CN114867477A - 血浆激肽释放酶抑制剂的晶型 - Google Patents

Abstract

本发明公开了1‑苄基‑N‑(4‑甲脒基苄基)‑1H‑吡唑‑4‑甲酰胺乙酸盐的纯晶型和无定形形式、其药物组合物及其制备方法。

Description

血浆激肽释放酶抑制剂的晶型

技术领域

本发明涉及血浆激肽释放酶抑制剂的晶型、制备血浆激肽释放酶抑制剂的基本上不含其他多晶型物的多晶型物的方法，以及包含血浆激肽释放酶抑制剂的基本上纯的多晶型物的组合物。

背景技术

血栓形成对于防止血液流失和修复损伤血管至关重要，这一过程被称为止血，但当血栓闭塞血管并使组织缺氧时，血栓也可为病理性的。血栓闭塞动脉，即动脉血栓形成，最常发生在动脉粥样硬化斑块破裂或受侵蚀的部位(V.Kou等人，Mt Sinai J Med(2006年)第73卷：第449-468页)。冠状动脉的特异性闭塞引起急性冠状动脉综合征，其包括不稳定型心绞痛和心肌梗死(MI)。

血液中的纤维蛋白凝块可通过启动两种不同途径，即内源性途径和外源性途径中的任一种而产生，这两种途径汇聚成共同的凝血途径(R.G.Macfarlane，Nature(1964年)第202卷：第498-499页；E.W.Davie等人，Science(1964年)第145卷：第1310-1312页；K.Joseph等人，Adv Immunol(2005年)第86卷：第159-208页)。实验数据表明，尽管血浆激肽释放酶(PK)缺陷个体和凝血因子XII(FXII)缺陷个体都缺乏出血表型，但它们内源性途径介导的凝块形成严重受损(O.D.Ratnoff等人，J Clin Invest(1955年)第34卷：第602-613页；R.W.Colman(2001年)“止血和血栓形成：基本原理和临床实践”(R.W.Colman等人编辑，利平科特·威廉斯·威尔金斯出版公司，宾夕法尼亚州费城，第103-122页；E.D.Rosen等人，Nature(1997年)第390卷：第290-294页；W.E.Hathaway等人，Blood(1965年)第26卷：第521-532页；A.S.Lawrie等人，Clin Lab Haematol(1998年)第20卷：第179-186页；以及S.M.Bates等人，Circulation(2005年)第112卷：第53-60页)。在内源性途径中，少量FXII通过与表面结合被激活(FXIIa)，而FXIIa又通过蛋白水解激活PK。重要的是，PK随后在反馈回路中产生额外的FXIIa，而FXIIa又将因子XI(FXI)激活为FXIa并连接至共同途径。虽然内源性途径初始通过少量FXIIa激活少量PK来激活，但随后内源性途径激活的程度由PK对FXII的反馈激活控制，从而控制下游凝血(W.E.Hathaway等人，Blood(1965年)第26卷：第521-532页)。

目前在医院环境中对急性MI或缺血性卒中的治疗需要紧急措施以溶解闭塞的血栓并允许再灌注(恢复血流)。这样做的一种常见方式是用纤维蛋白溶解剂治疗患者，诸如组织纤溶酶原激活物(t-PA)或链激酶，这些试剂导致从纤溶酶原产生活性纤溶酶。纤溶酶裂解血栓的纤维蛋白网，使凝块溶解。此类纤维蛋白溶解剂是世界范围内最常用的再灌注治疗。然而，纤维蛋白溶解也与高度的再血栓形成有关，根据以下研究，随后的再闭塞率高达50％(F.Zijlstra等人，N Engl J Med(1993年)第328卷：第680-684页；B.R.Brodie等人，Circulation(1994年)第90卷：第156-162页；G.W.Stone等人，Circulation(1999年)第99卷：第1548-1554页；H.Tamai等人，Am Heart J(2004年)第147卷：E9；F.W.Verheugt等人，JAm Coll Cardiol(1996年)第27卷：第766-773页)。

有临床证据表明经历过急性MI的患者处于高凝(促凝)状态。矛盾的是，这种高凝状态在那些接受纤维蛋白溶解疗法的患者中会额外地加剧。如通过凝血酶-抗凝血酶III(TAT)水平所衡量的，与在那些接受单独肝素治疗的患者中观察到的已经很高的水平相比，可观察到在接受这种治疗的患者中凝血酶的生成增加，其凝血酶水平高达前者的2倍(H.M.Hoffmeister等人，Circulation(1998年)第98卷：第2527-2533页)。已经提出凝血酶的增加是由纤溶酶介导的内源性途径的激活所导致。已知纤溶酶介导的内源性途径系统的激活发生在血液中(G.A.Ewald等人，Circulation(1995年)第91卷：第28-36页)，并且已经有人提出这是因纤溶酶直接激活FXII而发生。

纤维蛋白溶解诱导的高凝状态不仅导致再闭塞率增加，而且也可能至少部分地导致无法实现凝块的完全纤维蛋白溶解，这是纤维蛋白溶解疗法的主要缺点(E.C.Keeley等人，Lancet(2003年)第361卷：第13-20页)。纤维蛋白溶解疗法中的另一个问题是随之而来的颅内出血(ICH)风险增加到3倍(V.Menon等人，Chest(2004年)第126卷：第549S-575S页；纤维蛋白溶解疗法试验者协作组，Lancet(1994年)第343卷：第311-322页)。因此，不增加出血风险但抑制新凝血酶形成的辅助抗凝疗法将是非常有益的。

研究已发现，用FXII的不可逆抑制剂治疗野生型小鼠可减少血管闭塞和缺血性皮质损伤，而抑制FXII将保护动脉血栓形成，诸如在急性MI期间或在血栓性卒中期间发生的动脉血栓形成(WO2006/066878)。然而，肽类药物具有许多缺点，包括由于半衰期短而在急性研究中的应用有限，静脉内施用要医学干预，以及接受治疗的患者会产生抗肽抗体。

血浆激肽释放酶也与以下疾病有关：糖尿病性黄斑水肿和视网膜病变(A.Clermont等人，Diabetes(2011年)第60卷：第1590-1598页；J.A.Phipps等人，Hypertension(2009年)第53卷：第175-181页)；遗传性血管性水肿伴C1抑制剂缺乏症(A.Banerji等人，N Engl J Med(2017年)第376卷：第717-728页；E.

等人，NEngl J Med(2018年)第379卷(第4期)：第352-362页)；急性肝损伤(M.Li等人，BiochemBiophys Res Commun(2018年)第504卷(第4期)：第857-864页)；炎症和过敏反应(L.Bender等人，Front Immunol(2017年)第8卷：第1115页)；用重组tPA治疗后的出血性转化和脑水肿的恶化(F.

等人，Blood(2017年)第129卷(第16期)：第2280-2290页；和化学致敏性肾损伤(H.Wang等人，J Immunotoxicol(2016年)第13卷(第4期)：第567-579页)。

药物的多晶型行为可在药理学中具有关键作用。多晶型物是同一分子的不同固体形式，并且由于分子在晶格中的排列不同而可以具有不同的物理性质。这些不同的性质可影响药物参数，诸如储存稳定性、压缩性、密度、吸湿性、溶出度和生物利用度。通常可以将一种多晶型物转化为另一种多晶型物，并且在一些情况下这是自发发生的。当一种多晶型物可转化为具有不同密度或吸湿性的不同多晶型物(可导致片剂膨胀或破碎)时，储存稳定性受到影响。化合物的一种多晶型形式与另一种多晶型形式相比可能更易溶或以更高的速率溶解，从而提高了其生物利用度。如果多晶型物转化为生物利用度较低的形式，则该剂型的效力可能降低：如果其转化为生物利用度较高的形式，则药物的毒性可能超过限度。此外，该形式的物理性质可能影响制造：例如，一种多晶型物可能更容易形成溶剂化物，或者可能难以过滤和清洗掉杂质。

已开发了合适的血浆激肽释放酶抑制剂(参见，例如Sinha等人，WO2008/016883；US 8258170)。然而，尚未报道对此类化合物的晶型的鉴定及其对固体形式制剂的适用性。由于不同的晶型在溶解度、密度、稳定性和生物利用度方面可能不同，因此对此类晶型的鉴定仍然是未满足的需求。

发明内容

本文提供了1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐(1-benzyl-N-(4-carbamimidoylbenzyl)-1H-pyrazole-4-carboxamide acetate)的纯晶型、无定形形式和制备各晶型的方法。

本发明的一个方面为一种1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐(“化合物1”)的晶型，该晶型可为晶型I、晶型II、晶型III或晶型IV，其中该晶型基本上不含任何其他多晶型形式。

本发明的另一方面为一种化合物1的无定形形式(“晶型V”)，其中该无定形形式基本上不含任何晶型。

本发明的另一方面为一种药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的化合物1的纯固体形式(晶型I、晶型II、晶型III、晶型IV或晶型V)以及药学上可接受的载体。

本发明的另一方面为一种用于制备晶型I的方法，该晶型I基本上不含任何其他晶型。

本发明的另一方面为一种用于制备晶型II的方法，该晶型II基本上不含任何其他晶型。

本发明的另一方面为一种用于制备晶型III的方法，该晶型III基本上不含任何其他晶型。

本发明的另一方面为一种用于制备晶型III的方法，该晶型IV基本上不含任何其他晶型。

本发明的另一方面为一种用于制备晶型V的方法，该晶型V基本上不含任何晶型。

本发明的另一方面为一种用于通过施用本发明的药物组合物来治疗由血浆激肽释放酶介导的疾病的方法。

附图说明

图1示出了使用Cu Kα辐射制成的化合物1的晶型I的粉末X射线衍射(XRPD)图谱。

图2示出了使用Cu Kα辐射制成的化合物1的晶型II的粉末X射线衍射(XRPD)图谱。

图3示出了使用Cu Kα辐射制成的化合物1的晶型III的粉末X射线衍射(XRPD)图谱。

图4示出了使用Cu Kα辐射制成的化合物1的晶型IV的粉末X射线衍射(XRPD)图谱。

图5示出了使用Cu Kα辐射制成的化合物1的无定形晶型V的粉末X射线衍射(XRPD)图谱。

图6示出了在11×10⁵N的力下压缩约25-28小时之前和之后的晶型I和晶型II的粉末X射线衍射(XRPD)图。第一条和第三条迹线分别示出了压缩之前的晶型I和晶型II的XRPD图。迹线2和4分别示出了压缩之后的晶型I和晶型II的XRPD图。

图7示出了研磨之前和之后的晶型I和晶型II的粉末X射线衍射(XRPD)图。第一条和第三条迹线分别示出了研磨之前的晶型I和晶型II的XRPD图。迹线2和4分别示出了研磨之后的晶型I和晶型II的XRPD图。

图8示出了化合物1，晶型I的DSC和TGA热图像叠加。

图9示出了化合物1，晶型II的DSC和TGA热图像叠加。

图10示出了化合物1，晶型III的DSC和TGA热图像叠加。

图11示出了化合物1，晶型IV的DSC和TGA热图像叠加。

图12示出了无定形化合物1，晶型V的DSC和TGA热图像叠加。

具体实施方式

定义

除非另有说明，否则说明书和权利要求书中使用的下列术语具有以下给出的含义。

除非另有说明，否则术语“烷基”本身或作为另一取代基的一部分是指具有指定碳原子数的直链或支链烃基(即，C₁-C₈是指一个至八个碳)。烷基的示例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。对于本文中的每个定义(例如，烷基、烷氧基、烷基氨基、烷硫基、亚烷基、卤代烷基)，当不包括前缀以表示烷基部分中的主链碳原子的数目时，该基团或其部分将具有12个或更少的主链碳原子。

本文所用的术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及由指定量的指定成分的组合直接或间接地产生的任何产品。

术语“多晶型形式”是指化合物的结晶或无定形固体形式。多晶型形式在晶体结构内的分子取向或排列方面互不相同。排列的不同导致分子间作用力不同，从而可产生熔点、溶解度、硬度、稳定性、生物利用度、化学反应性等方面的差异。同一化合物的多晶型形式可通过这些性质和它们的X射线衍射图谱来区分。我们现在已经制备了化合物1的四种结晶多晶型形式和无定形形式。

术语“无定形”是指通过XRPD测定的具有至多有限结晶度的固体形式。在无定形固体中，原子以无序结构存在。在结晶物质或结晶区中，原子具有短程有序和长程有序。相比之下，无定形材料仅具有短程有序。活性物质的结晶度可以例如借助于动态差示量热法或X射线衍射法(包括XRPD)来测定。

