度哮喘”还涵盖中度-重度哮喘。适于用本文所述的制剂治疗的中度-重度哮喘可为具有一次或多次发作和频繁症状的、中等剂量至高剂量ICS：LABA未控制的哮喘。在某些实施方案中，将重度哮喘进一步定义为具有2型炎症的严重哮喘，其特征在于血液嗜酸性粒细胞升高(即，血液嗜酸性粒细胞计数≥150个细胞/μL)和/或FeNO升高(即FeNO≥20ppb)。

术语“FENO”是指呼出气一氧化氮，其是支气管或气道炎症的生物标志物。FENO由气道上皮细胞响应于炎性细胞因子(如TSLP、IL-4和IL-13)而产生。健康成人的FENO水平范围为十亿分之2至30(ppb)。用于测量FENO的示例性测定包括受试者通过NIOX

气道炎症监测仪吸入肺总容量，接着以50ml/s呼气10秒(通过视觉和听觉提示进行辅助)。

如本文所用，术语“高嗜酸性粒细胞型哮喘”是指筛选血液嗜酸性粒细胞计数≥250个细胞/μL的哮喘患者。

特别地，所述制剂提供了对通常可在初级护理环境中得到控制的不太严重的哮喘患者进行治疗的可能性。例如，患有全球哮喘防治倡议(GINA)等级为3或更低，适当地GINA等级为2或3的患者。GINA等级基于以下标准测量哮喘的严重程度(参见“Pocket Guide forAsthma Management and Prevention，”Global Initiative for Asthma；2019)。

日间哮喘症状每周两次以上；

由于哮喘导致夜醒；

每周使用哮喘缓解剂(reliever)两次以上；以及

由于哮喘而活动受限。这些标准的评分为零被认为是“良好控制的”。这些标准的评分为1-2被认为是“部分控制的”。这些标准的评分为3-4被认为是“未控制的”。

在一些实施方案中，制剂提供了对可在初级护理环境中得到控制的中度-重度哮喘患者或通过专业护理难以治疗的中度-重度哮喘患者进行治疗的可能性。例如，制剂可用于治疗患有全球哮喘防治倡议(GINA)等级为4-5的中度-重度哮喘患者。适当地，制剂提供了对未控制的中度-重度哮喘进行治疗的可能性。适当地，制剂提供了对具有一次或多次发作和频繁症状的、中等剂量至高剂量ICS：LABA未控制的中度-重度哮喘进行治疗的可能性。

其他示例性实施方案

实施方案1是一种干粉制剂，所述干粉制剂包含多个微粒，所述微粒包含：亮氨酸；按重量计约1％至约10％的三亮氨酸；和抗胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)抗体的抗原结合片段，所述抗原结合片段包含：a.重链可变结构域，所述重链可变结构域包含：包含SEQID NO：1所示的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的重链CDR2序列和包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的重链CDR3序列，其中重链CDR1、2或3中的任一者任选地包含单一氨基酸取代，以及b.重链可变结构域，所述重链可变结构域包含：包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的轻链CDR2序列和包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的轻链CDR3序列，其中轻链CDR 1、2或3中的任一者任选地包含单一氨基酸取代，其中所述亮氨酸和所述三亮氨酸以约0.1∶1至约30∶1的亮氨酸：三亮氨酸浓度比存在。

实施方案2是如实施方案1所述的干粉制剂，其中所述干粉制剂具有约0.4-1.0g/cm3的压缩堆积密度。

实施方案3是如前述实施方案中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂还包含玻璃稳定剂。

实施方案4是如实施方案3所述的干粉制剂，其中所述玻璃稳定剂是无定形糖或缓冲剂。

实施方案5是如实施方案3所述的干粉制剂，其中所述玻璃稳定剂包含无定形糖和缓冲剂。

实施方案6是如实施方案4或实施方案5所述的干粉制剂，其中所述无定形糖选自由以下组成的组：海藻糖、蔗糖、棉子糖、菊糖、葡聚糖、甘露醇和环糊精。

实施方案7是如实施方案4-6中任一项所述的干粉制剂，其中所述缓冲剂选自由以下组成的组：柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙酸盐缓冲剂和酒石酸盐缓冲剂。

实施方案8是如实施方案4-7中任一项所述的干粉制剂，其中所述无定形糖以按重量计约30％至约70％存在。

实施方案9是如实施方案4-8中任一项所述的干粉制剂，其中所述无定形糖是海藻糖。

实施方案10是如实施方案9所述的干粉制剂，其中所述海藻糖以按重量计约30％-65％存在。

实施方案11是如实施方案4-10中任一项所述的干粉制剂，其中所述缓冲剂以按重量计约1％至约10％存在。

实施方案12是如实施方案1-11中任一项所述的干粉制剂，其中亮氨酸：三亮氨酸的所述浓度比为约1∶1至约12∶1。

实施方案13是如实施方案1-12中任一项所述的干粉制剂，其中亮氨酸：三亮氨酸的所述浓度比为约1∶1至约7∶1。

实施方案14是如实施方案1-13中任一项所述的干粉制剂，其中亮氨酸：三亮氨酸的所述浓度比为约5.25∶1。

实施方案15是如实施方案1-14中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂包含按重量计约1％至约7％的三亮氨酸。

实施方案16是如实施方案1-15中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂包含按重量计约8％至约11％的亮氨酸和按重量计约2％至约4％的三亮氨酸。

实施方案17是如实施方案1-16中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂包含按重量计约10.5％的亮氨酸和按重量计约2％的三亮氨酸。

实施方案18是如实施方案1-17中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂还包含表面活性剂，其中所述表面活性剂任选地选自聚山梨糖醇酯-20(PS-20)、聚山梨糖醇酯-40(PS-40)、聚山梨糖醇酯-60(PS-60)、聚山梨糖醇酯-80(PS-80)和泊洛沙姆-188。

实施方案19是如实施方案18所述的干粉制剂，其中所述表面活性剂是PS-80，其中任选地PS-80以在按重量计约0.27％至按重量计约2.7％范围内的浓度存在。

实施方案20是如实施方案18所述的干粉制剂，其中所述表面活性剂是泊洛沙姆-188，其中任选地泊洛沙姆-188以在按重量计约1％至按重量计约10％范围内的浓度存在。

实施方案21是如实施方案1-20中任一项所述的干粉制剂，其中所述多个微粒具有约1μm至约5μm的等效光学体积平均直径(oVMD)。

实施方案22是如实施方案1-21中任一项所述的干粉制剂，其中所述多个微粒在以气溶胶形式提供时具有约2μm至约4μm的质量中值空气动力学直径(MMAD)。

实施方案23是如实施方案2-22中任一项所述的干粉制剂，其中所述压缩堆积密度为约0.5g/cm3至约0.8g/cm3。

实施方案24是如实施方案2-23中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂包含约39％的海藻糖、约10.5％的亮氨酸、约2％的三亮氨酸和约8.5％的柠檬酸盐缓冲剂。

