CN114853835A - 一种干燥nadh的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种干燥NADH的方法，所述的干燥NADH的方法包括冷控制、升华干燥和解析干燥三个主要处理步骤。本发明提供的技术方案，相比于现有技术，所获得的NADH产品的含水量大幅度降低，同时克服了使用现有技术中存在的实际冻结过程中形成的冰晶形态各异和大小分布不均一，导致升华过程中水蒸气流动的阻力加大，降低了干燥效率和效果的技术缺陷。采用本发明的技术方案，避免了现有方法中经常出现的由于温度变化产生的降解问题。

Description

一种干燥NADH的方法
技术领域
本发明涉及药物技术领域，具体地说涉及一种干燥NADH的方法。
背景技术
NADH(Nicotinamide adenine dinucleotide)是一种白色粉末的固体物质；分子式：C21H27N7O14P2；分子量：663.43；熔点：160℃。NADH全称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，简称还原型辅酶1，又称线粒体素；制备方法主要包括提取法、发酵法、生物合成法和有机物合成法。
NADH作为脱氢酶的辅酶，在细胞中参与几百个氧化还原反应。NADH的量与ATP产生量直接相关，每个细胞所含的NADH越多，所产生的能量越多。需要能量越多的器官，其所含的或所需的NADH的量也越高。人体中，NADH含量由高到低依次为心脏、肌肉、大脑、肝脏和红细胞。
NADH是人体中排名最高的辅酶，是许多生物反应的促进剂。NADH对于细胞发育和能量产生是必不可少的：从食物中产生能量至关重要，并且是细胞能量产生过程中电子的主要载体。NADH也是重要的抗氧化剂。实际上，科学家们承认，NADH是保护细胞免受有害物质损害的最强大的抗氧化剂。
NADH在大鼠、犬身上进行了动物毒性测试，即使在高浓度下，NADH也没有出现毒性或副作用。FDA不良事件报告系统和CAERS不良事件报告系统所载数据，从未有过因为口服NADH而引起的不良事件报道。
可以看出，NADH具有显著的生物活性高和毒副作用小的优势，具有很高的医用价值。
然而，NADH的化学性质极其活拨，氧气、潮湿、光照、酸性都容易使NADH失去活性。食物源中蔬菜几乎不含NADH，肉类中含有少量NADH，而食物中的NADH在加工过程中，又存在大量变性问题。
可见，在实际的制备、储存、运输和作为实际活性化合物在生物、药物制剂制作过程中，如何应对其化学活拨性，克服失活和变性问题，是实际面对的客观技术问题。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的一个目的是提供一种NADH干燥的方法。
现有技术研究发现，NADH的生理功能包括改善能量水平、保护细胞和促进神经递质的产生；NADH不仅作为有氧呼吸作用中重要的辅酶，NADH的[H]也携带大量能量。研究发现NADH能降低因辐射、药物、有毒物质、剧烈运动、缺血等各种因素引起的细胞的氧化应激，从而保护血管内皮细胞、肝细胞、心肌细胞、成纤维细胞、神经元等。因此注射或口服NADH在临床上被应改善心脑血管疾病、辅助癌症放化疗等领域。外用NADH已被证实可以有效治疗红斑痤疮和接触性皮炎；研究表明NADH显着促进神经递质多巴胺的产生，神经递质多巴胺是一种对短期记忆，不自主运动，肌肉张力和自发性物理反应至关重要的化学信号。
由于NADH的化学性质极其活拨，氧气、潮湿、光照、酸性都容易使NADH失去活性。
本申请的申请人在涉足的与NADH相关的活性研究和生产开发中，同样遇到NADH失活和变性问题；本申请的发明人，在研究中惊奇的发现，NADH产品中的水分含量与NADH产品储存稳定性密切相关；有效减少NADH产品中的水分含量，可以获得保存稳定的NADH产品。由于NADH本身高温下容易降解，采用冷冻真空干燥法是理论上可行的方式方法；同时，实际采用的干燥方法，需要同时兼顾除去水分的目的和保证NADH产品基本不发生降解而失去活性；但是，按照现有技术中冷冻真空干燥法进行NADH干燥，产品水分高，稳定性差。因此，需要探索特殊真空冷冻干燥工艺，以达到降低水分，实现提高稳定性目的。
本发明所述的一种干燥NADH的方法，是通过如下技术方案实现。
制冷控制是冷冻干燥的第一步，在冻结过程中，冷冻速率、冷冻温度和冷冻时间是影响后面过程的主要因素。若冷冻没有冻好，产品冻结不实，在进入第一阶段升华干燥时，产品可能出现“沸腾”现象而引起喷瓶，或冻干后制品表面凹凸不平，影响外观；如果冷的过低，则不仅浪费了能源和时间。而且对某些产品还会降低活性或者纯度。药液结冻固化后，冰晶就镶嵌在浓缩液的非晶态中，在适当的条件下，冰晶通过升华干燥除去，浓缩液非晶态中水分则通过解析干燥除去。由于在实际冻结过程中形成的冰晶形态各异和大小分布不均一，导致升华过程中水蒸气流动的阻力加大，降低了干燥效率和效果。同时在非晶态区域内多余的未冻结水存在，也即没有实现真正意义上的最大冻结浓缩状态，增加了解析干燥的工作量和难度。针对这些现象，我们经过大量实验发现在制冷过程加入重结晶和退火操作，可以减少由于成核温度差异造成冰晶尺寸和干燥速率的不均一性，进而提高干燥效率和产品质量。
所述一种干燥NADH的方法具体包括：冷控制、升华干燥和解析干燥三个主要处理步骤。