术语“固体形式”是指1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的任何结晶或无定形形式，以及它们的混合物。

术语“式I化合物”和“化合物1”是指1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐。

本文所用的术语“晶型I”是指化合物1的纯无水晶型。XRPD衍射图谱含有以下特征峰：在10.0度、18.1度、18.6度、20.1度和23.9度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰，其中所述XRPD使用Cu Kα辐射制成。晶型I的完整衍射图谱如图1所示。“纯”晶型基本上不含任何其他晶型。

本文所用的术语“晶型II”是指化合物1的纯水合晶型。XRPD衍射图谱含有以下特征峰：在4.2度、5.6度、8.4度、17.8度和19.8度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰，其中所述XRPD使用Cu Kα辐射制成。晶型II的完整衍射图谱如图2所示。

本文所用的术语“晶型III”是指化合物1的另一种纯晶型。XRPD衍射图谱含有以下特征峰：在7.7度、10.7度、20.1度、23.7度和24.3度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰，其中所述XRPD使用Cu Kα辐射制成。晶型III的完整衍射图谱如图3所示。

本文所用的术语“晶型IV”是指化合物1的另一种纯晶型。XRPD衍射图谱含有以下特征峰：在18.5度、19.6度和23.7度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰，其中所述XRPD使用Cu Kα辐射制成。晶型IV的完整衍射图谱如图4所示。

本文所用的术语“晶型V”是指化合物1的纯无定形形式。XRPD衍射图谱含有很少或不含特征峰。晶型V的完整衍射图谱如图5所示。

本文所用的术语“基本上不含”是指化合物1的固体形式，其具有至多有限量的不同多晶型物。在一些实施方案中，如果化合物1的固体形式含有小于10重量％、9重量％、8重量％、7重量％、6重量％、5重量％、4重量％、3重量％、2重量％、1重量％、0.9重量％、0.8重量％、0.7重量％、0.6重量％、0.5重量％、0.4重量％、0.3重量％、0.2重量％、0.1重量％、0.05重量％或0.01重量％的其他多晶型形式，则其基本上不含其他多晶型形式。例如，如果晶型I由小于约10重量％、小于约5重量％或小于约1重量％的晶型II、晶型III、晶型IV和/或晶型V组成，则晶型I基本上不含其他多晶型形式。此类晶型的纯度可使用XRPD、差示扫描量热法、热重分析和其他本领域已知的方法测定。

本文所用的术语“受试者”包括动物，诸如哺乳动物，包括但不限于灵长类动物(包括人)、牛、猪、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠等。

术语“有效量”是指在治疗、预防或控制由血浆激肽释放酶介导的病理过程或由血浆激肽释放酶介导的病理过程的明显症状中提供治疗益处的量。有效的具体量可以由普通医师容易地确定，并且可以根据本领域已知的因素而变化，诸如病理过程的类型、患者的病史和年龄、病理过程的阶段等。血浆激肽释放酶的抑制可以使用已知的测定方法，例如但不限于，使用体外比色或荧光底物裂解测定法，或通过测量离体全血或血浆的凝固时间来测定(参见，例如US 8258170)。

概述

化合物1用作血浆激肽释放酶(PK)抑制剂，用于预防和治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症，包括凝血障碍(诸如血栓形成)和其他PK依赖性疾病和病症。例如，这些化合物抑制通过内源性途径形成凝血酶，并因此降低新的致病性血栓形成(再闭塞)的风险，并且当作为纤维蛋白溶解方案的辅助疗法给予时，还改善纤维蛋白溶解诱导的再灌注。化合物1还可用于治疗由血浆激肽释放酶介导的其他疾病和病症，例如但不限于糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜病变、遗传性血管性水肿伴C1抑制剂缺乏症、急性肝损伤、炎症和过敏反应、用重组组织纤溶酶原激活物(tPA)治疗后的出血性转化和脑水肿的恶化、化学致敏性肾损伤、缺血性卒中、出血性卒中、高血压及其血管并发症(包括视网膜病变和肾病)、脑血管水肿、肺动脉高压、炎症、疼痛、急性心肌梗死(MI)、深静脉血栓形成(DVT)、卒中或MI后纤溶治疗(例如用组织纤溶酶原激活物、链激酶治疗)的并发症、心绞痛、血管性水肿、脓毒症、关节炎、体外循环术的并发症、毛细血管渗漏综合征、炎性肠病、糖尿病及其血管并发症(包括视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、肾病和神经病变)、老年性黄斑变性、视网膜静脉阻塞、脑水肿、缺血再灌注损伤、血管生成(例如癌症中血管生成)、哮喘、过敏反应和神经病症(例如阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、CNS感染和多形性成胶质细胞瘤)的脑血管并发症。

血浆激肽释放酶(PK)是一种作为无活性酶原前体血浆激肽释放酶(prePK)存在于血浆中的丝氨酸蛋白酶，由FXIIa通过水解蛋白激活。在正反馈回路中，PK通过水解蛋白激活酶原FXII，导致额外的FXIIa形成，进一步扩大其自身的激活。FXIIa也激活酶原FXI以活化FXIa，从而启动血液凝固的内源性(接触)途径，导致凝血酶的产生和纤维蛋白原的裂解。重要的是，PK裂解高分子量激肽原(HMWK)以产生缓激肽。缓激肽能够通过激活其在内皮细胞表面上存在的受体B1和B2打开血管内皮细胞之间的紧密连接，从而使流体和血浆蛋白外渗到组织中，这种情况被称为血管通透性增加。血脑屏障紧密连接被破坏，紧接着血浆和蛋白质渗漏到脑中(水肿)也与神经变性疾病，诸如阿尔茨海默病、帕金森病和多发性硬化(MS)，以及CNS感染和脑肿瘤有关。例如，肿瘤周围脑水肿导致多形性成胶质细胞瘤患者的预后较差(K.Schoenegger等人，Eur J Neurol.(2009年)第16卷(第7期)：第874-878页)。由缓激肽形成引起的血管渗透性增加可在各种疾病中导致过多流体在许多组织和器官中积聚(水肿)，这些疾病例如血管性水肿、黄斑囊样水肿、糖尿病性黄斑水肿、视网膜静脉阻塞后的黄斑水肿、卒中或头部创伤后的脑血管水肿和毛细血管渗漏综合征。例如，研究已表明，化合物1与BK受体拮抗剂hoe-140一样降低了血管紧张素II处理的啮齿动物的视网膜血管通透性(J.A.Phipps等人，Hypertension(2009年)第53卷：第175-181页)。研究还表明，prePK和接触系统的激活，例如在用污染的肝素治疗的患者中，引起了过敏反应(T.K.Kishimoto等人，N.Engl.J.Med.(2008年)第358卷：第2457-2467页)。

BK在血管性水肿中的重要性在遗传性血管性水肿中得到了进一步说明，在遗传性血管性水肿中，个体具有很少或不具有功能性C1抑制剂(PK的主要内源性抑制剂)。在这些个体中产生高水平的缓激肽，导致流体和蛋白质从血浆外渗到软组织中，从而引起危及生命的水肿。还已知C1-抑制剂涉及老年性黄斑变性(S.Ennis等人，Lancet(2008年)第372卷：第1828-1834页)和器官移植或心肌梗死后的缺血再灌注损伤的发病机理(D.Inderbitzin等人，Eur.Surg.Res.(2004年)第36卷：第142-147页；G.Horstick等人，Circulation(2001年)第104卷：第3125-3131页)。研究已表明，缓激肽及其受体涉及肿瘤血管生成(Y.Ikeda等人，Cancer Res(2004年)第64卷：第5178-5185页)、肺动脉高压(L.Taraseviciene-Stewart等人，Peptides(2005年)第26卷：第1292-1300页)和哮喘(P.J.Barnes，“Recent Progresson Kinins”(1992年)AAS38/III，Birkhauser Verlag出版社，巴塞尔)。

在血管性水肿患者中，小多肽PK抑制剂(DX-88，艾卡拉肽)缓解遗传性血管性水肿患者的水肿(A.Williams等人，Transfus.Apher.Sci.(2003年)第29卷：第255-258页；L.Schneider等人，J Allergy Clin Immunol(2007年)第120卷(第2期)：第416-422页；J.H.Levy等人，Expert Opin.Invest.Drugs(2006年)第15卷：第1077-1090页)。缓激肽B2受体拮抗剂艾替班特也可有效治疗遗传性血管性水肿(K.Bork等人，J.AllergyClin.Immunol.(2007年)第119卷：第1497-1503页)。PK生成缓激肽，因此抑制PK即可抑制缓激肽的产生。

在由纤溶治疗(例如组织纤溶酶原激活物、链激酶)引起的血栓形成中，接受纤维蛋白溶解的患者中存在更高水平的PK(H.M.Hoffmeister等人，J.Cardiovasc.Pharmacol.(1998年)第31卷：第764-772页)。研究已表明，纤溶酶介导的内源性途径的激活发生在血浆和血液中，并且在来自缺乏任何内源性途径组分的个体的血浆中明显减弱(G.A.Ewald等人，Circulation(1995年)第91卷：第28-36页)。发现患有急性MI的个体其激活PK和凝血酶水平升高(H.M.Hoffmeister等人，Circulation(1998年)第98卷：第2527-2533页)。

艾卡拉肽减少缺血性卒中动物模型中的脑水肿、梗死体积和神经缺陷(C.Storini等人，J.Pharm.Exp.Ther.(2006年)第318卷：第849-854页)。C1-INH减少了脑中动脉闭塞的小鼠模型中的梗死面积(M.G.De Simoni等人，Am.J.Pathol.(2004年)第164卷：第1857-1863页；N.Akita等人，Neurosurg.(2003年)第52卷：第395-400页)。研究表明，化合物1减少了缺血性卒中的大鼠模型中的梗塞体积和脑血管水肿，并且减少了出血性卒中的模型中的脑内出血的扩张(WO2009/0971)。发现B2受体拮抗剂减少了梗死体积、脑肿胀和嗜中性粒细胞积聚，并且对缺血性卒中动物模型具有神经保护作用(S.Zausinger等人，ActaNeurochir.Suppl.(2003年)第86卷：第205-207页；D.B.Lumenta等人，Brain Res.(2006年)第1069卷：第227-234页；L.Ding-Zhou等人，Br.J.Pharmacol.(2003年)第139卷：第1539-1547页)。

研究已发现，prePK水平在糖尿病患者中，特别是患有增殖性视网膜病的糖尿病患者中较高，并且与果糖胺水平相关(B.-B.Gao等人，Nature Med.(2007年)第13卷：第181-188页；K.Kedzierska等人，Archives Med.Res.(2005年)第36卷：第539-543页)。还发现prePK水平在糖尿病患者中升高，在感觉运动神经病变患者中最高(M.Christie等人，Thromb.Haemostas.(1984年)第52卷：第221-223页)。prePK水平在糖尿病患者中升高，与血压升高相关，与白蛋白排泄速率独立相关，并且在具有大量白蛋白尿的糖尿病患者中升高，表明prePK可能是进展性肾病的标志物(A.A.Jaffa等人，Diabetes(2003年)第52卷：第1215-1221页)。已发现B1受体拮抗剂减少了患有链脲菌素诱导的糖尿病的大鼠中的血管通透性增强，以及血浆向各种器官，包括皮肤和视网膜的渗漏(S.R.Lawson等人，欧洲药典(2005年)第514卷：第69-78页；S.R.Lawson等人，Regul Pept.(2005年)第124卷：第221-224页)。B1受体拮抗剂还可防止链脲菌素治疗的小鼠产生高血糖症和肾功能障碍(A.Zuccollo等人，Can.J.Physiol.Pharmacol.(1996年)第74卷：第586-589页)。

本发明的一个方面为一种1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐(“化合物1”)的晶型，该晶型基本上不含1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的其他多晶型形式。本发明的一个实施方案为具有小于10重量％的任何其他多晶型形式的晶型。本发明的一个实施方案为具有小于5重量％的任何其他多晶型形式的晶型。本发明的一个实施方案为具有小于1重量％的任何其他多晶型形式的晶型。