实施方案25是如实施方案1-24中任一项所述的干粉制剂，其中所述多个微粒具有小于约10m2/g的比表面积。

实施方案26是如实施方案25所述的干粉制剂，其中所述多个微粒具有约4mg2/g至约7m2/g的比表面积。

实施方案27是如前述实施方案中任一项所述的干粉制剂，其中所述重链可变结构域CDR1包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述重链可变结构域CDR2包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，所述重链可变结构域CDR3包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，所述轻链可变结构域CDR1包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，所述轻链可变结构域CDR2包含SEQID NO：6所示的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域CDR3包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列。

实施方案28是如实施方案27所述的干粉制剂，其中所述抗原结合片段包含有包含SEQ ID NO：4的重链可变结构域和包含SEQ ID NO：8的轻链可变结构域。

实施方案29是如前述实施方案中任一项所述的干粉制剂，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv、微型抗体或双抗体。

实施方案30是如实施方案29所述的干粉制剂，其中所述抗原结合片段是Fab。

实施方案31是如实施方案30所述的干粉制剂，其中所述Fab是人的或人源化的。

实施方案32是如前述实施方案中任一项所述的干粉制剂，其中衍生所述抗原结合片段的所述抗TSLP抗体是IgG1。

实施方案33是一种治疗患者的哮喘的方法，所述方法包括经由吸入施用根据实施方案1-29中任一项所述的干粉制剂。

实施方案34是如实施方案33所述的方法，其中所述哮喘是轻度哮喘。

实施方案35是如实施方案33所述的方法，其中所述哮喘是中度哮喘。

实施方案36是如实施方案33所述的方法，其中所述哮喘是重度哮喘。

实施方案37是如实施方案33所述的方法，其中所述哮喘是嗜酸性粒细胞型或非嗜酸性粒细胞型哮喘。

实施方案38是如实施方案33所述的方法，其中所述哮喘是低嗜酸性粒细胞型哮喘。

实施方案39是如实施方案33-38中任一项所述的方法，其中所述哮喘的特征在于以下情况中的少于三者：日间哮喘症状每周两次以上；由于哮喘导致夜醒；每周使用哮喘缓解剂两次以上；以及由于哮喘而活动受限。

实施方案40是如实施方案1-32中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂用于治疗方法中，其中所述制剂通过吸入施用。

实施方案41是根据实施方案37使用的干粉制剂，所述干粉制剂用于治疗哮喘的方法中。

实施方案42是根据实施方案38使用的干粉制剂，其中所述哮喘是轻度哮喘。

实施方案43是根据实施方案38使用的干粉制剂，其中所述哮喘是中度哮喘。

实施方案44是根据实施方案38使用的干粉制剂，其中所述哮喘是重度哮喘。

实施方案45是根据实施方案38使用的干粉制剂，其中所述哮喘是嗜酸性粒细胞型哮喘或非嗜酸性粒细胞型哮喘。

实施方案46是根据实施方案38使用的干粉制剂，其中所述哮喘是低嗜酸性粒细胞型哮喘。

实施方案47是根据实施方案38使用的干粉制剂，其中所述哮喘的特征在于以下情况中的少于三者：日间哮喘症状每周两次以上；由于哮喘导致夜醒；每周使用哮喘缓解剂两次以上；以及由于哮喘而活动受限。

实施例

实施例1-抗TSLP FAB的产生

使用标准分子生物学和克隆技术，产生了衍生自WO2009/035577(其通过引用整体并入本文)中公开的抗TSLP单克隆抗体“A5”的一系列抗体结合片段(Fab)。简而言之，将A5的CDR序列克隆到IgG1 Fab支架中，产生了本文称为Fab₁或Fab1的Fab片段。Fab₁的VH和VL序列分别公开为SEQ ID NO：4和8。

还从在CDR区中包含突变的Fab₁产生了变体Fab_2-9。表3中示出了Fab 1-9中每一者的VH和VL CDR的组合。

表3抗TSLP Fab_1-9的CDR序列

分析了Fab₁的纯度、稳定性和聚集倾向。简而言之，在30mM柠檬酸钠、105mM海藻糖(pH 6.0)中配制50mg/mL Fab₁。将样品放置在40℃和5℃的稳定箱中持续不同的时间段。在不同的时间点，通过相关的分析技术(如高性能尺寸排阻色谱法(HP-SEC))测试样品。使用来自Agilent Technologies(Santa Clara，CA，USA)的具有温度控制自动进样器、DAD或VWD、以及Agilent ChemStation软件/OpenLAB ECM CDS的Agilent HPLC系统。还使用了来自Tosoh Bioscience(Griesheim，Germany)的保护柱：TSKgel柱(7.9mm ID，目录号08543)和TSK-Gel G3000SWxl柱(5μm，

和7.8x300mm，目录号08541)。所使用的流动相是0.1M无水磷酸氢二钠、0.1M硫酸钠(pH 6.8)。表4中示出了稳定性和聚集分析的结果。

表4 Fab₁的稳定性和聚集性

还通过差示扫描量热法(DSC)测试了Fab₁的稳定性。使用来自MalvernPanalytical(Malvern，UK)的MicroCal Capillary VP DSC进行测试，并使用Origin 7.0软件(Northampton，MA，USA)进行数据分析。用制剂缓冲液(30mM柠檬酸钠、105mM海藻糖，pH6.0)将Fab₁样品稀释至5mg/mL。对于每个独立运行，通过自动进样器将500μL稀释的Fab₁样品和参考物(制剂缓冲液)注入DSC样品和参考细胞中。将溶液在95℃/h的扫描速度下从25℃加热到100℃。还获得了缓冲液(填充在样品和参考细胞中)扫描作为空白，用于样品的基线校正。

还使用iCE3分析仪通过成像等电聚焦(IEF)来确定Fab₁的电荷分布。iCE3毛细管IEF分析仪、PrinCE MicroInjector自动进样器，MicroInjection涂层转移毛细柱从Protein Simple购买和提供。使用带有碳氟化合物涂层的毛细柱和内置电解质罐的FC柱(零件号101701，Protein Simple)来分析样品。在整个分析中，将自动进样器保持在4℃。将Fab1的pI范围确定为8.35至8.80。

实施例2-FAB₁以PM亲和力与人和食蟹猴TSLP结合

通过BIAcore确定Fab₁与TSLP结合的亲和力

使用Biacore 8K SPR仪器(GE Healthcare，Little Chalfont，Bucks，UK)确定Fab₁对表达重组哺乳动物细胞的人和食蟹猴TSLP的特异性和亲和力。