步骤一、冷控制
a：预冻
将NADH浓缩液样品置于干燥箱内，设置预冷温度-37℃至-42℃，降温时间50-70min。在预冷温度条件下维持100-140min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实。
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为5-7℃，升温时间控制55-65min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体。在5-7℃温度下维持55-65min，此时NADH浓缩液呈现大部分液体状态，少量呈现固体状态。
然后前箱温度在25-35min降至-8℃至-12℃，持续时间500-700min。此温度下，NADH浓缩液会出现缓慢重结晶过程，会大大减少非晶态。
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-37℃至-42℃，将水分全部冻结为晶体。在28-32min内将温度升至-13℃至-17℃进行退火处理，退火时间110-130min。重复退火操作3-5次，再将溶液冻结处理。多次退火处理可以让冰晶结构更紧密，尺寸更均一，可以提高升华，解析效率。
步骤二、升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为8～10小时，2～4小时。干燥过程将真空度控制0.2-0.4mbar以内；
步骤三、解析干燥
由于本产品耐受温度低，要求水分低，所以本技术进行了三次解析操作，延长了解析时间。三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃，时间分别是3.5-4.5小时，5.5-6.5小时，1.8-2.2小时。解析干燥结束后，工艺完成。
在本发明技术方案中，进一步优选的方案为：
步骤一、冷控制
a：预冻
将NADH浓缩液置于干燥箱内，设置预冷温度-39℃至-41℃，降温时间约55-65min。在预冷温度条件下维持110-130min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实。
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为5.5-6.5℃，升温时间控制58-62min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体。在5.5-6.5℃温度下维持58-62min，此时NADH浓缩液呈现大部分液体状态，少量呈现固体状态。
然后前箱温度在28-32min降至-9℃至-11℃，持续时间550-650min。此温度下，NADH浓缩液会出现缓慢重结晶过程，会大大减少非晶态。
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-38℃至-41℃，将水分全部冻结为晶体。在29-31min内将温度升至-14℃至-16℃进行退火处理，退火时间115-125min。重复退火操作3-5次，再将溶液冻结处理。多次退火处理可以让冰晶结构更紧密，尺寸更均一，可以提高升华，解析效率。
步骤二、升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为8.5～9.5小时，2.5～3.8小时干燥过程将真空度控制0.25-0.35mbar以内。
步骤三、解析干燥
由于本产品耐受温度低，要求水分低，所以本技术做了三次解析操作，延长了解析时间。三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃。解析干燥结束后，工艺完成。时间分别是3.8-4.2小时，5.8-6.2小时，1.9-2.1小时。
在本发明技术方案中，更优选的方案为：
步骤一、冷控制
a：预冻
将NADH浓缩液置于干燥箱内，设置预冷温度-40℃，降温时间约60min。在-40℃条件下维持120min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实。
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为6℃，升温时间控制60min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体。在6℃温度下维持60min，此时NADH浓缩液呈现大部分液体状态，少量呈现固体状态。
60min后前箱温度在30min降至-10℃，持续时间600min。此温度下，NADH浓缩液会出现缓慢重结晶过程，会大大减少非晶态。
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-40℃，将水分全部冻结为晶体。在30min内将温度升至-15℃进行退火处理，退火时间120min。重复退火操作3次，再将溶液冻结处理。3次过程可以让冰晶结构更紧密，尺寸更均一，可以提高升华，解析效率。
步骤二、升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为9小时，3小时；干燥过程将真空度控制0.3mbar以内。