本发明的另一方面为一种化合物1的无定形形式，该无定形形式基本上不含化合物1的其他多晶型形式。

本发明的另一方面为一种药物组合物，该药物组合物包含药学上可接受的载体和化合物1的固体形式，该固体形式基本上不含化合物1的任何其他固体形式。

本发明的另一方面为一种用于制备化合物1的固体形式的方法，该固体形式基本上不含化合物1的任何其他固体形式。

化合物的制备

式I化合物通过本文所述的方法制备：

本发明的方法已在产率和纯度方面优化到足以商业化的程度。1-苄基-1H-吡唑-4-羧酸(“化合物4”)可商购获得，也可通过本领域已知的方法由可商购获得的前体化合物制备。例如，1-苄基-1H-吡唑-4-羧酸可通过在存在强碱的情况下使1H-吡唑-4-羧酸乙酯与适当取代的苄基卤(例如苄基溴)在非质子溶剂中接触，然后水解该酯来制备。例如，用K₂CO₃的丙酮溶液处理1H-吡唑-3-甲酸乙酯，然后用苄基溴处理，得到化合物1-苄基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯。然后用例如KOH的甲醇溶液处理乙酯，得到游离酸(化合物4)。

A.方法步骤1：

(A)可使用1-丙烷膦酸环酐

和三乙胺(Et₃N)将化合物4与4-氨基甲基-苄腈在非质子溶剂中偶联，产生1-苄基-N-(4-氰基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(“化合物3”)。

在该方法的一组实施方案中，

以50％的乙酸乙酯溶液提供。化合物4和4-氨基甲基-苄腈可以约等摩尔的量提供，或者反应物中的一种反应物可以与另一种反应物相比过量约0.2当量至约5当量范围的量提供。在该方法的一个实施方案中，化合物4与4-氨基甲基-苄腈的比例为约0.2至约5、约0.5至约2、约0.9至约1.2或约1.0。

也可以一系列比例提供。在该方法的实施方案中，

与化合物4的比例可为约0.5至约5、约0.8至约4、约1.0至约3、约1.2至约2.0和约1.2至约1.8。三乙胺也可以一系列与化合物4的比例提供。在该方法的实施方案中，Et₃N与化合物4的比例为约0.5至约10、约1至约8、约2至约5和约3至约5。

在该方法的一些实施方案中，使用非质子溶剂，例如但不限于二氯甲烷(DCM)、四氢呋喃(THF)、甲乙酮(MEK)、二甲亚砜(DMSO)、乙酸乙酯(EtOAc)、甲基叔丁基醚(MTBE)及它们的混合物。在该方法的一个实施方案中，非质子溶剂为DCM。

化合物4与4-(氨基甲基)苄腈的偶联通常在约0℃至约100℃的温度范围内进行。在一些实施方案中，偶联反应温度为约15℃至约所选非质子溶剂的回流温度。在该方法的实施方案中，反应温度为约20℃至约80℃。在该方法的一些实施方案中，反应温度为约20℃至约30℃。

上述偶联反应通常进行合适的时间段以使反应基本上完成，该时间段可随所选的非质子溶剂和反应温度变化。在该方法的一些实施方案中，反应时间为约30分钟至约48小时。在该方法的一些实施方案中，反应时间为约1小时至约24小时。在该方法的其他实施方案中，反应时间为约4小时至约12小时。在该方法的其他实施方案中，反应时间为约6小时至约10小时。在该方法的一些实施方案中，反应时间为约8小时。

在该方法的一些实施方案中，反应在惰性气氛或无水条件下进行。在该方法的一些实施方案中，反应在氮气下进行。

(B)然后通过萃取纯化上述偶联反应的产物，即化合物3。通常地，(i)将含有化合物3的非质子溶剂与水合并，(ii)充分混合(例如，通过搅拌或振摇)，(iii)使有机层和水层分离，(iv)除去水层，和(v)干燥有机层以除去水。这些步骤可以一起或单独地重复一次、两次、三次或更多次。此外，水也可含有盐，诸如NaCl、NaHCO₃等。水层也可用有机溶剂萃取，例如用DCM萃取，并且该有机溶剂可与获得的其他有机层合并。然后可将有机层用合适的干燥剂诸如硫酸钠干燥。

在该方法的一些实施方案中，将化合物3的DCM溶液加水搅拌，分离各层，然后加10％NaHCO₃水溶液搅拌，分离，再加饱和NaCl水溶液搅拌，分离，随后用Na₂SO₄干燥。

在该方法的一些实施方案中，然后将干燥的有机层减压浓缩，并溶于丙酮，用水洗涤，过滤，抽滤干燥，并真空干燥(或减压干燥)，得到纯化的化合物3。干燥步骤可以于升高温度进行，例如于高于约25℃、高于约30℃、高于约35℃、高于约40℃、高于约45℃、高于约50℃、高于约55℃以及高于约60℃的温度进行。干燥温度通常低于化合物3的熔融温度，并且可以低于约150℃、低于约120℃、低于约100℃、低于约90℃、低于约80℃、低于约75℃、低于约70℃和低于约65℃。

B.方法步骤2：

(A)然后在存在弱碱的情况下，使化合物3与羟胺(NH₂OH)或其盐在合适的溶剂中接触，得到化合物2溶液。在该方法的实施方案中，羟胺为羟胺盐酸盐。将羟胺或羟胺盐以与化合物3约10至约0.5的比例加入到反应中。在该方法的一些实施方案中，NH₂OH或盐与化合物3的比例为约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2或约1。在该方法的一些实施方案中，比例为至少约0.5、约1、约2或约3。

在该方法的一些实施方案中，化合物3转化为化合物2时使用的弱碱为三乙胺或二异丙胺。弱碱通常以与化合物3约10至约0.5的比例加入到反应混合物中。在该方法的一些实施方案中，弱碱与化合物3的比例为约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2或约1。在该方法的一些实施方案中，比例为至少约0.5、约1、约2或约3。

在该方法(化合物3转化为化合物2)的一些实施方案中，溶剂为乙醇、异丙醇、甲醇、DCM、EtOAc或它们的混合物。

在化合物3转化为化合物2的方法的一些实施方案中，反应于升高温度进行，例如于高于约25℃、高于约30℃、高于约35℃、高于约40℃、高于约45℃、高于约50、高于约55℃、高于约60℃、高于约65℃和高于约70℃的温度进行。反应温度通常等于或低于所选溶剂的回流温度，并且可低于约120℃、低于约100℃、低于约90℃、低于约80℃、低于约75℃、低于约70℃和低于约65℃。

在化合物3转化为化合物2的方法的一些实施方案中，反应时间通常为反应基本上完成所需的时间长度，该时间长度可随所选的特定反应物、非质子溶剂和反应温度变化。在该方法的一些实施方案中，反应时间为约30分钟至约48小时。在该方法的实施方案中，反应时间为约1小时至约24小时。在该方法的实施方案中，反应时间为约4小时至约12小时。在该方法的实施方案中，反应时间为约6小时至约10小时。在该方法的一些实施方案中，反应时间为约7小时。

(B)然后(i)将化合物2溶液浓缩，(ii)通过加入水使化合物沉淀，(iii)过滤固体，(iv)洗涤和(v)干燥，得到纯化的化合物2。在该方法的一些实施方案中，(i)通过加热含有化合物2的溶液、通过降低压力或两者来实现浓缩。在该方法的一些实施方案中，通过在减压下加热将溶液浓缩至反应混合物体积的约20％的体积。在该方法的一些实施方案中，通过抽滤、减压干燥、高温干燥或它们的组合来干燥固体。在该方法的一些实施方案中，固体首先通过抽滤干燥，然后通过在高温下减压干燥，得到纯化的化合物2。

C.方法步骤3：

(A)然后于升高温度将化合物2在质子溶剂中用还原条件处理，得到化合物1粗品。在该方法的一些实施方案中，还原条件包括催化氢化。在该方法的一些实施方案中，催化氢化使用雷尼镍和氢气。在该方法的一些实施方案中，质子溶剂为乙酸。在一些实施方案中，该方法可以提供化合物1作为乙酸盐。

在化合物2转化为化合物1的方法的一些实施方案中，使用高于约30℃、高于约35℃、高于约40℃、高于约45℃、高于约50℃、高于约55℃或高于约60℃的高反应温度。反应温度通常等于或低于溶剂的回流温度，并且低于约120℃、低于约100℃、低于约90℃、低于约80℃、低于约75℃、低于约70℃、低于约65℃、低于约60℃或低于约55℃。在该方法的一些实施方案中，反应温度为约50℃至约55℃。

在化合物2转化为化合物1的方法的一些实施方案中，催化氢化使用金属催化剂。在一些实施方案中，金属催化剂包括镍。在其他实施方案中，金属催化剂包括雷尼镍。

将化合物2还原为化合物1时使用的催化剂的量可随所选的催化剂和其他反应条件变化。在该方法的一些实施方案中，所用的雷尼镍的量为(以基于化合物2的量的mol％表示)至少约1mol％、至少约5mol％、至少约10mol％、至少约15mol％、至少约20mol％、至少约25mol％、至少约30mol％、至少约35mol％、至少约40mol％、至少约45mol％、至少约50mol％或至少约60mol％。

类似地，所用氢气的量(表示为kg压力/cm³催化剂)也将随所选择的催化剂的量和其他反应条件变化。在该方法的一些实施方案中，氢气的量为至少约1kg/cm³、至少约2kg/cm³、至少约3kg/cm³、至少约4kg/cm³、至少约5kg/cm³、至少约6kg/cm³、至少约7kg/cm³、至少约8kg/cm³、至少约9kg/cm³、至少约10kg/cm³、至少约11kg/cm³、至少约12kg/cm³、至少约15kg/cm³、至少约20kg/cm³或至少约25kg/cm³。在一些实施方案中，反应使用约20mol％的雷尼镍和约10kg/cm³的H₂。

反应时间通常为还原基本上完成所需的时间长度，该时间长度可以随所选的特定条件和反应温度变化。在一些实施方案中，反应时间为至少约30分钟、至少约1小时、至少约4小时、至少约8小时、至少约10小时、至少约12小时、至少约16小时、至少约20小时或至少约24小时。在其他实施方案中，反应时间少于约48小时、少于约40小时、少于约36小时、少于约30小时、少于约24小时、少于约18小时或少于约14小时。在一些实施方案中，反应时间为约12小时。

(B)(i)将化合物1反应混合物粗品过滤，(ii)将残余物用第一溶剂洗涤，然后(iii)浓缩至反应混合物体积的约10-20％，和(iv)将反应混合物置于化合物较不易溶于其中的第二溶剂中，(v)过滤并(vi)干燥，得到半纯化产物。第一溶剂(步骤ii)可为低级烷基醇、二甲基亚砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF)。在一些实施方案中，第一溶剂为甲醇或乙醇。在该方法的一些实施方案中，第二溶剂(步骤iv)为乙酸乙酯。

过滤过程(步骤i和步骤v)可包括抽滤，还可包括用额外的第二溶剂洗涤固体。在该方法的实施方案中，干燥过程(步骤vi)可包括抽滤干燥、减压干燥、高温干燥或它们的组合。在该方法的其他实施方案中，干燥过程包括抽滤干燥，随后于至少35℃的温度减压干燥。在一些实施方案中，减压小于600mmHg、小于500mmHg、小于400mmHg、小于300mmHg或小于200mmHg。在一些实施方案中，干燥温度为至少约40℃、至少约45℃或至少约50℃。本领域技术人员将理解，干燥温度低于化合物1的熔点或分解温度。在一些实施方案中，干燥温度低于约120℃、低于约110℃、低于约100℃、低于约90℃、低于约80℃、低于约70℃或低于约65℃。

(C)此时半纯化产物(化合物1)可能仍含有不可接受量的镍(或其他催化剂金属)。为了进一步纯化产物，将干燥的固体(i)用水处理，(ii)于升高温度加热并搅拌以形成浆料，(iii)冷却并(iv)过滤，(v)第一次干燥，(vi)溶于乙醇和乙酸的混合物中，(vii)加热至保持温度，(viii)冷却，(ix)过滤，并(x)第二次干燥，得到贫镍产物。在该方法的一些实施方案中，步骤(ii)的升高温度为至少约30℃、至少约35℃、至少约40℃、至少约45℃、至少约50℃、至少约55℃、至少约60℃或至少约65℃。在该方法的一些实施方案中，升高温度小于约100℃、小于约90℃、小于约80℃、小于约70℃或小于约65℃。在该方法的一些实施方案中，升高温度为约55℃。在该方法的一些实施方案中，步骤(iv)的过滤过程包括抽滤和用水洗涤。在该方法的一些实施方案中，步骤(v)的干燥步骤包括抽滤干燥，随后于至少35℃的温度减压干燥。在该方法的一些实施方案中，减压小于600mmHg、小于500mmHg、小于400mmHg、小于300mmHg或小于200mmHg。在该方法的一些实施方案中，步骤(v)的干燥温度为至少约40℃、至少约45℃或至少约50℃。在该方法的实施方案中，干燥温度低于约120℃、低于约110℃、低于约100℃、低于约90℃、低于约80℃、低于约70℃或低于约65℃。在该方法的一些实施方案中，步骤(v)的干燥温度为约45℃。