S系列C1生物传感芯片、胺偶联试剂盒(kit)、基于hepes缓冲盐水的缓冲液和再生缓冲液均获自GE Healthcare，并根据制造商的说明书来使用。使用冻干的链霉亲和素(用D-PBS重构)来制备链霉亲和素表面。简而言之，将链霉亲和素在10mM乙酸钠(pH 4.5)中稀释至4μgmL-1，并通过标准胺偶联方法共价固定至S系列C1生物传感芯片的三个流通池表面。实现了170个响应单位(RU)的最终链霉亲和素表面。胺偶联试剂还用于制备对照空白表面(没有固定的链霉亲和素)，以用作每个流通池内的参考表面。接着将N末端标记的生物素化TSLP(人和食蟹猴)滴定到每个链霉亲和素表面上，以使＜100RU的Fab1在饱和状态下结合(Rmax)。低水平的分析物结合确保了质量转移诱导的假像最小化，尤其是与在动力学测量步骤期间使用的相对较快的50μL min-1测定流速组合时。以50μL min-1测定流速注入单体化Fab1的稀释液(多循环动力学)(在HBS-EP+缓冲液中2倍稀释，范围在1.25至20nM之间)，缔合2分钟，并且解离10分钟。在整个实验中，在相同条件下进行多次仅缓冲液注射，以允许对最终传感图集进行双重参考处理。

芯片表面通过流动两个30秒的10mM甘氨酸(pH 1.7)的脉冲完全再生。使用1∶1朗缪尔(Langmuir)模型确定结合亲和力和动力学。

表5中所示的结果证明，Fab₁以相似亲和力(2倍以内；分别为46pM和88pM)与固定的人和食蟹猴TSLP结合。

表5使用BIAcore确定的Fab₁对人和食蟹猴TSLP的亲和力

分析物	k<sub>a</sub>(M<sup>-1</sup>s<sup>-1</sup>)	k<sub>d</sub>(s<sup>-1</sup>)	K<sub>D</sub>(pM)
				人TSLP	2.39E6	1.11E-4	46.3
食蟹猴TSLP	1.75E6	1.55E-4	88.4

通过动力学排除测定(KinExA)确定结合亲和力

还使用KinExA 3200仪器(Sapidyne Instruments，Boise，Idaho，USA)来确定Fab₁对人和食蟹猴TSLP的溶液相结合亲和力(K_D)，并使用KinExA Pro软件版本4.1.11处理所得数据。已综述了KinExA方法(Darling和Brault，2004)。

将Fab₁与不同浓度的每种人和食蟹猴TSLP预混合，直至达到平衡(使用2倍系列稀释法来制备至少12个浓度的每种人和食蟹猴TSLP)。接着使用KinExA仪器，通过用人TSLP包被的珠粒捕获游离Fab、洗去未结合的物质、并且用商业的物种特异性抗体(Alexa Fluor647标记的小鼠抗人重链和轻链特异性抗体(Jackson Immunoresearch 209-605-088))来荧光检测结合的Fab1，从而测量游离Fab₁的量。通过总体1∶1拟合将Fab₁对人TSLP的K_D提取到三个数据集，这三个数据集衍生自人TSLP滴定成1000pM(实心菱形)、500pM(倒置实心三角形)或40pM(空心正方形)固定Fab₁浓度溶液(图1)。通过总体1∶1拟合将Fab₁对食蟹猴TSLP的K_D提取到两个数据集，这两个数据集衍生自食蟹猴TSLP滴定成1000pM(实心菱形)或40pM(空心正方形)固定Fab₁浓度溶液(图2)。

将在每种人和食蟹猴TSLP浓度下检测到的游离Fab₁的量对TSLP的滴定浓度作图(分别为图1和2)。KinExA软件用于计算平衡解离常数(KD)。表6中所示的结果证明，在游离溶液中Fab₁与人TSLP结合的亲和力是其与食蟹猴TSLP结合的亲和力的1.7倍。

表6使用KinExA确定的Fab₁对人和食蟹猴TSLP的可溶相亲和力

配体	亲和力(K<sub>D</sub>)pM
		人TSLP	8.0(95％置信区间6.27-10.01pM)
食蟹猴TSLP	13.6(95％置信区间9.07-19.22pM)

实施例3-FAB1和特折鲁单抗以相似结合特征与TSLP结合

将Fab₁与人TSLP的结合特征直接与特折鲁单抗进行比较。特折鲁单抗是人免疫球蛋白G2(lgG2)单克隆抗体(mAb)，可与TSLP结合，从而阻止其与TSLP受体复合物的相互作用。在轻度特应性哮喘患者中进行的概念验证研究表明，特折鲁单抗在吸入过敏原激发后抑制了早期和晚期哮喘响应，并遏制了Th2炎症的生物标志物。目前临床上正在对特折鲁单抗进行研究，以作为治疗重度哮喘的专业护理治疗。

使用基于均相荧光共振能量转移(FRET)均相时间分辨荧光(

CisbioInternational)的TSLP：mAb结合测定来测定Fab₁的体外结合效力。链霉亲和素穴状化合物用于检测生物素化的TSLP。简而言之，将未标记的Fab₁的样品滴定到HTRF测定中，以与DyLight标记的特折鲁单抗竞争与生物素化的His-Avi人TSLP的结合。还使用未标记的特折鲁单抗和DyLight标记的特折鲁单抗(作为阳性对照)进行了竞争测定。

结果表明，Fab₁与特折鲁单抗竞争与人TSLP的结合，并以与特折鲁单抗相似的效力与人TSLP结合(IC50：Fab₁-0.38nM；特折鲁单抗-0.23nM-图3)。还使用Fab_2-9进行了HTRF测定，其表明这些Fab中的每一个也都与特折鲁单抗竞争与人TSLP的结合，并以与特折鲁单抗相似的效力与人TSLP结合(表7)。

表7如通过HTRF测定所确定的Fab_2-9的IC₅₀

	IC<sub>50</sub>nM
		Fab<sub>2</sub>	0.29
Fab<sub>3</sub>	0.24
		Fab<sub>4</sub>	0.36
Fab<sub>5</sub>	0.42
		Fab<sub>6</sub>	0.32
Fab<sub>7</sub>	0.24
		Fab<sub>8</sub>	0.29
Fab<sub>9</sub>	0.29