步骤三、解析干燥
由于本产品耐受温度低，要求水分低，所以本技术做了三次解析操作，延长了解析时间。三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃；时间分别是4小时，6小时，2小时。解析干燥结束后，工艺完成。
在本发明技术方案中，所述NADH浓缩液是指浓度200～400mmol/L的NADH浓缩液粗产品,或者换算为质量分数：质量分数13％～26％的NADH浓缩液粗产品。
技术效果：
本发明提供的技术方案，相比于现有技术，所获得的NADH产品的含水量大幅度降低，同时克服了使用现有技术中存在的实际冻结过程中形成的冰晶形态各异和大小分布不均一，导致升华过程中水蒸气流动的阻力加大，降低了干燥效率和效果的技术缺陷。采用本发明的技术方案，避免了现有方法中经常出现的由于温度变化产生的降解问题。
为使本发明具体实施方式的目的和技术方案更加清楚，下面将结合本发明的具体实施方式的实施实例，对本发明具体实施方式的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的具体实施方式是本发明的一部分具体实施方式，而不是全部的具体实施方式。基于所描述的本发明的具体实施方式，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所制备的所有其它具体实施方式，都属于本发明保护的范围。
具体实施方案
以下通过具体的实施例，进一步说明本发明的技术方案。在以下实施例、样品测试和对比试验中，涉及浓度，用“％”表示重量百分数。
实施例1
a：预冻
将NADH浓缩液(200mmol/L NADH浓缩液)置于干燥箱内，设置预冷温度-40℃，降温时间约60min。在-40℃条件下维持120min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实。
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为5℃，升温时间控制60min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体。在5℃温度下维持90min，此时NADH浓缩液呈现大部分液体状态，少量呈现固体状态。
90min后前箱温度在30min降至-5℃，持续时间600min。此温度下，NADH浓缩液会出现缓慢重结晶过程，会大大减少非晶态。
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-40℃，将水分全部冻结为晶体。在30min内将温度升至-15℃进行退火处理，退火时间120min。重复退火操作3次，再将溶液冻结处理。3次过程可以让冰晶结构更紧密，尺寸更均一，可以提高升华，解析效率。
步骤二、升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为8小时、3小时。干燥过程将真空度控制0.3mbar以内；
步骤三、解析干燥
由于本产品耐受温度低，要求水分低，所以本技术做了三次解析操作，延长了解析时间。三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃，时间分别是4小时，6小时，2小时。解析干燥结束后，工艺完成。
产品结果如下：表1
样品名 纯度 水分
实施例1产品 98.7％ 1.2％
实施例2
a：预冻
将NADH浓缩液(400mmol/L NADH浓缩液)置于干燥箱内，设置预冷温度-40℃，降温时间约60min。在-40℃条件下维持120min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实。
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为8℃，升温时间控制60min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体。在8℃温度下维持45min，此时NADH浓缩液呈现大部分液体状态，少量呈现固体状态。
45min后前箱温度在30min降至-8℃，持续时间400min。此温度下，NADH浓缩液会出现缓慢重结晶过程，会大大减少非晶态。
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-40℃，将水分全部冻结为晶体。在30min内将温度升至-12℃进行退火处理，退火时间120min。重复退火操作3次，再将溶液冻结处理。3次过程可以让冰晶结构更紧密，尺寸更均一，可以提高升华，解析效率。
步骤二、升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为10小时、4小时。干燥过程将真空度控制0.3mbar以内；
步骤三、解析干燥
由于本产品耐受温度低，要求水分低，所以本技术做了三次解析操作，延长了解析时间。三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃，时间分别是4小时，6小时，2小时。解析干燥结束后，工艺完成。