在步骤(vi)中，乙醇与乙酸的比例可为约1:20至约20:1。在该方法的一些实施方案中，比例为约1:1、约2:1、约3:1、约4:1、约5:1、约6:1、约7:1、约8:1、约9:1或约10:1，v/v乙醇：乙酸。

在该方法的一些实施方案中，步骤(vii)的保持温为至少约30℃、至少约35℃、至少约40℃、至少约45℃、至少约50℃、至少约55℃、至少约60℃或至少约65℃。在所述方法的一些实施方案中，保持温度为约乙醇和乙酸的溶剂混合物的回流温度，或小于约80℃、小于约75℃、小于约70℃、小于约65℃或小于约60℃的温度。在该方法的一些实施方案中，保持温度为约溶剂混合物的回流温度。

在该方法的一些实施方案中，将混合物于保持温度保持至少约10分钟、至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约90分钟、至少约120分钟、至少约150分钟、至少约240分钟或至少约3小时的时间段。在该方法的一些实施方案中，时间段不超过约5小时、不超过约4小时、不超过约3小时、不超过约2小时、不超过约1小时或不超过约30分钟。在该方法的一些实施方案中，时间段为约1小时。

步骤(viii)所述的冷却通常在至少约10分钟、至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约1小时或至少约2小时的时间段内进行。步骤viii的最终温度小于约35℃、小于约30℃、小于约25℃、小于约20℃、小于约15℃、小于约10℃或小于约5℃。在该方法的一些实施方案中，步骤(viii)的最终温度为约环境温度。在一些实施方案中，步骤(viii)还包括搅拌混合物。

步骤(ix)的过滤还可包括用低级烷基醇洗涤。在一些实施方案中，过滤的固体用乙醇洗涤。步骤(x)的干燥步骤可包括抽滤干燥、减压干燥、高温干燥或它们的组合。在该方法的实施方案中，步骤(x)的干燥方法包括抽滤干燥，随后于至少35℃的温度减压干燥。在该方法的实施方案中，减压小于600mmHg、小于500mmHg、小于400mmHg、小于300mmHg或小于200mmHg。在该方法的一些实施方案中，步骤(x)的干燥温度为至少约40℃、至少约45℃或至少约50℃。如上所述，所用的干燥温度将低于化合物1的熔点，并低于化合物1的分解温度。在该方法的一些实施方案中，干燥温度低于约120℃、低于约110℃、低于约100℃、低于约90℃、低于约80℃、低于约70℃或低于约65℃。在该方法的一些实施方案中，步骤(x)的干燥温度为约45℃。在该方法的一些实施方案中，步骤(vi)-(x)重复1次、2次或3次。在该方法的实施方案中，步骤(vi)-(x)重复1次。

晶型

本发明的一个方面为1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐(“化合物1”)的晶型，该晶型基本上不含1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的其他多晶型形式。本发明的一个实施方案为具有小于10重量％的任何其他多晶型形式的晶型。本发明的一个实施方案为具有小于5重量％的任何其他多晶型形式的晶型。本发明的一个实施方案为具有小于1重量％的任何其他多晶型形式的晶型。

A.晶型I：

(A)方法步骤3的贫镍产物通过以下步骤进一步纯化：(i)使化合物与第一溶剂接触，(ii)将混合物升高至第一升高温度，(iii)加入第二溶剂，(iv)将所得混合物冷却至结晶温度，(v)搅拌混合物，(vi)过滤固体，以及(vii)干燥固体，得到为纯无水晶型I的化合物1。

在一些实施方案中，步骤(i)的第一溶剂为甲醇、乙醇、1-丙醇或2-丙醇或它们的混合物。在一些实施方案中，低级烷基醇为甲醇。

在一些实施方案中，步骤(ii)的第一升高温度为至少约30℃、至少约35℃、至少约40℃、至少约45℃、至少约50℃、至少约55℃、至少约60℃或至少约65℃。该升高温度将不大于第一溶剂的回流温度，或不超过约80℃、不超过约75℃、不超过约70℃、不超过约60℃、不超过约55℃、不超过约50℃、不超过约45℃、不超过约40℃或不超过约35℃。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将溶液缓慢冷却至第二升高温度。在一些实施方案中，第二升高温度比第一升高温度低约5℃、约10℃、约15℃或约20℃。第二升高温度为约5℃、约10℃、约15℃、约20℃或高于20℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括过滤溶液。

在一些实施方案中，步骤(iii)的第二溶剂为MTBE或THF。在一些实施方案中，第二溶剂为MTBE。在一些实施方案中，第一溶剂和第二溶剂为无水的。在一些实施方案中，在至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟、至少约150分钟、至少约180分钟或至少约240分钟的延长的时间段内缓慢加入第二溶剂。该延长的时间段小于约24小时、小于约18小时、小于约12小时、小于约8小时、小于约6小时、小于约5小时、小于约4小时、小于约3小时、小于约2小时或小于约1小时。在一些实施方案中，延长的时间段为约2小时。第一溶剂与第二溶剂的比例可在约1:20至约20:1v/v之间变化。在一些实施方案中，MeOH与MTBE的比例为约5:1、约4:1、约3:1、约2.7:1、约2.5:1、约2.3:1、约2:1、约1.5:1、约1.3:1、约1.2:1、约1:1、约1:1.5、约1:2、约1:3或约1:4。

在一些实施方案中，步骤(iii)还包括加入晶种。

步骤(iv)的结晶温度不超过约35℃、小于约30℃、小于约25℃、小于约20℃、小于约15℃、小于约10℃或小于约5℃。在一些实施方案中，结晶温度为约25℃。本领域技术人员将理解，冷却通常将在延长的时间段内发生。在一些实施方案中，步骤(iv)的冷却时间为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟、至少约150分钟或至少约180分钟。在一些实施方案中，冷却时间为约45分钟至约90分钟。

在本发明的一些实施方案中，步骤(v)还包括在延长的时间段内加入额外量的第二溶剂。在一些实施方案中，步骤(v)的延长的时间段为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟或至少约150分钟。在其他实施方案中，该延长的时间段小于约24小时、小于约18小时、小于约12小时、小于约8小时、小于约6小时、小于约5小时、小于约4小时、小于约3小时、小于约2小时或小于约1小时。

步骤(vi)的过滤步骤还可包括用额外量的第二溶剂洗涤固体。步骤(vii)的干燥步骤可包括抽滤干燥、减压干燥、高温干燥或它们的组合。在一些实施方案中，步骤(x)的干燥发明包括抽滤干燥，随后于至少35℃的温度减压干燥。在一些实施方案中，减压小于600mmHg、小于500mmHg、小于400mmHg、小于300mmHg或小于200mmHg。在一些实施方案中，步骤(vii)的干燥温度为至少约40℃、至少约45℃或至少约50℃。如上所述，干燥温度低于化合物1的熔点，并且低于化合物1的分解温度。在一些实施方案中，干燥温度低于约120℃、低于约110℃、低于约100℃、低于约90℃、低于约80℃、低于约70℃或低于约65℃。在一些实施方案中，步骤vii的干燥温度为约45℃。

本发明的一个方面为化合物1的晶型，该晶型为无水晶型，并且特征在于具有约253℃的熔点和25℃时约8.3mg/mL的水溶解度(“晶型I”)。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，该晶型具有包括在10.0度、18.1度、18.6度、20.1度和23.9度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰的XRPD图谱，其中所述XRPD图谱使用Cu Kα辐射制成。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，其中该XRPD图谱还包括在20.5度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，该晶型具有基本上类似于图1的图谱的XRPD图谱。

本发明的一个方面为制备晶型I的方法，该方法包括使化合物1的固体形式与溶剂接触足以产生晶型I的时间段，该溶剂选自甲醇、异丙醇、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、无水丙酮、二氯甲烷、二乙醚、3-甲基-1-丁醇和硝基甲烷或它们的混合物。本发明的一个实施方案为该方法，其中该溶剂为甲醇。

B.晶型II：

在以下方法中将任何固体形式的化合物1转化为晶型II。使化合物1(i)与有机溶剂和水的混合物接触，(ii)加热并保持第一时间段，(iii)加入第二溶剂，(iv)将混合物冷却并保持第二时间段以结晶，并(v)分离所得固体，得到为纯晶型II的化合物1。在一些实施方案中，步骤(i)的有机溶剂为甲醇、异丙醇、THF或丙酮。在一些实施方案中，有机溶剂为甲醇。在一些实施方案中，有机溶剂和水的混合物包含至少约1％的水、至少约2％的水、至少约3％的水、至少约4％的水或至少约5％的水。在一些实施方案中，有机溶剂和水的混合物包含至少约10％的水、至少约15％的水、至少约20％的水、至少约25％的水、至少约30％的水、至少约35％的水、至少约40％的水、至少约45％的水或至少约50％的水。在一些实施方案中，有机溶剂和水的混合物包含不超过约45％的水、不超过约40％的水、不超过约35％的水、不超过约30％的水、不超过约25％的水、不超过约20％的水、不超过约15％的水或不超过约10％的水。

步骤(ii)的升高温度为至少约30℃、至少约35℃、至少约40℃、至少约45℃、至少约50℃、至少约55℃、至少约60℃或至少约65℃。该升高温度将不大于溶剂混合物的回流温度，或不超过约80℃、不超过约75℃、不超过约70℃、不超过约60℃、不超过约55℃、不超过约50℃、不超过约45℃、不超过约40℃或不超过约35℃。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括过滤溶液。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，该时间段可为约1分钟、约2分钟、约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约45分钟、约60分钟或约120分钟。在一些实施方案中，该时间段将小于约180分钟、小于约120分钟、小于约60分钟、小于约45分钟或小于约30分钟。

步骤(iii)的第二溶剂为MTBE或THF。在一些实施方案中，第二溶剂为MTBE。步骤(iii)可任选地包括在第二溶剂加入之前或之后加入晶型II的晶种。

步骤(iv)的结晶温度不超过约35℃、小于约30℃、小于约25℃、小于约20℃、小于约15℃、小于约10℃或小于约5℃。在一些实施方案中，结晶温度为约25℃。

步骤(iv)的冷却通常在延长的时间段内发生。在一些实施方案中，步骤(iv)的冷却时间为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟、至少约150分钟或至少约180分钟。在一些实施方案中，冷却时间为约45分钟至约90分钟。在一些实施方案中，步骤(iv)的结晶/保持时间段为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟或至少约150分钟。在一些实施方案中，该时间段小于约24小时、小于约18小时、小于约12小时、小于约8小时、小于约6小时、小于约5小时、小于约4小时、小于约3小时、小于约2小时或小于约1小时。

步骤(v)的分离步骤基本上类似于晶型I方法的步骤(vi)和(vii)。

本发明的一个方面为化合物1的晶型，该晶型为水合晶型，并且特征在于具有约253℃的熔点和25℃时约5.5mg/mL的水溶解度(“晶型II”)。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，该晶型具有包括在4.2度、5.6度、8.4度、17.8度和19.8度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰的XRPD图谱，其中所述XRPD图谱使用Cu Kα辐射制成。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，其中该XRPD图谱还包括在12.7度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，该晶型具有基本上类似于图2的图谱的XRPD图谱。

本发明的一个方面为一种用于制备晶型II的方法，该方法包括使化合物1的固体形式与水和溶剂的混合物接触足以产生晶型II的时间段，该溶剂选自异丙醇、四氢呋喃、丙酮和乙酸乙酯或它们的组合。在一个实施方案中，该溶剂为乙酸乙酯。在另一个实施方案中，该溶剂为甲醇。在另一个实施方案中，该方法还包括将MIBK加入该溶剂中。

C.晶型III：

(A)在以下方法中将任何固体形式的化合物1转化为晶型III。使化合物1(i)与有机溶剂接触，(ii)加热并保持第一时间段，(iii)加入第二溶剂，(iv)将混合物冷却并保持第二时间段以结晶，并(v)分离所得固体，得到为纯晶型III的化合物1。

在一些实施方案中，步骤(i)的有机溶剂为MeOH。在一些实施方案中，有机溶剂含有少于约10％的水。在一些实施方案中，有机溶剂包含不超过约10％的水、不超过约8％的水、不超过约5％的水、不超过约2％的水、不超过约1％的水或不超过约0.1％的水。