实施例4-在外周血单核细胞(PBMC)测定中Fab₁中和TSLP活性

接下来，通过在用Fab₁治疗后测量TSLP诱导的CCL17从PBMC的释放来确定Fab₁与TSLP的结合在原代细胞测定中是否具有功能性阻断活性。

根据MedImmune，Cambridge，UK建立的献血者程序，从健康供体获取血液。通过标准程序使用ficoll梯度分离外周血单核细胞。简而言之，将20ml用PBS稀释的血液(10ml血液：30ml PBS)铺层在15ml ficoll上。将管在室温下以400g旋转40min，无制动。收集PBMC层，并用50ml PBS洗涤细胞两次。将PBMC用细胞计数器和锥虫蓝进行计数以排除死细胞，然后重悬于培养基(含10％胎牛血清和1％青霉素/链霉素的RPMI)中，然后铺板到96孔板中。在结合TSLP的抗体片段Fab₁的存在下，用TSLP(0.5ng/ml)刺激细胞48h。还使用结合TSLP的抗体特折鲁单抗(作为阳性对照)进行测定。48h后，根据制造商的方案，去除上清液并使用R&D duoset ELISA测定CCL17的产生。在三个独立的实验中使用六个供体进行实验。

结果表明，Fab₁抑制从PBMC产生CCL17，其中IC₅₀为1.39nM(图4)。除了使用Fab₁、Fab₂和Fab₃(包含表3中概述的可变重链序列和可变轻链序列)之外，还重复进行测定，并且获得了相似的结果(图5)。

实施例5-在食蟹猴吸入FAB1后确定最大耐受剂量和药代动力学

本研究的目的是确定食蟹猴在经面罩的吸入暴露后雾化的Fab₁的最大耐受剂量(MTD)或最大可行剂量(MFD)和药代动力学(PK)。

雌性食蟹猴接受单次8min和20min的Fab₁吸入(第1组和第2组，每组三只动物)。基于25％的肺沉积，第1组和第2组中递送到肺的剂量为1和2mg/kg。第3组是重复剂量递增。一只雌性食蟹猴和一只雄性食蟹猴如下进行治疗：前2天每天吸入8min，每天吸入20min持续2天，每天吸入60min持续3天。收集连续血液样品以获得Fab₁血清PK和尿素浓度。收集支气管肺泡灌洗(BAL)样品以获得Fab₁ PK和尿素浓度。使用尿素浓度作为稀释标志物从BAL计算上皮层液体(ELF)。将混合免疫亲和性LC-MS/MS方法用于确定血清和BAL样品基质中的Fab₁浓度。定量的下限是血清中4ng/mL和BAL中10ng/mL。使用Phoenix WinNonlin(7.0版，Certara，L.P.，St Louis，MO)对单个血浆PK数据进行非隔室(NCA)分析。

吸入Fab₁后，血清PK、BAL和ELF浓度随剂量而增加，并且Fab₁浓度具有高度可变性(图6A至图6C)。Fab1的平均血清终末半衰期范围在9.75至13.6h之间。在吸入后2至4h的中值T_max时达到血清C_max。吸入后ELF的浓度远高于血清(＞2000倍高)，这表明吸入剂量后Fab₁在血清中的分布低。

实施例6：评估包含亮氨酸和三亮氨酸的喷雾干燥的制剂的物理特征

以下方法评估了三亮氨酸和亮氨酸浓度比对颗粒特性的影响。

在10％的总原料固体浓度下，使用相同的工艺参数，将不同的三亮氨酸、亮氨酸和海藻糖(TLT)wt％的总计24种粉末在试验性规模喷雾干燥器上进行喷雾干燥。由于原料在总固体浓度为10％(100mg/mL)下进行制备，本研究中所有wt％值也与浓度值(mg/mL)相同。表8中示出了每种颗粒赋形剂的浓度值的范围。

表8：颗粒组分组成范围

组分	最小值	最大值
			三亮氨酸	0.71mg/mL	5.72mg/mL
亮氨酸	0.62mg/mL	19.94mg/mL
			海藻糖	65.84mg/mL	90.16mg/mL
柠檬酸三钠	8.5mg/mL	8.5mg/mL

通过将赋形剂溶解于水中来制备每种原料(表9)。一旦将所有赋形剂完全溶解，则使用以下工艺参数对原料进行喷雾干燥：出口温度，70℃；原料进料速率，12ml/min；雾化器气流，13kg/h；以及干燥气流，80kg/h。选择参数以获得用于吸入的干粉制剂的目标颗粒和气溶胶特性。以18g的批量大小制造24种制剂中的每一种，以提供足够的粉末用于表征和产品性能评估。将批次随机化并在两天内生产。

表9：制剂1-24的原料浓度

测试了所有制剂的以下物理粉末特征

表10：分析的颗粒参数

¹压缩力为300,000N/m²，或者如果使用12.7mm样品室，则为38N。

使用

模型1360密度分析仪(Micromeritics，Norcross，GA)来测量粉末的压缩堆积密度(CBD)。在低湿度环境(＜5％RH)中制备粉末样品，之后将样品转移到已用氮气吹扫的密度分析仪样品室。记录粉末样品的净重，接着通过柱塞以每秒300个固结步骤的速率向样品施加12N的压缩力。将每个固结步骤中柱塞行进的直线距离转换为粉末样品的体积位移。接着将来自每个固结步骤的测量值平均数转换为计算的堆积密度值，以g/cm³表示。

结果表明，发现亮氨酸和三亮氨酸的含量对颗粒特性有显著影响。三亮氨酸被认定为具有最大影响的主要因素，而亮氨酸被认定为也具有显著影响的次要因素。结果总结于表11中。

表11：颗粒表征的结果

¹压缩力为300,000N/m²，或者如果使用12.7mm样品室，则为38N。

实施例7-亮氨酸/三亮氨酸制剂的气溶胶性能特征

以下实施例在干粉吸入器装置中评估了包含亮氨酸和三亮氨酸的制剂的气溶胶性能。对表4中列出的24种制剂中的20种测试了表7中列出的气溶胶性能输出。使用Monodose RS01装置利用3号胶囊完成所有产品性能表征。以60L/min的流速进行新一代撞击器(NGI)分析。

根据USP<601>进行级联撞击测试，以测量从干粉吸入器装置递送时喷雾干燥的制剂的气溶胶性能。所使用的级联撞击器设备是新一代撞击器(NGI；USP41，第<601>章)。对于在这些实施例中进行的气溶胶测量，将含有喷雾干燥的粉末制剂的一个3号HPMC胶囊从干粉吸入器装置中分散出来，并按照USP方法学在60L/min的抽真空下递送到NGI中。回收NGI每个阶段的样品，并通过280nm的UV吸收来测定蛋白质含量。由这些测量计算出的主要气溶胶性能参数为：a)细颗粒级分＜5μm(FPF＜5μm)，定义为从装置射出的粉末级分的空气动力学粒径测量为＜5μm；以及b)质量中值空气动力学直径MMAD。