实验结果如下：表2
样品名 纯度 水分
实施例2产品 98.3％ 1.0％
实施例3
a：预冻
将NADH浓缩液(300mmol/L NADH浓缩液)置于干燥箱内，设置预冷温度-40℃，降温时间约60min。在-40℃条件下维持120min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实。
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为5℃，升温时间控制60min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体。在5℃温度下维持90min，此时NADH浓缩液呈现大部分液体状态，少量呈现固体状态。
90min后前箱温度在30min降至-5℃，持续时间600min。此温度下，NADH浓缩液会出现缓慢重结晶过程，会大大减少非晶态。
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-40℃，将水分全部冻结为晶体。在30min内将温度升至-15℃进行退火处理，退火时间120min。再将溶液冻结处理。1次过程可以让冰晶结构更紧密，尺寸更均一，可以提高升华，解析效率。
步骤二、升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为9小时、2小时。干燥过程将真空度控制0.3mbar以内；
步骤三、解析干燥
由于本产品耐受温度低，要求水分低，所以本技术做了三次解析操作，延长了解析时间。三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃，时间分别是4小时，6小时，2小时。解析干燥结束后，工艺完成。
实验结果如下：表3
样品名 纯度 水分
实施例3产品 98.1％ 1.3％
实施例4
a：预冻
将NADH浓缩液(350mmol/L NADH浓缩液)置于干燥箱内，设置预冷温度-40℃，降温时间约60min。在-40℃条件下维持120min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实。
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为5℃，升温时间控制60min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体。在5℃温度下维持90min，此时NADH浓缩液呈现大部分液体状态，少量呈现固体状态。
90min后前箱温度在30min降至-5℃，持续时间600min。此温度下，NADH浓缩液会出现缓慢重结晶过程，会大大减少非晶态。
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-40℃，将水分全部冻结为晶体。在30min内将温度升至-15℃进行退火处理，退火时间120min。重复退火操作4次，再将溶液冻结处理。4次过程可以让冰晶结构更紧密，尺寸更均一，可以提高升华，解析效率。
步骤二、升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为10小时、2小时。干燥过程将真空度控制0.3mbar以内；
步骤三、解析干燥
由于本产品耐受温度低，要求水分低，所以本技术做了三次解析操作，延长了解析时间。三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃，时间分别是4小时，6小时，2小时。解析干燥结束后，工艺完成。
实验结果如下：表4
样品名 纯度 水分
实施例4产品 98.6％ 1.0％
实施例5
a：预冻
将NADH浓缩液(250mmol/L NADH浓缩液)置于干燥箱内，设置预冷温度-40℃，降温时间约60min。在-40℃条件下维持120min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实。
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为6℃，升温时间控制60min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体。在6℃温度下维持75min，此时NADH浓缩液呈现大部分液体状态，少量呈现固体状态。
75min后前箱温度在30min降至-6℃，持续时间500min。此温度下，NADH浓缩液会出现缓慢重结晶过程，会大大减少非晶态。
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-40℃，将水分全部冻结为晶体。在30min内将温度升至-15℃进行退火处理，退火时间120min。重复退火操作2次，再将溶液冻结处理。4次过程可以让冰晶结构更紧密，尺寸更均一，可以提高升华，解析效率。
步骤二、升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为10小时和4小时。干燥过程将真空度控制0.3mbar以内；
步骤三、解析干燥