步骤(ii)的升高温度为至少约30℃、至少约35℃、至少约40℃、至少约45℃、至少约50℃、至少约55℃、至少约60℃或至少约65℃。该升高温度将不大于溶剂混合物的回流温度，或不超过约80℃、不超过约75℃、不超过约70℃、不超过约60℃、不超过约55℃、不超过约50℃、不超过约45℃、不超过约40℃或不超过约35℃。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括过滤溶液。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，该时间段可为约1分钟、约2分钟、约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约45分钟、约60分钟或约120分钟。在一些实施方案中，该时间段将小于约180分钟、小于约120分钟、小于约60分钟、小于约45分钟或小于约30分钟。

在一些实施方案中，步骤(iii)的第二溶剂为乙腈(CH₃CN)。乙腈与MeOH溶液的比例为至少约1:1、至少约1:2、至少约1:3、至少约1:4、至少约1:5、至少约1:7、至少约1:10、至少约1:20、至少约1:30、至少约1:40或至少约1:50。步骤(iii)可任选地包括在第二溶剂加入之前或之后加入晶型III的晶种。

步骤(iv)的结晶温度不超过约35℃、小于约30℃、小于约25℃、小于约20℃、小于约15℃、小于约10℃或小于约5℃。在一些实施方案中，结晶温度为约25℃。冷却在延长的时间段内发生。在一些实施方案中，步骤(iv)的冷却时间为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟、至少约150分钟或至少约180分钟。在一些实施方案中，冷却时间为约45分钟至约90分钟。在一些实施方案中，步骤iv的结晶/保持时间段为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟或至少约150分钟。在一些实施方案中，该时间段小于约24小时、小于约18小时、小于约12小时、小于约8小时、小于约6小时、小于约5小时、小于约4小时、小于约3小时、小于约2小时或小于约1小时。

步骤(v)的分离步骤基本上类似于晶型I方法的步骤(vi)和(vii)。

(B)晶型III也可通过其他方法制备。使化合物1(i)与有机溶剂接触，(ii)加热并保持第一时间段，(iii)在减压下快速除去溶剂，并(iv)分离所得固体，得到为纯晶型III的化合物1。在一些实施方案中，步骤(i)的有机溶剂为MeOH或MeOH和DCM的混合物。在一些实施方案中，有机溶剂为MeOH。在一些实施方案中，有机溶剂为MeOH和DCM的混合物。在一些实施方案中，MeOH与DCM的比例为约1:1。在一些实施方案中，有机溶剂含有少于约10％的水。在一些实施方案中，有机溶剂包含不超过约10％的水、不超过约8％的水、不超过约5％的水、不超过约2％的水、不超过约1％的水或不超过约0.1％的水。

步骤(ii)的升高温度为至少约30℃、至少约35℃、至少约40℃、至少约45℃、至少约50℃、至少约55℃、至少约60℃或至少约65℃。该升高温度将不大于溶剂混合物的回流温度，或不超过约80℃、不超过约75℃、不超过约70℃、不超过约60℃、不超过约55℃、不超过约50℃、不超过约45℃、不超过约40℃或不超过约35℃。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤ii还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括过滤溶液。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，该时间段可为约1分钟、约2分钟、约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约45分钟、约60分钟或约120分钟。在一些实施方案中，该时间段将小于约180分钟、小于约120分钟、小于约60分钟、小于约45分钟或小于约30分钟。

在减压下快速进行步骤(iii)的溶剂除去。压力可小于约700mmHg、小于约600mmHg、小于约500mmHg、小于约400mmHg、小于约350mmHg、小于约300mmHg、小于约250mmHg、小于约200mmHg、小于约150mmHg、小于约100mmHg或小于约50mmHg。快速溶剂除去在小于约30分钟、小于约20分钟、小于约15分钟、小于约10分钟、小于约9分钟、小于约8分钟、小于约7分钟、小于约6分钟、小于约5分钟、小于约4分钟、小于约3分钟、小于约2分钟、小于约1分钟内进行。

步骤(iv)的分离步骤基本上类似于晶型I方法的步骤(vi)和(vii)。

本发明的一个方面为化合物1的晶型，该晶型为非无水晶型，并且特征在于具有约249℃的熔点和25℃时约7.2mg/mL的水溶解度(“晶型III”)。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，该晶型具有包括在7.7度、10.7度、20.1度、23.7度和24.3度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰的XRPD图谱，其中所述XRPD图谱使用Cu Kα辐射制成。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，其中该XRPD图谱还包括在18.5度和26.5度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，该晶型具有基本上类似于图3的图谱的XRPD图谱。

本发明的一个方面为一种用于制备晶型III的方法，该方法包括使化合物1的任何固体形式与包含乙腈的溶剂接触足以产生晶型III的时间段。本发明的一个实施方案为该方法，其中该溶剂包含少于约10％的水。本发明的一个实施方案为该方法，其中该溶剂包含少于约5％的水。本发明的一个实施方案为该方法，其中该溶剂包含少于约1％的水。

D.晶型IV：

(A)在以下方法中将任何固体形式的化合物1转化为晶型IV。使化合物1(i)与有机溶剂接触，(ii)加热并保持第一时间段，(iii)加入第二溶剂，(iv)将混合物冷却并保持第二时间段以结晶，并(v)分离所得固体，得到为纯晶型IV的化合物1。

在一些实施方案中，步骤(i)的有机溶剂为MeOH。在一些实施方案中，有机溶剂含有少于约5％的水，不超过约2％、不超过约1％或不超过约0.1％的水。

步骤(ii)的升高温度为至少约30℃、至少约35℃、至少约40℃、至少约45℃、至少约50℃、至少约55℃、至少约60℃或至少约65℃。该升高温度将不大于溶剂混合物的回流温度，或不超过约80℃、不超过约75℃、不超过约70℃、不超过约60℃、不超过约55℃、不超过约50℃、不超过约45℃、不超过约40℃或不超过约35℃。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括过滤溶液。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，该时间段可为约1分钟、约2分钟、约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约45分钟、约60分钟或约120分钟。在一些实施方案中，该时间段将小于约180分钟、小于约120分钟、小于约60分钟、小于约45分钟或小于约30分钟。

步骤(iii)的第二溶剂为乙酸乙酯(EtOAc)、乙酸异丙酯、MEK或MIBK。在一些实施方案中，该第二溶剂为乙酸乙酯(EtOAc)、乙酸异丙酯、MEK或MIBK。在一些实施方案中，该第二溶剂为EtOAc。在一些实施方案中，第二溶剂为MEK。在一些实施方案中，第二溶剂为MIBK。

(步骤(i)的)第二溶剂与MeOH溶液的比例为至少0.1:1、至少约0.2:1、至少约0.3:1、至少约0.4:1、至少约0.5:1、至少约1:1、至少约1:2、至少约1:3、至少约1:4、至少约1:5、至少约1:7、至少约1:8、至少约1:9、至少约1:10、至少约1:20、至少约1:30、至少约1:40或至少约1:50。

步骤(iii)可任选地包括在第二溶剂加入之前或之后加入晶型IV的晶种。

步骤(iv)的结晶温度不超过约35℃、小于约30℃、小于约25℃、小于约20℃、小于约15℃、小于约10℃或小于约5℃。在一些实施方案中，结晶温度为约25℃。冷却在延长的时间段内发生。在一些实施方案中，步骤(iv)的冷却时间为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟、至少约150分钟或至少约180分钟。在一些实施方案中，冷却时间为约45分钟至约90分钟。在一些实施方案中，步骤(iv)的结晶/保持时间段为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟或至少约150分钟。该时间段小于约72小时、小于约48小时、小于约24小时、小于约18小时、小于约12小时、小于约8小时、小于约6小时、小于约5小时、小于约4小时、小于约3小时、小于约2小时或小于约1小时。

步骤(v)的分离步骤基本上类似于晶型I方法的步骤(vi)和(vii)。

本发明的一个方面为化合物1的晶型，该晶型的特征在于具有约251℃的熔点(“晶型IV”)。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，该晶型具有包括在18.5度、19.6度和23.7度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰的XRPD图谱，其中所述XRPD图谱使用Cu Kα辐射制成。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，其中该XRPD图谱还包括在24.6度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰。本发明的一个实施方案为化合物1的晶型，该晶型具有基本上类似于图4的图谱的XRPD图谱。

E.晶型V—无定形：

在以下方法中将任何固体形式的化合物1转化为晶型V。使化合物1(i)与水性溶剂接触，(ii)加热并保持第一时间段，(iii)将溶液冷冻并冻干，并(iv)分离所得固体，得到为纯无定形晶型V的化合物1。

在一些实施方案中，步骤(i)的水性溶剂为水、去离子水或注射用水。在本发明的一个实施方案中，该水性溶剂为注射用水。在本发明的一个实施方案中，该水性溶剂为去离子水。

步骤(ii)的升高温度为至少约30℃、至少约35℃、至少约40℃、至少约45℃、至少约50℃、至少约55℃、至少约60℃或至少约65℃。该升高温度将不大于溶剂混合物的回流温度，或不超过约80℃、不超过约75℃、不超过约70℃、不超过约60℃、不超过约55℃、不超过约50℃、不超过约45℃、不超过约40℃或不超过约35℃。在本发明的一个实施方案中，升高温度为约45℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括过滤溶液。在一些实施方案中，升高温度为约55℃。在一些实施方案中，步骤(ii)还包括将混合物保持在该升高温度或接近该升高温度，直到化合物1完全溶解并且澄清溶液形成。在一些实施方案中，该时间段可为约1分钟、约2分钟、约5分钟、约10分钟、约20分钟、约30分钟、约45分钟、约60分钟或约120分钟。在一些实施方案中，该时间段将小于约180分钟、小于约120分钟、小于约60分钟、小于约45分钟或小于约30分钟。

冻干步骤(iii)在延长的时间段内发生。在一些实施方案中，步骤(iii)的冻干时间为至少约20分钟、至少约30分钟、至少约45分钟、至少约60分钟、至少约75分钟、至少约90分钟、至少约105分钟、至少约120分钟、至少约150分钟、至少约180分钟、至少约3小时、至少约4小时、至少约5小时、至少约6小时、至少约7小时、至少约8小时、至少约9小时或至少约10小时。该时间段小于约24小时、小于约18小时、小于约12小时、小于约8小时、小于约6小时、小于约5小时、小于约4小时、小于约3小时、小于约2小时或小于约1小时。

步骤(iv)的分离步骤通常需要简单地从冻干设备中收集无定形固体。

本发明的一个方面为化合物1的无定形形式，该无定形形式的特征在于具有约240℃的熔点和25℃时约7.1mg/mL的水溶解度(“晶型V”)。本发明的一个实施方案为化合物1的无定形形式，该无定形形式具有基本上类似于图5的图谱的XRPD图谱。

制剂

根据本领域已知的方法配制并施用化合物1。含有活性成分的药物组合物可为适合口服使用的形式，例如，如US 2002-0012680中所述的片剂、锭剂、糖锭、水性或油性混悬剂、可分散粉剂或颗粒剂、乳剂和自乳化剂、硬胶囊剂或软胶囊剂、糖浆剂、酏剂、溶液剂、口腔贴片剂、口服凝胶剂、咀嚼胶、咀嚼片、泡腾粉和泡腾片。用于口服使用的组合物可根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法制备，并且此类组合物可含有一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂、抗氧化剂和防腐剂的试剂，以提供药学上美观和可口的制剂。片剂含有与无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分，该赋形剂适用于制备片剂。这些赋形剂可为例如惰性稀释剂，诸如纤维素、二氧化硅、氧化铝、碳酸钙、碳酸钠、葡萄糖、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如PVP、纤维素、PEG、淀粉、明胶或阿拉伯树胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可为未包衣的，或者可通过已知技术进行肠内包衣或其他方式包衣，以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，从而提供更长时间的持续作用。例如，可使用缓释材料诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。片剂也可通过US 4256108、US 4166452和US 4265874中描述的技术进行包衣，以形成用于控制释放的渗透治疗片剂。

口服使用的制剂还可以硬明胶胶囊剂的形式存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂混合，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土，或者以软明胶胶囊剂的形式存在，其中活性成分与水或油介质混合，例如花生油、液体石蜡或橄榄油。此外，乳剂可由非水混溶性成分诸如油制备，并由表面活性剂诸如单双甘油酯、PEG酯等稳定。

水性混悬剂含有与适用于制备水性混悬剂的赋形剂混合的活性材料。此类赋形剂为助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可为天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七亚乙基氧十六醇，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，诸如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂，以及一种或多种甜味剂，诸如蔗糖或糖精。