表12：气溶胶表征

气溶胶分析的结果总结在表13中。

表13：气溶胶表征的结果

实施例8-产生包含抗TSLP抗体结合片段(Fab)的可吸入亮氨酸/三亮氨酸制剂

测试了包含不同Fab的另一种制剂的特征。使用了抗TSLP Fab，其衍生自特异性结合TSLP(胸腺基质淋巴细胞生成素)的人IgG1单克隆抗体(参见本文所提供的SEQ ID NO：1-8所示的序列)。产生包含表14中概述的质量浓度的不同制剂。

表14：喷雾干燥的含有抗TSLP Fab的制剂的组成

首先在包含105mM海藻糖、30mM柠檬酸盐(pH6.0)的液体缓冲液中接收抗TSLPFab。将亮氨酸、三亮氨酸、海藻糖和柠檬酸盐溶解于单独的水溶液中，接着将其添加到抗TSLP Fab溶液中以产生大量液体原料溶液用于喷雾干燥。表15总结了为了获得目标粉末制剂组合物而制备的原料组合物。接着使用表16中列出的工艺参数对液体原料溶液进行喷雾干燥。选择参数以获得用于吸入的干粉制剂的目标颗粒和气溶胶特性。

表15用于喷雾干燥的液体原料的组成

表16：关键喷雾干燥工艺参数

	制剂#1	制剂#2	制剂#3
				出口温度(℃)	70	70	70
原料进料速率(mL/min)	20	17	3
				雾化器气流(kg/h)	13	13	2.1
干燥气流(kg/h)	155	155	59.5

表17总结了喷雾干燥制剂的粉末和气溶胶性能表征的结果。对于气溶胶性能测量，用填充在3号HPMC胶囊中并从干粉吸入器装置分散的20mg喷雾干燥的粉末来测试所有三种制剂。

表17喷雾干燥的含有抗TSLP Fab的制剂的粉末和气溶胶特性

特别值得注意的是，由于粉末的高堆积密度，成功将50mg的制剂#3填充到单个3号HPMC胶囊中。高堆积密度(cBD)能够实现从单个胶囊递送非常高的有效负载(FPM＜5μm时为约14mg，FPF为82％，MMAD为2.4μm)。

另外，制剂#3表现出与抗IL-4 Fab制剂#2(cBD＝0.59g/cm3，SSA＝4.5m2/g)相似的cBD(0.58g/cm3)和SSA(4.6m2/g)，这表明粉末特性在包含不同活性成分的药物制剂之间转换。

实施例9-三个批量大小的喷雾干燥的抗TSLP制剂的粉末和气溶胶特性

此实施例使用较大的批量大小提供了对抗TSLP Fab亮氨酸/三亮氨酸制剂的粉末和气溶胶特性的分析，从而能够进行非GLP和GLP吸入毒理学研究。扩大规模需要使用替代性规模喷雾干燥器设备，并调整至喷雾干燥工艺参数，以解决流经系统的热量和质量的增加以及延长加工运行的需求。

以增加的批量大小制造了三个批次的喷雾干燥的抗TSLP Fab制剂。这些批次包含：抗TSLP Fab 40％w/w、海藻糖39％w/w、亮氨酸10.5％w/w、三亮氨酸2％w/w和柠檬酸盐(pH 6.0)8.5％w/w。表18中示出了每个批次选择的工艺参数。

表18批量大小增加的三个抗TSLP Fab制剂批次的喷雾干燥器工艺参数

*加工的粉末重量。

用3号HPMC胶囊中的50mg的粉末填充质量进行批次#1的气溶胶性能测试，而用20mg填充质量来测试批次#2和批次#3。虽然随着批量大小从8.5g批量大小增加到1.2kg，oVMD略有增加，但实现了在0.45至0.85g/cm³之间的压缩粉末堆积密度(cBD)。还在不依赖于批量大小的情况下维持了粉末的气溶胶性能，其中从基于胶囊的吸入器装置高有效负载地递送了抗TSLP Fab。这证明了制剂的可扩展性，其中对喷雾干燥器过程进行最少的调整。表19总结了粉末表征和气溶胶性能测试的全部结果。

表19批量大小增加的三个抗TSLP Fab批次的粉末特性和气溶胶性能

实施例10对包含表面活性剂的亮氨酸/三亮氨酸制剂的进一步表征.

产生了包含不同量的PS-80的另外批次的三亮氨酸/亮氨酸制剂。表20中示出了用于产生每个批次的制剂组成和工艺参数。否则如实施例6中所述产生制剂。

使用实施例7中公开的方法来分析表20中的制剂的气溶胶特性。表21中示出了分析的结果。

表21：包含PS-80的制剂的气溶胶性能

还使用前述实施例中描述的方法测量了聚集体含量、oVMD、残余水分含量、Tg、cBD和SSA。表22中示出了粉末特性分析的结果。

表22：包含FAB₁和不同(w/w)量的PS-80的干粉制剂的粉末特性

*nm-未测量

分析表明，不论PS-80的％(w/w)量如何，粉末特性在很大程度上等效于对照制剂。

接下来分析表22中所述的制剂的亚可见颗粒(SVP)的含量。使用微流成像技术(MFI)测量亚可见颗粒(SVP)计数。MFI结合了微流显微镜和高分辨率成像颗粒分析来定量SVP计数，并将这些计数在整个粒度范围内进行分类。在测试之前，将粉末样品溶解于水中，并轻轻涡旋以确保颗粒分布均匀，接着将其装载到Protein Simple MFI 5200(CA，USA)上。将结果报告为每ml不同粒度(≤1μm、≤2μm、≤5μm、≤10μm和≤25μm)的计数。图14A示出在干粉制剂中包含0.27％(w/w/)的PS-80降低了重构后每ml SVP的绝对数量。SVP计数减少随着PS-80浓度的增加而降低。添加0.67％(w/w)PS-80后看到SVP的显著降低，其中粒径大于5μm的SVP的量可忽略不计。当将制剂重构成浓度为30mg/ml FAB₁或2.5mg/ml FAB₁时，观测到这种趋势(图14B)。

如上文所述对第二种含有赋形剂的制剂进行SVP的制剂表征和分析。在这项研究中，与PS-80对照，将泊洛沙姆188用作赋形剂。

检查了泊洛沙姆188的多个％w/w量。用于产生每个制剂批次的制剂组成和工艺参数如表20中针对含有PS-80的制剂所述。修改海藻糖的量以补偿泊洛沙姆188的可变量。

还使用前述实施例中描述的方法测量了聚集体含量、oVMD、残余水分含量、Tg、cBD和SSA。表23中示出了粉末特性分析的结果。

表23：包含FAB₁和不同(w/w)量的泊洛沙姆-188的干粉制剂的粉末特性.