由于本产品耐受温度低，要求水分低，所以本技术做了三次解析操作，延长了解析时间。三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃，时间分别是4小时，6小时，2小时。解析干燥结束后，工艺完成。
实验结果如下：表5
样品名 纯度 水分
实施例5产品 98.5％ 1.3％
样品测试和对比试验
一、对照品的制备
对照品为本实验室制备，制备工艺如下：
①冷处理
a：预冻
将配置好的浓缩液置于干燥箱内，设置预冷温度-40℃，降温时间约60min。在-40℃条件下维持240min，以保障浓缩液冻结彻底结实。
b.退火
在30min内将温度升至-15℃进行退火处理，退火时间120min。再将样品温度设置-40℃冻结处理，冻结时间120min。
②升华干燥
升华干燥是利用冰晶升华的原理，在高度真空的环境下，将已冻结了的物料水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，从而达到干燥的目的。
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，时间分别为300min，120min，干燥过程将真空度控制0.3mbar以内。
③解析干燥
采用三次解析干燥操作，温度分别是25℃、45℃、5℃；时间分别是4小时，6小时，2小时。解析干燥结束后，获得对照品。
其中，对于对照品1，原料为200mmol/L NADH浓缩液原料；对于对照品2原料为400mmol/L NADH浓缩液原料。
二、检测方法和仪器
水分检测
仪器：831型库伦法卡氏水分测定仪；试剂：卡尔费休试剂
测定开始前，在滴定池中添加100ml的卡尔费休试剂，接通电源，开机，打开搅拌台<ON>开关，按<START>,仪器进入预干燥状态，COND灯闪烁，漂移值呈现飘逸趋势，出现箭头，当滴定池发出“滴”声音信号，COND灯持续亮，屏幕显示漂移值小于20μg/min(持续等待漂移值小于10μg/min，甚至是5μg/min能够获得更好的测定结果)，代表预干燥结束，可以开始进行水分测定。
从磨砂口加入50mg供试品，进样后迅速拧紧瓶塞(进样时应注意不要让样品沾到进样口上或滴定池壁上，避免因反应物质的量不准确影响测定结果)输入重量值，按键盘上<ENTER>键确认。
计算公式：
Figure BDA0003595009620000131
纯度检测
检测方法：高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)
主要仪器：高效液相色谱仪、电子天平、pH计
试剂：
Figure BDA0003595009620000132
液相色谱条件：
色谱柱：AgilentTC-C18(2)(4.6×250mm，5μm)
柱温：25℃
流速：1.0ml/min
进样量：20μl
检测器：UV260nm
采集时间：12min
流动相(梯度模式)：
A相：100mM磷酸氢二钠(用4mol/L的NaoH调节PH至6.6)
B相：甲醇
表6
Figure BDA0003595009620000133
Figure BDA0003595009620000141
溶剂：100mM碳酸氢钠
样品溶液的制备：
供试品溶液取本品50mg，精密称定，置100ml量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(0.5mg/ml)；以下内容中，所述供试品1-3对应实施例1-3产品。
精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。采用面积归一法计算NADH面积百分比，即为产品纯度。
三、实验数据比较
表7：本发明方法实施对样品的降解和水分影响
冻干前纯度 冻干后纯度 降解纯度 冻干后水分
对照品-1 99.0％ 98.3％ 0.7％ 5.6％
对照品-2 98.6％ 98.2％ 0.4％ 5.3％
供试品-1 98.8％ 98.6％ 0.2％ 1.2％
供试品-2 98.6％ 98.3％ 0.3％ 1.3％
供试品-3 98.7％ 98.5％ 0.2％ 1.2％
从表7可以看出，相比于对照品，供试品1-3(对应于实施例1-3产品)的降解纯度为0.2％至0.3％，而对照品1-2降解纯度分别为0.7％和0.4％；同时，经本发明方法干燥处理的供试品1-3(对应于实施例1-3产品)，其冻干后水分为1.2％至1.3％，而对照品1-2冻干后水分分别为5.6％和5.3％，说明采用本发明技术方案的效果明显优于采用现有技术方法的效果。
四、经本发明干燥处理样品稳定性比较
将实验所得供试品与对照品，按1.0g规格密封包装与铝箔袋内。在置于恒温恒湿箱内，设置温度40±2℃，相对湿度60±5％。分别检测0天，10天，20天，30天纯度含量的变化；在本稳定性比较试验中，供试品1-3(对应于实施例1-3产品)；对照品如以上定义。
数据如下：
不同工艺下产品稳定性数据-表8
Figure BDA0003595009620000151
五.实验结果
从实验数据可以看出，对照品冻干工艺纯度降解度均大于本发明技术方案，对照品水分均在5.0％以上，而本发明方法产品水分在1.0％左右，效果十分显著。而稳定性数据表明，本发明方法产品降解速度低于对照品，说明此方法可以有效提高产品纯度和稳定性。