油性混悬剂可通过将活性成分混悬在植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)中来配制，或混悬在矿物油诸如液体石蜡中来配制。油性混悬剂可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂诸如上述那些甜味剂，以及调味剂，以提供可口的口服制剂。这些组合物可通过加入抗氧化剂诸如抗坏血酸来保存。

适用于通过加入水来制备水性混悬剂的可分散粉剂和颗粒剂提供了与分散剂或润湿剂、混悬剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和混悬剂以上文已经提到的那些制剂为例。也可存在额外的赋形剂，例如甜味剂、调味剂和着色剂。

本发明的药物组合物还可为水包油乳剂的形式。油相可为植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡或这些液体石蜡的混合物。合适的乳化剂可为天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯；以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳剂还可含有甜味剂和调味剂。

糖浆剂和酏剂可用甜味剂配制，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖。此类制剂还可含有缓和剂、防腐剂和调味剂以及着色剂。口服溶液可与例如环糊精、PEG和表面活性剂组合制备。

药物组合物可为无菌注射水性或油性混悬剂的形式。该混悬剂可根据已知技术使用上文提到的那些合适的分散剂或润湿剂和助悬剂配制。无菌注射制剂也可为在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液剂或混悬剂，例如作为1,3-丁二醇中的溶液。可使用的可接受的溶媒和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌的不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成的单甘油酯或双甘油酯。此外，脂肪酸诸如油酸可用于制备注射剂。

化合物1还可以栓剂的形式施用，以进行直肠施用。这些组合物可通过将药物与合适的无刺激性赋形剂混合来制备，该赋形剂在常温时为固体但在直肠温度时为液体，因此将在直肠中溶化以释放药物。此类材料包括可可脂和聚乙二醇。此外，这些化合物可通过溶液剂或软膏剂经眼部递送施用。更进一步地，目标化合物的透皮递送可通过离子电渗贴片等方式完成。对于局部应用，使用含有本发明化合物的乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、溶液剂或混悬剂等。如本文所用，局部应用还意指包括漱口水和含漱剂的使用。

化合物1可配制成用于沉积到医疗装置中，该医疗装置可包括各种常规移植物、支架，包括支架移植物、导管、球囊、篮或可在体腔内部署或永久植入体腔内的其他装置，中的任一者。作为具体示例，需要有能够将本发明的化合物递送到已经通过介入技术治疗的身体区域的装置和方法。

化合物1可沉积在医疗装置诸如支架内，并递送到治疗部位用于治疗身体的一部分。支架已被用作治疗剂(即药物)的递送载体。血管内支架通常永久植入冠状或外周血管中。支架设计包括US 4733655(Palmaz)、US 4800882(Gianturco)和US 4886062(Wiktor)的支架设计。此类设计包括金属支架和聚合物支架，以及自扩张支架和球囊扩张支架。支架也可用于在与脉管系统接触的部位递送药物，例如US 5102417(Palmaz)和WO 91/12779(Medtronic,Inc.)和WO 90/13332(Cedars-Sanai Medical Center)、US 5419760(Narciso,Jr.)和US 5429634(Narciso,Jr.)中所公开的。

术语“沉积”是指通过本领域已知的方法将抑制剂涂覆、吸附、放置或以其他方式结合到装置中。例如，抑制剂可嵌入医疗装置内并从其内释放(“基质型”)，或者被涂覆或覆盖医疗装置的聚合物材料包围并通过其释放(“储库型”)。在后一示例中，抑制剂可被截留在聚合物材料内或使用本领域已知的一种或多种用于生成此类材料的技术与聚合物材料偶联。在其他制剂中，抑制剂可通过可分离的键而不需要涂层即可连接到医疗装置的表面并且随时间推移而释放，抑制剂可通过主动的机械或化学过程除去，或者是以使抑制剂存在于植入部位的永久固定形式。

聚合物可为生物稳定的或生物可吸收的聚合物，这取决于所需的释放速率或所需的聚合物稳定性程度。可使用的生物可吸收的聚合物包括但不限于聚(l-乳酸)、聚己内酯、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLLA/PGA)、聚(羟基丁酸酯)、聚(羟基丁酸酯-共-戊酸酯)、聚二恶烷酮、聚原酸酯、聚酸酐、聚(乙醇酸)、聚(d-乳酸)、聚(l-乳酸)、聚(d,l-乳酸)、聚(d,l-丙交酯)(PLA)、聚(l-丙交酯)(PLLA)、聚(乙醇酸-共-三亚甲基碳酸酯)(PGA/PTMC)、聚环氧乙烷(PEO)、聚二氧六环酮(PDS)、聚磷酸酯、聚磷酸酯氨基甲酸酯、聚(氨基酸)、氰基丙烯酸酯、聚(三亚甲基碳酸酯)、聚(亚氨基碳酸酯)、共聚(醚-酯)(例如PEO/PLA)、聚亚烷基草酸酯、聚磷腈和生物分子(诸如纤维蛋白、纤维蛋白原、纤维素、淀粉、胶原和透明质酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯、水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物)和本领域已知的其他合适的生物可吸收共聚物。此外，可以使用具有相对低的慢性组织响应的生物稳定聚合物，诸如聚氨酯、硅酮和聚酯，并且如果其他聚合物可以溶解并固化或聚合在医疗装置上，则也可以使用这些聚合物，诸如聚烯烃、聚异丁烯和乙烯-α烯烃共聚物；丙烯酸聚合物和共聚物，卤乙烯聚合物和共聚物，诸如聚氯乙烯；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯醚，诸如聚乙烯甲基醚；聚偏二卤乙烯，诸如聚偏二氟乙烯和聚偏二氯乙烯；聚丙烯腈、聚乙烯酮；聚乙烯芳族化合物，诸如聚苯乙烯，聚乙烯酯，诸如聚乙酸乙烯酯；乙烯单体之间以及与烯烃的共聚物，诸如乙烯-甲基丙烯酸甲酯共聚物、丙烯腈-苯乙烯共聚物、ABS树脂和乙烯-乙酸乙烯酯共聚物；吡喃共聚物；聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚；聚羟乙基-天冬酰胺-苯酚；棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸；聚酰胺，诸如尼龙66和聚己内酰胺；醇酸树脂、聚碳酸酯；聚甲醛；聚酰亚胺；聚醚；环氧树脂、聚氨酯；人造丝；人造丝-三乙酸酯；纤维素、乙酸纤维素、丁酸纤维素；乙酸丁酸纤维素；玻璃纸；硝酸纤维素；丙酸纤维素；纤维素醚；和羧甲基纤维素。

聚合物和半渗透性聚合物基质可形成成型制品，诸如阀、支架、管、假体等。通常，通过旋涂、浸渍或喷涂将聚合物施加到可植入装置的表面。本领域已知的其他方法也可用于该目的。喷涂方法包括传统方法以及利用喷墨型分配器的微沉积技术。另外，可使用光图案化或3D打印将聚合物沉积在可植入装置上，以使聚合物仅位于该装置的特定部分。装置的该涂层在装置周围提供均匀的层，这允许改善各种分析物通过装置涂层的扩散。

化合物1可被配制成从聚合物涂层释放到放置医疗装置的环境中。例如，使用涉及聚合物载体或层的若干众所周知的技术中的至少一种技术来控制洗脱，在延长的时间范围(例如，数月)内以受控方式释放化合物。这些技术中的一些技术先前在US2004/0243225中进行了描述，其全部公开内容以其整体并入本文。

此外，如例如US 6770729中所述的，其以整体并入本文，可操纵聚合物组合物的试剂和反应条件，从而可以控制抑制剂从聚合物涂层中的释放。例如，可调节一个或多个聚合物涂层的扩散系数以控制抑制剂从聚合物涂层的释放。在该主题的一个变型中，可以控制一个或多个聚合物涂层的扩散系数以调节存在于放置医疗装置的环境中的分析物(例如，促进聚合物的一些部分的分解或水解的分析物)接近聚合物组合物内的一种或多种组分的能力(并且例如，从而调节抑制剂从聚合物涂层的释放)。该方法的另一个实施方案包括具有多个聚合物涂层的装置，每个涂层具有多个扩散系数。在该方法的此类实施方案中，抑制剂从聚合物涂层的释放可通过该多个聚合物涂层来调节。

可通过调节聚合物组合物的一种或多种性质，诸如一种或多种内源化合物或外源化合物的存在，或另选地，通过调节聚合物组合物的pH来控制抑制剂从聚合物涂层的释放。例如，某些聚合物组合物可被设计成响应于聚合物组合物的pH的降低而释放抑制剂。另选地，某些聚合物组合物可被设计成响应于过氧化氢的存在而释放抑制剂。

本发明的一个方面为用于治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症的药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的化合物1的固体形式和药学上可接受的载体，其中该化合物1的固体形式为晶型I、晶型II、晶型III、晶型IV或晶型V，并且基本上不含化合物1的任何其他多晶型形式或无定形形式。本发明的一个实施方案为药物组合物，其中该固体形式为晶型I。本发明的一个实施方案为药物组合物，其中该固体形式为晶型II。本发明的一个实施方案为药物组合物，其中该固体形式为晶型III。本发明的一个实施方案为药物组合物，其中该固体形式为晶型IV。本发明的一个实施方案为药物组合物，其中该固体形式为晶型V。

本发明的一个方面为化合物1的固体形式制备用于治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症的药物的用途，其中该化合物1的固体形式基本上不含化合物1的任何其他多晶型或无定形形式。本发明的另一方面为化合物1的固体形式制备用于治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症的药物的用途，其中该化合物1的固体形式基本上不含化合物1的任何其他多晶型或无定形形式。

施用

本发明的药物组合物通过适用于具有类似用途的试剂的施用方式中的任何方式以治疗有效量施用。化合物1的实际施用量将取决于许多因素，诸如待治疗疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、所用化合物的效力、施用途径和形式以及其他因素。

本发明的一个方面为一种用于通过向有此需要的受试者施用有效量的本发明的药物组合物来治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症的方法。本发明的一个实施方案为该方法，其中该血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症选自糖尿病性黄斑水肿，糖尿病性视网膜病，遗传性血管性水肿伴C1抑制剂缺乏症，急性肝损伤，炎症，过敏反应，化学致敏性肾损伤，缺血性卒中，出血性卒中，高血压，高血压的血管并发症，视网膜病，肾病，脑血管水肿，肺动脉高压，炎症，疼痛，急性心肌梗死，深静脉血栓形成，纤溶治疗的并发症，心绞痛，血管性水肿，脓毒症，关节炎，体外循环术的并发症，毛细血管渗漏综合征，炎性肠病，糖尿病，糖尿病性视网膜病变，糖尿病性黄斑水肿，糖尿病性肾病，糖尿病性神经病变，老年性黄斑变性，视网膜静脉阻塞，脑水肿，缺血再灌注损伤，癌症相关的血管生成，哮喘，过敏反应以及阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、中枢神经系统感染和多形性成胶质细胞瘤的脑血管并发症。

实施例

提供以下实施例作为说明，而无意限制要求保护的发明。在以下实施例中，除非另有说明，否则减压浓缩在500mmHg-600mmHg下进行。使用以下缩写：DCM＝二氯甲烷；MeOH＝甲醇；EtOH＝乙醇；AcOH＝乙酸；EtOAc和AcOEt＝乙酸乙酯；

1-丙烷膦酸酐的EtOAc溶液；MTBE＝甲基叔丁基醚；MEK＝甲基乙基酮(2-丁酮)；MIBK＝甲基异丁基甲酮(4-甲基-2-戊酮)。

在环境条件(约20℃)下，在使用Cu Kα辐射(45kV，40mA)、θ-θ测角仪、聚焦镜、发散狭缝(1/2”)、入射和发散光束处的Soller狭缝(4mm)、透射箔样品台(

聚酰亚胺，12.7μm厚的膜)和PIXcel检测器的PANalytical X'Pert PRO X射线衍射仪(MalvernPanalytical，英国莫尔文)上收集X射线粉末衍射图谱。用于数据收集的软件是2.2f版的X'Pert数据收集器，并且使用1.2d版的X'Pert数据查看器呈现数据。数据收集范围为2.994°-35°2θ，连续扫描速度为0.202004°s^-1。

差示扫描量热法数据在配备有45位样品架的PerkinElmer Pyris 6000DSC上收集。使用经检定的铟验证仪器的能量和温度校准。在以下实施例中，将预定量的样品(0.5mg-3.0mg)置于针孔铝盘中，并以20℃/min的速率从30℃加热至350℃，或根据实验要求进行调整。以20mL/min的速率对样品进行干燥氮气吹扫。用Pyris软件v11.1.1修订版H进行仪器控制、数据获取和分析。