*nm-未测量

还使用实施例7中公开的方法来分析泊洛沙姆-188制剂的气溶胶特性。表24中示出了结果。

表24：包含泊洛沙姆-188(P188)的制剂的气溶胶性能

使用以上所述的方法来分析P188制剂的SVP含量。图15A示出在干粉制剂中包含0.67％(w/w)的P188降低了重构后每ml SVP的绝对数量。当将制剂重构成浓度为30mg/mlFAB₁(图15A)或2.5mg/ml FAB₁(图15B)时，观测到这种趋势。

实施例11包含1.1％(w/w)PS-80的亮氨酸/三亮氨酸制剂的表征.

在此实施例中，分析了包含1％或40％(w/w)Fab₁和1.1％(w/w/)PS-80的干粉制剂的粉末特性。表25中示出了完整的制剂组成。如实施例6中所述制造制剂。

表25：包含1.1％(w/w)PS-80和40％(w/w)或1％(w/w)Fab₁的干粉制剂中的赋形剂的按重量计的量

	Fab<sub>1</sub> 40％(w/w)	Fab<sub>1</sub> 1％(w/w)
			三亮氨酸	2	2
亮氨酸	10.5	10.5
			海藻糖	37.9	76.9
柠檬酸盐缓冲剂	8.5	8.5

在40℃和75％相对湿度(40/75)或25℃和60％相对湿度(25/60)下储存一个月或三个月后，分析制剂的稳定性。测试了粒度分布、水分含量和表面皱褶度。图16A和图16B示出包含40％(w/w)Fab₁的制剂的水分含量和粒度分布随时间保持稳定。图16C示出颗粒的形态随时间保持一致。图17A和图17B示出包含1％(w/w)Fab₁的制剂的水分含量和粒度分布随时间保持稳定。图17C示出颗粒的形态随时间保持一致。

分析了重构后在40/75下储存1或3个月或在25/60下储存3个月后的SVP的形成。如实施例8所述进行分析。图18A示出在将40％(w/w)Fab₁制剂重构成Fab₁浓度为30mg/ml后，在每种条件下形成的SVP的量不变。图18B示出在将1％(w/w)Fab₁制剂重构成Fab₁浓度为0.75mg/ml后，在每种条件下形成的SVP的量不变。

在储存后还测试了气溶胶特征。表26和表27中示出了结果。

表26：紧随制造以及在40/75下储存1或3个月或在25/60下储存3个月后包含40％(w/w)Fab₁和1.1％(w/w)PS-80的制剂的气溶胶性能.

表27：紧随制造以及在40/75下储存1或3个月或在25/60下储存3个月后包含1％(w/w)Fab₁和1.1％(w/w)PS-80的制剂的气溶胶性能.

在每种条件下储存每种制剂后，还表征了递送剂量(DD)百分比。表26和表27中示出了结果。

在40/75下储存1或3个月或在25/60下储存3个月后，还测试了表25中所述的每种制剂中Fab₁的效力。

使用均相时间分辨荧光(HTRF)来确定效力。HTRF结合了荧光共振能量转移技术(FRET)与时间分辨测量法(TR)。当两个荧光团(供体和受体)彼此靠近时，激发供体会促使能量转移到受体，从而产生FRET信号。在该测定中，与生物素化的人TSLP结合的链霉亲和素-铕穴状化合物是供体，而d2标记的抗TSLP mAb是受体。FAB₁与人TSLP结合并阻止标记的mAb结合。这进而增加了供体和受体荧光团之间的距离，并导致FRET信号减弱。

在评估参考标准与测定对照之间或参考标准与测试样品之间的平行度后，进行约束的四参数对数(4PL)曲线拟合，并通过将参考标准品的IC50值除以测定对照或每个测试样品的IC50值并乘以100％来计算FAB₁测定对照和测试样品的相对效力。

Fab₁的效力水平在等效制剂立即重构(即t＝0)的Fab₁效力的85％至110％之间。

参考文献：

Darling RJ，Brault PA.Assay and Drug Development Technologies.2004；2：647-657

Gauvreau GM，O′Byrne PM，Boulet LP，等人N Engl J Med 2014；370：2102-10

Tepper，JS，et al Int J Toxicol 2016；35：376-92

Rennard，SI，et al J Appl Physiol 1986；60：532-538

相关领域的普通技术人员将容易明白的是，在不脱离任何实施方案的范围的情况下，可对本文所述的方法和应用做出其他合适的修改和调整。以下实施例仅出于说明的目的而被包括在此并且不旨在是限制性的。

应当理解，虽然本文已说明和描述了某些实施方案，但是权利要求并不局限于所描述和显示的部分的具体形式或布置。在本说明书中，已公开了说明性实施方案，并且尽管使用了具体的术语，但是它们仅在一般意义和描述意义上使用并且不出于限制的目的。鉴于以上教导内容，可对这些实施方案进行修改和改变。因此，应当理解，这些实施方案能以不同于具体描述的方式进行实践。

尽管上文已描述了各种实施方案，但是应当理解，它们仅作为本发明技术的说明和实施例来呈现，而不是作为限制。相关领域的技术人员将明白的是，在不脱离本发明技术的精神和范围的情况下，可在形式和细节上进行各种改变。因此，本发明技术的宽度和范围不应受任何上文描述的实施方案的限制，而应当仅根据所附权利要求及其等同物来限定。还应当理解，本文讨论的每个实施方案的每个特征以及本文引用的每个参考文献的每个特征可与任何其他实施方案的特征结合使用。本文讨论的所有专利和出版物均以引用方式整体并入本文。

序列表

<110> 免疫医疗有限公司

<120> 结合胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的抗体的干粉制剂及其使用方法

<130> LC22310013P

<160> 31

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> HCDR1 FAB1

<400> 1

Thr Tyr Gly Met His

1 5

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> HCDR2 FAB1

<400> 2

Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 3

<211> 13

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> HCDR3 FAB1

<400> 3

Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 4

<211> 122

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 重链VH FAB1

<400> 4

Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val

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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn

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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

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Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp

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Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 5

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

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<223> LCDR1 FAB1

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Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 6

<211> 7

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> LCDR2 FAB1

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Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser

1 5

<210> 7

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> LCDR3 FAB1

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Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Val Val

1 5 10

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

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<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链VL

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链VL FAB1

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Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val

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His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr

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Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

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Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly

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Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

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<210> 9

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<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> misc_feature