以上结合具体实施例，对本发明技术方案的具体实施方式进行了进一步描述，此具体实施方案是为了对本技术方案的详细描述，而不是为了限制本技术方案。以上所述的具体实施方案，仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的技术构思和保护范围进行限定，在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域普通技术人员对本技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种干燥NADH的方法，其特征在于所述一种干燥NADH的方法具体包括：冷控制、升华干燥和解析干燥三个处理步骤；
步骤一、冷控制
a：预冻
将NADH浓缩液样品置于干燥箱内，设置预冷温度-37℃至-42℃，降温时间50-70min；在预冷温度条件下维持100-140min；
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为5-7℃，升温时间控制55-65min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体；在5-7℃温度下维持55-65min；
然后前箱温度在25-35min降至-8℃至-12℃，持续时间500-700min；
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-37℃至-42℃，将水分全部冻结为晶体；在28-32min内将温度升至-13℃至-17℃进行退火处理，退火时间110-130min；重复退火操作3-5次，再将溶液冻结处理；
步骤二、升华干燥
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为8～10小时，2～4小时；干燥过程将真空度控制0.2-0.4mbar以内；
步骤三、解析干燥
进行了三次解析操作；三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃，时间分别是3.5-4.5小时，5.5-6.5小时，1.8-2.2小时；解析干燥结束后，工艺完成。
2.根据权利要求1所述干燥NADH的方法，其特征在于所述
步骤一、冷控制
a：预冻
将NADH浓缩液置于干燥箱内，设置预冷温度-39℃至-41℃，降温时间约55-65min；在预冷温度条件下维持110-130min，以保障NADH浓缩液冻结彻底结实；
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为5.5-6.5℃，升温时间控制58-62min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体；在5.5-6.5℃温度下维持58-62min；
然后前箱温度在28-32min降至-9℃至-11℃，持续时间550-650min；
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-38℃至-41℃，将水分全部冻结为晶体；在29-31min内将温度升至-14℃至-16℃进行退火处理，退火时间115-125min；重复退火操作3-5次，再将溶液冻结处理。
3.根据权利要求1所述干燥NADH的方法，其特征在于所述
步骤二、升华干燥
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为8.5～9.5小时，2.5～3.8小时干燥过程将真空度控制0.25-0.35mbar以内。
4.根据权利要求1所述干燥NADH的方法，其特征在于所述
步骤三、解析干燥
进行三次解析操作；三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃；解析干燥结束后，工艺完成；时间分别是3.8-4.2小时，5.8-6.2小时，1.9-2.1小时。
5.根据权利要求2所述干燥NADH的方法，其特征在于所述
步骤一、冷控制
a：预冻
将NADH浓缩液置于干燥箱内，设置预冷温度-40℃，降温时间约60min；在-40℃条件下维持120min；
b：重结晶
预冻结束后，将前箱温度设置为6℃，升温时间控制60min，此升温过程需要缓慢均匀，不能加热过快导致NADH浓缩液化成液体；在6℃温度下维持60min；
60min后前箱温度在30min降至-10℃，持续时间600min；
c.退火
重结晶结束后，将温度降至-40℃，将水分全部冻结为晶体；在30min内将温度升至-15℃进行退火处理，退火时间120min；重复退火操作3次，再将溶液冻结处理。
6.根据权利要求3所述干燥NADH的方法，其特征在于所述
步骤二、升华干燥
分别设置0℃和5℃进行升华干燥，干燥时间分别为9小时，3小时；干燥过程将真空度控制0.3mbar以内。
7.根据权利要求4所述干燥NADH的方法，其特征在于所述
步骤三、解析干燥
进行三次解析操作；三次解析干燥温度分别是25℃，45℃，5℃；时间分别是4小时，6小时，2小时。
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