热重分析数据在配备有20位自动取样器的PerkinElmer Pyris 1TGA上收集。使用经检定的砝码和经检定的铝镍合金和帕克合金(Perkalloy)校准仪器的温度。在以下实施例中，除非另有说明，否则将预定量的样品(约5mg)装入预去皮的铝坩埚中，并以20℃/分钟的速率从环境温度加热至400℃。以20mL/min的速率对样品进行氮气吹扫。用Pyris软件v11.1.1修订版H进行仪器控制、数据获取和分析。

实施例1：式IV化合物的合成

式IV化合物购自商业来源，或通过下述方法或本领域已知的其他方法制备。

在20℃-25℃时，将1H-吡唑-4-甲酸乙酯(23.5g，1当量)和丙酮(587mL)在N₂气氛下加入圆底烧瓶中，并将混合物搅拌10分钟，然后加入K₂CO₃(70.4g，3当量)。将反应物料冷却至0℃-5℃，并且于0℃-5℃在15分钟内非常缓慢地加入苄基溴(28.66g，1.1当量)。将反应混合物升高至20℃-25℃，然后加热至50℃-60℃并于该温度保持3小时。反应完成后(已通过HPLC监测)，将反应混合物于45℃-50℃减压浓缩，用10％NaOH淬灭，用DCM(117mL)萃取。分离水层，用DCM(117mL)反萃取，并且合并的有机层用硫酸钠干燥并于45℃-50℃减压浓缩。将石油醚或正庚烷(117mL)加入浓缩物中，搅拌1小时，然后过滤，于40℃-45℃减压干燥12小时，得到1-苄基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(32.5g)。

将1-苄基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(30g)和甲醇(300mL)加入3L圆底烧瓶中，将所得的溶液于24℃搅拌10分钟。然后加入KOH(14.6g，2当量)，将混合物加热至65℃-70℃并保持4小时。反应完成后(如通过HPLC测定的)，将反应混合物于45℃-50℃减压浓缩至40mL-60mL。将所得残余物溶于水(300mL)中，用DCM(2×150mL)萃取。分离水层，并用6N HCl酸化至pH为2。将沉淀的固体过滤，用水(30mL)洗涤，并且于45℃-50℃减压干燥12小时，得到为浅棕色固体、由HPLC测得纯度为99.1％的1-苄基-1H-吡唑-4-甲酸(19.5g)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ5.36(s,2H),7.26-7.37(m,5H),7.83(s,1H),8.38(s,1H),12.33(宽峰S,1H)。

实施例2：式III化合物的合成

如下所述制备式III化合物：

将DCM(285mL)和4-氨基甲基-苄腈盐酸盐(19.2g，1.2当量)加入3L圆底烧瓶中，并将混合物冷却至0℃。于0℃加入三乙胺(39.4g，3当量)，并将所得混合物搅拌30分钟。接着，于0℃-5℃加入1-苄基-1H-吡唑-4-甲酸(19g，1当量)，并将温度升高至20℃-25℃。加入50％1-丙烷膦酸酐的乙酸乙酯溶液(

Spectrochem，72mL，1.28当量)并于20℃-25℃搅拌3小时。反应完成后，加入水(95mL)并搅拌10分钟-15分钟，然后分离有机层。水层再次用DCM(95mL)萃取，合并有机层并用水(95mL)洗涤。有机层用Na₂SO₄干燥并减压浓缩至约40mL。然后加入丙酮(95mL)，将混合物共蒸馏直到在反应罐中保留仅20mL-30mL。然后加入水(285mL)，于20℃-25℃搅拌1小时。将所得固体过滤，用丙酮:水(1:3v/v，10mL)洗涤，然后抽滤并于45℃-50℃减压干燥12小时，得到为浅棕色固体、由HPLC测得纯度为98.51％的1-苄基-N-(4-氰基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(26.9g，94％)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.49(d,J＝5.9Hz,2H),5.37(s,2H),7.27-7.38(m,5H),7.48(d,J＝8.1Hz,2H),7.79(d,J＝8.1Hz,2H),7.95(s,1H),8.31(s,1H),8.77(t,J＝5.9Hz,1H)。

实施例3：式II化合物的合成

如下所述制备式II化合物：

将乙醇(250mL)和1-苄基-N-(4-氰基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(25g)在氮气气氛下于20℃-25℃加入1L圆底烧瓶中。将盐酸羟胺(16.3g，3当量)和三乙胺(24.64g，3当量)于20℃-25℃加入到反应混合物中。然后将混合物加热至60℃-65℃，并于该温度保持7小时。反应完成后，将混合物于45℃-50℃减压浓缩至约30mL-50mL。然后加入水(250mL)，于环境温度搅拌30分钟。将所得固体过滤，用水(125mL)洗涤，抽滤至干燥，然后进一步于45℃-50℃减压抽滤干燥12小时，得到为淡黄色固体、由HPLC测得纯度为95.41％的1-苄基-N-(4-(N-羟基甲脒基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(25.5g，92.3产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ4.40(d,J＝5.9Hz,2H),5.34(s,2H),5.76(宽峰s,2H),7.25-7.37(m,7H),7.61(d,J＝8.2Hz,2H),7.91(s,1H),8.27(s,1H),8.63(t,J＝5.9Hz,1H),9.57(宽峰s,1H)。

实施例4：式I化合物的合成

如下所述制备式I化合物：

将乙酸(2100g)和1-苄基-N-(4-(N-羟基甲脒基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(200g)在氢化器中于25℃搅拌10分钟-15分钟。

将雷尼镍(40g)和水(1体积)在烧瓶中浆化，然后使其沉降5分钟。滗出水，并加入另一体积的水，浆化，使其沉降5分钟并滗出。加入乙酸(1体积)，将混合物浆化10分钟，然后使其沉降5分钟并滗出。然后将雷尼镍与乙酸(1体积)一起加入氢化器中。将反应混合物加热至60℃，并施加氢气(10Kg压力)30分钟。将所得混合物冷却至环境温度，并将所得固体在

上抽滤30分钟。将固体用MeOH(784g)洗涤，浓缩至1-2体积，加入EtOAc(2L)。将混合物于25℃搅拌1小时，然后抽滤，用EtOAc(400g)洗涤，并抽滤干燥2小时。将产物于25℃进一步减压(<300mmHg)干燥2小时，随后于45℃减压(<300mmHg)干燥12小时，得到为粗产物的1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐(220g)。

实施例5：纯化

将干燥的产物(219g)冷却至25℃，并与水(2190mL)一起加入圆底烧瓶中，搅拌10分钟以形成浆液。将该浆液在20分钟内加热至55℃，于该温度搅拌一小时，在搅拌下在20分钟内冷却至25℃，并于25℃再搅拌30分钟。将固体过滤，用水(220mL)洗涤，并抽滤干燥2小时。将产物于45℃再次减压(<300mmHg)干燥12小时，然后冷却至25℃并加入圆底烧瓶中。将无水乙醇(1250g)和乙酸(183g)加入其中，并将混合物在30分钟内加热至回流温度(75℃)，并保持回流30分钟。然后将混合物在30分钟内缓慢冷却至25℃，于25℃搅拌45分钟，过滤并用EtOH洗涤，然后于25℃抽滤干燥2小时。然后将产物于45℃减压(<300mmHg)干燥10小时。

将干燥的产物(143g)冷却至25℃，并与无水乙醇(1027g)和乙酸(150g)一起加入圆底烧瓶中，并将混合物在30分钟内加热至回流温度(75℃)，并保持回流1小时。然后将混合物在45分钟内缓慢冷却至25℃，于25℃搅拌45分钟，过滤并用EtOH洗涤，然后于25℃抽滤干燥2小时。然后将产物于45℃减压(<300mmHg)干燥12小时，得到含有少于30ppm镍的纯化的1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐(126g，56％产率，由HPLC测得纯度为99.6％)。

实施例6：纯晶型1

将1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐(化合物1，10g)粗品的MeOH(450mL)混合物加入到2L圆底烧瓶中，并将混合物加热至50℃-55℃，得到澄清溶液。将溶液于50℃-55℃保持30分钟，过滤，并加入到50℃-55℃的反应器中。将MTBE(450mL)于50℃-55℃缓慢加入，并将混合物在1小时内冷却至25℃。冷却后观察到白色悬浮液。将MTBE(450mL)于20℃-25℃缓慢加入，将所得混合物搅拌16小时，过滤，用MTBE(10mL)洗涤。将产物于50℃-55℃减压干燥24小时，得到为灰白色固体的无水结晶多晶型形式(“晶型1”)的纯1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐(8.25g，82.5％产率)。由HPLC测得产物纯度＞99％，并且含有少于14.5ppm的镍。¹H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ1.71(s,3H),4.47(d,J＝5.4Hz,2H),5.36(s,2H),7.26-7.37(m,5H),7.46(d,J＝7.8Hz,2H),7.74(d,J＝7.8Hz,2H),7.92(s,1H),8.29(s,1H),8.77(宽峰s,1H),10.34(宽峰s,3H)。¹³C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ24.7,41.7,55.0,118.4,127.4(2C),127.5(2C),127.8(2C),128.2(2C),128.6(2C),131.6,136.8,145.2,161.8,165.7,176.5。X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在10.0度、18.1度、18.6度、20.1度和23.9度且偏差为±0.5、±0.2或±0.1度的2θ(Cu Kα辐射)处的峰，与图1的XRPD图谱一致。热检测显示了在DSC热图上仅具有251℃时的主熔体吸热的简单热曲线，和指示乙酸盐损失的单一重量降低(图2)。

实施例7：纯晶型2

(A)结晶：称取化合物1(53mg)加入小瓶中，于55℃溶解于3:1MeOH:H₂O(1mL，20体积)中，并于50℃澄清放入结晶管中。

向溶液中加入MTBE(1mL)，并于50℃保持约10分钟。在MTBE加入的3分钟内，溶液形成悬浮液。将混合物在约1小时内冷却至25℃，并再平衡1小时，但仍为悬浮液。通过过滤分离固体，并于50℃真空干燥约16小时，得到灰白色固体，回收率为62.3％。X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在4.2度、5.6度、8.4度、17.8度和19.8度且偏差为±0.5、±0.2或±0.1度的2θ(Cu Kα辐射)处的峰，与图2的XRPD图谱一致。

(B)晶种结晶：称取化合物1(1.008g)加入容器中，加入3:1MeOH:H₂O(22mL，22体积)。将混合物加热至55℃以实现溶解。将溶液澄清并于50℃加入到容器中。向溶液中加入晶型II晶种(约10mg)，观察到其持续存在。

将MTBE(22mL，22体积)加入到容器中，并将混合物在约1小时内冷却至25℃。观察到精细的灰白色悬浮液随着冷却而成熟。将混合物再平衡45分钟，并加入额外的MTBE(22mL，22体积)。将悬浮液于25℃再平衡16.5小时。通过过滤分离固体，并于50℃真空干燥约23.5小时，得到自由流动的白色粉末固体，产率为73.5％。X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在4.2度、5.6度、8.4度、17.8度和19.8度且偏差为±0.5、±0.2或±0.1度的2θ(Cu Kα辐射)处的峰，与图2的XRPD图谱一致。热检测(图9)显示了晶型II的典型DSC热图，其在158℃具有显著吸热，之后在254℃具有主熔体吸热。TGA热图显示从40℃至105℃的4.067wt％的重量降低，表明了在乙酸盐重量减少事件之前接近化学计量的水损失。

实施例8：纯晶型3

(A)经由CH₃CN制备：称取化合物1(25mg)加入结晶管中，并将乙腈(MeCN)以0.1mL(4体积)等分试样加至0.5mL(20体积)，立即记录观察结果。将混合物通过磁力搅拌棒搅拌并加热至50℃，4小时后记录观察结果。若无明显溶解，将溶剂体积增加一倍至1mL(40体积)，立即记录观察结果。将混合物冷却至25℃，并平衡65小时。记录观察结果，并分离出一半的混合物。将混合物加热至50℃并平衡6小时，然后分离出剩余物。

将固体于50℃真空干燥17小时，然后通过XRPD检测进行分析。X射线粉末衍射(XRPD)图谱包括在7.7度、10.7度、20.1度、23.7度和24.3度处的峰，与图3的XRPD图谱一致。晶型III的热检测(图10)显示了在249℃时的单一吸热峰，在DSC热图中显示在234℃时有一个小肩峰。在熔体中仅存在TGA引起的乙酸盐歧化重量降低。