<223> 可变重链FAB1

<400> 9

cagatgcagt tggttgaatc tggtggcggc gtggtgcagc ctggcagatc tctgagactg 60

tcttgtgccg cctccggctt caccttcaga acctacggaa tgcactgggt ccgacaggcc 120

cctggcaaag gattggaatg ggtcgccgtg atttggtacg acggctccaa caagcactac 180

gccgactccg tgaagggcag attcaccatc accagagaca actccaagaa caccctgaac 240

ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc tagagcccct 300

cagtgggaac tcgtgcatga ggcctttgac atctggggcc agggaacaat ggtcaccgtc 360

tcctca 366

<210> 10

<211> 324

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> misc_feature

<223> FAB1可变轻链

<400> 10

tcatatgttc ttacacaacc accgtcggtt tcggttgctc caggacaaac agctcgaatt 60

acatgcggag gaaacaacct cggatcgaag tcggttcact ggtatcaaca aaagccagga 120

caagctccag ttctcgtggt gtacgatgat tcagatcgac catcatggat cccagagcga 180

ttctcaggat caaactcggg aaatactgcc acgctcacaa tttcacgcgg agaagcggga 240

gatgaagctg attactattg ccaagtgtgg gactcgtcgt cagatcatgt tgttttcgga 300

ggtggaacaa agctcacagt gctc 324

<210> 11

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> LCDR1 FAB2

<400> 11

Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 12

<211> 108

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链FAB2

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链VL FAB2

<400> 12

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr

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Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

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Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His

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Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> LCDR1 FAB3

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<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链FAB3

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链VL FAB3

<400> 14

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1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Val Gly Ser Lys Ser Val

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Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly

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Gly

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<221> MISC_FEATURE

<223> 重链FAB4

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<221> MISC_FEATURE

<223> 重链VH FAB4

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Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Glu Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp

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Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

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<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> HCDR2 FAB5

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Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys

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Ala

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<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 重链FAB5

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 重链VH FAB5

<400> 18

Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

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Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Ala Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 19

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> LCDR1 FAB6

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Gly Gly Gln Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 20

<211> 108

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链FAB6

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链VL FAB6

<400> 20

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Gln Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr

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Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

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Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly

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Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His

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Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

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<210> 21

<211> 11

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<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> LCDR1 FAB7

<400> 21

Gly Gly Asn Gln Leu Gly Ser Lys Ser Val His

1 5 10

<210> 22

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<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链FAB7

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链VL FAB7

<400> 22

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Gln Leu Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

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Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

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<210> 23

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> LCDR3 FAB8

<400> 23

Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Asp His Val Val

1 5 10

<210> 24

<211> 108

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链FAB8

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链VL FAB8

<400> 24

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr

35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Thr Ser Ser Asp His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 25

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> LCDR3 FAB9

<400> 25

Gln Val Trp Asp Ser Thr Ser Asp His Val Val

1 5 10

<210> 26

<211> 108

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链FAB9

<220>

<221> MISC_FEATURE

<223> 轻链VL FAB9

<400> 26

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr

35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Thr Ser Asp His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 27

<211> 159

<212> PRT

<213> 智人(homo sapiens)

<400> 27

Met Phe Pro Phe Ala Leu Leu Tyr Val Leu Ser Val Ser Phe Arg Lys

1 5 10 15

Ile Phe Ile Leu Gln Leu Val Gly Leu Val Leu Thr Tyr Asp Phe Thr

20 25 30

Asn Cys Asp Phe Glu Lys Ile Lys Ala Ala Tyr Leu Ser Thr Ile Ser

35 40 45

Lys Asp Leu Ile Thr Tyr Met Ser Gly Thr Lys Ser Thr Glu Phe Asn

50 55 60

Asn Thr Val Ser Cys Ser Asn Arg Pro His Cys Leu Thr Glu Ile Gln

65 70 75 80

Ser Leu Thr Phe Asn Pro Thr Ala Gly Cys Ala Ser Leu Ala Lys Glu

85 90 95

Met Phe Ala Met Lys Thr Lys Ala Ala Leu Ala Ile Trp Cys Pro Gly

100 105 110

Tyr Ser Glu Thr Gln Ile Asn Ala Thr Gln Ala Met Lys Lys Arg Arg

115 120 125

Lys Arg Lys Val Thr Thr Asn Lys Cys Leu Glu Gln Val Ser Gln Leu

130 135 140

Gln Gly Leu Trp Arg Arg Phe Asn Arg Pro Leu Leu Lys Gln Gln

145 150 155

<210> 28

<211> 227

<212> PRT

<213> 智人(Homo Sapiens)

<400> 28

Gln Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Thr Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Thr Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Pro Gln Trp Glu Leu Val His Glu Ala Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

115 120 125

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

130 135 140

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

145 150 155 160

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

165 170 175

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

180 185 190

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

195 200 205

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser

210 215 220

Cys Asp Lys

225

<210> 29

<211> 214

<212> PRT

<213> 智人(Homo Sapiens)

<400> 29

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Leu Gly Ser Lys Ser Val

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr

35 40 45

Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Trp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Gly Glu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys

100 105 110

Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln

115 120 125

Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly

130 135 140

Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly

145 150 155 160

Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala

165 170 175

Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser

180 185 190

Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val

195 200 205

Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210

<210> 30

<211> 681

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 30

cagatgcagt tggttgaatc tggtggcggc gtggtgcagc ctggcagatc tctgagactg 60

tcttgtgccg cctccggctt caccttcaga acctacggaa tgcactgggt ccgacaggcc 120

cctggcaaag gattggaatg ggtcgccgtg atttggtacg acggctccaa caagcactac 180

gccgactccg tgaagggcag attcaccatc accagagaca actccaagaa caccctgaac 240

ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc tagagcccct 300

cagtgggaac tcgtgcatga ggcctttgac atctggggcc agggaacaat ggtcaccgtc 360

tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg caccctcctc caagagcacc 420

tctgggggca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480

gtgtcgtgga actcaggcgc cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag 540

tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgacagtgc cctccagcag cttgggcacc 600

cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagagagtt 660

gagcccaaat cttgtgacaa a 681

<210> 31

<211> 642

<212> DNA

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 31

tcatatgttc ttacacaacc accgtcggtt tcggttgctc caggacaaac agctcgaatt 60

acatgcggag gaaacaacct cggatcgaag tcggttcact ggtatcaaca aaagccagga 120

caagctccag ttctcgtggt gtacgatgat tcagatcgac catcatggat cccagagcga 180

ttctcaggat caaactcggg aaatactgcc acgctcacaa tttcacgcgg agaagcggga 240

gatgaagctg attactattg ccaagtgtgg gactcgtcgt cagatcatgt tgttttcgga 300

ggtggaacaa agctcacagt gctcggtcag cccaaggctg ccccctcggt cactctgttc 360

ccgccctcct ctgaggagct tcaagccaac aaggccacac tggtgtgtct cataagtgac 420

ttctacccgg gagccgtgac agtggcctgg aaggcagata gcagccccgt caaggcggga 480

gtggagacca ccacaccctc caaacaaagc aacaacaagt acgcggccag cagctatctg 540

agcctgacgc ctgagcagtg gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa 600

gggagcaccg tggagaagac agtggcccct acagaatgtt ca 642

Claims

1.一种干粉制剂，所述干粉制剂包含多个微粒，所述微粒包含：

a.亮氨酸；

b.按重量计约1％至约10％的三亮氨酸；以及

c.抗胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)抗体的抗原结合片段，所述抗原结合片段包含：

重链可变结构域，所述重链可变结构域包含：

i.包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链CDR1序列；

ii.包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的重链CDR2序列；和

iii.包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的重链CDR3序列，其中重链CDR1、2或3中的任一者任选地包含单一氨基酸取代，和

轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含：

i.包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的轻链CDR1序列；

ii.包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的轻链CDR2序列；和

iii.包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的轻链CDR3序列；其中轻链CDR1、2或3中的任一者任选地包含单一氨基酸取代，

其中所述亮氨酸和所述三亮氨酸以约0.1∶1至约30的亮氨酸：三亮氨酸浓度比存在。

2.如权利要求1所述的干粉制剂，其中所述干粉制剂具有约0.4-1.0g/cm³的压缩堆积密度。

3.如前述权利要求中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂还包含玻璃稳定剂。

4.如权利要求3所述的干粉制剂，其中所述玻璃稳定剂是无定形糖或缓冲剂。

5.如权利要求3所述的干粉制剂，其中所述玻璃稳定剂包含无定形糖和缓冲剂。

6.如权利要求4或权利要求5所述的干粉制剂，其中所述无定形糖选自由以下组成的组：海藻糖、蔗糖、棉子糖、菊糖、葡聚糖、甘露醇和环糊精。

7.如权利要求4-6中任一项所述的干粉制剂，其中所述缓冲剂选自由以下组成的组：柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、组氨酸缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、乙酸盐缓冲剂和酒石酸盐缓冲剂。

8.如权利要求4-7中任一项所述的干粉制剂，其中所述无定形糖是海藻糖。

9.如权利要求1-8中任一项所述的干粉制剂，其中亮氨酸：三亮氨酸的所述浓度比为约1∶1至约12∶1、任选地约1∶1至约7∶1、任选地约5.25∶1。

10.如权利要求1-9中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂包含按重量计约8％至约11％的亮氨酸和按重量计约2％至约4％的三亮氨酸。

11.如权利要求1-10中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂包含按重量计约10.5％的亮氨酸和按重量计约2％的三亮氨酸。

12.如权利要求1-11中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂还包含表面活性剂，其中所述表面活性剂任选地选自聚山梨糖醇酯-20(PS-20)、聚山梨糖醇酯-40(PS-40)、聚山梨糖醇酯-60(PS-60)、聚山梨糖醇酯-80(PS-80)和泊洛沙姆-188。

13.如权利要求12所述的干粉制剂，其中所述表面活性剂是PS-80，其中任选地PS-80以在按重量计约0.27％至按重量计约2.7％、任选地按重量计约0.67％至按重量计约1.33％范围内的浓度存在。

14.如权利要求13所述的干粉制剂，其中所述PS-80以按重量计约1.1％的浓度存在。

15.一种干粉制剂，所述干粉制剂包含多个微粒，所述微粒包含：

a.按重量计约10.5％的亮氨酸；

b.按重量计约2％的三亮氨酸；

c.按重量计约1％至约40％的抗胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)抗体的抗原结合片段，所述抗原结合片段包含：

重链可变结构域，所述重链可变结构域包含：

i.包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重链CDR1序列；

ii.包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的重链CDR2序列；和

轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含：

i.包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列的轻链CDR1序列；

ii.包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列的轻链CDR2序列；和

iii.包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列的轻链CDR3序列；其中轻链CDR 1、2或3中的任一者任选地包含单一氨基酸取代；

d.按重量计约1.1％的聚山梨糖醇酯-80；以及

e.按重量计用以补足至100％的量的海藻糖。

16.如前述权利要求中任一项所述的干粉制剂，其中所述重链可变结构域CDR1包含SEQID NO：1所示的氨基酸序列，所述重链可变结构域CDR2包含SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列，所述重链可变结构域CDR3包含SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，所述轻链可变结构域CDR1包含SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列，所述轻链可变结构域CDR2包含SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列，并且所述轻链可变结构域CDR3包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列。

17.如权利要求16所述的干粉制剂，其中所述抗原结合片段包含：

a.包含SEQ ID NO：4的重链可变结构域；和

b.包含SEQ ID NO：8的轻链可变结构域。

18.如权利要求17所述的干粉制剂，其中所述抗原结合片段包含具有SEQ ID NO：28所示的序列的重链和具有SEQ ID NO：29所示的序列的轻链。

19.如前述权利要求中任一项所述的干粉制剂，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv、微型抗体或双抗体。

20.如权利要求19所述的干粉制剂，其中所述抗原结合片段是Fab。

21.如权利要求20所述的干粉制剂，其中所述Fab是人的或人源化的。

22.如前述权利要求中任一项所述的干粉制剂，其中衍生所述抗原结合片段的所述抗TSLP抗体是IgG1。

23.一种治疗患者的哮喘的方法，所述方法包括经由吸入施用根据权利要求1-22中任一项所述的干粉制剂。

24.如权利要求23所述的方法，其中所述哮喘是轻度哮喘。

25.如权利要求23所述的方法，其中所述哮喘是中度哮喘。

26.如权利要求23所述的方法，其中所述哮喘是重度哮喘。

27.如权利要求23所述的方法，其中所述哮喘是嗜酸性粒细胞型或非嗜酸性粒细胞型哮喘。

28.如权利要求27所述的方法，其中所述哮喘是低嗜酸性粒细胞型哮喘。

29.如权利要求23所述的方法，其中所述哮喘的特征在于以下情况中的少于三者：

日间哮喘症状每周两次以上；

由于哮喘导致夜醒；

每周使用哮喘缓解剂两次以上；以及

由于哮喘而活动受限。

30.根据权利要求1-22中任一项所述的干粉制剂，所述干粉制剂用于治疗方法中，其中所述制剂通过吸入施用。

31.根据权利要求30使用的干粉制剂，所述干粉制剂用于治疗哮喘的方法中。

32.根据权利要求31使用的干粉制剂，其中所述哮喘是轻度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、嗜酸性粒细胞型哮喘或非嗜酸性粒细胞型哮喘、或低嗜酸性粒细胞型哮喘。

33.根据权利要求31使用的干粉制剂，其中所述哮喘的特征在于以下情况中的少于三者：

日间哮喘症状每周两次以上；

由于哮喘导致夜醒；

每周使用哮喘缓解剂两次以上；以及

由于哮喘而活动受限。