(B)经由MeOH制备：称取化合物1(1.050g)加入烧瓶中，并加入MeOH(50mL，50体积)。将混合物加热至50℃并保持20分钟。仅由一部分溶解，因此进一步加热至60℃并施加额外的MeOH(10mL，共60体积)以实现溶解。将溶液澄清并在真空中浓缩至干燥，然后于50℃进一步真空干燥16.5小时，重新获得粉色、大体积、低密度固体，回收率为76.1％。

实施例9：纯晶型4

(A)由晶型1制备：称取化合物1(211mg)加入小瓶中，并加入MeOH(8.44mL，40体积)。将混合物加热至50℃并保持1小时。仅由一部分溶解，因此进一步加热以实现溶解。将溶液澄清并于50℃以1mL等分试样加入结晶管中。将EtOAc以0.1mL等分试样加至1mL。将混合物在2小时内冷却至20℃，并于20℃再平衡19.25小时。

固体于50℃真空干燥约22.5小时。X射线粉末衍射(XRPD)图包括在18.5度、19.6度和23.7度且偏差为±0.5度、±0.2度或±0.1度的2θ处的峰，与图4的XRPD图谱一致。晶型IV的热检测显示了在DSC热图上仅具有253℃时的主熔体吸热的简单热曲线(图11)，和在乙酸盐损失之前从100℃至150℃的约0.40wt％的较小重量降低。

(B)由无定形制备：称取无定形化合物1(4×50mg)和晶型4(4×2mg)加入4个结晶管中，并加入4种溶剂(THF、EtOAc、MIBK和MEK：2mL，40体积)。将混合物通过磁力搅拌棒于50℃搅拌约21小时，然后冷却至25℃。将悬浮液于25℃平衡约7.5小时，然后加热至50℃。将悬浮液于50℃平衡约16小时，然后冷却至25℃，并通过过滤分离固体。

固体于50℃真空干燥约72小时。从THF或EtOAc中回收的固体通过XRPD证实为晶型1，而从MIBK或MEK中回收的固体显示为晶型4。

实施例10：纯无定形形式5

称取化合物1(495mg)加入含去离子水(250mL)的烧瓶中，于45℃搅拌实现溶解。将溶液澄清加入3L烧瓶中，在约9小时内冷冻并冻干。分离出白色大体积固体，回收率为约83.6％。通过XRPD的检测显示固体主要是无定形的，但存在痕量的晶型II。

重复上述过程，在约6.25小时内冻干固体，得到白色大体积固体，回收率为70.5％。通过XRPD的检测显示该材料主要是无定形的(图5)。热检测(图12)显示了在约112℃时类似于晶型II少量吸热事件，和在约229℃和240℃时具有与晶型II相比略有降低的起峰和峰的主要吸热。观察到从40℃至80℃的1.300wt％的重量降低，这主要是残留的表面水分。从170℃至240℃的15.837wt％的第二次显著的重量降低与熔体相对应，表明乙酸盐损失(15.01wt％)，并且还可能表明截留水损失或导致从250℃开始分解的较小降解事件。

实施例11：压缩和研磨稳定性

固体剂型的制备方法可需要高度压缩和/或研磨，这可能导致一些化合物的晶体结构的变化。将化合物1晶型I和晶型II在11×10⁵N的压力下压缩约25-28小时以评估压缩对这些晶型的晶型稳定性的影响。

XRPD检测显示了晶型I的衍射分辨率的微小降低。晶型II的检测显示了衍射图谱的显著变化，变为结晶度降低的图谱，如图6所示。晶型I的热检测显示了压缩后TGA热图无变化。压缩后DSC热图中的熔体吸热的强度和温度降低。晶型II的热检测显示了TGA热图的水含量略有增加，然而，这可能是由于分离后样品的老化而不是压缩作用。DSC热图显示了强度降低，但主熔体吸热温度升高，并且在压缩后约150℃时增加了显著的吸热。

对晶型I和晶型II样品(每种样品约100mg)进行研磨操作以评估对固体形式和显微镜观察的影响。注意是否产生无定形含量，并审查对批料含水量的影响，特别是对于晶型II水合物的影响。

两种样品研磨后的数据集都清楚表明没有引起热学或晶体学上的变化。晶型II显示反射分辨率和强度的微小改变，但与输入相比，这两种样品在热学上或在XRPD上都不指示无定形含量，如图7所示。最显著的变化是，对于压缩材料，晶型II在生产时含水量(从2.76wt％)增加到3.93wt％，并且与预期的水合物保持一致。

进行显微镜检查，其中将这两种样品与它们的原始状态进行比较。研磨后，这两种样品在硅油下的分散性都非常好。晶型II保留了更多的5-10μm大小的颗粒，但大多数固体<5μm。晶型I被分解成非常细的和均匀分散的固体，主要为<5μm的颗粒(大多为1μm-2μm)，考虑到在投入批次中观察到相对小的粒度，这种情况是预料之中的。总之，在人工压力下，晶型I比水合晶型II显示出更好的稳定性。

Claims (42)

1.一种1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的晶型，所述晶型基本上不含1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的其他多晶型形式。

2.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型为无水1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐，并且特征在于具有约253℃的熔点和25℃时约8.3mg/mL的水溶解度(“晶型I”)。

3.根据权利要求2所述的晶型，其特征在于，所述晶型I的特征在于包括在10.0度、18.1度、18.6度、20.1度和23.9度且偏差为±0.5度的2θ处的峰的X射线粉末衍射(XRPD)图谱，其中所述XRPD使用Cu Kα辐射制成。

4.根据权利要求3所述的晶型，其特征在于，所述XRPD图谱还包括在20.5度且偏差为±0.5度的2θ处的峰。

5.根据权利要求3或4所述的晶型，其特征在于，所述XRPD图谱基本上类似于图1的图谱。

6.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐为水合的，并且特征在于具有约253℃的熔点和25℃时约5.5mg/mL的水溶解度(“晶型II”)。

7.根据权利要求6所述的晶型，其特征在于，所述晶型II的特征在于包括在4.2度、5.6度、8.4度、17.8度和19.8度且偏差为±0.5度的2θ处的峰的XRPD图谱，其中所述XRPD使用CuKα辐射制成。

8.根据权利要求7所述的晶型，其特征在于，所述XRPD图谱还包括在12.7度且偏差为±0.5度的2θ处的峰。

9.根据权利要求7或8所述的晶型，其特征在于，所述XRPD图谱基本上类似于图2的图谱。

10.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐为无水的，并且特征在于具有约249℃的熔点和25℃时约7.2mg/mL的水溶解度(“晶型III”)。

11.根据权利要求10所述的晶型，其特征在于，所述晶型III的特征在于包括在7.7度、10.7度、20.1度、23.7度和24.3度且偏差为±0.5度的2θ处的峰的XRPD图谱，其中所述XRPD使用Cu Kα辐射制成。

12.根据权利要求11所述的晶型，其特征在于，所述XRPD图谱还包括在18.5度和26.5度且偏差为±0.5度的2θ处的峰。

13.根据权利要求11或12所述的晶型，其特征在于，所述XRPD图谱基本上类似于图3的图谱。

14.根据权利要求1所述的晶型，其特征在于，所述晶型为1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐，其特征在于具有约251℃的熔点，并且特征在于包括在18.5度、19.6度和23.7度且偏差为±0.5度的2θ处的峰的XRPD图谱，其中所述XRPD使用Cu Kα辐射制成(“晶型IV”)。

15.根据权利要求14所述的晶型，其特征在于，所述XRPD图谱还包括在24.6度且偏差为±0.5度的2θ处的峰。

16.根据权利要求14或15所述的晶型，其特征在于，所述XRPD图谱基本上类似于图4的图谱。

17.1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的无定形形式，其特征在于具有约240℃的熔点和25℃时约7.1mg/mL的水溶解度(“晶型V”)。

18.一种用于治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症的药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的根据权利要求1至17中任一项所述的固体形式，以及药学上可接受的载体。

19.根据权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，所述固体形式为根据权利要求2至5中任一项所述的晶型I，以及药学上可接受的载体。

20.根据权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，所述固体形式为根据权利要求6至9中任一项所述的晶型II，以及药学上可接受的载体。

21.根据权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，所述固体形式为根据权利要求10至13中任一项所述的晶型III，以及药学上可接受的载体。

22.根据权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，所述固体形式为根据权利要求14至16中任一项所述的晶型IV，以及药学上可接受的载体。

23.根据权利要求18所述的药物组合物，其特征在于，所述固体形式为根据权利要求17所述的晶型V，以及药学上可接受的载体。

24.一种用于制备根据权利要求2至5中任一项所述的晶型I的方法，所述方法包括：

使1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的固体形式与溶剂接触足以产生晶型I的时间段，所述溶剂选自下组：甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃、2-甲基-四氢呋喃、无水丙酮、二氯甲烷、二乙醚、3-甲基-1-丁醇和硝基甲烷或它们的混合物。

25.根据权利要求24所述的方法，其特征在于，所述溶剂为甲醇。

26.根据权利要求24或25所述的方法，其特征在于，所述溶剂还包括选自四氢呋喃、叔丁基甲基醚和庚烷的溶剂。

27.一种用于制备根据权利要求6至9中任一项所述的晶型II的方法，所述方法包括：

使1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的固体形式与水和溶剂的混合物接触足以产生晶型II的时间段，所述溶剂选自下组：异丙醇、四氢呋喃、丙酮和乙酸乙酯或它们的组合。

28.根据权利要求27所述的方法，其特征在于，所述混合物包含至少约10％的水。

29.根据权利要求27或28所述的方法，其特征在于，所述溶剂为乙酸乙酯。

30.一种用于制备根据权利要求17所述的晶型V的方法，所述方法包括：

(a)将1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的固体形式溶解于足量的水中以形成溶液；

(b)将所述溶液冷冻；以及

(c)冻干步骤(b)的产物。

31.一种用于制备根据权利要求10至13中任一项所述的晶型III的方法，所述方法包括：

使1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的固体形式与乙腈接触足以产生晶型III的时间段。

32.根据权利要求1所述的晶型，所述晶型具有小于10重量％的任何其他多晶型形式。

33.根据权利要求32所述的晶型，所述晶型具有小于5重量％的任何其他多晶型形式。

34.根据权利要求32或33所述的晶型，所述晶型具有小于1重量％的任何其他多晶型形式。

35.一种用于治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症的方法，所述方法包括：

向有此需要的受试者施用有效量的根据权利要求中1至17中任一项所述的晶型或根据权利要求18至23中任一项所述的药物组合物。

36.根据权利要求35所述的方法，其特征在于，所述血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症选自：

糖尿病性黄斑水肿，糖尿病性视网膜病，遗传性血管性水肿伴C1抑制剂缺乏症，急性肝损伤，炎症，过敏反应，化学致敏性肾损伤，缺血性卒中，出血性卒中，高血压，高血压的血管并发症，视网膜病，肾病，脑血管水肿，肺动脉高压，炎症，疼痛，急性心肌梗死，深静脉血栓形成，纤溶治疗的并发症，心绞痛，血管性水肿，脓毒症，关节炎，体外循环术的并发症，毛细血管渗漏综合征，炎性肠病，糖尿病，糖尿病性视网膜病变，糖尿病性黄斑水肿，糖尿病性肾病，糖尿病性神经病变，老年性黄斑变性，视网膜静脉阻塞，脑水肿，缺血再灌注损伤，癌症相关的血管生成，哮喘，过敏反应以及阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、中枢神经系统感染和多形性成胶质细胞瘤的脑血管并发症。

37.1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的固体形式用于治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症的用途，所述固体形式基本上不含1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的其他多晶型形式。

38.根据权利要求37所述的用途，其特征在于，所述固体形式为根据权利要求1至17中任一项所述的晶型。

39.1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的固体形式用于制备用于治疗血浆激肽释放酶依赖性疾病或病症的药物的用途，所述固体形式基本上不含1-苄基-N-(4-甲脒基苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺乙酸盐的其他多晶型形式。

40.根据权利要求39所述的用途，其特征在于，所述固体形式为根据权利要求1至17中任一项所述的晶型。

41.根据权利要求3、4、7、8、11、12、14、15中任一项所述的晶型，其特征在于，所述XRPD峰在所述峰位置±0.2度的2θ内。

42.根据权利要求41所述的晶型，其特征在于，所述XRPD峰在所述峰位置±0.1度的2θ内。

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